KR20160021125A - 항-cxcl1, cxcl7 및 cxcl8 항체 및 이들의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 인간 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 단리된 항체 또는 그의 단편을 제공하며, 상기 항체 또는 단편은 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시, 최대한 16 nM의 평형 해리 상수(K_D)를 갖는 인간 케모카인 CXCL1, 최대한5 nM의 평형 해리 상수(K_D)를 갖는 인간 케모카인 CXCL7, 및 최대한 45 nM의 평형 해리 상수(K_D)를 갖는 인간 케모카인 CXCL8에 결합할 수 있다. 본 발명은 또한 상기 단리된 항체의 일부 용도를 제공한다.

Description

항-CXCL1, CXCL7 및 CXCL8 항체 및 이들의 용도{ANTI-CXCL1, CXCL7 AND CXCL8 ANTIBODIES AND THEIR APPLICATIONS}

본 발명은 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병의 예방 및 치료 분야에 관한 것이다.

특히, 본 발명은 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 항체 및 이들의 용도, 특히 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병의 치료 및/또는 예방을 위한 약제로서 사용하기 위한 용도에 관한 것이다.

암을 치료하기 위해서 혈관형성을 표적화하는 것이 1970년대 초 주다 포크만(Judah Folkman)에 의해 제안되었다. 상기 초기 가설은 다수의 전-임상 및 임상 연구에 의해 확인되었으며 인간화된 단클론 항체 및 광범위한 키나제 억제제를 포함한 다수의 치료 화합물들을 개발하게 되었다.

혈관형성의 가장 중요한 인자들 중 하나는 VEGF(혈관 내피세포 성장인자)이다. VEGF를 발견한지 거의 20년후에, VEGF를 표적화하는 인간화된 단클론 항체인 베바시주맵(Hurwitz et al., 2004)이 표준 화학요법제 이리노테칸과 함께 결장암의 치료에 대해서 식품의약품 안전청(FDA)의 승인을 획득하였다.

수니티니브 말레이트(Choueiri et al., 2008) 및 소라페니브 토실레이트(Eisen et al., 2008)와 같은 수용체 타이로신 키나제 억제제 및 또한 템시로리무스(Motzer et al., 2008) 및 비-수용체 세린 쓰레오닌 키나제 억제제와 같은 세포내 키나제의 억제제를 포함한 다른 다양한 혈관형성 억제 화합물들이 또한 개발되었다.

이들 치료법을 사용하는 무진행 생존율의 현저한 증가에도 불구하고, 피할 수 없는 재발 및 사망으로의 질병 진행이 관찰되었다. 일부 최근의 논문들은 치료 회피라 칭하는 새로운 현상, 및 타이로신 키나제 억제제에 의한 치료의 경우에 증가된 전이 잠재성을 갖는 보다 공격적인 세포의 선택을 개시하고 있다(Ebos et al., 2009, Paez-Ribes et al., 2009).

이렇게 하여, VEGF는 RCC 혈관형성 억제 치료법에 표적화되었으나; VEGF만을 표적화하는 것은 단지 부분적으로만 성공하였다. VEGF에 대한 인간화된 중화 항체(즉 베바시주맵)를 사용한 무진행 생존율의 현저한 증가에도 불구하고(Yang et al., 2003)(Escudier et al., NEJM 2007), 위약과 베바시주맵 치료된 환자간의 전체적인 생존율에는 현저한 차이가 없음이, ASCO 회의 2009에서 제출한 중추적인 AVOREN 연구에 보고되었다. 치료의 회피는, VEGF pre mRNA의 선택적 이어맞추기로부터 생성되는, VEGFxxxb라 칭하는 VEGF의 혈관형성 억제 형태의 존재로 인한 혈관형성 과잉 또는 효능 없음을 포함하는 상이한 기전들을 통해 발생할 수 있다(Harper, 2008).

WO 2008/130969는 5개 항원의 혼합물의 마우스에의 주사에 의해 획득된 단클론 항체(상기 항체는 상기 5개 항원: 인간 IL-8(CXCL8), Gro-알파(CXCL1), Gro-베타(CXCL2), Gro-감마(CXCL3) 및 ENA-78(CXCL5)에 결합할 수 있다)를 개시하며, 비-인간 영장류의 흡입된 LPS 급성 폐 염증 모델에서 상기 항체의 사용을 개시한다. 그러나, WO 2008/130969는 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 결합하는 단클론 항체는 개시하고 있지 않다.

WO 2011/100271은 인간 IL-8(CXCL8), Gro-알파(CXCL1), Gro-베타(CXCL2), Gro-감마(CXCL3), GCP2, NAP2(CXCL7) 및 ENA-78(CXCL5)에 결합할 수 있는 단클론 항체를 개시한다. 그러나, WO 2011/100271은 상기 항원들에 대한 상기 단클론 항체들의 친화성은 개시하지 않는다.

따라서 당해 분야에서는 환자의 수명을 증가시키고 재발 및 사망으로의 질병 진행을 피하는 신규의 개선된 혈관형성 억제 화합물에 대한 상당한 필요성이 여전히 존재한다. 본 발명자들은 본 출원에 개시된 발명에 의해 중대한 단계를 진척시켰다.

본 발명의 목적은 상기 언급한 문제를 전체적으로 또는 부분적으로 해결할 수 있게 하는 신규의 화합물을 제공함으로써 상기 필요성을 충족시키는 것이다.

뜻밖에도, 발명자들은 그들의 새로 개발된 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 항체들이, 특히 RCC(투명세포 신세포 암종)의 마우스 모델에서 종양 성장을 효율적으로 억제할 수 있음을 입증하였다. RCC는 고도로 혈관화된 종양(이는 폰 히펠 린다우(Hippel Lindau) 유전자의 돌연변이로 인해 발생한다)이기 때문에, 상기 혈관형성 억제 치료법의 연구에 가장 적합한 모델 중 하나이다.

이러한 결과는, 다수의 최근의 논문들이 CXCL8을 포함한 케모카인의 억제가 종양 성장을 억제하지 않고 반대로 촉진함을 개시하고 있기 때문에, 뜻밖이다. 이런 식으로, 야오(Yao) 등(2007)은 CXCL-8의 억제가 누드 마우스에서 종양 성장을 촉진함을 입증하였다.

놀랍게도, 상기 새로 개발된 항체들은 단독으로 또는 함께 사용되는 상업적인 항-CXCL1, 항-CXCL7 및 항-CXCL8 항체보다 더 효율적으로 종양 성장을 억제할 수 있다. 이러한 결과는 발명자들이 상업적인 항-CXCL7 및 항-CXCL8 항체의 조합(상업적인 항-CXCL1 항체와 함께 또는 상기 항체 없이)이 종양 성장의 억제에 부가적인 효과를 획득할 수 없음을 입증하였기 때문에 정말로 놀라운 것이다. 반대로, 발명자들은 상업적인 항-CXCL7 및 항-CXCL8 항체의 병용이 종양 성장의 억제에 대한 그들의 별도의 사용보다 덜 효율적이며 RCC의 마우스 모델에서 종양발생 촉진 효과를 가짐을 입증하였다.

따라서, 하나의 태양에서, 본 발명은 인간 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 단리된 항체 또는 그의 단편에 관한 것이며, 상기 항체 또는 그의 단편은 표면 플라스몬 공명에 의해, 특히 25 ℃에서 및 보다 특히 실시예들에 개시된 비아코어(Biacore)(등록상표) 플라스몬 공명 분석에 따라 측정시, 최대한 16 nM의 평형 해리 상수(K_D)를 갖는 인간 케모카인 CXCL1, 최대한 5 nM의 평형 해리 상수(K_D)를 갖는 인간 케모카인 CXCL7, 및 최대한 45 nM의 평형 해리 상수(K_D)를 갖는 인간 케모카인 CXCL8에 결합할 수 있다.

본 발명의 항체를, 래트와 같은 동물을 인간 CXCL7에 특이적이지만 인간 CXCL1 및 8과 유사성을 공유하는 펩티드, 특히 서열 SDLYAELRCMCIKTTSGIHPKNIQS(서열번호 20)의 펩티드로 면역시킨 다음, 선별 방법에 의해 항체를 단리시킴으로써 획득할 수 있다. 항체를 단리시키기 위한 상이한 선별 방법, 예를 들어 키홀 림펫 헤모시아닌에 커플링된 상기 펩티드상에서의 ELISA 시험 및 문헌[Bourcier et al.(2011)]에 개시된 바와 같이 CXCR2를 발현하는 세포에서 CXCL-7 유도된 ERK 활성화를 억제하는 항체 능력의 시험을 사용할 수 있다.

특정한 실시태양에서, 본 발명은 또한

i) 적어도 하나의 동물을, 인간 CXCL7에 특이적이지만 인간 CXCL1 및 8과 유사성을 공유하는 적어도 하나의 펩티드, 및 특히 서열 SDLYAELRCMCIKTTSGIHPKNIQS(서열번호 20)의 펩티드로 면역시키고,

ii) 당해 분야의 숙련가에 의해 공지된 임의의 방법, 예를 들어 상기 동물로부터 B 세포를 단리하고 상기 B 세포를 골수종 세포와 융합시켜 단클론 항체를 분비할 수 있는 불멸의 하이브리도마 세포를 형성시킴으로써 단클론 항체를 생성시키고,

iii) 서열번호 20 서열의 펩티드 또는 키홀 림펫 헤모시아닌에 커플링된 서열번호 20 서열의 펩티드에 결합할 수 있는 항체, 및/또는 특히 문헌[Bourcier et al.(2011)]에 개시된 바와 같은 분석에서, CXCR2를 발현하는 세포에서 CXCL-7 유도된 ERK 활성화를 억제할 수 있는 항체를 단리시키는 선별 방법을 수행하는

단계들을 포함하는 방법에 의해 수득되거나, 또는 상기 방법에 의해 수득되기 쉬운 항체에 관한 것이다.

본 발명에 따른 항체는 특히 하기의 이점들을 갖는다:

- 상기 항체는 다수의 CXCL 케모카인, 특히 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 독특한 개시된 항체이고;

- 각각의 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 상기 항체의 친화성이 상기 케모카인들 중 단지 하나에 대해 상업적으로 입수할 수 있는 항체들에 비해 중요하며;

- 실험 모델에서 종양 성장을 증가시키는 베바시주맵(VEGF에 대한 항체)에 비해(Escudier et al.., 2010), 본 발명의 항체는 종양 성장을 억제하고;

- 본 발명의 항체는 전형적인 VEGF/VEGFR 경로와 상이한 독립적인 혈관형성 경로를 표적화한다. 상기 CXCL 케모카인 경로는 혈관형성성이고 염증성이다. 더욱이 CXCL 케모카인은, 종양 세포가 그들의 수용체 CXCR1 및 CXCR2를 발현하기 때문에 자가분비 증식 경로를 유도한다. 따라서 관련된 CXCL 케모카인(CXCL1, CXCL7 및 CXCL8) 혈관형성을 억제함으로써, 염증 및 증식이 본 발명의 항체에 의해 억제된다.

달리 정의되지 않는 한, 본 발명에 사용된 모든 과학기술 용어들은 관련 분야의 숙련가에게 통상적으로 이해되는 바와 같은 의미를 갖는다.

편의상, 명세서 및 특허청구범위에 사용되는 몇몇 용어 및 어구들의 의미를 제공한다.

본 발명에 사용되는 바와 같은 "항체"란 용어는 단클론 항체, 다클론 항체, 다중특이성 항체(예를 들어 이중특이성 항체)를 포함함을 의미한다. 보다 특히, 항체(또는 "면역글로불린")는 다이설파이드 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중(H)쇄 및 2개의 경(L)쇄를 포함하는 당단백질들로 이루어진다.

각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(또는 도메인)(본 발명에서 V_H로서 약기한다) 및 중쇄 불변 영역(이후부터 C_H)을 포함한다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타, 또는 입실론으로서 분류되며, 각각 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE로서 상기 항체의 아이소타입을 한정한다. 상기 면역글로불린 IgG, IgD 및 IgA의 중쇄 불변 영역(각각 γ, δ, 및 α 쇄)은 3개의 도메인(CH1, CH2 및 CH3) 및 가중된 가요성을 위한 힌지 영역을 포함하며, 상기 면역글로불린 IgM 및 IgE의 중쇄 불변 영역은 4개의 도메인(CH1, CH2, CH3 및 CH4)을 함유한다.

본 발명의 항체는 그의 중쇄의 구조에 따라 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE 아이소타입을 가질 수 있다. 그러나, 바람직한 실시태양에서, 본 발명의 항체는 IgG 아이소타입의 것이다, 즉 그의 중쇄는 감마(γ) 유형을 갖는다.

IgG 항체는 혈청 중의 그의 풍부성의 순으로 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4(IgG1이 가장 풍부하다)라 명명하는 4개의 별개의 하위유형으로 분류된다. 상기 γ 쇄 중의 힌지 영역의 구조는 이들 각각의 하위유형에게 그의 독특한 생물학적 프로파일을 제공한다(이들의 Fc 영역들간에 약 95%의 유사성이 존재한다 하더라도, 상기 힌지 영역의 구조는 비교적 상이하다).

본 발명의 항체는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 하위유형을 가질 수 있다.

그러나, 바람직한 실시태양에서, 본 발명의 항체는 IgG1 하위유형 또는 IgG2 하위유형을 갖는다.

각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본 발명에서 V_L로서 약기한다) 및 단지 하나의 도메인만을 포함하는 경쇄 불변 영역(C_L)을 포함한다. 포유동물에서 2가지 유형의 경쇄가 존재한다: 염색체 2상의 면역글로불린 카파 자리에 의해 암호화되는 카파(κ) 쇄, 및 염색체 22상의 면역글로불린 람다 자리에 의해 암호화되는 람다(λ) 쇄. 바람직한 실시태양에서, 본 발명의 항체는 카파 경쇄를 갖는다.

상기 V_H 및 V_L 영역을, 주로 항원의 에피토프에의 결합을 담당하고 "프레임워크 영역"(FR)이라 칭하는, 보다 보존된 영역이 산재된 "상보성 결정 영역"(CDR)이라 칭하는 고가변성 영역들로 추가로 세분할 수 있다. 각각의 V_H 및 V_L은 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성되며, 이들은 하기의 순서로 아미노-말단에서부터 카복시-말단으로 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 각각의 도메인에 대한 아미노산 서열의 정렬은 널리 공지된 규약(CHOTHIA et al., J. Mol . Biol., 1987; CHOTHIA et al., Nature, 1989)에 따른다. 특정 항원과 결합하는 상기 항체의 기능성 능력은 각 경/중쇄 쌍의 가변 영역들에 따라 변하며, 주로 CDR에 의해 결정된다. 상기 중쇄의 가변 영역은 상이한 B 세포에 의해 생산된 항체에 대해 상이하지만, 단일 B 세포 또는 B 세포 클론(또는 하이브리도마)에 의해 생산된 모든 항체에 대해서는 동일하다.

대조적으로, 상기 항체의 불변 영역은 숙주 조직 또는 인자, 예를 들어 면역계의 다양한 세포(예를 들어 효과기 세포) 및 전형적인 보체 시스템의 제1 성분(Clq)의 상기 면역글로불린의 결합을 매개한다.

본 발명에 사용되는 바와 같이, "항체 단편"이란 용어는 목적하는 생물 활성을 나타내는 한(즉 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 것인 한) Fab, Fab', F(ab')2, scFv, dsFv, ds-scFv, 이량체, 미니바디, 다이아바디, 및 이들의 다량체 및 이중특이성 항체 단편을 가리키고자 한다. 항체를 통상적인 기법을 사용하여 단편화시킬 수 있다. 다양한 기법들이 항체 단편의 생성을 위해 개발되었다. 전통적으로는, 이들 단편을 완전한 항체의 단백질 분해 절단을 통해 획득하였다. 예를 들어, F(ab')2 단편은 상기 항체를 펩신으로 처리함으로써 생성시킬 수 있다. 상기 생성되는 F(ab')2 단편을 다이설파이드 가교를 감소시키도록 처리하여 Fab' 단편들을 생성시킬 수 있다. 파파인 절단(Papain digestion)이 Fab 단편의 형성을 이끌어낼 수 있다. Fab, Fab' 및 F(ab')2, scFv, dsFv, ds-scFv, 이량체, 미니바디, 다이아바디, 이중특이성 항체 단편 및 다른 단편들을 또한 재조합 기법에 의해 합성할 수 있다.

본 발명과 관련하여, 항체를, 상기 항체가 펩티드에 대해 10⁷ M^-1 초과, 바람직하게는 5.10⁷ M^-1 초과, 보다 바람직하게는 10⁸ M^-1 초과의 친화성 상수 K_a(역전된 평형 해리 상수, 즉 1/K_D이다)를 갖는 경우, 상기 펩티드에 "대한" 또는 "결합한다"라고 한다.

펩티드 또는 항원(Ag)에의 항체(Ab)의 결합을 특성화하기 위해 사용되는 친화성 상수는 하기와 같이 정의되는 역전된 해리 상수이다:

상기 친화성을 예를 들어 평형 투석에 의해서, 형광 소광에 의해서, 또는 표면 플라스몬 공명에 의해서 측정할 수 있으며, 이들 기술은 당해 분야에 통상적으로 사용된다. 특히, 상기 평형 해리 상수(K_D) 및 친화성 상수(K_a)를 실시예에 개시된 방법에 따라 표면 플라스몬 공명에 의해 측정할 수 있다.

특히, 본 발명의 단리된 항체 또는 그의 단편은 표면 플라스몬 공명에 의해, 특히 25 ℃에서 및 보다 특히 실시예들에 개시된 비아코어(등록상표) 플라스몬 공명 분석에 따라 측정시, 최대한 16 nM의 평형 해리 상수(K_D)를 갖는 인간 케모카인 CXCL1, 최대한 4 nM의 평형 해리 상수(K_D)를 갖는 인간 케모카인 CXCL7, 및 최대한 45 nM의 평형 해리 상수(K_D)를 갖는 인간 케모카인 CXCL8에 결합할 수 있다.

특히 본 발명의 단리된 항체 또는 그의 단편은 표면 플라스몬 공명에 의해, 특히 25 ℃에서 및 보다 특히 실시예들에 개시된 비아코어(등록상표) 플라스몬 공명 분석에 따라 측정시, 최대한 12 nM의 평형 해리 상수(K_D)를 갖는 인간 케모카인 CXCL1, 최대한 5 nM의 평형 해리 상수(K_D)를 갖는 인간 케모카인 CXCL7, 및 최대한 20 nM의 평형 해리 상수(K_D)를 갖는 인간 케모카인 CXCL8에 결합할 수 있다.

본 발명에 사용되는 바와 같이, "CXCL1"이란 용어는 성장-조절된 발암유전자 알파, GRO-α로서 또한 공지된 CXC 케모카인에 관한 것이다.

바람직하게, 인간 CXCL1은 서열번호 17(NCBI 기준 서열: NM_001511)에 나타낸 서열에 의해 암호화된 케모카인에 관한 것이다.

본 발명에 사용되는 바와 같이, "CXCL7"이란 용어는 호중구 활성화 펩티드-2, NAP-2로서 또한 공지된 CXC 케모카인에 관한 것이다.

바람직하게, 인간 CXCL7은 서열번호 18(GenBank: NM_002704)에 나타낸 서열에 의해 암호화된 케모카인에 관한 것이다.

본 발명에 사용되는 바와 같이, "CXCL8"이란 용어는 인터류킨 8, IL-8로서 또한 공지된 CXC 케모카인에 관한 것이다.

바람직하게, 인간 CXCL8은 서열번호 19(GenBank: NM_000584)에 나타낸 서열에 의해 암호화된 케모카인에 관한 것이다.

본 발명의 소개에서 언급한 일치성(identity)의 백분율은, 예를 들어 니들맨과 분쉬(Needleman and Wunsch 1970)의 연산을 사용하여, 비교되는 서열들의 전체적인 정렬을 기준으로, 즉 전체 길이에 걸친 서열들의 정렬을 기준으로 측정된다. 상기 서열 비교는 예를 들어 10.0인 매개변수 "끊김(Gap open)" 0.5인 매개변수 "끊김 확장(Gap Extend)", 및 "BLOSUM62" 행렬을 사용함으로써 상기 니들 소프트웨어를 사용하여 수행될 수 있다. 니들과 같은 소프트웨어는 "needle"이란 이름으로 www.ebi.ac.uk 웹사이트에서 입수할 수 있다.

특히, 본 발명에 따른 인간 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 단리된 항체 또는 그의 단편은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 12를 포함하거나 상기 서열들로 이루어지는 서열, 서열번호 1의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 1과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 2의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 2와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 3의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 3과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 4의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 4와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 5의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 5와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 6의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 6과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 7의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 7과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 8의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 8과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 9의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 9와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 10의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 10과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 11의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 11과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 또는 서열번호 12의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 12와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열의 CDR들 중에서 선택된, 특히 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11, 또는 서열번호 12로 이루어지는 서열의 상보성 결정 영역(CDR) 중에서 선택된 적어도 하나, 특히 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 및 보다 특히 6개의 CDR을 포함한다.

특히, 본 발명에 따른 인간 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 단리된 항체 또는 그의 단편은

- 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 12, 서열번호 1의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 1과 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 2의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 2와 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 3의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 3과 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 4의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 4와 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 5의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 5와 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 6의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 6과 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 7의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 7과 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 8의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 8과 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 9의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 9와 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 10의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 10과 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 11의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 11과 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 12의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 12와 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열, 특히 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 12로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 서열의 CDR로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 6개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다.

특히, 본 발명에 따른 인간 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 단리된 항체 또는 그의 단편은

- 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 1의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 1과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 2의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 2와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 3의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 3과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 7의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 7과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 8의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 8과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 또는 서열번호 9의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 9와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 상기 서열들로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된, 특히 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 7, 서열번호 8, 또는 서열번호 9로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된 적어도 하나, 특히 적어도 2개, 및 보다 특히 3개의 CDR; 및

- 특히, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 12, 서열번호 4의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 4와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 5의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 5와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 6의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 6과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 10의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 10과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 11의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 11과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 또는 서열번호 12의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 12와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 상기 서열들로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된, 특히 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 10, 서열번호 11, 또는 서열번호 12로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된 적어도 하나, 특히 적어도 2개, 및 보다 특히 3개의 CDR;

을 포함한다.

특히, 본 발명에 따른 인간 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 단리된 항체 또는 그의 단편은

- 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 1의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 1과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 2의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 2와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 3의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 3과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 상기 서열들로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된, 특히 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된, 적어도 하나, 특히 적어도 2개, 및 보다 특히 3개의 CDR; 또는

- 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 7의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 7과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 8의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 8과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 또는 서열번호 9의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 9와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 상기 서열들로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된, 특히 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된, 적어도 하나, 특히 적어도 2개, 및 보다 특히 3개의 CDR; 및

- 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 4의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 4와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 5의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 5와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 6의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 6과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 상기 서열들로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된, 특히 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6으로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된, 적어도 하나, 특히 적어도 2개, 및 보다 특히 3개의 CDR; 또는

- 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 12, 서열번호 10의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 10과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 11의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 11과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 또는 서열번호 12의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 12와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 상기 서열들로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된, 특히 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 12로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된, 적어도 하나, 특히 적어도 2개, 및 보다 특히 3개의 CDR

을 포함한다.

특히, 본 발명에 따른 인간 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 단리된 항체 또는 그의 단편은

- 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 1의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 1과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 2의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 2와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 3의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 3과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 상기 서열들로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된, 특히 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된, 적어도 하나, 특히 적어도 2개, 및 보다 특히 3개의 CDR; 및

- 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 4의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 4와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 5의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 5와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 6의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 6과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 상기 서열들로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된, 특히 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6으로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된, 적어도 하나, 특히 적어도 2개, 및 보다 특히 3개의 CDR

을 포함한다.

특히, 본 발명에 따른 인간 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 단리된 항체 또는 그의 단편은

- 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 7의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 7과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 8의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 8과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 또는 서열번호 9의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 9와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 상기 서열들로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된, 특히 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된, 적어도 하나, 특히 적어도 2개, 및 보다 특히 3개의 CDR; 및

- 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 12, 서열번호 10의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 10과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 11의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 11과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 또는 서열번호 12의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 12와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 상기 서열들로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된, 특히 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 12로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된, 적어도 하나, 특히 적어도 2개, 및 보다 특히 3개의 CDR

을 포함한다.

특히, 본 발명에 따른 인간 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 단리된 항체 또는 그의 단편은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 1의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 1과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 2의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 2와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 3의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 3과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 4의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 4와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 5의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 5와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 6의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 6과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 상기 서열들로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된, 특히 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6으로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된, 6개의 CDR을 포함한다.

특히, 본 발명에 따른 인간 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 단리된 항체 또는 그의 단편은 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 12, 서열번호 7의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 7과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 8의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 8과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 또는 서열번호 9의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 9와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 10의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 10과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 서열번호 11의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 11과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 또는 서열번호 12의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 12와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 상기 서열들로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된, 특히 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 12로 이루어지는 서열의 CDR 중에서 선택된 6개의 CDR을 포함한다.

본 발명의 항체의 또 다른 실시태양에서, 상기 경쇄 가변 영역(V_L)은

- 서열번호 1 또는 서열번호 7의 서열, 또는 서열번호 1의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 1과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 또는 서열번호 7의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 7과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 특히 서열번호 1 또는 서열번호 7의 서열의 경쇄 CDR1(LC-CDR1); 및/또는

- 서열번호 2 또는 서열번호 8의 서열, 또는 서열번호 2의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 2와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 또는 서열번호 8의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 8과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 특히 서열번호 2 또는 서열번호 8의 서열의 경쇄 CDR2(LC-CDR2); 및/또는

- 서열번호 3 또는 서열번호 9의 서열, 또는 서열번호 3의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 3과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 또는 서열번호 9의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 9와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 특히 서열번호 3 또는 서열번호 9의 서열의 경쇄 CDR3(LC-CDR3)

을 포함하고; 및

상기 중쇄 가변 영역(VH)은

- 서열번호 4 또는 서열번호 10의 서열, 또는 서열번호 4의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 4와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 또는 서열번호 10의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 10과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 특히 서열번호 4 또는 서열번호 10의 서열의 중쇄 CDR1(HC-CDR1); 및/또는

- 서열번호 5 또는 서열번호 11의 서열, 또는 서열번호 5의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 5와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 또는 서열번호 11의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 11과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 특히 서열번호 5 또는 서열번호 11의 서열의 중쇄 CDR2(HC-CDR2); 및/또는

- 서열번호 6 또는 서열번호 12의 서열, 또는 서열번호 6의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 6과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 또는 서열번호 12의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 12와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 특히 서열번호 6 또는 서열번호 12의 서열의 중쇄 CDR3(HC-CDR3)

를 포함한다.

특히, 본 발명에 따른 항체의 경쇄 가변 영역(V_L)은

- 서열번호 1의 서열의 경쇄 CDR1(LC-CDR1); 및

- 서열번호 2의 서열의 경쇄 CDR2(LC-CDR2); 및

- 서열번호 3의 서열의 경쇄 CDR3(LC-CDR3)

을 포함한다.

특히, 본 발명에 따른 항체의 중쇄 가변 영역(V_H)은

- 서열번호 4의 서열의 중쇄 CDR1(HC-CDR1); 및

- 서열번호 5의 서열의 중쇄 CDR2(HC-CDR2); 및

- 서열번호 6의 서열의 중쇄 CDR3(HC-CDR3)

을 포함한다.

특히, 본 발명에 따른 항체의 경쇄 가변 영역(V_L)은

- 서열번호 7의 서열의 경쇄 CDR1(LC-CDR1); 및

- 서열번호 8의 서열의 경쇄 CDR2(LC-CDR2); 및

- 서열번호 9의 서열의 경쇄 CDR3(LC-CDR3)

을 포함한다.

특히, 본 발명에 따른 항체의 중쇄 가변 영역(V_H)은

- 서열번호 10의 서열의 중쇄 CDR1(HC-CDR1); 및

- 서열번호 11의 서열의 중쇄 CDR2(HC-CDR2); 및

- 서열번호 12의 서열의 중쇄 CDR3(HC-CDR3)

을 포함한다.

특히, 본 발명에 따른 항체의 경쇄 가변 영역(V_L)은

- 서열번호 1의 서열, 또는 서열번호 1의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 1과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 특히 서열번호 1의 서열의 경쇄 CDR1(LC-CDR1); 및

- 서열번호 2의 서열, 또는 서열번호 2의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 2와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 특히 서열번호 2의 서열의 경쇄 CDR2(LC-CDR2); 및

- 서열번호 3의 서열, 또는 서열번호 3의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 3과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 특히 서열번호 3의 서열의 경쇄 CDR3(LC-CDR3)

을 포함하고; 및

상기 중쇄 가변 영역(VH)은

- 서열번호 4의 서열, 또는 서열번호 4의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 4와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 특히 서열번호 4의 서열의 중쇄 CDR1(HC-CDR1); 및

- 서열번호 5의 서열, 또는 서열번호 5의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 5와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 특히 서열번호 5의 서열의 중쇄 CDR2(HC-CDR2); 및

- 서열번호 6의 서열, 또는 서열번호 6의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 6과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 특히 서열번호 6의 서열의 중쇄 CDR3(HC-CDR3)

을 포함한다.

특히, 본 발명에 따른 항체의 경쇄 가변 영역(V_L)은

- 서열번호 1의 서열의 경쇄 CDR1(LC-CDR1); 및

- 서열번호 2의 서열의 경쇄 CDR2(LC-CDR2); 및

- 서열번호 3의 서열의 경쇄 CDR3(LC-CDR3)

을 포함하고; 및

상기 중쇄 가변 영역(VH)은

- 서열번호 4의 서열의 중쇄 CDR1(HC-CDR1); 및

- 서열번호 5의 서열의 중쇄 CDR2(HC-CDR2); 및

- 서열번호 6의 서열의 중쇄 CDR3(HC-CDR3)

을 포함한다.

특히, 본 발명에 따른 항체의 경쇄 가변 영역(V_L)은

- 서열번호 7의 서열, 또는 서열번호 7의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 7과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 특히 서열번호 7의 서열의 경쇄 CDR1(LC-CDR1); 및

- 서열번호 8의 서열, 또는 서열번호 8의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 8과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 특히 서열번호 8의 서열의 경쇄 CDR2(LC-CDR2); 및

- 서열번호 9의 서열, 또는 서열번호 9의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 9와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 특히 서열번호 9의 서열의 경쇄 CDR3(LC-CDR3)

을 포함하고; 및

상기 중쇄 가변 영역(VH)은

- 서열번호 10의 서열, 또는 서열번호 10의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 10과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 특히 서열번호 10의 서열의 중쇄 CDR1(HC-CDR1); 및

- 서열번호 11의 서열, 또는 서열번호 11의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 11과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 특히 서열번호 11의 서열의 중쇄 CDR2(HC-CDR2); 및

- 서열번호 12의 서열, 또는 서열번호 12의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 12와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열, 특히 서열번호 12의 서열의 중쇄 CDR3(HC-CDR3)

을 포함한다.

특히, 본 발명에 따른 항체의 경쇄 가변 영역(V_L)은

- 서열번호 7의 서열의 경쇄 CDR1(LC-CDR1); 및

- 서열번호 8의 서열의 경쇄 CDR2(LC-CDR2); 및

- 서열번호 9의 서열의 경쇄 CDR3(LC-CDR3)

을 포함하고; 및

상기 중쇄 가변 영역(VH)은

- 서열번호 10의 서열의 중쇄 CDR1(HC-CDR1); 및

- 서열번호 11의 서열의 중쇄 CDR2(HC-CDR2); 및

- 서열번호 12의 서열의 중쇄 CDR3(HC-CDR3)

을 포함한다.

특히, 상기 경쇄 가변 영역(V_L)의 서열은 서열번호 13의 서열, 또는 서열번호 13의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 13과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 상기 서열들로 이루어지고/이루어지거나; 상기 중쇄 가변 영역(V_H)의 서열은 서열번호 14의 서열, 또는 서열번호 14의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 14와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 상기 서열들로 이루어진다.

하나의 실시태양에서, 상기 경쇄 가변 영역(V_L)의 서열은 서열번호 13의 서열로 이루어지고 상기 중쇄 가변 영역(V_H)의 서열은 서열번호 14의 서열로 이루어진다.

특히, 상기 경쇄 가변 영역(V_L)의 서열은 서열번호 15의 서열, 또는 서열번호 15의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 15와 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 상기 서열들로 이루어지고/이루어지거나; 상기 중쇄 가변 영역(V_H)의 서열은 서열번호 16의 서열, 또는 서열번호 16의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 16과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 상기 서열들로 이루어진다.

또 다른 실시태양에서, 상기 경쇄 가변 영역(V_L)의 서열은 서열번호 15의 서열로 이루어지고 상기 중쇄 가변 영역(V_H)의 서열은 서열번호 16의 서열로 이루어진다.

본 발명의 항체는 다클론 또는 단클론 항체일 수 있다.

본 발명에 사용되는 바와 같은 "다클론 항체"는 상이한 B 세포 자원들로부터 획득된 항체를 표시한다. 상기는 전형적으로 표적 항원(들)의 다양한 결정인자들, 또는 에피토프에 대한 다양한 항체들을 포함한다. 이들 항체는 동물에서 생성될 수 있다. 분자 생물학, 미생물학의 통상적인 기법들 및 재조합 DNA 기법이 당해 분야의 기술 내에 있다. 상기와 같은 기법은 문헌에 충분히 설명되어 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체를 하기의 통상적인 방법에 의해 제조할 수 있다. 포유동물(예를 들어 마우스, 햄스터 또는 토끼)을, 상기 포유동물에서 항체 반응을 이끌어내는 면역원 형태의 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8로 면역시킬 수 있다. 폴리펩티드상에 면역원성을 부여하는 기법은 담체에의 접합 또는 당해 분야에 널리 공지된 다른 기법들을 포함한다. 예를 들어, 상기 폴리펩티드를 항원보강제의 존재하에서 투여할 수 있다. 상기 면역화의 진행을 혈장 또는 혈청 중 항체 역가의 검출에 의해 모니터할 수 있다. 상기 항체의 수준을 평가하기 위해 표준 ELISA 또는 다른 면역분석 과정들을 항원으로서 면역원과 함께 사용할 수 있다. 면역화에 이어서, 항혈청을 획득할 수 있으며, 경우에 따라 상기 혈청으로부터 다클론 항체를 단리할 수 있다.

본 발명에 사용되는 바와 같은 "단클론 항체"는 거의 동종의 항체 집단으로부터 발생하는 항체를 의미한다. 보다 특히, 집단의 주 항체는 최소의 비율로 발견될 수 있는 몇 개의 가능한 천연 돌연변이를 제외하고 동일하다. 즉, 단클론 항체는 단세포 클론(예를 들어 하이브리도마, 상기 동종 항체를 암호화하는 DNA 분자로 형질감염된 진핵생물 숙주 세포, 상기 동종 항체를 암호화하는 DNA 분자로 형질감염된 원핵생물 숙주 세포 등)의 성장으로부터 발생하는 동종 항체로 이루어지며 일반적으로는 하나 및 단지 하나의 아이소타입 및 하위유형의 중쇄, 및 단지 한 가지 유형의 경쇄를 특징으로 한다. 또한, 다클론 항체의 제제와 대조적으로, 각각의 단클론 항체는 항원의 단일 에피토프에 대한 것이다.

단클론 항체를 생성시키기 위해서, 항체 생산 세포(림프구)를 상술한 바와 같이 면역된 동물로부터 수확하고 표준 체세포 융합 과정에 의해 골수종 세포와 융합시켜 상기 세포를 불멸화하고 하이브리도마 세포를 제공할 수 있다. 상기와 같은 기법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다(예를 들어 콜러와 밀스테인(Kohler and Milstein, 1975)에 의해 최초로 개발된 하이브리도마 기법뿐만 아니라 다른 기법들, 예를 들어 인간 B-세포 하이브리도마 기법(Kozbor et al., 1983), 인간 단클론 항체를 생산하는 EBV-하이브리도마 기법(Cole et al., Methods Enzymol, 121:140-67(1986)), 및 조합 항체 라이브러리의 선별(Huse et al., Science 246:1275(1989))이다. 하이브리도마 세포를, 오직 표적 폴리펩티드(들)에 결합하는 단클론 항체만이 단리되도록 상기 폴리펩티드(들)와 특이적으로 반응성인 항체의 생산을 위해 면역화학적으로 선별할 수 있다.

특히, 본 발명의 항체는 단클론 항체이다.

본 발명의 항체는 인간, 키메릭, 인간화, 뮤린, CDR-그래프트, 파지-디스플레이, 세균-디스플레이, 효모-디스플레이, 트랜스제닉-마우스 생산, 돌연변이, 및 무작위화될 수 있다.

키메릭 항체는 상이한 부분들이 상이한 동물 종들로부터 유래되는 분자, 예를 들어 뮤린 단클론 항체(mAb)로부터 유래된 가변 영역 및 인간 면역글로불린 불변 영역을 갖는 분자이다(예를 들어 카빌리(Cabilly) 등의 미국특허 제 4,816,567 호 및 보스(Boss) 등의 미국특허 제 4,816,397 호를 참조하시오). 단쇄 항체는 하나의 항원 결합 부위를 가지며 단일 폴리펩티드로 이루어진다. 상기 항체를 당해 분야에 공지된 기법에 의해, 예를 들어 라드너(Ladner) 등의 미국특허 제 4,946,778 호에 개시된 방법을 사용하여 생성시킬 수 있다.

본 발명의 항체의 인간화된 형태는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메릭 항체이다. 대개, 인간화된 항체는 수용자의 고가변 영역으로부터의 잔기가 비-인간 종(공여자 항체), 예를 들어 목적하는 특이성, 친화성 및 능력을 갖는 마우스, 래트, 토끼 또는 비인간 영장류의 고가변 영역으로부터의 잔기에 의해 치환된 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다. 일부 예에서, 인간 면역글로불린(수용자 항체)의 프레임워크 영역(FR) 잔기가 공여자 항체의 상응하는 비-인간 잔기에 의해 치환된다. 더욱 또한, 인간화된 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 일반적으로, 상기 인간화된 항체는 적어도 하나 및 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 전부 포함할 수 있으며, 여기에서 상기 고가변 루프의 전부 또는 실질적으로 전부는 비-인간 면역글로불린(목적하는 특이성, 친화성 및 능력을 갖는 공여자 항체)의 것들에 상응하며 상기 FR의 전부 또는 실질적으로 전부는 인간 면역글로불린 서열의 것들이다. 하나의 실시태양에서, 인간화된 항체는 수용체(비-인간) FR, 예를 들어 뮤린 FR과 적어도 65%의 서열 일치성을 나타내는 인간화된 FR을 포함한다. 상기 인간화된 항체는 또한 면역글로불린 불변 영역(Fc), 특히 인간 면역글로불린의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 비-인간 항체의 인간화 방법은 당해 분야에 개시되었다. 바람직하게, 인간화된 항체는 비-인간인 공급원으로부터 상기 항체내로 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 갖는다. 이들 비-인간 아미노산 잔기를 종종 "수입" 잔기라 칭하며, 상기 잔기는 전형적으로 "수입" 가변 도메인으로부터 유래한다. 인간화는 고가변 영역 서열을 인간 항체의 상응하는 서열 대신 치환시킴으로써 필수적으로 수행될 수 있다. 따라서, 상기와 같은 인간화된 항체는 완전한 인간 가변 도메인보다 실질적으로 적게 비-인간 종으로부터 상응하는 서열에 의해 치환된 키메릭이다. 실제로, 인간화된 항체는 전형적으로 일부 고가변 영역 잔기 및 가능하게는 일부 FR 잔기가 설치류 항체 중의 유사한 부위로부터의 잔기에 의해 치환된 인간 항체이다. 상기 인간화된 항체의 제조에 사용되는 인간 가변 도메인(경쇄 및 중쇄 모두)의 선택은 항원성을 감소시키는데 매우 중요하다. 다른 방법은 일반적으로 항체 수용체 가변 영역 프레임워크상에 공여자 CDR 결합 친화성을 부여함을 포함한다. 한 가지 방법은 동시적인 이식 및 가변 영역 결합 단편의 결합 친화성의 최적화를 포함한다. 또 다른 방법은 항체 가변 영역의 결합 친화성을 최적화함에 관한 것이다.

다중-특이성 항체는 상이한 항원들에 특이적으로 결합하는 적어도 2개의 항원-결합 부위를 갖는 항체 분자이다. 상기와 같은 분자는 당해 분야에 공지된 기법에 의해, 예를 들어 세갈(Segal)의 미국특허 제 4,676,980 호 또는 미국특허 제 6,121,424 호에 개시된 방법을 사용하여 생성시킬 수 있다. 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 단클론 항체를 관심 폴리펩티드(들)를 갖는 재조합 조합 면역글로불린 라이브러리(예를 들어 항체 파지 디스플레이 라이브러리)를 선별함으로써 확인하고 단리할 수 있다. 파지 디스플레이 라이브러리의 생성 및 선별을 위한 키트를 상업적으로 입수할 수 있다. 추가로, 특히 항체 디스플레이 라이브러리의 생성 및 선별에 사용될 수 있는 방법 및 시약의 예들을 예를 들어 미국특허 제 5,223,409 호, WO 92/18619 및 WO 91/17271에서 찾을 수 있다.

항체를 생성 후(예를 들어 동물의 혈액 또는 혈청으로부터) 단리하거나 합성하고 널리-공지된 기법에 의해 추가로 정제할 수 있다. 단백질에 특이적인 항체를 친화성 크로마토그래피, ELISPOT 또는 ELISA에 의해 선택하거나 정제할 수 있다. 예를 들어, 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8을 고체 지지체, 예를 들어 크로마토그래피 컬럼에 공유 또는 비-공유 커플링시킬 수 있다. 이어서 상기 컬럼을 사용하여 다수의 상이한 에피토프들에 대한 항체를 함유하는 샘플로부터 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 항체를 정제하고, 이에 의해 실질적으로 정제된 항체 조성물, 즉 오염 항체가 실질적으로 없는 조성물을 생성시킬 수 있다. "실질적으로 정제된 항체 조성물"이란 이 상황에서 상기 항체 샘플이 스트렙-태그 II 서열의 경우 이외에 에피토프에 대한 오염 항체를 단지 30%(건조 중량 기준) 이하로 함유하며, 바람직하게는 상기 샘플의 20% 이하, 더욱더 바람직하게는 10% 이하 및 가장 바람직하게는 5% 이하(건조 중량 기준)가 오염 항체임을 의미한다. "정제된 항체 조성물"은 상기 조성물 중의 항체의 적어도 99%가 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 것임을 의미한다.

본 발명의 항체를 그의 "네이키드(naked)" 또는 접합되지 않은 형태로 투여하거나, 또는 상기 항체는 상기에 접합된 다른 작용제를 가질 수도 있다. 예를 들어 상기 항체는 검출 가능하게 표지된 형태로 존재할 수 있다. 항체를 방사성동위원소, 친화성 표지(예를 들어 비오틴, 아비딘 등), 효소 표지(예를 들어 양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제 등), 형광 표지(예를 들어 FITC 또는 로다민 등), 상자성 원자 등의 사용을 통해 검출 가능하게 표지할 수 있다. 상기와 같은 표지화를 수행하는 과정은 당해 분야에 널리 공지되어 있다.

또 다른 실시태양에서, 본 발명의 항체를 동결건조시킨다. 상기와 같은 실시태양에서, 상기 동결건조된 항체를 투여시에 담체 또는 희석제, 예를 들어 상기에 개시된 것들과 혼합한다. 더욱 또 다른 실시태양에서, 본 발명의 항체를 중합체와 같은 화합물에 접합시킨다. 하나의 실시태양에서, 상기 중합체는 폴리알킬렌 글리콜이다. 하나의 실시태양에서, 상기 폴리알킬렌 글리콜은 폴리에틸렌 글리콜, 또는 PEG이다.

치료법에 사용하기 위해서, 상기 항체(들)를 약학적으로 허용 가능한 부형제와 함께 적합하게 제형화할 것이다. 예방 또는 치료학적 치료에 적합한 제형을 비경구, 바람직하게는 동맥내, 복강내, 정맥내, 피하, 근육내 또는 에어로졸을 통해 투여할 수 있으며, 상기 제형은 유효량의 상기 항체(들)를 함유할 것이다. 상기 량은 환자의 일반적인 상태, 질병의 진행 및 다른 인자들에 따라 변할 것이다.

특히, 본 발명의 항체는 2012년 4월 25일자로 국립 미생물 배양 콜렉션(Collection National de Cultures de Microorganismes, CNCM)에 CNCM I-4617번(또한 발명자에 의해 12A10-13으로서 표시됨)으로 기탁된 하이브리도마에 의해 생산된다.

특히, 본 발명의 항체는 2012년 4월 25일자로 국립 미생물 배양 콜렉션(CNCM)에 CNCM I-4618번(또한 발명자에 의해 35B11-8로서 표시됨)으로 기탁된 하이브리도마에 의해 생산된다.

상기 하이브리도마 CNCM I-4617 및 CNCM I-4618은 LOU-M 래트를, 인간 CXCL7에 특이적이지만 인간 CXCL1 및 8과 유사성을 공유하는 펩티드, 즉 서열 SDLYAELRCMCIKTTSGIHPKNIQS(서열번호 20)의 펩티드로 면역시킴으로써 획득되었다. 상이한 선별 분석, 즉 키홀 림펫 헤모시아닌에 커플링된 상기 펩티드상에서의 ELISA 시험 및 문헌[Bourcier et al.(2011)]에 개시된 바와 같이 CXCR2를 발현하는 세포에서 CXCL-7 유도된 ERK 활성화를 억제하는 항체 능력의 시험을 사용하여 이들 두 하이브리도마를 단리하였다.

이들 하이브리도마는 고수율의 본 발명의 항체를 생산한다.

본 발명은 또한 본 발명에 따른 항체 또는 그의 단편을 암호화하는 단리된 핵산 분자에 관한 것이다.

"핵산 분자"란 용어는 데옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드인 중합체 형태의 뉴클레오티드, 또는 이들의 유사체를 지칭한다.

본 발명은 또한 본 발명에 따른 항체 또는 그의 단편을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 벡터에 관한 것이다. 상기 벡터는 반-안정성 또는 안정성 발현에 적합할 수 있다.

특히, 본 발명에 따른 상기 벡터는 클로닝 또는 발현 벡터이다.

상기 벡터는 박테리오파지와 같은 바이러스 벡터 또는 플라스미드와 같은 비-바이러스 벡터일 수 있다.

본 발명은 또한 본 발명에 따른 항체 또는 그의 단편을 암호화하는 핵산 분자 또는 상기 핵산 분자를 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다.

본 발명은 또한

- 본 발명에 따른 항체 및 그의 단편,

- 본 발명에 따른 항체 또는 그의 단편을 암호화하는 단리된 핵산 분자; 및

- 상기 핵산 분자를 포함하는 벡터

로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 화합물을 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 유리한 실시태양들은 상기 정의된 바와 같다.

"약제" 및 "약학 조성물"이란 용어는 호환적으로 및 본 발명에서 그의 가장 넓은 의미로 사용된다.

상기와 같은 화합물(특히 본 발명에 따른 항체 및 그의 단편, 본 발명에 따른 항체를 암호화하는 단리된 핵산 분자 및 상기 핵산 분자를 포함하는 벡터로 이루어지는 그룹 중에서 선택되는)은 본 발명에 따른 약학 조성물 또는 약제 중에 치료 유효량(활성 및 무독성량)으로 존재할 수 있다. 치료 유효량은 상기 증상 또는 상태를 개선시키는 화합물의 양을 지칭한다. 치료 효능 및 독성을 세포 배양물 또는 실험 동물에서 표준 약학 과정, 예를 들어 ED50(집단의 50%에서 치료학적으로 유효한 양) 및 LD50(집단의 50%에 치명적인 용량)에 의해서 측정할 수 있다. 독성 대 치료 효과의 비가 치료 지수이며 이를 LD50/ED50의 비로서 나타낼 수 있다. 큰 치료 지수를 나타내는 약학 조성물이 바람직하다.

예를 들어, 본 발명에 따른 항체를 환자에게, 적어도 매달, 특히 적어도 3주마다, 보다 특히 적어도 2주마다, 및 훨씬 더 특히 적어도 매주, 상기 환자 체중의 0.1 ㎍/㎏ 내지 100 ㎎/㎏, 특히 1 ㎎/㎏ 내지 50 ㎎/㎏ 범위내의 양으로, 특히 정맥내로 투여할 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물을 임의의 수의 경로, 예를 들어 비제한적으로 경구, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 척추강내, 심실내, 경피, 피하, 복강내, 비내, 장, 국소, 설하, 직장 수단 또는 눈으로 투여할 수 있다.

상기 활성 성분 외에, 본 발명의 약학 조성물은, 상기 활성 화합물의 약학적으로 사용될 수 있는 제제로의 가공을 용이하게 하는 부형제 및 보조제를 포함한 적합한 약학적으로 허용 가능한 담체를 함유할 수 있다. 특히, 본 발명에 따른 약학 조성물을 약학적으로 허용 가능한 담체 중에서 제형화한다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 당해 분야의 숙련가에게 널리 공지되어 있다. 제형 및 투여를 위한 기법에 대한 추가의 상세한 내용은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (Maack Publishing Co., Easton, Pa.)]의 최신판에서 찾을 수 있다.

특히, 상기 약학적으로 허용 가능한 담체는 등장성 용액을 포함하거나 등장성 용액이다.

본 발명은 또한 약제로서 사용하기 위한 본 발명에 따른 항체 또는 그의 단편에 관한 것이다. 유리한 실시태양은 상기에 정의된 바와 같다.

본 발명은 또한 약제로서 사용하기 위한 본 발명에 따른 항체 또는 그의 단편을 암호화하는 단리된 핵산 분자에 관한 것이다. 유리한 실시태양은 상기에 정의된 바와 같다.

본 발명은 또한 약제로서 사용하기 위한 본 발명에 따른 항체를 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 벡터에 관한 것이다. 유리한 실시태양은 상기에 정의된 바와 같다.

본 발명은 또한 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 본 발명에 따른 항체 또는 그의 단편에 관한 것이다. 유리한 실시태양은 상기에 정의된 바와 같다.

본 발명은 또한 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 본 발명에 따른 항체 또는 그의 단편을 암호화하는 단리된 핵산 분자에 관한 것이다. 유리한 실시태양은 상기에 정의된 바와 같다.

본 발명은 또한 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 본 발명에 따른 항체 또는 그의 단편을 암호화하는 단리된 핵산 분자를 포함하는 벡터에 관한 것이다. 유리한 실시태양은 상기에 정의된 바와 같다.

본 발명에 사용되는 바와 같이, "케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8"과 관련된 질병"이란 용어는 상기 케모카인의 적어도 하나, 특히 적어도 둘 및 보다 특히 전부가 관련된 임의의 질병을 지칭한다. 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병은 병적인 혈관형성 질병 및 염증성 질병을 포함한다. 예를 들어, 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 염증성 질병은 녹내장, 습성 나이-관련된 황반 변성, 당뇨성 망막병증과 같은 안과 질병일 수 있다. 염증성 질병은 또한 천식 및 류머티스성 관절염(상기는 또한 혈관형성 질병이다)을 포함한다.

본 발명에 사용되는 바와 같이, "병적인 혈관형성 질병"이란 용어는 내피세포의 이상 증식이 혈관 네트워크의 병적인 발생을 유도하는 임의의 질병을 지칭한다. 병적인 혈관형성 질병의 예는 문헌[Carmeliet et al, 2000]의 논문에 개시되어 있다. 혈관형성은 이상 혈관구조를 특징으로 하는 질병에 대항하기 위한 치료학적 표적일 수 있으며, 따라서 "병적인 혈관형성 질병", "병적인 혈관형성 질환", "바람직하지 못한 과도한 혈관신생을 특징으로 하는 질병", "바람직하지 못한 과도한 혈관신생을 특징으로 하는 질환", "바람직하지 못한 병적인 혈관형성을 수반하는 질병", "바람직하지 못한 병적인 혈관형성을 수반하는 질환", "혈관형성의 억제가 필요한 질병" 또는 "혈관형성의 억제가 필요한 질환"이란 표현들은 호환적으로 사용될 수 있다.

특히, 병적인 혈관형성 질병, 또는 바람직하지 못한 과도한 혈관신생을 특징으로 하는 질병은 하기로 이루어지는 그룹 중에서 선택된다:

- 이상 혈관형성을 갖는 암, 특히 이상 혈관형성을 갖는 고형 종양, 보다 특히 투명세포 신세포 암종을 포함한 신장암, 유방암, 난소암, 폐암, 췌장암 및 결장암;

- 이상 혈관형성을 갖는 안과 질병, 특히 나이-관련된 황반 변성, 당뇨성 망막병증, 망막색소변성증 및 포도막염;

- 류머티스성 관절염;

- 건선;

- 혈관종;

- 자궁내막증; 및

- 카포시 육종.

특히, 상기 병적인 혈관형성 질병은 투명세포 신세포 암종이다.

본 발명은 또한 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 또는 바람직하지 못한 과도한 혈관신생을 특징으로 하는 질병의 치료 및/또는 예방을 위한 약제의 제조를 위한

- 본 발명에 따른 항체 및 그의 단편,

- 본 발명에 따른 항체 또는 그의 단편을 암호화하는 단리된 핵산; 및

- 상기 핵산 분자를 포함하는 벡터

로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 화합물의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 또한 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 또는 바람직하지 못한 과도한 혈관신생을 특징으로 하는 질병의 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 상기 치료 및/또는 예방이 필요한 환자에게 치료 또는 예방량의

- 본 발명에 따른 항체 및 그의 단편,

- 본 발명에 따른 항체 또는 그의 단편을 암호화하는 단리된 핵산; 및

- 상기 핵산 분자를 포함하는 벡터

로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 화합물을 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명에 따른 치료 방법은 상기 치료가 필요한 환자에게 치료 또는 예방량의 적어도 또 다른 관심 화합물(예를 들어 항-종양제, 혈관형성 억제 화합물, 소염 화합물)을 투여하는 단계를 또한 포함할 수 있다.

본 발명에 사용되는 바와 같이, "항-종양제"란 용어는 종양 성장을 방지하거나 또는 종양 축소를 촉진하는 임의의 화합물을 지칭한다. 항-종양제는 혈관형성 억제 화합물, DNA 삽입제/가교결합제(옥살리플라틴, 미톡산트론과 같은), DNA 합성 억제제(시토신 β-D-아라비노퓨라노시드, 5-플루오로우라실과 같은), DNA-RNA 전사 조절제(독소루비신, 액티노마이신 D), 미세소관 억제제(패클리탁셀, 노코다졸)일 수 있다.

본 발명에 사용되는 바와 같이, "혈관형성 억제 화합물"이란 용어는 병적인 혈관 네트워크의 발생을 억제하는 임의의 화합물을 지칭한다. 특히, 상기 혈관형성 억제 화합물은 VEGF 수용체 및 CXCL/ELR+ 케모카인(예를 들어 CXCR1 및 CXCR2)의 수용체와 같은 혈관형성 전구 인자의 수용체를 억제할 수 있다.

본 발명에 사용되는 바와 같이, "소염 화합물"이란 용어는 염증을 감소시키는 임의의 화합물을 지칭한다. 특히, 소염 화합물은 코르티코이드 및 비스테로이드성 소염제 이부프로펜 유도체일 수 있다.

특히, 상기 혈관형성 억제 화합물은

- 베바시주맵(특히 암의 치료 및/또는 예방을 위한) 및 라니비주맵(특히 나이-관련된 황반 변성의 치료 및/또는 예방을 위한)과 같은 항체 항-VEGF;

- 세툭시맵과 같은 항체 항-EGF 수용체;

- 수니티니브, 소라페니브, 액시티니브, 레고라페니브와 같은, VEGFR1, 2, 3, CSFR, PDGFR을 포함한 혈관형성에 관련된 수용체의 억제제;

- 에베로리무스, 템시로리무스와 같은 m-TOR의 억제제;

- 에를로티니브와 같은 EGF 수용체의 억제제

로 이루어지는 그룹 중에서 선택된다.

본 발명에 따른 상기 항체, 핵산 분자 및/또는 상기 벡터를 상기 관심 화합물과 동시에, 별도로 또는 연속적으로 투여할 수 있다.

본 발명은 또한 약제로서 동시에, 별도로 또는 연속적으로 사용하기 위한

- 본 발명에 따른 항체 및 그의 단편, 본 발명에 따른 항체 또는 그의 단편을 암호화하는 단리된 핵산 분자 및 상기 핵산 분자를 포함하는 벡터로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 화합물; 및

- 적어도 또 다른 관심 화합물

을 포함하는, 복합 제품에 관한 것이다.

유리한 실시태양은 상기에 정의된 바와 같다.

특히, 상기 또 다른 관심 화합물은 혈관형성 억제 화합물이다.

본 발명은 또한 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병의 예방 및/또는 치료를 위해 사용하기 위한 본 발명에 따른 복합 제품에 관한 것이다.

본 발명은 또한 샘플을 본 발명에 따른 항체 및/또는 그의 단편과 함께 배양하는 단계를 포함하는, 상기 샘플 중에서 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 케모카인을 검출하는 방법에 관한 것이다.

특히, 상기 샘플은 생물학적 샘플이다.

"생물학적 샘플"이란 용어는 진단 또는 모니터링 분석에 사용될 수 있는 유기체로부터 수득되는 다양한 샘플 유형들을 포함한다. 상기 용어는 생물 기원의 혈액 및 다른 액체 샘플, 고체 조직 샘플, 예를 들어 생검 시편, 또는 조직 배양물, 또는 이들로부터 유래된 세포 및 그의 자손을 포함한다. 추가로, 상기 용어는 순환하는 종양 또는 다른 세포를 포함할 수 있다. 상기 용어는 구체적으로 임상 샘플을 포함하며, 세포 배양물, 세포 상등액, 세포 용해물, 혈청, 혈장, 소변, 양수, 눈 샘플용 수성 체액 및 유리체액을 포함한 생물학적 유체, 및 조직 샘플 중의 세포를 추가로 포함한다. 상기 용어는 또한 조달 후 임의의 방식, 예를 들어 시약에 의한 처리, 용해, 또는 몇몇 성분의 농축으로 조작된 샘플들을 포함한다.

유리하게, 상기 생물학적 샘플을 체액, 그의 분획, 조직 추출물 및 세포 추출물을 포함하는 그룹 중에서 선택할 수 있다. 특히 상기 생물학적 샘플을 혈장 샘플 및 종양 추출물을 포함하는 그룹 중에서 선택할 수 있다.

특히, 샘플 중에서 본 발명에 따른 케모카인을 검출하는 방법은 본 발명에 따른 항체와, CXCL1, CXCL7 및 CXCL8로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 케모카인과의 결합을 검출하는 단계를 추가로 포함한다.

샘플 중에서 본 발명에 따른 케모카인을 검출하는 방법은 당해 분야의 숙련가에게 널리 공지된 다양한 기법들, 예를 들어 비제한적으로

- 웨스턴 블럿 분석(세포 용해물 또는 용액 중에 존재하는 케모카인 또는 그의 단편을 멤브레인상에 고정화시키며, 그 후에 상기 멤브레인을 당해 분야에 널리 공지된 적합한 조건하에서, 바람직하게는 표지된 본 발명의 항체와 배양한다),

- ELISA 분석(상기 케모카인 또는 그의 단편을 미세적정 플레이트상에 고정화시키며, 그 후에 상기 플레이트를 당해 분야에 널리 공지된 적합한 조건하에서, 바람직하게는 표지된 본 발명의 항체와 배양한다),

- 면역조직화학 분석(바람직하게는 표지된 재조합 항체를 사용하여 상기 케모카인 또는 그의 단편을 발현하는 고정된 세포 또는 조직을 함유하는 샘플을 염색한다),

- 유식 세포측정 분석(바람직하게는 표지된 재조합 항체를 사용하여 당해 분야에 널리 공지된 적합한 조건하에서 상기 케모카인 또는 그의 단편을 발현하는 고정된 또는 살아있는 세포를 함유하는 샘플을 염색한다)

에 근거할 수 있다.

샘플 중에서 본 발명에 따른 케모카인을 검출하는 방법의 하나의 실시태양에서, 본 발명의 항체를 고체 지지체상에 코팅한다.

이들 검출 기법은 문헌[Sambrook, Fritsch and Maniatis - "Molecular Cloning - A Laboratory Manual" Second Edition Cold Spring Harbor Laboratory, 1989]에 충분히 개시되어 있다. 항체의 사용을 요하는 임의의 다른 검출 기법들이 본 발명에 포함된다. 상기 샘플 중의 상기 케모카인(들)의 존재 및 최종적으로 양을 이들 기법 덕분에 측정할 수 있다. 이들 기법 중 일부는 본 발명의 항체를 상기에 개시된 바와 같이 검출 가능한 마커, 바람직하게는 형광 또는 발광 마커로 표지함을 필요로 한다.

본 발명은 또한 샘플을 본 발명에 따른 항체 및/또는 그의 단편과 함께 배양하는 단계를 포함하는, 상기 샘플로부터 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 케모카인을 정제하는 방법에 관한 것이다.

샘플로부터 본 발명에 따른 케모카인을 정제하는 방법은 당해 분야의 숙련가에게 널리 공지된 다양한 기법들, 예를 들어 비제한적으로 유식 세포측정 분석, 면역침전 분석에 근거할 수 있다. 이들 검출 기법은 문헌[Sambrook, Fritsch and Maniatis - "Molecular Cloning - A Laboratory Manual" Second Edition Cold Spring Harbor Laboratory, 1989]에 충분히 개시되어 있다.

본 발명은 또한 샘플에서 케모카인을 검출하고 샘플로부터 본 발명에 따른 케모카인을 정제하는 방법을 수행하기에 유용한 키트에 관한 것이며; 상기 키트는

- 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 및/또는 그의 단편; 및

- 상기 본 발명에 따른 항체 및/또는 그의 단편을 검출하기 위한 적어도 하나의 시약

을 포함한다.

상기 본 발명에 따른 항체의 검출을 위한 상기 시약은 ELISA 시약, 웨스턴 블럿 시약, 및 도트 블럿 시약으로 이루어지는 그룹 중에서 선택될 수 있다.

본 발명은 또한 피실험자에서 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 특히 투명세포 신세포 암종의 시험관내 또는 시험관외 진단 및/또는 예측 방법, 및 특히 시험관내 진단 및/또는 예측 방법에 관한 것으로, 상기 방법은

본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 및/또는 그의 단편을 사용하여 상기 피실험자의 생물학적 샘플 중의 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 인간 케모카인의 발현 및/또는 발현 수준을 측정함을 포함한다. 실제로, 발명자들은 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8이 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 병적인 혈관형성 질병, 투명세포 신세포 암종에 걸린 환자의 전체적인 생존에 대한 예후 인자임을 입증하였다. 특히, 발명자들은 이들 케모카인, 특히 CXCL1 및 CXCL7의 과발현이 전체적인 생존에 대한 불량한 예후의 인자임을 입증하였다.

특히, 단계 i)을 하나의 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 적어도 하나의 표지된 2차 항체를 추가로 사용함으로써 수행할 수 있으며, 여기에서 상기 케모카인은 본 발명의 항체 및/또는 그의 단편을 인식한다.

예를 들어, 단계 i)을 ELISA 분석에 의해 수행할 수 있으며, 여기에서 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 미세적정 플레이트상에 고정화하고, 그 후에 상기 플레이트를, 당해 분야에 널리 공지된 적합한 조건하에서 본 발명에 따른 항체 및/또는 그의 단편을 인식하는 하나의 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 적어도 하나의 표지된 2차 항체와 배양한다. 상기 실시태양에 따라, 상기 3개의 케모카인의 발현 수준을 동시에 측정할 수 있다.

본 발명의 방법은 상기 단계 i)에서 측정된 발현 수준을 대조용 수준과 비교하고 상기 환자가 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종에 걸린지의 여부를 측정하는 단계 ii)를 추가로 포함할 수 있다.

바람직한 실시태양에서, 본 발명의 방법은 상기 단계 i)에서 측정된 발현 수준을 대조용 수준과 비교하고 상기 단계 i)에서 측정된 발현의 수준이 상기 대조용 수준보다 현저하게 더 높은지를 측정하는 단계 ii)를 포함하며; 상기 현저하게 더 높은 발현 수준은 상기 피실험자가 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종에 걸린 것을 가리키고; 상기 대조용 수준은 적어도 건강한 피실험자로부터 또는 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종에 걸리지 않은 피실험자로부터의 생물학적 샘플 중에서 측정된 적어도 하나의 케모카인의 발현 수준이다.

본 발명은 또한 피실험자에서 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 특히 투명세포 신세포 암종의 퇴화적인 결과를 측정하기 위한 시험관내 또는 시험관외 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 a) 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 및/또는 그의 단편을 사용하여 상기 피실험자의 생물학적 샘플 중의 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 인간 케모카인의 발현 및/또는 발현 수준을 측정함을 포함한다.

본 발명의 방법은 상기 단계 a)에서 측정된 발현 수준을 대조용 수준과 비교하고 상기 피실험자가 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종의 퇴화적인 결과를 겪는지의 여부를 측정하는 단계 b)를 추가로 포함할 수 있다.

특히, 단계 a)를, 본 발명의 항체 및/또는 그의 단편을 인식하는 하나의 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 적어도 하나의 표지된 2차 항체를 추가로 사용함으로써 수행할 수 있다.

예를 들어, 단계 a)를 ELISA 분석에 의해 수행할 수 있으며, 여기에서 본 발명의 항체 또는 그의 단편을 미세적정 플레이트상에 고정화하고, 그 후에 상기 플레이트를, 당해 분야에 널리 공지된 적합한 조건하에서 본 발명에 따른 항체 및/또는 그의 단편을 인식하는 하나의 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 적어도 하나의 표지된 2차 항체와 배양한다. 상기 실시태양에 따라, 상기 3개의 케모카인의 발현 수준을 동시에 측정할 수 있다.

적합한 "대조용 수준"은 적어도 하나의 기준 샘플 중에서 측정된 상기 적어도 하나의 케모카인의 발현 수준 및 기준 한계값을 포함한다.

"기준 샘플"은 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병의 공지된 상태, 특히 공지된 병적인 혈관형성 질병 상태, 보다 특히 공지된 투명세포 신세포 암종 상태를 갖는 피실험자로부터, 또는 건강한 피실험자로부터, 또는 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종에 걸리지 않은 피실험자로부터의 생물학적 샘플이다.

바람직하게, 상기 대조용 수준은 다수의 피실험자로부터의, 다수의 기준 샘플 중에서 측정된 상기 적어도 하나의 케모카인의 평균 발현 수준이다.

바람직하게, 상기 기준 샘플은 단계 i) 또는 a)의 상기 생물학적 샘플과 동일한 유형의 생물학적 샘플(즉, 상응하는 생리학적 성질의 생물학적 샘플)이다.

바람직한 실시태양에서, 본 발명의 방법은 상기 단계 a)에서 측정된 상기 발현 수준을 대조용 수준과 비교하고 상기 단계 a)에서 측정된 상기 발현 수준이 상기 대조용 수준보다 현저하게 더 높은지를 측정하는 단계 b)를 포함하며; 상기 현저하게 더 높은 발현 수준은 상기 피실험자에서 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종의 퇴화적인 결과를 가리키고; 상기 대조용 수준은 적어도 건강한 피실험자로부터 또는 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종에 걸리지 않은 피실험자로부터의 생물학적 샘플 중에서 측정된 상기 적어도 하나의 케모카인의 발현 수준이다.

적합한 "대조용 수준"은 건강한 피실험자, 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종에 걸리지 않은 피실험자의 동일한 유형의 생물학적 샘플 중에서 측정된 상기 적어도 하나의 케모카인의 발현 수준을 포함한다.

바람직하게, 상기 대조용 수준은 다수의 건강한 피실험자, 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종에 걸리지 않은 다수의 피실험자의 동일한 유형의 생물학적 샘플 중에서 측정된 상기 적어도 하나의 케모카인의 평균 발현 수준이다.

상기 적어도 하나의 케모카인의 상기 현저하게 더 높은 발현 수준은 상기 대조용 수준의 적어도 10% 초과, 15% 초과, 20% 초과, 25% 초과, 30% 초과, 바람직하게는 35% 초과의 발현의 증가에 상응할 수 있다.

상기와 같은 기준 한계값은 상기 시험된 생물학적 샘플의 유형 및 상기 적어도 하나의 케모카인의 발현 수준의 측정에 사용된 방법에 따라 변할 수 있다. 그러나, 특정한 실험 조건(동일한 유형의 시험된 생물학적 샘플, 상기 적어도 하나의 케모카인의 발현 수준의 동일한 측정 방법)의 경우, 상기 한계값을 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 안정한 질병, 특히 안정한 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 안정한 투명세포 신세포 암종이 있는 환자(살아있는 환자)의 집단 및 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종의 퇴화적인 결과를 겪고 있는 환자(사망한 환자)의 집단 모두를 포함하는 기준 환자 풀을 근거로 측정할 수 있다. 이들 환자의 상기 적어도 하나의 케모카인의 발현 수준을 측정함으로써, 기준 한계값 T를 하기의 특징들에 의해 측정할 수 있다:

- 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 안정한 질병, 특히 안정한 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 안정한 투명세포 신세포 암종이 있는 모든 또는 대부분의 기준 환자(살아있는 환자)는 T보다 열등한 적어도 하나의 케모카인 발현 수준값을 가지며; 및

- 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종의 퇴화적인 결과를 겪고 있는 모든 또는 대부분의 기준 환자(사망한 환자)는 T보다 우수한 적어도 하나의 케모카인 발현 수준값을 갖는다.

이 경우에, 단계 i)에서 측정된 상기 발현 수준이 상기 한계값 T보다 현저하게 더 높은 경우, 이는 상기 피실험자에서의 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종의 퇴화적인 결과를 가리킨다.

특히, 상기 시험된 생물학적 샘플이 혈장 샘플인 경우, 상기 기준 한계값은

- CXCL7의 경우 265 내지 1825 ng/㎖, 바람직하게 450 내지 800 ng/㎖ 및 보다 바람직하게 640 ng/㎖의 범위;

- CXCL8의 경우 0 내지 30 pg/㎖, 바람직하게 5 내지 15 pg/㎖ 및 보다 바람직하게 11 pg/㎖의 범위

에 포함될 수 있다.

특히 상기 시험된 생물학적 샘플이 종양 용해물 샘플인 경우, 상기 기준 한계값은

- CXCL1의 경우 총 단백질에 대해서 50 내지 150 pg/㎎, 바람직하게 75 내지 125 pg/㎎ 및 보다 바람직하게 96 pg/㎎의 범위;

- CXCL7의 경우 총 단백질에 대해서 800 내지 1400 pg/㎎, 바람직하게 1000 내지 1200 pg/㎎ 및 보다 바람직하게 1152 pg/㎎의 범위;

- CXCL8의 경우 총 단백질에 대해서 50 내지 350 pg/㎎, 바람직하게 150 내지 250 pg/㎎ 및 보다 바람직하게 206 pg/㎎의 범위

에 포함될 수 있다.

피실험자에서 병적인 혈관형성 질병, 특히 투명세포 신세포 암종의 퇴화적인 결과를 측정하는 본 발명의 방법의 하나의 실시태양에서, 상기 피실험자에게 혈관형성 억제 치료법을 가한다.

상기 혈관형성 억제 치료법은 혈관형성 억제 화합물의 상기 피실험자에의 투여를 포함할 수 있다.

본 발명에 사용되는 바와 같은 "측정"이란 용어는 정성적인 검출 및 정량분석을 모두 의미할 수 있다.

"발현"이란 용어는 일반적으로 검출 가능한 수준의 아미노산 서열 또는 단백질이 발현되도록 폴리뉴클레오티드 서열이 성공적인 전사 및 번역을 겪는 과정을 지칭한다. 본 발명의 몇몇 상황에서, 발현은 mRNA의 생성을 지칭한다. 다른 상황에서, 발현은 단백질 또는 그의 단편의 생성을 지칭한다. 상기 단편은 효소적 절단 또는 정상 또는 병든 상태의 특징인 생물학적 과정을 통해 생성될 수 있다.

다양한 공지된 방법들 중 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로 면역분석을, 본 발명에 따른 항체 또는 그의 단편을 사용하여, 예를 들어 효소-결합된 면역흡수 분석(ELISA), 방사성면역분석(RIA) 등에 의해, 상기 개인의 상기 생물학적 샘플 중의 상기 적어도 하나의 케모카인의 검출에 사용할 수 있다.

본 발명은 또한 본 발명의 피실험자에서 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병의 시험관내 또는 시험관외 진단 및/또는 예측 방법을 수행하기 위한 키트에 관한 것이며, 상기 키트는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 및/또는 그의 단편을 포함한다.

특정한 실시태양에서, 본 발명은 또한 피실험자에서 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 또는 바람직하지 못한 과도한 혈관신생을 특징으로 하는 질병 또는 질환의 시험관내 진단 및/또는 예측 방법을 수행하기 위한 키트에 관한 것이며, 상기 키트는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 및/또는 그의 단편을 포함한다.

상기 키트는 본 발명의 방법에 유용한 추가적인 성분들, 예를 들어 비제한적으로 완충제, 전개 시약, 표지, 반응 표면, 검출 수단, 대조용 샘플, 표준, 설명서, 및 피실험자가 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종에 걸린지의 여부를 측정하기 위한 해석 정보를 제공할 수 있다.

상기 키트는 또한

- 본 발명에 따른 상기 항체 또는 그의 단편을 검출하기 위한 적어도 하나의 시약을 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 본 발명에 따라 피실험자에서 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종의 퇴화적인 결과를 측정하는 본 발명의 방법을 수행하기 위한 키트에 관한 것이며, 상기 키트는 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 및/또는 그의 단편을 포함한다.

상기 키트는 본 발명의 방법에 유용한 추가적인 성분들, 예를 들어 비제한적으로 완충제, 전개 시약, 표지, 반응 표면, 검출 수단, 대조용 샘플, 표준, 설명서, 및 피실험자에서 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종의 퇴화적인 결과를 측정하기 위한 해석 정보를 제공할 수 있다.

상기 키트는 또한

- 본 발명에 따른 상기 항체 또는 그의 단편을 검출하기 위한 적어도 하나의 시약을 포함할 수 있다.

본 발명은 또한

i") 특히 본 발명의 방법에 따라, 피실험자에서 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종을 진단 및/또는 예측하고; 및

-iii") 소염 및/또는 혈관형성 억제 치료법으로 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종에 걸린 피실험자를 치료함, 특히 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병에 걸린 피실험자에게 소염 화합물 및/또는 혈관형성 억제 화합물(특히 본 발명에 따른 항체, 그의 단편, 핵산 분자, 벡터로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 화합물)을 투여함

을 포함하는 방법에 관한 것이다.

특히, 상기 방법은

-i") 피실험자의 생물학적 샘플 중에서 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 인간 케모카인의 발현 및/또는 발현 수준을 측정함을 포함하는, 상기 피실험자에서 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종을 진단 및/또는 예측하고; 및

-iii") 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병에 걸린 피실험자에게 본 발명에 따른 항체, 그의 단편, 핵산 분자, 벡터로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 화합물을 투여함을 포함하는, 소염 및 혈관형성 억제 치료법으로 상기 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종에 걸린 피실험자를 치료함

을 포함한다. 상기와 같은 방법은 환자(케모카인 CXCL1, CXCL7 및/또는 CXCL8의 과발현을 갖는)의 치료에 보다 잘 맞추는 이점을 가지며 따라서 항-VEGF 치료법에 의한 환자의 불필요한 치료를 피한다(따라서 재발 및 사망으로의 질병 진행을 피한다). 바람직한 실시태양에서, 상기 본 발명의 방법은 ii") 단계 i")에서 측정된 상기 발현 수준을 대조용 수준과 비교하고 상기 단계 i")에서 측정된 발현 수준이 상기 대조용 수준보다 현저하게 더 높은지를 측정하는 단계를 추가로 포함하며; 상기 현저하게 더 높은 발현 수준은 상기 피실험자에서 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종의 퇴화적인 결과를 가리키고; 상기 대조용 수준은 적어도 건강한 피실험자로부터 또는 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종에 걸리지 않은 피실험자로부터의 생물학적 샘플 중에서 측정된 상기 적어도 하나의 케모카인의 발현 수준이다.

본 발명은 또한

i"") 특히 본 발명의 방법에 따라, 피실험자에서 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종의 퇴화적인 결과를 측정하고;

-iii"") 소염 치료법 및/또는 혈관형성 억제 치료법으로 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종의 퇴화적인 결과를 겪고 있는 피실험자를 치료함, 특히 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병의 퇴화적인 결과를 겪고 있는 피실험자에게 소염 화합물 및/또는 혈관형성 억제 화합물(특히 본 발명에 따른 항체, 그의 단편, 핵산 분자, 벡터로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 화합물)을 투여함

을 포함하는 방법에 관한 것이다.

특히, 상기 방법은

i"") 피실험자의 생물학적 샘플에서 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 인간 케모카인의 발현 및/또는 발현 수준을 측정함을 포함하는, 상기 피실험자에서 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종의 퇴화적인 결과를 측정하고;

iii"") 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병의 퇴화적인 결과를 겪고 있는 피실험자에게 본 발명에 따른 항체, 그의 단편, 핵산 분자, 벡터로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 화합물을 투여함을 포함하는, 소염 및 혈관형성 억제 치료법으로 상기 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종의 퇴화적인 결과를 겪고 있는 피실험자를 치료함

을 포함한다. 상기와 같은 방법은 환자(케모카인 CXCL1, CXCL7 및/또는 CXCL8의 과발현을 갖는)의 치료에 보다 잘 맞추는 이점을 가지며 따라서 항-VEGF 치료법에 의한 환자의 불필요한 치료를 피한다(따라서 재발 및 사망으로의 질병 진행을 피한다). 바람직한 실시태양에서, 상기 본 발명의 방법은 단계 i"")에서 측정된 상기 발현 수준을 대조용 수준과 비교하고 상기 단계 i"")에서 측정된 발현 수준이 상기 대조용 수준보다 현저하게 더 높은지를 측정하는 단계 ii"")를 추가로 포함하며; 상기 현저하게 더 높은 발현 수준은 상기 피실험자에서 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종의 퇴화적인 결과를 가리키고; 상기 대조용 수준은 적어도 건강한 피실험자로부터 또는 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종에 걸리지 않은 피실험자로부터의 생물학적 샘플 중에서 측정된 상기 적어도 하나의 케모카인의 발현 수준이다.

본 발명은 또한

- 서열번호 20의 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지는 서열의 펩티드 및 상기 서열번호 20의 전체 길이에 걸쳐 상기 서열번호 20과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지는 서열의 펩티드

로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 펩티드에 관한 것이다.

본 발명은 또한 면역원성 펩티드로서

- 서열번호 20의 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지는 서열의 펩티드 및 상기 서열번호 20의 전체 길이에 걸쳐 상기 서열번호 20과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지는 서열의 펩티드

로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 본 발명의 펩티드의 용도에 관한 것이다.

본 발명에 사용되는 바와 같이, "면역원성 펩티드"란 용어는 T 세포 초회항원자극된 면역화에 의해 인식되는 동물을 면역시키기에 유용한 펩티드에 관한 것이다.

상기 펩티드 면역원성을 면역원성 담체와의 가교결합 또는 커플링에 의해서, 또는 적합한 항원보강제의 사용에 의해서 증가시킬 수 있다. 적합한 면역원성 담체 또는 적합한 항원보강제의 결정은 당해 분야의 숙련가들의 능력내에 충분히 있다. 면역원성 담체의 예는 비제한적으로 키홀 림펫 헤모시아닌(KHL), 파상풍 독소(TT), 소 혈청 알부민(BSA), 오브알부민(OVA), 소 티로글로불린(BTG), 글루타치온 S 트랜스퍼라제(GST), 소 티로글로불린 또는 이작용성 또는 유도화제를 사용하는 대두 트립신 억제제, 예를 들어 말레이미도벤조일 설포숙신이미드 에스테르(시스테인 잔기를 통한 접합), N-하이드록시숙신이미드(리신 잔기를 통해), 글루타르알데히드, 숙신산 무수물, SOCL₂, 또는 R¹N=C=NR(여기에서 R¹ 및 R은 상이한 알킬기이다), 특히 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH)을 포함한다.

본 발명은 또한

- 서열번호 20의 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지는 서열의 펩티드 및 상기 서열번호 20의 전체 길이에 걸쳐 상기 서열번호 20과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지는 서열의 펩티드

로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 본 발명의 펩티드를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 약제로서, 특히 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종의 예방 및/또는 치료를 위한

- 서열번호 20의 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지는 서열의 펩티드 및 상기 서열번호 20의 전체 길이에 걸쳐 상기 서열번호 20과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지는 서열의 펩티드

로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 본 발명의 펩티드에 관한 것이다.

상기 펩티드를 예방 또는 치료에 사용하기 위해서, 약학적으로 허용 가능한 부형제와 함께 적합하게 제형화할 것이다. 상기 예방 또는 치료학적 치료에 적합한 제형을 경구 또는 비경구, 바람직하게는 피하 또는 근육내로 투여할 수 있으며, 상기 제형은 유효량의 상기 펩티드를 함유할 것이다. 상기 량은 CXCL1, CLXL7 및 CXCL8을 포함하는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 케모카인에 대한 체액 또는 세포-매개된 면역 반응을 이끌어낼 수 있어야 하며 상기 환자의 일반적인 상태, 상기 질병의 진행 및 다른 인자들에 따라 변할 것이다.

또 다른 실시태양에서, 본 발명의 펩티드를 동결건조시킨다. 상기와 같은 실시태양에서, 본 발명의 동결건조된 펩티드를 투여 시에 본 발명에서 상기에 개시된 것들과 같은 담체 또는 희석제와 혼합한다. 더욱 또 다른 실시태양에서, 본 발명의 항체를 중합체와 같은 화합물에 접합시킨다. 하나의 실시태양에서, 상기 중합체는 폴리알킬렌 글리콜이다. 하나의 실시태양에서, 상기 폴리알킬렌 글리콜은 폴리에틸렌 글리콜, 또는 PEG이다.

본 발명은 또한

- 서열번호 20의 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지는 서열의 펩티드 및 상기 서열번호 20의 전체 길이에 걸쳐 상기 서열번호 20과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지는 서열의 펩티드

로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 본 발명의 펩티드를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병, 보다 특히 투명세포 신세포 암종의 예방 및/또는 치료를 위한 약제의 제조를 위한

- 서열번호 20의 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지는 서열의 펩티드 및 상기 서열번호 20의 전체 길이에 걸쳐 상기 서열번호 20과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지는 서열의 펩티드

로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 본 발명의 펩티드에 관한 것이다.

본 발명은 또한 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병의 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병의 치료 및/또는 예방이 필요한 환자에게 치료 또는 예방량의

서열번호 20의 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지는 서열의 펩티드 및 상기 서열번호 20의 전체 길이에 걸쳐 상기 서열번호 20과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지는 서열의 펩티드

로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 본 발명의 펩티드를 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명은 또한

α) 서열번호 20의 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지는 서열의 펩티드 및 상기 서열번호 20의 전체 길이에 걸쳐 상기 서열번호 20과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지는 서열의 펩티드;

및/또는 비-인간 동물의 세포에 유효한 프로모터의 조절하에서 상기 적어도 하나의 펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 적어도 하나의 발현 벡터

로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 펩티드의 반복된 투여에 의해 상기 비-인간 동물을 면역시키고;

β) 상기 면역된 비-인간 동물로부터 생성된 혈청을 수집하여 상기 적어도 하나의 펩티드에 대한 항체를 획득하고;

χ) 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 특이적으로 결합하는 상기 단계 β)에서 획득된 상기 항체의 시험관내 또는 생체외 능력을 측정하고; 및 최종적으로

δ) 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 특이적으로 결합할 수 있는 항체(들)를 선택하는

단계들을 포함하는, 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 항체의 제조 방법에 관한 것이다.

바람직하게 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 항체의 제조 방법은 상기 혈청 항체를 배면 기질, 바람직하게는 고체 지지체, 가장 바람직하게는 폴리스티렌 고체 지지체에 고정시킴을 추가로 포함한다.

적합한 비-인간 동물은 비제한적으로 마우스, 래트, 양, 염소, 햄스터, 토끼, 바람직하게는 마우스를 포함한다.

상기 단계 α)에서 면역원성 펩티드로서 사용된 펩티드는 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 체액 면역 반응을 이끌어낼 수 있는 완전 펩티드, 또는 그의 단편 및 유도체를 포함할 수 있다.

상기 동물의 혈청을 항체 역가의 평가를 위해 샘플링할 수 있다. 최적의 역가에 도달했을 때, 상기 동물을 채혈하여 적합한 부피의 특정 혈청을 제공할 수 있다. 필요한 항체 정제의 정도는 의도된 용도에 따라 변한다. 일부 목적의 경우, 정제가 전혀 필요하지 않지만, 다른 경우, 예를 들어 상기 항체를 고체 지지체에 고정화시켜야 하는 경우, 정제 단계를 수행하여 목적하지 않는 물질을 제거하고 비특이적인 결합을 감소시키거나 제거할 수 있다.

상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 특이적으로 결합하는 상기 단계 β)에서 획득된 상기 항체의 시험관내 또는 생체외 능력을 측정하는 단계 χ)는 당해 분야의 숙련가에 의해, 예를 들어 스캐차드(Scatchard) 분석(1949) 또는 이후에 개시되는 바와 같은 표면 플라스몬 공명 분석에 의해 쉽게 측정될 수 있다.

"상기 비-인간 동물의 세포에서 유효한 프로모터의 조절하에서 상기 적어도 하나의 펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열"이란 용어는 상기 비-인간 동물의 세포에서 상기 뉴클레오티드 서열의 발현을 지시하는 프로모터에 작동적으로 연결된 상기 적어도 하나의 펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열에 관한 것이다.

일반적으로, 본 발명에 유용한 벡터는 비제한적으로 상기 적어도 하나의 펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열의 삽입 또는 통합에 의해 조작된 플라스미드, 파지미드, 바이러스, 바이러스 또는 세균 공급원으로부터 유래하는 다른 비히클을 포함한다.

상기 적어도 하나의 펩티드의 발현은 각각 안정하거나 일시적인 발현 벡터를 사용하는 안정하거나 일시적인 발현일 수 있다. 일시적인 발현 벡터의 예는 플라스미드를 포함한다. 안정한 발현 벡터의 예는 렌티바이러스 벡터를 포함한다. 바람직하게, 상기 적어도 하나의 펩티드의 발현은 안정하다.

상기 적어도 하나의 펩티드의 발현은 또한 당해 분야의 숙련가에 의해 널리 공지된 구성 또는 유도성 프로모터를 사용하여, 구성적이거나 유도성일 수 있다. 구성 프로모터의 예는 베타-액틴 프로모터, 근육 크레아틴 키나제 프로모터, 인간 신장 인자, 유인원 바이러스(예를 들어 SV40), 파필로마 바이러스, 아데노바이러스, 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 거대세포바이러스(CMV), 라우스 육종 바이러스(RSV), B형 간염 바이러스(HBV), 몰로니 백혈병 바이러스의 긴 말단 반복부(LTR) 및 다른 레트로바이러스로부터의 프로모터, 및 헤르페스 단순 바이러스의 티미딘 키나제 프로모터와 같은 포유동물 또는 바이러스 프로모터를 포함한다. 당해 분야에서 명명되지는 않았지만 공지된 다른 구성 프로모터들을 쉽게 사용할 수 있다.

본 발명에 유용한 프로모터는 또한 유도제의 존재하에서 발현되는 유도성 프로모터를 포함한다. 예를 들어, 몇몇 금속 이온의 존재하에서 메탈로티오네인 프로모터를 유도하여 전사 및 번역을 촉진한다.

바람직하게, 상기 적어도 하나의 펩티드의 발현은 구성적이다.

특히 단계 δ)는 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시, 최대한 16 nM의 평형 해리 상수(K_D)를 갖는 인간 케모카인 CXCL1, 최대한 5 nM의 평형 해리 상수(K_D)를 갖는 인간 케모카인 CXCL7, 및 최대한 45 nM의 평형 해리 상수(K_D)를 갖는 인간 케모카인 CXCL8에 결합할 수 있는 항체(들)의 선택을 포함할 수 있다.

본 발명은 또한

a") 서열번호 20의 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지는 서열의 펩티드 및 상기 서열번호 20의 전체 길이에 걸쳐 상기 서열번호 20과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지는 서열의 펩티드;

및/또는 비-인간 동물의 세포에 유효한 프로모터의 조절하에서 상기 적어도 하나를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 적어도 하나의 발현 벡터

로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 펩티드의 반복된 투여에 의해 상기 비-인간 동물을 면역시키고; 및

b") 상기 면역된 비-인간 동물로부터 생성된 혈청을 수집하여 상기 적어도 하나의 펩티드에 대한 항체를 획득하고;

c") 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 특이적으로 결합하는 상기 단계 b)에서 획득된 상기 항체의 시험관내 또는 생체외 능력을 측정하고; 및 최종적으로

d") 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 특이적으로 결합할 수 있는 항체(들)를 선택하는

단계들을 포함하는, 상기 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8과 관련된 질병, 특히 병적인 혈관형성 질병의 치료를 위한 항체의 선택 방법에 관한 것이다.

특히 단계 d")는 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시, 최대한 16 nM의 평형 해리 상수(K_D)를 갖는 인간 케모카인 CXCL1, 최대한 5 nM의 평형 해리 상수(K_D)를 갖는 인간 케모카인 CXCL7, 및 최대한 45 nM의 평형 해리 상수(K_D)를 갖는 인간 케모카인 CXCL8에 결합할 수 있는 항체(들)의 선택을 포함할 수 있다.

도 1(A-E)은 종양 성장을 억제하는 본 발명의 항체들(발명자들에 의해 12A10-13으로서 또한 표시되는 CNCM I-4617 및 발명자들에 의해 35B11-8로서 또한 표시되는 CNCM I-4618 2개의 하이브리도마에 의해 생산된)의 능력을 예시한다.
도 1A: 면역화에 사용된 펩티드(pCXCL7로서 표시됨)를 제공한다. 최대의 유사를 나타내는 CXCL7의 상기 도메인과 CXCL 사이토킨의 다른 도메인들과의 비교를 또한 도시한다.
도 1B: 3.10⁶ 786-O^{LUC -} 세포를 누드 마우스(그룹당 n=10)에게 피하 주사하였다. 주사 후 15일째에, 모든 마우스에서 종양이 발생하였으며 상기 마우스들을, 대조군의 경우 PBS로 또는 상기 2개의 하이브리도마 12A10-13 또는 35B11-8에 의해 생산된 항체 15 ㎎/㎏으로 매주 처리하였다. 생물발광을 개시된 바와 같이 매주 측정하였다(Grepin et al., 2012). 데이터는 평균±SD이다. 대조군 및 처리된 마우스의 종양 크기간의 통계학적 차이를 제공한다: ^*p<0.05.
도 1C: 평균 부피±SD 및 통계학적 분석: ^*p<0.05; ^**p<0.01.
도 1D: 종양-함유 마우스의 전형적인 상들.
도 1E: CXCL1, 7, 8 및 VEGF의 종양내 양이 ELISA에 의해 검출되었다. 데이터는 평균±SD이다. 통계학적 분석은 ^*p<0.05; ^**p<0.011이었다.
도 2는 누드 마우스에서 실험적인 ccRCC의 성장에 대한 CXCL7 또는 CXCL8에 대한 상업적으로 입수할 수 있는 항체의 효과를 예시한다. 3.10⁶ 786-O^{LUC +} 세포를 누드 마우스(그룹당 n=7)에게 피하 주사하였다. 주사 후 15일째에, 모든 마우스에서 종양이 발생하였으며 상기 마우스들을, 대조군의 경우 PBS로 또는 상업적으로 입수할 수 있는 항-CXCL7 항체 또는 항-CXCL8 항체(프레포테크(Prepotech)(등록상표) 500M33 및 500M08) 또는 상기 두 항체의 조합 15 ㎎/㎏으로 매주 처리하였다. 생물발광을 개시된 바와 같이 매주 측정하였다(Grepin et al., 2012). 통계학적 유의수준 차이를 나타낸다: ^*p<0.05.
도 3은 누드 마우스에서 실험적인 ccRCC의 성장에 대한 CXCL1, CXCL7 또는 CXCL8에 대한 상업적으로 입수할 수 있는 항체들의 조합의 효과 대 상기 두 하이브리도마 12A10-13(CNCM I-4617) 및 35B11-8(CNCM I-4618)에 의해 생산된 본 발명의 항체의 효과의 비교를 예시한다. 3.10⁶ 786-O^{LUC +} 세포를 누드 마우스(그룹당 n=10)에게 피하 주사하였다. 주사 후 15일째에, 모든 마우스에서 종양이 발생하였으며 상기 마우스들을, 대조군의 경우 PBS로 또는 상기 두 하이브리도마 12A10-13 또는 35B11-8에 의해 생산된 항체 15 ㎎/㎏ 또는 상업적으로 입수할 수 있는 항-CXCL1, 항-CXCL7 및 CXCL8 항체(프레포테크(등록상표) 500P92, 500M33 및 500M08)의 조합 15 ㎎/㎏으로 매주 처리하였다. 종양을 캘리퍼스로 측정하고 부피를 하기(v = L x I² x 0.52, Auerbach et al., 1978)와 같이 계산한다. 통계학적 유의수준 차이를 나타낸다: ^*p<0.05; ^**p<0.01; ^***p<0.001.
도 4는 상기 두 하이브리도마 12A10-13(CNCM I-4617), 35B11-8(CNCM I-4618)에 의해 생산된 본 발명의 항체 및 상업적으로 입수할 수 있는 항체(펩프로테크(등록상표))의 결합 및 해리 상수를 나타낸다.
도 5는 상기 두 하이브리도마 12A10-13(CNCM I-4617) 및 35B11-8(CNCM I-4618) 항체에 의해 생산된 항체의 아이소타입 분류를 나타낸다. 이들 항체를 상기 하이브리도마 12A10-13에 의해 생산된 항체의 경우 IgG2C 및 상기 하이브리도마 35B11-8에 의해 생산된 항체의 경우 IgG1로서 특성화하였다.
도 6은 신세포 암종을 갖는 환자의 전체적인 생존의 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 평가를 나타낸다. 전체적인 생존과 (도 6A) CXCL1(제3 사분위수 값 96.2 pg/㎎ 단백질) 및 (도 6B) CXCL7(제1 사분위수 값 1152 pg/㎎ 단백질) 및 (도 6C) CXCL8(중간값 206 pg/㎎)의 기준선 수준과의 상관관계. 전체적인 생존을 제3 사분위수 값 미만 또는 초과인 CXCL1의 기준선 수준 또는 제1 사분위수 값 미만 또는 초과의 CXCL7의 기준선을 갖는 환자 하위그룹들로부터 계산하였다.
도 7은 환자들의 임상 및 생물학적 매개변수 및 단변량 분석을 도시한다.
도 8은 환자들의 임상 및 생물학적 매개변수 및 다변량 분석을 도시한다.
도 9(A-C)는 레이저-유도된 맥락막 혈관신생(ChNV)의 래트 모델에서 상기 두 하이브리도마 12A10-13(CNCM I-4617) 및 35B11-8(CNCM I-4618)에 의해 생산된 본 발명의 항체의 효과를 예시한다. 맥락막 혈관신생(ChNV)은 0일째에 래트의 오른쪽 눈에서 532 ㎚ 아르곤 레이저 광응고 장치(100 ms동안 150 mW에서 6개의 75 ㎛-크기 스폿)를 사용하여 유도되었다. 상기 두 하이브리도마 12A10-13(CNCM I-4617)(12A) 및 35B11-8(CNCM I-4618)(35B)에 의해 생산된 본 발명의 항체뿐만 아니라 음성 대조군(비히클-VEH)으로서 생리학적 혈청을 0일째에 유리체내 투여하였다(30 ㎍/눈).
도 9A는 23일째(레이저 처리 후)에 병변 평가의 크기를 나타낸다. 데이터는 평균±SEM이다. 통계학적 분석: ^*p<0.05.
도 9B는 14일째(레이저 처리 후)에 혈관조영 평가를 나타낸다. 데이터는 평균±SEM이다. 통계학적 분석: ^*p<0.05; ^**p<0.01. 안저 신생혈관을, 혈관촬영도(하이델베르그(Heidelberg)의 망막 혈관조영기)상의 병변 형광 강도를 기록함으로써 14일째에 오른쪽 눈에서 평가하였다.
도 9C는 21일째(레이저 처리 후)에 혈관조영 평가를 나타낸다. 데이터는 평균±SEM이다. 통계학적 분석: ^*p<0.05; ^**p<0.01. 안저 신생혈관을, 혈관촬영도(하이델베르그의 망막 혈관조영기)상의 병변 형광 강도를 기록함으로써 21일째에 오른쪽 눈에서 평가하였다.

본 발명을 하기 본문의 실시예들에 의해 상세히 설명할 것이나, 본 발명의 기술 범위는 이들 실시예로 제한되지 않는다.

실시예

I. 물질 및 방법

인간 신장 샘플

환자의 임상적 특징 및 정상 및 종양 조직의 혈관형성 프로파일은 앞서 그레핀(Grepin R) 등(2012)에 의해 개시되었다.

세포주 및 분자 생물학

786-O^{LUC +}, RCC-10^{LUC +} 및 ACHN^{LUC +} 세포를 렌티바이러스 형질도입(pLenti6/V5-D-TOPO, 인비트로젠, 프랑스 소재) 및 블라스티시딘 선택(10 ㎍/㎖)에 의해 획득하였다.

종양 이종이식편 형성 및 크기 평가

786-O^{LUC +}, RCC-10^{LUC +} 또는 ACHN^{LUC +} 세포(3.10⁶ 내지 10.10⁶ 세포)를 5-주된 누드(nu/nu) 암컷 마우스(장비에(Janvier), 프랑스 소재)의 옆구리에 피하 주사하였다. 생물발광을 제조사의 설명에 따라 생체내 영상화 시스템(IVIS, 캘리퍼 라이프사이언시즈(Caliper LifeSciences), 프랑스 소재)을 사용하여 정량분석하였다. 종양 부피(v = L x I² x 0.52(Auerbach et al., 1978))를 캘리퍼스를 사용하여 나란히 측정하였다. 생물발광과 종양 부피에 대한 값들간에 선형 관계가 존재하였다.

사이토킨의 측정

CXCL 사이토킨, FGF, 인간 및 마우스 VEGF를 제조사(펩프로테크, 프랑스 뇌이쉬르센 소재)의 권장에 따라 펩프로테크 ELISA 키트를 사용하여 측정하였다. VEGF-C를 휴먼 듀오세트(Human DuoSet) ELISA 키트를 사용하여 측정하고, VEGF-D를 콴티킨(Quantikine) ELISA 키트(R&D 시스템스, 미국 미네아폴리스 소재)를 사용하여 측정하였다.

통계학적 분석

통계학적 분석은 양쪽 검정이었으며 상기 분석을 윈도우용 R-2.12.2를 사용하여 수행하였다. 통계학적 비교를 정성분석 데이터의 경우 카이-2 검정 또는 피셔 정확 추론, 정량분석 데이터의 경우 스튜던트 t-검정 또는 윌콕슨 검정 및 센서드 데이터의 경우 로그-순위 검정을 사용하여 수행하였다.

물질 및 방법 비아코어(등록상표) 분석

기계

CM5 센서 칩을 포함한 비아코어(등록상표) 3000 SPR(표면 플라스몬 공명) 바이오센서, 비아코어(등록상표) 3000 조절 소프트웨어 4.1 버전 및 BIA평가 소프트웨어 4.1 버전(GE 헬쓰케어).

시약

N-하이드록시숙신이미드(NHS), N-에틸-N'-(3-다이메틸아미노프로필)-카보다이이미드 하이드로클로라이드(EDC), 및 에탄올아민 하이드로클로라이드 NaOH, pH 8.5를 함유하는 아민 커플링 키트.

0.01M HEPES, pH 7.4, 0.15M NaCl, 3mM EDTA, 0.05%(v/v) 계면활성제 P20을 함유하는 수성 완충제, HBS-EP 완충제.

항체 포획(다클론 토끼 항 마우스 면역글로불린 항체), 고정화 완충제(10mM 나트륨 아세테이트 pH 5.0 용액) 및 재생 용액(10mM 글리신-HCl pH1.7 용액)을 함유하는 마우스 항체 포획 키트.

이들 시약은 모두 GE 헬쓰케어에 의해 제공된다.

항원 및 항체

다클론 토끼 항-마우스 IgG 항체(마우스 항체 포획 키트, GE 헬쓰케어), 1 ㎎/㎖ 모액 농도.

홈메이드 단클론 래트 IgG 항체: Mc12A10-13 및 Mc35B11-8, 각각 30.5 ㎍/㎕ 및 32 ㎍/㎕(모액 농도).

상업적인 단클론 마우스 IgG 항체: McCXCL1, McCXCL7, McCXCL8, PcPan CXCL1-2-3. 이들 항체를 여과된 탈이온수(mQ)로 용해시켜 각각 하기의 모액 농도 2 ㎎/㎖, 1 ㎎/㎖, 1 ㎎/㎖ 및 0.5 ㎎/㎖을 획득하였다.

상기 시험된 항원들은 사이토킨 CXCL1, CXCL3, NAP2, IL8이며, 이들을 여과된 탈이온수로 용해시켜 1 ㎎/㎖의 모액 농도를 획득하였다.

CM5 센서 칩 표면상에의 포획 항체의 고정화

다클론 토끼 항 마우스 항체(마우스 항체 포획 키트)를 GE 헬쓰케어에 의해 공급된 실험 프로토콜에 따라 표준 아민 커플링 화학을 사용하여 CM5 센서 칩상에 공유적으로 고정화시켰다.

먼저, 상기 CM5 표면의 카복시메틸 덱스트란을 1:1 비의 0.4M EDC 및 0.1M NHS의 7분 주사로 활성화시킨다. 이어서 상기 고정화 완충제 중에서 30 ㎍/㎖로 희석된 다클론 토끼 항 마우스 항체(마우스 항체 포획 키트)를 7분 주사로 활성화된 표면상에 고정화시킨다. 남아있는 활성화된 카복시메틸 덱스트란 그룹은 1M 에탄올아민 하이드로클로라이드 NaOH의 7분 주사로 차단한다. 상기 주사는 또한 비-공유 결합된 항체를 제거한다.

이들 고정화 단계를 10 ㎕/분의 유량 및 HSP-EP 실행 완충제로 25 ℃에서 수행한다.

상기 비아코어(등록상표) 3000에 의해, 4개의 수로(유동 세포)를 상기 CM5 센서 표면상에 설계한다. 상기 다클론 토끼 항 마우스 IgG 항체를 2번째, 3번째 및 4번째 유동 세포(FC)상에 공유 커플링시켜, 기준 공제용 제1 FC(FC1) 블랭크를 남긴다. 상기 제1 FC(FC1)는 포획 항체의 주사없이, 단지 활성화(EDC/NHS)되고 탈활성화된다(에탄올아민 하이드로클로라이드 NaOH).

결합 분석(리간드 포획 및 분석물질 결합)

결합 분석을 훌륭한 방법, 특히 "포획 분자를 사용하는 결합"을 사용하여 수행한다.

먼저 상기 리간드(관심 항체)를 고정화된 항체에 의해 포획한다. 희석된 항체 Mc12A10-13(5 ㎍/㎖), Mc35B11-8(8 ㎍/㎖), McCXCL1(2 ㎍/㎖), McCXCL7(1 ㎍/㎖), McCXCL8(3 ㎍/㎖), McPan CXCL1-2-3(5 ㎍/㎖)을 5 ㎕/분의 유량으로 3분 주사에 의해 CM5 센서 칩상에 고정화된 다클론 토끼 항 마우스 IgG 항체에 의해 포획한다. 상기 "포획 항체-리간드" 복합체를 분석물질(사이토킨)의 주사 전에 10분 동안 안정화시킨다. 상기 포획은 비-공유 상호작용이다.

이어서 일련의 사이토킨 농도를 상기 포획 항체(리간드)에 대해 주사한다(분석물질). 사이토킨 CXCL1, CXCL3, NAP2, IL8을 0 내지 10 ㎍/㎖의 농도 범위에 대해 20 ㎍/㎖의 유량으로 상기 포획된 리간드에 주사한다. 상기 "리간드/분석물질" 복합체가 형성된다. 상기 결합 및 해리 단계를 각각 약 3분 및 2.5분에 걸쳐 모니터한다. 상기 유도된 신호를 RU(공명 단위)로 측정한다.

재생 단계를 각 사이토킨(분석물질) 주사 사이에서 수행하여 상기 복합체 "리간드-분석물질"을 제거한다. 상기 단계는 20 ㎕/분의 유량의 재생 완충제(마우스 항체 포획 키트)의 주사로 이루어진다. 상기 시험된 "리간드-분석물질" 커플에 따라, 상기 재생 주사의 지속기간은 30초 내지 3분으로 다양하다. 상기 재생 단계의 끝에서, 상기 CM5 센서 칩을 최소 5분 동안(상기 시험된 "리간드-분석물질" 커플에 따라 5 내지 7분) 안정화시킨다.

상기 재생 후에, 오직 상기 포획 항체(다클론 토끼 항 마우스 IgG 항체)만이 상기 CM5 센서 칩상에 남아있는다. 상기 칩은 다시 새로운 결합 분석 주기를 위해 준비된다.

항체 및 사이토킨 희석을 HBS-EP 실행 완충제로 수행한다.

상기 결합 분석을 모두 25 ℃에서 HBS-EP 실행 완충제로 수행한다. 결합 분석을 오직 FC1 및 FC2상에서 모니터한다. 상기 FC1은 대조군(블랭크)이므로, FC2에서 측정된 신호를 상기 FC1상에서 획득된 신호에 의해 공제한다. 더욱 또한, 각각의 사이토킨 농도에 대해 획득된 신호를 실행 완충제 주사(0 ㎍/㎖의 사이토킨)에 의해 획득된 신호에 의해 공제한다.

물질 및 방법 - 맥락막 혈관신생

맥락막 혈관신생(ChNV)을 0일째에 래트의 오른쪽 눈에서 532 ㎚ 아르곤 레이저 광응고 장치(100 ms동안 150 mW에서 6개의 75 ㎛-크기 스폿)를 사용하여 유도하였다.

착색된 갈색 노르웨이 래트를, 각각 3개의 상이한 처리(레이저-유도된 맥락막 혈관신생의 래트 모델에서 0일째에 유리체내 투여)에 상응하는, 8마리 동물의 3개 그룹으로 분할하였다:

- 하이브리도마 12A10-13(CNCM I-4617)(12A)에 의해 생산된 본 발명의 항체 30 ㎍/눈;

- 하이브리도마 35B11-8(CNCM I-4618)(35B)에 의해 생산된 본 발명의 항체 30 ㎍/눈;

- 음성 대조군(비히클-VEH)으로서 생리학적 혈청.

상기 병변의 크기를 23일째(레이저 처리 후)에 평가하였다.

안저 신생혈관을, 혈관촬영도(하이델베르그의 망막 혈관조영기)상의 병변 형광 강도를 기록함으로써 14일 및 21일째에 오른쪽 눈에서 평가하였다.

II. 결과

II.1 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 항체는 종양 성장을 감소시켰다

상기 ELR+CXCL의 단백질 서열 유사성을 종양 성장에 관련된 사이토킨 CXCL1, 7 및 8을 동시에 인식하는 항체의 발생에 사용하였다.

상기 목적을 위해서, 발명자들은 Lou/M 래트를 서열 SDLYAELRCMCIKTTSGIHPKNIQS(서열번호 20)의 인간 CXCL7에 특이적인 펩티드로 면역시켰다. 그러나, 상기 펩티드는 도 1A에 도시된 바와 같이 CXCL1, 2, 3 및 8과 유사성을 공유하였다.

상이한 선별 방법들을 사용하여 2개의 상이한 하이브리도마 12A10-13(CNCM I-4617), 35B11-8(CNCM I-4618)을 단리하였다: 키홀 림펫 헤모시아닌에 커플링된 서열 서열번호 20의 펩티드상에서의 ELISA 시험, 및 앞서 개시된 바와 같은(Bourcier C., et al.(2011)), CXCR2를 발현하는 세포에서 CXCL7-유도된 ERK 활성화를 억제하는 상기 항체의 능력.

상기 관심의 주요 CXCL에 대한 항체의 평형 해리 상수 K_D 및 친화성 상수 Ka를 비아코어(등록상표) 플라스몬 공명 분석에 의해 측정하고 도 4에 나타내었다. 이들 결과는 상이한 사이토킨, 특히 CXCL7, CXCL1 및 CXCL8에 대한 상기 두 항체의 다중 특이성을 입증하였다. 더욱이, 본 발명의 항체(상기 두 하이브리도마 12A10-13/CNCM I-4617, 35B11-8/CNCM I-4618에 의해 생산된)는 인간 케모카인 CXCL7에, 상업적으로 입수할 수 있는 항-CXCL7 항체보다 더 높은 친화성으로 결합할 수 있다.

이들 항체는 상기 하이브리도마 12A10-13(CNCM I-4617)에 의해 생산된 항체의 경우 IgG2C로서 및 상기 하이브리도마 35B11-8(CNCM I-4618)에 의해 생산된 항체의 경우 IgG1로서 특성화되었다(도 5). 상기 특성화는 특수 키트(래트 아이소타입 분류 키트, AbD 세로텍(Serotec), 참고번호: RMT1)를 사용하여 수행되었다.

종양 성장을 억제하는 본 발명 항체의 능력을 누드 마우스에서 ccRCC 이종이식된 종양의 발생에 대한 상기 항체들의 효과의 분석에 의해 평가하였다.

도 1B, C 및 D는 상기 두 항체가 모두 종양 성장을 강하게 억제하였음을 명백히 보인다.

더욱이, 상기 두 항체는 모두 종양 공격성에 관련된 주요 사이토킨들인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8의 종양내 양을 감소시켰다. 이들 항체에 의한 종양-함유 마우스의 처리도 또한 VEGF 발현을 감소시켰으며, 이는 이들의 강한 혈관형성 억제 효과를 강조하였다(도 1E).

이들 새로 개발된 항체는 종양 성장을, 단독으로 또는 함께 사용된, 상업적으로 입수할 수 있는 항-CXCL1, 항-CXCL7 및 항-CXCL8 항체보다 더 효율적으로 억제할 수 있다(도 1B, 1C, 2 및 3). 이러한 결과는 상기 상업적인 항-CXCL7 및 항-CXCL8 항체의 조합(상업적인 항-CXCL1 항체의 존재 또는 부재하의)이 종양 성장의 억제에 대해 부가적인 효과를 획득할 수 없기 때문에 실제로 놀라운 것이다. 반대로, 발명자들은 상업적인 항-CXCL7 및 항-CXCL8 항체의 병용이 종양 성장의 억제에 대해 그들의 별도의 사용보다 덜 효율적이며 RCC의 마우스 모델에서 종양발생 촉진 효과(pro-tumoral effect)를 가짐을 입증하였다(도 2).

II.2 CXCL1 , CXCL7 및 CXCL8은 투명세포 신세포 암종 환자의 전체적인 생존에 대한 예후 인자이다.

케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8이 환자 결과와 관련이 있는지를 조사하기 위해서, 투명세포 신세포 암종(ccRCC)에 걸린 51명 환자의 전체적인 생존간의 상관 관계(Grepin R, et al.(2012)) 및 상이한 케모카인들의 종양내 양을 측정하였다. 전체로서, 22명의 환자(43%)가 상기 추적 기간 동안 사망하였다. 제3 사분위수(96.2 pg/㎎)보다 우수한 CXCL1 수준 또는 제1 사분위수(1152 pg/㎎)보다 우수한 CXCL7 수준을 나타낸 환자들이 현저하게 더 높은 사망률을 가졌음은 주목할만하다(도 6A 및 B). 중간(206 pg/㎎)보다 우수한 CXCL8 수준을 나타낸 환자들은 더 높은 사망률을 가졌다(도 6C).

단변량 생존 분석은 CXCL1 및 CXCL7 발현이 전체적인 생존에 대한 불량한 예후의 인자임을 보였다(각각 p = 0.017 및 p = 0.0015)(도 7). 더욱 또한, 환자결과에 대한 불량한 예후 인자인 것으로 공지된, 진단시 전이 및 퓌어맨(Furhman) 등급이 또한 전체적인 생존과 유의수준으로 상관되었다(p = <10^-3 및 0.001).

이어서 전체적인 생존에 관한, 진단시 전이 및 퓌어맨 등급의 CXCL1, CXCL7 수준의 예측 유의수준을 다변량 Cox 회귀 모델에서 분석하였다(도 8). CXCL7 발현은 전체적인 생존에 대한 독립적인 예측 모수로서 확인된 반면(p = 0.014), CXCL1은 통계학적 유의수준에 도달하지 못했다(p = 0.059). 유사한 결과가 전체적인 생존에 대한, 진단시 전이 및 퓌어맨 등급에 대해 획득되었다(p = 0.0005 및 0.007; 도 8).

이러한 결과는 특히 본 발명의 항체를 사용하는, 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8의 과발현의 검출이 병적인 혈관형성 질병, 투명세포 신세포 암종에 걸린 환자의 전체적인 생존에 대한 예후 인자임을 나타낸다.

II.3 CXCL1 , CXCL7 및 CXCL8에 대한 항체는 레이저-유발된 맥락막 혈관신생의 래트 모델에서 병변 크기를 현저하게 감소시키고 혈관 누출을 감소시켰다.

나이-관련된 황반 변성에서 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 항체의 효과를 조사하기 위해서, 레이저-유발된 맥락막 혈관신생의 래트 모델에서 실험을 수행하였다.

맥락막 혈관신생(ChNV)을 0일째에 래트의 오른쪽 눈에서 532 ㎚ 아르곤 레이저를 사용하여 유도하였다.

착색된 갈색 노르웨이 래트를, 각각 3개의 상이한 처리(레이저-유도된 맥락막 혈관신생의 래트 모델에서 0일째에 유리체내 투여)에 상응하는, 8마리 동물의 3개 그룹으로 분할하였다:

- 하이브리도마 12A10-13(CNCM I-4617)(12A)에 의해 생산된 본 발명의 항체 30 ㎍/눈;

- 하이브리도마 35B11-8(CNCM I-4618)(35B)에 의해 생산된 본 발명의 항체 30 ㎍/눈;

- 음성 대조군(비히클-VEH)으로서 생리학적 혈청.

상기 병변의 크기를 23일째(레이저 처리 후)에 평가하였다. 도 9A에 도시된 바와 같이, 상기 병변의 크기는 본 발명의 두 항체(12A10-13(CNCM I-4617)(12A): p=0.0014; 35B11-8(CNCM I-4618)(35B) p=0.004)에 의해 처리후 23일째에 대단히 감소하였다.

안저 신생혈관을, 혈관촬영도(하이델베르그의 망막 혈관조영기)상의 병변 형광 강도를 기록함으로써 14일 및 21일째에 오른쪽 눈에서 평가하였다. 결과를 도 9B 및 9C에 나타낸다.

비히클 처리된 그룹(음성 대조군-VEH)에서, 상기 유도된 눈은 레이저 손상후 14 및 21일째에 일관된 플루오레세인 누출을 보였다. 상기 평균 플루오레세인 누출은 78%의 심한 누출 스폿(점수 3)과 함께 14일째에 2.8±0.2(평균±SD, n=8, 중간=2.8) 및 21일째에 2.8±0.4(평균±SD, n=8; 중간=3.0)였으며, 이는 ChNV의 형성 및 지속을 가리킨다.

상기 하이브리도마 12A10-13(CNCM I-4617)에 의해 생산된 본 발명의 항체 30 ㎍의 유리체내 주사(12A)는 비히클 그룹에 비해 14일 및 21일째에 혈관 누출의 32% 감소를 나타낸 반면(각각 p=0.002 및 0.0046), 누출 억제에 대한 경향이 상기 하이브리도마 35B11-8(CNCM I-4618)에 의해 생산된 본 발명의 항체 30 ㎍이 주사된 눈에서 관찰되었다(도 35B).

이들 결과는 레이저-유발된 맥락막 혈관신생의 래트 모델에서 병변 크기를 감소시키고 혈관 누출을 감소시키는 본 발명의 항체의 효율을 분명히 나타낸다.

참고문헌

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2-3 2-3-1 2-3-2 2-3-3 2-3-4	기탁증명 기탁 기관의 명칭 기탁 기관의 주소 기탁일 수납번호	CNCM 국립 미생물 배양 콜렉션 ( CNCM ) 프랑스 75724 파리 15구 닥터 루 거리 28 파스퇴르 연구소 2012년 4월 25일(2012.04.25) CNCM I-4618
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SEQUENCE LISTING <110> CENTRE NATIONAL DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE (CNRS) UNIVERSITE DE NICE SOPHIA ANTIPOLIS <120> ANTI-CXCL1, CXCL7 AND CXCL8 ANTIBODIES AND THEIR APPLICATIONS <130> IPA151214-FR <140> PCT/EP2014/060201 <141> 2014-05-19 <150> EP13305642.4 <151> 2013-05-17 <160> 24 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Light chain CDR1 (LC-CDR1) - hybridoma 35B11-8 <400> 1 Gln Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Tyr Ile Ala 1 5 10 <210> 2 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Light chain CDR2 (LC-CDR2) - hybridoma 35B11-8 <400> 2 Thr Ser Thr Leu Val Ser 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Light chain CDR3 (LC-CDR3) - hybridoma 35B11-8 <400> 3 Leu Gln Tyr Asp Asn Ser Pro Phe Pro 1 5 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Heavy chain CDR1 (HC-CDR1) - hybridoma 35B11-8 <400> 4 Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr Trp Met 1 5 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial sequence 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Artificial sequence <220> <223> Heavy chain (HC) - hybridoma 35B11-8 <400> 14 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Lys Thr Gly Ser Asn Pro Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gly Thr Thr Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 15 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Light chain (LC) - hybridoma 12A10-13 <400> 15 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr Thr Met Ala Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ala Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Asn Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Thr Glu 65 70 75 80 Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Ser Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 16 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Heavy chain (HC) - hybridoma 12A10-13 <400> 16 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Ile Ser Trp Ile Lys Gln Thr Thr Gly Gln Gly Leu Glu Tyr Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Thr Gly Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Phe 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Pro Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Pro Ser Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala 115 <210> 17 <211> 1184 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> Human CXCL1 <400> 17 cacagagccc gggccgcagg cacctcctcg ccagctcttc cgctcctctc acagccgcca 60 gacccgcctg ctgagcccca tggcccgcgc tgctctctcc gccgccccca gcaatccccg 120 gctcctgcga gtggcactgc tgctcctgct cctggtagcc gctggccggc gcgcagcagg 180 agcgtccgtg gccactgaac tgcgctgcca gtgcttgcag accctgcagg gaattcaccc 240 caagaacatc caaagtgtga acgtgaagtc ccccggaccc cactgcgccc aaaccgaagt 300 catagccaca ctcaagaatg ggcggaaagc ttgcctcaat cctgcatccc ccatagttaa 360 gaaaatcatc gaaaagatgc tgaacagtga caaatccaac tgaccagaag ggaggaggaa 420 gctcactggt ggctgttcct gaaggaggcc ctgcccttat aggaacagaa gaggaaagag 480 agacacagct gcagaggcca cctggattgt gcctaatgtg tttgagcatc gcttaggaga 540 agtcttctat ttatttattt attcattagt tttgaagatt ctatgttaat attttaggtg 600 taaaataatt aagggtatga ttaactctac ctgcacactg tcctattata ttcattcttt 660 ttgaaatgtc aaccccaagt tagttcaatc tggattcata tttaatttga aggtagaatg 720 ttttcaaatg ttctccagtc attatgttaa tatttctgag gagcctgcaa catgccagcc 780 actgtgatag aggctggcgg atccaagcaa atggccaatg agatcattgt gaaggcaggg 840 gaatgtatgt gcacatctgt tttgtaactg tttagatgaa tgtcagttgt tatttattga 900 aatgatttca cagtgtgtgg tcaacatttc tcatgttgaa actttaagaa ctaaaatgtt 960 ctaaatatcc cttggacatt ttatgtcttt cttgtaaggc atactgcctt gtttaatggt 1020 agttttacag tgtttctggc ttagaacaaa ggggcttaat tattgatgtt ttcatagaga 1080 atataaaaat aaagcactta tagaaaaaac tcgtttgatt tttgggggga aacaagggct 1140 acctttactg gaaaatctgg tgatttataa aaaaaaaaaa aaaa 1184 <210> 18 <211> 1307 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> Human CXCL7 <400> 18 acttatctgc agacttgtag gcagcaactc accctcactc agaggtcttc tggttctgga 60 aacaactcta gctcagcctt ctccaccatg agcctcagac ttgataccac cccttcctgt 120 aacagtgcga gaccacttca tgccttgcag gtgctgctgc ttctgtcatt gctgctgact 180 gctctggctt cctccaccaa aggacaaact aagagaaact tggcgaaagg caaagaggaa 240 agtctagaca gtgacttgta tgctgaactc cgctgcatgt gtataaagac aacctctgga 300 attcatccca aaaacatcca aagtttggaa gtgatcggga aaggaaccca ttgcaaccaa 360 gtcgaagtga tagccacact gaaggatggg aggaaaatct gcctggaccc agatgctccc 420 agaatcaaga aaattgtaca gaaaaaattg gcaggtgatg aatctgctga ttaatttgtt 480 ctgtttctgc caaacttctt taactcccag gaagggtaga attttgaaac cttgattttc 540 tagagttctc atttattcag gatacctatt cttactgtat taaaatttgg atatgtgttt 600 cattctgtct caaaaatcac attttattct gagaaggttg gttaaaagat ggcagaaaga 660 agatgaaaat aaataagcct ggtttcaacc ctctaattct tgcctaaaca ttggactgta 720 ctttgcattt ttttctttaa aaatttctat tctaacacaa cttggttgat ttttcctggt 780 ctactttatg gttattagac atactcatgg gtattattag atttcataat ggtcaatgat 840 aataggaatt acatggagcc caacagagaa tatttgctca atacattttt gttaatatat 900 ttaggaactt aatggagtct ctcagtgtct tagtcctagg atgtcttatt taaaatactc 960 cctgaaagtt tattctgatg tttattttag ccatcaaaca ctaaaataat aaattggtga 1020 atatgaatct tataaactgt ggttagctgg tttaaagtga atatatttgc cactagtaga 1080 acaaaaatag atgatgaaaa tgaattaaca tatctacata gttataattc tatcattaga 1140 atgagcctta taaataagta caatatagga cttcaacctt actagactcc taattctaaa 1200 ttctactttt ttcatcaaca gaactttcat tcatttttta aaccctaaaa cttataccca 1260 cactattctt acaaaaatat tcacatgaaa taaaaatttg ctattga 1307 <210> 19 <211> 1718 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> Human CXCL8 <400> 19 gagggtgcat aagttctcta gtagggtgat gatataaaaa gccaccggag cactccataa 60 ggcacaaact ttcagagaca gcagagcaca caagcttcta ggacaagagc caggaagaaa 120 ccaccggaag gaaccatctc actgtgtgta aacatgactt ccaagctggc cgtggctctc 180 ttggcagcct tcctgatttc tgcagctctg tgtgaaggtg cagttttgcc aaggagtgct 240 aaagaactta gatgtcagtg cataaagaca tactccaaac ctttccaccc caaatttatc 300 aaagaactga gagtgattga gagtggacca cactgcgcca acacagaaat tattgtaaag 360 ctttctgatg gaagagagct ctgtctggac cccaaggaaa actgggtgca gagggttgtg 420 gagaagtttt tgaagagggc tgagaattca taaaaaaatt cattctctgt ggtatccaag 480 aatcagtgaa gatgccagtg aaacttcaag caaatctact tcaacacttc atgtattgtg 540 tgggtctgtt gtagggttgc cagatgcaat acaagattcc tggttaaatt tgaatttcag 600 taaacaatga atagtttttc attgtaccat gaaatatcca gaacatactt atatgtaaag 660 tattatttat ttgaatctac aaaaaacaac aaataatttt taaatataag gattttccta 720 gatattgcac gggagaatat acaaatagca aaattgaggc caagggccaa gagaatatcc 780 gaactttaat ttcaggaatt gaatgggttt gctagaatgt gatatttgaa gcatcacata 840 aaaatgatgg gacaataaat tttgccataa agtcaaattt agctggaaat cctggatttt 900 tttctgttaa atctggcaac cctagtctgc tagccaggat ccacaagtcc ttgttccact 960 gtgccttggt ttctccttta tttctaagtg gaaaaagtat tagccaccat cttacctcac 1020 agtgatgttg tgaggacatg tggaagcact ttaagttttt tcatcataac ataaattatt 1080 ttcaagtgta acttattaac ctatttatta tttatgtatt tatttaagca tcaaatattt 1140 gtgcaagaat ttggaaaaat agaagatgaa tcattgattg aatagttata aagatgttat 1200 agtaaattta ttttatttta gatattaaat gatgttttat tagataaatt tcaatcaggg 1260 tttttagatt aaacaaacaa acaattgggt acccagttaa attttcattt cagataaaca 1320 acaaataatt ttttagtata agtacattat tgtttatctg aaattttaat tgaactaaca 1380 atcctagttt gatactccca gtcttgtcat tgccagctgt gttggtagtg ctgtgttgaa 1440 ttacggaata atgagttaga actattaaaa cagccaaaac tccacagtca atattagtaa 1500 tttcttgctg gttgaaactt gtttattatg tacaaataga ttcttataat attatttaaa 1560 tgactgcatt tttaaataca aggctttata tttttaactt taagatgttt ttatgtgctc 1620 tccaaatttt ttttactgtt tctgattgta tggaaatata aaagtaaata tgaaacattt 1680 aaaatataat ttgttgtcaa agtaaaaaaa aaaaaaaa 1718 <210> 20 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> pCXCL7 <400> 20 Ser Asp Leu Tyr Ala Glu Leu Arg Cys Met Cys Ile Lys Thr Thr Ser 1 5 10 15 Gly Ile His Pro Lys Asn Ile Gln Ser 20 25 <210> 21 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> pCXCL1 <400> 21 Ala Ser Val Ala Thr Glu Leu Arg Cys Gln Cys Leu Gln Thr Leu Gln 1 5 10 15 Gly Ile His Pro Lys Asn Ile Gln Ser 20 25 <210> 22 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> pCXCL2 <400> 22 Ala Pro Leu Ala Thr Glu Leu Arg Cys Gln Cys Leu Gln Thr Leu Gln 1 5 10 15 Gly Ile His Leu Lys Asn Ile Gln Ser 20 25 <210> 23 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> pCXCL3 <400> 23 Ala Ser Val Val Thr Glu Leu Arg Cys Gln Cys Leu Gln Thr Leu Gln 1 5 10 15 Gly Ile His Leu Lys Asn Ile Gln Ser 20 25 <210> 24 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> pCXCL8 <400> 24 Pro Arg Ser Ala Lys Glu Leu Arg Cys Gln Cys Ile Lys Thr Tyr Ser 1 5 10 15 Lys Pro Phe His Pro Lys Phe Ile Lys Glu 20 25

Claims (16)

1. 인간 케모카인 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8에 대한 단리된 항체 또는 그의 단편으로, 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시, 최대한 16 nM의 평형 해리 상수(K_D)를 갖는 인간 케모카인 CXCL1, 최대한 5 nM의 평형 해리 상수(K_D)를 갖는 인간 케모카인 CXCL7, 및 최대한 45 nM의 평형 해리 상수(K_D)를 갖는 인간 케모카인 CXCL8에 결합할 수 있는 상기 항체 또는 단편.
2. 제1항에 있어서,
   경쇄 가변 영역(V_L)이
   - 서열번호 1의 서열 또는 서열번호 1의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 1과 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열의 경쇄 CDR1(LC-CDR1); 및
   - 서열번호 2의 서열 또는 서열번호 2의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 2와 적어도 90%의 일치성(identity)을 갖는 서열의 경쇄 CDR2(LC-CDR2); 및
   - 서열번호 3의 서열 또는 서열번호 3의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 3과 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열의 경쇄 CDR3(LC-CDR3)
   을 포함하고; 및
   중쇄 가변 영역(VH)이
   - 서열번호 4의 서열 또는 서열번호 4의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 4와 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열의 중쇄 CDR1(HC-CDR1); 및
   - 서열번호 5의 서열 또는 서열번호 5의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 5와 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열의 중쇄 CDR2(HC-CDR2); 및
   - 서열번호 6의 서열 또는 서열번호 6의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 6과 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열의 중쇄 CDR3(HC-CDR3)
   을 포함하는 항체.
3. 제1항에 있어서,
   경쇄 가변 영역(V_L)이
   - 서열번호 7의 서열 또는 서열번호 7의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 7과 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열의 경쇄 CDR1(LC-CDR1); 및
   - 서열번호 8의 서열 또는 서열번호 8의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 8과 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열의 경쇄 CDR2(LC-CDR2); 및
   - 서열번호 9의 서열 또는 서열번호 9의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 9와 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열의 경쇄 CDR3(LC-CDR3)
   을 포함하고; 및
   중쇄 가변 영역(VH)이
   - 서열번호 10의 서열 또는 서열번호 10의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 10과 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열의 중쇄 CDR1(HC-CDR1); 및
   - 서열번호 11의 서열 또는 서열번호 11의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 11과 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열의 중쇄 CDR2(HC-CDR2); 및
   - 서열번호 12의 서열 또는 서열번호 12의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 12와 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열의 중쇄 CDR3(HC-CDR3)
   을 포함하는 항체.
4. 제1항 또는 제2항에 있어서,
   경쇄 가변 영역(V_L)의 서열이 서열번호 13의 서열 또는 서열번호 13의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 13과 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지고; 및 중쇄 가변 영역(V_H)의 서열이 서열번호 14의 서열 또는 서열번호 14의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 14와 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지는 항체.
5. 제1항 또는 제3항에 있어서,
   경쇄 가변 영역(V_L)의 서열이 서열번호 15의 서열 또는 서열번호 15의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 15와 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지고; 및 중쇄 가변 영역(V_H)의 서열이 서열번호 16의 서열 또는 서열번호 16의 전체 길이에 걸쳐 서열번호 16과 적어도 90%의 일치성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어지는 항체.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 항체가 단클론 항체인 항체.
7. 제4항에 있어서,
   2012년 4월 25일자로 국립 미생물 배양 콜렉션(Collection National de Cultures de Microorganismes, CNCM)에 CNCM I-4618번으로 기탁된 하이브리도마에 의해 생산되는 항체.
8. 제5항에 있어서,
   2012년 4월 25일자로 국립 미생물 배양 콜렉션(CNCM)에 CNCM I-4617번으로 기탁된 하이브리도마에 의해 생산되는 항체.
9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 항체 또는 그의 단편을 암호화하는 단리된 핵산 분자.
10. 제9항에 정의된 바와 같은 핵산 분자를 포함하는 벡터.
11. 제9항에 정의된 바와 같은 핵산 분자 또는 제10항에 정의된 바와 같은 벡터를 포함하는 숙주 세포.
12. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 항체 및 그의 단편, 제9항에 정의된 바와 같은 단리된 핵산 분자 및 제10항에 정의된 바와 같은 벡터로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 화합물을 포함하는 약학 조성물.
13. 약제로서 사용하기 위한 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 항체 또는 그의 단편, 제9항에 정의된 바와 같은 단리된 핵산 분자 또는 제10항에 정의된 바와 같은 벡터.
14. 병적인 혈관형성 질병 또는 바람직하지 못한 과도한 혈관신생을 특징으로 하는 질병, 특히 이상 혈관형성을 갖는 암, 이상 혈관형성을 갖는 안과 질병, 류머티스성 관절염, 건선, 혈관종, 자궁내막증 및 카포시 육종으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 질병의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 항체 또는 그의 단편, 제9항에 정의된 바와 같은 단리된 핵산 분자 또는 제10항에 정의된 바와 같은 벡터.
15. 피실험자에서 병적인 혈관형성 질병 또는 바람직하지 못한 과도한 혈관신생을 특징으로 하는 질병의 시험관내 진단 및/또는 예측 방법으로,
    i) 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 항체 및/또는 그의 단편을 사용하여 상기 피실험자의 생물학적 샘플 중의 CXCL1, CXCL7 및 CXCL8로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 인간 케모카인의 발현 및/또는 상기 발현의 수준을 측정함
    을 포함하는 방법.
16. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 항체 및/또는 그의 단편을 포함하는, 제15항에 따른 방법을 수행하기 위한 키트.

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