KR20160008942A - 발효된 부활초 추출물을 포함하는 조성물 및 이의 용도 - Google Patents

발효된 부활초 추출물을 포함하는 조성물 및 이의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 발효된 부활초의 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 미백, 피부 주름 개선, 피부 탄력 개선, 또는 항산화용 화장료 조성물, 항산화용 약학 조성물, 및 발효된 부활초의 추출물 및 부활초 추출물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 유효성분으로 포함하는, 염증 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

Description

발효된 부활초 추출물을 포함하는 조성물 및 이의 용도 {A composition comprising fermented Myrothamnus flabellifolius extract and the use thereof}
본 발명은 발효된 부활초의 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 미백, 피부 주름 개선, 피부 탄력 개선, 또는 항산화용 화장료 조성물, 항산화용 약학 조성물, 및 발효된 부활초의 추출물 및 부활초 추출물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 유효성분으로 포함하는, 염증 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
피부는 외부 환경으로부터 인체를 보호하고, 내부의 수분 및 유용 성분이 밖으로 유출되는 것을 막아주는 장벽 기능, 체온조절 기능, 배설 기능 등 다양한 생리적 기능을 담당하고 있는 중요한 기관이다. 그러나, 다음과 같은 이유 등에 의해 피부 세포의 활성이 저하되고 피부에 기미, 주근깨 및 검버섯 등의 변화가 생기며 피부가 칙칙하고 거칠게 변하는 노화 현상이 일어날 수 있다.
첫째, 피부의 진피층에 존재하는 콜라겐은 피부의 기계적 견고성, 결합조직의 저항력, 조직의 결합력 유지, 및 세포접착의 지탱 등의 기능을 수행하여 피부의 구성성분에 많은 영향을 미친다. 이러한 콜라겐은 스트레스, 고령화 또는 자외선 조사에 의한 광 노화에 의하여 감소되며, 이에 따라 피부 조직이 느슨해지고 탄력을 상실하게 된다.
둘째, 스트레스 또는 자외선 조사와 같은 외부 요인에 의해 염증 반응이 일어나거나 노화에 의해 면역 세포들의 활성이 감소하여 피부의 면역 기능 조절이 비정성화되어 피부 노화가 촉진된다.
셋째, 표피의 세포 기능이 저하됨으로써 신진대사 작용이 원활하지 못하게 되어, 각질 탈락이 잘 일어나지 않아 각질이 과하게 축적된 상태에서 자외선을 받으면 탄력이 저하되어 주름의 발생을 초래하게 된다.
넷째, 표피에 피지막이 형성되지 않을 경우 수분과 피지 분비가 감소하고 피부가 건조해지면서 주름이 형성된다.
다섯째, 피하지방에서 생성된 산소 라디칼이 세포막과 세포핵을 파괴하여 혈액순환을 저하시킴으로써 피부의 영양과 수분이 부족하게 되어 피부 노화가 촉진된다.
여섯째, 피부가 자외선을 받으면 피부를 보호하기 위해 멜라닌을 합성한다. 합성된 멜라닌은 멜라노좀을 통해 피부의 각질세포로 옮겨진다. 이 각질 세포는 28일을 주기로 턴-오버(turn over) 현상이 일어난다. 따라서 생성된 멜라닌은 각질세포에 의 해 28일을 주기로 소실되는 것이 일반적이나, 스트레스, 피부 노화 등에 의해 피부 세포 주기가 잘 조절되지 않게 되면 각질세포가 제 시기에 탈락하지 않아 기미, 주근깨, 검버섯 등의 색소 침착이 일어나게 되어 피부 노화가 일어나게 된다.
일곱째, 피부에서는 피지, 땀 성분 및 화장품 성분들이 피부 상재균에 의해 독성이 강한 물질로 분해되어 피부에 자극을 일으키고 염증을 유발시킬 수 있다. 또한 자외선으로 인한 자극으로 피부에 염증 매개 물질인 일산화 질소(NO)의 생성을 증가시켜 염증이 유발될 수 있다. 일산화 질소의 생성은 대부분 iNOS에 의한 것인데, iNOS는 LPS, 사이토카인 같은 자극에 의해 급격하게 유도되어 과량의 NO를 생성하는 것으로 알려져 있다.
상기와 같은 피부 주름을 개선시키고 피부 색소 침착을 억제하기 위한 보습제, 미백제, 및 피부 노화를 지연시키기 위한 화장품 등에 대하여 다양한 연구가 진행되고 있다. 나아가, 고령화 사회로의 진입에 따라 젊고 탄력 있는 피부를 갖고자 하는 소비자의 욕구가 증대되었으며, 2000 년 7 월 화장품법의 시행됨에 따라 피부 노화를 지연시키고 피부 보습을 개선시키는 화장품에 대한 연구 및 개발이 더욱 활발해졌다. 이러한 기능의 화장품들은, 피부에 독성이나 자극을 주지 않기 위하여 천연 물질을 사용하기도 한다.
부활초는 성서에 나오는 유대광야의 '여리고' 계곡에서 자란다 하여 여리고 장미(rose of Jericho)라고도 불리우며, 포함된 트리할로스 성분이 부활초가 극한 환경에서도 살아가는데 도움을 준다. 트리할로스는 분자 내에 하이드록시(OH) 기를 많이 함유하고 있어 물을 많이 끌어당길 수 있기 때문에 피부 보습력 강화에 탁월한 효과가 있다고 알려져 있다.
이러한 배경 하에, 본 발명자들은 피부 미백, 주름 개선, 피부 탄력 개선을 유도하기 방법을 개발하고자 예의 연구 노력한 결과, 발효된 부활초 추출물이 피부 미백, 피부 주름 예방 또는 개선, 피부 탄력 개선 효과뿐만 아니라, 항염증 및 항산화 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 주된 목적은 발효된 부활초의 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 미백, 피부 주름 예방 또는 개선, 피부 탄력 개선, 또는 항산화용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 발효된 부활초의 추출물 및 부활초 추출물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 유효성분으로 포함하는, 염증 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 발효된 부활초의 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항산화용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
화장료 조성물
상기의 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 발효된 부활초의 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 미백, 피부 주름 예방 또는 개선, 피부 탄력 개선, 또는 항산화용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 피부 미백은 멜라닌 형성 과정을 억제 시켜 멜라닌 생성을 억제하는 것을 말한다. 본 발명자들은 발효된 부활초 추출물을 쥐의 멜라노마 세포에 처리하여 생성된 멜라닌의 양을 측정한 결과, 발효된 부활초의 추출물은, 티로시나제에 직접 작용하여 멜라닌 생성을 억제하는 것으로 알려진 알부틴과 비교할 때 2배 이상의 멜라닌 생성 저해율을 나타내어 미백 효과가 우수하며, 부활초 추출물에 비해서도 멜라닌 생성 저해 효과가 뛰어나, 색소 침착을 억제하며 우수한 미백 효과를 나타냄을 확인하였다(실험예 4, 표 4).
상기 피부 주름이란 피부가 쇠하여 생긴 잔줄을 의미하며, 유전자에 의한 원인, 피부 진피에 존재하는 콜라겐과 엘라스틴의 감소, 외부환경 등에 의해 유발될 수 있다. 본 발명의 피부 주름 예방 또는 개선은 피부에 주름이 생성되는 것을 억제 또는 저해하거나, 이미 생성된 주름을 완화시키는 것을 말한다.
상기 피부 탄력이란 진피층에 존재하는 엘라스틴(elastin)으로 구성된 탄력섬유 및 콜라겐(collagen)이라고 하는 교원섬유에 의해 나타나는 것으로, 피부 탄력 개선이란 엘라스틴과 콜라겐이 충분히 존재하는 상태에서 피부 탄력이 유지되는 것을 말한다.
본 발명자들은 인간 유래 섬유아세포에 발효된 부활초의 추출물을 처리한 결과, 콜라겐 합성에 관여하는 비타민 C 에 비해서도 우수한 콜라겐 생합성 능력을 나타내며, 부활초 추출물에 비해서도 콜라겐 합성 촉진 효과가 우수함을 확인하였다(실험예 5, 6, 표 5, 6).
상기 항산화는 세포내 대사 또는 자외선의 영향으로 인한 산화적 스트레스에 따라 반응성이 높은 자유 라디칼(free radical) 또는 활성산소종(reactive oxygen species;ROS)에 의한 세포의 산화를 억제하는 것을 말하며, 자유 라디칼 또는 활성산소종을 제거하여 이로 인한 세포의 손상이 감소되는 것을 포함한다. 본 발명자들은 발효된 부활초의 추출물은 비타민 C와 비교할 때도 자유라디칼 소거능이 매우 강력하였으며, 천연 추출물인 점을 고려하였을 때, 발효되지 않은 부활초 추출물에 비해서도 항산화 효과가 우수함을 확인하였다(실시예 7, 표 7).
상기 발효된 부활초의 추출물에서 발효는 당해 분야에서 널리 알려진 방법에 의하여 실시할 수 있다.　일 예로, 상기 발효는 부활초의 건조물, 분쇄물, 농축물, 또는 이의 혼합물에 발효 미생물을 접종하여 발효시킨 것일 수 있다. 다른 일 예로, 상기 발효는 미생물의 배양 배지에 부활초의 건조물, 농축물, 또는 이의 혼합물을 첨가한 다음, 발효 미생물을 배지에 접종하여 적정한 온도 및 습도에서 적정한 시간 동안 발효시키는 방법에 의하여 실시할 수 있다. 일 예로, 상기 발효 미생물은 버섯, 유산균 및 효모로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
상기 발효에 사용되는 버섯은 예를 들어 표고버섯, 느타리버섯, 팽이버섯, 송이버섯, 양송이버섯, 목이버섯, 노루궁뎅이 버섯, 영지버섯, 또는 상황버섯일 수 있으나 본 발명의 목적인 피부 미백, 피부 주름 예방 또는 개선, 피부 탄력 개선, 또는 항산화 효과를 나타낼 수 있는 이상 이에 제한되지 않는다.
상기 유산균은 예를 들어 비피도박테리움 속(Bifidobacterium sp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.), 락토코커스 락티스 속(Lactococcus sp.), 페디오코커스 속(Pediococcus sp.), 스트렙토코커스 속(Streptococcus . sp), 또는 류코노스톡 속(Leuconostoc sp.)의 미생물일 수 있으나 본 발명의 목적인 피부 미백, 피부 주름 예방 또는 개선, 피부 탄력 개선, 또는 항산화 효과를 나타낼 수 있는 이상 이에 제한되지 않는다. 일 예로, 상기 유산균은 비피도박테리움 비피덤(B. bifidum), 비피도박테리움 브레브(B. breve), 비피도박테리움 롱검(B. longum), 비피도박테리움 애니말리스(B. animalis), 비피도박테리움 락티스(B. lactis), 락토바실러스 애시도필러스(L. acidophilus), 락토바실러스 카세이(L. casei), 락토바실러스 가세리(L. gasseri), 락토바실러스 델브루에키 종(L. delbrueckii spp.), 락토바실러스 불가리쿠스(L. bulgaricus), 락토바실러스 헬베티쿠스(L. helveticus), 락토바실러스 퍼멘텀(L. fermentum), 락토바실러스 파라카세이(L. paracasei), 락토바실러스 플랜타룸(L. plantarum), 락토바실러스 류테리(L. reuteri), 락토바실러스 람노서스(L. rhamnosus), 락토바실러스 살리바리우스(L. salivarius), 락토코커스 락티스(L. lactis), 페디오코커스 세레비지애(P. cerevisiae), 페디오코커스 애시디락티시(P. acidilactici), 스트렙토코커스 락티스(S. lactis), 스트렙토코커스 서모필리스(S. thermophiles), 스트렙토코커스 크레모리스(S. cremoris), 또는 류코노스톡 메센터로이데스(L. mesenteroides)일 수 있다. 본 발명에서 유산균은 젖산균과 동일한 의미로 사용될 수 있다.
상기 효모는 예를 들어 사카로마이시스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 엘립소이데우스(S. ellipsoideus), 사카로마이세스 코레아누스(S. coreanus), 사카로마이세스 칼스버젠시스(S. carlsbergensis), 사카로마이세스 파스토리아누스(S. pastorianus), 사카로마이세스 락티스(S. lactis), 사카로마이세스 룩시(S. rouxii), 시죠사카로마이세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe), 지고사카로마이세스 메이저(Zygosaccharomyces major), 한세눌라 아노말라 (Hansenula anomala), 브레타노마이세스 블룩셀렌시스(Brettanomyces bruxellensis), 브레타노마이세스 커스터시아누스(B. custersianus), 데케라 아노말라(Dekkera anomala), 스트렙토마이세스 올리보크로모제네스(Streptomyces olivochromogenes), 또는 스트렙토마이세스 그리세우스(S. griseus)일 수 있으나 본 발명의 목적인 피부 미백, 피부 주름 예방 또는 개선, 피부 탄력 개선, 또는 항산화 효과를 나타낼 수 있는 이상 이에 제한되지 않는다. 일 예로 상기 효모는 사카로마이시스 세레비시애일 수 있다.
본 발명의 부활초의 미생물 발효를 위한 미생물의 접종량, 배양 온도, 배양 습도 및 배양 시간은 발효에 이용되는 미생물의 종류에 따라 다양한 조건에 따라 달라질 수 있다. 일 예로, 상기 발효된 부활초의 추출물은 효모를 부활초 또는 이를 포함하는 배지에 접종하고, pH 5.5 내지 6.5, 10 내지 35℃에서 24시간 내지 5일 동안 발효하여 얻어진 것일 수 있다. 다른 일 예로, 상기 발효된 부활초의 추출물은 유산균을 부활초 또는 이를 포함하는 배지에 접종하고, pH 6.5 내지 7.5, 온도 35 내지 38℃에서 24시간 내지 5일 동안 발효하여 얻어진 것일 수 있다. 또 다른 일 예로, 상기 발효된 부활초의 추출물은 비피더스균을 부활초 또는 이를 포함하는 배지에 접종하고, pH 6.5 내지 7.5, 온도 35 내지 38℃에서 혐기배양 조건을 유지하면서 24시간 내지 5일 동안 발효하여 얻어진 것일 수 있다.
상기 발효된 부활초의 추출물은 당해 분야에서 잘 알려진 방법에 의하여 발효된 부활초로부터 제조될 수 있다. 일 예로, 상기 발효된 부활초를 통상의 방법에 따라 잘게 분쇄하고, 물, 탄소수 1 내지 4개의 무수 또는 함수 저급 알코올(예로, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올 등), 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜 등의 다가 알코올, 및 클로로포름, 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, 아세톤, 벤젠, 헥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄 등의 탄화수소계 용매를 단독으로 사용하거나 2 종 이상 혼합하여 사용할 수 있다.
다른 일 예로, 상기 발효된 부활초의 추출물은 발효된 부활초의 물 및 에탄올 추출물일 수 있다. 예를 들어 상기 물 및 에탄올의 비율은 1:1 내지 1:10 부피비일 수 있으며, 일 예로 1:1 내지 1:5 부피비일 수 있다.
상기 추출 용매의 양은 이용되는 추출 용매의 종류에 따라 다양할 수 있으나, 예를 들어 발효물의 건조 중량에 대하여 1 내지 20배, 또는 5 내지 20배로 사용할 수 있다.　또한, 상기 추출은 1회 이상 실시한 것일 수 있으며, 또한 1회 이상 추출한 추출액을 혼합하고 이를 감압 농축한 것일 수 있다.　또한, 상기 발효물의 분쇄 전에 건조 과정(예로, 40 내지 70℃에서 15 내지 50시간 동안의 건조)을 거친 다음 분쇄한 후 추출한 것일 수 있다.
상기 발효된 부활초의 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 발효된 부활초의 추출물은 감압 증류 및 동결건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다. 　
또 하나의 구체예로서, 상기 조성물은 부활초 추출물을 유효성분으로 추가로 포함하는 것일 수 있다. 일 예로 상기 부활초 추출물은 부활초의 물 및 에탄올 추출물일 수 있다.
상기 발효된 부활초의 추출물, 또는 발효된 부활초의 추출물 및 부활초 추출물은 전체 조성물 총 중량 대비 0.0001 중량% 내지 30 중량%, 또는 0.005 중량% 내지 10 중량%으로 포함될 수 있다. 일 예로 0.01 중량% 내지 5 중량% 로 포함될 수 있다. 실험 결과, 함량이 0.0001 중량% 미만일 경우에는 실질적인 피부 항산화 효과와 피부 보습 효과를 기대하기 어려우며, 30 중량%를 초과할 경우에는 화장학적 효과 대비 제조 비용이 너무 상승하는 문제점이 발생할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조된 것일 수 있다. 예를 들어, 유연 화장수 또는 영양 화장수 등과 같은 화장수, 훼이셜 로션, 바디로션 등과 같은 유액, 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림, 마사지 크림 등과 같은 크림, 에센스, 세럼, 화장연고, 스프레이, 오일젤, 젤, 팩, 선 스크린, 메이크업 베이스, 액체 타입, 고체 타입 또는 스프레이 타입 등의 파운데이션, 파우더, 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일과 같은 메이크업 제거제, 클렌징 폼, 비누, 바디 워쉬 등과 같은 세정제 등의 제형을 가질 수 있다.
상기 유연화장수는 본 발명의 부활초 추출물, 발효된 부활초 추출물 또는 이의 혼합물 이외에 프로필렌글리콜, 글리세린 등의 다가 알코올 1 ~ 10 중량% 및 폴리에틸렌올레일에테르, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유 등의 계면활성제 0.05 ~ 2 중량%를 함유하도록 제조할 수 있다.
상기 영양화장수 또는 영양크림은 본 발명의 부활초 추출물, 발효된 부활초 추출물 또는 이의 혼합물 이외에 스쿠알란, 바셀린, 옥틸도데칸올 등의 오일 5 ~ 20 중량% 및 세탄올, 스테아릴알코올, 밀납 등의 왁스 3 ~ 15 중량%를 함유하도록 제조할 수 있다.
상기 마사지크림은 본 발명의 부활초 추출물, 발효된 부활초 추출물 또는 이의 혼합물 이외에 유동파라핀, 바셀린, 이소노닐이소노나노에이트 등의 오일 30 ~ 70 중량%를 함유하도록 제조할 수 있다.
상기 에센스는 본 발명의 부활초 추출물, 발효된 부활초 추출물 또는 이의 혼합물 이외에 프로필렌글리콜, 글리세린 등의 다가 알코올 3 ~ 30 중량%를 함유하도록 제조할 수 있다.
상기 팩은 본 발명의 부활초 추출물, 발효된 부활초 추출물 또는 이의 혼합물 이외에 폴리 비닐알코올 5 ~ 20 중량%를 함유하는 필 오프(peel off) 팩 또는 일반 유화형 화장료에 카올린, 탈크, 산화아연, 이산화 티탄 등의 안료가 5 ~ 30 중량% 함유된 워시 오프(wash off) 팩으로 제조할 수 있다.
또한 본 발명의 화장료 조성물은 각각의 제형에 상기 기재한 성분들 이외에 일반적으로 화장료 조성물에 배합되는 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제 또는 향료 등을 필요에 따라 적절히 배합하여 사용할 수 있다.
염증 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물
상기의 목적을 달성하기 위한 또 하나의 양태로서, 본 발명은 발효된 부활초의 추출물 및 부활초 추출물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 유효성분으로 포함하는, 염증 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 발효된 부활초 및 그의 추출물에 대한 설명은 상기한 바와 같다.
발효된 부활초의 추출물 및 부활초 추출물을 모두 포함할 경우, 각 추출물의 비율은 1:1 내지 10:1일 수 있으며, 다른 일 예로 1:1 내지 5:1으로 포함될 수 있다.
상기 염증 질환은 피부염, 알러지, 아토피를 포함하는 피부 염증 질환, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통 (fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스 관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrome), 다발성 경화증 또는 급성 및 만성 염증 질환일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
염증반응과 관련된 주요 인자로서 나이트릭옥사이드(nitric oxide, NO)와 나이트릭옥사이드 합성효소(nitric oxide synthase, NOS)가 있다. NO에 의한 산화적 스트레스로 인해 세포내의 NF-κB(Nuclear Factor Kappa B)가 활성화되고, 활성화된 NF-κB가 핵안으로 들어가서 염증반응을 일으키는 유전자 발현을 촉진하므로 염증반응이 가속화된다. 주로 NO는 대식세포와 단핵구세포에서 많이 생산되며, 대식세포는 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide, LPS)와 같은 염증성 제제에 의해 염증 관련 반응이 빠르게 유도된다. NOS에 의해 L-아르기닌(L-arginine)이 산화되어 NO가 생산되며, NOS중에서 유도성 나이트릭옥사이드 합성효소(inducible nitric oxide synthase, iNOS)는 세포내에서 NO의 과생산에 밀접한 관계가 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명자들은 발효된 부활초 추출물 또는 부활초 추출물의 산화질소(NO)의 저해 활성을 측정한 결과, LPS 처리에도 불구하고 NO 생성을 효과적으로 저해할 수 있음을 확인하였다. 특히, 부활초 추출물에 비하여 발효시킨 부활초의 추출물의 NO 저해 활성이 더 우수함을 확인하였다(실험예 8, 표 8). 따라서, 본 발명에 따른 약학 조성물은 염증 매개 물질인 NO 생성 증가에 의하여 유발되는 염증을 완화할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "예방"이란, 본 발명에 따른 약학 조성물을 개체에 투여하여 염증 질환의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "치료"란, 본 발명의 약학 조성물을 염증 질환 발병 의심 개체에 투여하여 염증 질환의 증세가 호전되도록 하거나 이롭게 되도록 하는 모든 행위를 의미할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 단일제제로도 사용할 수 있고, 공인된 염증 질환 효과를 가진다고 알려진 약물을 추가로 포함하여 복합제제로 제조하여 사용할 수 있으며, 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "약학적으로 허용 가능한 담체"란 생물체를 자극하지 않으면서, 주입되는 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제를 의미할 수 있다. 본 발명에 사용 가능한 상기 담체의 종류는 특별히 제한되지 아니하며 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되고 약학적으로 허용되는 담체라면 어느 것이든 사용할 수 있다. 상기 담체의 비제한적인 예로는, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사 용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.
또한, 필요한 경우 항산화제, 완충액 및/또는 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가하여 사용할 수 있으며, 희석제, 분산제, 계면 활성제, 결합제, 윤활제 등을 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제 등으로 제제화하여 사용할 수 있다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 약제학적으로 유효한 양의 발효된 부활초의 추출물, 부활초 추출물, 또는 이의 혼합물을 포함할 수 있다. 본 발명에서 용어, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 상기 발효된 부활초의 추출물, 부활초 추출물, 또는 이들의 혼합물의 경우, 전체 조성물 총 중량 대비 0.0001 중량% 내지 30 중량%, 0.005 중량% 내지 10 중량%, 또는 0.01 중량% 내지 5 중량%를 의미할 수 있다. 실험 결과, 함량이 0.0001 중량% 미만일 경우에는 실질적인 효과를 기대하기 어려우며, 30 중량%를 초과할 경우에는 약리 효과 대비 제조 비용이 너무 상승하는 문제점이 발생할 수 있다. 그러나 본 발명의 목적상, 특정 환자에 대한 구체적인 치료적 유효량은 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 경우에 따라 다른 제제가 사용되는지의 여부를 비롯한 구체적 조성물, 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 구체적 조성물과 함께 사용되거나 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자와 의약 분야에 잘 알려진 유사 인자에 따라 다르게 적용하는 것이 바람직하다.
본 발명의 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여할 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용을 유발하지 않으면서 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명에서 사용된 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 본 발명의 약학 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물의 투여 방식은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방식에 따를 수 있다. 상기 투여 방식의 비제한적인 예로, 조성물을 경구 투여 또는 비경구 투여 방식으로 투여할 수 있다. 본 발명에 따른 약학 조성물은 목적하는 투여 방식에 따라 다양한 제형으로 제작될 수 있다.
본 발명의 약학조성물의 투여량은 예를 들어, 본 발명의 약학 조성물을 사람을 포함하는 포유동물에 하루 동안 1 내지 20 ㎎/㎏, 보다 바람직하게는 1 내지 10㎎/㎏으로 투여할 수 있고, 본 발명의 조성물의 투여빈도는 특별히 이에 제한되지 않으나, 1일 1회 투여하거나 또는 용량을 분할하여 수회 투여할 수 있다.
상기 약학 조성물의 제형은 예를 들어 연고, 패치제, 겔, 크림 또는 분무제와 같은 피부 외용제일 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 상기 피부 외용제는 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 포함할 수 있다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 약학 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 염증 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "개체"란, 염증 질환이 발병되었거나 발병할 가능성이 있는 인간을 포함한 모든 동물을 의미할 수 있다. 상기 동물은 인간뿐만 아니라 이와 유사한 증상의 치료를 필요로 하는 소, 말, 양, 돼지, 염소, 낙타, 영양, 개, 고양이 등의 포유동물일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 상기 예방 또는 치료 방법은 구체적으로, 염증 질환이 발병하였거나 발병할 위험이 있는 개체에 상기 조성물을 약학적으로 유효한 양으로 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
본 발명에서 사용된 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 본 발명의 약학적 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다.
항산화용 약학 조성물
상기의 목적을 달성하기 위한 또 하나의 양태로서, 본 발명은 발효된 부활초의 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항산화용 약학 조성물을 제공한다.
발효된 부활초의 추출물은 상기한 것과 같다.
항산화는 세포 내 대사 또는 자외선의 영향으로 인한 산화적 스트레스에 따라 반응성이 높은 자유 라디칼 또는 활성산소종(ROS)에 의한 세포의 산화를 억제하는 것을 말하며, 자유 라디칼 또는 활성산소종을 제거하여 이로 인한 세포의 손상이 감소되는 것을 포함할 수 있다.
본 발명자들은 발효된 부활초의 추출물은 비타민 C와 비교할 때도 자유라디칼 소거능이 매우 강력하였으며, 천연 추출물인 점을 고려하였을 때, 발효되지 않은 부활초 추출물에 비해서도 항산화 효과가 우수함을 확인하였다(실시예 7, 표 7).
발효된 부활초의 추출물의 제조방법
또 하나의 양태로서, 본 발명은 버섯, 유산균 및 효모로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상으로 부활초를 발효시키는 단계; 및 상기 발효된 부활초를 물 및 에탄올을 이용하여 추출하는 단계를 포함하는, 발효된 부활초의 추출물의 제조방법을 제공한다.
상기 발효 방법 및 추출방법은 상기한 바와 같다.
본 발명에 따른 부활초 추출물, 발효된 부활초 추출물 또는 이의 혼합물은 항염증, 보습, 미백, 주름 개선, 탄력 개선, 항산화 효과가 우수하면서도 피부에 알러지 반응이나 자극을 유발하지 않아 인체에 안전하므로, 의약품 또는 화장료로 사용할 수 있다.
이하 본 발명을 하기 예에 의해 상세히 설명한다. 다만, 하기 예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 하기 예에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것은 아니다.
비교예 : 부활초 추출물의 제조
부활초[이스라엘에서 직접 구매한 부활초를 (주)래디안에서 구입] 200 g을 세말하여 분말화한 후, 여기에 증류수와 70% 에탄올이 3:7 부피비로 혼합된 추출용매를 넣어 실온(20 ~ 25℃)에서 5시간 동안 추출하고 1차 여과하였다. 그 후 여과된 추출물에서 증발과정을 통해 에탄올을 제거한 뒤 다시 원심분리와 2차 여과를 통해 침전물을 제거하였다. 마지막으로 마이크로 여과를 거쳐 부활초 추출물 23 g을 수득하였다.
실시예 : 발효된 부활초 추출물의 제조
효모균(Saccharomyces cerevisiae, (주)래디안에서 구입)을 YM 배지(broth)에 접종 한 후, 30℃의 쉐이킹 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하였다.
분쇄한 부활초 100 중량%에 정제수 59.4 중량%, 부틸렌글라이콜 40 중량%, 트레할로스 중량 0.1%에 상기 균주를 접종한 후 30℃의 발효조에서 48시간 동안 배양하였다. 그 후, 발효물을 오토클레이브로 멸균하고, 상기 비교예와 같은 방법으로 추출, 분리, 정제하였다. 한편 트레할로스의 첨가는 결과에 영향을 미치지 않는다.
실험예 1: 세포 독성 시험
발효된 부활초 추출물(실시예)과 부활초 추출물(비교예)의 안전성을 검증하기 위하여, 각각의 추출물을 V79-4세포(차이니스 햄스터, 폐 조직 섬유아세포의 연속 세포주)에 처리하고 MTT 시험법에 의하여 세포 독성 시험을 실시하였다. 대조군인 소디움라우릴설페이트(SLS)에 대해서도 같은 방법으로 세포 독성 시험을 실시하였다.
그 결과, 하기 표 1과 같이, 본 발명의 발효된 부활초 추출물은 계면활성제인 소디움라우릴설페이트(SLS)에 비하여 약 900배 낮은 세포 독성을 보여 안전성이 우수함을 확인할 수 있었다. 또한 부활초 추출물에 비해서도 세포 독성이 낮음을 확인하였다.
시료 IC50(%w/v)
실시예 5.54
비교예 4.23
소디움라우릴설페이트 (SLS) 0.006
[주] IC50(InhibitoryConcentration50):50%의 세포를 사멸시키는 농도
실험예 2: 알러지 평가(H- CLAT )
발효된 부활초 추출물이 피부에서 알러지를 유발하는지 여부를 확인하기 위한 실험으로서, H-CLAT(Human Cell Line Activation Test) 실험법을 실시하였다.
먼저, 상기 실험예 1에서 세포 생존률이 75%인 농도(CV75)를 기준으로 하여, CV75 x 1.2, CV75, CV75/1.23, CV75/1.25, 또는 10,000㎍/ml (Highest technical dose) 농도의 발효된 부활초 추출물(실시예) 또는 부활초 추출물(비교예)을 THP-1(human monocytic cell line)에 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 그 후 세포 생존률을 MTT 시험법에 의하여 확인하였으며, THP-1 세포를 형광물질(FITC)가 표지된 CD54, CD86 항체로 염색하여, 유세포 분석(Flow cytometry)으로 CD54, CD86 검출량을 확인하였다. 그 후 알러지 유발성 판정 기준에 따라 CD54 RFI(Relative fluorescence intensity)가 200 이상이거나, CD86 RFI이 150 이상일 경우 양성으로 판정하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
구분 농도 (㎍/ml) 세포생존도 (%) CD54 RFI CD86 RFI
실시예 4000 86 110 96
5000 87 103 104
8000 91 123 120
100000 89 112 103
비교예 4000 83 110 89
5000 81 120 102
8000 83 113 92
100000 82 128 103
상기 표와 같이, 알러지 유발성 판정 기준에 따라, 발효된 부활초 추출물은 세포 생존률 80% 이상의 모든 농도에서 알러지 유발가능성이 없음(음성)을 확인하였다.
실험예 3: 피부 자극성 평가
발효된 부활초 추출물의 피부에 대한 자극성을 확인하기 위하여, 건강한 성인 남, 여 각 50명을 대상으로 등 부위에 각 시료 0.2g을 24시간 첩포(patch test)한 후 핀 챔버를 제거하고 4시간 경과한 다음, 육안으로 피부 상태 변화를 판독하였다. 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.
구분 피험자수 판정결과 자극도
++ + +- -
음성 대조군
(증류수)		 50 - - 2 48 0.07
양성 대조군
(SLS 0.1%)		 50 4 3 2 41 0.30
비교예 50 - - 2 48 0.10
실시예 50 - - 3 47 0.06
[주]
- : 홍반이나 특이한 현상 없음
+- : 주위보다 약간 붉어짐
+ : 주위보다 현저히 붉어짐
++ : 주위보다 심하게 붉어지고 부풀어 오름
상기 표와 같이, 본 발명의 발효된 부활초 추출물은 음성대조군과 비슷한 정도의 낮은 피부 자극도를 나타내어 피부에 안전함을 확인하였다. 발효된 부활초의 추출물은 부활초 추출물에 비해서도 피부 자극도가 낮게 나타났다.
실험예 4: 미백효과-멜라닌 총량 감소 효과
발효된 부활초 추출물의 미백 효과를 확인하기 위하여, Lotan R. 외(Cancer Res. 40:3345-3350, 1980)에 기재된 방법에 따라 쥐의 멜라노마 세포(B-16 mouse melanoma cell)의 배양액에, 발효된 부활초 추출물(실험예)를 첨가하여 멜라닌 총량을 측정하였다. 실험 시, 먼저 쥐의 멜라노마 세포에 대하여 독성을 평가하여 독성이 없는 농도에서 미백평가를 수행하였다. 음성 대조군으로는 DMSO를, 양성 대조군으로는 알부틴(albutin)을 사용하였다.
구체적으로, 상기 물질을 100 ppm이 되도록 배지에 첨가한 후 멜라노마 세포를 3일간 배양하였다. 이후, 각 세포들을 트립신(trypsin) 처리하여 배양 용기로부터 떼어내 원심분리한 후, 수산화나트륨 용액(1N 농도) 1 ml를 가하여 멜라닌을 녹였다. 그 후 400 nm에서 분광 광도계를 이용하여 흡광도를 측정하여, 생성된 멜라닌의 양을 정량하였다. 멜라닌 생성량(abs)은 단위 세포수(1x106 cell) 당 흡광도로 나타내었으며, 저해율(%)은 음성 대조군 대비 상대적인 멜라닌 총량으로 계산하여 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.
시료 멜라닌 생성량(abs) 저해율(%)
음성 대조군(DMSO) 0.33 -
양성 대조군(알부틴) 0.23 30.3
비교예 0.17 48.48
실시예 0.12 63.63
상기 표와 같이, 발효된 부활초의 추출물은, 티로시나제에 직접 작용하여 멜라닌 생성을 억제하는 것으로 알려진 알부틴과 비교할 때 2배 이상의 멜라닌 생성 저해율을 나타내어 미백 효과가 우수하며, 부활초 추출물에 비해서도 멜라닌 생성 저해 효과가 뛰어나, 색소 침착을 억제하며 우수한 미백 효과를 나타냄을 확인하였다.
실험예 5: 제1형 콜라겐( type I collagen )의 합성 촉진 효과
주름 개선 또는 피부 탄력 개선 효과를 확인하기 위하여, 발효된 부활초의 추출물 또는 부활초 추출물을 인간 유래 섬유아세포의 배양배지에 첨가하여 세포수준에서 콜라겐 합성촉진효과를 실험하였다. 생합성된 콜라겐의 측정은 PICP EIA 키트(Procollagen Type I C-Peptide Enzyme ImmunoAssay KIT, Takara, Cat No. MK10)를 이용하여 정량하였다.
먼저, 인간 유래 섬유아세포(Human normal fibroblast)를 DMEM 배지에서 5 % 농도의 CO2 배양기에 37℃로 24시간 동안 배양하였다. 상기 배양 배지에 발효된 부활초의 추출물 또는 부활초 추출물 50ppm을 각각 첨가하여 대조군(무 처리)과 함께 48 시간 동안 배양하였다. 양성 대조군으로는 비타민 C를 사용하였다.
그 후 배양액을 취득하고 PICP EIA Kit를 이용하여 각각의 농도에 따라 콜라겐 생합성 정도를 정량한 후, 분광광도계를 이용하여 450 nm에서 측정하였다. 콜라겐 생성 증가율은 하기 수학식과 같이 대조군(무처리)에 대한 상대적인 콜라겐 생성량의 비율로 계산하여 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.
[수학식 1]
콜라겐 생합성 증가율(%) = (시험군 콜라겐양 / 대조군 콜라겐 양) x 100
구분 시료 농도 콜라겐 생합성 증가율(%)
대조군(무처리) 50ppm -
비타민 C 50ppm 8
비교예 50ppm 8
실시예 50ppm 10
상기 표와 같이, 발효된 부활초의 추출물은 콜라겐 합성에 관여하는 비타민 C 에 비해서도 우수한 콜라겐 생합성 능력을 나타내며, 부활초 추출물에 비해서도 콜라겐 합성 촉진 효과가 우수함을 확인하였다.
실험예 6: 콜라게나아제 ( Collagenase ) 저해 효과
콜라겐(Collagen)을 분해하는 효소인 콜라게나아제의 활성 저해 효과를 확인하기 위하여, 콜라게나아제의 기질인 합성한 N-(3-[2-Furyl]acryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala를 완충용액(50mM Tricine, 10mM CaCl2·H2O, 400mM NaCl(pH 7.5))에 10mM의 농도로 녹인 후 최종적으로 75μM이 되도록 희석하였다. 쥐의 이자에서 유래한 콜라게나아제를 4℃의 차가운 3차 증류수에 1 unit/ml 농도로 녹인 후 최종적으로 0.05unit/ml이 되도록 상기 완충용액을 이용하여 희석하고 발효된 부활초의 추출물을 최종농도 50ppm이 되도록 첨가하였다. 양성 대조군으로는 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)를, 음성 대조군으로는 DMSO를 같은 농도로 사용하였다.
반응은 96-웰플레이트에서 진행하였으며, 상온에서 10분간 반응시켰다. 분광 광도계를 이용하여 1분 간격으로 345 nm에서 흡광도를 측정하여 시간 대비 흡광도의 최대 기울기를 구하여 효소의 활성으로 정하였다. 콜라게나아제 저해율은 다음 수학식 2와 같이 계산하여 표 6에 나타내었다.
[수학식 2]
Figure pat00001
시료 효소 활성도 저해율(%)
대조군 -0.7 -
양성대조군 -0.6 14.29
비교예 -0.4 42.86
실시예 -0.3 57.14
상기 표와 같이, 발효된 부활초의 추출물은 콜라게나아제 저해 효과가 알려진 EGCG에 비하여 콜라겐을 분해하는 효소인 콜라게나아제의 활성을 약 4배 더 많이 저해하며, 부활초 추출물에 비해서도 1.3배 더 많이 저해함을 확인할 수 있었다. 이와 같이 실험예 5 및 6을 통하여, 본 발명의 발효된 부활초의 추출물의 피부 주름 및 피부 탄력에 대한 개선 효과가 부활초 추출물에 비하여 향상되었음을 확인하였다.
실험예 7: 자유라디칼 소거능 확인
발효된 부활초 추출물에 대한 자유라디칼 소거능을 1,1-디페닐-2-피크릴히드라질(DPPH) 방법으로 측정하였다(Blois, Nature 181, 1190, 1958). DPPH는 비교적 안정한 자유라디칼로서 라디칼 상태로 존재 시 517㎚에서 최대 흡광을 보이며 라디칼이 소거되면 흡광성을 잃는다. DPPH는 시그마(Sigma)사의 것을 사용하였으며, 0.15 mM의 농도로 메틸 알코올에 녹여 사용하였다.
먼저, 발효된 부활초 추출물 또는 양성 대조군인 비타민 C를 96-웰 플레이트의 각각의 웰에 100μl씩 넣었다. 여기에 DPPH 용액을 100μl씩 첨가한 다음 상온에서 30분간 방치하고 마이크로플레이트 리더(BioTek EL-340)를 이용하여 517㎚에서의 흡광도를 측정하였다.
시료를 처리한 것의 흡광도가 대조군의 흡광도의 절반이 될 때의 추출물의 농도를 IC50으로 표시한 결과를 하기 표 7에 나타내었다.
시료 IC50(%w/v)
대조군 0.0025
양성대조군 (비타민 C) 농도 0.0005
비교예 농도 0.0007
실시예 농도 0.0006
상기 표와 같이, 발효된 부활초의 추출물은 비타민 C와 비교할 때도 자유라디칼 소거능이 매우 강력하였으며, 천연 추출물인 점을 고려하였을 때, 발효되지 않은 부활초 추출물에 비해서도 항산화 효과가 우수함을 확인하였다.
실험예 8: 항염 효능 시험
발효된 부활초 추출물의 항염 효능을 확인하기 위하여, 산화질소(NO)의 저해 활성을 이산화질소(NO2) 축적량에 의하여 측정하였다.
먼저, 12 웰 플레이트에 RAW 264.7 세포를 1x106 세포수/웰 이 되도록 1 ml씩 분주하고 24시간 배양하였다. 이후 과량의 NO 생성을 유도하는 LPS(lipopolysaccharide)가 첨가된 배지와 첨가되지 않은 배지로 각각 교체하여 1시간 배양하고, 발효된 부활초 추출물(실시예) 또는 부활초 추출물(비교예)을 처리한 후 24시간 배양하였다.
100μl의 상층액을 각 웰에서 분리한 후, 빈 웰에서 100μl의 그리스(Griess) 용액(증류수에 용해된 0.1% NED(나프틸에틸렌 다이아민 다하이드로클로라이드)와 5% H3PO4에 용해된 1% sulfanilamide의 1:1 혼합액)을 처리하고 암실에서 반응시켰다. 그 후, 분자 장치 마이크로플레이트 리더(Molecular Device microplate reader, Sunnyvale, CA, US)를 이용하여 550nm에서 흡광도를 측정하여, 배지에 축적된 이산화질소의 양을 측정하였다.
시료 NO 생성(μM)
대조군 1.5
LPS 처리(양성대조군) 9.8
LPS 처리 + 비교예 8
LPS 처리 + 실시예 7.5
그 결과, 상기 표 8과 같이 LPS 처리 시 대조군(무처리)에 비하여 NO 생성량이 증가하였으나, 발효된 부활초의 추출물을 처리할 경우, LPS 처리에도 불구하고 NO 생성을 효과적으로 저해할 수 있음을 확인하였다. 특히, 부활초 추출물을 처리한 비교예에 비하여, 실험예에서 NO 저해 활성이 더 우수함을 확인하였다. 따라서, 발효된 부활초의 추출물은 염증 매개 물질인 NO 생성 증가에 의하여 유발되는 염증을 완화할 수 있다.
제조예 1, 2, 비교 제조예 1, 2: 에센스의 제조
상기 실험예의 추출물, 또는 비교예와 실시예의 추출물을 1:1의 중량비율로 혼합한 혼합물을 포함하는 에센스를 제조예 1, 2로 제조하였다. 또한, 비교예(부활초 추출물)를 포함하는 에센스를 비교 제조예 1로, 실험예 또는 비교예의 추출물을 포함하지 않는 에센스를 비교 제조예 2로 제조하였다. 상세한 조성(중량%)은 하기 표 9에 나타냈다.
구분 (중량%) 제조예 1 제조예 2 비교제조예 1 비교제조예 2
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량
트리에탄올아민 0.25 0.25 0.25 0.25
카르복시비닐폴리머1 0.22 0.22 0.22 0.22
글리세린 4 4 4 4
프로필렌글리콜 0.2 0.2 0.2 0.2
파라옥시안식향산에스테르 0.2 0.2 0.2 0.2
비교예 - - 7 -
실시예 7 - - -
비교예,2의 1:1 혼합물 - 7 - -
밀납 0.5 0.5 0.5 0.5
세토스테아릴알콜 1 1 1 1
글리세릴모노스테아레이트 1 1 1 1
자기유화형
모노스테아린산		 1 1 1 1
모노스테아린산소르비탄2 0.5 0.5 0.5 0.5
모노스테아린산폴리에틸렌글리콜 8 8 8 8
파라옥시안식향산프로필 0.1 0.1 0.1 0.1
디메틸실록산 0.3 0.3 0.3 0.3
이소세틸옥타노에이트3 3 3 3 3
스쿠알란 5 5 5 5
향료 0.05 0.05 0.05 0.05
총 합 100 100 100 100
[주]
1. 카르복시비닐폴리머 -미국 비. 에프. 굿리치 (B.F.Goodrich) 사의 카보폴 941 (Carbopol 941) 1 중량 % 수용액
2. 모노스테아린산소르비탄 -영국 아이시아이 (ICI) 사이 아라셀 60(Arlacel 60)
3. 이소세틸옥타노에이트 -일본 니혼 고쿄 알코올 (Nihon KoKyu Alcohol) 사의 아이시이에이치 (ICEH)
실험예 9: 수분 보유능 평가
상기 제조된 에센스의 피부 보습력을 평가하기 위하여, 각 에센스를 각각 피부에 정량 도포한 후 각질층의 수분 보유량을 측정하고 이를 평가하는 방법을 사용하였다. 측정 기기로는 피부수분함량 측정기(스킨 설피스 하이그로미터, skin surface hygrometer, 모델명: SKICON-200, 일본 IBS사 제품)를 이용하였다.
구체적으로는, 25℃, 상대습도 45%의 항온 항습실에서 각 에센스를 각각 20명의 피시험자의 팔의 안쪽에 일정량(2 mg/㎠) 도포한 후 잘 문지르고, 평가 전의 수분 보유능을 기준으로 1시간과 3시간 후의 수분 증가율(%)을 측정하여 보습 효과를 평가하였다. 얻어진 결과를 하기 표 10에 나타내었다.
구분 수분 증가율 (%)
제조예 1 제조예 2 비교 제조예 1 비교 제조예 2
도포 전 0 0 0 0
도포 1시간 후 57 51 45 23
도포 3시간 후 39 31 26 15
상기 표와 같이, 본 발명의 발효된 부활초의 추출물을 포함하는 제조예 1의 에센스는, 추출물을 포함하지 않는 비교 제조예 2뿐만 아니라, 발효되지 않은 부활초 추출물을 포함한 비교 제조예 1의 에센스에 비해서도 도포 1시간 후 및 3시간 후에 수분 보유 증가율이 향상되어 우수한 보습 효과를 나타냄을 확인하였다.
제조예 3, 4, 비교 제조예 3, 4: 수중유형 유화물 제조
상기 실험예의 추출물, 또는 비교예와 실시예의 추출물을 1:1의 중량비율로 혼합한 혼합물을 포함하는 수중유형 유화물을 제조예 3, 4로 제조하였다. 또한, 비교예(부활초 추출물)를 포함하는 수중유형 유화물을 비교 제조예 1로, 실험예 또는 비교예의 추출물을 포함하지 않는 수중유형 유화물을 비교 제조예 2로 제조하였다. 상세한 조성(중량%)은 하기 표 11에 나타냈다.
구분 (중량 %) 제조예 3 제조예 4 비교 제조예 3 비교 제조예 4
수상 정제수 잔량 잔량 잔량 잔량
트리에탄올아민 0.2 0.2 0.2 0.2
카르복시비닐폴리머1 15 15 15 15
글리세린 5 5 5 5
프로필렌글리콜 5 5 5 5
파라옥시안식향산에스테르 0.2 0.2 0.2 0.2
실시예 - - 0.1 -
실시예 2 0.1 - - -
실시예 1,2의 1:1 혼합물 - 0.1 - -
세토스테아릴알콜 1 1 1 1
글리세릴모노스테아레이트 1 1 1 1
모노스테아린산소르비탄2 1 1 1 1
POE(20) 소르비탄모노스테아레이트 1.5 1.5 1.5 1.5
파라옥시안식향산프로필 0.1 0.1 0.1 0.1
이소세틸미리스테이트 5 5 5 5
이소세틸옥타노에이트3 5 5 5 5
스쿠알란 5 5 5 5
향료 0.05 0.05 0.05 0.05
100 100 100 100
이소세틸옥타노에이트3 5 5 5 5
스쿠알란 5 5 5 5
향료 0.05 0.05 0.05 0.05
총합 100 100 100 100
[주]
1. 카르복시비닐폴리머 -미국 비. 에프. 굿리치 (B.F.Goodrich) 사의 카보폴 941 (Carbopol 941) 1 중량 % 수용액
2. 모노스테아린산소르비탄 -영국 아이시아이 (ICI) 사이 아라셀 60(Arlacel 60)
3. 이소세틸옥타노에이트 -일본 니혼 고쿄 알코올 (Nihon KoKyu Alcohol) 사의 아이시이에이치 (ICEH)
실험예 10: 주름 개선 효과
상기 제조된 수중유형 유화물의 주름개선 효과를 건강한 35 ~ 50 세의 여성을 대상으로 하여 다음과 같은 방법으로 측정하였다.
35 ~ 50 세의 여성 80 명을 10 명씩 8 개의 군으로 나눈 후, 7 개의 군은 제조예 3, 4, 또는 비교 제조예 3의 수중유형 유화물을 안면부에 1 일 1 회씩 3 개월간 도포하도록 하였고, 나머지 1개의 군은 비교 제조예 4의 수중유형 유화물을 안면부에 1 일 1 회씩 3 개월간 도포하도록 하였다.
3 개월 후 주름의 개선 정도를 피시험자의 설문 및 주름의 영상분석을 통해 평가하였다. 피시험자의 설문은 주름 개선 및 탄력 증진에 관하여 사용 전과 비교하여 개선 없음, 약간의 개선, 상당한 개선의 3 단계로 판정하였으며, 그 결과를 하기 표 12에 나타내었다.
구분 개선 없음 약간의 개선 상당한 개선
제조예 3 1 5 4
제조예 4 1 7 2
비교 제조예 3 1 6 3
비교 제조예 4 7 3 0
상기 표와 같이, 본 발명의 발효된 부활초의 추출물을 포함하는 제조예 3의 에센스는, 추출물을 포함하지 않는 비교 제조예 4 뿐만 아니라, 발효되지 않은 부활초 추출물을 포함한 비교 제조예 3의 에센스에 비해서도 주름 개선 효과가 우수함을 확인할 수 있었다.
제제예 1: 화장료의 제조
1. 화장수의 제조
부활초 추출물, 발효된 부활초 추출물 또는 이의 혼합물 0.1 중량%, 글리세린 5.0 중량%, 디프로필렌글리콜 3.0 중량%, 히알루론산 0.5 중량%, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유 0.1 중량%, 폴리에틸렌 올레일에테르 0.1 중량%, 에탄올 5.0 중량%, 방부제 0.15 중량%, 색소 0.05 중량％, 향료 0.05 중량％ 및 잔량의 정제수를 혼합(전체 조성 100 중량%)하여 화장수를 제조하였다.
2. 에센스의 제조
부활초 추출물, 발효된 부활초 추출물 또는 이의 혼합물 7.0 중량%, 세토스테아릴알코올 1.0 중량%, 자기유화형 모노스테아린산 1.0 중량%, 밀납 0.5 중량%, 스쿠알란 5.0 중량%, 이소세틸옥타노에이트 3.0 중량%, 디메틸실록산 0.3 중량%, 모노스테아린산소르비탄 0.5 중량%, 모노스테아린산폴리에틸렌글리콜 8.0 중량%, 글리세린 4.0 중량%, 프로필렌글리콜 0.2 중량%, 카르복시폴리머 0.22 중량%, 트리에탄올아민 0.25 중량%, 방부제 0.05 중량％, 색소 0.05 중량％, 향료 0.05 중량％ 및 잔량의 정제수를 혼합(전체 조성 100 중량%)하여 에센스를 제조하였다.
3. 로션의 제조
부활초 추출물, 발효된 부활초 추출물 또는 이의 혼합물 5.0 중량%, 세토스테아릴알코올 0.8 중량%, 자기유화형 모노스테아린산 1.0 중량%, 밀납 0.5 중량%, 스테아린산 0.5 중량%, 유동파라핀 7.0 중량%, 스쿠알란 5.0 중량%, 마카데미아오일 3.0 중량%, 이소세틸옥타노에이트 2.0 중량%, 디메틸실록산 0.3 중량%, 모노스테아린산소르비탄 0.5 중량%, 모노스테아린산폴리에틸렌글리콜 1.2 중량%, 글리세린 4.0 중량%, 프로필렌글리콜 4.0 중량%, 베타인 4.0 중량%, 카르복시폴리모 0.12 중량%, 트리에탄올아민 0.15 중량%, 방부제 0.25 중량%, 색소0.05 중량％, 향료 0.05 중량％ 및 잔량의 정제수를 혼합(전체 조성 100 중량%)하여 로션을 제조하였다.
4. 크림의 제조
부활초 추출물, 발효된 부활초 추출물 또는 이의 혼합물 7.0 중량%, 세토스테아릴알코올 3.0 중량%, 자기유화형 모노스테아린산 0.5 중량%, 친유형 모노스테아린산 1.5 중량%, 밀납 0.5 중량%, 유동파라핀 8.0 중량%, 스쿠알란 7.0 중량%, 이소세틸옥타노에이트 4.0 중량%, 정제 호호바유 4.0 중량%, 디메틸실록산 0.3 중량%, 모노스테아린산소르비탄 1.0 중량%, 모노스테아린산폴리에틸렌글리콜 1.2 중량%, 글리세린 6.0 중량%, 프로필렌글리콜 4.0 중량%, 베타인 4.0 중량%, 잔탄검 0.06 중량%, 트리에탄올아민 0.10 중량%, 방부제 0.25 중량%, 향료 0.05 중량％, 색소 0.05 중량％ 및 잔량의 정제수를 혼합(전체 조성 100 중량%)하여 크림을 제조하였다.
제제예 2: 약학 조성물의 제조
1. 겔의 제조
부활초 추출물, 부활초 추출물, 발효된 부활초 추출물 또는 이의 혼합물 1.0 중량%, 글리세린 4.0 중량%, 프로필렌글리콜 4.0 중량%, 에탄올 10 중량%, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유 0.1 중량%, 카르복시폴리머 0.30 중량%, 트리에탄올아민 0.30 중량%, 방부제 0.05 중량％, 색소 0.05 중량％, 향료 0.05 중량％, 잔량의 정제수를 혼합(전체 조성 100 중량%)하여 젤을 제조하였다.
2. 연고의 제조
부활초 추출물, 부활초 추출물, 발효된 부활초 추출물 또는 이의 혼합물 0.5 중량％, 베타-1,3-글루칸 10.0 중량%, 밀납 10.0 중량%, 폴리솔베이트60 5.0 중량%, 피이지 60 경화피마자유 2.0 중량%, 솔비탄세스퀴올레이트 0.5 중량%, 바셀린 5.0 중량%, 유동파라핀 10.0 중량%, 스쿠알란 5.0 중량%, 쉐어버터 3.0 중량%, 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0 중량%, 글리세린 10.0 중량%, 프로필렌글리콜 10.2 중량%, 트리에탄올아민 0.2 중량%, 방부제 0.05 중량％, 색소 0.05 중량％, 향료 0.05 중량％, 적량의 정제수를 혼합(전체 조성 100 중량%)하여 연고를 제조하였다.
3. 국소 투여용 약제(패치제)의 제조
부활초 추출물, 발효된 부활초 추출물 또는 이의 혼합물 0.5 중량%, 베타-1,3-글루칸 3.0 중량%, 헥실렌글리콜 20.0 중량%, 디에틸아민 0.7 중량%, 폴리아크릴산(Carbopol 934P) 1.0 중량%, 아황산나트륨 0.1 중량%, 폴리옥시에틸렌라우릴에테르(E.O=9) 1.0 중량%, 폴리히드록시에틸렌세틸스테아릴 에테르(Cetomacrogol 1000) 1.0 중량%, 점성의 파라핀 오일 2.5 중량%, 카프릴산에스테르/카프르산에스테르(Cetiol LC) 2.5 중량%, 폴리에틸렌글리콜400 3.0 중량%, 잔량의 탈이온수를 혼합(전체 조성 100 중량%)하여 패치제를 제조하였다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (11)

  1. 발효된 부활초의 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 미백, 피부 주름 예방 또는 개선, 피부 탄력 개선, 또는 항산화용 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 부활초 추출물을 유효성분으로 추가로 포함하는 것인, 화장료 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 발효된 부활초의 추출물은 버섯, 유산균 및 효모로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상에 의하여 발효된 부활초의 추출물인 것인, 화장료 조성물.
  4. 제3항에 있어서
    상기 효모는 사카로마이시스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)인 것인, 화장료 조성물.
  5. 제3항에 있어서,
    상기 발효는 10℃ 내지 35℃ 에서 24시간 내지 5일 동안 실시되는 것인, 화장료 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 발효된 부활초의 추출물은 발효된 부활초의 물 및 에탄올 추출물인 것인, 화장료 조성물.
  7. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 유효성분은 전체 조성물 총 중량 대비 0.0001 중량% 내지 30 중량% 로 포함되는 것인, 화장료 조성물.
  8. 발효된 부활초의 추출물 및 부활초 추출물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 유효성분으로 포함하는, 염증 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 발효된 부활초의 추출물은 버섯, 유산균 및 효모로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상에 의하여 발효된 부활초의 추출물인 것인, 염증 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  10. 제8항에 있어서,
    상기 조성물은 피부외용제인 것인, 염증 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  11. 발효된 부활초의 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항산화용 약학 조성물.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN109260116A (zh) * 2018-11-22 2019-01-25 武汉跃莱健康产业有限公司 一种含有植物提取物的至肽肌底液及其生产工艺
KR101998067B1 (ko) * 2019-03-29 2019-09-27 (주)지에프씨생명과학 비피도박테리움 속 gfc-b09 균주 및 이를 이용하여 제조된 발효물
CN111182906A (zh) * 2017-08-07 2020-05-19 玫琳凯有限公司 处理红斑或皮肤炎症的局部皮肤用组合物

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