KR20150096800A - 어류 부화액으로부터의 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피부에 대한 다양한 의학적 및 미용적 적용에서, 특히 동물의 피부 장애 또는 병태를 치료 또는 예방하기 위해 피부 보습화를 위한 및/또는 피부 각질층의 박피를 위한, 폴리펩타이드 또는 이의 일부를 포함하는 어류 부화액으로부터 얻거나 또는 얻을 수 있는 약제학적 또는 화장료 조성물 및 상기 조성물의 용도에 관한 것이다.

Description

어류 부화액으로부터의 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION FROM FISH HATCHING FLUID}

본 발명은 어류 부화액(fish hatching fluid)으로부터 유래될 수 있는 폴리펩타이드 및/또는 폴리펩타이드의 일부를 포함하는 조성물의 생성 방법, 및 피부에 대한 다양한 적용에서 그의 용도에 관한 것이다. 특히, 상기 폴리펩타이드 및/또는 폴리펩타이드의 일부를 포함하는 조성물은 다양한 의학적 및 미용적 피부 장애 또는 병태를 치료하는데 유용하다.

피부는 신체의 연약한 기관 중 하나이다. 좀처럼 생명을 위협하지 않음에도 불구하고, 피부 장애 또는 병태는 불편할 수 있으며, 만성 장애를 야기할 수 있다. 추가로, 피부는 매우 가시적이기 때문에, 피부 장애 및 병태는 정신적 스트레스를 야기할 수 있다. 따라서 피부 병태 및 장애의 효과적인 치료에 대한 지속적인 필요가 있다.

피부는 사람 체중의 약 12 내지 16%를 차지하는 신체의 가장 큰 기관을 형성한다. 이는 사람의 신체 외부 세계와 신체 내부의 통제된 환경 사이의 장벽으로서 그리고 영향의 조절로서 다수의 생명 유지와 관련된 역할을 수행한다.

피부는 3층, 즉, 표피, 진피 및 피하 조직으로 이루어진다. 표피는 피부의 가장 위의 상피층이다. 이는 물리적 장벽으로서 작용하며, 신체로부터 물의 손실을 방지하고, 물질 및 유기체의 신체 내로의 유입을 방지한다. 그의 두께는 신체 부위에 따라 다르다.

표피는 층화 편평상피로 이루어지며, 즉, 편평화된 세포의 층으로 이루어진다. 피부, 모발 및 손발톱은 케라틴화되어 있는데, 이는 그들이 케라틴으로 불리는 단백질로 만들어진 죽은, 경화된 소수성 표면을 가진다는 것을 의미한다. 표피는 케라틴세포와 결합된 세포밖 지질의 함량에 기인하여, 특히 표피의 중간층(투명층)에서 불침투성으로 만들어진다. (예를 들어, 식도, 구강 인강, 생식기 및 기타의) 점막은 주로 비케라틴화되어 있으며, 촉촉하다. 표피는 3가지 주된 유형의 세포, 즉, 케라틴세포(피부 세포), 멜라닌세포(색소 생성 세포) 및 랑게르한스 세포(면역 세포)를 가진다. 메르켈(Merkel) 세포는 제4의 덜 우세한 표피 세포이다.

케라틴세포는 그들이 바깥으로 이동함에 따라 케라틴의 축적에 따라 성숙하고 분화된다. 그들은 결국 줄어들거나 없어진다. 그들은 4 또는 5개의 별개의 층을 형성하는데, 가장 피상적인 층으로부터 가장 깊은 층까지 (i) 핵이 없는, 죽고, 완전히 마른 경화 세포를 지니는 각질(각질층), (ii) 호염기성 과립을 함유하고 얇은 투명층에 의해 각질층으로부터 표면상으로 분리된 세포를 지니는 과립(과립층), (iii) 유극층(뽀족하거나, 가시가 있는 또는 가시세포층)(이때 세포는 그들이 상부로 이동됨에 따라 점점 더 편평하게 됨) (iv) 원주(긴) 재생성 세포를 지니는 배아층(기저층)이다.

표피 바로 밑은 표피와 진피 간에 놓인 전문화된 구조인 기저막이다.

진피는 피부의 섬유성 결합조직 또는 지지층이다. 주된 섬유는 콜라겐 섬유 및 섞어 짜인(interwoven) 엘라스틴이다.

피하 조직은 진피와 표피 바로 밑의 지방층이다. 이는 또한 피하 조직, 진피하 또는 피하지방층으로 불린다. 피하 조직은 주로 지방 세포(함지방세포), 신경 및 혈관으로 이루어진다.

새로운 상피 피부 세포는 피부의 더 하부 층인 과립층에서 생성된다. 시간에 따라, 세포는 피부의 표면으로 이동하고, 더 산성이 된다. 그들의 30일의 여행 동안, 그들은 사멸되고 케라틴으로 포화된다. 케라틴 및 결합된 지질은 그들이 외부 구성요소로부터 피부를 보호하기 때문에 중요하다.

질환, 손상, 환경적 인자, 연령, 호르몬, 수준, 의약, 외부로 적용 또는 섭취된 물질, 유전적 병태 또는 다양한 다른 인자는 불일치 또는 이상증을 초래하는 피부의 이상증적 기능화를 야기할 수 있다. 일부 이들 불일치 또는 이상증은 사실상 순전히 미용적, 예를 들어 건성 피부, 주름 또는 변형된 색소형성일 수 있거나, 더 중증으로 통증 또는 불편함, 예를 들어 습진 및 건선을 야기할 수 있다.

건성 피부는 가장 흔한 피부 병태 및 이상증이다. 특정 개체가 건성 피부의 여지가 더 많음에도 불구하고, 상기 병태는 연령, 성별 또는 피부 유형과 관계없이 누군가에게 영향을 미칠 수 있다.

피부의 외부층(투명층을 지니는 각질층)에 물이 없을 때 건성 피부가 생긴다. 이 층이 제대로 보습될 때, 이는 피부를 통한 수분 손실을 최소화하며, 자극물, 알레르겐 및 세균이 들어가지 않게 한다. 그러나, 각질층이 건조될 때, 그의 보호적 기능은 감소된다. 이는 수분 손실을 더 크게 하며, 피부가 환경 인자에 상처 받기 쉽게 한다.

정상 조건 하에서, 각질층은 10% 내지 30%의 수분 함량을 가진다. 이 수분은 피부에 그의 부드럽고, 매끈하며, 유연한 질감을 전한다. 물은 대기, 피부의 기저층 및 땀으로부터 생긴다. 피부샘에 의해 생성되는 오일 및 피부 세포에 의해 생성된 지방 물질은 천연 보습제로서 작용하여 각질층이 수 중에서 밀봉되게 한다.

신체는 증발에 의해 피부 표면으로부터 지속적으로 수분을 손실한다. 정상 조건 하에서, 손실 속도는 느리며, 물은 적절히 대체된다. 건성 피부의 특징적 징후 및 증상은 수분 손실이 물 대체를 초과할 때 생기며, 각질층의 수분 함량은 10% 미만으로 떨어진다.

건성 피부를 개선 또는 근절하는 보습제가 고도로 바람직하다. 다수의 보습제가 당업계에 공지되어 있지만, 효과적으로 더 순한 천연 생성물에 대한 필요가 남아있다.

다른 흔한 피부 이상증 또는 병태는 과량의 피부 각질층이다. 이는 각질층이 없어지는 것의 부전으로부터 또는 각질층 내 과량의 케라틴 침착을 통해 초래될 수 있다. 전자는 피부 짓무름의 자연적 과정이 불균일하게 될 때 생기며, 피부에 건성의 거친 특징을 부여한다. 양성 과증식성 장애는 표피박리 각화과다증(또는 균열이 생긴 피부) 및 모공 각화증을 포함한다. 한 가지 흔한 양성 과증식성 병태는 흉터 주변의 말초 비대 및/또는 켈로이드 형성이다. 다른 과증식성 병태는 티눈, 굳은살, 과각화 사마귀(특히 보통 사마귀), 비늘증 및 수장족저 각피증이다.

현재의 치료는 박피(exfoliation) 또는 극단적 경우에 수술을 수반한다. 과각화증은 보통 각질층을 연화시키고 비후화된 피부(thickened skin)를 제거함으로써 치료된다.

박피는 또한 손상된 표피 세포, 예를 들어 색소형성 장애를 나타내는 표피로부터의 표피 세포, 예를 들어 기미를 제거하기 위해 사용될 수 있다.

박피는 표피의 외부층을 제거하여 아래의 더 새로운 피부 세포를 드러낸다. 박피는 물리적 수단에 의해(즉, 피부의 찰과상) 또는 화학적 수단에 의해 달성될 수 있다. 화학적 박피제는 살리실산, 글라이콜산, 과일효소, 시트르산 또는 말산을 함유하는 스크럽을 포함하고, 피부과 전문의에 의해 고농도로 또는 처방전 없이 살 수 있는 제품에서 저 농도로 적용될 수 있다. 화학적 박피는 알파 하이드록시산(AHA) 또는 베타 하이드록시산(BHA)을 함유하는 생성물의 사용, 또는 세포 접합에서 함께 세포를 보유하는 아교 유사 물질을 느슨하게 하여 그들을 늦추게 하는 작용을 하는 효소의 사용을 수반할 수 있다. 이 유형의 박피는 여드름 치료 중인 사람들에게 권고된다.

박피에 대한 가장 큰 단점은 그것을 달성하기 위해 사용되는 일부 생성물 및 방법의 높은 가격이다. 박피는 피부에 일부 초기 발적을 야기할 것이다. 화학적 박피의 마지막 근처에서, 피부 표면 상에서 색이 밝은 백색 내지 회색으로 변하면서 피부는 탈색될 것이다. 따라서 피부에 대해 더 순한 더 효과적인 방법이 더 바람직하다.

따라서 피부를 보습화하는데 및/또는 피부 각질의 박피에 적합한 치료에 대한 필요가 남아있다.

어류 부화액에서 찾은 특정 폴리펩타이드 및 펩타이드(예를 들어, 폴리펩타이드의 일부)는 놀랍게도 이제 현저하게 효과적인 보습제 및 박피제가 된다는 것을 발견하였다. 난생 척추동물 유기체, 예를 들어 어류, 양서류, 조류 및 파충류로부터의 배아의 부화는 알 껍질(eggshell)의 단백질성 부분을 부분적으로 또는 완전히 분해할 수 있는 전형적으로 부화 효소로서 알려진 다양한 효소에 의해 용이하게 된다. 모든 척추동물의 난모세포는 다양한 폴리펩타이드의 가교에 의해 구성된 난황 외피, 알 껍질 또는 장막(본 명세서에서 상호호환적으로 사용됨)으로서 공지된 특징적 세포밖 외피를 가진다. 상이한 특이도를 지니는 프로테아제는 알 껍질을 연화, 침식 및/또는 붕괴(즉, 분해)하고 배아의 방출을 용이하게 하기 위해 장막 상에서 작용한다. 따라서, 부화 과정 동안 알로부터 방출된 유체 및/또는 배아 부화 유체(즉, 부화액)는 다수의 폴리펩타이드 및 폴리펩타이드의 일부, 즉, 분해 산물을 포함한다.

본 발명자들은 어류 부화 효소 및 알 껍질(특히 상기 알 껍질 폴리펩타이드의 부분 또는 단편)의 분해로부터 생성된 알 껍질 폴리펩타이드의 특정 조성물이 피부 습윤화에 및/또는 피부 각질의 박피에 특히 적합하다는 것을 결정하였다.

배아의 부화는 소위 부화 효소에 의해 적어도 부분적으로 달성되거나 또는 용이하게 된다. 예를 들어, 어류 코리오라이신은 전형적으로 부화액 중에서 발견된 메탈로프로테이나제이다. 코리오라이신은 일반적으로 2가지 형태, 즉, 고 코리오라이신 효소(코리오라이신 H, HCE) 및 저 코리오라이신 효소(코리오라이신 L, LCE)에서 발견되는데, 이들은 일부 구조적 및 촉매적 특징이 유사하고 아스타신 패밀리에 속하지만 현저하게 상이한 기질 선호도를 지닌다. 다른 촉매적 활성을 지니는 부화 효소, 예를 들어 세린 프로테아제가 또한 동정되고 특성규명되었다.

이론에 의해 구속되지 않고, 예는 메탈로프로테이나제와 세린 프로테아제 둘 다의 부화 효소와 연어과(Salmonidae) 부화액으로부터의 알 껍질 단백질의 부분을 포함하는 조성물은 피부의 보습화 및/또는 피부 각질층의 박피를 할 수 있다는 것을 입증한다.

다른 어류로부터의 부화액은 연어과로부터의 부화액에서 발견된 폴리펩타이드와 기능적으로 동등한 폴리펩타이드를 함유한다.

본 명세서에 정의된 조성물에서 부화 효소와 폴리펩타이드 분해 산물(예를 들어, 알 껍질 폴리펩타이드 및 상기 폴리펩타이드의 일부)의 조합은 피부의 진피 및 표피에 존재하는 상이한 유형의 단백질과 상호작용할 수 있는 것으로 생각된다. 폴리펩타이드와 폴리펩타이드의 일부의 독특한 조합은 상승적으로 작용을 할 수 있으며, 이들 상호작용은 다양한 피부 장애 또는 병태의 치료에서 조성물의 효과를 초래할 수 있는 것으로 믿어진다.

따라서, 가장 넓게, 본 발명은 본 명세서에서 이후에 기재되는 방법에 의해 어류 부화액으로부터 유래될 수 있는 조성물을 제공하는 것을 알 수 있다. 상기 조성물은 메탈로프로테이나제, 세린 프로테아제 및 하나 이상의 알 껍질 폴리펩타이드 및/또는 상기 폴리펩타이드의 부분을 포함한다. 특히, 조성물은 본 명세서에서 이후에 기재되는 바와 같이 피부를 보습화 및/또는 박피함으로써 피부의 다양한 이상증, 장애 또는 병태에서 또는 이들에 대한 방법에서 사용하기 위한 것이다. 다시 말해서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물은 건성 피부, 각질이 바람직하게는, 예를 들어 과각화증 병태에서보다 더 두꺼운 피부, 또는 표피에서 바람직하지 않은 색소형성을 지니는 피부, 예를 들어 기미, 검버섯, 주근깨 또는 갈색무늬와 같은 병태 또는 장애의 치료에서, 또는 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한 것이다. 특히 바람직한 양태에서, 본 발명은 정상이지만 건성인 피부 또는 비후화된 피부(예컨대, 굳은살, 티눈 또는 과각화 사마귀)의 미용적 치료 또는 색소형성 장애, 예컨대 기미의 미용적 치료에서 또는 치료를 위한 방법에서 사용하기 위해 본 명세서에 기재된 바와 같은 부화액으로부터 유래될 수 있는 조성물을 제공함으로써 알 수 있다. 다른 바람직한 양태에서, 본 발명은 피부 장애 또는 병태, 예컨대 여드름, 습진, 건선 또는 통증을 초래하는 사마귀의 치료적 치료에서 또는 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 바와 같은 부화액으로부터 유래될 수 있는 조성물을 제공하는 것으로서 알 수 있다. 상기 언급한 조성물은 또한 본 명세서에서 "부화액 추출물"로서 지칭된다. 부화 효소 및 알 껍질 폴리펩타이드 및 펩타이드에 추가로, 상기 추출물은 본래의 비-단백질성 물질을 포함할 수 있다.

본 명세서에 기재된 바와 같은 어류 부화액으로부터 유래될 수 있는 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제 및/또는 희석제를 포함하는 약제학적 또는 화장료 조성물로서 제공될 수 있다는 것이 본 명세서로부터 명백하게 될 것이다.

따라서, 일 양태에서, 본 발명은, 적어도 하기 단계들 a) 내지 g)를 포함하는, 어류 부화액으로부터 본 명세서에 기재된 바와 같은 약제학적 또는 화장료 조성물을 제조하는 방법을 제공한다:

a) 최소 용적의 물(예를 들어, 알의 용적 이하임) 중에서 어류 알을 현탁시키는 단계;

b) 바람직하게는 80% 초과의 배아에 대해 부화가 6시간 미만 내에 완료되도록 상기 알의 동기화된 신속한 부화(synchronized, rapid hatching)를 유도하는 단계;

c) 선택적으로 부화된 알을 여과시켜 부화액을 얻는 단계; 및

d) 조성물을 얻기 위하여 b) 또는 c)의 부화액을 여과시키는 단계로서, 적어도 하기 단계들 (i) 내지 (iii)을 포함하는, 상기 부화액을 여과시키는 단계:

(i) 적어도 5㎛의 기공 크기, 바람직하게는 5 내지 15㎛, 및 특히 바람직하게는 7㎛의 기공 크기를 지니는 필터를 사용하여 부화액을 여과시키고, 그 여과액을 수집하는 단계;

(ii) 선택적으로 0.30 내지 0.60㎛의 기공크기, 바람직하게는 0.35 내지 0.55㎛의 기공 크기, 특히 바람직하게는 0.40 내지 0.50㎛, 가장 바람직하게는 0.45㎛를 지니는 필터를 사용하여 (i) 단계로부터의 여과액을 여과시키고 그 여과액을 수집하는 단계;

(iii) 단계 (i) 또는 (ii)로부터의 여과액에 하기 단계들 (1) 내지 (5)를 포함하는 이온 교환 크로마토그래피를 실시하는 단계:

(1) 이온 교환 칼럼, 예컨대 DEAE(다이에틸아미노에틸) 칼럼 상에 여과액을 장입하는 단계;

(2) 적합한 완충제, 예를 들어 20mM 트리스-HCl, pH 8.5를 포함하는, 예컨대 pH 7 내지 9에서의 완충된 세척 용액으로 칼럼을 세척하는 단계;

(3) 제1 용리 완충제 또는 (예를 들어 단계 (4)의 제2 용리 완충제보다 이온 강도가 더 낮은) 용매(예컨대 50 내지 100mM, 예를 들어 50mM NaCl의 농도로 염을 추가로 포함하는, 예를 들어, 완충된 세척 용액)를 사용하여 칼럼으로부터 폴리펩타이드(특히 류코렉틴 폴리펩타이드)를 용리시키는 단계;

(4) 제2 용리 완충제 또는 (예를 들어 단계 (3)의 제1 용리 완충제보다 이온 강도가 더 높은) 용매(예컨대 500mM 내지 2M, 예를 들어 1M NaCl의 농도로 제1 용리 완충제보다 더 고농도의 염을 포함하는, 예를 들어 완충된 세척 용액)를 사용하여 칼럼으로부터 남아있는 폴리펩타이드를 용리시키는 단계;

(5) 단계 (4)로부터 용리액을 수집하는 단계;

e) 단계 (5)로부터의 용리액 중의 물을 약제학적으로(또는 미용적으로) 허용가능한 완충제와 교환하는 단계;

f) 0.15 내지 0.30㎛의 기공 크기, 바람직하게는 0.22㎛의 기공 크기를 지니는 필터를 사용하여 단계 (e)로부터 얻어진 용액을 여과시키고, 그 여과액을 수집하는 단계; 및

g) 단계 (f)로부터의 여과액으로부터 상기 약제학적 또는 화장료 조성물을 제조하는 단계.

본 명세서에 언급된 바와 같은 "부화액"은 부화 과정 동안 알로부터 방출된 유체이며, 조질의, 희석 또는 여과된 형태로 있을 수 있다. 조질의 부화액은 미희석, 미처리 유체를 지칭한다. 희석된 부화액은, 예를 들어 부화가 수 중에서 일어날 때 부화 동안 또는 부화 후에 다른 유체와 혼합될 수 있는 부화액을 지칭한다.

본 발명은 또한 본 명세서에 기재된 방법에 의해 얻어지거나 또는 얻을 수 있는 약제학적 또는 화장료 조성물을 제공한다.

여과액에 이온 교환 크로마토그래피를 실시하는 단계는, 본 발명의 조성물의 폴리펩타이드(이하에 정의되는 바와 같은 이들 부분을 포함)가 정제 전에(즉, 이온 교환 크로마토그래피 전에) 부화액 추출물 중에 존재하는 다른 폴리펩타이드 중 적어도 하나에 대해 풍부하게 되는, 여과액을 초래하는 임의의 적합한 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 예를 들어, 이온 교환 크로마토그래피는 부화액 중의 부화 효소 및 알 껍질 폴리펩타이드는 부화액에 존재하는 다른 폴리펩타이드 중 적어도 하나, 바람직하게는 이 정제 단계 전에 부화액 추출물 중에 존재하는 모든 다른 폴리펩타이드에 대해 적어도 5%만큼 풍부화되는 최종 용리액(즉, 제2 용리 완충제를 사용하여 얻어지는 용리액)을 초래할 수 있다. 다른 폴리펩타이드는 본 명세서에 정의된 바와 같은 본 발명의 방법에서 사용하기 위한 조성물 중의 폴리펩타이드의 구조적 및/또는 기능적 정의 내에 속하지 않는 폴리펩타이드(즉, 부화 효소 또는 알 껍질 폴리펩타이드 또는 이들의 부분)로서 정의될 수 있다. 본 발명의 약제학적 또는 화장료 조성물(즉, 본 명세서에 기재된 방법에 의해 얻어지거나 또는 얻을 수 있음)은 이하에 추가로 정의하는 류코렉틴 폴리펩타이드를 함유하지 않는다. 바람직하게는, 폴리펩타이드는 이 단계에 의해 적어도 10, 20, 30, 40 또는 50%만큼 풍부화된다. 특히 바람직하게는 폴리펩타이드는 정제 전 부화액 추출물에 존재하는 다른 폴리펩타이드 중 적어도 하나, 예를 들어 류코렉틴에 대해 50 또는 60% 초과의 순도, 예를 들어 70, 80 또는 90% 초과, 바람직하게는 95 또는 99% 초과 순도로 정제된다. 따라서, 용리액은 이온 교환 크로마토그래피 전에 부화액 중에 존재하는 다른 폴리펩타이드, 예컨대 류코렉틴의 단지 미량, 예를 들어 0.1%, 0.01%, 0.001%, 0.0001% 또는 0.00001% w/w 미만을 포함할 수 있다.

이온 교환 크로마토그래피는 당업계에 잘 공지되어 있고, 적합한 이온 교환 칼럼은 상업적으로 입수가능하다. 예시적 실시형태에서 이온 교환 칼럼은 DEAE(디에틸아미노에틸) 칼럼, 즉, DEAE에 결합된 비활성 매트릭스, 예컨대 셀룰로스, 실리카, 세파로스 등의 칼럼이다. 그러나, 다른 이온 교환 칼럼은 상기 기재한 방법에서 사용하기에 적합할 수도 있다.

이온 교환 칼럼에 대한 여과된 부화액의 장입 단계는, 그것이 본 발명의 조성물 중의 폴리펩타이드와 결합할 수 있도록 제조 또는 활성화된 이온 교환 칼럼에 부화액을 적용하는 단계를 포함한다. 이온 교환 칼럼을 제조 또는 활성화하는 단계는 전형적으로 완충제, 예를 들어 이하에 정의하는 바와 같은 세척 완충제로 칼럼을 세척하는 단계를 수반한다. 이 사전 세척 단계는 최적의 조건, 예를 들어 pH 하에서, 폴리펩타이드를 칼럼에 결합시킬 수 있는 이온 교환 칼럼을 초래한다. 따라서, 장입 단계는 본 발명의 조성물의 폴리펩타이드를 이온 교환 칼럼에 결합시키는 단계로서 검토될 수 있다.

여과된 부화액을 이온 교환 칼럼 상에 장입시키는 단계 후에, 그리고 표준 프로토콜에 따라, 칼럼은 적합한 완충제로 세척되어 칼럼에 결합되지 않은 부화액 중에 존재하는 원치않는 구성성분을 제거한다. 세척 단계는 칼럼에 대한 세척 완충제 용적을 적용하는 것을 포함하며, 전형적으로 칼럼에 적용되는 세척 완충제의 용적은 이온 교환 칼럼의 용적과 적어도 동일하며, 칼럼 용적의, 예를 들어 적어도 1.5, 2, 3, 4 또는 5배 초과일 수 있다. 일부 실시형태에서 세척 단계는, 예를 들어 2, 3, 4, 5회 이상 반복될 수 있다. 임의의 적합한 세척 완충제는 본 발명의 방법에서 이용될 수 있다. 적합한 세척 완충제는 관심 대상의 폴리펩타이드와 이온 교환 칼럼 간의 상호작용을 상당히 방해하지 않는 것이며, 본 발명의 조성물의 폴리펩타이드의, 예를 들어 10% 미만, 예를 들어 5, 4, 3, 2 또는 1% 미만은 각각의 세척 단계에 의해 이온 교환 칼럼으로부터 제거된다. 바람직한 실시형태에서, 세척 완충제는 pH가 6 내지 10, 바람직하게는 7 내지 9, 예를 들어 8.5 범위에 있는, 10 내지 100mM, 바람직하게는 10 내지 50mM, 예를 들어 20 내지 30mM의 범위에서의 트리스-HCl 용액이다. 세척 단계로부터의 통과액은, 예를 들어 추가 세척 단계가 필요하고(예를 들어, 정제 전 부화액에 존재하는 원치않는 구성성분을 나타내는 폴리펩타이드, 다당류, 염 등의 존재에 대해 시험) 및/또는 폐기되는지 여부를 결정하도록 수집될 수 있다.

이온 교환 칼럼("제1" 용리 단계)으로부터의 류코렉틴 폴리펩타이드를 용리시키는 단계는 임의의 적합한 수단에 의해 수행될 수 있고, 전형적으로 적어도 류코렉틴 폴리펩타이드와 이온 교환 칼럼, 즉, 제1 용리 용액(예를 들어, 완충제) 또는 용매 간의 상호작용을 방해하도록 칼럼에 용매 또는 용액의 적용을 수반한다. 그러나, 제1 용리 용매 또는 용액은 관심 대상의 폴리펩타이드와 이온 교환 칼럼 간의 상호작용을 방해하기에 충분하지 않으며, 예를 들어 본 발명의 조성물의 총 폴리펩타이드에서 10% 미만, 예를 들어 5, 4, 3, 2 또는 1% 미만은 용리 단계에 의해 이온 교환 칼럼으로부터 제거되어 류코렉틴 폴리펩타이드를 용리한다. 전형적으로 칼럼에 적용되는 제1 용리 완충제 또는 용매의 용적은 이온 교환 칼럼의 용적과 적어도 동일하고, 예를 들어 칼럼 용적의 적어도 1.5, 2, 3, 4 또는 5배 이상일 수 있다. 일부 실시형태에서 "제1" 용리 단계(즉, 제1 용리 용액 또는 용매를 사용)는, 예를 들어 2, 3, 4, 5회 이상으로 반복될 수 있다. 류코렉틴 폴리펩타이드를 함유하는 용리액("제1" 용리 단계로부터의 통과액)은 각각의 용리 단계로부터 수집될 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 류코렉틴 폴리펩타이드를 함유하는 용리액은 폐기된다. 적합한 제1 용리 완충제 또는 용매는 류코렉틴 폴리펩타이드와 이온 교환 칼럼 간의 상호작용을 방해하는 것이며, 예를 들어 칼럼에 결합되는 류코렉틴 폴리펩타이드의 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 75, 80, 85, 90, 95 또는 99%는 각각의 용리 단계에 의해 칼럼으로부터 용리된다.

바람직한 실시형태에서, 제1 용리 완충제는 (제2 용리 완충제에 비해) 낮은 이온 강도를 제공하도록 류코렉틴 폴리펩타이드와 이온 교환 칼럼 간의 상호작용을 방해할 수 있는 물질, 예를 들어 염을 포함하는 세척 완충제와 동일하다. 염은 10 내지 500mM, 바람직하게는 20 내지 400mM, 30 내지 300mM, 40 내지 200mM 또는 50 내지 100mM, 예를 들어 50mM NaCl의 범위로 존재할 수 있다. 따라서, 일부 실시형태에서, 용리 완충제는 상기 기재한 바와 같은 범위에서 염, 예를 들어 NaCl, KCl 등을 또한 포함하는 pH가 6 내지 10, 바람직하게는 7 내지 9, 예를 들어 8.5의 범위 있는, 10 내지 100mM, 바람직하게는 10 내지 50mM, 예를 들어 20 내지 30mM의 범위에서의 트리스-HCl의 용액이다.

이온 교환 칼럼으로부터 본 발명의 조성물의 폴리펩타이드를 용리시키는 단계("제2" 또는 "최종" 용리 단계)는 임의의 적합한 수단에 의해 수행될 수 있고, 전형적으로 관심대상의 폴리펩타이드와 이온 교환 칼럼 간의 상호작용을 방해하도록 칼럼에 용매 또는 용액의 적용을 수반한다. 전형적으로 칼럼에 적용되는 용리 완충제 또는 용매의 용적은 이온 교환 칼럼의 용적과 적어도 동일하며, 예를 들어 칼럼 용적의 적어도 1.5, 2, 3, 4 또는 5배 이상일 수 있다. 일부 실시형태에서 "제2" 용리 단계(즉, 제2 용리 용액 또는 용매를 사용)는, 예를 들어 2, 3, 4, 5회 이상으로 반복될 수 있다. 용리액은 각각의 용리 단계로부터 수집될 수 있고, 용리액 중 하나 이상은 용리액 중에서 물을 교환하는 단계 전에 합쳐질 수 있다. 적합한 용리 완충제 또는 용매는 본 발명의 조성물의 폴리펩타이드와 이온 교환 칼럼 간의 상호작용을 방해하는 것이며, 예를 들어 칼럼에 결합되는 본 발명의 조성물의 폴리펩타이드의 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 75, 80, 85, 90, 95 또는 99%는 각각의 "제2" 용리 단계에 의해 칼럼으로부터 용리된다.

바람직한 실시형태에서, 제2 용리 완충제는 제1 용리 완충제보다 더 높은 이온 강도를 제공하기 위해 관심대상의 폴리펩타이드와 이온 교환 칼럼 간의 상호작용을 방해할 수 있는 물질, 예를 들어 염을 포함하는 세척 완충제와 동일하다. 염은 500 내지 2000mM, 바람직하게는 600 내지 1800mM, 700 내지 1700mM, 800 내지 1500mM 또는 900 내지 1200mM, 예를 들어 약 1000mM NaCl의 범위로 존재할 수 있다. 따라서, 일부 실시형태에서, 용리 완충제는 상기 기재한 바와 같은 범위에서 염, 예를 들어 NaCl, KCl 등을 또한 포함하는 pH가 6 내지 10, 바람직하게는 7 내지 9, 예를 들어 8.5의 범위에 있는, 10 내지 100mM, 바람직하게는 10 내지 50mM, 예를 들어 20 내지 30mM의 범위에서의 트리스-HCl의 용액이다.

여과액 중에서 물을 교환하는 단계는 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법, 예를 들어 정용여과 또는 투석을 사용하여 수행될 수 있다. 특정의 바람직한 실시형태에서, 이 단계는 12kDa 이하, 바람직하게는 10kDa 이하, 예를 들어 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3kDa 이하의 배제 크기를 지니는 필터를 사용하는 정용여과를 사용하여 수행된다.

정용여과는 용액으로부터, 예를 들어 염 또는 다른 원치않는 또는 바람직하지 않은 미세용질을 제거하기 위해 또는 용매, 예를 들어 완충제 용액을 교환하는 방법으로서 초미세여과막을 사용한다. 소분자는 용액으로부터 분리되는 한편, 잔류액 중에 더 큰 분자(필터를 통과하지 않은 물질)를 남긴다. 미세용질 및 용매, 예를 들어 물은 일반적으로 막을 통해 용이하게 세척된다. 전형적으로 약 3 용적의 정용여과 용매(예를 들어, 인산염 완충 식염수)는 95%의 미세용질을 제거할 것이다. 따라서, 단계 (5)로부터의 상기 여과액, 즉, 용리액은 정용여과에 의해 처음으로 처리되고, 이는 용액의 부분(부화액의 가용성 불순물/원치않는 분획을 함유)이 막을 통과함에 따라 잔류액의 농도를 생성한다. 이어서, 잔류액은 약제학적으로 허용가능한 완충제, 예를 들어 0.5mM 인산나트륨 및 1mM 염화나트륨, 인산염 완충 식염수 등으로 희석된다. 희석된 잔류액에 필요하다면, 반복된 라운드의 정용여과를 실시할 수 있다. 전형적으로, 단계 (f) 전에, 잔류액은 단계 (f)로부터의 여과액이 25000 내지 45000mU/ℓ, 바람직하게는 25000 내지 35000mU/ℓ 및 가장 바람직하게는 약 30000mU/ℓ의 효소 활성을 가지도록 희석된다. 여과액의 효소 활성은 인자 Xa 색원체 기질(CH₃OCO-D-CHA-Gly-Arg-pNA-AcOH, 시그마 알드리치(Sigma aldrich) 제품 번호: F3301-25MG)을 절단하는 여과액의 능력에 의해 측정될 수 있다. 정용여과 단계 전에, 부화액은 90 내지 1,300,000mU/ℓ의 범위에서 효소적 활성을 포함할 수 있다. 일 단위(1U)는 분당 1μ㏖의 기질의 전환을 촉매하는데 필요한 효소의 양으로서 정의될 수 있다.

인자 Xa 색원체 기질(시그마 알드리치)은 부화액 중에 존재하는 세린 프로테아제 효소에 의해 절단되어 405㎚의 파장에서 분광 측정학적 분석을 사용하여 편리하게 측정될 수 있는 황색 생성물을 수득한다. 전형적 분석은 10㎕ 인자 Xa 색원체 기질(밀리-q 또는 증류수 중에서 10 ㎎/㎖), 70㎕ 0.2 M 트리스-HCl pH 8.5 및 520㎕ dH₂O를 포함하는 600 ㎕ 기질 용액에 상기 방법의 단계 (d) 또는 (e)로부터 얻을 수 있는 100㎕ 부화액 용액의 첨가를 포함한다. 편리하게는 흡광도의 변화는 5 내지 20분 동안(또는 낮은 효소 활성을 지니는 샘플에 대해 1시간까지), 전형적으로 10분 동안 측정될 수 있다. 샘플 1㎖ 당 효소 활성을 얻기 위해 상기 결과에 적절한 인자, 예를 들어 10(10분 분석 동안)을 곱한다. 부화액의 활성을 결정하기 위해 다른 적절하고 동등한 기질이 사용될 수 있다.

상기 언급한 바와 같이, 일부 실시형태에서 정제를 위해 얻어진 부화액의 양, 특히 부화액 중에서 목적으로 하는 폴리펩타이드 또는 이의 부분의 양을 최대화하기 위해 알 부화 단계와 동기화시키는 것이 유리할 수 있다. 동기화된 부화는 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, 일부 알은 광 조작을 사용하여, 예를 들어 알을 광(부화를 저해함)으로부터 광이 없는 조건으로 전달하여 동기화될 수 있다. 알 온도, 예를 들어 알이 부화하는 용액 온도의 조작, 부화 환경에서 이산화탄소의 양을 증가시키는 부화 환경의 탈산소화, 예를 들어 알이 부화하는 용액의 탈산소화(Oppen-Berntsen et al. 1990, Aquaculture, 86, pp. 417-430)) 및 전기를 사용하는 알의 자극은 또한 동기화된 부화를 야기하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 동기화된 부화는 페로몬, 예를 들어 배아 발생 및 부화에 영향을 미칠 수 있는, 즉, 자극할 수 있는 펩타이드 페로몬을 사용하여 달성될 수 있다. 상기 언급한 바와 같이, 알은 알 용적 이하일 수 있는 최소 용적의 물속에 현탁될 수 있으며, 예를 들어 1㎖의 알마다, 1, 0.75, 0.5, 0.25㎖ 이하의 현탁 액체, 예를 들어 0.5 내지 1㎖가 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서 후속 정제 단계를 용이하게 하기 위해 부화액을 희석시키는 것, 예를 들어 부화액의 점성도를 감소시키는 것이 유리할 수 있다. 따라서, 상기 방법은 부화액을 희석시키는 추가 단계를 포함할 수 있다. 바람직하게는 여과액은 적어도 0.1, 0.2, 0.5, 0.75, 1.0, 1.5, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 50, 100, 1000, 5000 또는 10000배만큼 희석될 수 있다.

바람직한 실시형태에서 상기 알의 동기화된 신속한 부화는 80% 초과의 배아에 대해 6시간 미만 내에 부화가 완료되도록 하는 것이다. 특히 바람직한 실시형태에서, 부화는 5, 4, 3 또는 2시간 미만, 예컨대 0.5 내지 6시간, 1 내지 5시간, 1.5 내지 4시간, 2 내지 3시간, 예를 들어 1 내지 2시간 내에 완료된다. 더 나아가, 일부 실시형태에서 부화는 배아의 85%, 90% 또는 95% 초과, 예를 들어 배아의 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99% 초과에 대해 상기 언급한 기간 내에 완료된다.

상기 기재한 약제학적 또는 화장료 조성물을 제조하는 방법은 바람직하게는 공급원 물질 또는 단리 절차에서 사용되는 물질로부터 유래된 임의의 오염 구성성분, 예를 들어 조질의 부화액에 포함된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부 이외의 구성성분이 실질적으로 없는 풍부화된 제제를 초래한다. 다른 오염 구성성분은 류코렉틴 폴리펩타이드를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 조성물은 시작 부화액에 비해 관심 대상의 폴리펩타이드 및 폴리펩타이드의 일부의 평가된 w/w(건조 중량)으로서 30, 40, 50 또는 60% 초과, 예를 들어 70, 80 또는 90% 초과의 순도로 풍부화될 수 있고, 즉, 90% 순도는 제조 방법의 과정을 통해 출발 물질(오염 구성성분)의 90% 손실을 지칭한다. 그러나, 더 낮은 순도를 갖는 조성물이 사용될 수 있고, 예를 들어 40, 50, 60, 70, 80 또는 90% 초과의 출발 물질을 보유한다. 그러나, 더 낮은 순도, 즉, 0.0005%[w/w] 미만, 바람직하게는 0.0001, 0.00005 또는 0.00001%[w/w] 미만의 균일한 조성물은 류코렉틴 펩타이드를 함유하지 않는다.

단계 (f)로부터의 여과액은 그 자체가 약제학적 또는 화장료 조성물을 형성할 수 있지만, 선택적으로 상기 방법으로부터 얻어진 또는 얻을 수 있는 생성물(단계 (f)의 여과액)은 약제학적 또는 화장료 조성물을 생성하는 단계 (g)에서 및/또는 본 발명의 방법 및 용도에서 그것의 사용 전에 적절한 농도로 희석(또는 농축)될 수 있다. 따라서, 상기 방법은 조성물을 희석(또는 농축)시키는 추가 단계를 포함할 수 있다. 바람직하게는 여과액은 적어도 1.5, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 50, 100, 1000, 5000 또는 10000배만큼 희석(또는 농축)될 수 있다. 특히 바람직하게는 최종 조성물은 단계 (f)의 여과액의 0.5 내지 10%, 예를 들어 0.5 내지 5%, 바람직하게는 0.5 내지 3%(예를 들어, 1 또는 3%)를 포함한다. 특정의 바람직한 실시형태에서, 상기 방법의 단계 (e)로부터의 용액은 희석 또는 농축되어 상기 기재한 방법에 의해 측정되는 바와 같이 10000 내지 100000mU/ℓ의 효소적 활성을 지니는 용액을 달성한다. 바람직하게는 용액, 및 그에 따라 단계 (f)로부터의 여과액은 20000 내지 90000, 25000 내지 80000, 25000 내지 60000, 25000 내지 50000, 25000 내지 45000 또는 25000 내지 35000mU/ℓ의 활성을 포함한다. 가장 바람직하게는 용액은 약 30000mU/ℓ의 활성을 포함한다.

선택적으로, 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제 및/또는 희석제가 상기 방법으로부터 얻어지거나 또는 얻을 수 있는 조성물에 첨가될 수 있다. 따라서, 단계 (f)로부터의 여과액으로부터 약제학적 또는 화장료 조성물을 제조하는 단계 (g)는 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제 및/또는 희석제를 조성물에 첨가하는 단계 또는 조성물을 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제 및/또는 희석제와 합하는 단계를 포함할 수 있다. 대안의 또는 추가적인 제조 방법 단계는 용매, 예를 들어 pH, 이온 농도 등을 변화 또는 변형시키는 것을 포함한다.

다른 약제학적으로 허용가능한 구성성분 또는 성분은, 예를 들어 단계 (g) 동안 상기 방법으로부터 얻어지거나 또는 얻을 수 있는 조성물에 첨가될 수 있다. 하나 이상의 다른 구성성분은 활성 구성성분, 즉, 피부 상에서 효과를 갖는, 또한 바람직하게는 피부의 병태 또는 장애의 치료에서, 예를 들어 본 명세서에 기재된 병태 또는 장애에서 유용한 구성성분일 수 있다. 따라서, 대안적으로 또는 추가적으로, 상기 방법은 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 활성 구성성분을 조성물에 첨가하거나 또는 상기 조성물을 단계 (g)에서의 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 활성 구성성분과 조합하는 추가 단계를 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 활성 구성성분은 이하에 더 상세하게 기재하는 바와 같이 무기염, 비타민, 효소, 단백질, 펩타이드, 아미노산, 지질, 항산화제, 다당류, 자외선차단제로서 적합한 물질, 화학적 박피제, 추출물 및 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.

상기 방법으로부터 얻어지거나 또는 얻을 수 있는 약제학적 또는 화장료 조성물은 본 명세서의 다른 곳에 기재된 바와 같이 본 발명의 방법에서 사용하기에 적합하다.

본 발명의 약제학적 또는 화장료 조성물은 다양한 피부 병태 또는 장애의 치료에서 특히 유용한 부화 효소 및 알 껍질 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부의 조합을 포함한다.

특히, 본 발명의 조성물은 메탈로프로테이나제 활성을 지니는 부화 효소, 세린 프로테아제 활성을 지니는 부화 효소 및 하나 이상의 알 껍질 폴리펩타이드 또는 이들의 부분을 포함하되, 바람직하게는 상기 부분은 부화 동안 부화 효소에 의해 중합 및 가교된 알 껍질의 단백질 분해 절단에 의해 생성된 부분과 구조적으로 동일하다. 폴리펩타이드는 본 명세서에서 관심대상의 폴리펩타이드로서 지칭될 수 있다.

본 발명의 조성물에 존재할 수 있는 예시적 메탈로프로테이나제의 서열은 서열번호 1로 제시된다.

본 발명의 조성물에 존재할 수 있는 예시적 세린 프로테아제는 다음의 특성을 갖는 약 28kDa의 분자량을 지니는 폴리펩타이드로서 정의될 수 있다:

a) 크로모짐 X를 절단;

b) 벤즈아미딘에 의해 저해;

c) 알기닌과의 펩타이드 결합을 절단;

d) 8M 유레아, 몰농도의 염, 증류수 및 유기 용매, 바람직하게는 다이옥산 또는 프로판올의 존재에서 활성으로 남아있음; 및

e) 50일 동안 실온에서 용액 중에서 효소적 활성을 보유함. 바람직하게는 세린 프로테아제는 하기 단계:

a) 최소 용적의 물속에 어류, 예를 들어, 연어 알을 현탁시키는 단계;

b) 상기 알의 동기화된 신속한 부화를 유도하는 단계;

c) 부화액을 얻기 위해 부화알을 여과시키는 단계;

d) 상기 부화액에 고체 유래아를 첨가하여 알 껍질 단편을 해리시키고 상기 유체에 저속 원심분리를 실시하는 단계;

e) 원심분리 상청액에 겔 여과를 실시함으로써 상기 세린 프로테아제를 추가로 정제하는 단계; 및

f) 벤즈아미딘-변형 수페로스(Superose) 6B(등록상표) 칼럼 상에서 친화도 크로마토그래피에 의해 상기 세린 프로테아제를 추가로 정제하는 단계를 포함하는 방법에 의해 정제된 형태로 얻어질 수 있되, 상기 친화도 크로마토그래피는 농축 염 세척을 수행함으로써 수행되어 농축 염 용액 중에서 다이옥산으로 용리시켜 크로마토그래피 매트릭스에 또는 거대분자 구조에 결합된 세린 프로테아제 활성을 지니는 폴리펩타이드를 추출한다.

알 껍질 폴리펩타이드는 장막을 형성하기 위해 가교된 구조적 단백질이다. 알 껍질 폴리펩타이드 및 이의 일부는 알껍질의 분해를 통해 부화액 중에 존재한다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 조성물에서 발견되는 알 껍질 폴리펩타이드는 바람직하게는 산성 또는 매우 산성이고, 예를 들어 3 내지 5.5, 바람직하게는 3.5 내지 5.2의 pI를 가진다.

알 껍질 폴리펩타이드는 다양한 형태로, 특히 전장 폴리펩타이드의 일부 또는 단편의 형태로 부화액 중에 나타난다. 전장 알 껍질 폴리펩타이드는 부화액 중에 존재하는 부분을 포함하기 때문에, 전장 알 껍질 폴리펩타이드와 이의 일부는 둘 다 본 발명에서의 효용을 찾을 것으로 생각된다. 더 나아가, 알 껍질 폴리펩타이드 및 그의 부분의 다양한 아이소폼은 부화액 중에서 동정되었다.

본 발명자들은 본 명세서에서 본 발명의 조성물 중에 존재할 수 있는 3가지 예시적 알 껍질 폴리펩타이드를 개시한다. 부화액 중에서 찾은 일부 알 껍질 폴리펩타이드의 서열은 질량 분석법에 의해 결정되었고, 서열번호 2 내지 4로 제시된다. 이들 서열은 각각 서열번호 8, 6 및 7로 제시되는 전장 알 껍질 폴리펩타이드로부터 유래된 폴리펩타이드의 일부 또는 단편을 나타낸다. 따라서, 서열번호 2 내지 4는 본 명세서에 정의된 바와 같은 알 껍질 폴리펩타이드의 일부로서 정의될 수 있다.

상기 논의한 바와 같이, 각각의 알 껍질 폴리펩타이드 또는 이의 일부는 다양한 아이소폼으로 존재할 수 있다.

따라서, 상기 기재한 방법에 의해 얻어지거나 또는 얻을 수 있는 약제학적 또는 화장료 조성물의 구성성분은 다음과 같이 정의될 수 있다:

(i) 서열번호 1에서 제시되는 아미노산 서열 또는 상기 서열에 대해 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 메탈로프로테이나제;

(ii) 상기 기재한 방법에 의해 얻어질 수 있는 세린 프로테아제; 및

(iii) 하기 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 알 껍질 폴리펩타이드:

(a) 서열번호 2에서 제시되는 아미노산 서열 또는 상기 서열에 대해 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 알 껍질 폴리펩타이드;

(b) 서열번호 3에서 제시되는 아미노산 서열 또는 상기 서열에 대해 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 알 껍질 폴리펩타이드;

(c) 서열번호 4에서 제시되는 아미노산 서열 또는 상기 서열에 대해 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 알 껍질 폴리펩타이드; 또는

(iv) 일부가 본 명세서에서 이후에 기재하는 바와 같은 길이를 갖는 (i) 내지 (iii)에 정의된 임의의 폴리펩타이드의 부분;

및 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제 및/또는 희석제. (상기 적어도 70% 서열 동일성은 바람직하게는 적어도 80, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 동일성이다)

상기 언급한 바와 같이, 일부 실시형태에서 서열번호 2 내지 4에 제시된 서열보다 더 긴 서열이 조성물 중에 존재할 수 있다. 따라서, 상기 목록에서, 서열번호 2 내지 4는 각각 서열번호 5 내지 7로 대체될 수 있되, 서열번호 2는 대안적으로 서열번호 8로 대체될 수 있다.

상기 언급한 바와 같이, 본 명세서에 기재되는 약제학적 또는 화장료 조성물은 기능성 류코렉틴 폴리펩타이드 또는 이의 기능성 부분을 포함하지 않는다. 류코렉틴 폴리펩타이드는 서열번호 9 내지 12 중 임의의 하나에 제시된 바와 같은 아미노산 서열 또는 상기 서열에 대해 적어도 50% 동일한 서열, 또는 임의의 상기 서열의 일부를 포함하는 폴리펩타이드로서 정의될 수 있다.

기능성 류코렉틴 폴리펩타이드는 진피 섬유아세포로부터 아연 의존적 엔도펩티다제인 매트릭스 메탈로프로테이나제(MMP)의 방출을 저해할 수 있는 폴리펩타이드이다. 그러나, 상기 정의된 류코렉틴 폴리펩타이드의 구조적 정의 내에 속하는 폴리펩타이드는 시험관내 세포 배양물에서 MMP의 방출을 저해하는 폴리펩타이드의 능력에 의해 정의되는 바와 같이, 이것이 기능성 류코렉틴, 예를 들어 서열번호 9 내지 12 중 임의의 하나의 활성의 50, 40, 30, 20, 10 또는 5% 미만을 가진다면, 비기능성 류코렉틴 폴리펩타이드가 되는 것으로 고려될 수 있다. 대안적으로 발현될 때, 기능성 류코렉틴 폴리펩타이드는 시험관내 세포 배양물에서 MMP의 방출을 저해하는 폴리펩타이드의 능력에 의해 정의되는 바와 같이 기능성 류코렉틴, 예를 들어 서열번호 9 내지 12 중 임의의 하나의 활성의 적어도 50, 70 또는 90%를 가져야 한다.

본 명세서에 정의된 조성물에서 본 명세서에 정의된 폴리펩타이드 또는 이의 일부의 총 농도는 다를 수 있다. 그러나, 바람직한 실시형태에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 그룹의 각각의 유형의 비율은 모든 조성물에 대해, 즉, 총 폴리펩타이드 농도와 관계없이 일치된다. 특히 바람직한 실시형태에서, 조성물 중 총 폴리펩타이드의 백분율로서 조성물 중의 본 명세서에서 앞서 정의한 폴리펩타이드의 비율은 하기와 같이 정의될 수 있다:

(i) 약 0.05 내지 약 0.20%[w/w] 메탈로프로테이나제, 바람직하게는 약 0.100% 내지 약 0.125%, 예컨대 약 0.108% 내지 약 0.112% 메탈로프로테이나제;

(ii) 약 0.15% 내지 약 0.40%[w/w] 세린 프로테아제, 바람직하게는 약 0.255% 내지 약 0.310%, 예컨대 약 0.275% 내지 약 0.290% 세린 프로테아제; 및

(iii) 약 99.40% 내지 약 99.80%[w/w] 총 알 껍질 폴리펩타이드 또는 상기 폴리펩타이드의 일부, 바람직하게는 약 99.575% 내지 약 99.645%, 예컨대 약 99.598% 내지 약 99.617% 총 알 껍질 폴리펩타이드 또는 상기 폴리펩타이드의 일부.

본 명세서에 언급된 바와 같이, 상기 총 알 껍질 폴리펩타이드 또는 이의 부분은 본 명세서에서 정의되는 알 껍질 폴리펩타이드와, 아세톤 용적의 4배를 지니는 알 껍질과 연관된 폴리펩타이드의 침전에 의해 얻을 수 있고 3 내지 5.5의 pI를 갖는 다른 매우 산성인 알 껍질 단백질을 둘 다 포함한다.

따라서, 본 발명의 조성물에서 임의의 하나의 알 껍질 폴리펩타이드 또는 상기 폴리펩타이드의 일부의 비율은 조성물 중의 총 폴리펩타이드의 약 0 내지 99.80%[w/w], 예컨대 1 내지 95%, 2 내지 90%, 3 내지 85%, 4 내지 80%, 5 내지 75%, 10 내지 70%, 15 내지 65%, 20 내지 55%, 25 내지 50% 또는 30 내지 40%일 수 있되, 조성물 중의 알 껍질 폴리펩타이드 또는 상기 폴리펩타이드의 일부의 총 비율은 조성물 중의 총 폴리펩타이드의 99.80%를 초과하지 않는다. 바람직하게는, 조성물 중의 알 껍질 폴리펩타이드 또는 상기 폴리펩타이드의 일부의 총 비율은 조성물 중의 총 폴리펩타이드의 99.617%를 초과하지 않는다.

본 명세서의 약제학적 조성물에 대한 언급은 포함하는 화장료 조성물로서 읽혀질 수 있다.

본 명세서에서 언급되는 바와 같은 "폴리펩타이드"는 바람직하게는 50, 100, 150, 200 또는 250개 초과의 잔기 및/또는 500, 400, 300, 200 또는 100개 미만의 잔기 또는 그것들로부터 선택된 범위를 지니는 분자이다. 본 명세서에 언급되는 바와 같은 "일부"는 바람직하게는 그것이 유래된 서열의 적어도 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240개 이상의 아미노산을 포함한다. 상기 일부는 서열의 중심 또는 N-말단 또는 C-말단으로부터 얻어질 수 있다. 바람직하게는 상기 부분은 N-말단 단부로부터, 예를 들어 폴리펩타이드의 처음 50, 100 또는 150개 잔기로부터 얻어진다. 대안적으로 C-말단 단부로부터, 예를 들어 폴리펩타이드의 마지막 50, 100 또는 150개 잔기로부터 얻어진 부분이 바람직하다.

바람직하게는 본 명세서에 정의된 폴리펩타이드 서열은 그것이 비교되는 서열(서열번호 1 내지 12)에 대해 적어도 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 동일하다.

서열 동일성은, 가변 pam인자, 및 12.0에서 갭 생성 페널티 설정 및 4.0에서 갭 연장 페널티 설정 및 2개 아미노산 창과 함께 FASTA pep-cmp를 사용하는 SWISS-PROT 단백질 서열 데이터뱅크를 사용함으로써, 결정될 수 있다. 바람직하게는 상기 비교는 서열의 전장 길이에 걸쳐 만들어지지만, 더 작은 비교창, 예를 들어 200, 100 또는 50개 미만의 연속 아미노산에 걸쳐 만들어질 수 있다.

바람직하게는 이러한 서열 동일성 관련 폴리펩타이드는 인용 서열 번호에서 제시되는 폴리펩타이드와 기능적으로 동일하다. 이러한 기능적으로 동일한 폴리펩타이드는 이하에 제시하는 바와 같은 유도체 형태를 취할 수 있다.

더 나아가, 본 명세서에 기재된 바와 같은 "일부"는 기능적 동등물일 수 있다. 바람직하게는 이들 일부는 본 명세서에 언급된 (비교 영역에 대한) 동일성 조건을 만족시킨다.

본 명세서에 언급된 바와 같이, "기능적 동등물"을 달성하기 위해, 폴리펩타이드는 모 분자(즉, 서열 동일성에 의해 관련되는 분자)에 대해 효소적 활성 및/또는 약제학적 또는 미용적 기능을 수행함에 있어 일부 감소된 효능을 나타낼 수 있지만, 바람직하게는 효율적이거나 또는 더 효율적이다. 따라서, 기능적 동등물은 본 명세서에 이후에 기재된 바와 같은 피부의 장애 또는 병태의 치료에서 효과적인 폴리펩타이드에 관한 것이다. 이는, 예를 들어 실시예에서 언급되는 생체내 분석을 수행함으로써 정량적 또는 정량적 방식으로 관련되는 폴리펩타이드에 대한 유도체(즉, 서열 관련된) 폴리펩타이드의 효과의 비교에 의해 시험될 수 있다. 정량적 결과가 가능한 경우, 유도체는 모 폴리펩타이드의 적어도 30, 50, 70 또는 90%만큼 효과적이다. 대안적으로 또는 추가적으로 시험관내 시험은, 예를 들어 인자 X와 같은 적합한 폴리펩타이드 또는 펩타이드 기질, 예를 들어 메탈로프로테이나제 또는 세린 프로테아제를 절단하는 부화 효소의 능력의 분석에 의해 수행될 수 있다.

특히 바람직한 기능적으로 동일한 변이체는 천연 생물학적 변형(예를 들어, 종 내에서 또는 대안적으로 상이한 속, 예를 들어 어류에서의 대립유전자 변이체 또는 지리적 변형)이다.

따라서, 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 조성물이 얻어질 수 있는 적합한 어류, 특히 어류 알(즉, 조성물에 함유된 폴리펩타이드 및 본 발명의 조성물이 얻어질 수 있는 출발물질)은 조기아강(Actinopterygii)의 3개 하급 중 하나인 진골어류(Teleostei) 하급의 임의의 어류를 포함한다. 따라서, 어류는 골설어상목(Osteoglossomorpha), 당멸치상목(Elopomorpha), 청어상목(Clupeomorpha), 골표상목(Ostariophysi), 원극기상목(Protacanthopterygii), 협기상목(Stenopterygii), 원린상목(Cyclosquamata), 스코펠로상목(Scopelomorpha), 이악어상목(Lampridiomorpha), 폴리믹시아상목(Polymyxiomorpha), 측극기상목(Paracanthopterygii) 및 극기상목(Acanthopterygii)로 이루어진 목록으로부터 선택된 임의의 상목으로부터의 어류로부터 선택될 수 있다.

일부 실시형태에서, 어류는 골설어목(Osteoglossiformes), 히오돈목(Hiodontiformes), 당멸치목(Elopiformes), 여을멸목(Albuliformes), 밑보리멸목(Notacanthiformes), 뱀장어목(Anguilliformes), 심해뱀장어목(Saccopharyngiformes), 청어목(Clupeiformes), 압치목(Gonorynchiformes), 잉어목(Cypriniformes), 카라신목(Characiformes), 김노투스목(Gymnotiformes), 메기목(Siluriformes), 샛멸목(Argentiniformes), 연어목(Salmoniformes), 민물꼬치고기목(Esociformes), 바다빙어목(Osmeriformes), 꼬리치목(Ateleopodiformes), 앨퉁이목(Stomiiformes), 홍메치목(Aulopiformes), 샛비늘치목(Myctophiformes), 이악어목(Lampriformes), 턱수염금눈돔목(Polymixiiformes), 연농어목(Percopsiformes), 두꺼비고기목(Batrachoidiformes), 아귀목(Lophiiformes), 대구목(Gadiformes), 첨치목(Ophidiiformes), 숭어목(Mugiliformes), 색줄멸목(Atheriniformes), 동갈치목(Beloniformes), 케토미무스목(Cetomimiformes), 열대송사리목(Cyprinodontiformes), 스테파노베리스목(Stephanoberyciformes), 금눈돔목(Beryciformes), 달고기목(Zeiformes), 학치목(Gobiesociformes), 큰가시고기목(Gasterosteiformes), 실고기목(Syngnathiformes), 드렁허리목(Synbranchiformes), 복어목(Tetraodontiformes), 가자미목(Pleuronectiformes), 쏨뱅이목(Scorpaeniformes) 농어목(Perciformes) 및 철갑상어목(Acipenseriformes)으로 이루어진 목록으로부터 선택된 임의의 목의 어류로부터 선택될 수 있다.

바람직한 실시형태에서, 어류는 연어목, 잉어목, 농어목, 메기목, 숭어목 및 철갑상어목으로 이루어진 목록으로부터 선택된 임의의 목의 어류로부터 선택될 수 있다.

특정의 바람직한 실시형태에서, 어류는 연어과, 잉어과(Cyprinidae), 시클리드과(Cichlidae), 팬가시메기과(Pangasiidae), 민어과(Sciaenidae), 바리과(Serranidae), 전갱이과(Carangidae), 도미과(Sparidae), 스즈키과(Lateolabracidae), 농어과(Moronidae), 숭어과(Mugilidae), 나일농어과(Latidae), 구굴무치과(Eleotridae) 및 철갑상어과(Acipenseridae)로 이루어진 목록으로부터 선택된 임의의 과의 어류로부터 선택될 수 있다.

따라서, 일부 실시형태에서, 어류는 골린 어류, 문아이, 불볼락, 당멸치, 타폰, 여울멸, 발광멸과, 스파이니일, 트루일, 풍선장어, 큰입장어, 청어, 멸치, 밀크피쉬, 밥(barb), 잉어, 다니오, 금붕어, 미꾸라지, 피라미, 라스보라, 카라신, 펜슬피쉬, 도끼고기, 피라냐, 테트라, 전기뱀장어, 나이프피쉬, 메기, 배럴아이 피쉬, 민머리치, 연어, 송어, 강꼬치고기, 바다빙어, 갤락시드, 꼬리치과, 앨퉁이류, 납작앨퉁이, 물천구, 늑대고기, 샛비늘치, 산갈치, 빨간개복치, 홍투라치, 금눈돔과, 동굴어, 송어-퍼치, 복어, 아구, 대구, 숨이고기, 실버아로와나, 숭어, 은줄멸, 레인보우피쉬, 날치, 웨일피쉬, 태생어, 킬리피쉬, 릿지헤드, 귀신고기, 철갑둥어, 달고기, 황학치, 큰가시고기, 파이프피쉬, 해마, 드렁허리, 파랑쥐치, 복어, 가자미, 쏨뱅이, 둑중개, 버들붕어과, 배스, 시클리드, 망둥이, 구라미, 고등어, 퍼치, 스캣, 명태 또는 레스일 수 있다.

특히 바람직한 실시형태에서, 어류는 초어(크테노파링고돈 이델라(Ctenopharyngodon idella)), 백연어(하이포프탈미크티스 모리트릭스(Hypophthalmichthys molitrix)), 카틀라(카틀라 카틀라(Catla catla)), 잉어(시프리누스 카르피오(Cyprinus carpio)), 대두어(하이포프탈미크티스 노빌리스(Hypophthalmichthys nobilis)), 붕어(카라시우스 카라시우스(Carassius carassius)), 역돔(오레오크로미스 닐로티쿠스 닐로티쿠스(Oreochromis niloticus niloticus)), 판가스 메기(판가시우스 판가시우스(Pangasius pangasius)), 로호 라베오(Roho labeo)(라베오 로히타(Labeo rohita)), 대서양 연어(살모 사라르(Salmo salar)), 부세(라리미크티스 크로세아(Larimichthys crocea)), 그리지 그루퍼(Greasy grouper)(에피네펠루스 타우비나(Epinephelus tauvina)), 바다송어(살모 트루타 트루타(Salmo trutta trutta)), 방어(세리올라 퀸쿼라디아타(Seriola quinqueradiata)), 길트레트 시브레암(Gilthead seabream)(스파루스 아우라타(Sparus aurata)), 농어(라테올라브랙스 자포니쿠스(Lateolabrax japonicus)), 유러피언 시배스(디센트라쿠스 라브랙스(Dicentrarchus labrax)), 참돔(크리소프리스 아우라투스(Chrysophrys auratus)), 숭어(무길 세팔루스(Mugil cephalus)), 바라문디(라테스 칼카리페르(Lates calcarifer)), 마블 고비(옥시엘레오트리스 마르모라타(Oxyeleotris marmorata)), 역돔(오레오크로미스 모잠비쿠스(Oreochromis mossambicus)), 산천어(온코린쿠스 미키스(Oncorhynchus mykiss)), 은연어(온코린쿠스 키수치(Oncorhynchus kisutch)), 왕연어(온코린쿠스 츠하이츠카(Oncorhynchus tshawytscha)), 곱사연어(온코린쿠스 고르부스카(Oncorhynchus gorbuscha)), 백연어(온코린쿠스 케타(Oncorhynchus keta)), 붉은 연어(온코린쿠스 네르카(Oncorhynchus nerka)), 시베리아 철갑상어(아시펜세르 바에리(Acipenser baerii))및 다누베 스투르게온(Danube sturgeon)(아시펜세르 구엘덴스타에드티(Acipenser gueldenstaedtii))으로부터 선택된 임의의 종일 수 있다.

일부 실시형태에서, 약제학적 또는 화장료 조성물은 한 가지 이상의 유형의 어류, 특히 한 가지 이상 유형의 어류 알, 즉, 상기 정의한 어류 중 임의의 하나 이상으로부터의 어류 알로부터의 부화액으로부터 얻어지거나 또는 얻을 수 있다. 예를 들어, 2 이상의 유형의 어류알로부터의 부화액은 본 발명의 약제학적 또는 화장료 조성물을 얻기 위해 본 명세서에 기재된 방법에서 사용될 수 있었다. 따라서, 본 발명의 방법은, 예를 들어 여과 전 또는 여과 후에 하나 이상의 유기체의 부화알로부터 수집된 부화액을 합하는 단계를 포함할 수 있다.

"약제학적으로 허용가능한", "생리학적으로 허용가능한" 또는 "미용으로 허용가능한"은 성분이 치료적 및/또는 미용적 적용분야 및 조성물에 적합하여야 한다는 것을 의미한다. 성분은 또한 조성물 내 다른 성분과 양립가능할 뿐만 아니라 환자에 대해 생리학적으로 허용가능하여야 한다.

투여를 위해 활성 성분, 즉, 상기 기재한 방법에 의해 얻어질 수 있는 조성물의 폴리펩타이드 구성성분은 약제학적 또는 화장료 조성물에서 사용하기 위해 적절하게 변형될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 조성물은, 예를 들어 염 또는 비전해질, 아세테이트, SDS, EDTA, 시트레이트 또는 아세트산 완충제, 만니톨, 글라이신, HSA 또는 폴리솔베이트와 같은 적절한 첨가제의 사용에 의해 분해에 대해 안정화될 수 있다.

본 명세서에 기재된 방법에 의해 얻어지거나 또는 얻을 수 있는 폴리펩타이드 구성성분은 유일한 활성 성분으로서 치료적 또는 미용적 용도를 위한 조성물에 존재할 수 있거나, 또는 다른 성분, 특히 다른 활성 성분과 조합되어, 예를 들어 치료적 또는 미용적 효과(상기 기재한 바와 같음)를 증가시키거나 또는 조성물이 소비자에게 더 매력적이 되게 한다.

본 명세서에 기재된 조성물은 또한, 예를 들어 상기 기재한 천연 공급원 중 하나로부터 상기 조성물의 제조 후에 불순물을 포함할 수 있다. 본 명세서에 기재한 바와 같은 조성물에서, 어류 부화액(즉, 총 폴리펩타이드 성분)으로부터 유래될 수 있는 다양한 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부는 상기 기재한 방법에 따라 제조된 조성물의 범위 0.001 내지 50% w/w에서 (조합하여) 존재할 수 있다(또는 조성물이 단계 (g)에서 희석된다면 10 내지 100배 더 낮음). 바람직하게는 어류 부화액으로부터 유래될 수 있는 상기 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부는 조성물의 0.0005 내지 10% w/w 범위(또는 10 내지 40%까지)에서, 예를 들어 상기 방법에 따라 제조되는 조성물의 0.001 내지 5%, 0.001 내지 3%, 0.001 내지 2%, 0.001 내지 1%, 0.001 내지 0.5%, 0.001 내지 0.15% w/w에서(예를 들어, 최종 단계에서 희석된다면, 0.05-0.5% w/w 또는 0.0005-0.005% w/w에서) (조합하여) 존재한다. 따라서, 어류 부화액으로부터 유래될 수 있는 개개 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부는 조성물의 1x10^-5 내지 10% w/w의 범위에서 존재할 수 있다. 일부 실시형태에서 어류 부화액으로부터 유래될 수 있는 상기 개개 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부는, 단계 (g)에서 추가로 희석되지 않는다면, 조성물의 범위 1x10^-5 내지 5% w/w의 조성물에서, 예를 들어 약제학적 또는 화장료 조성물의 1x10^-5 내지 4%, 1x10^-5 내지 3%, 1x10^-5 내지 2%, 1x10^-5 내지 1%, 1x10^-4 내지 0.5%, 1x10^-4 내지 0.15%, 1x10^-4 내지 0.1% 또는 1x10^-4 내지 0.01% w/w에서 존재할 수 있거나, 또는 단계 (g)에서 희석된다면, 예를 들어 10 내지 200, 예를 들어 30 내지 100배만큼 감소된다.

조성물 중의 어류 부화액으로부터 유래될 수 있는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부의 비율은 조성물 중의 다른 용질에 대해, 즉, 용매, 예를 들어 물을 제외하고 정해질 수 있다. 따라서, 상기 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부는 조합하여 조성물의 건조 질량의 1 내지 100% w/w 범위에서 존재할 수 있다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부는 조합하여 조성물의 건조 질량의 1 내지 90% w/w의 범위에서, 예를 들어 5 내지 80%, 10 내지 75%, 20 내지 70%, 30 내지 65%w/w, 예를 들어 조성물의 건조 질량의 약 68 또는 69% w/w의 범위에서 존재할 수 있다. 따라서, 개개 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부는 조성물의 건조 질량의 0.001 내지 80% w/w의 범위에서, 예를 들어 조성물의 건조 질량의 0.0001 내지 75%, 0.001 내지 70%, 0.01 내지 60% w/w, 0.05 내지 50% w/w에서 존재할 수 있다. 본 명세서에 기재된 바와 같이, 조성물은 단계 (g)에서 본 발명에 따른 사용을 위해 희석될 수 있다.

본 발명의 추가 양태에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물은 치료법(therapy)(혹은 요법)에서 사용하기 위한 것이다.

상기 언급한 바와 같이, 본 발명의 조성물 중의 폴리펩타이드 또는 상기 폴리펩타이드의 일부는 피부를 보습화 및/또는 박피시킴으로써 피부 이상증, 장애 또는 병태의 치료에서 치료적 특성을 나타낸다.

치료될 바람직한 피부 이상증, 병태 또는 장애는 건성 피부, 각질이 바람직한 것보다 더 두꺼운 피부, 예를 들어 과각화증 병태, 또는 표피에서 바람직하지 않은 색소형성을 지니는 피부, 예를 들어, 기미, 검버섯, 주근깨 또는 갈색무늬이다. 치료는 미용적이며, 예를 들어 정상이지만 건성인 피부 또는 비후화된 피부(예컨대, 굳은살, 티눈 또는 과각화 사마귀)의 치료 또는 색소형성 장애, 예컨대 기미의 치료, 또는 치료적, 예를 들어 여드름, 습진, 건선 또는 통증을 야기하는 사마귀를 치료하는 것일 수 있다.

본 명세서에 언급되는 바와 같은 "장애"는 정상 유기체에 비한 증상 또는 무증상 유기체에서의 근본적인 병리학적 장애를 지칭하며, 예를 들어 감염 또는 후천적 또는 선천적 유전자 결함으로부터 초래될 수 있다. "이상증" 또는 "병태"는 병리학적 장애의 결과로서가 아닌 정상의 최적의 피부에 비한 피부에서의 불규칙 또는 결함을 지칭한다. 결함/불규칙은 대신에 연령, 손상, 환경 인자, 호르몬 수준, 의약, 외부에 적용된 또는 섭취된 물질, 유전적 병태 또는 불규칙을 초래하는 피부의 이상증 작용을 야기하는 다양한 다른 인자로부터 초래될 수 있다.

장애, 이상증 또는 병태는 단지 미용적 또는 의학적 치료를 필요로 하는 비미용적인 것 또는 이들의 조합일 수 있다.

본 명세서에 지칭되는 바와 같은 "미용적"은 질환 또는 장애를 치유, 치료 또는 예방하지는 않지만, 대신에 피부관리 제품으로서 작용하거나 또는 피부 외관, 예를 들어 피부의 색, 질감 또는 수분 함량을 변형 또는 개선시키는 처리를 지칭하는 것으로 의도된다.

본 명세서에 기재된 바와 같은 의학적 치료에서 사용되는 "비-미용적"(또는 의학적) 성분은 장애, 예를 들어 통증 또는 불편함의 하나 이상의 증상을 치유, 완화, 치료 또는 예방하기 위한 작용을 한다.

본 명세서에 기재된 치료의 기반은 본 명세서에 개시된 바와 같은 부화 효소 및 알 껍질 폴리펩타이드의 피부 보습 및 박피 효과이다. 이들 효과는 본 명세서에 제공된 실시예에 나타내었다.

따라서 부화 효소 및 알 껍질 폴리펩타이드를 포함하는 조성물의 보습 및/또는 박피 특성에 기반한 치료가 생각된다.

따라서 본 발명은 동물의 피부의 박피 및/또는 보습의 미용적 또는 비미용적 방법을 제공하되, 본 명세서에서 이후에 기재되는 바와 같은 미용적 또는 약제학적 조성물은 상기 동물에게 투여된다.

따라서, 상기와 관련하여, 본 발명은 동물의 피부를 박피 및/또는 보습화하는 미용적 또는 비-미용적 방법을 제공하되, 미용적 또는 약제학적 조성물은 상기 동물에게 투여되고, 상기 조성물은 본 명세서에 기재된 방법에 의해 얻어지거나 또는 얻을 수 있다.

본 명세서에 언급된 바와 같은 "박피하는"은 상피 표면의 표층 세포를 제거하는 것이며 피부에서의 표피 각질층의 스케일링 또는 낙설(desquamation)과 동일시된다. 본 명세서에서 지칭되는 "보습화"는 피부로부터의 물의 손실을 방지하는 보습제뿐만 아니라 피부에 도포될 때 물을 끌어당기고 보유하는 보습제(습윤제) 및 (결함있는 낙설을 개선시키는) 연화제를 아우른다.

대안적으로 언급된, 본 발명은 동물의 피부를 박피 및/또는 보습화하는데 사용하기 위한 본 발명에 기재된 바와 같은 미용적 또는 약제학적 조성물을 제공한다. (조성물은 대안적으로 해당 목적을 위한 의약을 제조하기 위해 사용될 수 있다)

상기 언급한 바와 같이, 이러한 박피 및/또는 보습화 특성은 다양한 피부 이상증, 장애 또는 병태를 치료 또는 예방하는데 유리하다.

바람직한 양태에서, 치료 또는 예방될 피부 이상증, 병태 또는 장애는 건성 피부이다. 이는 보습화 및/또는 박피에 의해 치료될 수 있다.

본 명세서에서 지칭되는 바와 같은 "건성 피부"는 종종 미세한 주름의 패턴, 스케일링 및 가려움을 특징으로 하는 수분 또는 피지가 없는 표피를 지칭한다. 건성 피부는 그 자체가 피부 병태로서 생길 수 있거나(예를 들어, 노화, 열/냉기/건조 손상에 기인) 또는 일광 노출, 습진, 접촉성 피부염, 건선 또는 어린선(피부의 뚜렷한 벗겨짐을 야기하는 유전선 병태)과 같은 피부 장애 또는 병태의 증상이 있을 수 있다.

추가 바람직한 양태에서, 치료 또는 예방될 이상증, 병태 또는 장애는 피부의 두꺼운 각질층이다. 이는 보습화 및/또는 박피에 의해 치료될 수 있다.

피부의 이러한 비후화된 각질은 영역의 반복적인 문지름에 기인하여 피부의 비후화된 상부층을 구성하는 보호 패드인 굳은살 또는 티눈 또는 피부 상의 사마귀와 같은 병태로 생길 수 있다. 이러한 방법은 또한 그의 병리에서 케라틴화를 수반하는 여드름을 치료 또는 예방하기 위해 사용될 수 있다. 피부의 비후화된 각질층은 그 자체가 병태일 수 있거나 또는 피부 병태 또는 장애의 증상일 수 있다.

추가 바람직한 양태에서, 치료 또는 예방될 이상증, 병태 또는 장애는 피부의 색소형성 장애 또는 이상증이다. 이는 박피에 의해 치료될 수 있다.

피부의 색소형성 장애 또는 이상증은 노화, 호르몬 변화, 유전적 인자, 질환 또는 일광 또는 다른 손상의 결과로서 생길 수 있다. 변용된 색소형성은 국소적인 과량의 멜라닌세포 또는 멜라닌세포 활성의 증가 또는 둘 다로부터 초래될 수 있다. 색소형성 장애는 간, 일광 또는 검버섯(일광흑자) 및 다른 잡티, 예컨대 주근깨를 포함한다.

대안적으로 언급하면, 따라서 본 발명은 동물의 피부의 병태 또는 장애를 치료 또는 예방하는 미용적 또는 비-미용적 방법을 제공하되, 상기 피부는 비정상적으로 건성이거나, 피부의 각질층은 비정상적으로 비후화되거나 또는 피부는 색소형성 장애를 가지며, 본 명세서에 기재한 바와 같은 미용적 또는 약제학적 조성물은 상기 동물에게 투여된다. 상기 병태 또는 장애는 바람직하게는 본 명세서에서 앞서 기재된 바와 같다.

본 명세서에 지칭되는 바와 같은 "비정상"은 정상의 최적의 피부, 즉, 건강하고, 수화된, 정상적으로 색소형성되고 노화되지 않은 피부에 비교하여 결정된다.

추가적인 대안의 언급에서, 본 발명은 동물의 피부의 병태 또는 장애를 치료 또는 예방하는 미용적 또는 비-미용적 방법에서 사용하기 위해 본 명세서에 기재된 바와 같은 미용적 또는 약제학적 조성물을 제공하되, 상기 피부는 비정상적으로 건성이거나, 피부의 각질은 비정상적으로 두껍거나 또는 피부는 색소형성 장애를 가진다. (화합물 또는 조성물은 대안적으로 해당 목적을 위해 의약을 제조하기 위해 사용될 수 있다)

본 발명의 조성물은 피부 모공 크기를 감소시킴에 있어 특히 유용한 것으로 발견되었다. 이와 관련하여, 여드름은 모공 내에서 죽은 피부 세포가 쌓일 때 부분적으로 생긴다(피지선의 과케라틴화). 본 발명의 조성물은 모공 내에서 피부 세포의 쉐딩(shedding)을 정상화시키고 유분 및 박테리아와 함께 피부 병변을 생성할 수 있는 막힘, 예를 들어 구진 및 고름 물집과 같은 염증 병변 및 블랙 헤드 및 화이트헤드와 같은 비염증 병변을 방지하는 것이 발견되었다. 따라서, 본 명세서에 정의된 조성물은 피부 모공 크기를 감소시키는 미용적 또는 비미용적 방법에서 사용될 수 있다.

대안적으로 검토하면, 본 발명의 조성물은 여드름, 예를 들어 구진, 고름 물집, 블랙 헤드 및/또는 화이트헤드와 같은 염증 및/또는 비염증 피부 병변을 치료 또는 예방하는 미용적 또는 비-미용적 방법으로 사용될 수 있다. (화합물 또는 조성물은 대안적으로 해당 목적을 위한 의약을 제조하기 위해 사용될 수 있다.)

바람직한 양태에서, 의학적 및/또는 미용적 용도는 피부에 대한 국소 투여에 의해 달성된다.

따라서, 특히 바람직한 양태에서, 본 명세서에 정의되는 미용적 또는 약제학적 조성물은 피부가 비정상적으로 건성이거나, 피부의 각질이 비정상적으로 두껍거나 또는 색소형성 결함이 존재하는 장애, 예를 들어 굳은살, 티눈, 사마귀, 습진, 접촉성 피부염, 건선, 어린선, 여드름 및 기미를 치료하기 위해 사용될 수 있다.

추가의 특정 바람직한 양태에서, 본 명세서에 정의된 미용적 또는 약제학적 조성물은 피부가 비정상적으로 건성인 장애를 치료하기 위해 사용될 수 있다.

본 명세서에 사용되는 바와 같은, "치료하는"은 피부가 상기 병태 또는 장애로 고통받지 않는 또는 상기 치료를 받지 않은 상기 개체의 신체의 상이한 부분에 존재하는 증상 또는 효과에 비해 또는 상기 치료를 받지 않은 대응하는 정상 개체에 비해 상기 병태 또는 장애의 하나 이상의 증상 또는 효과, 예를 들어 건성 또는 비후화된 피부의 존재 또는 정도, 색소형성의 정도 또는 면적, 가려움 또는 통증 등의 바람직하게는 정상 수준으로 감소, 완화 또는 제거를 지칭한다.

"예방하는"은 해당 증상 또는 효과의 개시의 정도 또는 타이밍(예를 들어, 지연)의 절대적 방지, 또는 예방 또는 완화를 지칭한다. 예를 들어, 건성, 비후화 또는 비정상적으로 색소형성된 피부에 의해 전형화된 병태는 이러한 병태의 출현 전에 본 발명의 조성물의 주기적 적용에 의해 예방될 수 있다.

본 발명에 따른 치료 또는 예방 방법은 유리하게는 장애 또는 병태를 치료 또는 예방하는데 및/또는 보습화 또는 박피를 달성하는데 효과적인 하나 이상의 활성 성분의 투여와 조합될 수 있다. 따라서, 본 발명의 미용적 또는 약제학적 조성물은 이러한 활성 성분 중 하나 이상을 추가적으로 함유할 수 있다.

본 발명의 또한 추가 양태에 따르면, 본 발명자들은 본 명세서에 정의된 바와 같은 미용적 또는 약제학적 조성물 및 선택적으로 바람직하게는 본 명세서에 기재된 바와 같은 인간 또는 동물 요법에서 동시, 별개 또는 순차적 사용을 위해 조합된 제제로서 하나 이상의 추가적인 활성 성분을 제공한다.

본 발명의 조성물은 용이하게 입수가능한 성분을 사용하여 당업계에 잘 공지된 기법에 따라 하나 이상의 생리적으로 허용가능한 담체, 부형제 및/또는 희석제와 함께 전통적인 방법으로 제형화될 수 있다.

본 명세서에 기재된 조성물은 용이하게 입수가능한 성분을 사용하여 당업계에 잘 공지된 기법에 따라 하나 이상의 생리학적으로 허용가능한 담체, 부형제 및/또는 희석제와 함께 전통적인 방법으로 제형화될 수 있다. 조성물은 수계, 글라이세린계, 알코올(20%까지)계, 아크릴레이트계 오일/물 에멀전, 잔탄검계 오일/물 에멀전 또는 물/오일 에멀전으로서, 예를 들어 pH 3.5 내지 11, 바람직하게는 pH 5.5 내지 9로서 제공될 수 있다.

따라서, 조성물은 선택적으로 조합 제제로서 다른 활성 성분과 함께, 하나 이상의 전통적인 담체, 희석제 및/또는 부형제와 함께 혼입되어 전통적인 갈레닉(galenic) 제제, 예컨대 정제, 알약, 분말, 로젠지, 사쉐, 카셰(cachet), 엘릭시르, 현탁액(주사액 또는 주입 유체로서), 에멀전, 용액, 시럽, 에어로졸(고체로서 또는 액체 매질 중에서), 연고, 연질 및 경질 젤라틴 캡슐, 좌약, 멸균 주사용액, 멸균 포장 분말 등과 함께 혼입될 수 있다. 생분해성 중합체(예컨대, 폴리에스터, 폴리무수물, 폴리락트산 또는 폴리글라이콜산)는 또한 고체 이식물용으로 사용될 수 있다. 조성물은 냉동 건조, 과냉각 또는 퍼마자임(Permazyme)의 사용에 의해 안정화될 수 있다. 이러한 조성물은 본 발명의 조성물(즉, 단계 (g)에 따라 제조됨)을 형성한다.

적합한 부형제, 담체 또는 희석제는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아검, 인산칼슘, 탄산칼슘, 락트산칼슘, 옥수수 전분, 알긴산염, 트래거캔스, 젤라틴, 규산칼슘, 미정질셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물 시럽, 물, 물/에탄올, 물/글라이콜, 물/폴리에틸렌, 글라이콜, 프로필렌 글라이콜, 메틸 셀룰로스, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필 하이드록시벤조에이트, 탈크, 스테아르산마그네슘, 광유 또는 지방 물질, 예컨대 경지 또는 이들의 적합한 혼합물이다. 지속 방출 제형을 얻기 위한 작용제, 예컨대 카복시폴리메틸렌, 카복시메틸 셀룰로스, 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트 또는 폴리비닐아세테이트가 또한 사용될 수 있다.

조성물은 추가적으로 윤활제, 습윤제, 유화제, 점성 증가제, 과립화제, 붕해제, 결합제, 삼투 활성제, 현탁제, 보존제, 감미제, 향미제, 흡착 향상제(예를 들어, 표면 침투제, 예를 들어 담즙염, 레시틴, 계면활성제, 지방산, 킬레이터), 항갈변제, 유기 용매, 항산화제, 안정제, 유화제, 실리콘, 알파-하이드록시산, 완화제, 소포제, 보습제, 비타민, 향료, 이온성 또는 비이온성 점증제, 계면활성제, 충전제, 이온성 또는 비이온성 점증제, 금속이온봉쇄제, 중합체, 추진제, 알칼리화제 또는 산성화제, 유백제, 착색제 및 지방 화합물 등을 포함할 수 있다. 일부 이들 구성성분은 이하에 더욱 상세하게 기재된다.

미용적 또는 약제학적 조성물 중의 다른 활성 성분 또는 구성성분은 무기염, 비타민, 효소, 단백질, 펩타이드, 아미노산, 지질, 다당류, 자외선차단제로서 적합한 물질, 화학적 박피제, 추출물, 피부 컨디셔닝제, 항산화제 및 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 추가적인 단백질의 예는 콜라겐 및/또는 이들의 유도체(예를 들어, 상기 정의된 바와 같은 이들의 일부), 세포성장을 촉진할 수 있는 단백질 또는 펩타이드, 당단백질 1, 당단백질 2 및 라미닌을 포함한다.

본 발명의 조성물은 과일효소(예를 들어, 브로멜라닌), 과산화물제거효소, 과산화효소, 하이알루로니다제 및 뮤코폴리사카리다제 중 하나 이상을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 효소와 함께 제공될 수 있다.

펩타이드는 D,L-카르노신, D-카르노신, L-카르노신, 안세린 및 매트릭실(펜타펩타이드 유도체) 중 임의의 하나 이상으로부터 선택될 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다.

아미노산은 L-알라닌, L-알기닌, L-아스파라긴, L-아스팔트산, L-시스테인, L-시스틴, 글라이신, L-글루타민, L-글루탐산, L-히스티딘, L-아이소류신, L-류신, L-라이신, L-메티오닌, L-페닐알라닌, L-프롤린, L-세린, L-트레오닌, L-트립토판, L-타이로신 및 L-발린 및 표 1에 정의된 바와 같은 비자연적으로 생기는 아미노산을 포함하는 이들의 유도체 중 하나 이상으로부터 선택될 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다.

항산화제로서 특히 바람직한 아미노산은 글라이신, 라이신, 알기닌, 시스테인, 시스틴, 히스티딘, 타이로신 및 트립토판 중 하나 이상으로부터 선택될 수 있다.

본 발명의 조성물은 지방, 오일, 왁스 등을 포함하는 하나 이상의 지질을 포함할 수 있다. 적합한 극성 오일은, 예를 들어 레시틴 및 지방산 트라이글라이세라이드의 그룹으로부터의 오일, 즉, 8 내지 24개, 특히 12 내지 18개의 탄소 원자의 쇄 길이를 지니는 포화 및/또는 불포화, 분지 및/또는 비분지 알칸카복실산이다. 지방산 트라이글라이세라이드는, 예를 들어, 합성, 반합성 및 천연 오일, 예컨대 올리브유, 해바라기유, 대두유, 땅콩유, 유채씨유, 아몬드유, 팜유, 코코넛유, 피마자유, 밀배아유, 포도씨유, 엉겅퀴유, 달맞이 종자유, 마카다미아 너트유 등으로부터 유리하게 선택될 수 있다.

대안적으로 또는 추가적으로 오일은 휘발성 오일, 비휘발성 오일 또는 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 비휘발성 오일은 다음의 정의 중 적어도 하나를 충족시키는 오일을 포함한다: (a) 오일은 25℃ 및 1 대기압에서 0.2㎜Hg 이하의 수증기압을 나타내고; (b) 오일은 적어도 300℃의 1 대기압에서 비등점을 가진다. 휘발성 오일은 상기 정의한 바와 같은 "비-휘발성"이 아닌 물질을 포함한다.

비휘발성 오일은 비휘발성 실리콘 오일, 비휘발성 탄화수소 오일 및 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 적합한 비휘발성 실리콘 오일은 선형 폴리메틸실록산을 포함하고, 바람직하게는, 비-휘발성 실리콘 오일은 고분자량 디메티콘이다. 상업적으로 입수가능한 선형 폴리메틸실록산의 예는 다우 코팅 코포레이션사(Dow Corning Corporation)의 DC 200 유체 20Cst, DC 200 유체 100Cst, DC 200 유체 350Cst를 포함한다.

적합한 비-휘발성 탄화수소 오일은 다이글라이세린 또는 트라이글라이세린의 분지 에스터 또는 1,2,3,4 부탄 트라이올 또는 에리트리톨, 다이에리트리톨 또는 트라이 에리트리톨의 에스터를 포함한다. 바람직하게는, 비-휘발성 탄화수소 오일은 에리트리틸 트라이에틸헥사노에이트(닛산 올리오사(Nisshin Oilio)제의 살라코스(Salacos) E-38로서 입수가능) 및 폴리글라이세릴-2 트라이아이소스테아레이트(닛산 올리오사제의 코스몰(Cosmol) 43V로서 입수가능), 다이에틸 헥실 카보네이트(데구사(Degussa)제의 Tegosoft DEC로서 입수가능), 디카프릴 에터(코그니스 아게사(Cognis AG)로부터 세티올 OE(Cetiol OE)로서 입수가능), 디카프릴 카보네이트(코그니스 아게사로부터 세티올 CC(Cetiol CC)로서 입수가능), 아이소노닐 아이소노나네이트(셉픽사(Seppic)로부터 라놀(Lanol) 99로서 입수가능), 트라이데실 네오펜타노에이트(인터네셔널 스페셜티 프로덕츠사(International Speciality Product)제의 세라필(Ceraphyl) 55로서 공급), 또는 이들의 혼합물을 포함한다.

휘발성 오일은 휘발성 실리콘 오일, 기능화된 휘발성 탄화수소 오일과 비기능화된 휘발성 탄화수소 오일 둘 다 및 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 본 발명에서 유용한 휘발성 오일은 포화 또는 불포화될 수 있거나, 직쇄 또는 분지쇄 또는 환식 구조를 가질 수 있거나, 또는 이들 특징 중 임의의 하나 이상을 가질 수 있다.

휘발성 탄화수소 오일의 예는 폴리데칸, 예컨대 아이소도데칸 및 아이소데칸(예를 들어, 프레스퍼스 인코포레이티드사(Presperse Inc.)로부터 입수가능한 퍼메틸(Permethyl)-99A) 및 C7-C15 아이소파라핀(예컨대, 엑손 케미칼스사(Exxon Chemicals)로부터 입수가능한 아이소파 시리즈(Isopar Series))을 포함한다.

휘발성 실리콘 오일은 사이클로펜타실록산, 사이클로헥사실록산 또는 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 상업적으로 입수가능한 휘발성 환식 실리콘 오일의 예는 다우 코닝 코포레이션사로부터의 DC 244, DC 245, DC 344, 및 DC 345; 모멘티브 퍼포먼스 머테리얼스사(Momentive Performance Materials)로부터의 SF-1204 및 SF-1202 실리콘 유체; 제너럴 일렉트릭 코포레이션사로부터의 GE 7207 및 7158); 및, SWS 실리콘 코포레이션사(SWS Silicones Corp.)로부터의 SWS-03314를 포함한다.

선형 휘발성 실리콘 오일은 선형 폴리메틸실록산일 수 있다. 상업적으로 입수가능한 선형 폴리메틸실록산의 예는 다우 코닝 코포레이션사로부터의 DC 200 유체, 5Cst를 포함한다.

본 발명의 조성물은 음이온성 다당류(예를 들어, 알긴산, 펙틴, 잔탄검, 하이알루론산, 콘드로이틴 설페이트, 아라비아검, 카라야 검, 트래거캔스검, 카복시메틸-키틴, 셀룰로스검, 글라이코사미노글라이칸), 양이온성 다당류(예를 들어, 키토산, 아세틸화된 키토산, 양이온성 구아검, 양이온성 하이드록시에틸셀룰로스(HEC)), 비이온성 다당류(예를 들어, 전분, 덱스트린, 구아검, 셀룰로스 에터, 예컨대 하이드록시에틸셀룰로스, 메틸셀룰로스 및 나이트로셀룰로스), 양쪽성 다당류(예를 들어, 카복시메틸키토산, N-하이드록시-다이카복시에틸-키토산, 변형된 감자 전분) 및 소수성 다당류(예를 들어, 세틸 하이드록시에틸셀룰로스, 폴리쿼터늄24) 중 하나 이상으로부터 선택된 하나 이상의 다당류를 추가로 포함할 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다.

조성물은 유기 자외선 차단제와 같은 자외선차단제로서 적합한 물질, 예를 들어 신남산 유도체를 추가로 포함할 수 있다. 유기 자외선차단제 활성은 친수성 유기 자외선차단제, 소수성 유기 자외선차단제 또는 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 자외선차단제의 적합한 예는 문헌[CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook, 7th edition volume 2, pp.1672, edited by Wenning and Mc Ewen (The Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Association, Inc., Washington, D.C. 1997)]에서 찾을 수 있다.

유기 자외선차단제는 알킬 β,β-다이페닐아크릴레이트 유도체, α-사이아노 β,β-다이페닐아크릴레이트 유도체, 안트라닐레이트 유도체, 벤조페논 유도체, 캄퍼 유도체, 다이벤조일메탄 유도체, p-아미노벤조산 유도체, 살리실산 유도체, 트라이아진 유도체, 또는 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 예를 들어, 소수성 유기 선스크린은 4-(1,1-다이메틸에틸)-4'-메톡시다이벤조일메탄; 4-아이소프로필다이벤조일메탄; 4-(1,1-다이메틸에틸)-4'-메톡시다이벤조일메탄, 2-에틸헥실-2-사이아노-3,3-다이페닐아크릴레이트, 또는 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다.

뷰틸 메톡시다이벤조일메탄 또는 아보벤존(Avobenzone)으로도 알려진 상업적으로 입수가능한 4-(1,1-다이메틸에틸)-4'-메톡시다이벤조일메탄의 예는 지보당-루르 에스. 에이.사(Givaudan Roure S. A.)로부터의 파르솔(Parsol) TM 1789 및 머크 앤 코포레이션, 인코포레이티드사(Merck & Co., Inc.)로부터의 유솔렉스(Eusolex) TM 9020을 포함한다. 아이소프로필다이벤조일메탄으로서도 알려진 상업적으로 입수가능한 4-아이소프로필다이벤조일메탄의 예는 머크 앤 코포레이션, 인코포레이티드사로부터의 유솔렉스 TM 8020을 포함한다. 옥토크릴렌으로서도 알려진 상업적으로 입수가능한 2-에틸헥실-2-사이아노-3,3-다이페닐아크릴레이트의 예는 BASF사로부터의 유비널(Uvinul) N539 SG; 및 로나/머크(Rona/Merck)사로부터의 유솔렉스 OCR을 포함한다.

일부 실시형태에서, 친수성 유기 자외선차단제는 2-페닐벤즈이미다올-5-설폰산일 수 있다. PBSA로서도 알려진 상업적으로 입수가능한 2-페닐벤즈이미다올-5-설폰산의 예는 로나/머크사로부터의 유솔렉스 232를 포함한다.

신남산 유도체 자외선차단제의 적합한 예는 문헌[CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook, 7th edition volume 2, pp.1672, edited by Wenning and Mc Ewen (The Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Association, Inc., Washington, D.C. 1997)]에서 찾을 수 있다. 신남산 유도체는 2-에틸헥실-p-메톡시신나메이트, 디에탄올아민 메톡시신나메이트, 2-에톡시에틸-p-메톡시신나메이트, 또는 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 예를 들어, 신남산 유도체는 2-에틸헥실-p-메톡시신나메이트일 수 있다.

조성물은 알파 하이드록시산(AHA), 베타 하이드록시산(BHA) 또는 폴리-하이드록시산, 예컨대 살리실산, 글라이콜산, 시트르산 및 말산 중 임의의 하나 이상으로부터 선택되지만, 이들로 제한되지 않는 화학적 박피제를 함유할 수 있다.

조성물 중에 혼입될 수 있는 추출물은, 예를 들어 플라보노이드(예를 들어, 글라이코실 루틴, 페룰산, 카페인산), 푸르푸릴리덴 글루시톨, 뷰틸화된 하이드록시 톨루엔, 뷰틸화된 하이드록시아니솔, 노르다이하이드로구아이아레트 수지산, 노르다이하이드로구아이아레트산, 트라이하이드록시뷰티로페논 및 이들의 유도체를 포함할 수 있는 식물 추출물을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 발명의 조성물에서 사용하기 위한 특정 식물 추출물은 알로에 베라 추출물, 인삼 추출물 및 호스테일 추출물을 포함한다.

인삼 추출물은 인삼(Panax ginseng)의 뿌리를 친수성 용매(특히, 물, 에탄올, 글라이콜 또는 이들의 임의의 혼합물)로 추출함으로써 얻어질 수 있다. 추출물은 사포닌, 스테롤, 탄수화물, 펙틴, 비타민, 무기염 및 지질을 함유한다.

쇠뜨기 추출물은 에퀴세툼 아르벤스(Equisetum arvense)의 전체 허브를 친수성 용매(예를 들어, 물, 에탄올, 글라이콜 또는 이들의 임의의 혼합물)로 추출함으로써 얻어질 수 있다. 추출물은 실리케이트, 플라비노이드, 사포노사이드, 카페인산 및 페룰산을 함유한다.

조성물은 피부 컨디셔닝제를 추가로 포함할 수 있다. 피부 컨디셔닝제는 습윤제, 박피제, 완화제 또는 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 습윤제는 글라이세린, 프로필렌 글라이콜, 다이프로필렌 글라이콜, 폴리프로필렌 글라이콜, 폴리에틸렌 글라이콜 글라이콜, 솔비톨, 하이드록시프로필 솔비톨, 헥실렌 글라이콜, 1,3-뷰틸렌 글라이콜, 1,2,6-헥산트라이올, 에톡실화된 글라이세린, 프로폭실화된 글라이세린 또는 이들의 혼합물과 같은 다가 알코올을 포함한다.

본 발명의 조성물에서 제공될 수 있는 항산화제의 예는 아미노산, 비타민, 무기염, 카로테노이드, 펩타이드, 티올, 설폭시민 화합물, 킬레이터, 불포화 지방산, 페놀 화합물, 식물 추출물, 스틸벤, 요산, 만노스, 클로로겐산, 이미다졸(예를 들어, 유로칸산), 푸르푸릴리덴솔비톨, 유비퀴논, 유비퀴놀, 플라스토퀴논, 피토스테롤 및 이들의 유도체(예를 들어, 염, 에스터, 에터, 당, 뉴클레오타이드, 뉴클레오사이드, 펩타이드 및/또는 지질 유도체)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않으며, 이들 중 일부는 상기 기재되어 있다.

비타민은 비타민 A 및 이의 유도체(예를 들어, 레티노이드 또는 레티놀 또는 그들의 유도체, 예컨대 레티닐 팔미테이트 또는 레티닐 프로프리오에이트), 바이오틴, 폴산, 판토텐산칼슘, 니코틴아마이드, 피리독신 HCl, 피리독살 HCl, 리보플라빈, 티아민 HCl, 티미딘, 비타민 B12, 비타민 B3(예를 들어, 니아신아마이드), 비타민 B5(예를 들어, 판테놀), 비타민 C 및 이의 유도체(예를 들어, 아스코빌 팔미테이트, Mg 아스코빌 포스페이트, 아스코빌 아세테이트), 토코페롤 및 유도체(예를 들어, 비타민 E 아세테이트) 중 임의의 하나 이상으로부터 선택될 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다.

무기염은 몰리브데네이트(예를 들어, (NH₄)OMo₇O₂₄) 알루미늄(예를 들어, AlCl₃), 칼슘(예를 들어, CaCl₂), 코발트(예를 들어, CoCl₂), 크로뮴(예를 들어, CrK(SO₄)), 구리(예를 들어, CuSO₄), 철(예를 들어, Fe(NO₃)₃, FeSO₄), 칼륨(예를 들어, KCl), 마그네슘(예를 들어, MgCl₂), 망간(예를 들어, MnCI₂, MnSO₄), 인산염(예를 들어, Na₂HPO₄, NaH₂PO₄), 탄산염(예를 들어, NaHCO₃), 규산염(예를 들어, Na₂SiO₃), 나트륨(예를 들어, NaCl), 바나듐산염(예를 들어, NH₄VO₃), 니켈(예를 들어, NiCl₂), 주석(예를 들어, SnCl₂), 아연(예를 들어, ZnO, ZnSO₄), 셀레늄(예를 들어, 셀레노메티오닌, 엡셀렌, H₂SeO₃, Na₂SeO₃), 황산염 및 질산염 중 임의의 하나 이상의 염으로부터 선택될 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다.

카로테노이드는 카로텐, 예를 들어 α-카로텐, β-카로텐, ψ-라이코펜, 피토엔 등 및 이들의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택될 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다.

티올은 오로티오글루코스, 프로필티오유라실, 티오레독신, 리포산, 글루타티온, 시스테인, 시스틴, 시스타민 및 그들의 글라이코실, N-아세틸, 메틸, 에틸, 프로필, 아밀, 뷰틸 및 라우릴, 팔미토일, 올레일, γ-리놀레일, 콜레스테릴 및 글라이세릴 에스터 및 이들의 염, 다이라우릴 티오다이프로피오네이트, 다이스테아릴 티오다이프로피오네이트, 티오다이프로피온산 및 이들의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택될 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다.

설폭시민 화합물은 호모시스테인 설폭시민, 뷰티오닌 설폰, 펜타-, 헥사-, 헵타티오닌 설폭시민 중 임의의 하나 이상으로부터 선택될 수 있지만, 이들로 제한되지 않으며, 그들이 매우 낮은 투약량(예를 들어, p㏖ 내지 μ㏖/㎏)으로 제공되도록 조성물 중에 포함될 수 있다.

킬레이터는 아포페리틴, 데스페랄, 락토페린, α-하이드록시 지방산, 팔미트산, 피트산, α-하이드록시산(예를 들어, 시트르산, 락트산, 말산), 흄산, 담즙산, 담즙산 추출물, 빌리루빈, 빌리베르딘, EDTA, EGTA 및 이들의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택될 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다.

포화 지방산은 γ-리놀렌산, 리놀레산, 올레산 및 이들의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택될 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다.

스틸벤 및 이의 유도체는 스틸벤 옥사이드 및 트랜스-스틸벤 옥사이드를 포함한다.

다양한 추가적인 선택적 활성 성분은 본 발명의 조성물 내로 혼입될 수 있다. 이들 추가적인 성분의 비제한적 예는 추가적인 스킨 케어 활성제, 예컨대 파르네솔, 비사볼롤, 피탄트라이올, 유레아, 구아니딘(예를 들어, 아미노 구아니딘); 헥사미니딘 화합물, 이의 염 또는 유도체; 당 아민; 셀프-태닝제(예를 들어, 데하이드록시아세톤); 구조화제; 친수성 겔화제; 항-여드름 의약(레조르시놀, 살리실산 등); 피부 진정 및 치유제, 예컨대 알란토인 등; 및 미적 목적에 적합한 작용제, 예컨대 에센셜 오일, 향료, 피부 센세이트, 불투명화제, 방향족 화합물(예를 들어, 정향유, 멘솔, 캄퍼, 유칼립투스 오일, 및 유게놀)을 포함한다. 본 명세서에 기재된 화합물은 당업계에 잘 공지된 기술을 사용함으로써 신체에 투여 후에 활성 성분의 빠른, 지속 또는 지연된 방출을 제공하도록 제형화될 수 있다.

조성물은, 예를 들어 활성 성분이 흡수, 흡착, 혼입 또는 결합될 수 있는 에멀전으로서 또는 리포좀, 니오좀, 미소구체, 나노입자 등에서 특정 세포 또는 조직을 전달하게 하는 또는 표적화하기 위한 임의의 적절한 제형일 수 있다. 이는 생성물을 불용성 형태로 효과적으로 전환시킬 수 있다. 이들 미립자 형태는 안정성(예를 들어, 분해)과 전달 문제를 둘 다 극복할 수 있다.

용액, 현탁액, 겔 및 에멀전의 사용이 바람직하며, 예를 들어 활성 성분은 물, 기체, 수계 액체, 오일, 겔, 에멀전, 수중유 또는 유중수 에멀전, 분산물 또는 이들의 혼합물 중에서 운반될 수 있다.

유화제는 비이온성 유화제, 음이온성 유화제, 양이온성 유화제, 쌍성 유화제, 양쪽성 유화제 또는 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 유화제는 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 알루어드 출판사(Allured Publishing Corporation)에 의해 공개된 문헌[McCutcheon's, Detergents and Emulsifiers, North American Edition (1986)] 참조.

미용적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 담체가 실리콘 중의 물 에멀전일 때, 유화제는 바람직하게는 폴리옥시알킬렌 공중합체, 폴리글라이세릴 공중합체 또는 이들의 혼합물로부터 선택된다. 실리콘 폴리에터로도 알려진 폴리옥시알킬렌 공중합체는 미국 특허 제4,268,499호에 상세하게 기재되어 있다. 상업적으로 입수가능한 폴리옥시알킬렌 공중합체의 예는, 다우 코닝 코포레이션사로부터의 DC5225C 또는 DC2-5185C(사이클로펜타실록산과의 배합물로서 입수가능한 PEG/PPG-18/18 디메티콘); 및 신에츠 인코포레이티드사로부터의 KF6017 또는 KF6028(PEG-9 디메티콘)을 포함한다. 상업적으로 입수가능한 폴리글라이세릴 유화제의 예는 신에츠 인코포레이티드사로부터의 KF6100 및 KF6104를 포함한다.

조성물은 국소(즉, 피부에) 투여에 대해 바람직하다.

국소 조성물은 겔, 크림, 연고, 스프레이, 로션, 살브, 스틱, 비누, 분말, 필름, 에어로졸, 폼(foam), 용액, 에멀전, 현탁액, 분산물, 예를 들어 비이온성 소수포 분산물, 밀크 및 당업계에서 임의의 다른 전통적인 미용적 또는 약제학적 형태를 포함한다.

연고, 겔 및 크림은, 예를 들어 적합한 증점제 및/또는 겔화제의 첨가에 의해 수성 또는 유성 베이스와 함께 제형화될 수 있다. 로션은 수성 또는 유성 베이스와 함께 제형화될 수 있고, 일반적으로 또한 하나 이상의 유화제, 분산제, 현탁제, 증점제 또는 착색제를 함유할 것이다. 분말은 임의의 적합한 분말 베이스의 도움으로 형성될 수 있다. 점적 및 용액은 또한 하나 이상의 분산제, 가용화제 또는 현탁제를 포함하는 수성 또는 비수성 베이스와 함께 제형화될 수 있다. 에어로졸 스프레이는 적합한 추진제의 사용과 함께 가압 팩을 이용하여 편리하게 전달된다.

일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 조성물은 폴리펩타이드 또는 조성물이 적용, 침윤 또는 화학적으로 결합된 생성물, 장치 또는 물질을 통해 피부에 국소적으로 투여될 수 있다. 이것 때문에, 붕대, 플라스터(예를 들어, 접착성 패치), 거즈, 수술용 테이프, 면봉 또는 다른 흡수성 물질, 예를 들어 퍼프, 플리스 또는 스펀지, 또는 지지 매트릭스가 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물로 코팅, 침윤 또는 화학적으로 결합될 수 있다. 예를 들어, 다수의 조성물은, 예를 들어 본 명세서에 참고로 포함되는 미국 특허 공개 제2008/0038300호, 미국 특허 공개 제 2009/0043236호, WO 2005/067499호 및 WO 2009/085302호에 잘 기재되어 있는 진피 패치를 사용하여 피부에 적용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물을 포함하는 재료는, 예를 들어 치료될 대상체에 의해 착용될 수 있는 장치의 형태일 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기재되는 바와 같은 조성물은 기저귀, 장갑, 양말 등의 모두 또는 부분을 형성하는 재료 또는 지지 매트릭스 상에 적용, 침윤 또는 화학적으로 결합될 수 있다.

따라서, 본 발명의 추가 양태는 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물로 코팅, 침윤 또는 화학적으로 결합된 생성물, 재료 또는 장치의 제공을 포함한다. 본 발명은 또한 본 명세서에 기재된 바와 같은 용도를 위해 이러한 생성물, 재료 또는 장치로 연장된다. 바람직하게는 상기 생성물은 붕대, 플라스터(예를 들어, 접착성 패치), 거즈, 수술용 테이프, 면봉이거나, 또는 상기 장치는 기저귀, 장갑 또는 양말이다.

미용적 또는 약제학적 조성물은 투여를 위한 설명서와 함께 용기, 포장 또는 디스펜서 내에 포함될 수 있다.

일부 실시형태에서, 조성물은 경구 또는 비경구 투여에 적합한 형태로 제공될 수 있다. 따라서 대안의 약제학적 형태는 선택적으로 하나 이상의 비활성의 전통적인 담체 및/또는 희석제와 함께, 예를 들어 옥수수 전분, 락토스, 수크로스, 미정질 셀룰로스, 스테아르산마그네슘, 폴리비닐피롤리돈, 시트르산, 타르타르산, 물, 물/에탄올, 물/글라이세롤, 물/솔비톨, 물/폴리에틸렌 글라이콜, 프로필렌 글라이콜, 스테아릴 알코올, 카복시메틸셀룰로스 또는 지방 물질, 예컨대 경질 지방 또는 이들의 적합한 혼합물과 함께 활성 성분을 함유하는 평범한 또는 코팅된 정제, 캡슐, 현탁액 및 용액을 포함한다.

본 명세서에 기재된 조성물 중의 활성 성분의 농도는 조성물의 공급원(즉, 상기 기재한 방법에 대한 출발 물질), 투여 방식, 치료 과정, 환자의 연령 및 체중, 미용적 또는 치료적 적응증, 치료될 신체 또는 신체 영역에 의존할 수 있으며, 선택에 따라 변하거나 또는 조절될 수 있다. 일반적으로, 그러나, 여과 단계 (f) 후에 본 발명의 방법에 따라 제조되는 조성물은 단계 (g)에서 0.001, 0.005, 0.01 또는 0.1 내지 50%, 예를 들어 0.005 내지 40%, 예를 들어 0.1 내지 25%, 예컨대 0.1 또는 0.5 내지 5, 예를 들어 1 내지 5%(w/w 또는 v/v)로 희석되어 단계 (f) 후에 투여를 위한, 특히 국소 투여를 위한 최종 제제, 예를 들어 조성물의 1% 또는 3% 용액을 제공한다.

추가적인 구성성분이 상기 기재한 방법에 의해 제조된 조성물, 예를 들어 본 명세서에서 상기 기재된 바와 같은 추가적인 보습제에 첨가될 때, 추가적인 성분은 0.0001, 0.0005, 0.001 또는 0.01 내지 50%, 예를 들어 0.0005 내지 40%, 예를 들어 0.01 내지 25%, 예컨대 0.1 또는 0.5 내지 5, 예를 들어 1 내지 5%(투여, 특히 국소 투여를 위한 최종 제제의 w/w)의 양으로 존재할 수 있다. 조성물에 대한 유효 단일 용량은 치료되는 포유류 동물에 따라서 국소로 적용되고, 단일 용량으로 취해질 때, 0.0001 내지 100㎎/㎠/일(조성물 중의 총 단백질), 예를 들어 0.1 내지 100 ㎎/㎠/일, 바람직하게는 0.0001 내지 10㎎/㎠/일, 예를 들어 0.1 내지 10 ㎎/㎠/일의 범위에 있을 수 있다.

투여는, 예를 들어 경구, 장, 경피, 협측, 직장 또는 국소 투여 또는 흡입에 의한 투여를 포함하는 의학 분야에 공지된 임의의 적합한 방법에 의할 수 있다. 바람직한 투여 형태는 경구로, 또는 가장 바람직하게는 국소로 투여될 것이다. 인식될 바와 같이, 경구 투여는 활성 성분이 분해가능하다면, 제한된다. 이러한 문제를 극복하기 위해, 성분은 앞서 언급한 바와 같이 안정화될 수 있다.

바람직하게는 액체 용액, 크림 또는 현탁액은 국소 투여용으로 사용될 수 있다.

조성물이 적용 또는 투여될 동물은 포유류로 제한된다. 바람직하게는 포유류는 영장류, 집에서 기르는 동물, 가축 및 실험실 동물이다. 따라서 바람직한 포유류 동물은 마우스, 래트, 토끼, 기니아 피그, 고양이, 개, 원숭이, 돼지, 소, 염소, 양 및 말을 포함한다. 특히 바람직하게는 조성물은 인간에 적용 또는 투여된다.

다음의 실시예는 단지 예시의 방법으로 제공하며, 언급되는 도면은 다음과 같다:
도 1은 본 발명의 방법에서 단계 (f)에서 제조한 1%의 부화액 조성물을 포함하는 겔(겔 B)로 1일 2회 처리의 4주 후에 미처리 피부와 비교한 피부 모공 직경에서의 (A) 평균 감소 및 (B) 상대적 감소를 도시하는 막대 차트를 도시한 도면.
도 2는 본 발명의 방법에서 단계 (f)에서 제조한 1%의 부화액 조성물을 포함하는 겔(겔 B)로 1일 2회 처리의 4주 후에 미처리 피부와 비교한 염증 피부 병변 수의 (A) 평균 감소 및 (B) 상대적 감소를 도시하는 막대 차트를 도시한 도면.
도 3은 본 발명의 방법에서 단계 (f)에서 제조한 1%의 부화액 조성물을 포함하는 겔(겔 B)로 1일 2회 처리의 4주 후에 미처리 피부와 비교한 비염증 피부 병변 수의 (A) 평균 감소 및 (B) 상대적 감소를 도시하는 막대 차트를 도시한 도면.
도 4는 본 발명의 방법에서 단계 (f)에서 제조한 3%의 부화액 조성물을 포함하는 겔(활성 겔)과 D-스쿠암(D-Squame) 시험을 사용하는 글라이콜산의 3% 용액을 포함하는 겔의 박피 효과를 비교하는 막대 차트(A)를 도시한 도면. 하부의 스코어는 더 적은 인설(scaliness), 즉, 증가된 박피를 나타낸다. (B)는 t0에서 및 5분 후에 활성 겔에 의해 처리된 시험 영역의 사진을 나타낸다.
도 5는 본 발명의 방법에서 단계 (f)에서 제조한 3%의 부화액 조성물을 포함하는 겔(겔 B)로 1일 2회 처리 3주 후에 미처리 피부와 비교한 피부 수화의 (A) 평균 증가 및 (B) 상대적 증가를 도시하는 막대 차트를 도시한 도면.
도 6은 본 발명의 방법에서 단계 (f)에서 제조한 3%의 부화액 조성물을 포함하는 겔로 1일 2회 처리 3주 후에 미처리 피부와 비교한 습진 또는 여드름의 중증도의 (A) 평균 시각적 평가 및 (B) 상대적 시각적 평가를 도시하는 막대 차트를 도시한 도면.
도 7은 본 발명의 방법에서 단계 (f)에서 제조한 3%의 부화 조성물을 포함하는 겔로 1일 2회 처리 3주 후에 미처리 피부와 비교한 염증 및 비염증 피부 병변 수의 (A) 평균 감소 및 (B) 상대적 감소를 도시하는 막대 차트를 도시한 도면.

실시예

실시예 1: 조성물의 제조

본 조성물을 연어 부화액으로부터 제조하였다. 부화액의 단백질 농도를 개선시키기 위해, 연어알을 부화전 최소 용적의 물에 옮겼다. 승온(실온)에 의해 또는 탈산소에 의해 고도로 동기화된 부화를 유도할 수 있으며(Oppen-Berntsen et al. 1990, Aquaculture, 86, pp. 417-430), 이것으로 조질의 폴리펩타이드 및 폴리펩타이드의 일부의 소 용적의 고도로 농축된 제제를 수득한다. 배아의 95% 초과에 대해 2시간 내에 부화를 완료하여야 한다.

7㎛ 기공 크기를 지니는 표준 필터를 사용하여 부화액을 여과시켜서 후속 여과 단계에서 필터를 막을 가능성이 있는 물질을 제거한다. 처리한 부화액인 이 여과액을 상당한 분해 없이 몇 년 동안 냉동시킨 후에 추가 단백질 정제를 위해 해동하고 사용할 수 있다. 이 사실은 부화액 조성물을 제조하기 위한 출발 물질의 생성을 크게 단순화시킨다.

처리한 부화액을 제조업자의 설명서에 따라 다이에틸아미노에틸(DEAE) 이온 교환 칼럼 상에 장입하고 나서, 20mM 트리스 HCl 용액(pH 8.50)으로 세척하였다. 통과액을 버렸다. 류코렉틴 단백질을 50mM NaCl을 함유하는 세척 용액을 이용하여 칼럼으로부터 용리시켰다. 용리액을 다른 용도를 위해 수집하였다. 관심대상의 폴리펩타이드(즉, 메탈로프로테이나제, 세린 프로테아제 및 알 껍질 폴리펩타이드)를 1M NaCl을 함유하는 세척 용액을 이용하여 칼럼으로부터 용리시켰다. 용리액을 수집하고 나서, 8kDa의 필터 배제 크기로 정용여과시켜 부화액의 물을 완충제로 교환하였다. 이 경우에, 다른 완충제가 동일하게 적합하더라도, 완충제는 인산염 완충 식염수였다. 예를 들어, 0.5mM 인산염 및 1mM NaCl을 함유하는 완충제 또는 중성 또는 약간 알칼리(pH 7.5 내지 8.5)의 pH에서 5 mM NaCl을 함유하는 밀리몰 트리스(예를 들어, 10 mM)를 함유하는 완충제가 적합하다. 정용여과 단계로부터의 잔류액을 수집하고, 완충제의 첨가에 의해 희석시켰다.

최종적으로, 여과액에 0.22㎛의 기공 크기를 지니는 필터를 통해 여과를 실시하였고, 최종 여과액을 수집하였다. 이 여과액은 조질의 부화액에서 발견되는 메탈로프로테이나제, 세린 프로테아제 및 알 껍질 폴리펩타이드 및 폴리펩타이드의 일부가 고도로 풍부한 제제이며, 부화액으로부터의 류코렉틴 폴리펩타이드를 전혀 포함하지 않거나 또는 단지 미량으로 포함한다.

실시예 2: 피부 모공 크기에 대한 조성물의 생체내 효과

부화액 조성물을 실시예 1에서 기재한 바와 같이 제조하였다. 조성물을 1% 겔[v/v](겔의 용적 당 조성물 총 용적)로서 제조하고, 활성 성분, 즉, 부화액 조성물을 포함하지 않는 대조군 겔(도 1에서 겔 B)과 비교하였다. 겔은 수 중에서 보존제(0.8%), 다이글라이세린(3.00%) 및 잔탄검(0.8%)을 포함하였다.

이중맹검, 위약 통제 임상 시험을 23명의 여성 지원자 대상체에 대해 수행하였다. 23명의 대상체는 연령이 22.4 내지 58.7세(39.3 ± 13.6세)였다.

시험은 얼굴 분할 설계를 사용하였다. 적용 부위는 얼굴의 우측 또는 좌측 절반이었다. 활성 겔을 무작위화한 시험 부위(우측/좌측)에 할당하였다. 팔자주름 위 볼 영역 상의 모공에 대해 모공 크기 분석을 수행하였다.

4주의 기간에 걸쳐 집에서 대상체에 의해 1일 2회 활성 겔을 도포하였다. 얼굴의 절반에 보통 실행하는 양으로 겔을 도포하고, 남아있는 다른 절반은 미처리하였다(무작위로 할당함).

모공 크기를 시각화하기 위해, 크림이 모공 내로 혼입되도록 아연-산화물-함유 크림(페나텐(Penaten)(등록상표))을 측정 영역에 도포하였다. 남은 것을 티슈로 조심해서 제거하였다. D-스코프 II 부착을 사용하여 캐논 파워샷 G9(Canon PowerShot G9) 디지털 카메라(40x 배율을 지니는 렌즈)에 의해 마이크로 영상을 촬영하고 나서 포토파인더(FotoFinder)(등록상표) 2007 메디스콥 소프트웨어에 의해 기록하였다. D-스코프는 프리즘 리플렉터 고리 및 통합 LED 램프를 가지는데, 시각영역의 균형잡힌 조도(illumination)를 보장한다. 시험 부위 당 하나의 영상을 촬영하였다. 연구의 완료 후에, 소프트웨어 이미지J를 사용하여 시험 부위 당 3개의 선택 모공의 크기(직경)을 측정하였다. t0 및 t1에 동일 기공을 측정하였다.

모공 크기 분석에 대한 영상을 처음 겔 도포를 시작하기 전(t0) 및 처리의 4주 후(t1)에 촬영하였다. 21.5℃(±1℃) 및 50%(±5%) 상대 습도로 기후를 통제한 방에서 모든 평가를 수행하였다. 시점 t1에서의 평가는 최종 생성물 처리 후 10 내지 20시간에 하였다.

t0에서 시험 부위 간의 차이 평가를 위해, 본래의 데이터를 분석하였다. 처리 후(t1) 시험 부위 간의 차이 평가를 위해, t0 및 비처리 상황에 대한 데이터를 분석하였다. 이중 상대적 데이터(t0 및 미처리 상황에 대한 데이터)를 다음과 같이 계산하였다: (t1에서의 처리 상황/t0에서의 처리 상황)/(t1에서의 미처리 상황/t0에서의 미처리 상황). 이들 데이터는 미처리 상황(대조군)의 변형 및 그들이 상이한 처리(대조군 시험 부위를 포함)를 받기 전 시험 부위 간의 차이의 변형을 고려하는 파라미터에서의 변화를 반영한다.

결과

t0 상황은 동일하였다. t0 평가 후 활성 겔로 처리한 시험 부위는 미처리로 남긴 표적 부위와 모공 크기가 유의하게 다르지 않았다(p=0.3811). t0에서, 기공 크기는 미처리 시험 부위에 대해 평균 0.60(± 0.19)㎜였고, 겔 처리 시험 부위에 대해 0.65(± 0.22)㎜였다.

미처리 시험 부위의 기공 크기는 연구 기간 내에 동일하였다(p=0.5084). t0 및 미처리 t1에 대한 데이터에 관해, 활성 겔(즉, 단계 (f)의 1% 부화액 조성물을 포함)로 처리한 피부는 매일 처리의 4주 후에 미처리 상황에 비해 약 22%만큼 모공 크기의 통계적으로 유의한 감소를 나타내었다(p=0.0005)(도 1). 보고된 유해 피부 반응은 없었다.

실시예 3: 피부 병변(여드름)에 대한 조성물의 생체내 효과

단계 (f)의 부화액 조성물을 포함하는 겔을 실시예 2에 기재한 바와 같이 제조하였다(도 2의 겔 B).

이중맹검, 위약통제 임상시험을 21명의 적격인 여성 지원자 대상체에 대해 수행하였다. 대상체는 18.2 내지 34.5세(26.3 ± 5.0세)였다. 대상체를 그들의 이마, 볼 및/또는 턱 상에 스팟함으로써 연구에 참가하는데 적격으로 되었다.

시험은 얼굴 분할 설계를 사용하였다. 적용 부위는 이마, 볼 및 턱을 포함하는 얼굴의 우측 또는 좌측 절반이었다. 활성 겔을 무작위화한 시험 부위(우측/좌측)에 할당하였다.

4주의 기간에 걸쳐 집에서 대상체에 의해 1일 2회 활성 겔을 도포하였다. 얼굴의 절반에 보통 실행하는 양으로 생성물을 도포하고, 남아있는 다른 절반은 미처리하였다(무작위로 할당함).

염증(구진, 고름 물집) 및 비염증(블랙헤드, 화이트헤드) 병변의 수를 처음 겔 도포를 시작하기 전(t0) 및 처리 4주 후에(t1) 시험 부위 둘 다에 대해 시각적으로 계수화하였다. 21.5℃(± 1℃) 및 50%(± 5%) 상대 습도로 기후를 통제한 방에서 모든 평가를 수행하였다. 시점 t1에서의 평가는 최종 생성물 처리 후 10 내지 20시간에 하였다.

임의의 주어진 대상체에 대한 평가 둘 다에서 동일한 평가자에 의해 병변 수를 계수화하였다. 모든 병변 계수를 표준 광 조건 하에 수행하였다. 각각의 블랙헤드(개방 면포), 화이트헤드(폐쇄성 면포), 구진 및 고름 물집에 대해 이마, 볼 및 턱(코 영역은 아님) 상에서 계수화하였다.

결과

염증 병변 수

t0 상황은 동일하지 않았다. 기준 평가 후에 활성겔로 처리한 시험 부위는 미처리로 남아있는 시험부위로부터의 염증 병변 수와 상당히 상이하였다(p=0.0217). t0에서, 염증 병변의 수는 미처리 시험 부위에 대해 평균 8.4(± 7.4)였고, 활성 겔 처리한 시험 부위에 대해 7.0(± 6.5)이었다. 미처리 시험 부위의 염증 병변 수는 연구 기간 내에 동일하였다(p=0.0815).

활성 겔로 처리한 피부는 매일 4주 처리 후에 미처리 상황에 비해 염증 병변 수의 통계적으로 유의한 감소를 나타내었다(p=0.0086)(도 2). 보고된 유해 피부 반응은 없었다.

비-염증 병변 수

t0 상황은 동일하였다. 기준 평가 후 활성 겔로 처리한 시험 부위는 미처리로 남아있는 시험 부위와 비-염증 병변 수가 유의하게 다르지 않았다(p=0.8753). t0에서, 비-염증 병변의 수는 미처리 시험 부위에 대해 평균 3.2(± 5.3)였고, 겔 B 처리 시험 부위에 대해 2.8(± 3.2)이었다. 미처리 시험 부위의 비-염증 병변의 수는 연구 기간 내에 동일하였다(p=0.9057).

활성 겔로 처리한 피부는 매일 4주 처리 후 미처리 상황에 비해 비-염증 병변 수의 통계적으로 유의한 감소를 나타내었다(p=0.0215)(도 3). 유해한 피부 반응은 보고되지 않았다.

실시예 4: 박피에 대한 조성물의 생체내 효과

단계 (f)의 3% 부화액 조성물을 포함하는 겔을 실시예 2에 기재한 바와 같이 제조하였다.

이중맹검, 위약통제 임상시험을 종아리 둘 다에 대해 건성 및 인설 피부의 시각적 징후를 지니는 3명의 대상체에 대해 수행하였다. 3명의 대상체는 38.4 내지 57.8세(평균 48.1 ± 9.7세)였다.

이 연구는 박피에 대한 부화액 조성물을 포함하는 겔의 효과를 글라이콜산(3%)과 비교해서 분석하기 위하여 사용하였다. 활성 겔 또는 글라이콜산 중 하나로 처리를 위한 종아리 상의 8개 시험 영역, 즉, 각각의 종아리에 대해 4개 영역이 있었다. 시험 영역에 대한 생성물 처리의 할당의 순서를 바꾸었다. 4개 시험 부위 중에서, 하나는 미처리로 남긴 반면, 나머지 3개는 5분, 10분 또는 15분 동안 생성물 처리하였다.

시험 생성물 처리 바로 전(t0), D-스쿠암(등록상표) 샘플을 각각의 종아리로부터 취하였다(4개 시험 부위의 중복 영역). 활성 겔 및 글라이콜산(3%)을 종아리 상의 각각의 시험 부위 상에 전문가에 의해 한 번 도포하였다. 생성물을 5분, 10분 및 15분 동안 피부 상에 작용시켰고, 하나는 시험 처리하지 않았다("0분"). 이어서, 모두 4개 시험 부위를 물로 린스하고 나서, 공기 건조시킨 후, D-스쿠암(등록상표) 샘플을 모두 4개 시험 부위로부터 취하였다. 모든 D-스쿠암(등록상표) 디스크를 검정색 저장 카드에 옮기고 나서, 다음의 스코어를 사용하여 인설 정도에 관해 평가하였다:

스코어 0: 없음

스코어 1: 약간

스코어 2: 중등증

스코어 3: 중증

스코어 4: 극심함

불편한 유해 반응은 없었다.

결과

D-스쿠암(등록상표)을 사용하는 3명 대상체에 대한 박피 평가는 5분, 10분 또는 15분의 처리 요법 후 글라이콜산에 비해 평균적으로 활성 겔에 대해 인설의 더 높은 감소를 나타내었다(도 4).

실시예 5: 피부 수화에 대한 조성물의 생체내 효과

단계 (f)의 3% 부화액 조성물을 포함하는 겔을 실시예 2에 기재한 바와 같이 제조하였다.

이중맹검, 위약통제 임상시험을 4명의 대상체에 대해 수행하였다. 대상체는 팔뚝 상에 건성 피부를 가짐으로써 연구 참가에 적격이 되었다. 4명의 대상체는 56.3 내지 70.9세(평균 64.3 ± 6.3세)였다.

피부 수화를 분석하기 위한 시험 부위는 둘 다 팔뚝이었다. 팔뚝에 대해 4개 시험 영역, 즉 팔뚝의 각각의 안쪽에 2개가 있었다. 2개 영역을 부화액을 포함하는 활성겔로 처리하였고, 하나는 글라이세린(대조군)으로 처리하고, 4번째는 미처리로 남겨두었다.

3주의 기간에 걸쳐 집에서 대상체에 의해 1일 2회 처리를 수행하였다. 생성물을 약 2㎎/㎠의 양으로 대응하는 팔뚝 시험 부위에 도포하였다(무작위, 하나의 시험 부위는 미처리로 남겼고, 다른 것은 대조군으로서 글라이세린으로 처리하였다).

제1 생성물 도포를 시작하기 전(t0) 및 처리의 3주 후(t1), 팔뚝 상의 피부 수화(수분측정기(Corneometer) CM825(등록상표), 10회 반복 측정)를 측정하였다.

대상체를 그들의 포함시키지 않은 시험 영역에 적어도 30분 동안 내부 기후 조건에 대해 적응시킨 후에, 21.5℃(± 1℃) 및 50%(± 5%) 상대 습도에서 기후 통제한 방에서 모든 측정을 수행하였다. 최종 생성물 처리 후 10 내지 20시간 후에 시점 t1에서의 측정 및 처리를 하였다.

결과

단계 (f)의 3% v/v의 부화액 조성물을 포함하는 활성 겔(겔 B)로 처리한 피부는 1일 2회 3주의 생성물 처리 후에 미처리 상황에 비해 약 21%의 4명 대상체에 대해 피부 수화의 평균 증가를 나타내었다(도 5).

실시예 6: 습진 및 여드름에 대한 조성물의 생체내 효과

단계 (f)의 3% 부화액 조성물을 포함하는 겔을 실시예 2에 기재한 바와 같이 제조하였다.

이중맹검, 위약통제 임상시험을 4명의 대상체(습진 2명 및 여드름 2명)에 대해 수행하였다. 대상체는 습진 또는 여드름을 가짐으로써(전문가에 의해 시각적으로 평가) 연구 참가에 적격이 되었다. 습진 또는 여드름 등급에 대한 활성 겔의 효과를 선택한 문제 영역에 대해, 즉, 손 또는 팔 상에서(습진) 또는 얼굴 상에서(여드름) 분석하였다.

활성 겔을 실제 실행에 대응하는 생성물의 양을 사용하여 3주의 기간에 걸쳐 집에서 대상체에 의해 아침에 및 저녁에 1일 2회 도포하였다.

처음 생성물 도포(t0) 시작 직전 및 처리(t1)의 3주 후에, 습진 또는 여드름 등급을 객관적 피부과학적 수명 스코어링 및 대상체 자신의 주관적 평가에 의해 시각적으로 평가하였다. 병변 계수(비염증(화이트헤드 및 블랙헤드)의 수 및 질 및 염증 병변(구진 및 고름 물집)을 (얼굴 여드름을 지니는 2명의 대상체에 대해서만) 피부과학적으로 평가하였다.

시각적 전문가 평가 및 주관적 평가를 다음의 스코어에 따라 수행하였다:

스코어 0: 없음

스코어 1: 약간

스코어 2: 중등증

스코어 3: 중증

스코어 4: 극심함

시각적 전문가 평가뿐만 아니라 주관적 평가(데이터 미제시)는 활성 겔로 3주 처리 요법 후에 평균 2명의 대상체에서 습진 및 여드름 등급의 감소를 나타내었다(도 6). 병변 계수는 활성 겔로 3주 처리 요법 후에 2명 대상체에 대한 평균에서 염증 및 비염증 병변 수의 감소를 나타내었다(도 7).

서열:

<110> Aqua Bio Technology ASA <120> Cosmetic compositions from fish hatching fluid <130> 42.20.113489 <160> 12 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 261 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 1 Met Asp His Arg Pro Thr Leu Ser Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu 1 5 10 15 Gly Leu Ser Gln Ala Ser Gly Asn Glu Phe His Asp Glu Pro Asp His 20 25 30 Val Ser Ile Thr Ser Val Ile Leu Lys Ser Asn Asn Gly Thr Asn Glu 35 40 45 Leu Leu Leu Asp Gly Asp Ile Leu Ala Pro Arg Thr Arg Asn Ala Met 50 55 60 Lys Cys Phe Ser Ser Gln Tyr Ser Cys Leu Trp Lys Lys Ser Ser Asp 65 70 75 80 Gly Leu Val Tyr Val Pro Tyr Ile Leu Ser Ala Val Tyr Ser Ser Leu 85 90 95 Glu Val Glu Thr Ile Glu Thr Ala Met Lys Tyr Phe Gln Gly Lys Thr 100 105 110 Cys Ile Arg Phe Ile Pro Arg Lys Thr Gln Thr Ala Tyr Leu Asp Ile 115 120 125 Gln Ser Ser Gly Gly Cys Phe Gly Thr Val Gly Thr Val Gly Asp Arg 130 135 140 Gln Thr Leu Ser Leu Ala Gln Phe Gly Cys Val Gln His Gly Ile Ile 145 150 155 160 Gln His Glu Leu Leu His Ala Leu Gly Phe His Glu His Asn Arg Ser 165 170 175 Asp Arg Glu Gln Tyr Ile Arg Ile Asn Trp Gln Tyr Ile Tyr Asp Tyr 180 185 190 Ala Val Gly Asn Phe Gln Lys Glu Asp Thr Asn Asn Leu His Thr Ala 195 200 205 Tyr Asp Tyr Ser Ser Val Met His Tyr Asp Arg Thr Ala Tyr Thr Asn 210 215 220 Asp Tyr Gly Lys Glu Thr Ile Thr Pro Ile Pro Asp Pro Ser Val Ala 225 230 235 240 Ile Gly Gln Arg Leu Gly Met Ser Asp Ile Asp Val Leu Lys Val Asn 245 250 255 Lys Leu Tyr Gln Cys 260 <210> 2 <211> 117 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 2 Thr Val Thr Val Gln Cys Thr Lys Asp Gly Gln Phe Val Val Val Val 1 5 10 15 Ser Arg Asp Ala Thr Leu Pro Asn Leu Glu Leu Asp Ser Ile Ser Leu 20 25 30 Leu Gly Ala Asn Gly Ala His Cys Thr Pro Val Gly Thr Thr Ser Ala 35 40 45 Phe Ala Ile Tyr Gln Phe Lys Val Thr Glu Cys Gly Thr Val Val Thr 50 55 60 Glu Glu Pro Asp Thr Ile Val Tyr Glu Asn Arg Met Ser Ser Ser Tyr 65 70 75 80 Val Val Gly Ile Gly Pro Phe Gly Asp Ile Thr Arg Asp Ser His Tyr 85 90 95 Asp Leu Val Phe Gln Cys Arg Tyr Thr Gly Thr Ser Val Glu Thr Leu 100 105 110 Val Ile Glu Val Lys 115 <210> 3 <211> 261 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 3 Ala Val Thr Val Gln Cys Thr Lys Asp Gly Gln Phe Val Val Val Val 1 5 10 15 Ala Arg Asp Ala Thr Leu Pro Ser Leu Glu Leu Asp Ser Ile Ser Leu 20 25 30 Leu Gly Thr Asn Gly Pro His Cys His Ala Ile Gly Thr Thr Ser Val 35 40 45 Phe Ala Ile Tyr Gln Phe Lys Val Thr Glu Cys Gly Thr Val Met Thr 50 55 60 Glu Glu Thr Asp Thr Ile Ile Tyr Glu Asn Arg Met Ser Ser Ser Tyr 65 70 75 80 Gln Val Gly Val Gly Pro Phe Gly Ser Ile Thr Arg Asp Ser Gln Tyr 85 90 95 Asp Leu Thr Phe Gln Cys Arg Tyr Lys Gly Ser Thr Ile Val Ala Val 100 105 110 Val Ile Asp Val Lys Pro Val Pro Pro Pro Asn Pro Asp Ile Ala Pro 115 120 125 Gly Pro Leu Thr Val Glu Leu Arg Leu Gly Ser Gly Thr Cys Leu Thr 130 135 140 Lys Gly Cys Asn Glu Glu Glu Val Ala Tyr Thr Ser Tyr Tyr Thr Glu 145 150 155 160 Ala Asp Tyr Pro Val Thr Lys Val Leu Arg Asp Pro Val Tyr Thr Glu 165 170 175 Val Arg Ile Leu Ala Arg Thr Asp Pro Asn Ile Val Leu Thr Leu Gly 180 185 190 Arg Cys Trp Ala Thr Thr Asn Pro Asn Pro Leu Ser Leu Pro Gln Trp 195 200 205 Asp Leu Leu Ile Asp Gly Cys Pro Tyr Gln Asp Asp Arg Tyr Leu Thr 210 215 220 Thr Pro Ile Asn Val Gly Pro Ser Ser Gly Leu Ser Phe Pro Thr His 225 230 235 240 Tyr Arg Arg Phe Val Leu Lys Met Phe Thr Phe Val Asp Pro Met Ser 245 250 255 Met Thr Pro Leu Arg 260 <210> 4 <211> 224 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 4 Ala Glu Cys Arg Glu Asn Met Val His Val Glu Ala Lys His Asp Leu 1 5 10 15 Leu Gly Ile Gly Gln Leu Ile Gln Leu Glu Asp Leu Thr Leu Gly Asp 20 25 30 Cys Pro Met Ser Gly Phe Asp Asn Ile Asn Gln Val Leu Ile Phe Glu 35 40 45 Ser Pro Leu Gln Ser Cys Gly Ser Gln Leu Arg Met Thr Thr Asn Ser 50 55 60 Leu Ile Tyr Ile Phe Thr Leu Tyr Tyr Lys Pro Lys Pro Leu Ala Asn 65 70 75 80 Thr Pro Leu Ile Arg Thr Asn Asp Ala Met Ile Asn Ile Glu Cys His 85 90 95 Tyr Pro Arg Lys His Asn Val Ser Ser Leu Ala Leu Ile Pro Thr Trp 100 105 110 Thr Pro Phe Ser Ala Ala Lys Tyr Ala Glu Glu Leu Leu Tyr Phe Ser 115 120 125 Met Arg Leu Met Thr Ala Asp Trp Gln Tyr Glu Arg Ala Gly Asn Met 130 135 140 Tyr Val Leu Gly Asp Met Val Asn Ile Glu Ala Ser Val Met Gln Tyr 145 150 155 160 Phe His Val Pro Leu Arg Ile Phe Val Asp Ser Cys Val Ala Thr Leu 165 170 175 Glu Pro Asn Ile Asn Ala Asn Pro Arg Tyr Ala Phe Ile Glu Asn His 180 185 190 Gly Cys Leu Ile Asp Ala Lys Met Thr Gly Ser His Ser Gln Phe Met 195 200 205 Pro Arg Ser Ala Asp Tyr Lys Leu Tyr Phe Gln Val Glu Ala Phe Arg 210 215 220 <210> 5 <211> 439 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 5 Met Lys Trp Ser Ala Val Cys Leu Val Ala Val Ala Thr Leu Gly Trp 1 5 10 15 Leu Cys Asp Ala Gln Asn Phe Leu Glu Lys Pro Gly Trp Pro Pro Ile 20 25 30 Gln Thr Pro Pro Ser Trp Pro Pro Gln Thr Pro Gln Arg Pro Val Gln 35 40 45 Pro Leu Pro Gln Arg Pro Ala Gln Pro Phe Leu Gln Lys Pro Ala Gln 50 55 60 Pro Ile Pro Gln Arg Ile Pro Tyr Thr Glu Asp Asp Thr Lys Gln Thr 65 70 75 80 Cys Glu Val Val Asp Lys Asp Lys Val Ser Cys Gly Leu Ser Gly Ile 85 90 95 Thr Ala Ala Gln Cys Gln Ala Ile Ser Cys Cys Phe Asp Gly Arg Met 100 105 110 Cys Phe Tyr Gly Lys Thr Val Thr Val Gln Cys Thr Lys Asp Gly Gln 115 120 125 Phe Val Val Val Val Ser Arg Asp Ala Thr Leu Pro Asn Leu Glu Leu 130 135 140 Asp Ser Ile Ser Leu Leu Gly Ala Asn Gly Ala His Cys Thr Pro Val 145 150 155 160 Gly Thr Thr Ser Ala Phe Ala Ile Tyr Gln Phe Lys Val Thr Glu Cys 165 170 175 Gly Thr Val Val Thr Glu Glu Pro Asp Thr Ile Val Tyr Glu Asn Arg 180 185 190 Met Ser Ser Ser Tyr Val Val Gly Ile Gly Pro Phe Gly Asp Ile Thr 195 200 205 Arg Asp Ser His Tyr Asp Leu Val Phe Gln Cys Arg Tyr Thr Gly Thr 210 215 220 Ser Val Glu Thr Leu Val Ile Glu Val Lys Thr Tyr Pro Asn Pro Asn 225 230 235 240 Pro Val Val Thr Val Asp Ala Val Leu Asn Val Glu Leu Arg Leu Ala 245 250 255 Asn Gly Arg Cys Leu Ser Lys Gly Cys Asp Glu Met Gln Glu Ala Tyr 260 265 270 Thr Ser Tyr Tyr Thr Val Ala Asp Tyr Pro Val Thr Lys Val Leu Arg 275 280 285 Asp Pro Val Tyr Ala Glu Val Arg Ile Leu Gly Met Thr Asp Pro Asn 290 295 300 Val Val Leu Thr Leu Glu Gln Cys Trp Ala Thr Ile Asp Pro Thr Gly 305 310 315 320 Asp Arg Leu Pro Arg Trp Asp Leu Leu Val Asn Gly Cys Pro Tyr Gln 325 330 335 Asp Asp Arg Tyr Leu Thr Val Pro Ile Ala Ser Asp Ser Ser Tyr Ile 340 345 350 Pro Pro Gly Glu Phe Leu Ser His Tyr Lys Arg Phe Val Phe Lys Met 355 360 365 Phe Thr Phe Val Asp Pro Thr Ser Met Val Pro Leu Gln Glu Asn Val 370 375 380 Tyr Ile His Cys Arg Ala Thr Val Cys His Ala Leu Ala Gly Ser Cys 385 390 395 400 Glu Gln Arg Cys Asn Arg Gln Arg Arg Asp Leu Ser Ala Gln Gly Gln 405 410 415 Lys Lys Thr Lys Gly Asp Val Val Val Ser Ser Gln Lys Val Ile Met 420 425 430 Ile Asp Pro Ser Leu Tyr Ala 435 <210> 6 <211> 524 <212> PRT <213> Oncorhynchus masou <400> 6 Met Lys Trp Ser Ala Val Cys Leu Val Ala Val Ala Thr Leu Gly Trp 1 5 10 15 Leu Cys Asp Ala Gln Ile Tyr Leu Glu Lys Pro Gly Trp Pro Pro Ile 20 25 30 Gln Thr Pro Ala Ser Trp Pro Ala Gln Pro Pro Glu Lys Pro Val Gln 35 40 45 Pro Pro Gln Arg Pro Ala Gln Pro Pro Gln Trp Pro Ala Gln Pro Pro 50 55 60 Gln Trp Pro Ala Gln Pro Pro Gln Arg Pro Ala Gln Pro Pro Gln Arg 65 70 75 80 Pro Ala Gln Thr Gln Gln Trp Pro Gly Gln Pro Pro Gln Arg Pro Ala 85 90 95 Gln Pro Pro Gln Trp Pro Ala Gln Pro Pro Gln Arg Pro Ala Gln Pro 100 105 110 Pro Gln Arg Pro Ala Gln Pro Pro Gln Arg Pro Ala Gln Pro Pro Pro 115 120 125 Arg Pro Ala Gln Pro Pro Gln Trp Pro Val His Pro Pro Gln Trp Pro 130 135 140 Val Gln Pro Gly Thr Pro Leu Gln Arg Pro Lys Phe Pro Ser Asp Pro 145 150 155 160 Gly Ser Lys Gln Ser Cys Asp Val Asp Ser Gln His Lys Val Gln Cys 165 170 175 Gly Leu Pro Asp Ile Thr Ala Ala His Cys Asp Ala Ile Asn Cys Cys 180 185 190 Phe Asp Gly Arg Met Cys Phe Tyr Gly Lys Ala Val Thr Val Gln Cys 195 200 205 Thr Lys Asp Gly Gln Phe Val Val Val Val Ala Arg Asp Ala Thr Leu 210 215 220 Pro Ser Leu Glu Leu Asp Ser Ile Ser Leu Leu Gly Thr Asn Gly Pro 225 230 235 240 His Cys His Ala Ile Gly Thr Thr Ser Val Phe Ala Ile Tyr Gln Phe 245 250 255 Lys Val Thr Glu Cys Gly Thr Val Met Thr Glu Glu Thr Asp Thr Ile 260 265 270 Ile Tyr Glu Asn Arg Met Ser Ser Ser Tyr Gln Val Gly Val Gly Pro 275 280 285 Phe Gly Ser Ile Thr Arg Asp Ser Gln Tyr Asp Leu Thr Phe Gln Cys 290 295 300 Arg Tyr Lys Gly Ser Thr Ile Val Ala Val Val Ile Asp Val Lys Pro 305 310 315 320 Val Pro Pro Pro Asn Pro Asp Ile Ala Pro Gly Pro Leu Thr Val Glu 325 330 335 Leu Arg Leu Gly Ser Gly Thr Cys Leu Thr Lys Gly Cys Asn Glu Glu 340 345 350 Glu Val Ala Tyr Thr Ser Tyr Tyr Thr Glu Ala Asp Tyr Pro Val Thr 355 360 365 Lys Val Leu Arg Asp Pro Val Tyr Thr Glu Val Arg Ile Leu Ala Arg 370 375 380 Thr Asp Pro Asn Ile Val Leu Thr Leu Gly Arg Cys Trp Ala Thr Thr 385 390 395 400 Asn Pro Asn Pro Leu Ser Leu Pro Gln Trp Asp Leu Leu Ile Asp Gly 405 410 415 Cys Pro Tyr Gln Asp Asp Arg Tyr Leu Thr Thr Pro Ile Asn Val Gly 420 425 430 Pro Ser Ser Gly Leu Ser Phe Pro Thr His Tyr Arg Arg Phe Val Leu 435 440 445 Lys Met Phe Thr Phe Val Asp Pro Met Ser Met Thr Pro Leu Arg Glu 450 455 460 Thr Val Phe Ile His Cys Asn Thr Ala Val Cys Leu Pro Ser His Gly 465 470 475 480 Asp Ser Cys Glu Pro Arg Cys Tyr Arg Lys Arg Arg Asp Ile Pro Ala 485 490 495 Ala Val Gln Lys 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175 Pro Lys Pro Leu Ala Asn Thr Pro Leu Ile Arg Thr Asn Asp Ala Met 180 185 190 Ile Asn Ile Glu Cys His Tyr Pro Arg Lys His Asn Val Ser Ser Leu 195 200 205 Ala Leu Ile Pro Thr Trp Thr Pro Phe Ser Ala Ala Lys Tyr Ala Glu 210 215 220 Glu Leu Leu Tyr Phe Ser Met Arg Leu Met Thr Ala Asp Trp Gln Tyr 225 230 235 240 Glu Arg Ala Gly Asn Met Tyr Val Leu Gly Asp Met Val Asn Ile Glu 245 250 255 Ala Ser Val Met Gln Tyr Phe His Val Pro Leu Arg Ile Phe Val Asp 260 265 270 Ser Cys Val Ala Thr Leu Glu Pro Asn Ile Asn Ala Asn Pro Arg Tyr 275 280 285 Ala Phe Ile Glu Asn His Gly Cys Leu Ile Asp Ala Lys Met Thr Gly 290 295 300 Ser His Ser Gln Phe Met Pro Arg Ser Ala Asp Tyr Lys Leu Tyr Phe 305 310 315 320 Gln Val Glu Ala Phe Arg Phe Gln Ser Gln Arg Gly Ser Asp Pro Ile 325 330 335 Ile Pro Gln Lys Thr Lys Ile Pro Phe Gln Pro Ala Ala Asp Tyr Pro 340 345 350 Ala Thr Leu Asp Met Ile Phe Leu Thr Cys His Leu Lys Ala Thr Thr 355 360 365 Ile Ala Phe Pro Ile Asp Phe Glu Tyr Lys Ala Cys Ser Phe Ile Asn 370 375 380 Thr Trp Arg Glu Ala Gly Gly Asn Asp Gly Val Cys Gly Cys Cys Asp 385 390 395 400 Ser Thr Cys Ser Asn Arg Lys Gly Arg Asp Thr Thr Thr His Gln Lys 405 410 415 Pro Ala Asn Ile Trp Glu Gly Asp Val Gln Leu Gly Pro Ile Phe Ile 420 425 430 Ser Glu Lys Val Glu Gln 435 <210> 8 <211> 467 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 8 Lys Trp Ser Tyr Gln Leu Pro Gln Lys Leu Ala Gln Pro Leu Pro Gln 1 5 10 15 Lys Pro Ala Gln Pro Leu Pro Gln Trp Pro Val Gln Pro Leu Pro Gln 20 25 30 Arg Pro Ala Glu Pro Leu Pro Gln Arg Pro Ala Gln Pro Leu Pro Gln 35 40 45 Trp Pro Val Gln Pro Leu Pro Gln Arg Pro Ala Glu Pro Leu Pro Gln 50 55 60 Arg Pro Ala Gln Pro Leu Pro Gln Arg Pro Val Gln Pro Leu Pro Gln 65 70 75 80 Arg Pro Ala Gln Pro Phe Leu Gln Lys Pro Ala Gln Pro Ile Pro Gln 85 90 95 Arg Ile Pro Tyr Thr Lys Asp Asp Thr Lys Gln Thr Cys Glu Val Val 100 105 110 Asp Lys Asp Lys Val Ser Cys Gly Leu Ser Gly Ile Thr Ala Ala Gln 115 120 125 Cys Gln Ala Ile Ser Cys Cys Phe Asp Gly Arg Met Cys Phe Tyr Gly 130 135 140 Lys Thr Val Thr Phe Gln Cys Thr Lys Asp Gly Gln Phe Val Val Val 145 150 155 160 Val Ser Arg Asp Ala Thr Leu Pro Asn Leu Glu Leu Asp Ser Ile Ser 165 170 175 Leu Leu Gly Ala Asn Gly Ala His Cys Thr Pro Val Gly Thr Thr Ser 180 185 190 Ala Phe Ala Ile Tyr Gln Phe Lys Val Thr Glu Cys Gly Thr Val Val 195 200 205 Thr Glu Glu Pro Asp Thr Ile Val Tyr Glu Asn Arg Met Ser Ser Ser 210 215 220 Tyr Val Val Gly Ile Gly Pro Phe Gly Asp Ile Thr Arg Asp Ser His 225 230 235 240 Tyr Asp Leu Val Phe Gln Cys Arg Tyr Thr Gly Thr Ser Val Glu Thr 245 250 255 Leu Val Ile Glu Val Lys Thr Tyr Pro Asn Pro Asn Pro Val Val Thr 260 265 270 Val Asp Ala Val Leu Asn Val Glu Leu Arg Leu Ala Asn Gly Arg Cys 275 280 285 Leu Ser Lys Gly Cys Asp Glu Met Gln Glu Ala Tyr Thr Ser Tyr Tyr 290 295 300 Thr Val Ala Asp Tyr Pro Val Thr Lys Val Leu Arg Asp Pro Val Tyr 305 310 315 320 Ala Glu Val Arg Ile Leu Gly Met Thr Asp Pro Asn Val Val Leu Thr 325 330 335 Leu Glu Gln Cys Trp Ala Thr Thr Asp Pro Thr Gly Asp Arg Leu Pro 340 345 350 Arg Trp Asp Leu Leu Val Asn Gly Cys Pro Tyr Gln Asp Asp Arg Tyr 355 360 365 Leu Thr Val Pro Ile Ala Ser Asp Ser Ser Tyr Ile Pro Pro Gly Glu 370 375 380 Phe Leu Ser His Tyr Lys Arg Phe Val Phe Lys Met Phe Thr Phe Val 385 390 395 400 Asp Pro Thr Ser Met Val Pro Leu Gln Glu Asn Val Tyr Ile His Cys 405 410 415 Arg Ala Thr Val Cys His Ala Leu Ala Gly Ser Cys Glu Gln Arg Cys 420 425 430 Asn Arg Gln Arg Arg Asp Leu Ser Ala Gln Gly Gln Lys Lys Thr Lys 435 440 445 Gly Asp Val Val Val Ser Ser Gln Lys Val Ile Met Ile Asp Pro Ser 450 455 460 Leu Tyr Ala 465 <210> 9 <211> 255 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 9 Met Arg Thr Thr Ala Ala Phe Leu Leu Val Leu Cys Leu Leu Ala Ile 1 5 10 15 Ser His Ala Trp Asp Cys Gln Glu Val Val Asn Ile Lys Asn Leu Met 20 25 30 Gln Ile Asp Ala Gly Leu Gly Gln Val Val Ala Thr Asp Thr Ser Gln 35 40 45 Ile Pro Tyr Tyr Leu Val Gly Asp Lys Trp Ile Arg Leu Pro Gly Ser 50 55 60 Leu Lys His Ile Thr Val Gly Pro Ala Gly Ile Trp Gly Val Asn Lys 65 70 75 80 Asp Tyr Ala Ile Tyr Lys Tyr Val Ala Gly Asn Trp Val Gln Ala Ala 85 90 95 Gly Leu Leu Lys Gln Leu Asp Ala Gly Gly Glu Gln Phe Ile Val Gly 100 105 110 Ala Asn Met Asn Asp Thr Pro Tyr Cys Leu Thr Ser Ser Ala Thr Val 115 120 125 Gly Tyr Lys Gly Pro Gly Ser Pro Leu Pro Trp Thr Gly Leu Pro Gly 130 135 140 Ala Val Lys Tyr Tyr Ser Cys Gly Pro Phe Gly Cys Trp Ala Val Asn 145 150 155 160 Lys Asn Asp Asp Ile Tyr Leu Met Ser Leu Asn Gln Asp Cys Gln Asn 165 170 175 Lys Gly Trp Ser His Ile Glu Gly Lys Leu Ser Met Ile Glu Val Ala 180 185 190 Thr Asp Gly Ser Val Phe Gly Val Asn Ser Ala Gly Ser Val Tyr Thr 195 200 205 Arg Asp Gly Ile Thr Ala Ser Lys Pro Glu Gly Thr Gly Trp Ser Asn 210 215 220 Ile Pro Met Gly Met Leu Met Gly His Val Thr Tyr Asp Leu Gly Arg 225 230 235 240 Leu Trp Val Val Ser Lys Ser Ala Val Thr Met Val Cys Thr His 245 250 255 <210> 10 <211> 208 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 10 Ser Ile Pro Tyr Tyr Leu Val Gly Asp Lys Trp Ile Arg Leu Pro Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys His Ile Thr Val Gly Pro Ala Gly Ile Trp Gly Val Asn 20 25 30 Lys Asp Tyr Ala Ile Tyr Lys Tyr Val Ala Gly Asn Trp Val Gln Ala 35 40 45 Ala Gly Leu Pro Lys Gln Leu Asp Ala Gly Gly Glu Gln Phe Ile Val 50 55 60 Gly Ala Asn Met Asp Asp Thr Pro Tyr Cys Leu Thr Ser Ser Ala Thr 65 70 75 80 Val Gly Tyr Lys Gly Pro Gly Ser Pro Leu Pro Trp Thr Gly Leu Pro 85 90 95 Gly Ala Val Lys Tyr Tyr Ser Cys Gly Pro Phe Gly Cys Trp Ala Val 100 105 110 Asn Lys Asn Asp Asp Ile Tyr Leu Met Ser Leu Asn Gln Asp Cys Gln 115 120 125 Asn Asn Gly Trp Ser His Ile Glu Gly Lys Leu Ser Met Ile Glu Val 130 135 140 Ala Thr Asp Gly Ser Val Phe Gly Val Asn Ser Ala Gly Ser Val Tyr 145 150 155 160 Thr Arg Asp Gly Ile Thr Ala Ser Lys Pro Glu Gly Thr Gly Trp Ser 165 170 175 Asn Ile Pro Met Cys Met Leu Met Gly His Val Thr Tyr Asp Leu Gly 180 185 190 Arg Leu Trp Val Val Ser Lys Ser Ala Val Thr Met Val Cys Thr His 195 200 205 <210> 11 <211> 255 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 11 Met Arg Thr Thr Ala Ala Phe Leu Leu Val Leu Cys Leu Leu Ala Ile 1 5 10 15 Ser His Ala Trp Asp Cys Gln Glu Val Val Asn Ile Lys Asn Leu Met 20 25 30 Gln Ile Asp Ala Gly Leu Gly Gln Val Val Ala Thr Asp Thr Ser Gln 35 40 45 Ile Pro Tyr Tyr Leu Val Gly Asp Lys Trp Ile Arg Leu Pro Gly Ser 50 55 60 Leu Lys His Ile Thr Val Gly Pro Ala Gly Ile Trp Gly Val Asn Lys 65 70 75 80 Asp Tyr Ala Ile Tyr Lys Tyr Val Ala Gly Asn Trp Val Gln Ala Ala 85 90 95 Gly Leu Leu Lys Gln Leu Asp Ala Gly Gly Asn Gln Phe Val Val Gly 100 105 110 Ala Asn Met Asp Asp Thr Pro Phe Cys Leu Thr Ser Ser Ala Thr Val 115 120 125 Gly Tyr Lys Gly Pro Gly Ser Pro Leu Pro Trp Thr Gly Leu Pro Gly 130 135 140 Ala Val Lys Tyr Tyr Ser Cys Gly His Phe Gly Cys Trp Ala Val Asn 145 150 155 160 Lys Asn Asp Asp Ile Phe Leu Met Ser Leu Asn Gln Asp Cys Gln Asn 165 170 175 Asn Gly Trp Ser His Ile Asp Gly Lys Leu Ser Met Ile Glu Val Ala 180 185 190 Thr Asp Gly Ser Val Phe Gly Val Asn Ser Ala Gly Ser Val Tyr Thr 195 200 205 Arg Asp Gly Ile Thr Ala Ser Lys Pro Glu Gly Thr Gly Trp Ser Asn 210 215 220 Ile Pro Met Gly Met Leu Met Gly His Val Thr Tyr Asp Leu Gly Arg 225 230 235 240 Leu Trp Val Val Ser Lys Ser Gly Gly Thr Met Val Cys Thr His 245 250 255 <210> 12 <211> 255 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 12 Met Gly Thr Thr Ala Ala Phe Leu Leu Val Leu Cys Leu Leu Ala Ile 1 5 10 15 Ser His Ala Trp Asp Cys Gln Glu Val Val Asn Ile Lys Asn Leu Met 20 25 30 Gln Ile Asp Ala Gly Leu Gly Gln Val Val Ala Thr Asp Thr Ser Gln 35 40 45 Ile Pro Tyr Tyr Leu Val Gly Asp Lys Trp Ile Arg Leu Pro Gly Ser 50 55 60 Leu Lys His Ile Thr Val Gly Pro Ala Gly Ile Trp Gly Val Asn Lys 65 70 75 80 Asp Tyr Ala Ile Tyr Lys Tyr Val Ala Gly Asn Trp Val Gln Ala Ala 85 90 95 Gly Leu Leu Lys Gln Leu Asp Ala Gly Gly Glu Gln Phe Ile Val Gly 100 105 110 Ala Asn Met Asn Asp Thr Pro Tyr Cys Leu Thr Ser Ser Ala Thr Val 115 120 125 Gly Tyr Lys Gly Pro Gly Ser Pro Leu Pro Trp Thr Gly Leu Pro Gly 130 135 140 Ala Val Lys Tyr Tyr Ser Cys Gly Pro Phe Gly Cys Trp Ala Val Asn 145 150 155 160 Lys Asn Asp Asp Ile Tyr Leu Met Ser Leu Asn Gln Asp Cys Gln Asn 165 170 175 Lys Gly Trp Ser His Ile Glu Gly Lys Leu Ser Met Ile Glu Val Ala 180 185 190 Thr Asp Gly Ser Val Phe Gly Val Asn Ser Ala Gly Ser Val Tyr Thr 195 200 205 Arg Asp Gly Ile Thr Ala Ser Lys Pro Glu Gly Thr Gly Trp Ser Asn 210 215 220 Ile Pro Met Gly Met Leu Met Gly His Val Thr Tyr Asp Leu Gly Arg 225 230 235 240 Leu Trp Val Val Tyr Lys Ser Ala Val Thr Met Val Cys Thr His 245 250 255

Claims (20)

1. 적어도 하기 단계들 a) 내지 g)를 포함하는, 어류 부화액(fish hatching fluid)으로부터 약제학적 또는 화장료 조성물을 제조하는 방법으로서:
   a) 최소 용적의 물속에 어류 알을 현탁시키는 단계;
   b) 바람직하게는 80% 초과의 배아에 대해 부화가 6시간 미만 내에 완료되도록 상기 알의 동기화된 신속한 부화(synchronized, rapid hatching)를 유도하는 단계;
   c) 선택적으로 상기 부화된 알을 여과시켜 부화액을 얻는 단계; 및
   d) 조성물을 얻기 위하여 b) 또는 c)의 상기 부화액을 여과시키는 단계로서, 적어도 하기 단계들 (i) 및 (ii)를 포함하는, 상기 부화액을 여과시키는 단계:
   (i) 적어도 5㎛의 기공 크기를 지니는 필터를 사용하여 상기 부화액을 여과시키고, 여과액을 수집하는 단계;
   (ii) 단계 (i)로부터의 상기 여과액에 하기 단계들 (1) 내지 (5)를 포함하는 이온 교환 크로마토그래피를 실시하는 단계:
   (1) 이온 교환 칼럼, 바람직하게는 DEAE(다이에틸아미노에틸) 칼럼 상에 상기 여과액을 장입하는 단계;
   (2) 적합한 완충제, 바람직하게는 pH 7 내지 9에서의 완충된 세척 용액으로 상기 칼럼을 세척하는 단계;
   (3) 제1 용리 완충제 또는 용매를 사용하여 상기 칼럼으로부터 류코렉틴 폴리펩타이드를 용리시키는 단계로서, 바람직하게는 상기 제1 용리 완충제가 50 내지 100mM의 농도로 염을 추가로 포함하는 상기 완충된 세척 용액을 포함하는, 상기 류코렉틴 폴리펩타이드를 용리시키는 단계;
   (4) 제2 용리 완충제 또는 용매를 사용하여 상기 칼럼으로부터 남아있는 폴리펩타이드를 용리시키는 단계로서, 바람직하게는 상기 제2 용리 완충제가 500mM 내지 2M의 농도로 염을 포함하는 상기 완충된 세척 용액을 포함하는, 상기 남아있는 폴리펩타이드를 용리시키는 단계;
   (5) 단계 (4)로부터 용리액을 수집하는 단계;
   e) 단계 (5)로부터의 상기 용리액 중의 물을 약제학적으로 또는 미용적으로 허용가능한 완충제와 교환하는 단계;
   f) 0.15 내지 0.30㎛의 기공 크기를 지니는 필터를 사용하여 단계 (e)로부터 얻어진 용액을 여과시키고, 여과액을 수집하는 단계; 및
   g) 단계 (f)로부터의 상기 여과액으로부터 상기 약제학적 또는 화장료 조성물을 제조하는 단계를 포함하는, 방법.
2. 제1항에 있어서, 기공 크기가 0.30 내지 0.60㎛인 필터를 사용하여 단계 (i)로부터의 상기 여과액을 여과시키고, 상기 여과액을 수집하는 추가의 단계를 포함하는, 방법.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
   a) 단계 (i)에서의 상기 필터의 기공 크기는 5 내지 15㎛이되, 바람직하게는 상기 기공 크기는 7㎛이고;
   b) 제2항에서의 상기 필터의 상기 기공 크기는 0.35 내지 0.55㎛이되, 바람직하게는 상기 기공 크기는 0.45㎛이고/이거나;
   c) 단계 (f)에서의 상기 필터의 상기 기공 크기는 0.22㎛인, 방법.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (e)는 정용여과를 포함하는, 방법.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 알은 골설어상목(Osteoglossomorpha), 당멸치상목(Elopomorpha), 청어상목(Clupeomorpha), 골표상목(Ostariophysi), 원극기상목(Protacanthopterygii), 협기상목(Stenopterygii), 원린상목(Cyclosquamata), 스코펠로상목(Scopelomorpha), 이악어상목(Lampridiomorpha), 폴리믹시아상목(Polymyxiomorpha), 측극기상목(Paracanthopterygii) 및 극기상목(Acanthopterygii)으로 이루어진 목록으로부터 선택된 임의의 상목(Superorder)의 어류로부터 선택된 어류로부터 유래되는, 방법.
6. 제5항에 있어서, 상기 어류는 골설어목(Osteoglossiformes), 히오돈목(Hiodontiformes), 당멸치목(Elopiformes), 여을멸목(Albuliformes), 밑보리멸목(Notacanthiformes), 뱀장어목(Anguilliformes), 심해뱀장어목(Saccopharyngiformes), 청어목(Clupeiformes), 압치목(Gonorynchiformes), 잉어목(Cypriniformes), 카라신목(Characiformes), 김노투스목(Gymnotiformes), 메기목(Siluriformes), 샛멸목(Argentiniformes), 연어목(Salmoniformes), 민물꼬치고기목(Esociformes), 바다빙어목(Osmeriformes), 꼬리치목(Ateleopodiformes), 앨퉁이목(Stomiiformes), 홍메치목(Aulopiformes), 샛비늘치목(Myctophiformes), 이악어목(Lampriformes), 턱수염금눈돔목(Polymixiiformes), 연농어목(Percopsiformes), 두꺼비고기목(Batrachoidiformes), 아귀목(Lophiiformes), 대구목(Gadiformes), 첨치목(Ophidiiformes), 숭어목(Mugiliformes), 색줄멸목(Atheriniformes), 동갈치목(Beloniformes), 케토미무스목(Cetomimiformes), 열대송사리목(Cyprinodontiformes), 스테파노베리스목(Stephanoberyciformes), 금눈돔목(Beryciformes), 달고기목(Zeiformes), 학치목(Gobiesociformes), 큰가시고기목(Gasterosteiformes), 실고기목(Syngnathiformes), 드렁허리목(Synbranchiformes), 복어목(Tetraodontiformes), 가자미목(Pleuronectiformes), 쏨뱅이목(Scorpaeniformes) 농어목(Perciformes) 및 철갑상어목(Acipenseriformes)으로 이루어진 목록으로부터 선택된 임의의 목(Order)으로부터 유래되는, 방법.
7. 제6항에 있어서, 상기 어류는 연어과(Salmonidae), 잉어과(Cyprinidae), 시클리드과(Cichlidae), 팬가시메기과(Pangasiidae), 민어과(Sciaenidae), 바리과(Serranidae), 전갱이과(Carangidae), 도미과(Sparidae), 스즈키과(Lateolabracidae), 농어과(Moronidae), 숭어과(Mugilidae), 나일농어과(Latidae), 구굴무치과(Eleotridae) 및 철갑상어과(Acipenseridae)로 이루어진 목록으로부터 선택된 임의의 과(Family)로부터 유래되는, 방법.
8. 제7항에 있어서, 상기 어류는 초어(크테노파링고돈 이델라(Ctenopharyngodon idella)), 백연어(하이포프탈미크티스 모리트릭스(Hypophthalmichthys molitrix)), 카틀라(카틀라 카틀라(Catla catla)), 잉어(시프리누스 카르피오(Cyprinus carpio)), 대두어(하이포프탈미크티스 노빌리스(Hypophthalmichthys nobilis)), 붕어(카라시우스 카라시우스(Carassius carassius)), 역돔(오레오크로미스 닐로티쿠스 닐로티쿠스(Oreochromis niloticus niloticus)), 판가스 메기(판가시우스 판가시우스(Pangasius pangasius)), 로호 라베오(Roho labeo)(라베오 로히타(Labeo rohita)), 대서양 연어(살모 사라르(Salmo salar)), 부세(라리미크티스 크로세아(Larimichthys crocea)), 그리지 그루퍼(Greasy grouper)(에피네펠루스 타우비나(Epinephelus tauvina)), 바다송어(살모 트루타 트루타(Salmo trutta trutta)), 방어(세리올라 퀸쿼라디아타(Seriola quinqueradiata)), 길트레트 시브레암(Gilthead seabream)(스파루스 아우라타(Sparus aurata)), 농어(라테올라브랙스 자포니쿠스(Lateolabrax japonicus)), 유러피언 시배스(디센트라쿠스 라브랙스(Dicentrarchus labrax)), 참돔(크리소프리스 아우라투스(Chrysophrys auratus)), 숭어(무길 세팔루스(Mugil cephalus)), 바라문디(라테스 칼카리페르(Lates calcarifer)), 마블 고비(옥시엘레오트리스 마르모라타(Oxyeleotris marmorata)), 역돔(오레오크로미스 모잠비쿠스(Oreochromis mossambicus)), 산천어(온코린쿠스 미키스(Oncorhynchus mykiss)), 은연어(온코린쿠스 키수치(Oncorhynchus kisutch)), 왕연어(온코린쿠스 츠하이츠카(Oncorhynchus tshawytscha)), 곱사연어(온코린쿠스 고르부스카(Oncorhynchus gorbuscha)), 백연어(온코린쿠스 케타(Oncorhynchus keta)), 붉은 연어(온코린쿠스 네르카(Oncorhynchus nerka)), 시베리아 철갑상어(아시펜세르 바에리(Acipenser baerii))및 다누베 스투르게온(Danube sturgeon)(아시펜세르 구엘덴스타에드티(Acipenser gueldenstaedtii))으로 이루어진 목록으로부터 선택된 종인, 방법.
9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 부화는 95% 초과의 배아에 대해 2시간 미만 내에 완료되는, 방법.
10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 규정된 방법으로부터 얻어지거나 또는 얻을 수 있는 약제학적 또는 화장료 조성물.
11. 치료법(therapy)에서 사용하기 위한 제10항에 청구된 바와 같은, 조성물.
12. (i) 동물의 피부를 박피(exfoliating) 및/또는 보습화하고/하거나 (ii) 동물의 피부 모공 크기를 감소시키기 위한 미용적 또는 비-미용적 방법으로서, 제10항에 규정된 바와 같은 조성물이 상기 동물에게 투여되는, 방법.
13. 동물의 피부의 박피 및/또는 보습화에 사용하기 위한 제10항에 정의한 바와 같은, 조성물.
14. 동물의 피부의 병태 또는 장애를 치료 또는 예방하는 미용적 또는 비-미용적 방법으로서, 상기 피부는 비정상적으로 건성이거나, 상기 피부의 상기 각질층은 비정상적으로 비후화(thickened)되거나 또는 상기 피부는 색소형성 장애를 가지되, 제10항에 규정된 바와 같은 조성물이 상기 동물에게 투여되는, 방법.
15. 동물의 피부의 병태 또는 장애를 치료 또는 예방하는 미용적 또는 비-미용적 방법에서 사용하기 위한 제10항에 정의된 바와 같은 조성물로서, 상기 피부는 비정상적으로 건성이거나, 상기 피부의 상기 각질층은 비정상적으로 비후화되거나 또는 상기 피부는 색소형성 장애를 갖는, 조성물.
16. 제14항 또는 제15항에 있어서, 치료 또는 예방될 상기 피부 병태 또는 장애는 습진, 접촉성 피부염, 건선, 어린선 또는 여드름인, 방법 또는 조성물.
17. 제14항 또는 제15항에 있어서, 치료 또는 예방될 상기 피부 병태 또는 장애는 염증 및/또는 비염증 피부 병변, 바람직하게는 구진, 고름 물집, 블랙헤드 및/또는 화이트헤드를 포함하는, 방법 또는 조성물.
18. 제14항 또는 제15항에 있어서, 치료 또는 예방될 상기 피부 병태 또는 장애는 굳은살, 티눈, 사마귀 또는 기미를 포함하는, 방법 또는 조성물.
19. 제10항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 생성물, 재료 또는 장치에 코팅, 침윤 또는 화학적으로 결합되는, 방법 또는 조성물.
20. 제10항에 규정된 바와 같은 조성물로 코팅, 침윤 또는 화학적으로 결합된 생성물, 재료 또는 장치.

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