KR20140117684A - 단백질 키나제 억제제로서의 헤테로아릴 화합물 및 조성물 - Google Patents

단백질 키나제 억제제로서의 헤테로아릴 화합물 및 조성물

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KR20140117684A
KR20140117684A KR1020147024689A KR20147024689A KR20140117684A KR 20140117684 A KR20140117684 A KR 20140117684A KR 1020147024689 A KR1020147024689 A KR 1020147024689A KR 20147024689 A KR20147024689 A KR 20147024689A KR 20140117684 A KR20140117684 A KR 20140117684A
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앤 마리 마데라
다니엘 푼
아론 스미스
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노파르티스 아게
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Abstract

본 발명은 하기 화학식 I의 화합물을 제공한다.
<화학식 I>
Figure pat00195

상기 식에서, R1, R2, R3 및 X는 본원에 정의된 바와 같다. 화학식 I의 화합물 및 그의 제약 조성물은 암 및 B-Raf-연관 질환의 치료에 유용하다.

Description

단백질 키나제 억제제로서의 헤테로아릴 화합물 및 조성물 {HETEROARYL COMPOUNDS AND COMPOSITIONS AS PROTEIN KINASE INHIBITORS}
본 발명은 신규 부류의 화합물, 이러한 화합물을 포함하는 제약 조성물, 및 비정상적이거나 탈조절된 키나제 활성과 연관된 질환 또는 장애, 특히 B-Raf의 비정상적 활성화를 수반하는 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하기 위한 이러한 화합물의 사용 방법을 제공한다.
단백질 키나제는 매우 다양한 세포 과정의 조절 및 세포 기능에 대한 제어 유지에 있어 중추적인 역할을 하는, 거대 패밀리의 단백질을 나타낸다. 이들 키나제의 부분적이고 비제한적인 목록은 수용체 티로신 키나제, 예컨대 혈소판-유래의 성장 인자 수용체 키나제 (PDGF-R), 신경 성장 인자 수용체, trkB, Met, 및 섬유모세포 성장 인자 수용체인 FGFR3; 비-수용체 티로신 키나제, 예컨대 Abl 및 융합 키나제 BCR-Abl, Lck, Csk, Fes, Bmx 및 c-src; 및 세린/트레오닌 키나제, 예컨대 B-Raf, sgk, MAP 키나제 (예를 들어, MKK4, MKK6 등), 및 SAPK2α, SAPK2β 및 SAPK3을 포함한다. 키나제의 이상 활성은 양성 및 악성 증식성 장애 뿐만 아니라 면역계 및 신경계의 부적절한 활성화로부터 발병하는 질환을 비롯한 많은 질환 상태에서 관찰되어 왔다.
본 발명은 신규 부류의 화합물, 이러한 화합물을 포함하는 제약 조성물, 및 비정상적이거나 탈조절된 키나제 활성과 연관된 질환 또는 장애, 특히 B-Raf의 비정상적 활성화를 수반하는 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하기 위한 이러한 화합물의 사용 방법을 제공하고자 한다.
본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다:
<화학식 I>
Figure pat00001
상기 식에서,
X는 O 또는 S를 나타내고;
R1은 C1 -6-알킬, C3 -8 분지형 알킬, C3 -8 시클로알킬, 임의로 치환된 헤테로아릴, 임의로 치환된 헤테로시클릴 및 임의로 치환된 아릴로부터 선택되고;
R2는 R11로 치환된 헤테로아릴이고;
R3은 R12, R13 및 R15로 치환된 페닐로부터 선택되고;
R11은 H 및 임의로 치환된 아미노로부터 선택되고;
R12는 할로겐 또는 H이고;
R13은 NHSO2알킬 및 NHSO2아릴로부터 선택되고;
R15는 할로겐, H 및 C1 -6 알킬로부터 선택된다.
본 발명의 바람직한 실시양태는 X가 O 또는 S를 나타내고; R1이 C3 -6 분지형 알킬, C3 -6 시클로알킬 및 임의로 치환된 페닐로부터 선택되고; R2가 R11로 치환된 헤테로아릴이고; R3이 R12, R13 및 R15로 치환된 페닐로부터 선택되고; R11이 H, 아미노 및 NH-CH2-CH(CH3)NH-C(O)-OCH3으로부터 선택되고; R12가 할로겐이고; R13이 NHSO2-C1 -6 알킬 및 NHSO2-임의로 치환된 페닐로부터 선택되고; R15가 할로겐, H 및 C1 -6 알킬로부터 선택된 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
또 다른 바람직한 실시양태는 X가 O 또는 S를 나타내고; R1이 C3 -6 분지형 알킬, C3 -6 시클로알킬 및 임의로 치환된 페닐로부터 선택되고; R2가 R11로 치환된 헤테로아릴이고; R3이 R12, R13 및 R15로 치환된 페닐로부터 선택되고; R11이 H, NH-(CH2)1-2-CN 및 아미노로부터 선택되고; R12가 할로겐이고; R13이 NHSO2-C1 -6 알킬이고; R15가 할로겐, H 및 C1 -6 알킬로부터 선택된 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 이러한 실시양태의 바람직한 측면은 X가 O 또는 S를 나타내고; R1이 t-부틸, 시클로-프로필 및 치환된 페닐로부터 선택되고; R2가 R11로 치환된 피리미디닐이고; R3이 R12, R13 및 R15로 치환된 페닐로부터 선택되고; R11이 NH2이고; R12가 Cl 또는 F이고; R13이 NHSO2-C1 -3 알킬이고; R15가 F, Br, CH3, H 및 Cl로부터 선택된 것인 화학식 I의 화합물을 제공한다. 본 발명의 이러한 측면의 구체적인 측면은 X가 O를 나타내고; R1이 시클로프로필을 나타내고; R15가 Cl 또는 F를 나타내는 것인 화학식 I의 화합물을 제공한다. 본 발명의 또 다른 특히 바람직한 측면은 X가 S를 나타내고; R1이 시클로프로필을 나타내고; R15가 Cl 또는 F를 나타내는 것인 화학식 I의 화합물을 제공한다.
본 발명의 추가의 바람직한 실시양태는 X가 O 또는 S를 나타내고; R1이 C3 -6 분지형 알킬, C3 -6 시클로알킬 및 임의로 치환된 페닐로부터 선택되고; R2가 R11로 치환된 헤테로아릴이고; R3이 R12, R13 및 R15로 치환된 페닐로부터 선택되고; R11이 NH(CH2)1-2-CN 또는 NH-CH2-CH(CH3)NH-C(O)-OCH3이고; R12가 할로겐이고; R13이 NHSO2-치환된 페닐이고; R15가 할로겐, H 및 C1 -6 알킬로부터 선택된 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 이러한 실시양태의 추가의 바람직한 측면은 X가 O 또는 S를 나타내고; R1이 t-부틸, 시클로-프로필 및 치환된 페닐로부터 선택되고; R2가 R11로 치환된 피리미디닐이고; R3이 R12, R13 및 R15로 치환된 페닐로부터 선택되고; R11이 NH(CH2)1-2-CN 또는 NH-CH2-CH(CH3)NH-C(O)-OCH3이고; R12가 Cl 또는 F이고; R13이 NHSO2-치환된 페닐이고; R15가 F, Br, CH3, H 및 Cl로부터 선택된 것인 화학식 I의 화합물을 제공한다.
본 발명의 특히 바람직한 화합물은
N-(3-(5-(2-아미노피리미딘-4-일)-2-시클로프로필티아졸-4-일)-5-클로로-2-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드;
(S)-메틸 1-(4-(4-(5-클로로-2-플루오로-3-(프로필술폰아미도)페닐)-2-시클로프로필티아졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)프로판-2-일카르바메이트;
N-(2,5-디클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸아미노)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)페닐)프로판-1-술폰아미드;
N-(3-(5-(2-아미노피리미딘-4-일)-2-시클로프로필티아졸-4-일)-2,5-디클로로페닐)프로판-1-술폰아미드;
(S)-메틸 1-(4-(4-(2-클로로-5-플루오로-3-(프로필술폰아미도)페닐)-2-시클로프로필티아졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)프로판-2-일카르바메이트; 및
N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸아미노)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-5-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드;
N-(3-(5-(2-아미노피리미딘-4-일)-2-시클로프로필옥사졸-4-일)-5-클로로-2-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드; 및
N-(3-(5-(2-아미노피리미딘-4-일)-2-시클로프로필옥사졸-4-일)-2,5-디클로로페닐)프로판-1-술폰아미드
또는 그의 제약상 허용되는 염
으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 또 다른 측면에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물이 제공된다. 제약 조성물은 항암 화합물, 진통제, 항구토제, 항우울제 및 항염증제로 이루어진 군으로부터 선택된 추가의 치료제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에서는 암의 치료가 필요한 대상체에게 제약 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 측면의 바람직한 실시양태는 상기 암이 폐 암종, 췌장 암종, 방광 암종, 결장 암종, 골수 장애, 전립선암, 갑상선암, 흑색종 및 선종으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 암의 치료가 필요한 대상체에게 제약 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 희석제, 담체 또는 부형제를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 측면의 바람직한 실시양태는 상기 암이 폐 암종, 췌장 암종, 방광 암종, 결장 암종, 골수 장애, 전립선암, 갑상선암, 흑색종 및 선종으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면에서는 Raf 키나제에 의해 매개되는 상태의 치료가 필요한 대상체에게 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, Raf 키나제에 의해 매개되는 상태를 치료하는 방법이 제공된다. 바람직하게는, 매개하는 Raf 키나제는 돌연변이체 b-Raf 키나제, 보다 바람직하게는 돌연변이체 b-Raf(V600E) 키나제이다.
상기 방법은 추가의 치료제를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 바람직한 추가의 작용제는 항암 약물, 통증 의약, 항구토제, 항우울제 또는 항염증제를 포함하고, 보다 바람직하게는 추가의 치료제는 다른 Raf 키나제 억제제, 또는 MEK, mTOR, PI3K, CDK9, PAK, 단백질 키나제 C, MAP 키나제, MAPK 키나제 또는 ERK의 억제제이다.
본 발명은 단지 예시적 목적을 위해 제공되지만 본원에서 교시에 따라 제한하는 것으로 해석되지는 않는 하기의 비제한적 예로 하기에 추가로 설명될 수 있다:
정의
기로서 및 다른 기, 예를 들어, 할로-치환된 알킬 및 알콕시의 구조 요소로서의 "알킬"은 직쇄형 또는 분지형일 수 있다. C1 -4-알콕시는 메톡시, 에톡시 등을 포함한다. "할로치환된 알킬"은 임의의 수소가 할로겐으로 치환될 수 있는 알킬 기 (분지형 또는 비분지형)를 지칭한다. 할로치환된-(C1-C4)알킬의 대표적인 예는 플루오로메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 클로로플루오로메틸, 디플루오로에틸, 펜타플루오로에틸 등을 포함한다. 유사하게, 히드록시-치환된-(C1-C6)알킬은 임의의 수소가 히드록실로 치환될 수 있는 알킬 기 (분지형 또는 비분지형)를 의미한다. 예를 들어, 히드록시-치환된-(C1-C6)알킬은 2-히드록시에틸 등을 포함한다. 유사하게, 시아노-치환된-(C1-C6)알킬은 임의의 수소가 시아노로 치환될 수 있는 알킬 기 (분지형 또는 비분지형)를 의미한다.
"아릴"은 6 내지 10개의 고리 탄소 원자를 함유하는 모노시클릭 또는 융합된 비시클릭 방향족 고리 집합체를 의미한다. 예를 들어, 아릴은 페닐 또는 나프틸, 바람직하게는 페닐일 수 있다. "아릴렌"은 아릴 기로부터 유래된 2가의 라디칼을 의미한다.
"헤테로아릴"은 고리원 중 1개 이상이 헤테로원자인, 상기 정의된 바와 같은 아릴이다. 예를 들어, (C1-C10)헤테로아릴은 피리딜, 인돌릴, 인다졸릴, 퀴녹살리닐, 퀴놀리닐, 벤조푸라닐, 벤조피라닐, 벤조티오피라닐, 벤조[1,3]디옥솔, 이미다졸릴, 벤조-이미다졸릴, 피리미디닐, 푸라닐, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 피라졸릴, 티에닐 등을 포함한다.
"시클로알킬"은 명시된 갯수의 고리 원자를 함유하는 포화 또는 부분 불포화 모노시클릭, 융합된 비시클릭 또는 가교된 폴리시클릭 고리 집합체를 의미한다. 예를 들어, (C3-C10)시클로알킬은 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 시클로노닐 및 시클로데실을 포함한다. 바람직한 시클로알킬은 시클로프로필이다.
"헤테로시클로알킬"은 고리 탄소 중 1개 이상이 -O-, -N=, -NR- (여기서, R은 수소, (C1-C4)알킬 또는 질소 보호기 (-NPg)임), -C(O)-, -S-, -S(O)- 또는 -S(O)2-로부터 선택된 모이어티에 의해 대체된 것인 시클로알킬을 의미한다. (C3-C8)헤테로시클로알킬의 대표적인 예는 2H-피라닐, 4H-피라닐, 피페리디닐, 1,4-디옥산, 모르폴리닐, 1,4-디티아닐, 티오모르폴리노, 이미다졸리딘-2-온, 테트라히드로푸란, 피페라지닐, 1,3,5-트리티아닐, 피롤리디닐, 피롤리디닐-2-온, 피페리디논, 1,4-디옥사-8-아자-스피로[4.5]데스-8-일 등을 포함한다.
"할로겐" (또는 할로)은 클로로, 플루오로, 브로모 또는 아이오도를 나타낸다.
"pMEK"는 인산화 Mek를 의미한다.
"pERK"는 인산화 ERK를 의미한다.
"치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 질환 및/또는 그의 부수적인 증상을 완화 또는 경감시키는 방법을 지칭한다.
용어 "본 발명의 화합물"은 (달리 구체적으로 확인되지 않는 한) 화학식 I의 화합물, 그의 전구약물, 상기 화합물 및/또는 전구약물의 제약상 허용되는 염, 및 상기 화합물, 염 및/또는 전구약물의 수화물 또는 용매화물 뿐만 아니라 모든 입체이성질체 (부분입체이성질체 및 거울상이성질체 포함), 호변이성질체 및 동위원소로 표지된 화합물을 지칭한다.
상세한 설명
본 발명의 화합물은, 특히 본원에 함유되어 있는 설명에 비추어 볼 때 화학업계에 널리 공지되어 있는 것과 유사한 방법을 포함하는 합성 경로에 의해 합성될 수 있다. 출발 물질은 일반적으로 상업적 공급원, 예컨대 알드리치 케미칼스(Aldrich Chemicals)(위스콘신주 밀워키)로부터 입수가능하거나, 또는 당업자에게 널리 공지된 방법 (예를 들어, 문헌 [Louis F. Fieser and Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-19, Wiley, New York (1967-1999 ed.)] 또는 [Beilsteins Handbuch der Organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin] (부록 포함) (또한 바일스타인(Beilstein) 온라인 데이터베이스를 통해 입수가능함)에 일반적으로 기재된 방법에 의해 제조됨)을 이용하여 용이하게 제조된다.
예시적 목적을 위해, 하기 도시된 반응식은 본 발명의 화합물 뿐만 아니라 주요 중간체를 합성하는 잠재적 경로를 제공한다. 개개의 반응 단계의 보다 상세한 설명에 대해서는 하기의 실시예 섹션을 참조한다. 당업자는 다른 합성 경로를 이용하여 본 발명의 화합물을 합성할 수 있다는 것을 인지할 것이다. 구체적인 출발 물질 및 시약이 반응식에 도시되고 하기에 논의되어 있지만, 다른 출발 물질 및 시약으로 용이하게 대체하여 다양한 유도체 및/또는 반응 조건을 제공할 수 있다. 추가로, 하기 기재된 방법에 의해 제조된 많은 화합물이 당업자에게 널리 공지된 통상의 화학을 이용하여 본 개시내용에 비추어 추가로 변형될 수 있다.
일반적 합성 기술
화학식 I의 화합물은 하기 반응식 I에 요약된 절차를 이용하여 제조될 수 있다.
<반응식 I>
Figure pat00002
피발아미드 (1a)로서의 출발 브로모아닐린 (SM-1)의 간단한 보호, 이어서 브로마이드 모이어티의 Pd(0) 매개 카르보닐화는 관능화된 아미도에스테르 (1b)를 제공할 수 있다. 4-메틸-2-(메틸티오)피리미딘 또는 4-메틸-2-클로로피리미딘을 탈양성자화한 다음, 이어서 (1b)에 첨가하여 정교화된 케톤 (1c)를 공급할 수 있는 한편, N-브로모숙신이미드 (NBS)로 처리하여 브로모케톤 (1d)를 수득할 것이다. 이어서, 적절하게 치환된 티오아미드 또는 아미드와의 고리화축합은 상응하는 티아졸 또는 옥사졸 (1e)를 생성할 것이다. 피발아미드 보호기를 제거하고, 후속적인 아닐리드 (1f)를 바람직한 술포닐 클로라이드로 처리하여 중간체 (1g)를 생성할 것이다. 2-클로로피리미딘 모이어티를 직접 대체하거나 또는 메틸티오 모이어티를 술폰 또는 술폭시드 (1h)로 산화시킨 다음, 적절한 아민으로 대체하여 화학식 I의 화합물 (1i)를 생성할 것이다.
유용한 중간체를 공급하기 위한 반응식 I의 결과는 하기 반응식 II에 기재되어 있다.
<반응식 II>
Figure pat00003
적절하게 치환된 브로모아렌 (SM-2)를 적합한 강염기, 예컨대 리튬 2,2,6,6-테트라메틸-피페리딘에 의해 탈보호하고, DMF로 켄칭하여 상응하는 알데히드 (2a)를 제공할 수 있다. 산으로의 산화 및 후속적인 에스테르화는 브로모에스테르 (2b)를 제공할 것이다. 피발아미드를 사용한 팔라듐(0) 매개 아미드화로 아미도에스테르 (1b)를 수득할 것이고, 이것은 반응식 I을 통해 화학식 I의 화합물로 정교화될 수 있다.
본 발명의 화합물을 제조하기 위한 또 다른 대안적 경로는 하기 반응식 III에 요약되어 있다.
<반응식 III>
Figure pat00004
단순 니트로벤조산 (SM-3)을 에스테르 (3a)로 쉽게 전환시킬 수 있다. Zn-암모늄 클로라이드를 사용한 니트로 환원 또는 임의의 다른 적절한 니트로 환원 방법은 유용한 아닐리노에스테르 (3b)를 제공할 수 있다. 적절한 술포닐 클로라이드로 처리하여 술포닐이미드 (3c) 또는 상응하는 술포닐아미드 (3d)를 제공할 수 있다. 4-메틸-2-(메틸티오)피리미딘 또는 4-메틸-2-클로로피리미딘을 탈보호한 다음, (3c) 또는 (3d)에 첨가하여, 술포닐이미드 절단과 동시에 정교화된 케톤 (3e)를 제공할 수 있다. 이어서, N-브로모숙신이미드 (NBS)로 처리하여 브로모케톤 술폰아미드 (3f)를 수득할 것이다. 적절하게 치환된 티오아미드 또는 아미드와의 고리화축합은 상응하는 티아졸 또는 옥사졸 (1g)를 제공할 것이고, 이것은 반응식 I에 요약된 경로를 통해 화학식 I의 화합물로 정교화될 수 있다.
본 발명의 화합물로 접근하는 또 다른 경로는 하기 반응식 IV에 요약된다.
<반응식 IV>
Figure pat00005
4-메틸-2-(메틸티오)피리미딘 또는 4-메틸-2-클로로피리미딘를 탈보호한 다음, (3a)에 첨가하여 정교화된 케톤 (4a)를 제공할 수 있다. 이어서, N-브로모숙신이미드 (NBS)로 처리하여 브로모케톤 술폰아미드 (4b)를 수득할 것이다. 이어서, 적절하게 치환된 티오아미드 또는 아미드와의 고리화축합은 상응하는 티아졸 또는 옥사졸 (4c)를 제공할 것이다. Zn/염화암모늄을 사용한 니트로 환원 또는 임의의 다른 적절한 니트로 환원 방법은 아닐린 (1f)를 제공할 것이고, 이것은 화학식 I의 화합물로 정교화될 수 있다.
화학식 I의 화합물은 또한 반응식 V에서 하기에 요약된 절차에 의해 제조될 수 있다.
<반응식 V>
Figure pat00006
(1d) 또는 (3d)와 우레아 또는 티오우레아를 고리화축합하여 상응하는 C-2 아미노티아졸 또는 아미노옥사졸 (5a)를 수득할 것이다. 샌드마이어(Sandmeyer) 반응은 목적하는 C-2 브로모 헤테로사이클 (5b)를 제공할 수 있다. 바람직한 보로네이트 에스테르 또는 산을 사용한 스즈끼(Suzuki) 교차-커플링은 삼치환 헤테로사이클 (1e) 또는 (1g)를 제공하고, 이어서 이것을 화학식 I의 화합물로 정교화할 수 있다.
본 발명의 화합물 (중간체 포함)은 그 자체로, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 용매화물 및/또는 수화물의 형태로 단리 및 사용될 수 있다. 화학식 I에 의해 나타내어진 다수의 화합물은 산 부가염, 특히 제약상 허용되는 산 부가염을 형성할 수 있다. 본 발명의 제약상 허용되는 산 부가염은 무기 산, 예를 들어 할로겐화수소산, 예컨대 염산, 브로민화수소산 또는 아이오딘화수소산, 질산, 황산, 인산의 염; 및 유기 산, 예를 들어 지방족 모노카르복실산, 예컨대 포름산, 아세트산, 프로피온산 및 부티르산, 지방족 히드록시 산, 예컨대 락트산, 시트르산, 타르타르산 또는 말산, 디카르복실산, 예컨대 말레산 또는 숙신산, 방향족 카르복실산, 예컨대 벤조산, p-클로로벤조산, 디페닐아세트산 또는 트리페닐아세트산, 방향족 히드록시 산, 예컨대 o-히드록시벤조산, p-히드록시벤조산, 1-히드록시나프탈렌-2-카르복실산 또는 3-히드록시나프탈렌-2-카르복실산, 및 술폰산, 예컨대 메탄술폰산 또는 벤젠술폰산의 염을 포함한다. 이들 염은 공지된 염-형성 절차에 의해 화학식 I의 화합물로부터 제조될 수 있다.
산성 기, 예를 들어 카르복실 기를 함유하는 본 발명의 화합물은 또한 염기, 특히 당업계에 널리 공지된 것과 같은 제약상 허용되는 염기와의 염을 형성할 수 있고; 적합한 이러한 염은 금속 염, 특히 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염, 예컨대 나트륨, 칼륨, 마그네슘 또는 칼슘 염, 또는 암모니아 또는 제약상 허용되는 유기 아민 또는 헤테로시클릭 염기, 예컨대 에탄올아민, 벤질아민 또는 피리딘과의 염을 포함한다. 이들 염은 공지된 염-형성 절차에 의해 화학식 I의 화합물로부터 제조될 수 있다.
비대칭 탄소 원자를 함유하는 이들 화합물의 경우에, 화합물은 개개의 광학 활성 이성질체 형태 또는 그의 혼합물로, 예를 들어 라세미 또는 부분입체이성질체 혼합물로서 존재한다. 달리 명시되지 않는 한, 본 발명은 개개의 광학 활성 R 및 S 이성질체 둘다, 뿐만 아니라 그의 혼합물, 예를 들어 라세미 또는 부분입체이성질체 혼합물을 포함한다. 또한, 본 발명은 모든 기하 및 위치 이성질체를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 화합물이 이중 결합 또는 융합된 고리를 포함하는 경우, 시스- 및 트랜스-형태 둘 다, 뿐만 아니라 혼합물이 본 발명의 범주 내에 포함된다.
부분입체이성질체 혼합물은 이들의 개개의 부분입체이성질체들의 물리/화학적 차이를 기초로 하여 당업자에게 공지된 방법, 예컨대 크로마토그래피 및/또는 분별 결정화에 의해 이들의 개개의 부분입체이성질체로 분리될 수 있다. 거울상이성질체는, 적절한 광학 활성 화합물 (예를 들어, 키랄 보조제, 예컨대 키랄 알콜 또는 모셔(Mosher) 산 클로라이드)과의 반응에 의해 거울상이성질체 혼합물을 부분입체이성질체 혼합물로 전환시키고, 부분입체이성질체를 분리하고, 개개의 부분입체이성질체들을 상응하는 순수한 거울상이성질체로 전환 (예를 들어, 가수분해)시켜 분리할 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물 중 일부는 회전장애이성질체 (예를 들어, 치환된 비아릴)일 수 있고, 본 발명의 일부로 고려된다. 거울상이성질체는 또한 상업적으로 입수가능한 키랄 고압 액체 크로마토그래피 (HPLC) 칼럼을 이용하여 분리될 수 있다.
본 발명의 화합물은 비용매화 형태, 뿐만 아니라 제약상 허용되는 용매, 예컨대 물, 에탄올 등과의 용매화 형태로 존재할 수 있으며, 본 발명이 용매화 및 비용매화 형태 둘 다를 포괄하는 것으로 의도된다. 본 발명의 목적을 위해, 용매화물 (수화물 포함)은 제약 조성물, 예를 들어 용매인 부형제와 조합된 화학식 I의 화합물 (또는 그의 제약상 허용되는 염)로 여겨진다. 화합물 자체, 그의 제약 염, 또는 상기 화합물 또는 염의 용매화물/수화물은 무정형 또는 결정질 형태 (예를 들어, 다형체)로 존재할 수 있다.
본 발명의 중간체 및 화합물이 상이한 호변이성질체 형태로 존재할 수 있는 것이 또한 가능하고, 이러한 모든 형태는 본 발명의 범주 내에 포함된다. 용어 "호변이성질체" 또는 "호변이성질체 형태"는 낮은 에너지 장벽을 통해 상호전환가능한 상이한 에너지의 구조 이성질체를 지칭한다. 예를 들어, 양성자 호변이성질체 (또한 양성자성 호변이성질체로도 공지됨)는 양성자의 이동을 통한 상호전환, 예컨대 케토-에놀 및 이민-엔아민 이성질체화를 포함한다. 양성자 호변이성질체의 구체적인 예는 양성자가 2개의 고리 질소 사이에서 이동할 수 있는 이미다졸 모이어티이다. 원자가 호변이성질체는 일부의 결합 전자의 재배치에 의한 상호전환을 포함한다.
본 발명은 1개 이상의 원자가 원자 번호는 동일하지만 자연에서 일반적으로 발견되는 원자 질량 또는 질량수와는 상이한 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자로 대체된 것인 모든 제약상 허용되는 동위원소-표지된 화학식 I의 화합물을 포함한다.
본 발명의 화합물에 포함되기에 적합한 동위원소의 예는 수소의 동위원소, 예컨대 2H 및 3H, 탄소의 동위원소, 예컨대 11C, 13C 및 14C, 염소의 동위원소, 예컨대 36Cl, 플루오린의 동위원소, 예컨대 18F, 아이오딘의 동위원소, 예컨대 123I 및 125I, 질소의 동위원소, 예컨대 13N 및 15N, 산소의 동위원소, 예컨대 15O, 17O 및 18O, 인의 동위원소, 예컨대 32P, 황의 동위원소, 예컨대 35S를 포함한다.
보다 무거운 동위원소, 예컨대 중수소, 즉, 2H로의 치환은 더욱 양호한 대사 안정성, 예를 들어 생체내 반감기의 증가 또는 투여량 요건의 감소로부터 생성된 특정의 치료 이점을 제공할 수 있으며, 따라서 일부 상황에서는 바람직할 수 있다.
동위원소-표지된 화학식 I의 화합물은 일반적으로 당업자에게 공지된 통상의 기술에 의해 또는 첨부된 실시예 및 제조예 섹션에 기재된 것과 유사한 방법에 의해, 이미 사용되고 있는 비-표지된 시약 대신에 적절한 동위원소-표지된 시약을 사용하여 제조될 수 있다.
생물학으로부터의 어느 하나를 이 섹션에서 살펴본다. 본 발명의 화합물은 암 세포의 성장의 시험관내 및/또는 생체내 억제에 유용하다. 결과적으로, 본 발명의 화합물 (본원에서 사용된 조성물 및 방법 포함)은 본원에 기재된 치료 용도를 위한 의약의 제조에 사용될 수 있다. 화합물은 단독으로, 또는 제약상 허용되는 담체, 용매 (물 포함) 또는 부형제와 함께 조성물로 사용될 수 있다. 적합한 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제는, 예를 들어 가공제 및 약물 전달 개질제 및 증진제, 예컨대 예를 들어, 인산칼슘, 스테아르산마그네슘, 활석, 모노사카라이드, 디사카라이드, 전분, 젤라틴, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스, 덱스트로스, 히드록시프로필-β-시클로덱스트린, 폴리비닐피롤리디논, 저융점 왁스, 이온 교환 수지 등, 뿐만 아니라 이들의 임의의 2종 이상의 조합물을 포함한다. 다른 적합한 제약상 허용되는 부형제는 문헌 ["Remington's Pharmaceutical Sciences," Mack Pub. Co., New Jersey (1991)]에 기재되어 있고, 이는 본원에 참조로 포함된다. 제약 조성물은 화합물의 결정질 매트릭스 내로의 용매 (물 포함)의 혼입을 포함한다 (또한 용매화물 및 수화물로 지칭됨).
본 발명의 화합물은 키나제의 활성을 조절하며, 이에 따라, 키나제가 질환의 병리상태 및/또는 증상에 기여하는 질환 또는 장애의 치료에 유용하다. 본원에 기재된 화합물 및 조성물에 의해 억제되고 본원에 기재된 방법이 유용한 키나제의 예는 B-Raf (B-Raf의 돌연변이체 형태 포함)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
미토겐-활성화 단백질 키나제 (MAPK) 경로는 세포 증식, 생존, 분화 및 이동의 제어를 조정하는 다수의 이펙터 분자의 활성을 매개한다. 예를 들어 성장 인자, 시토카인 또는 호르몬에 의한 세포의 자극은, 원형질막-관련 Ras가 GTP-결합되어 Raf를 동원하도록 활성화된다. 이러한 상호작용은 Raf의 키나제 활성을 유도하여 MAPK/ERK (세포외 신호-관련 키나제) (MEK)의 인산화를 지시하고, 결과적으로 ERK를 인산화시킨다. 이어서, 활성화된 ERK는 각종 이펙터 분자, 예를 들어 키나제, 포스파타제, 전사 인자 및 세포골격 단백질을 인산화시킨다. 따라서, Ras-Raf-MEK-ERK 신호전달 경로는 신호를 세포 표면 수용체로부터 세포핵으로 전송하며, 이는 예를 들어 세포 증식 및 생존에 필수적이다. 이러한 신호전달 캐스케이드의 조절은 다수의 Ras 이소형 (K-Ras, N-Ras 및 H-Ras 포함), Raf 이소형 (A-Raf, B-Raf, C-Raf/Raf-1), MEK 이소형 (MEK-1 및 MEK-2) 및 ERK 이소형 (ERK-1 및 ERK-2)에 의해 추가로 풍부화된다. 인간 암 중 10 내지 20%가 종양원성 Ras 돌연변이를 가지며 다수의 인간 암이 활성화된 성장 인자 수용체를 갖기 때문에, 상기의 경로는 개입을 위한 이상적인 표적이다.
다수의 신호전달 경로에서 Raf의 필수적인 역할 및 입지는, 포유동물 세포 내 탈조절되고 우세한 억제성 Raf 돌연변이체를 이용한 연구 뿐만 아니라 모델 유기체에 생화학적 및 유전학적 기술을 이용한 연구로부터 입증되었다. 과거에, 항-종양 약물 표적이 되는 Raf에 대한 초점은 Ras의 하류 이펙터로서의 그의 기능에 집중하였다. 그러나, 최근의 발견은 Raf가 종양원성 Ras 대립유전자가 전혀 요구되지 않는 특정 종양의 형성에서 우세한 역할을 가질 수 있음을 시사한다. 특히, B-Raf 및 N-Ras 대립유전자의 활성화는 흑색종 중 약 70%, 유두성 갑상선 암종 중 40%, 난소 저등급 암종 중 30% 및 결장직장암 중 10%에서 확인되었다. K-Ras에서의 돌연변이는 췌장암 중 대략 90%에서 발생한다. 대부분의 B-Raf 돌연변이는 키나제 도메인 내에서 발견되며, 단일 치환 (V600E)이 80% 이상을 차지한다. 돌연변이된 B-Raf 단백질은, MEK에 대한 상승된 키나제 활성 또는 C-Raf의 활성화 중 하나를 통해 Raf-MEK-ERK 경로를 활성화시킨다.
따라서, B-Raf에 대한 키나제 억제제의 개발은 수많은 유형의 인간 암, 특히 전이성 흑색종, 고형 종양, 뇌 종양, 예컨대 다형성 교모세포종 (GBM), 급성 골수성 백혈병 (AML), 폐암, 유두상 갑상선 암종, 난소 저-등급 암종 및 결장직장암의 치료를 위한 새로운 치료 기회를 제공한다. 여러 Raf 키나제 억제제는 시험관내 및/또는 생체내 검정에서 종양 세포 증식의 억제에 효능을 나타내는 것으로서 기재되었다 (예를 들어, 미국 특허 번호 6,391,636, 6,358,932, 6,037,136, 5,717,100, 6,458,813, 6,204,467 및 6,268,391 참조). 다른 특허 및 특허 출원은 백혈병의 치료 (예를 들어, 미국 특허 번호 6,268,391, 6,204,467, 6,756,410 및 6,281,193; 및 포기된 미국 특허 출원 번호 20020137774 및 20010006975 참조) 또는 유방암의 치료 (예를 들어, 미국 특허 번호 6,358,932, 5,717,100, 6,458,813, 6,268,391, 6,204,467 및 6,911,446 참조)를 위한 Raf 키나제 억제제의 사용을 제시한다. 데이터는, Raf 키나제 억제제가 MAPK 경로를 통한 신호전달을 유의하게 억제하여, B-Raf (V600E) 종양의 극적인 수축을 유발할 수 있음을 입증한다.
일부 Raf 억제제는, 야생형 B-Raf 세포에서 MEK 및 ERK 신호전달을 증가시키는 것 이외에도, 또한 암 세포주에서 세포 성장을 유도하며 섬유모세포에서 형질전환 및 성장을 일으킨다. 이전에, 하류 신호전달의 유도는 공개된 Raf 경로 피드백 루프 때문이었다. 그러나, pMEK 및 pERK의 유도는 Raf 억제제 처리한지 수 분 내에, 심지어 보고된 피드백 인산화 사건이 B-Raf 및 C-Raf 상에 나타나기 전에 일어날 수 있다. 신호전달 및 세포 성장 둘 다의 유도는 2상 패턴으로 일어나며, 낮은 화합물 농도 (0.01-0.1 μM)에서 최대 유도를 유발하고, 보다 높은 화합물 농도 (1-10 μM)에서 보다 덜 완전한 유도를 유발한다. 이러한 2상 패턴은 또한 정제된 야생형 B-Raf 또는 C-Raf를 사용한 생화학적 검정에서 관찰되며, 2개 신호전달 서브유닛의 상호작용을 수반하는 메카니즘을 시사한다. 추가로, Raf 이량체화는, Raf 분자의 트랜스-인산화를 통해서가 아니라 아마도 키나제의 형태 활성화에 의해 pMEK를 상향조절할 수 있다. 이 모델과 부합하여, Raf 억제제 처리는 세포에서 B-Raf/C-Raf 이량체 형성을 유도한다. 추가로 siRNA를 사용한 A- 또는 B-Raf의 녹다운은 pMEK 및 pERK의 Raf 억제제 유도를 제거하지 않으며, C-Raf의 녹다운은 상기 유도를 약간만 감소시킨다. 특히, K-Ras 돌연변이 세포에서의 K-Ras의 녹다운은 또한 상기 유도를 약간만 감소시켜, 이러한 효과가 Ras에 의해 주로 매개되는 것이 아님을 암시한다. 종합하면, 데이터는 하나의 Raf 분자에 결합하는 억제제가 이량체에서의 파트너 Raf 분자의 형태 활성화 및 이량체화를 유도하는 것인 모델을 시사한다. 이는 야생형 Raf 및 돌연변이체 Ras 종양이 선택적 Raf 키나제 억제제에 민감하지 않은 이유를 설명할 수 있으며, 또한 독성에 대해 중요한 의미를 가질 수 있는데, 강한 분열촉진 신호전달의 유도가 정상 조직의 과증식을 유발할 수 있기 때문이다. Raf 억제제 유도 메카니즘의 이해는 개선된 억제제의 설계를 도출할 수 있다.
Raf 억제제와 조합된 MEK 억제제의 첨가는 ERK 신호전달의 유의한 억제를 유발하며, 결과적으로 세포 증식 및 형질전환의 감소를 유발한다. MEK 억제제 단독으로 처리하는 것은 진료실에서 용량 제한 독성을 유발하기 때문에, Raf 억제제와 MEK 억제제 조합물은 우수한 치료 전략을 나타낸다.
본 발명의 화합물은 이들 암 세포에서 신호 캐스케이드를 차단하고 궁극적으로 세포의 정지 및/또는 사망을 유도함으로써 B-Raf 키나제가 관여하는 세포 과정을 억제한다.
전술한 바에 따라, 본 발명은 또한, 상기 기재된 임의의 질환 또는 장애의 치료가 필요한 대상체에게 치료 유효량 (하기 "투여 및 제약 조성물" 참조)의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 상기 기재된 임의의 질환 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다. 상기 용도 중 임의의 것을 위해, 필요한 투여량은 투여 방식, 치료할 특정 상태 및 목적하는 효과에 따라 달라질 것이다.
일반적으로, 본 발명의 화합물은 당업계에 공지된 임의의 통상적이고 허용되는 방식을 통해 단독으로 또는 하나 이상의 치료제와 조합하여 치료 유효량으로 투여될 것이다. 치료 유효량은 질환의 중증도, 대상체의 연령 및 상대적 건강 상태, 사용된 화합물의 효능 및 기타의 요인에 따라 폭넓게 달라질 수 있다. 일반적으로, 만족스러운 결과는 체중 1 kg 당 약 0.03 내지 2.5 mg의 1일 투여량으로 전신적으로 얻어지는 것으로 나타난다. 보다 큰 포유동물, 예를 들어 인간에서 지정된 1일 투여량은 약 0.5mg 내지 약 100mg의 범위이며, 이는 편리하게는, 예를 들어 1일 4회 이하의 분할 용량으로 투여된다. 경구 투여용으로 적합한 단위 투여 형태는 약 1 내지 50 mg의 활성 성분을 포함한다.
제약 제제는 종래의 용해 및 혼합 절차를 이용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 벌크 약물 물질 (즉, 본 발명의 화합물 또는 상기 화합물의 안정화된 형태 (예를 들어, 시클로덱스트린 유도체 또는 다른 공지된 착화제와의 착물))은 상기 기재된 하나 이상의 부형제의 존재 하에 적합한 용매 중에 용해된다. 본 발명의 화합물은 전형적으로 제약 투여 형태로 제제화되어, 용이하게 제어가능한 투여량의 약물을 제공하고 환자에게 우아하고 용이하게 취급가능한 생성물을 제공한다.
본 발명의 화합물은 제약 조성물로서 임의의 통상의 경로로, 특히 경장으로, 예를 들어 경구로, 예를 들어 정제 또는 캡슐의 형태로, 또는 비경구로, 예를 들어 주사가능한 용액 또는 현탁액의 형태로, 국소적으로, 예를 들어 로션, 겔, 연고 또는 크림의 형태로, 또는 비강 또는 좌제 형태로 투여될 수 있다. 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 본 발명의 화합물을 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 또는 희석제와 함께 포함하는 제약 조성물은 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의한 통상적인 방식으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 경구 조성물은 활성 성분을, a) 희석제, 예를 들어 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 만니톨, 소르비톨, 셀룰로스 및/또는 글리신; b) 윤활제, 예를 들어 실리카, 활석, 스테아르산, 그의 마그네슘 또는 칼슘 염 및/또는 폴리에틸렌글리콜; 또한 정제의 경우에는, c) 결합제, 예컨대 규산알루미늄마그네슘, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸트, 메틸셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스 및/또는 폴리비닐피롤리돈; 원하는 경우에, d) 붕해제, 예컨대 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염, 또는 발포성 혼합물; 및/또는 e) 흡수제, 착색제, 향미제 및 감미제와 함께 포함하는 정제 또는 젤라틴 캡슐일 수 있다. 주사가능한 조성물은 수성 등장성 용액 또는 현탁액일 수 있고, 좌제는 지방 에멀젼 또는 현탁액으로부터 제조될 수 있다. 조성물은 멸균되고/되거나, 아주반트, 예컨대 보존제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 용해 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제를 함유할 수 있다. 추가로, 이들은 또한 다른 치료상 유익한 물질을 함유할 수 있다. 경피 적용에 적합한 제제는 유효량의 본 발명의 화합물을 담체와 함께 포함한다. 담체는 숙주의 피부를 통과하는 것을 돕기 위해 흡수가능한 약리학상 허용되는 용매를 포함할 수 있다. 예를 들어, 경피 장치는 백킹 부재, 화합물을 임의로 담체와 함께 함유하는 저장소, 임의로 장기간에 걸쳐 제어된 예정 속도로 숙주의 피부에 화합물을 전달하기 위한 속도 제어 장벽, 및 장치가 피부에 부착되도록 하는 수단을 포함하는 붕대 형태이다. 매트릭스 경피 제제를 또한 사용할 수 있다. 예를 들어, 피부 및 눈으로의 국소 적용에 적합한 제제는, 바람직하게는 당업계에 널리 공지된 수용액, 연고, 크림 또는 겔이다. 이들은 가용화제, 안정화제, 장성 증진제, 완충제 및 보존제를 함유할 수 있다.
일부 요법에서, 본 발명의 화합물을 하나 이상의 치료제와 조합하여 투여하는 것이 유리할 수 있다 (제약 조합물). 예를 들어, 상승작용 효과는 다른 항종양제 또는 항증식제, 예를 들어 유사분열 억제제, 알킬화제, 항대사물, 개재 항생제, 성장 인자 억제제 (예를 들어, 트라스투주맙, 파니투무맙, 세툭시맙, 이필리무맙, 트레멜리무맙, 라무시루맙, 게피티닙, 에를로티닙, 라파티닙, 소라페닙, 다사티닙, 수니티닙, 도비티닙 등), 세포 주기 억제제, 효소, 토포이소머라제 억제제, 생물학적 반응 조절제, 항체, 세포독성제, 항호르몬, 항안드로겐, 항혈관신생제, 키나제 억제제, 범 키나제 억제제 또는 성장 인자 억제제와 함께 발생할 수 있다. 적합한 치료제는 에를로티닙, 도세탁셀, 겜시타빈, 시스플라틴, 카르보플라틴, 파클리탁셀, 베바시주맙, 트라스투주맙, 페르투주맙, 테모졸로미드, 타목시펜, 독소루비신, 라파마이신 및 라파티닙을 포함한다. 다른 적합한 치료제는 의사 처방 참고집에 열거되어 있다.
예를 들어, Raf 억제제와 조합된 MEK 억제제의 첨가는 ERK 신호전달의 유의한 억제를 유발하며, 결과적으로 세포 증식 및 형질전환의 감소를 유발한다. MEK 억제제 단독으로 처리하는 것은 진료실에서 용량 제한 독성을 유발하기 때문에, Raf 억제제와 MEK 억제제 조합물은 우수한 치료 전략을 나타낸다.
본 발명의 또 다른 실시양태는 치료 유효량의 발명의 개요의 화합물 (Raf 억제제) 및 하나 이상의 MEK 단백질 키나제 억제제를 포함하는 조합물 및 암의 치료 방법이다.
조합 요법을 위한 바람직한 치료제는 MEK 억제제 (예를 들어, AZD6244 (WO 03/077914의 실시예 10), 2-(2-플루오로-4-아이오도페닐아미노)-N-(2-히드록시에톡시)-1,5-디메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리딘-3-카르복스아미드, 4-(4-브로모-2-플루오로페닐아미노)-N-(2-히드록시에톡시)-1,5-디메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리다진-3-카르복스아미드, PD-0325901(액손 메드켐(Axon Medchem)으로부터 구입가능한 N-[(2-R)-2,3-디히드록시프로폭시]-3,4-디플루오로-2-[(2-플루오로-4-아이오도페닐)아미노]-벤즈아미드), PD-184352(액손 메드켐으로부터 구입가능한 2-(2-클로로-4-아이오도페닐)아미노-N-(시클로프로필메톡시)-3,4-디플루오로벤즈아미드), 3,4-디플루오로-2-(2-플루오로-4-아이오도페닐아미노)-N-(2-히드록시에톡시)-5-((3-옥소모르폴리노)메틸)벤즈아미드 CH-4987655 (로슈-츄가이(Roche-Chugai)) SL-327 (액손 메드켐으로부터 구입가능한 α-[아미노[(4-아미노페닐)티오]메틸렌]-2-(트리플루오로메틸)벤젠아세토니트릴), XL-518(엑셀릭시스(Exelixis)), AR-119(아르데아 바이오사이언시스(Ardea Biosciences), 발레안트 파마슈티칼스(Valeant Pharmaceuticals)), AS-701173(머크 세로노(Merck Serono)), AS-701255(머크 세로노), 360770-54-3(와이어쓰(Wyeth)), RDEA119 ((S)-N-(3,4-디플루오로-2-(2-플루오로-4-아이오도페닐아미노)-6-메톡시페닐)-1-(2,3-디히드록시프로필)시클로프로판-1-술폰아미드)); AS703026 (EMD 세로노(EMD Serono)); MSC1936369B (EMD 세로노); GSK1120212 (글락소스미쓰클라인(GlaxoSmithKline)); ARRY-438162 (어레이 바이오파마(Array BioPharma)); GDC0941 (제넨테크(Genentech)); GDC0973 (제넨테크); TAK-733 (밀레니엄 파마슈티칼스, 인크.(Millennium Pharmaceuticals, Inc.)); RO5126766 (호프만-라 로슈(Hoffmann-La Roche)); 및 ARRY162 (어레이 바이오파마);
mTOR 억제제 (예를 들어, 라파마이신 (시롤리무스), 토리셀(TORISEL)™(템시롤리무스), RAD001 (에베롤리무스), AP23573(데포롤리무스), OSI-027(OSI 파마슈티칼스(OSI Pharmaceuticals)), WO 06/090167; WO 06/090169; WO 07/080382; WO 07/060404; 및 WO08/023161에 기재된 화합물); 및
PI3K 억제제 (예를 들어, 워트만닌, WO 06/044453에서 기재된 17-히드록시워트만닌 유사체, 4-(2-(1H-인다졸-4-일)-6-((4-(메틸술포닐)피페라진-1-일)메틸)티에노-[3,2-d]피리미딘-4-일)모르폴린, (S)-1-(4-((2-(2-아미노피리미딘-5-일)-7-메틸-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-일)메틸)피페라진-1-일)-2-히드록시프로판-1-온, 4-(2-(1H-인다졸-4-일)-6-((4-(메틸술포닐)피페라진-1-일)메틸)티에노-[2,3-d]피리미딘-4-일)모르폴린, LY294002(액손 메드켐으로부터 구입가능한 2-(4-모르폴리닐)-8-페닐-4H-1-벤조피란-4-온), PI 103 히드로클로라이드 (액손 메드켐으로부터 구입가능한 3-[4-(4-모르폴리닐피리도[3',2':4,5]푸로[3,2-d]피리미딘-2-일]페놀 히드로클로라이드), PIK 75 (액손 메드켐으로부터 구입가능한 N'-[(1E)-(6-브로모이미다조[1,2-a]피리딘-3-일)메틸렌]-N,2-디메틸-5-니트로벤젠술포노-히드라지드 히드로클로라이드), PIK 90 (액손 메드켐으로부터 구입가능한 N-(7,8-디메톡시-2,3-디히드로-이미다조[1,2-c]퀴나졸린-5-일)-니코틴아미드), GDC-0941 비스메실레이트 (액손 메드켐으로부터 구입가능한 -(1H-인다졸-4-일)-6-(4-메탄술포닐-피페라진-1-일메틸)-4-모르폴린-4-일-티에노[3,2-d]피리미딘 비스메실레이트), PKI587 1-(4-(4-(디메틸아미노)피페리딘-1-카르보닐)페닐)-3-(4-(4,6-디모르폴리노-1,3,5-트리아진-2-일)페닐)우레아 (와이어쓰), 2126458 2,4-디플루오로-N-(2-메톡시-5-(4-(피리다진-4-일)퀴놀린-6-일)피리딘-3-일)벤젠술폰아미드 (GSK), PF-04691502 2-아미노-8-((1r,4r)-4-(2-히드록시에톡시)시클로헥실)-6-(6-메톡시피리딘-3-일)-4-메틸피리도[2,3-d]피리미딘-7(8H)-온 (화이자(Pfizer)), BEZ235 (노파르티스로부터 구입가능한 2-메틸-2-[4-(3-메틸-2-옥소-8-퀴놀린-3-일-2,3-디히드로-이미다조[4,5-c]퀴놀린-1-일)-페닐]-프로피오니트릴), BKM120 (5-(2,6-디모르폴리노피리딘-4-일)-4-(트리플루오로메틸)피리딘-2-아민 (노파르티스), AS-252424 (액손 메드켐으로부터 구입가능한 5-[1-[5-(4-플루오로-2-히드록시-페닐)-푸란-2-일]-메트-(Z)-일리덴]-티아졸리딘-2,4-디온), TGX-221 (액손 메드켐으로부터 구입가능한 7-메틸-2-(4-모르폴리닐)-9-[1-(페닐아미노)에틸]-4H-피리도-[1,2-a]피리미딘-4-온), XL-765 및 XL-147 (엑셀릭시스)
을 포함한다.
본 발명의 화합물이 다른 치료제와 조합하여 투여되는 경우, 공동-투여된 화합물의 투여량은 물론 사용된 공동-약물의 유형, 사용된 특정 약물, 치료하고자 하는 상태 등에 따라 달라질 것이다.
본 발명의 방법에 따라, 본 발명의 화합물 또는 본 발명의 화합물과 하나 이상의 추가의 제약 작용제와의 조합물은, 바람직하게는 제약 조성물의 형태로, 이러한 치료가 필요한 대상체에게 투여된다. 본 발명의 조합물 측면에서, 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 다른 제약 작용제 (상기 기재됨)는 개별적으로, 또는 둘 다를 포함하는 제약 조성물로 투여될 수 있다. 상기 투여가 경구로 이루어지는 것이 일반적으로 바람직하다. 그러나, 치료할 대상체가 삼킬 수 없거나 또는 경구 투여가 달리 유해하거나 바람직하지 않은 경우에는, 비경구 또는 경피 투여가 적절할 수 있다.
본 발명의 방법에 따라, 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 다른 제약 작용제의 조합물이 함께 투여되는 경우에, 이러한 투여는 시간에 맞추어 순차적으로, 또는 일반적으로 바람직한 동시 방법으로 동시에 이루어질 수 있다. 순차적 투여의 경우에, 본 발명의 화합물 및 추가의 제약 작용제는 임의의 순서로 투여될 수 있다. 상기 투여는 경구로 이루어지는 것이 일반적으로 바람직하다. 상기 투여는 경구로 동시에 이루어지는 것이 특히 바람직하다. 본 발명의 화합물 및 추가의 제약 작용제가 순차적으로 투여되는 경우에, 각각의 투여는 동일한 방법에 의한 것이거나 또는 다양한 방법에 의한 것일 수 있다.
적용될 제약 조성물 (또는 제제)은 약물 투여에 이용되는 방법에 따라 다양한 방식으로 포장될 수 있다. 일반적으로, 분배를 위한 물품은 적절한 형태의 제약 제제가 그 안에 배치되어 있는 용기를 포함한다. 적합한 용기는 당업자에게 널리 공지되어 있고, 병 (플라스틱 및 유리), 사쉐, 앰플, 플라스틱 백, 금속 실린더 등과 같은 물질을 포함한다. 용기는 또한 포장 내용물에 부주의하게 접근하는 것을 방지하기 위해 쉽게 조작할 수 없는 집합체를 포함할 수 있다. 추가로, 용기에는 용기의 내용물을 기재한 표지가 부착되어 있다. 표지는 또한 적절한 경고문을 포함할 수 있다. 본 발명은 또한 a) 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 본원에 개시된 바와 같은 본 발명의 화합물인 제1 작용제 및 b) 하나 이상의 추가의 치료제를 포함하는 제약 조합물, 예를 들어 키트를 제공한다. 키트는 그의 투여에 대한 지침서를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "공동-투여" 또는 "조합 투여" 등은, 단일 환자에게 선택된 치료제를 투여하는 것을 포함하는 것을 의미하고, 작용제들이 반드시 동일한 투여 경로에 의해 또는 동시에 투여되는 것은 아닌 치료 요법을 포함하는 것으로 의도된다.
본원에 사용된 용어 "제약 조합물"은, 하나 초과의 활성 성분의 혼합 또는 조합으로부터 생성된 생성물을 의미하고, 활성 성분의 고정 조합물 및 비-고정 조합물 둘 모두를 포함한다. 용어 "고정 조합물"은 활성 성분, 예를 들어 화학식 I의 화합물 및 공동-작용제가 모두 단일 실체 또는 투여량의 형태로 환자에게 동시에 투여되는 것을 의미한다. 용어 "비고정 조합물"은 활성 성분, 예를 들어 화학식 I의 화합물 및 공동-작용제가 동시에, 공동으로, 또는 특정 시간 비제한적으로 순차적으로 개체로서 환자에게 투여되는 것을 의미하며, 여기서 상기 투여는 환자의 신체에 2종 화합물의 치료상 유효한 수준을 제공한다. 후자는 또한 칵테일 요법, 예를 들어 3종 이상의 활성 성분의 투여에도 적용된다.
본 발명은 신규 부류의 화합물, 이러한 화합물을 포함하는 제약 조성물, 및 비정상적이거나 탈조절된 키나제 활성과 연관된 질환 또는 장애, 특히 B-Raf의 비정상적 활성화를 수반하는 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하기 위한 이러한 화합물의 사용 방법을 제공한다.
실시예
본 발명은 본 발명의 화합물의 제조를 설명하는 하기의 중간체 및 실시예에 의해 추가로 예시되지만, 이에 제한되지는 않는다.
정제용 분리는 레디셉(RediSep)® 정상 실리카 플래쉬 칼럼 (4 g 내지 120 g, 35-70 마이크로미터 입자 크기; 텔레다인 이스코 인크.(Teledyne Isco Inc.), 네브라스카주 링컨)과 조합된 콤비플래쉬(CombiFlash)® Rf 시스템 (텔레다인 이스코 인크.)을 사용하거나, 또는 실리카 겔 (230-400 메쉬) 충전재를 사용하는 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해, 또는 워터스(WATERS) 2767 샘플 매니저(Sample Manager), C-18 역상 칼럼 (30x50 mm), 유량 75 mL/분을 이용하는 HPLC에 의해 수행하였다. 콤비플래쉬® 시스템 및 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 사용된 전형적인 용매는 디클로로메탄, 메탄올, 에틸 아세테이트, 헥산, 아세톤, 수성 암모니아 (또는 수산화암모늄) 및 트리에틸 아민이다. 역상 HPLC에 사용된 전형적인 용매는 다양한 농도의 아세토니트릴과 물 (0.1% 트리플루오로아세트산 (TFA) 함유)이었다.
마이크로웨이브 반응은 크리에이터(Creator) 또는 이니티에이터(Initiator) 마이크로웨이브 시스템 (바이오타지(Biotage), 버지니아주 샤를로테스빌)에서 수행하였다.
상응하는 의미를 갖는 하기의 두문자어가 하기 실험 섹션에 사용된다.
DEAD - 디에틸 아조디카르복실레이트 DIEA- 디이소프로필에틸 아민
THF - 테트라히드로푸란 DCM- 디클로로메탄
DMF - 디메틸포름아미드 HOAc- 아세트산
DME - 1,1-디메톡시에탄 ACN- 아세토니트릴
EtOAc - 에틸 아세테이트 NMP- N-메틸피롤리디논
mCPBA- m-클로로퍼벤조산 TFA- 트리플루오로아세트산
LiHMDS- 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 MeOH- 메탄올
dba- 디벤질리덴아세톤 Et2O- 디에틸 에테르
NBS- N-브로모숙신이미드 DMSO- 디메틸 술폭시드
rt- 실온 TLC- 박층 크로마토그래피
주요 출발 물질 및 중간체의 제조
출발 물질 메틸-2-클로로-5-플루오로-3-피발아미도벤조에이트 (I, 반응식 I, (1b))의 제조:
Figure pat00007
단계 1. N-(3-브로모-2-클로로-5-플루오르페닐)피발아미드의 제조:
교반 막대가 설비된 질소 하의 둥근 바닥 플라스크에 1-클로로-2,6-디브로모-4-플루오로벤젠 (14.36 g, 49.8 mmol), 피발아미드 (5.04 g, 49.8 mmol), 탄산세슘 (21.09 g, 64.7 mmol) 및 디옥산 (250 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소로 스파징하고, Pd(dba)2 (1.43 g, 2.490 mmol) 및 5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸크산텐 (크산트포스(XANTPHOS), 2.02 g, 3.49 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응물을 밀봉하고, 18시간 동안 70℃에서 오일조에서 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각되도록 하고, NH4Cl의 포화 수용액 및 EtOAc 사이에 분배하였다. 층을 분리하고, 수성 부분을 EtOAc (2 X)로 추출하였다. 합한 유기 부분을 물, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축하고, 실리카 겔 상에 흡착시켰다. EtOAc-헵탄 (1-20%) 용리 구배를 사용하는 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 N-(3-브로모-2-클로로-5-플루오르페닐)피발아미드 (11.0 g, 33.8 mmol, 68%)를 백색 결정질 고체로서 수득하였다.
Figure pat00008
단계 2. 메틸-2-클로로-5-플루오로-3-피발아미도벤조에이트의 제조:
교반 막대가 설비된 스틸 압력 반응 용기에 N-(3-브로모-2-클로로-5-플루오로페닐) 피발아미드 (6.22 g, 20.16 mmol), MeOH (100 mL), 트리에틸아민 (5.62 mL, 40.3 mmol)을 첨가하였다. 생성된 용액을 5분 동안 질소로 스파징하고, 이어서 [(R)-(+)-2,2'-비스(디페닐포스피노)-1,1'-비나프틸]팔라듐(II) 클로라이드 (0.323 g, 0.403 mmol)를 첨가하였다. 반응 용기를 밀봉하고, 일산화탄소 (70 psi)로 가압하였다. 이어서, 반응물을 오일조에 넣고, 18시간 동안 100℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 유기부를 합하고, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축하였다. 생성된 적색 오일을 실리카 겔 상에 흡착시키고, EtOAc-헵탄 (0-20%) 구배로 용리하는 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고 농축하여 메틸-2-클로로-5-플루오로-3-피발아미도벤조에이트 (3.30 g, 11.36 mmol, 56%)를 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pat00009
출발 물질 메틸-5-클로로-2-플루오로-3-피발아미도벤조에이트 (II, 반응식 II, (1b))의 제조:
Figure pat00010
단계 1. 3-브로모-5-클로로-2-플루오로벤즈알데히드의 제조
n-BuLi/헥산 (2.0 M, 24.3 mL, 48.6 mmol)의 용액을 건조 THF (48 mL) 중 2,2,6,6-테트라메틸-피페리딘 (6.86 g, 48.6 mmol)의 냉각된 용액에 15분에 걸쳐 -75℃에서 첨가하면서, 내부 온도를 -75 내지 -67℃에서 유지하였다. 첨가 후에, 반응물을 -70 내지 -67℃에서 30분 동안 유지하였다. 2-브로모-4-클로로-1-플루오로벤젠 (5.2 mL, 9.0 g, 43.0 mmol)을 10분에 걸쳐 첨가하면서, 내부 온도를 -70 내지 -67℃에서 유지하였다. 생성된 반응물을 40분 동안 상기 온도에서 유지하였다. 이어서, DMF (4.4 ml, 56.7 mmol)를 15분에 걸쳐 적가면서, 내부 온도를 -70 내지 -65℃에서 유지하였다. 1시간 후에, TLC는 완전한 전환을 나타내었고, 반응물을 -60 내지 -30℃에서 포화 수성 NH4Cl 용액 (15 mL)으로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 -30 내지 10℃에서 수성 6.0 N HCl 용액 (25 mL)으로 pH 1-2로 조정하고, 헵탄 (60 mL) 및 H2O (15 mL) 사이에 분배하였다. 층을 분리하고, 수성 부분을 헵탄 (50 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 부분을 염수 (2 X 50 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하였다. 생성된 조 물질을 EtOAc-헵탄 (0-20%) 용리 구배를 사용하는 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 3-브로모-5-클로로-2-플루오로벤즈알데히드 (10 g, 80% 수율)를 밝은 황색 고체로서 수득하였다:
Figure pat00011
단계 2. 3-브로모-5-클로로-2-플루오로벤조산의 제조:
t-부탄올 (50 mL) 및 물 (50 mL)의 혼합물 중 3-브로모-5-클로로-2-플루오로벤즈알데히드 (13.0 g, 54.7 mmol)의 현탁액을 30℃로 가열한 다음, 내부 온도 30-45℃로 25분에 걸쳐 KMnO4를 조금씩 첨가하였다. 이어서, 생성된 혼합물을 순차적으로 45℃에서 추가의 30분 동안, 50-55℃에서 30분 동안 및 55-65℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 실온으로 냉각되도록 하고, 음성 퍼옥시드 시험을 위해 포화 수성 Na2SO3 용액으로 켄칭하고, 물 (70 mL)로 희석하고, 포화 수성 Na2CO3 용액 (9 mL)으로 염기성화시키고, 10분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 셀라이트(Celite) 패드를 통해 여과하고, 필터 케이크를 물 (2 x 50 mL)로 세척하였다. 합한 여과물을 15-25℃에서 진한 HCl로 pH 1까지 산성화하고, 이어서 EtOAc (2 X 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 순차적으로 물 (100 mL), 염수 (100 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하여 3-브로모-5-클로로-2-플루오로벤조산 (11.0 g, 79% 수율)을 밝은 황색 고체로서 수득하였다:
Figure pat00012
단계 3. 메틸 3-브로모-5-클로로-2-플루오로벤조에이트의 제조:
메탄올 (100 mL, 2470 mmol) 중 3-브로모-5-클로로-2-플루오로벤조산 (7.5 g, 29.6 mmol)의 용액을 진한 H2SO4 (8 mL, 29.6 mmol)로 처리하고, 생성된 혼합물을 밤새 환류로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, 빙수 (200 mL)로 희석하고, EtOAc (2 X 200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 포화 수성 Na2CO3 용액 (2 X 100 mL), 염수 (100 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하여 메틸 3-브로모-5-클로로-2-플루오로벤조에이트 (7.2 g, 26.9 mmol, 91% 수율)를 연황색 고체로서 수득하였다:
Figure pat00013
단계 4. 메틸-5-클로로-2-플루오로-3-피발아미도벤조에이트의 제조:
교반 막대가 설비된 밀봉된 튜브에 메틸 3-브로모-5-클로로-2-플루오로벤조에이트 (7.39 g, 27.6 mmol), 피발아미드 (8.38 g, 83 mmol), 탄산세슘 (11.70 g, 35.9 mmol) 및 1,4-디옥산 (30 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 5분 동안 Ar로 퍼징한 다음, Pd(dba)2 (0.79 g, 1.38 mmol) 및 크산트포스 (1.12 g, 1.93 mmol)를 첨가한 다음, Ar로 추가 5분 동안 스파징하였다. 반응 튜브를 밀봉하고, 3시간 동안 110℃에서 오일조에서 가열하였다. 분취액의 LCMS는 완전한 전환을 나타내었고, 반응물을 허용하여, 합한 유기 부분을 순차적으로 물, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하였다. 생성된 물질을 실리카 겔 상에 흡착시키고, EtOAc-헵탄 (1-10%) 용리 구배를 사용하는 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 메틸-5-클로로-2-플루오로-3-피발아미도벤조에이트 (4.76 g, 16.5 mmol, 60% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다:
Figure pat00014
출발 물질 메틸 2-플루오로-3-(N-(프로필술포닐)프로필술폰아미도) 벤조에이트 (III, 반응식 III, (3c))의 제조:
Figure pat00015
단계 1: 메틸 2-플루오로-3-니트로벤조에이트의 제조
MeOH (50 mL) 중 2-플루오로-3-니트로벤조산 (5 g, 27.0 mmol)의 용액을 진한 H2SO4 (1.4 mL, 27.0 mmol)로 처리하고, 생성된 반응물을 16시간 동안 50℃에서 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 EtOAc로 희석하였다. 유기 용액을 수상이 중성 pH에 도달할 때까지 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하엿다. 2개의 상을 분리하였다. 유기부를 물, 염수로 세척하고, 건조시켰다 (Na2SO4). 용액을 여과하고 농축하여 조 메틸 2-플루오로-3-니트로벤조에이트 (5.1 g, 25.2 mmol, 93%)를 연황색 고체로서 수득하였고, 이것을 다음 단계에 그대로 사용하였다.
Figure pat00016
단계 2: 메틸 3-아미노-2-플루오로벤조에이트의 제조
MeOH (150 mL) 중 2-플루오로-3-니트로벤조에이트 (2.6 g, 12.8 mmol)에 아연 분말 (8.4 g, 128 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 빙조에서 0℃로 냉각시켰다. 이 현탁액에 염화암모늄 (6.9 g, 128 mmol)을 10분에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 불균질 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 수집된 여과물을 회백색 고체로 농축하였다. 이 잔류물을 EtOAc 중에 현탁시키고, 초음파처리하고, 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 농축하여 메틸 3-아미노-2-플루오로벤조에이트 (2.04 g, 11.8 mmol, 92%)를 갈색 오일로서 수득하였다. 이 물질을 추가의 정제 없이 다음 단계에 전달하였다.
Figure pat00017
단계 3: 메틸 2-플루오로-3-(N-(프로필술포닐)프로필술폰아미도)벤조에이트
메틸 3-아미노-2-플루오로벤조에이트 (2.04 g, 12.1 mmol)를 자기 교반막대를 갖춘 둥근 바닥 플라스크에서 DCM (100 mL) 중에 용해시켰다. Et3N (5.0 mL, 36.2 mmol)을 시린지를 통해 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 프로판-1-술포닐 클로라이드 (1.6 mL, 14.3 mmol)를 적가하였다. 투명한 오렌지색 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. LCMS는 반응이 단지 부분적으로 완결되었음을 나타내었고, 이어서 추가의 프로판-1-술포닐 클로라이드 (1.4 mL, 12.1 mmol)를 첨가하고, 반응물을 3시간 동안 교반하였다. 제2 LCMS 분석은 일부의 출발 물질이 남아있음을 나타내었다. 프로판-1-술포닐 클로라이드 (0.14 mL, 1.2 mmol)를 다시 첨가하고, 반응 혼합물을 또 다른 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, 물로 켄칭하였다. 2개의 상을 분리하고, 유기 부분을 물, 염수로 세척하고, 건조시켰다 (Na2SO4). 용매를 증발시켜 4.77g의 조 물질을 수득하였다. 실리카 겔 상의 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하고 (0-50% EtOAc-헵탄), 이어서 Et2O로 연화처리하여 메틸 2-플루오로-3-(N-(프로필술포닐)프로필술폰아미도) 벤조에이트 (3.41 g, 8.94 mmol, 74%)를 연한 오렌지색 고체로서 수득하였다.
Figure pat00018
출발 물질 에틸 2-클로로-3-(메틸술폰아미도)벤조에이트 (IV, 반응식 III, (3d))의 제조:
Figure pat00019
단계 1. 에틸 2-클로로-3-니트로벤조에이트의 제조:
DCM 중 2-클로로-3-니트로벤조산 (2.0 g, 9.9 mmol)의 0℃에서의 혼합물에, 옥살릴 클로라이드 (1.0 mL, 11.9 mmol)를 첨가한 다음, 촉매 DMF (0.15 mL, 2.0 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응물을 15분 동안 교반하고, 이 시간에 빙조를 제거하고, 반응물이 실온으로 가온되도록 하였다. 반응물을 다시 0℃로 냉각시키고, EtOH (12 mL, 200 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온되도록 하면서, 2일에 걸쳐 반응물을 유지하였다. 반응물을 진공 하에 농축하고, 생성된 오일을 Et2O 중에 용해시키고, 수성 1 M NaOH 용액 (25 mL), 물 (3 X 25 mL) 및 염수 (25 mL)로 세척하였다. Et2O 층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 스트립핑하여 에틸 2-클로로-3-니트로벤조에이트 (2.0 g, 8.7 mmol, 88%)를 황색 오일로서 수득하였다.
Figure pat00020
단계 2. 에틸 3-아미노-2-클로로벤조에이트의 제조:
22℃에서 HOAc (50 mL) 중 에틸 2-클로로-3-니트로벤조에이트 (2 g, 8.71 mmol)의 용액에, 철 (4.86 g, 87 mmol)을 첨가하였다. 반응물은 첨가 15분 후에 발열을 생성하였다. 반응물을 실온에서 18시간 동안 교반되도록 하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하고, 수집된 고체를 EtOAc로 철저히 세척하였다. 합한 여과물은 수성 1 M NaOH 용액 (2 x 200 mL), 물 (3 X 200 mL) 및 염수 (200 mL)로 세척하였다. EtOAc 층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 농축하여 에틸 3-아미노-2-클로로벤조에이트 (1.69 g, 8.5 mmol, 97%)를 황색 오일로서 수득하였다:
Figure pat00021
단계 3. 에틸 2-클로로-3-(메틸술폰아미도)벤조에이트의 제조:
DCM (4 mL) 중 에틸 3-아미노-2-클로로벤조에이트 (845 mg, 4.23 mmol) 및 피리딘 (1.03 ml, 12.7 mmol)의 용액에, 메탄술포닐클로라이드 (0.33 mL, 4.2 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새 교반되도록 하였다. 반응의 TLC는 완전한 반응을 나타내었다. 반응물을 오일로 농축하고, EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. EtOAc 층을 물 (3 X 25 mL) 및 염수 (25 mL)로 세척하였다. EtOAc 층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 농축하여 베이지색 고체를 수득하였다. 고체를 DCM 중에 용해시키고, 실리카 겔 상에 흡착시켰다. 물질을 EtOAc-헵탄 (0-100%) 용리 구배를 사용하는 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 에틸 2-클로로-3-(메틸술폰아미도)벤조에이트 (880 mg, 3.17 mmol, 74.9%)를 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pat00022
출발 물질 에틸 2-클로로-3-(프로필술폰아미도)벤조에이트 (V, 반응식 I, (1b))의 제조:
Figure pat00023
상기 화합물을, 적절한 시약을 대체하여 출발 물질 IV, 단계 3과 유사한 절차를 이용하여 제조하였다.
Figure pat00024
출발 물질 메틸 2-클로로-3-피발아미도벤조에이트 (VI, 반응식 I, (1b))의 제조:
Figure pat00025
단계 1 및 2는 중간체 IV에 대해서와 동일하다.
단계 3. 메틸 2-클로로-3-피발아미도벤조에이트의 제조
0℃에서의 DCM (50 ml) 중 메틸 3-아미노-2-클로로벤조에이트 (2.5 g, 13.5 mmol) 및 Et3N (3.8 ml, 26.9 mmol)의 용액에 피발로일 클로라이드 (1.8 ml, 14.8 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 밤새 실온으로 가온되도록 하였다. 혼합물을 EtOAc로 희석하였다. EtOAc 층을 수성 1.0 M HCl 용액, 물, 포화 수성 중탄산나트륨 용액, 물, 염수로 세척하고, 건조시켰다 (MgSO4). 용액을 여과하고 농축하여 메틸 2-클로로-3-피발아미도벤조에이트 (3.5 g, 13.0 mmol, 96% 수율)를 연분홍색 오일로서 수득하였고, 이것을 추가의 정제 없이 사용하였다:
Figure pat00026
출발 물질 에틸 2,5-디클로로-3-피발아미도벤조에이트 (VII 반응식 I, (1b))의 제조:
Figure pat00027
단계 1: 에틸 3-아미노-2,5-디클로로벤조에이트의 제조
MeOH (40 mL) 중 에틸 2,5-디클로로-3-니트로벤조에이트 (2 g, 7.57 mmol, 출발 물질 I, 단계 1에 대한 절차를 따라 제조됨)의 용액을 물 (20 mL) 중 철 분말 (2.12 g, 37.9 mmol) 및 염화암모늄 (1.22 g, 22.7 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 2시간 동안 질소 하에 오일조에서 60℃에서 교반하였다. 현탁액을 실온으로 냉각시키고 EtOAc로 희석하였다. 유기 용액을 물, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하여 목적하는 에틸 3-아미노-2,5-디클로로벤조에이트 (1.6 g, 90%)를 황색 고체로서 수득하였고, 이것을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다:
Figure pat00028
단계 2: 2,5-디클로로-3-피발아미도벤조에이트의 제조
질소 하에 DCM 중 3-아미노-2,5-디클로로벤조에이트 (1.6 g, 6.8 mmol) 및 트리에틸아민 (1.9 mL, 13.7 mmol)의 용액을 빙조로 0℃로 냉각시켰다. 피발로일 클로라이드 (0.92 mL, 7.52 mmol)를 시린지를 통해 적가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 80% 전환을 나타냈고, 추가의 트리에틸아민 (1.0 mL, 6.9 mmol) 및 피발로일 클로라이드 (90 μL, 0.8 mmol)를 첨가하였다. 교반은 15시간 동안 실온에서 계속하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 유기부를 물, 수성 1 N HCl 용액, 포화 수성 중탄산나트륨 용액, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하여 2,5-디클로로-3-피발아미도벤조에이트 (2.5 g, 84%)를 갈색 오일로서 수득하였고, 이것을 추가의 정제 없이 전달하였다:
Figure pat00029
출발 물질 에틸 2,5-디클로로-3-(N-(메틸술포닐)메틸술폰아미도) 벤조에이트 (VIII, 반응식 III, (3c))의 제조:
Figure pat00030
중간체 IV, 단계 3에서와 유사한 술포닐화 절차를 따라 에틸 3-아미노-2,5-디클로로벤조에이트 (중간체 VII, 단계 1)로부터 제조하였다:
Figure pat00031
출발 물질 에틸 에틸 2,5-디클로로-3-(프로필술폰아미도)벤조에이트 (IX, 반응식 III, (3d))의 제조:
Figure pat00032
중간체 IV, 단계 3에서와 동일한 술포닐화 절차를 따라 에틸 3-아미노-2,5-디클로로벤조에이트 (중간체 VII, 단계 1)로부터 제조하였다:
Figure pat00033
출발 물질 (S)-tert-부틸 1-아미노프로판-2-일카르바메이트 (X, NHR5)의 제조:
Figure pat00034
단계 1. (S)-tert-부틸 1-(1,3-디옥스이소인돌린-2-일)프로판-2-일카르바메이트의 제조:
건조 THF (420 mL) 중 (S)-tert-부틸 1-히드록시프로판-2-일카르바메이트 (7.4 g, 42.2 mmol)의 교반 용액에 프탈이미드 (6.83 g, 46.4 mmol) 및 PPh3 (12.2 g, 46.4 mmol)을 첨가하였다. 이어서, DEAD (7.3 mL, 46.4 mmol)를 교반 용액에 실온에서 적가하고, 3시간 동안 유지하였다. 이어서, 반응 혼합물을 농축하고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (SiO2, 70:30 - 50:50 헥산-EtOAc)에 의해 정제하여 (S)-tert-부틸 1-(1,3-디옥스이소인돌린-2-일)프로판-2-일카르바메이트 12.5 g을 수득하였다.
Figure pat00035
단계 2. (S)-tert-부틸 1-아미노프로판-2-일카르바메이트의 제조:
히드라진 1수화물 (20 mL, 643 mmol)을 건조 MeOH (150 mL) 중 (S)-tert-부틸 1-(1,3-디옥스이소인돌린-2-일)프로판-2-일카르바메이트 (12.5 g, 41.1mmol)의 현탁액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 1시간 동안 50℃로 가열하였다. 실온으로 냉각한 후, 반응 혼합물을 소결유리 깔때기를 통해 여과하고, 여과물을 농축하였다. 생성된 잔류물을 Et2O (300 mL) 중에 현탁시키고, 여과하고, Et2O로 필터 케이크를 철저하게 세척하였다. 합한 여과물을 여과하고 농축하여 (S)-tert-부틸-1-아미노프로판-2-일카르바메이트 6.3 g을 수득하였다:
Figure pat00036
출발 물질 N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-2-클로로-5-플루오로페닐)피발아미드 (XI, 반응식 I, (1d))의 제조:
Figure pat00037
단계 1. N-(2-클로로-5-플루오로-3-(2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)페닐)피발아미드의 제조:
0℃에서의 THF (35 mL) 중 4-메틸-2-(메틸티오)피리미딘 (1.26 mL, 9.04 mmol) 및 메틸 2-클로로-5-플루오로-3-피발아미도-벤조에이트 (I, 2.0 g, 6.95 mmol)의 냉각된 용액에 LiHMDS (THF 중 1.0 M, 25.7 mL, 25.7 mmol)를 천천히 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 0℃로 유지하였다. 반응 분취액의 LCMS는 완전한 전환을 나타내었고, 1.0 M 수성 HCl 용액의 첨가에 의해 반응물을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하는 한편, 이어서 EtOAc를 첨가하고, 생성된 2상 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 용액을 사용하여 pH 8로 중성화하였다. 2개의 상을 분리하고, 수성 상을 EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하였다. 생성된 잔류물을 실리카 겔 상에 흡착시키고, EtOAc-헵탄 (0-30%) 용리 구배를 사용하는 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 N-(2-클로로-5-플루오로-3-(2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)페닐)피발아미드 (2.24 g, 5.66 mmol, 81% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다:
Figure pat00038
단계 2. N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-2-클로로-5-플루오로페닐)피발아미드의 제조:
-5℃ (빙염수조)에서의 DCM (61 mL) 중 N-(2-클로로-5-플루오로-3-(2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)페닐)피발아미드 (2.42 g, 6.11 mmol)의 용액에 NBS (1.09 g, 6.11 mmol)를 2부분으로 첨가하면서, 각 첨가 사이의 5분 동안 반응물을 교반되도록 하였다. 반응물을 1시간 동안 5℃에서 유지하고, 이 시간까지 TLC 분석은 완전한 전환을 나타내었다. 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 유기 부분을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 농축하여 N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-2-클로로-5-플루오로페닐)피발아미드 (2.81 g, 5.92 mmol, 97% 수율)를 황색 발포체로서 수득하였고, 이것은 정치시 천천히 결정화되었다:
Figure pat00039
출발 물질 N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-5-클로로-2-플루오로페닐)피발아미드 (XII, 반응식 I, (1d))의 제조:
Figure pat00040
단계 1. N-(5-클로로-2-플루오로-3-(2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)페닐)피발아미드의 제조
화염 건조 플라스크를 THF (10 mL) 중 메틸 메틸-5-클로로-2-플루오로-3-피발아미도벤조에이트 (II, 2.5 g, 8.69 mmol) 및 4-메틸-2-메틸티오피리미딘 (1.62 g, 11.30 mmol)으로 충전하였다. 용액을 0℃로 냉각시키고, THF 중 LiHMDS (1.0 M, 32.1 mL, 32.1 mmol)를 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 0℃에서, 이어서 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 HCl 용액 (1.0 M, 12 mL, 12 mmol)으로 켄칭하고, 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 층을 분리하였다. 유기 부분을 순차적으로 물, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하였다. 생성된 잔류물을 EtOAc/헥산 (25-50%) 구배로 용리하는 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다. N-(5-클로로-2-플루오로-3-(2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)페닐)피발아미드 (2.42 g, 6.00 mmol, 69% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다:
Figure pat00041
단계 2. N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-5-클로로-2-플루오로페닐)피발아미드의 제조:
-5℃에서의 DCM (60 mL) 중 N-(5-클로로-2-플루오로-3-(2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)페닐)피발아미드 (2.42 g, 6.00 mmol)의 교반 현탁액에 NBS (1.07 g, 6.00 mmol)를 2부분으로 첨가하면서, 각 첨가 사이의 15분 동안 반응물이 교반되도록 하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 농축하여 N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-5-클로로-2-플루오로페닐)피발아미드 (2.94 g, 6.2 mmol)를 황색 발포체로서 수득하였고, 이것을 추가의 정제 없이 다음 단계에 전달하였다:
Figure pat00042
출발 물질 N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-2-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드 (XIII, 반응식 III, (3f))의 제조:
Figure pat00043
단계 1. N-(2-플루오로-3-(2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)페닐)프로판-1-술폰아미드의 제조:
이 물질을 출발 물질 XI, 단계 1에서와 동일한 절차를 따라 출발 물질 III으로부터 제조하였다:
Figure pat00044
단계 2. N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-2-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드의 제조:
이 물질을 출발 물질 XI, 단계 2에서와 동일한 절차를 따라 N-(2-플루오로-3-(2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)페닐)프로판-1-술폰아미드 (96% 수율)로부터 제조하였다:
Figure pat00045
출발 물질 2-브로모-2-(2-클로로피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로-3-니트로페닐)에타논 (XIV, 반응식 IV, (4b))의 제조:
Figure pat00046
단계 1. 2-(2-클로로피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로-3-니트로페닐)에타논의 제조:
0℃에서의 THF (25 mL) 중 2-클로로-4-메틸피리미딘 (2.86 g, 22.3 mmol) 및 메틸 2-플루오로-3-니트로벤조에이트 (중간체 III, 단계 1, 4.43 g, 22.3 mmol)의 용액에 THF 중 LiHMDS (1.0 M, 44.5 mL, 44.5 mmol)를 천천히 첨가하였다. 암색 반응 혼합물을 2시간 동안 0℃에서 교반되도록 하고, 이 시간에 1.0 M 수성 HCl 용액의 첨가에 의해 이것을 켄칭하고, 밤새 실온에서 교반되도록 하였다. 생성된 침전물을 진공 여과에 의해 제거하였다. 수집된 여과물을 농축하고, 생성된 잔류물을 EtOH로 연화처리하여 2-(2-클로로피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로-3-니트로페닐)에타논 (447 mg, 1.5 mmol)을 황갈색 고체로서 제공하였다:
Figure pat00047
단계 2: 2-브로모-2-(2-클로로피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로-3-니트로페닐)에타논의 제조:
-10℃에서의 DCM (10 ml) 중 2-(2-클로로피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로-3-니트로페닐)에타논 (220 mg, 0.74 mmol)의 용액에 NBS (132 mg, 0.74 mmol)를 3부분으로 첨가하면서, 각 첨가 사이의 5분 동안 반응물이 교반되도록 하였다. 반응물을 30분 동안 -10℃에서 교반하였다. 반응물을 DCM 및 물 사이에 분배하고, 층은 분리하였다. 유기 부분을 물 및 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 농축하여 갈색 오일 272 mg을 얻었다. 조 물질을 EtOAc-헵탄 (0-50%) 용리 구배를 사용하는 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 2-브로모-2-(2-클로로피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로-3-니트로페닐)에타논 (142 mg, 0.33 mmol, 44%)을 수득하였다:
Figure pat00048
출발 물질 N-(3-(2-브로모-2-(2-클로로피리미딘-4-일)아세틸)-2-클로로페닐)메탄술폰아미드 (XV 반응식 III, (3f))의 제조:
Figure pat00049
단계 1. 1-(2-클로로-3-니트로페닐)-2-(2-(메틸티오) 피리미딘-4-일)에타논의 제조:
이 물질을 중간체 XI, 단계 1과 동일한 절차를 따라 중간체 IV로부터 제조하였다:
Figure pat00050
단계 2. N-(3-(2-브로모-2-(2-클로로피리미딘-4-일)아세틸)-2-클로로페닐)메탄술폰아미드의 제조:
이 물질을 중간체 XI, 단계 2와 동일한 절차를 따라 제조하였다:
Figure pat00051
출발 물질 N-(3-(2-브로모-2-(2-클로로피리미딘-4-일)아세틸)-2-클로로페닐)프로판-1-술폰아미드 (XVI, 반응식 III, (3f))의 제조:
Figure pat00052
단계 1: N-(2-클로로-3-(2-(2-클로로피리미딘-4-일)아세틸)페닐)프로판-1-술폰아미드의 제조:
이 물질을 중간체 XI, 단계 1과 동일한 절차를 따라 중간체 V로부터 제조하였다:
Figure pat00053
단계 2. N-(3-(2-브로모-2-(2-클로로피리미딘-4-일)아세틸)-2-클로로페닐)프로판-1-술폰아미드:
이 물질을 중간체 XI, 단계 2와 동일한 절차를 따라 N-(2-클로로-3-(2-(2-클로로피리미딘-4-일)아세틸)페닐)프로판-1-술폰아미드로부터 제조하였다:
Figure pat00054
출발 물질 N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-2-클로로페닐)피발아미드 (XVII, 반응식 III, (3f))의 제조:
Figure pat00055
단계 1. N-(2-클로로-3-(2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)페닐)피발아미드의 제조:
이 물질을 중간체 XI, 단계 1과 동일한 절차를 따라 중간체 VI으로부터 제조하였다:
Figure pat00056
단계 2. N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-2-클로로페닐)피발아미드의 제조
이 물질을 중간체 XI, 단계 2와 동일한 절차를 따라 N-(2-클로로-3-(2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)페닐)피발아미드로부터 제조하였다:
Figure pat00057
출발 물질 N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-2,5-디클로로페닐)피발아미드 (XVIII, 반응식 III, (3f))의 제조:
Figure pat00058
단계 1. N-(2,5-디클로로-3-(2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)페닐)피발아미드의 제조:
이 물질을 출발 물질 XI, 단계 1과 동일한 절차를 따라 중간체 VII로부터 제조하였다:
Figure pat00059
단계 2. N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-2,5-디클로로페닐)피발아미드의 제조:
이 물질을 출발 물질 XI, 단계 2와 동일한 절차를 따라 N-(2,5-디클로로-3-(2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)페닐)피발아미드로부터 제조하였다:
Figure pat00060
출발 물질 N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-2,5-디클로로페닐)프로판-1-술폰아미드 (XIX, 반응식 III, (3f))의 제조:
Figure pat00061
단계 1. N-(2,5-디클로로-3-(2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)페닐)프로판-1-술폰아미드의 제조:
이 물질을 중간체 XI, 단계 1과 동일한 절차를 따라 중간체 IX로부터 제조하였다:
Figure pat00062
단계 2. N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-2,5-디클로로페닐)프로판-1-술폰아미드의 제조:
이 물질을 출발 물질 XI, 단계 2와 동일한 절차를 따라 N-(2,5-디클로로-3-(2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)페닐)프로판-1-술폰아미드로부터 제조하였다:
Figure pat00063
출발 물질 N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-2,5-디클로로페닐)메탄술폰아미드 (XX, 반응식 III, (3f))의 제조:
Figure pat00064
단계 1. N-(2,5-디클로로-3-(2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)페닐)메탄술폰아미드의 제조:
이 물질을 중간체 XI, 단계 1과 동일한 절차를 따라 중간체 VIII로부터 제조하였다:
Figure pat00065
단계 2. N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-2,5-디클로로페닐)메탄술폰아미드의 제조:
이 물질을 중간체 XI, 단계 2와 동일한 절차를 따라 N-(2,5-디클로로-3-(2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)페닐)메탄술폰아미드로부터 제조하였다:
Figure pat00066
출발 물질 3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로아닐린 (XXI, 반응식 I, (1f))의 제조:
Figure pat00067
단계 1. N-(3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로페닐)피발아미드의 제조:
실온에서 Ar 하의 DMA (4.7 mL) 중 N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-2-클로로-5-플루오로페닐)-피발아미드 (XI, 489 mg, 1.03 mmol)의 용액에 2,2-디메틸프로판티오아미드 (131 mg, 1.12 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고, 이어서 3시간 동안 80℃로 가열하고 유지하였다. LCMS에 의해 반응이 완결되었는지 판단하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 상을 합하고, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하였다. 생성된 잔류물을 실리카 겔 상에 흡착시키고, EtOAc:헵탄 (0-15%) 용리 구배를 사용하는 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 N-(3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로페닐)피발아미드 (175 mg, 0.36 mmol, 38%)를 백색 발포체로서 수득하였다:
Figure pat00068
단계 2. 3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로아닐린의 제조:
EtOH (3.6 mL) 중 N-(3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로페닐)피발아미드 (175 mg, 0.355 mmol)의 용액을 6.0 M 수성 HCl 용액 (1.8 mL, 10.7 mmol)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 18시간 동안 80℃에서 오일조에서 가열하고, 이어서 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 수성 포화 NaHCO3으로 pH 8로 켄칭하였다. 상을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 부분을 합하고, 물, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 농축하였다. 생성된 잔류물을 실리카 겔 상에 흡착시키고, EtOAc:헵탄 (0-50%) 용리 구배를 사용하는 실리카 겔의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로아닐린 (104 mg, 0.25 mmol, 71% 수율)을 백색 발포체로서 수득하였다:
Figure pat00069
출발 물질 3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-5-클로로-2-플루오로아닐린 (XXII, 반응식 I, (1f))의 제조:
Figure pat00070
단계 1: N-(3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-5-클로로-2-플루오로페닐)-피발아미드의 제조:
이 물질을 중간체 XXI, 단계 1에 대한 절차를 따라 중간체 XII로부터 제조하였다:
Figure pat00071
단계 2. 3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-5-클로로-2-플루오로아닐린의 제조:
표제의 화합물을 중간체 XX, 단계 2에 대한 절차를 따라 N-(3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-5-클로로-2-플루오로페닐)-피발아미드로부터 제조하였다:
Figure pat00072
출발 물질 N-(3-(2-tert-부틸-5-(2-클로로피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로페닐)메탄술폰아미드 (XXIII, 반응식 IV, (1g))의 제조:
Figure pat00073
단계 1. 2-tert-부틸-5-(2-클로로피리미딘-4-일)-4-(2-플루오로-3-니트로페닐)티아졸:
목적 물질을 출발 물질 XXI, 단계 1에 이용된 절차를 따라 출발 물질 XIV로부터 제조하였다:
Figure pat00074
단계 2. 3-(2-tert-부틸-5-(2-클로로피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로아닐린의 제조:
2-tert-부틸-5-(2-클로로피리미딘-4-일)-4-(2-플루오로-3-니트로페닐)티아졸 (34 mg, 0.087 mmol)을 HOAc (3 mL) 중에 용해시키고, 철 (48 mg, 0.87 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 24시간 동안 실온에서 교반하였다. LCMS는 소량의 출발 물질이 여전히 존재한다는 것을 나타내었다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 여과하고, 여과물을 증발시켰다. 잔류물을 포화 수성 NaHCO3 용액 및 EtOAc 사이에 분배하고, 층을 분리하였다. 수상을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물, 염수로 세척하고, 건조시켰다 (Na2SO4). 조 물질을 실리카 겔 상에 흡착시키고, 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피 (2:1에서 1:1 헵탄-EtOAc)에 의해 정제하여 표제의 중간체 (5.9 mg, 0.016 mmol)를 수득하였다:
Figure pat00075
단계 3. N-(3-(2-tert-부틸-5-(2-클로로피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로페닐)메탄술폰아미드의 제조:
표제의 중간체를 피리딘을 용매로서 사용하여 출발 물질 IV, 단계 3의 제조에 이용된 술포닐화 절차를 따라 3-(2-tert-부틸-5-(2-클로로피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로아닐린으로부터 제조하였다:
Figure pat00076
출발 물질 N-(3-(2-tert-부틸-5-(2-클로로피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로페닐)프로판술폰아미드 (XXIV, 반응식 IV, (1g))의 제조:
Figure pat00077
목적 화합물을 피리딘을 용매로서 사용하여 출발 물질 IV, 단계 3의 제조에 이용된 술포닐화 절차를 따라 3-(2-tert-부틸-5-(2-클로로피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로아닐린 (중간체 XXIII, 단계 2)을 1-프로판술포닐 클로라이드로 술포닐화시킴으로써 수득하였다.
Figure pat00078
출발 물질 N-(3-(2-tert-부틸-5-(2-클로로피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로페닐)메탄술폰아미드 (XXV, 반응식 III, (1g))의 제조:
Figure pat00079
목적 화합물을 중간체 XXI, 단계 1에 이용된 절차를 따라 중간체 XV로부터 수득하였다:
Figure pat00080
출발 물질 N-(3-(2-tert-부틸-5-(2-클로로피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로페닐)프로판술폰아미드 (XXVI, 반응식 III, (1g))의 제조:
Figure pat00081
목적 화합물을 출발 물질 XXI, 단계 1에 이용된 절차를 따라 중간체 XVI으로부터 수득하였다:
Figure pat00082
N-(3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2,5-디클로로페닐)프로판-1-술폰아미드 (XXVII, 반응식 III, (1g))의 제조:
Figure pat00083
표제의 화합물을 중간체 XXI에 이용된 절차를 따라 중간체 XIX로부터 수득하였다.
Figure pat00084
N-(3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2,5-디클로로페닐)메탄술폰아미드 (XXVIII, 반응식 III, (1g))의 제조:
Figure pat00085
표제의 화합물을 출발 물질 XXI에 이용된 절차를 따라 중간체 XX으로부터 수득하였다.
Figure pat00086
출발 물질 2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-5-플루오로아닐린 (XXIX, 반응식 V, (1f))의 제조:
Figure pat00087
단계 1. N-(3-(2-아미노-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로페닐)피발아미드의 제조:
실온에서의 EtOH (5.1 mL) 중 N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-2-클로로-5-플루오로페닐)피발아미드 (중간체 XI, 489 mg, 1.03 mmol)의 용액에 티오우레아 (392 mg, 5.15 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반되도록 하고, 이어서, 오일조에서 30분 동안 75℃로 가열하고, 이 온도에서 유지하였다. LCMS가 완전한 전환을 나타내었고, 반응물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 반응물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하였다. 생성된 잔류물을 실리카 겔 상에 흡착시키고, 헵탄-EtOAc (20-100%) 용리 구배를 사용하는 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 N-(3-(2-아미노-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로페닐)피발아미드 (311 mg, 0.68 mmol, 66% 수율)를 연황색 고체로서 수득하였다:
Figure pat00088
단계 2. N-(3-(2-브로모-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로페닐)피발아미드의 제조:
0℃ (빙염수조)에서 ACN (7 mL) 중 구리(II) 브로마이드 (154 mg, 0.69 mmol)의 용액을 함유하는 질소 하에 오븐 건조된 둥근 바닥 플라스크에 10분에 걸쳐 tert-부틸니트라이트 (123 μL, 1.03 mmol)를 첨가하였다. 이 냉각 반응 혼합물에 ACN (6.9 mL) 중 N-(3-(2-아미노-5-(2-(메틸티오)-피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로페닐)피발아미드 (311 mg, 0.69 mmol)의 현탁액을 10분에 걸쳐 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 2시간 동안 65℃로 가열하였다. 분취액의 LCMS는 전환이 완결되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 농축하고, 이어서 EtOAc 및 물로 희석하였다. 상을 분리하고, 수성 상을 EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 물, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 농축하여 N-(3-(2-브로모-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로페닐)피발아미드 (320 mg, 0.59 mmol, 86% 수율)를 갈색 발포체로서 수득하였다:
Figure pat00089
단계 3. N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-5-플루오로페닐) 피발아미드의 제조:
톨루엔 (5.2 mL) 및 물 (1.0 mL) 중 N-(3-(2-브로모-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로페닐)피발아미드 (320 mg, 0.620 mmol), 시클로프로필보론산 피나콜 에스테르 (417 mg, 2.48 mmol), 인산칼륨 (395 mg, 1.86 mmol)의 혼합물을 질소로 스파징하였다. 이어서, Pd(OAc)2 (28 mg, 0.124 mmol) 및 트리시클로헥실포스핀 (70 mg, 0.25 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 반응 튜브에서 밀봉하고, 18시간 동안 오일조에서 100℃로 가열하였다. LCMS는 10-20% 전환을 나타내었다. 추가의 시클로프로필보론산 (213 mg, 2.48 mmol)을 도입하고, 반응물을 또 다른 18시간 동안 100℃에서 유지하였다. 분취액의 LCMS는 90% 전환을 나타내었다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 상을 합하고, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 농축하였다. 생성된 잔류물을 실리카 겔 상에 흡착시키고, 헵탄-EtOAc (1-50%) 용리 구배를 사용하는 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-5-플루오로페닐) 피발아미드 (107 mg, 0.22 mmol, 36% 수율)를 밝은 갈색 발포체로서 수득하였다:
Figure pat00090
단계 4. 2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-5-플루오로아닐린의 제조:
에탄올 (2.2 mL) 중 N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-5-플루오로페닐)피발아미드 (107 mg, 0.224 mmol)의 용액을 수성 황산 용액 (50% v/v, 1.2 mL)으로 처리하였다. 생성된 반응 혼합물을 8시간 동안 90℃에서 오일조에서 가열하였다. 분취액의 LCMS는 95% 전환을 나타내었다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, 이어서 EtOAc 및 포화 수성 NaHCO3 용액의 2상 용액에 조심스럽게 첨가하였다 (pH 7로 염기성화시킴). 상을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 추출하였다. 유기 부분을 합하고, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하여 2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-5-플루오로아닐린 (86 mg, 0.22 mmol, 98% 수율)을 오렌지색 발포체로서 수득하였다:
Figure pat00091
5-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로아닐린 (XXX, 반응식 V, (1f))의 제조:
Figure pat00092
단계 1. N-(3-(2-아미노-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-5-클로로-2-플루오로페닐)피발아미드:
EtOH 중 N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-5-클로로-2-플루오로페닐)피발아미드 (XII, 467 mg, 0.98 mmol) 및 티오우레아 (374 mg, 4.91 mmol)의 혼합물을 45분 동안 90℃에서 가열하고, 이어서 실온으로 냉각되도록 하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (50 ml)로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3 용액 (25 ml), 이어서 염수 (25 ml)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하였다. 생성된 잔류물을 EtOAc-헵탄 (0 - 50%) 용리 구배로 용리하는 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하고, 목적 생성물 (484 mg)을 황색 고체로서 수득하였다:
Figure pat00093
단계 2. N-(3-(2-브로모-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-5-클로로-2-플루오로페닐)피발아미드:
0℃에서의 ACN (10 mL) 중 구리(II) 브로마이드 (201 mg, 0.90 mmol)의 용액에, t-부틸 니트라이트 (139 mg, 1.35 mmol)를 첨가하였다. 이 반응 혼합물에 ACN (15 mL) 중 N-(3-(2-아미노-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-5-클로로-2-플루오로페닐)피발아미드 (480 mg, 0.90 mmol)의 슬러리를 10분에 걸쳐 첨가하였다. 이어서, 반응물을 2시간 동안 65℃로 가열하고, LCMS는 단지 부분 전환을 나타내었다. 추가의 ACN (25 ml) 및 t-부틸 니트라이트 (139 mg, 1.35 mmol)를 순차적으로 첨가하고, 반응 혼합물을 2.5시간 동안 65℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, 농축하고, 생성된 잔류물을 EtOAc-헵탄 (0 - 30%)으로 용리하는 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 목적 생성물 (405 mg, 87% 수율)을 밝은 황색 고체로서 수득하였다:
Figure pat00094
단계 3. N-(5-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로페닐)피발아미드:
톨루엔 (5 mL) 및 물 (0.50 mL) 중 N-(3-(2-브로모-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-5-클로로-2-플루오로페닐)피발아미드 (400 mg, 0.78 mmol), 시클로프로필보론산 (200 mg, 2.33 mmol) 및 인산칼륨 (988 mg, 4.65 mmol)의 혼합물을 Ar로 퍼징하였다. Pd(OAc)2 (34.8 mg, 0.155 mmol) 및 트리시클로헥실포스핀 (87 mg, 0.31 mmol)을 첨가한 다음, Ar로 퍼징하였다. 이어서, 반응물을 밤새 100℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 층을 분리하였다. 유기 부분을 물, 염수로 세척하고, 건조시키고, 농축하였다. 생성된 잔류물을 헵탄-EtOAc (0 - 30%)로 용리하는 실리카 겔 상에 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하고, 목적 생성물 (143 mg, 39% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다:
Figure pat00095
단계 4. 5-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로아닐린의 제조:
EtOH (9 ml) 중 N-(5-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로페닐)피발아미드 (143 mg, 0.300 mmol)의 용액을 수성 H2SO4 (50% v/v, 3 ml)로 처리하고, 반응 혼합물을 8시간 동안 환류에서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, 농축하고, 생성된 잔류물을 빙수 (30 ml) 중에 용해시키고, 고체 NaHCO3 (6 g)에 의해 중성화하고, EtOAc (2 x 30 ml)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 염수 (30 ml)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하여 조 5-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로아닐린을 황색 잔류물로서 수득하였고, 이것을 추가의 정제 없이 사용하였다:
Figure pat00096
출발 물질 N-(3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드 (XXXI, 반응식 V, (1h))의 제조:
Figure pat00097
단계 1. N-(3-(2-아미노-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드:
표제의 중간체를 중간체 XXIX, 단계 1에 대한 절차를 따라 중간체 XIII으로부터 수득하였다:
Figure pat00098
단계 2. N-(3-(2-브로모-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드:
표제의 중간체를 중간체 XXIX, 단계 2에 대한 절차를 따라 중간체 XIII으로부터 수득하였다:
Figure pat00099
단계 3. N-(3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드:
표제의 중간체를 중간체 XXIX, 단계 3에 대한 절차를 따라 중간체 XIII으로부터 수득하였다:
Figure pat00100
단계 4. N-(3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드:
실온에서의 DCM (15 ml) 중 N-(3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드 (306 mg, 0.66 mmol)의 용액에 70% mCPBA (325 mg, 1.32 mmol)를 첨가하고, 반응물을 밤새 실온에서 교반되도록 하였다. 반응물을 수성 포화 중탄산나트륨으로 켄칭하고, 상을 분리하였다. 수상을 pH 5로 산성화하고, DCM으로 추출하였다. 합한 유기 부분을 건조시키고 (Na2SO4), 농축하여 N-(3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드 (298 mg, 0.600 mmol)를 수득하였고, 이것을 추가의 정제 없이 사용하였다:
Figure pat00101
출발 물질 N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)페닐)프로판-1-술폰아미드 (XXXII, 반응식 V, (1h))의 제조:
Figure pat00102
단계 1. N-(3-(2-아미노-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로페닐) 피발아미드의 제조:
표제의 중간체를 중간체 XXIX, 단계 1에 대한 절차를 따라 중간체 XVII로부터 수득하였다:
Figure pat00103
단계 2. N-(3-(2-브로모-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로페닐)피발아미드의 제조:
표제의 중간체를 중간체 XXIX, 단계 2에 대한 절차를 따라 상기 물질로부터 수득하였다:
Figure pat00104
단계 3. N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)페닐)피발아미드의 제조:
표제의 중간체를 중간체 XXIX, 단계 3에 대한 절차를 따라 상기 물질로부터 수득하였다:
Figure pat00105
단계 4. 2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)아닐린의 제조:
표제의 중간체를 중간체 XXIX, 단계 4에 대한 절차를 따라 상기 물질로부터 수득하였다:
Figure pat00106
단계 5. N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)페닐)프로판-1-술폰아미드의 제조:
표제의 중간체를 1-프로판술포닐 클로라이드를 사용하여 중간체 IV, 단계 4와 유사한 방식으로 2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)아닐린으로부터 제조하였다:
Figure pat00107
단계 6. N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)페닐)프로판-1-술폰아미드의 제조:
표제의 중간체를 중간체 XXXI, 단계 4와 유사한 방식으로 N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)페닐)프로판-1-술폰아미드로부터 제조하였다:
Figure pat00108
출발 물질 N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)페닐)메탄술폰아미드 (XXXIII, 반응식 V, (1h))의 제조:
Figure pat00109
단계 1. N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)페닐)메탄술폰아미드:
표제의 중간체를 메탄술포닐 클로라이드를 사용하여 중간체 IV, 단계 4와 유사한 방식으로 2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)아닐린 (중간체 XXXI, 단계 4)으로부터 제조하였다:
Figure pat00110
단계 2. N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)페닐)메탄술폰아미드:
표제의 중간체를 중간체 XXXI, 단계 4에 대한 절차를 따라 상기 물질로부터 수득하였다:
Figure pat00111
N-(2,5-디클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)페닐)프로판-1-술폰아미드 (XXXIV, 반응식 V, (1h)의 제조:
Figure pat00112
단계 1. N-(3-(2-아미노-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2,5-디클로로페닐)피발아미드의 제조:
표제의 중간체를 중간체 XXIX, 단계 1로부터의 절차를 이용하여 N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-2,5-디클로로페닐)프로판-1-술폰아미드 (중간체 XIX)로부터 수득하였다:
Figure pat00113
단계 2. N-(3-(2-브로모-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2,5-디클로로페닐)피발아미드의 제조:
표제의 중간체를 중간체 XXIX, 단계 2로부터의 절차를 이용하여 상기 N-(3-(2-아미노-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2,5-디클로로페닐)피발아미드로부터 수득하였다:
Figure pat00114
단계 3. N-(2,5-디클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)페닐)피발아미드의 제조:
표제의 중간체를 중간체 XXIX, 단계 3으로부터의 절차를 이용하여 상기 N-(3-(2-브로모-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2,5-디클로로페닐)피발아미드로부터 수득하였다:
Figure pat00115
단계 4. 2,5-디클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)아닐린의 제조:
표제의 중간체를 중간체 XXIX, 단계 4로부터의 절차를 이용하여 상기 N-(2,5-디클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)페닐)피발아미드로부터 수득하였다:
Figure pat00116
단계 5. N-(2,5-디클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)페닐)프로판-1-술폰아미드의 제조:
표제의 중간체를 1-프로판술포닐 클로라이드를 사용하여 중간체 IV, 단계 3과 유사한 방식으로 상기 2,5-디클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)아닐린으로부터 수득하였다:
Figure pat00117
단계 6. N-(2,5-디클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)페닐)프로판-1-술폰아미드의 제조:
표제의 중간체를 중간체 XXXI, 단계 4와 유사한 방식으로 상기 N-(2,5-디클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)페닐)프로판-1-술폰아미드로부터 제조하였다:
Figure pat00118
출발 물질 2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-5-플루오로아닐린 (XXXV, 반응식 I, (1f))의 제조:
Figure pat00119
단계 1. N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-5-플루오로페닐)피발아미드의 제조:
실온에서의 1,3-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-2(1H)-피리미디논 (DMPU, 840 μL) 중 N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-2-클로로-5-플루오로페닐) 피발아미드 (XI, 400 mg, 0.84 mmol)의 용액에 시클로프로판카르복스아미드 (1.43 g, 16.9 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 40분 동안 미리 가열된 135℃ 오일조에 넣고, 이어서 실온으로 냉각되도록 하고, EtOAc 및 물 사이에 분배하였다. 수성 상을 EtOAc로 추출하고, 유기 층을 합하였다. 수득된 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 농축하였다. 생성된 잔류물을 실리카 겔 상에 흡착시키고, 헵탄-EtOAc (0-60%) 용리 구배를 사용하는 실리카 겔 상 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-5-플루오로페닐)피발아미드 (170 mg, 0.365 mmol, 43% 수율)를 수득하였다:
Figure pat00120
단계 2. 2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-5-플루오로아닐린의 제조:
에탄올 (5.6 mL) 중 N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-5-플루오로페닐)피발아미드 (254 mg, 0.55 mmol)의 용액을 수성 황산 용액 (50% v/v, 2.9 mL)으로 처리하였다. 생성된 반응 혼합물을 7시간 동안 90℃에서 오일조에서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, 이어서 EtOAc 및 포화 수성 NaHCO3 용액의 2상 용액에 조심스럽게 첨가하였다 (pH 7으로 염기성화시킴). 상을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 추출하였고; 유기부를 합하고, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 농축하여 2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-5-플루오로아닐린 (191 mg, 0.46 mmol, 83% 수율)을 5-10% N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-5-플루오로페닐)피발아미드를 함유한 오렌지색 발포체로서 수득하였다:
Figure pat00121
출발 물질 5-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-2-플루오로아닐린 (XXXVI, 반응식 I, (1f))의 제조:
Figure pat00122
단계 1. N-(5-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-2-플루오로페닐)피발아미드의 제조:
N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-5-클로로-2-플루오로페닐)-피발아미드 (XII, 771 mg, 1.62 mmol), 시클로프로판카르복스아미드 (2.763 mg, 32.5 mmol) 및 DMPU (1.6 mL)의 혼합물을 70분 동안 135℃에서 미리 가열된 오일조에서 가열하였다. 이어서, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 물 (30 ml) 및 EtOAc (30 ml) 사이에 분배하고, 층을 분리하였다. 유기 층을 포화 수성 NaHCO3 용액 (20 ml), 물 (30 ml), 염수 (30 ml)로 순차적으로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하였다. 생성된 잔류물을 EtOAc-헵탄 (0-25%)으로 용리하는 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 N-(5-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-2-플루오로페닐)피발아미드 (773 mg)를 발포체로서 수득하였다:
Figure pat00123
단계 2. 5-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-2-플루오로아닐린의 제조:
EtOH (18 mL) 중 N-(5-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-2-플루오로페닐)피발아미드 (748 mg) 및 H2SO4 (50% v/v, 6 ml)의 용액을 밤새 환류하고, 실온으로 냉각되도록 하고, 농축하였다. 생성된 잔류물을 빙수 (30 mL)로 희석하고, 과량의 고체 NaHCO3으로 중성화하고, EtOAc (2 X 30 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 염수 (30 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하였다. 생성된 조 물질을 EtOAc-헵탄 (0-100%)으로 용리하는 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 5-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-2-플루오로아닐린 (153 mg, 2단계에 걸쳐 20%)을 황색 고체로서 수득하였다:
Figure pat00124
출발 물질 N-(3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-2-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드 (XXXVII, 반응식 III, (1h))의 제조:
Figure pat00125
단계 1. N-(3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-2-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드의 제조: 표제의 중간체를 중간체 XXXV, 단계 1로부터의 절차를 이용하여 N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-2-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드 (중간체 XIII)로부터 수득하였다:
Figure pat00126
단계 2. N-(3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-2-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드의 제조:
표제의 중간체를 중간체 XXXI, 단계 4에 대한 절차를 이용하여 N-(3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-2-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드로부터 제조하여 술폭시드 및 목적 술폰의 혼합물을 제공하였다:
Figure pat00127
출발 물질 N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)페닐)프로판-1-술폰아미드 (XXXVIII, 반응식 III, (1h))의 제조:
Figure pat00128
단계 1. N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)페닐)피발아미드의 제조:
표제의 중간체를 중간체 XXXV, 단계 1에 대한 절차를 따라 N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-2-클로로페닐)피발아미드 (중간체 XVII)로부터 제조하였다:
Figure pat00129
단계 2. 2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)아닐린:
표제의 중간체를 중간체 XXXV, 단계 2에 대한 절차를 따라 상기 물질로부터 수득하였다:
Figure pat00130
단계 3. N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)페닐)프로판-1-술폰아미드:
표제의 중간체를 1-프로판술포닐 클로라이드를 사용하여 중간체 IV, 단계 3에 대한 절차를 따라 상기 물질로부터 수득하였다:
Figure pat00131
단계 4. N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)페닐)프로판-1-술폰아미드:
표제의 중간체를 중간체 XXXI, 단계 4로부터의 절차를 이용하여 상기 N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)페닐)프로판-1-술폰아미드로부터 제조하였다:
Figure pat00132
출발 물질 N-(2,5-디클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)페닐)프로판-1-술폰아미드 (XXXIX, 반응식 III, (1h))의 제조:
Figure pat00133
단계 1. N-(2,5-디클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)페닐)피발아미드의 제조:
화합물을 중간체 XXXV, 단계 1에 대한 절차를 따라 N-(3-(2-브로모-2-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)아세틸)-2,5-디클로로페닐)피발아미드 (중간체 XVII)로부터 제조하였다:
Figure pat00134
단계 2. 2,5-디클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)아닐린의 제조:
화합물을 중간체 XXXV, 단계 2에 대한 절차를 따라 상기 N-(2,5-디클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)페닐)피발아미드로부터 제조하였다:
Figure pat00135
단계 3. N-(2,5-디클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)페닐)프로판-1-술폰아미드의 제조:
화합물을 1-프로판술포닐 클로라이드를 사용하여 중간체 IV, 단계 4와 유사한 방식으로 2,5-디클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)아닐린으로부터 제조하였다:
Figure pat00136
단계 4. N-(2,5-디클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)페닐)프로판-1-술폰아미드의 제조:
화합물을 중간체 XXXI, 단계 4에 대한 절차를 이용하여 상기 N-(2,5-디클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)페닐)프로판-1-술폰아미드로부터 제조하였다:
Figure pat00137
실시예 1
(S)-메틸 1-(4-(2-tert-부틸-4-(2-클로로-5-플루오로-3-(메틸술폰아미도)페닐)티아졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)프로판-2-일카르바메이트의 제조
Figure pat00138
3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로아닐린 (XXI, 104 mg, 0.25 mmol), 피리딘 (1 mL) 및 메탄술포닐 클로라이드 (0.079 mL, 1.02 mmol)의 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, 농축하고, 생성된 잔류물을 DME (5 ml) 및 포화 수성 Na2CO3 용액 (5 mL)의 혼합물 중에 현탁시켰다. 2상 반응 혼합물을 2시간 동안 65℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 유기부를 합하고, 물, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 농축하여 N-(3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸티오)-피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로페닐)메탄술폰아미드 (131 mg, 0.24 mmol, 95%)를 갈색 잔류물로서 수득하였고, 이것을 추가의 정제 없이 사용하였다:
Figure pat00139
N-(3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸티오)-피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로페닐)메탄술폰아미드 (131 mg, 0.269 mmol)를 질소 하에 DCM (2.7 mL) 중에 용해시켰다. 혼합물을 빙/수조에서 0℃로 냉각시키고, 60% mCPBA (155 mg, 0.54 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반되도록 하고, 실온으로 가온되도록 하고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 켄칭하였다 (생성된 수상의 pH는 7-8임). 수성 상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 물, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 농축하여 N-(3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로페닐)메탄술폰아미드 (107 mg, 0.196 mmol)를 점성 황색 오일로서 수득하였고, 이것은 정치시 결정화되었다:
Figure pat00140
NMP (1 mL) 중 N-(3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로페닐)메탄술폰아미드 (36 mg, 0.069 mmol) 및 (S)-tert-부틸 1-아미노프로판-2-일카르바메이트 (X, 121 mg, 0.69 mmol)의 용액을 실온에서 15분 동안 교반하고, 이어서 15분 동안 120℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, 포화 수성 NH4Cl 용액으로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 유기부를 합하고, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 농축하여 (S)-tert-부틸 1-(4-(2-tert-부틸-4-(2-클로로-5-플루오로-3-(메틸술폰아미도)페닐)티아졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)프로판-2-일카르바메이트 (40 mg, 0.065 mmol, 94%)를 황색 오일로서 수득하였다:
Figure pat00141
(S)-tert-부틸 1-(4-(2-tert-부틸-4-(2-클로로-5-플루오로-3-(메틸술폰아미도)페닐)티아졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)프로판-2-일카르바메이트 (40 mg, 0.065 mmol)를 함유하는 둥근 바닥 플라스크에 TFA:DCM의 1:1 용액 (1 mL)을 첨가하였다. 생성된 반응물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 농축하고, THF (1 mL) 및 포화 수성 NaHCO3 용액 (1 mL)의 혼합물 중에 현탁시켰다. 상기 2상 용액에 THF 중 0.1 M 용액으로서의 메틸 클로로포르메이트 (6 μL, 0.072 mmol)를 첨가하였다. 2상 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 빠르게 교반하였다. 유기 층의 LCMS는 거의 전환을 나타내지 않았다. 이어서, 추가의 메틸 클로로포르메이트 (15 μL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 또 다른 15분 동안 빠르게 교반하였다. 반응 분취액의 LCMS는 완전한 전환을 나타내었다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하고; 유기 상을 합하고, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 농축하였다. 잔류물을 DMSO 중에 용해시키고, 역상 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 동결건조시켜 (S)-메틸 1-(4-(2-tert-부틸-4-(2-클로로-5-플루오로-3-(메틸술폰아미도)페닐)티아졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)프로판-2-일카르바메이트를 TFA 염으로서 수득하였다 (14 mg):
Figure pat00142
실시예 2
N-(3-(2-tert-부틸-5-(피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드의 제조
Figure pat00143
피리딘 (0.4 mL) 중 3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로아닐린 (XXI, 30 mg, 0.073 mmol)의 용액에, 1-프로판술포닐 클로라이드 (33 μL, 0.29 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반되도록 하였다. 분취액의 LCMS는 반응이 미완결임을 나타내었다. 추가의 1-프로판술포닐 클로라이드 (32.9 μL, 0.293 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가의 72시간 동안 실온에서 교반하고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 켄칭하고 (pH = 8), EtOAc로 추출하였다. 이어서, 수성 상을 수성 1 N HCl 용액으로 pH 6으로 조정하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 물, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 농축하여 조 N-(3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로페닐) 프로판-1-술폰아미드 (39 mg, 0.068 mmol)를 갈색 고체로서 수득하였고, 이것을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다:
N-(3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로 페닐)프로판-1-술폰아미드 (39 mg, 0.076 mmol)를 DCM (2 mL) 중에 용해시키고, 용액을 빙수조에서 0℃로 냉각시켰다. 냉각된 반응물에 mCPBA (50%, 52 mg, 0.15 mmol)를 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반되도록 하고, 이어서 포화 수성 NaHCO3 용액으로 켄칭하였다. 수성 상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 물, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 농축하여 N-(3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드 (25 mg, 0.046 mmol, 60%)를 점성 황색 잔류물로서 수득하였고, 이것은 정치시 결정화되었다:
Figure pat00145
DCM (0.5 mL) 및 EtOH (0.5 mL) 중 N-(3-(2-tert-부틸-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드 (25 mg, 0.046 mmol)의 용액에 수소화붕소나트륨 (3.5 mg, 0.091 mmol)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 18시간 동안 질소 하에 주위 온도에서 교반하였다. 이어서, 더 많은 수소화붕소나트륨 (12 mg, 0.32 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 추가의 18시간 동안 교반되도록 하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 물, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 농축하였다. 잔류물을 DMSO 중에 용해시키고, 역상 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 동결시키고, 동결건조시켜 N-(3-(2-tert-부틸-5-(피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로-5-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드 (2 mg)를 TFA 염으로서 수득하였다.
Figure pat00146
실시예 3
(S)-메틸 1-(4-(4-(2-클로로-5-플루오로-3-(메틸술폰아미도)페닐)-2-시클로프로필티아졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)프로판-2-일카르바메이트의 제조:
Figure pat00147
건조 피리딘 (440 μL) 중 2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)-피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-5-플루오로아닐린 (XXIX, 86 mg, 0.219 mmol)의 용액을 실온에서 메탄술포닐 클로라이드 (85 μL, 1.1 mmol)로 처리하고, 반응물을 3시간 동안 교반하였다. 분취액의 LCMS는 술폰아미드와 술폰이미드의 혼합물로서 90% 전환을 나타냈다. 반응물을 추가의 2시간 동안 교반하고, 농축하고, 생성된 잔류물을 DME (5 mL) 및 포화 수성 Na2CO3 용액 (5 mL) 사이에 분배하였다. 2상 반응 혼합물을 1시간 동안 60℃로 가열하였다. LCMS는 목적 술폰아미드로의 완전한 전환을 나타내었다. 반응물을 실온으로 냉각되도록 하고, 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 유기부를 합하고, 물, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 농축하였다. 생성된 잔류물을 실리카 겔 상에 흡착시키고, EtOAc-헵탄 (0-100%) 용리 구배를 사용하여 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고 농축하여 N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-5-플루오로페닐)메탄술폰아미드 (59 mg, 0.12 mmol, 57% 수율)를 밝은 갈색 결정질 고체로서 수득하였다:
Figure pat00148
DCM (1.2 mL) 중 N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-5-플루오로페닐)메탄술폰아미드 (58 mg, 0.12 mmol)의 용액을 질소 분위기 하에 60% mCPBA (71 mg, 0.25 mmol)로 처리하였다. 생성된 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. LCMS는 완전한 전환을 나타내었고, 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 상을 합하고, 물, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하여 N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-5-플루오로페닐)-메탄술폰아미드 (65 mg, 0.129 mmol)를 점성 황색 잔류물로서 수득하였고, 이것을 추가의 정제 없이 다음 단계로 전달하였다:
Figure pat00149
NMP (1 ml) 중 N-(2-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-5-플루오로페닐)메탄-술폰아미드 (32 mg, 0.064 mmol) 및 (S)-tert-부틸 1-아미노프로판-2-일카르바메이트 (X, 111 mg, 0.64 mmol)의 용액을 마이크로웨이브 반응기에서 10분 동안 120℃에서 조사하였다. LCMS는 완전한 전환을 나타내었고, 반응물을 NH4Cl의 포화 수성 용액으로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기부를 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하여 (S)-tert-부틸-1-(4-(4-(2-클로로-5-플루오로-3-(메틸술폰아미도)페닐)-2-시클로프로필티아졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)프로판-2-일카르바메이트 (43 mg, 0.065 mmol)를 황색 오일로서 수득하였고, 이것을 추가의 정제 없이 다음 단계로 전달하였다:
Figure pat00150
(S)-tert-부틸-1-(4-(4-(2-클로로-5-플루오로-3-(메틸술폰아미도)페닐)-2-시클로프로필티아졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)-프로판-2-일카르바메이트 (43 mg, 0.072 mmol)를 10분 동안 실온에서 DCM 중 TFA (50% v/v, 1 mL)의 용액으로 처리하였다. 이어서, 반응 혼합물을 농축하고, 생성된 잔류물을 THF (2 mL) 및 NaHCO3의 포화 수성 용액 (2 mL) 중에 용해시켜 2상 혼합물을 형성하였다. 메틸 클로로포르메이트 (0.028 mL, 0.360 mmol)를 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 빠르게 교반하였다. LCMS는 완전한 전환을 나타내었고, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 상을 합하고, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 황색 잔류물로 농축하였고, 이것을 정제용 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 동결건조시켜 (S)-메틸 1-(4-(4-(2-클로로-5-플루오로-3-(메틸술폰아미도)페닐)-2-시클로프로필티아졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)프로판-2-일카르바메이트 (12 mg, 0.018 mmol)를 TFA 염으로서 수득하였다:
Figure pat00151
실시예 4
(S)-메틸 1-(4-(4-(5-클로로-2-플루오로-3-(메틸술폰아미도)페닐)-2-시클로프로필티아졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)프로판-2-일카르바메이트의 제조
Figure pat00152
DCM (5 mL) 중 5-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로아닐린 (XXX, 113 mg, 0.29 mmol) 및 무수 피리딘 (0.23 mL, 2.86 mmol)의 용액을 메탄술포닐 클로라이드 (0.18 mL, 2.29 mmol)로 처리하고, 생성된 반응 혼합물을 21시간 동안 실온에서 교반하였다. LCMS는 술폰아미드 및 소량의 술폰이미드로의 완전한 전환을 나타내었다. 반응물을 물 (100 uL)로 켄칭하고 농축하였다. 생성된 조 잔류물을 DME (15 mL) 및 포화 수성 Na2CO3 용액 (5 mL) 중에 현탁시키고, 생성된 혼합물을 격렬하게 교반하면서 2시간 동안 60℃에서 가열하였다. LCMS는 술폰아미드로의 완전한 전환을 나타내었다. 반응물을 실온으로 냉각되도록 하고, 생성된 분배된 층을 분리하였다. 유기 층을 수집하고, 남아있는 현탁액을 여과하고, 수집된 고체를 MeOH (2 x 10 mL)로 세척하였다. 여과물을 DME 층과 합하고 농축하였다. 생성된 잔류물을 EtOAc (30 mL) 및 0.1 N 인산나트륨 완충제 (pH 7.0, 30 mL) 사이에 분배하고, 층을 분리하였다. 유기 부분을 염수 (30 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하여 N-(5-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로페닐)메탄술폰아미드 (134 mg)를 황색 잔류물로서 수득하였고, 이것을 추가의 정제 없이 사용하였다:
Figure pat00153
DCM (10 mL) 중 N-(5-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로페닐)메탄술폰아미드 (134 mg, 0.28 mmol)의 용액을 15분 동안 실온에서 70% mCPBA (70 mg, 0.28 mmol)로 처리하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0.1 N 인산나트륨 완충제 (pH 7, 4 x 20 ml), 염수 (10 ml)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하여 N-(5-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술피닐)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로페닐)메탄술폰아미드 (120 mg)를 황색 잔류물로서 수득하였고, 이것을 추가의 정제 없이 사용하였다:
Figure pat00154
NMP (1 mL) 중 N-(5-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-플루오로페닐)메탄술폰아미드 (50 mg, 0.103 mmol) 및 (S)-tert-부틸 1-아미노프로판-2-일카르바메이트 (X, 39 mg, 0.22 mmol)의 용액을 2시간 동안 100℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (3 ml)로 희석하고, 0.1 N 인산나트륨 완충제 (pH 7, 3 X 3 mL)로 세척하였다. EtOAc 추출물을 합하고, 염수 (3 ml)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하여 (S)-tert-부틸 1-(4-(4-(5-클로로-2-플루오로-3-(메틸술폰아미도)페닐)-2-시클로프로필티아졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)프로판-2-일카르바메이트 (65 mg)를 황색 발포체로서 수득하였고, 이것을 추가의 정제 없이 전달하였다:
Figure pat00155
MeOH (1 mL) 중 (S)-tert-부틸 1-(4-(4-(5-클로로-2-플루오로-3-(메틸술폰아미도)페닐)-2-시클로프로필티아졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)프로판-2-일카르바메이트 (65 mg, 0.103 mmol)의 용액을 진한 HCl (100 uL)로 3시간 동안 실온에서, 이어서 1시간 동안 60℃에서 처리하고, 마지막으로 실온으로 냉각되도록 하고, 농축 건조시켰다. 생성된 갈색 잔류물을 THF (3 mL) 및 포화 수성 NaHCO3 용액 (3 mL) 사이에 분배하였다. 2상 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하면서 메틸 클로로포르메이트 (8 uL, 0.10 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (3 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수 (2 X 3 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하였다. 생성된 조 잔류물을 역상 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 합하고, 동결건조시켜 (S)-메틸 1-(4-(4-(5-클로로-2-플루오로-3-(메틸술폰아미도)페닐)-2-시클로프로필티아졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)프로판-2-일카르바메이트 (23 mg)를 TFA 염으로서 수득하였다:
Figure pat00156
실시예 5
(S)-메틸 1-(4-(4-(5-클로로-2-플루오로-3-(메틸술폰아미도)페닐)-2-시클로프로필옥사졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)프로판-2-일카르바메이트의 제조
Figure pat00157
DCM (5 mL) 중 5-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-2-플루오로아닐린 (XXXVI, 153 mg, 0.41 mmol) 및 무수 피리딘 (0.33 mL, 4.07 mmol)의 용액을 메탄술포닐 클로라이드 (0.25 mL, 3.25 mmol)로 처리하고, 생성된 반응물을 밤새 실온에서 교반하였다. LCMS는 술폰아미드 및 소량의 술폰이미드로의 완전한 전환을 나타내었다. 반응물을 물 (100 uL)로 켄칭하고 농축하였다. 조 잔류물을 DME (15 mL) 및 포화 수성 Na2CO3 용액 (5 mL) 사이에 분배하고, 2시간 동안 60℃에서 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각되도록 하고, 생성된 분배된 층을 분리하였다. 유기 층을 수집하고, 남아있는 현탁액을 여과하고, 수집된 고체를 MeOH (2 X 10 mL)로 세척하였다. 여과물을 DME 층과 합하고, 농축하였다. 생성된 잔류물을 EtOAc (30 mL) 및 0.1 N 인산나트륨 완충제 (pH 7.0, 30 mL) 사이에 분배하였다. EtOAc 추출물을 염수 (30 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하여 N-(5-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-2-플루오로페닐)메탄-술폰아미드 (166 mg)를 황색 잔류물로서 수득하였고, 이것을 추가의 정제 없이 사용하였다:
Figure pat00158
DCM (25 mL) 중 N-(5-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-2-플루오로페닐)메탄-술폰아미드 (166 mg, 0.37 mmol)의 용액을 10분 동안 실온에서 70% mCPBA (90 mg, 0.37 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 조 잔류물을 EtOAc (30 mL) 및 0.1 N 인산나트륨 완충제 (pH 7, 30 mL) 사이에 분배하였다. 층을 분리하고, 유기 부분을 0.1 N 수성 인산나트륨 완충제 (pH 7.0, 2 X 30 mL), 염수 (30 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하여 N-(5-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술피닐)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-2-플루오로페닐)메탄술폰아미드 (160 mg, 93% 수율)를 황색 잔류물로서 수득하였고, 이것을 추가의 정제 없이 사용하였다:
Figure pat00159
NMP (1 mL) 중 N-(5-클로로-3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술피닐)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-2-플루오로페닐)메탄술폰아미드 (50 mg, 0.106 mmol) 및 (S)-tert-부틸 1-아미노프로판-2-일카르바메이트 (X, 41 mg, 0.234 mmol)의 용액을 2시간 동안 100℃에서 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각되도록 하고, EtOAc (3 mL)으로 희석하고, 0.1 N 수성 인산나트륨 완충제 (pH 7, 3 X 3 mL), 염수 (3 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하여 (S)-tert-부틸 1-(4-(4-(5-클로로-2-플루오로-3-(메틸술폰아미도)페닐)-2-시클로프로필옥사졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)프로판-2-일카르바메이트 (63 mg)를 황색 발포체로서 수득하였고, 이것을 추가의 정제 없이 전달하였다:
Figure pat00160
MeOH (1 mL) 중 (S)-tert-부틸 1-(4-(4-(5-클로로-2-플루오로-3-(메틸술폰아미도)페닐)-2-시클로프로필옥사졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)프로판-2-일카르바메이트 (63 mg, 0.11 mmol)의 용액을 진한 HCl (100 uL)로 3시간 동안 실온에서, 이어서 1시간 동안 60℃에서 처리하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 THF (3 mL) 및 포화 수성 NaHCO3 용액 (3 mL) 사이에 분배하였다. 2상 반응 혼합물을 격렬하게 교반하면서 실온에서 10분 동안 메틸 클로로포르메이트 (8 uL, 0.11 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (3 ml)로 추출하고, 유기 층을 염수 (2 X 3 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축하였다. 생성된 잔류물을 정제용 역상 HPLC에 의해 정제하고, 순수한 분획을 합하고 동결건조시켜 (S)-메틸 1-(4-(4-(5-클로로-2-플루오로-3-(메틸술폰아미도)페닐)-2-시클로프로필옥사졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)프로판-2-일카르바메이트 (27 mg)를 TFA 염으로서 수득하였다:
Figure pat00161
실시예 6
N-(3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸아미노)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-2-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드의 제조
Figure pat00162
N-(3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸술포닐)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-2-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드 (XXXVII, 20 mg, 0.042 mmol) 및 메틸아민 (40% 수성, 130 μL, 4.2 mmol)의 용액을 4시간 동안 90℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 생성된 잔류물을 DMSO 중에 용해시키고, 역상 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 생성물을 함유하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 N-(3-(2-시클로프로필-5-(2-(메틸아미노)피리미딘-4-일)옥사졸-4-일)-2-플루오로페닐)프로판-1-술폰아미드 (5 mg)를 TFA 염으로서 수득하였다:
Figure pat00163
실시예 7
(S)-메틸 1-(4-(2-tert-부틸-4-(2-클로로-3-(프로필술폰아미도)페닐)티아졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)프로판-2-일카르바메이트의 제조
Figure pat00164
N-(3-(2-tert-부틸-5-(2-클로로피리미딘-4-일)티아졸-4-일)-2-클로로페닐)프로판-1-술폰아미드 (XXVI, 30 mg, 0.062 mmol), DIEA (0.017 mL, 0.096 mmol), Na2CO3 (13 mg, 0.12 mmol) 및 (S)-tert-부틸 1-아미노프로판-2-일카르바메이트 (X, 11 mg, 0.062 mmol)를 NMP (1 mL) 중에 혼합하였다. 반응 혼합물을 3 일 동안 90℃에서 가열하고, 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하였다. 물을 1N HCl로 pH 5로 조정하고, EtOAc로 추출하였다. EtOAc 층을 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 조 (S)-tert-부틸 1-(4-(2-tert-부틸-4-(2-클로로-3-(프로필술폰아미도)페닐)티아졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)프로판-2-일카르바메이트
Figure pat00165
를 황색 오일로서 수득하였고, 이것을 추가의 정제 없이 전달하였다.
(S)-tert-부틸 1-(4-(2-tert-부틸-4-(2-클로로-3-(프로필술폰아미도)페닐)티아졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)프로판-2-일카르바메이트를 HCl (디옥산 중 4M, 2 mL) 중에 용해시키고, 1시간 동안 실온으로 교반되도록 하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축하여 (S)-N-(3-(5-(2-(2-아미노프로필아미노)피리미딘-4-일)-2-tert-부틸티아졸-4-일)-2-클로로페닐)프로판-1-술폰아미드를 황색 고체로서 수득하였다
Figure pat00166
이 물질을 THF (1.0 mL) 및 포화 수성 NaHCO3 (1.0 mL) 중에 용해시키고, 혼합물을 빙조에서 냉각시키고, 메틸 클로로포르메이트 (5 μL, 0.062 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온되도록 하고, 밤새 교반하였다. 혼합물을 EtOAc로 추출하고, 수성 층을 1M HCl로 pH 5가 되게 하고, EtOAc로 2회 더 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 물, 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 농축하였다. 생성된 잔류물을 역상 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 생성물을 함유하는 분획을 합하고 동결건조시켜 목적하는 (S)-메틸 1-(4-(2-tert-부틸-4-(2-클로로-3-(프로필술폰아미도)페닐)티아졸-5-일)피리미딘-2-일아미노)프로판-2-일카르바메이트 (6 mg)를 TFA 염으로서 수득하였다:
Figure pat00167
하기 표 I (실시예 8-67)은 적절한 출발 물질을 사용하여 상기 실시예 1-7에 기재된 절차에 의해 제조된 화합물을 제공한다.
<표 I>
Figure pat00168
Figure pat00169
Figure pat00170
Figure pat00171
Figure pat00172
Figure pat00173
Figure pat00174
Figure pat00175
Figure pat00176
Figure pat00177
Figure pat00178
표 II에 열거된 화합물은 적절한 출발 물질을 사용하여 상기 기재된 절차에 의해 제조될 수 있다.
<표 II>
Figure pat00179
Figure pat00180
Figure pat00181
약리학적 데이터
본 발명의 화합물에 대한 유용성은 하기 검정 중 하나 이상에서 관찰된 데이터에 의해 지지된다.
Raf/Mek 증폭된 발광 근접 동질 검정
(알파 스크린(Alpha Screen))
완충제
검정 완충제: 50 mM 트리스(Tris) (pH 7.5), 15 mM MgCl2, 0.01% 소 혈청 알부민 (BSA), 1 mM 디티오트레이톨 (DTT)
정지 완충제: 60 mM 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA), 0.01% 트윈® 20
비드 완충제: 50 mM 트리스 (pH 7.5), 0.01% 트윈® 20
물질
b-Raf(V600E) (활성)
비오티닐화 Mek (키나제 무효화)
알파 스크린 검출 키트 (퍼킨엘머(PerkinElmer)™로부터 입수가능함, #6760617R)
항 포스포-MEK1/2 (셀 시그널링 테크놀로지, 인크.(Cell Signaling Technology, Inc.)로부터 입수가능함, #9121)
384웰 검정 플레이트 (그라이너(Greiner)® 백색 플레이트, #781207)
검정 조건
b-Raf(V600E) 대략 4 pM
c-Raf 대략 4 nM
비오티닐화 Mek (키나제 무효화) 대략 10 nM
ATP 10 μM
화합물과의 예비-인큐베이션 시간: 실온에서 60분
반응 시간: 실온에서 1 또는 3시간
검정 프로토콜
Raf 및 비오티닐화 Mek (키나제 무효화)를 2X 최종 농도로 검정 완충제 (50 mM 트리스 (pH 7.5), 15 mM MgCl2, 0.01% BSA 및 1 mM DTT) 중에 합하고, 100% DMSO 중에 희석된 40X의 raf 키나제 억제제 시험 화합물 0.5 μl를 함유하는 검정 플레이트 (그라이너 백색 384 웰 검정 플레이트 #781207)에 웰당 10 μl를 분배하였다. 상기 플레이트를 60분 동안 실온에서 인큐베이션하였다.
검정 완충제 중에 희석된 2X ATP를 웰 당 10 μL로 첨가함으로써 Raf 키나제 활성 반응을 개시하였다. 3시간 (bRaf(V600E)) 또는 1시간 (c-Raf) 후에, 10 μL의 정지 시약 (60 mM EDTA)을 첨가하여 반응을 정지시켰다. 토끼 항-p-MEK (셀 시그널링, #9121) 항체 및 알파 스크린 IgG (프로테인A(ProteinA)) 검출 키트 (퍼킨엘머 #6760617R)를 사용하여, 비드 완충제 (50 mM 트리스 (pH 7.5), 0.01% 트윈20) 중 항체 (1:2000 희석) 및 검출 비드 (두 비드 모두의 1:2000 희석)의 혼합물 30 μL를 웰에 첨가함으로써 인산화된 생성물을 측정하였다. 검출 비드를 빛으로부터 보호하기 위해, 암실 조건 하에 첨가를 수행하였다. 플레이트의 상부에 덮개를 덮고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한 다음, 퍼킨엘머 엔비전(Envision) 기기 상에서 발광을 판독하였다. 50% 억제를 위한 각각의 화합물의 농도 (IC50)를 XL 피트(XL Fit) 데이터 분석 소프트웨어를 이용하여 비-선형 회귀에 의해 계산하였다.
Raf/Mek 증폭된 발광 근접 동질 검정에서의 본 발명의 대표적인 화합물에 대한 돌연변이체 b-Raf(V600E) IC50 데이터를 하기 표 III에 나타내었다:
<표 III>
Figure pat00182
Figure pat00183
Figure pat00184
Figure pat00185
Figure pat00186
Figure pat00187
Figure pat00188
Figure pat00189
Figure pat00190
Figure pat00191
Figure pat00192
Figure pat00193
본원에 기재된 실시예 및 실시양태는 단지 예시적 목적을 위한 것이고, 이를 고려한 다양한 변형 또는 변화가 당업자에게 제안될 것이고, 본원의 취지 및 범위, 및 첨부된 특허청구범위의 범주 내에 포함되어야 한다는 것을 이해한다. 본원에 인용된 모든 문헌, 특허 및 특허 출원은 모든 목적을 위해 참조로 포함된다.

Claims (1)

  1. 하기 화학식 I의 화합물의 단백질 키나제 억제 용도.
    <화학식 I>
    Figure pat00194
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