KR20120046719A

KR20120046719A - 콜라겐 생산 저하 억제제, 이를 포함하는 피부외용 조성물 및 화장료

Info

Publication number: KR20120046719A
Application number: KR1020127001657A
Authority: KR
Inventors: 와코토 부카와; 타쿠미 와타나베
Original assignee: 콤비 가부시키가이샤
Priority date: 2009-06-23
Filing date: 2010-06-21
Publication date: 2012-05-10
Also published as: HK1245112A1; WO2010150738A1; JP5815203B2; TW201105356A; TWI527595B; JP2011006332A; CN102802603A; CN107334718A

Abstract

본 발명에 의한 콜라겐 생산 저하 억제제는, 연와의 효소 분해물을 유효 성분으로 하는, 진피 섬유아세포에서의 자외선 조사에 의한 콜라겐 생산 저하의 억제제이다. 본 발명에 따르면, 효율적으로 생산할 수 있으며, 안정성이 높고, 진피 섬유아세포에 있어서의 콜라겐 생산 저하가 우수한 억제제, 및 이를 포함하는 외용제 및 화장료가 제공된다.

Description

콜라겐 생산 저하 억제제, 이를 포함하는 피부외용 조성물 및 화장료 {AGENT FOR PREVENTING REDUCTION IN PRODUCTION OF COLLAGEN, AND EXTERNAL COMPOSITION FOR SKIN AND COSMETIC EACH COMPRISING SAME}

본원은 선행하는 일본 특허 출원인 일본 특허 출원 2009-148772호(출원일: 2009년 6월 23일)에 기초하는 것으로서, 그 우선권의 이익을 주장하는 것으로, 그의 개시 내용 전체는 참조로써 여기에 도입된다.

본 발명은 연와(燕窩)의 효소 분해물을 유효 성분으로 하는 진피 섬유아세포에서의 콜라겐 생산 저하의 억제제에 관한 것이다. 상세하게는 본 발명은 자외선 조사에 의해 피부 진피 섬유아세포에서 발생하는 I형 콜라겐 생산 저하를 억제하는, 콜라겐 생산 저하 억제제에 관한 것이다. 또한 본 발명은 그의 유효 성분인 연와의 효소 분해물을 포함하는, 피부외용 조성물 및 화장료에 관한 것이다.

피부 거칠음이나 주름, 피부의 처짐, 탄력 저하 등의 피부 트러블은, 특히 여성에게 있어서 중대한 관심사이다. 이들 피부 트러블은, 통상 환경적인 요인이나, 노화와 같은 가령(加齡)에 따른 요인, 또한 스트레스 등의 심리적 요인 등에 의해 야기된다고 생각되고 있다. 특히, 최근 자외선의 증대나, 에어컨의 다용 등에 따른 생활환경의 건조화 등에 의한 피부에 악영향을 미치는 환경적 요인이 증대되고 있다.

피부 조직은 표피, 진피, 피하조직으로 이루어진다. 진피에는, 콜라겐이나 히알루론산이 많이 포함되며, 피부의 보수성이나 탄력성에 크게 관여하고 있다. 콜라겐이나 히알루론산은, 진피 중에 존재하는 진피 섬유아세포를 생산하는 것이 알려져 있다.

콜라겐은 인간의 생체 내에 존재하는 단백질 중 약 30 ％를 차지하며, 그의 70 ％가 진피에 존재한다고 알려져 있다. 진피에 존재하는 콜라겐으로는, I형 콜라겐이나 III형 콜라겐이 포함되지만, 주요한 것은 I형 콜라겐이다.

종래, 피부의 탄력이나 윤기의 향상, 주름 예방 개선을 목적으로, 콜라겐을 배합한 화장료를 외용으로 사용하여, 피부에 콜라겐을 직접 보충하는 방법이 다용되어 왔다. 그러나, 외용으로 콜라겐을 보충한 경우, 피부 진피에서의 콜라겐량을 증가시키는 것은 곤란하기 때문에, 피부의 탄력이나 윤기의 향상, 주름 예방 개선을 위해서는, 반드시 충분하다고는 할 수 없었다.

피부가 자외선을 포함하는 광에 노출되면, 진피의 세포밖 매트릭스의 대부분을 차지하는 콜라겐이 현저히 감소하여, 그의 섬유 다발의 혼란이 발생하는 것이 알려져 있다. 이 때문에, 진피의 콜라겐량을 증가시키는 것은, 주름의 개선이나 예방 등에 유용하다고 되어 있다(비문헌 1("기능성 화장품 소재의 개발을 위한 실험법"(이모까와 겐지 감수), 2007년 발행, CMC 출판, 제45 내지 47페이지)). 또한 여기에는, 중파 자외선(UVB)의 조사에 의해서, 진피 섬유아세포의 콜라겐 합성이 크게 저하되는 것이 나타나 있다. 여기에는, I형 콜라겐 합성 촉진제의 예로서, 비타민 C 유도체, 유장(milk serum) 성분 등이 예시되어 있다.

한편, 문헌[Akiko Kojima-Yuasa, et al., Fragrance Journal, April, 2009, No.346 (Vol.37, No.4), pp.103-]에는, 콜라겐 생산능의 저하를 억제하는 것은 QOL의 향상 개선에 유용하고, 피부에서의 콜라겐량의 저하는, 주름이나 처짐 등의 원인이 된다는 것이 나타나 있다.

이 때문에, 자외선 조사를 받은 진피 섬유아세포의 콜라겐 합성의 저하 현상을 억제 또는 개선하는 것은, 자외선에 노출된 피부에 발생할 수 있는 콜라겐 저하에 따른, 피부의 탄력이나 윤기의 저하를 예방 또는 개선하고, 또한 주름 예방 또는 개선 측면에서 중요하다고 할 수 있다.

그러나, 종래 진피 섬유아세포가 만드는 I형 콜라겐의 생산을 촉진시키고자 하는 시도는 많이 이루어지고 있지만(예를 들면, 일본 특허 공개 제2008-105984호 공보나, WO 2004/085429), 자외선 조사를 받은 진피 섬유아세포의 콜라겐 합성의 저하 현상 자체를 직접 억제 또는 개선을 도모함으로써, 진피에서의 콜라겐의 현상을 억제하는 것에 대해서는, 본 발명자들이 알고 있는 한, 검토는 거의 진행되고 있지 않다.

연와는, 금사연(金絲燕)이 자신의 타액을 실의 형태로 하여 만드는 둥지로, 그의 성분으로는, 당단백질을 많이 포함하며, 지질은 거의 포함되지 않는 것으로 알려져 있다. 연와는 종래 중화요리에서의 식용 소재나, 한방약의 원료 등에 사용되고 있다. 최근에는, 연와를 원료로 이용한 건강 식품 등도 개발되고 있지만, 외용제나 화장료와 같은 외용 용도에의 적용예는 아직 미미하게 알려져 있다.

일본 특허 공개 제2003-95961호 공보에는, 연와의 효소 분해물을 이용한 경구용 피부 미용 촉진제가 개시되어 있다. 그러나, 여기에는 경구 용도만이 개시되어 있는 것에 불과하고, 외용 용도에의 이용 가능성에 대해서는 아무런 기재도 시사도 되어 있지 않다. 또한 여기서의 효과는, 피부의 촉촉함의 향상이나, 결이 섬세한 피부를 얻는 것이며, 피부의 탄력이나 윤기의 향상이나, 주름 개선을 수반하는 I형 콜라겐의 생산 촉진능에 대해서는, 하등 기재되어 있지 않으며, 자외선 조사를 받은 진피 섬유아세포의 콜라겐 합성의 저하를 억제할 수 있는 것에 대해서도 기재도 시사도 되어 있지 않다.

WO 99/022709에는, 연와의 함수 용제 추출물, 특히 열수 추출물을 포함하는 화장료가 개시되어 있다. 이 화장료는 스킨케어 용도로 사용할 수 있어, 외용 용도로 사용하는 것이다. 또한 여기에는 연와의 함수 추출물이, 피부 세포에서의 콜라겐 합성 촉진 효과를 나타내는 것도 개시되어 있다. 그러나, 여기서 사용되는 추출물은, 연와를 열수 추출하여 고형분을 제거한 것으로, 연와 전체를 효소 처리하여 그대로 사용하는 연와 효소 분해물과는 명백히 다른 것이다. 또한 여기에는, 자외선 조사를 받은 진피 섬유아세포의 콜라겐 합성의 저하를 억제할 수 있는 것에 대해서는 기재도 시사도 되어 있지 않다.

본 발명자들은 금번, 연와의 효소 분해물이 자외선 조사를 받은 피부 진피 섬유아세포에서 볼 수 있는 I형 콜라겐 합성 저하 현상을 효과적으로 억제하는 효과가 있는 것을 예상밖으로 발견하였다. 본 발명은 이러한 지견에 기초하는 것이다.

또한 본 발명자들은, 동시에 연와의 효소 분해물이 피부 진피 섬유아세포에서의 I형 콜라겐의 우수한 생산 촉진 효과를 갖는 것도 발견하였다.

따라서 본 발명은 효율적으로 생산할 수 있으며, 안정성이 높고, 진피 섬유아세포에서의 콜라겐 생산 저하가 우수한 억제제, 및 이를 포함하는 외용제 및 화장료의 제공을 그의 목적으로 한다.

본 발명에 의한 콜라겐 생산 저하 억제제는, 연와의 효소 분해물을 유효 성분으로 하는, 진피 섬유아세포에서의 자외선 조사에 의한 콜라겐 생산 저하의 억제제이다.

본 발명의 하나의 바람직한 양태에 따르면, 상기 효소 분해물은 프로테아제에 의한 분해물이다.

본 발명의 하나의 보다 바람직한 양태에 따르면, 상기 효소 분해물의 분자량은 70 내지 200,000이다.

본 발명의 하나의 더욱 바람직한 양태에 따르면, 상기 효소 분해물의 평균 분자량은 1,000 내지 50,000이다.

본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 본 발명에 의한 콜라겐 생산 저하 억제제는, 자외선 조사에 의해 피부 진피 섬유아세포에서 발생하는 I형 콜라겐 생산 저하를 억제하기 위한 것이다.

본 발명의 별도의 양태에 따르면, 본 발명에 의한 콜라겐 생산 저하 억제제를 포함하여 이루어지는, 피부외용 조성물이 제공된다. 바람직하게는 이 조성물은, 자외선 조사를 받기 전 또는 후의 스킨 케어에 이용되며, 보다 바람직하게는, 자외선 조사를 받은 피부에서 발생하는, 피부의 탄력 및 윤기 저하의 예방 또는 개선, 및 주름 예방 또는 개선에 이용된다.

본 발명의 별도의 보다 바람직한 양태에 따르면, 본 발명에 의한 피부외용 조성물은 화장료이다.

본 발명의 별도의 양태에 따르면, 인간을 포함한 포유동물의 진피 섬유아세포에서의 자외선 조사에 의한 콜라겐 생산 저하의 억제제를 제조하기 위한, 연와의 효소 분해물의 사용이 제공된다. 본 발명의 별도의 하나의 양태에 따르면, 자외선 조사를 받기 전 또는 후의 스킨케어용 피부외용 조성물을 제조하기 위한, 연와의 효소 분해물의 사용이 제공된다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명의 유효 성분인 효소 분해물의 유효량을, 인간을 포함한 포유동물의 피부에 적용하는 것을 포함하여 이루어지는, 진피 섬유아세포에서의 자외선 조사에 의한 콜라겐의 생산 저하를 억제하는 방법이 제공된다. 본 발명의 또 다른 하나의 양태에 따르면, 본 발명의 유효 성분의 유효량을, 인간을 포함한 포유동물의, 자외선 조사를 받기 전 또는 후의 피부에 적용하는 것을 포함하여 이루어지는 스킨케어 방법이 제공된다. 마찬가지로, 본 발명의 유효 성분의 유효량을, 인간을 포함한 포유동물의 피부에 적용하는 것을 포함하여 이루어지는, 자외선 조사를 받은 피부에서 발생하는, 피부의 탄력과 윤기 저하를 개선하고, 주름을 예방 또는 개선하는 방법도 제공된다.

본 발명에 따르면, 연와의 효소 분해물을 유효 성분으로서 사용함으로써, 인간 피부 진피 섬유아세포에서 발생할 수 있는 콜라겐의 생산 저하를, 효과적으로 억제하여 개선할 수 있다. 특히 자외선 조사를 받은 피부 진피 섬유아세포에서 볼 수 있는 I형 콜라겐 생산 저하 현상에 대하여 효과적인 억제 또는 개선 효과를 얻을 수 있다. 또한 이 진피 섬유아세포에서의 콜라겐 생산 저하의 억제 효과에 기초하여, 효소 분해물을 피부외용 용도 또는 화장료 용도에 사용함으로써, 섬유아세포의 콜라겐 생산 저하에 따른 피부의 탄력(탄력성)이나 피부의 윤기 저하를 개선하고, 또한 주름을 예방 또는 개선할 수 있다.

특히 이들 효과는, 햇볕에 그을린 후의 피부에서 콜라겐 합성이 저하된 듯한 상태의 피부에서 유효하다. 이와 같이 하여 본 발명에 따르면, 소비자의 QOL의 향상을 도모할 수 있다. 또한, 사용되는 효소 분해물은, 식용 소재로서도 주지인 연와를 사용하기 때문에, 안전성이 높고, 소비자에게도 받아들여지기 쉬운 것이다. 또한 효소 분해물은, 연와를 그대로 효소 처리하여 얻을 수 있기 때문에, 효율적으로 제조할 수 있으며, 제조 비용도 낮게 억제할 수 있다.

[도 1] 연와 샘플 중 시알산량의 측정 결과를 나타내는 그래프이다.
[도 2] 연와 샘플 중 단백질량의 측정 결과를 나타내는 그래프이다.
[도 3] GPC-HPLC에 의한 연와 효소 분해물 1의 측정 결과를 나타내는 그래프이다.
[도 4] GPC-HPLC에 의한 연와 효소 분해물 2의 측정 결과를 나타내는 그래프이다.
[도 5] 콜라겐의 생산 촉진능의 측정 결과를 나타내는 그래프이다.

유효 성분

본 발명에 의한 콜라겐 생산 저하 억제제는, 상기한 바와 같이 연와의 효소 분해물을 유효 성분으로 한다.

효소 분해물의 원료인 연와는, 금사연이 자신의 타액을 실의 형상으로 만든 둥지로, 그의 성분으로는 당단백질을 많이 포함하며, 지질은 거의 포함되어 있지 않다. 여기서 금사연이란, 칼새과(Apodidae)의 금사연속(Collocalia)에 속하는 제비류를 말하며, 예를 들면 아포디대 콜로칼리아 프란시카(Apodidae Collocalia francica), 아포디대 콜로칼리아 살란가나(Apodidae Collocalia salangana), 아포디대 콜로칼리아 푸시파가(Apodidae Collocalia fuciphaga), 아포디대 콜로칼리아 이넥스펙타타(Apodidae Collocalia inexpectata), 아포디대 콜로칼리아 베스티타(Apodidae Collocalia vestita), 아포디대 콜로칼리아 에스큘렌타(Apodidae Collocalia esculenta), 아포디대 콜로칼리아 맥시무스(Apodidae Collocalia maximus) 등을 들 수 있다.

본 발명에서 연와는 시판품을 사용할 수 있다. 일반적으로 시판되고 있는 연와에는, 털이나 똥 등의 오염을 제거하고 세정한 것부터, 연와의 찌꺼기를 모아 표백과 세정을 반복하여 성형한 것까지 다양한 종류가 있지만, 본 발명에서 이용하는 연와는, 전처리에 있어서 과도한 세정이나 표백 등이 행해지지 않은 연와를 이용하는 것이 바람직하다.

연와의 효소 분해물이란, 연와를 효소 반응을 적용하여 분해해서 얻어진 것을 의미하며, 연와 또는 그의 처리물을, 프로테아제나 프로테아제를 포함하는 복합 효소 등을 이용하여 분해시킴으로써 얻을 수 있다. 여기서 분해 처리에 사용하는 효소로는, 바람직하게는 프로테아제이고, 보다 바람직하게는 판크레아틴이다.

연와의 효소 분해물은, 통상 우선 가열 살균 처리를 실시한 후, 수중에서 효소 처리에 가함으로써 행할 수 있다. 살균 처리의 조건은, 관용의 가열 살균 조건을 적절하게 참고하여 설정할 수 있으며, 효소 처리의 조건도 사용하는 효소의 종류나, 연와의 상태에 따라 적절하게 설정할 수 있다.

보다 구체적인 예를 들면, 연와의 효소 분해물은, 이하와 같이 하여 제조할 수 있다.

예를 들면, 분쇄한 연와에, 그 질량의 10 내지 50배의 물을 가하여 팽윤시킨 후, 60 내지 130 ℃에서 5 초 내지 30 분간 가열 살균 처리한다. 그 후, 적량의 효소를 그대로 첨가하여, 효소의 최적 pH, 최적 온도에서 0.5 내지 48 시간 동안 효소 반응을 행한다. 효소 반응 종료 후, 가열 처리 등에 의해 효소를 실활시키고, 반응액을 여과하여 불용물을 제거함으로써, 연와의 효소 분해물을 얻을 수 있다. 또한, 이 효소 분해물은, 필요에 따라 건조하여 분말화할 수도 있다. 또한, 상기한 각 공정에서는, 적절하게 pH 조정, 탈색, 탈취 등의 조작을 행할 수도 있다.

별도의 예로서, 연와의 처리물을 효소 분해하는 경우에는, 입경 2 mm 이하, 바람직하게는 150 ㎛ 이하로 분쇄한 연와에, 그 질량의 10 내지 100배의 물을 가하여, 1 내지 60 ℃, 0.5 내지 48 시간 동안 정치 또는 교반하여 팽윤시킨 후, 60 내지 130 ℃, 5 초 내지 30 분간 가열 살균 처리하고, 필요에 따라 여과하여, 얻어진 용액을 상기와 마찬가지로 하여 효소 처리에 가함으로써, 연와의 효소 분해물을 얻을 수 있다.

효소 분해물의 제조법에 있어서, 효소 반응의 시간이 길수록, 단백질의 분해가 진행되어, 보다 저분자의 단백질을 포함하는 효소 분해물이 얻어지게 된다. 본 발명에서는 효소 반응 시간을 0.5 내지 48 시간, 바람직하게는 3 내지 36 시간, 보다 바람직하게는 약 24 시간 정도로 하여, 효소 반응을 보다 진행시킨 효소 분해물이 바람직하다.

이와 같이 하여 얻어지는 연와의 효소 분해물의 분자량은 70 내지 200,000이 바람직하고, 70 내지 180,000이 보다 바람직하다. 더욱 바람직하게는, 분자량은 70 내지 150,000이고, 더욱더 바람직하게는 70 내지 120,000이다.

또한 연와의 효소 분해물의 평균 분자량(중량 평균 분자량)은, 300 내지 100,000이 바람직하고, 500 내지 70,000이 보다 바람직하다. 더욱 바람직하게는, 평균 분자량은 700 내지 60,000이고, 더욱더 바람직하게는 1,000 내지 50,000이다.

또한, 연와 효소 분해물에 대해서는 필요에 따라, 여기서의 조작 조건을 적절하게 변경하거나, 관용의 정제 또는 분획 방법을 적용하거나 함으로써, 추가로 상기 평균 분자량의 하한값을, 바람직하게는 5,000 이상, 보다 바람직하게는 10,000 이상, 더욱 바람직하게는 15,000 이상, 더욱더 바람직하게는 20,000 이상으로 할 수 있다.

피부외용 조성물

본 발명에 의한 콜라겐 생산 저하 억제제는, 단독으로 그대로도 사용할 수 있지만, 화장료, 의약품, 의약 부외품 등의 다양한 피부외용 조성물에 첨가제로서 함유시킬 수 있어, 진피 섬유아세포의 콜라겐 생산 저하를 억제하는 효과를 갖는 조성물을 얻을 수 있다. 얻어진 조성물은 스킨케어, 바람직하게는 자외선 조사를 받기 전 또는 후의 스킨 케어, 보다 바람직하게는 자외선 조사를 받은 피부에서 발생하는 피부의 탄력 및 윤기 저하의 개선, 및 주름 예방 또는 개선에 유효하게 사용할 수 있다.

본 발명에 의한 유효 성분인 연와의 효소 분해물은, 자외선 조사를 받은 인간 피부 진피 섬유아세포에서 볼 수 있는 I형 콜라겐 생산의 저하를 효과적으로 억제하는 활성을 갖는다(후술하는 실시예의 시험 결과).

따라서, 본 발명에서 콜라겐 생산 저하의 억제 활성이란, 인간 피부 진피의 섬유아세포에서 발생할 수 있는 콜라겐 생산능의 저하를 억제 또는 개선하는 작용을 의미하며, 이에 따라, 인간 피부 진피에서의 콜라겐량의 현상을 억제 또는 개선할 수 있음을 의미한다. 진피의 콜라겐량의 저하를 억제 또는 개선함으로써, 주름 개선이나 예방 효과가 얻어져, 콜라겐 생산 저하에 따른 피부의 탄력(탄력성)이나 피부의 윤기 저하를 예방 또는 개선할 수 있는 것은, 당업자에게 있어서 주지된 것으로, 용이하게 이해할 수 있는 것이다(예를 들면, 상술한 문헌["기능성 화장품 소재의 개발을 위한 실험법"(이모까와 겐지 감수), 2007년 발행, CMC 출판, 제45 내지 47페이지(비특허문헌 1)]이나, 문헌[Akiko Kojima-Yuasa, et al., Fragrance Journal, April, 2009, No.346 (Vol.37, No.4), pp.103-(비특허문헌 2)] 등에 이 점이 명확히 나타나 있음).

특히 이들 효과는, 햇볕에 그을린 후 피부에서 콜라겐 합성이 저하된 듯한 상태의 피부에서 유효하다고 할 수 있다. 따라서, 본 발명에 의한 유효 성분이, 진피의 섬유아세포에서의 콜라겐 생산 저하의 억제 활성을 갖는 것이 확인되어 있기 때문에, 본 발명에 의한 유효 성분이 스킨케어에 유효한 것은 분명하다. 특히, 본 발명의 유효 성분이 자외선 조사를 받기 전 또는 후의 스킨케어, 보다 바람직하게는 자외선 조사를 받은 피부에서 발생하는, 피부의 탄력 및 윤기 저하의 개선, 및 주름 예방 또는 개선에 유효하다는 것은 명백하다. 또한, 본 발명에 의한 유효 성분은, 노화에 의한 피부의 탄력 저하의 개선, 주름 예방 등에도 유효하다.

또한, 본 명세서에서 피부의 탄력이나 윤기의 저하, 주름 등의 피부 또는 피부 상태의 "예방 또는 개선"이란, 상기 상태의 조절, 진행의 지연, 완화, 발병 예방, 재발 예방, 억제 등을 포함하는 의미로 사용된다.

따라서 상기한 바와 같이, 본 발명의 별도의 양태에 따르면, 본 발명에 의한 콜라겐 생산 저하 억제제를 포함하여 이루어지는, 피부외용 조성물이 제공된다. 바람직하게는, 피부외용 조성물은 의약품, 의약 부외품, 또는 화장료로서 제공되며, 보다 바람직하게는 화장료로서 제공된다.

본 발명에 의한 피부외용 조성물(특히 화장료)에 있어서, 유효 성분인 연와 효소 분해물의 함유량(건물 환산)은 특별히 제한은 없으며, 조성물의 형태에 따라 다르지만, 일반적으로는 고형분으로서 0.001 내지 20 중량％, 바람직하게는 0.005 내지 5 중량％의 범위이고, 조성물의 형태에 따라 적절하게 변경할 수 있다.

또는, 본 발명에 의한 피부외용 조성물에서의 연와 효소 분해물의 함유량(건물 환산)은, 1일당 0.01 mg 이상, 보다 바람직하게는 0.01 mg 내지 2 mg, 1 평방cm당 피부에 적용할 수 있도록 포함하는 것이 바람직하다.

본 발명에 의한 피부외용 조성물은 유효 성분을 포함하며, 진피 섬유아세포에서의 콜라겐의 생산 저하의 억제 효과를 손상시키지 않는 한, 본 발명에 의한 피부외용 조성물은, 다른 임의 성분을 더 포함하여 이루어질 수 있다. 이러한 임의 성분으로는, 예를 들면 피부 외용제나 화장료에 관용되고 있는 각종 성분, 예를 들면 보습제, 저급 알코올, 다가 알코올, 당류, 계면활성제, 완충제, 유화제, 안정화제, 증점제, 산화 방지제, 방부 방균제, 킬레이트제, pH 조정제, 향료, 색소, 자외선 흡수제, 자외선 산란제, 비타민류, 아미노산류, 항염증제, 물, 펩티드, 당알코올류, 효소류, 식물 엑기스류, 항산화 물질류, 탈크, 클레이, 꽃가루, 진주 등을 들 수 있다.

여기서 보습제로는, 예를 들면 폴리에틸렌글리콜, 폴리프로필렌글리콜, 글리세린, 프로필렌글리콜, 소르비톨, 히알루론산이나 콘드로이틴황산 등의 산성 무코다당류, 아미노산, 콜라겐, 엘라스틴 등을 들 수 있다.

저급 알코올로는, 예를 들면 에탄올, 프로판올, 이소프로판올 등을 들 수 있다.

다가 알코올로는, 예를 들면 글리세린, 펜타에리트리톨, 디펜타에리트리톨, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 폴리프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜 등을 들 수 있다.

당류로는, 예를 들면 글루코오스, 말토오스, 락토오스, D-글루쿠론산, 수크로오스, D-소르비트, 소르비탄, 셀룰로오스, 전분 등의 당류, 올리고당류, 다당류 및 이들의 유도체 등을 들 수 있다.

본 발명에 의한 피부외용 조성물은, 연와 효소 분해물을 포함하는 콜라겐 생산 저하 억제제 및 이들 임의 성분을, 공지된 방법에 따라 적절하게 배합하여 조정함으로써, 로션, 유액, 크림, 보습액, 팩제, 화장수, 보디로션, 보디크림 등의 다양한 화장료에서 관용의 제품 형태로 할 수 있다. 본 발명에 의한 피부외용 조성물은, 추가로 파운데이션류, 립스틱, 아이섀도우, 볼터치 등의 메이크업 화장품이나, 자외선 차단용 제품이나 방취 화장품 등의 약용 화장품, 샴푸나 헤어 린스, 이발료 등의 두발용 화장품, 피부 세정제나 욕제의 목욕용 화장품 등으로서 이용할 수도 있다.

본 발명의 별도의 양태에 따르면, 상기한 바와 같이, 인간을 포함한 포유동물의 진피 섬유아세포에서의 자외선 조사에 의한 콜라겐 생산 저하의 억제제를 제조하기 위한, 연와의 효소 분해물의 사용이 제공된다. 여기서, 진피 섬유아세포에서의 자외선 조사에 의한 콜라겐 생산 저하의 억제는, 바람직하게는 자외선 조사에 의한 피부 진피 섬유아세포에서 발생하는 I형 콜라겐 생산 저하의 억제이다.

본 발명의 별도의 하나의 양태에 따르면, 상기한 바와 같이, 자외선 조사를 받기 전 또는 후의 스킨케어용 피부외용 조성물을 제조하기 위한, 연와의 효소 분해물의 사용이 제공된다. 여기서 피부외용 조성물은, 바람직하게는 자외선 조사를 받은 피부에서 발생하는, 피부의 탄력 및 윤기의 저하 및 주름 예방 또는 개선에 이용되는 것이다. 또한, 피부외용 조성물은, 바람직하게는 화장료이다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 상기한 바와 같이, 본 발명의 유효 성분인 효소 분해물의 유효량을, 인간을 포함한 포유동물의 피부에 적용하는 것을 포함하여 이루어지는, 진피 섬유아세포에서의 자외선 조사에 의한 콜라겐의 생산 저하를 억제하는 방법이 제공된다. 또한 여기서 "유효량"이란, 적용에 의해서, 체내에서의 원하는 영역에서, 콜라겐의 생산 저하의 억제 활성을 발휘할 수 있을 수 있는 데에 충분한 양이다. 여기서, 진피 섬유아세포에서의 자외선 조사에 의한 콜라겐 생산 저하의 억제는, 바람직하게는 자외선 조사에 의한 피부 진피 섬유아세포에서 발생하는 I형 콜라겐 생산 저하의 억제이다.

또한 본 발명의 또 다른 하나의 양태에 따르면, 본 발명의 유효 성분의 유효량을, 인간을 포함한 포유동물의 자외선 조사를 받기 전 또는 후의 피부에 적용하는 것을 포함하여 이루어지는, 스킨케어 방법이 제공된다. 마찬가지로, 본 발명의 유효 성분의 유효량을, 인간을 포함한 포유동물의 피부에 적용하는 것을 포함하여 이루어지는, 자외선 조사를 받은 피부에서 발생하는, 피부의 탄력과 윤기의 저하를 개선하고, 주름을 예방 또는 개선하는 방법도 제공된다. 또한 여기서 "유효량"이란, 원하는 효과가 얻어지는 데에 충분한 양이다.

또한 본 명세서에 있어서, "약" 및 "정도"를 이용한 값의 표현은, 그 값을 설정하는 것에 의한 목적을 달성함에 있어서, 당업자이면 허용할 수 있는 값의 변동을 포함하는 의미이다. 예를 들면, 소정의 값 또는 범위의 20 ％ 이내, 바람직하게는 10 ％ 이내, 보다 바람직하게는 5 ％ 이내의 변동을 허용할 수 있는 것을 의미한다.

[실시예]

이하의 예에 기초하여 본 발명을 구체적으로 설명하지만, 본 발명이 이들 예로 한정되는 것은 아니다.

(1) 연와 샘플의 제조

(1-1) 연와 효소 분해물 1

시판되고 있는 무표백의 연와를 분쇄기로 분쇄하여, 100 메쉬 패스(입경 150 ㎛ 이하)의 연와 분말을 얻고, 이 연와 분말에 약 50배량(질량)의 물을 가하여 5 ℃에서 20 시간 동안 팽윤시킨 후, 121 ℃, 15 분간 가열 살균 처리하였다.

얻어진 처리액을 냉각한 후, pH를 조정하고, 연와 분말에 대하여 2 질량％의 양의 프로테아제 함유 효소(상품명 "판크레아틴 F", 아마노 세이야꾸 가부시끼가이샤 제조)를 첨가하여, 45 ℃에서 3 시간 동안 반응시켰다.

이 효소 반응액을 pH 7.0으로 조정한 후, 90 ℃에서 5 분간 가열하여 효소를 실활시켜 여과하고, 여과액을 회수하였다. 이 여과액을 농축한 후, 동결 건조하여 "연와 효소 분해물 1"을 얻었다.

(1-2) 연와 효소 분해물 2

효소 반응의 시간을 24 시간으로 한 것 이외에는, 상기 (1-1)항의 효소 분해물 1과 마찬가지로 행하여 "연와 효소 분해물 2"를 얻었다.

(1-3) 연와 열수 추출물( 비교예 )

시판되고 있는 무표백의 연와(건조물) 40 g을 분쇄기로 분쇄하고, 이 분쇄물을 1000 ml의 증류수에 가하여, 가열 환류하에서 2 시간 동안 추출 처리를 행하였다. 가열 환류 후, 정치한 후, 상청을 분취하여 여과하고, 여과액을 회수하였다. 잔사에 대해서는 추가로, 상기와 마찬가지로 1000 ml의 증류수에 가하여, 가열 환류하에서 재추출 처리를 행한 후, 고형물 잔사를 여과에 의해 제거하고, 여과액을 회수하였다. 얻어진 여과액(추출액)을 합하여 감압하에서 농축하고, 얻어진 농축물을 동결 건조하여, 황백색의 "연와 열수 추출물"(비교예)을 얻었다.

(2) 연와 샘플의 분석

얻어진 각 연와 샘플(연와 효소 분해물 1, 연와 효소 분해물 2 및 연와 열수 추출물) 중 시알산량과 단백질량을 하기와 같이 하여 측정하였다.

시알산의 양은, 각 시료를 산 가수분해 후에 고속 액체 크로마토그래피로 유리 N-아세틸뉴라민산으로서 측정하였다.

단백질의 양은, 브래드 포드(Brad ford)법에 기초하는 바이오 래드(Bio Rad)사의 프로틴 어세이 키트를 사용하여 측정하였다.

결과는, 도 1 및 도 2에 도시하는 바와 같았다.

다음으로, 연와 효소 분해물 1 및 연와 효소 분해물 2에 포함되는 단백질의 분자량 및 그의 분포를 측정하기 위해, 하기와 같은 조건으로 GPC에 의한 분석을 하였다.

[HPLC의 측정 조건]

?칼럼: 쇼덱스 아사히팩(Shodex Asahipak) GS320HQ(φ7.6×300 mm)

?칼럼 온도: 35 ℃

?이동상: 50 mM CH₃COONH₃ pH 6.7

?유속: 0.4 ml/분

?시료 주입량: 10 μl

?검출기: 자외 분광 검출기(UV 220 nm에서 측정)

[사용한 분자량 마커]

?BSA MW 66,000

?Gly-gly MW 132.1

?Gly-gly-gly MW 189.17

?L-아스파라긴산 MW 133.1

?DL-아스파라긴산 MW 150.1

?N-아세틸뉴라민산 MW 309.3

측정 결과는, 도 3 및 도 4에 도시하는 바와 같았다.

또한, 연와 효소 분해물에 포함되는 단백질의 분자량에 대해서, 웨스턴 블로팅법을 사용하여 평가하였다. 구체적으로는, 우선 상기한 측정법에 따라 연와 효소 분해물 중 단백질의 양을 확인하였다. 연와 효소 분해물 유래의 단백질(100 μg)을, SDS-PAGE를 이용하여 10 내지 15 ％의 폴리아크릴아미드에 의해 분리하였다. 겔에 전개한 단백질을 면역 분석(Immuno-blot) PVDF막(폴리비닐리덴 디플루오라이드(Polyvinylidene difluoride), 바이오-래드 랩(Bio-Lad Lab)사로부터 입수)에 전사하였다. PVDF막을 3 ％ 탈지유와 0.1 ％ 트윈(Tween)-20을 포함하는 PBS 중에서 1 시간 동안 블록킹하고, 시각적으로 판정하였다.

또한, 단백질의 분자량의 평가에 있어서는, 공지 문헌[Guo, C. T., Suzuki Y., et al., Antiviral Res. 70, pp.140-146(2006)]에 개시되어 있는 데이터도 참고로 하였다.

이들 결과로부터, 연와 효소 분해물 중에 포함되는 단백질 분자량은, 약 70 내지 120,000 정도(또한 평가 조건에 의해서는, 상한값은 200,000 정도가 되는 경우가 있음)의 범위에서 존재하는 것을 알 수 있었다.

또한, 얻어진 결과로부터, 연와 효소 분해물 1에 있어서의 단백질의 평균 분자량은, 약 55,000인 것을 알 수 있었다. 또한, 연와 효소 분해물 2에 있어서의 단백질의 평균 분자량은, 약 33,000인 것을 알 수 있었다.

(3) 자외선 조사에 따른 진피 섬유아세포에서의 콜라겐의 생산 저하의 억제 효과

정상 인간 피부 진피 섬유아세포(KF-4109, 클라보사로부터 입수)를, 0.5 ％ 송아지 혈청(FBS) 함유 DMEM 배지(시그마(SIGMA)로부터 입수)를 이용하여 96구멍 플레이트에 2×10⁴ 셀의 세포 밀도로 파종하였다. 파종 24 시간 후, 하기 소정 농도의 각 연와 샘플을 함유한 0.5 ％ FBS 함유 DMEM 배지와 교환하고, 추가로 24 시간 동안 배양하였다.

또한 샘플 농도에 대해서는 하기한 바와 같다:

(i) 효소 분해물의 농도(0, 78.1, 312.5, 1250, 5000 μg/ml),

(ii) 열수 추출물의 농도(0, 1.56, 6.25, 25, 100 μg/ml).

배양 후, 배지 상청의 일부를 회수하고, 상청 중 I형 콜라겐량을 ELISA법에 의해 측정하였다.

측정 결과로부터, 연와의 효소 분해물이, 인간 피부 진피 섬유아세포의 I형 콜라겐 생산을 유의하게 증가시키는 것이 인정되었다. 이는 비교예인 열수 추출물의 경우에 비하여 현저한 차이가 보였다.

배양 후, 추가로 소정 농도의 각 연와 샘플을 함유한 행크스(Hank's) 완충액 내에서, UVB(중파 자외선)를 조사한 후(자외선 조사기(필립스사 제조 TL20W/12RS), UV 단파장 컷트 필터(컷트온 파장 300 nm)를 사용)), 0.5 ％ FBS 함유 DMEM 배지와 교환하고, 추가로 24 시간 동안 배양하였다.

배양 후, 배지 상청을 회수하고, 상청 중 I형 콜라겐량을 ELISA법에 의해 측정하였다.

세포는 0.1 ％ 트리톤(Triton) X-100 용액으로 용해시킨 후, 단백질량을 정량하였다.

ELISA법으로는, 일차 항체에 항-인간 콜라겐 I형(Anti-Human Collagen Type I) 항체(Rabit)를 이용하고, 이차 항체에 히스토파인 PO(Rabit)를 이용하고, 추가로 발색제에는 2,2'-아지노비스(3-에틸벤조티아졸린-6-술폰산)(ABTS)을 이용하고, 마이크로플레이트리더로 405 nm의 흡광도를 측정하였다.

단백질량의 정량은, BCA법(비신코닌법)(펩티드 결합에 반응시킨 구리 이온을 BCA(비신코닌산)와 반응시키고, 파장 562 nm에서의 흡수를 측정하는 방법)에 의해서 행하였다.

배지 중 I형 콜라겐량은, 전체 세포의 단백질량에서 배지 중 I형 콜라겐량을 나눔으로써 단위 단백질량당 I형 콜라겐 생산량으로서 산출하였다.

결과는 도 3에 도시하는 바와 같았다.

결과로부터, 연와의 효소 분해물이 UVB 조사에 의한 진피 섬유아세포에서의 I형 콜라겐 생산 저하를 유의하게 억제하는 것이 확인되었다. 또한 열수 추출물(비교예)의 경우에는, 이러한 억제 효과는 보이지 않았다.

Claims

연와의 효소 분해물을 유효 성분으로 하는 진피 섬유아세포에서의 자외선 조사에 의한 콜라겐 생산 저하의 억제제.
제1항에 있어서, 효소 분해물이 프로테아제에 의한 분해물인 콜라겐 생산 저하 억제제.
제1항 또는 제2항에 있어서, 효소 분해물의 분자량이 70 내지 200,000인 콜라겐 생산 저하 억제제.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 효소 분해물의 평균 분자량이 1,000 내지 50,000인 콜라겐 생산 저하 억제제.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 자외선 조사에 의해 피부 진피 섬유아세포에서 발생하는 I형 콜라겐 생산 저하를 억제하기 위한 콜라겐 생산 저하 억제제.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 기재된 콜라겐 생산 저하 억제제를 포함하여 이루어지는 피부외용 조성물.
제6항에 있어서, 자외선 조사를 받기 전 또는 후의 스킨케어에 이용되는 피부외용 조성물.
제6항 또는 제7항에 있어서, 자외선 조사를 받은 피부에서 발생하는 피부의 탄력 및 윤기의 저하 및 주름의 예방 또는 개선에 이용되는 피부외용 조성물.
제6항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 화장료인 피부외용 조성물.
인간을 포함한 포유동물의 진피 섬유아세포에서의 자외선 조사에 의한 콜라겐 생산 저하의 억제제를 제조하기 위한 연와의 효소 분해물의 사용.
제10항에 있어서, 진피 섬유아세포에서의 자외선 조사에 의한 콜라겐 생산 저하의 억제가, 자외선 조사에 의한 피부 진피 섬유아세포에서 발생하는 I형 콜라겐 생산 저하의 억제인 연와의 효소 분해물의 사용.
자외선 조사를 받기 전 또는 후의 스킨케어용 피부외용 조성물을 제조하기 위한 연와의 효소 분해물의 사용.
제12항에 있어서, 피부외용 조성물이 자외선 조사를 받은 피부에서 발생하는 피부의 탄력 및 윤기의 저하 및 주름의 예방 또는 개선에 이용되는 것인 연와의 효소 분해물의 사용.
제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 효소 분해물이 프로테아제에 의한 분해물인 연와의 효소 분해물의 사용.
제10항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 효소 분해물의 분자량이 70 내지 200,000인 연와의 효소 분해물의 사용.
제10항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 효소 분해물의 평균 분자량이 1,000 내지 50,000인 연와의 효소 분해물의 사용.
제10항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 피부외용 조성물이 화장료인 연와의 효소 분해물의 사용.
연와의 효소 분해물의 유효량을, 인간을 포함한 포유동물의 피부에 적용하는 것을 포함하여 이루어지는, 진피 섬유아세포에서의 자외선 조사에 의한 콜라겐의 생산 저하를 억제하는 방법.
제18항에 있어서, 진피 섬유아세포에서의 자외선 조사에 의한 콜라겐 생산 저하의 억제가, 자외선 조사에 의한 피부 진피 섬유아세포에서 발생하는 I형 콜라겐 생산 저하의 억제인 방법.
연와의 효소 분해물의 유효량을, 인간을 포함한 포유동물의, 자외선 조사를 받기 전 또는 후의 피부에 적용하는 것을 포함하여 이루어지는 스킨케어 방법.
연와의 효소 분해물의 유효량을, 인간을 포함한 포유동물의 피부에 적용하는 것을 포함하여 이루어지는, 자외선 조사를 받은 피부에서 발생하는 피부의 탄력과 윤기의 저하를 개선하여 주름을 예방 또는 개선하는 방법.
제18항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 효소 분해물이 프로테아제에 의한 분해물인 방법.