KR20110093513A - Composition containing the extracts or fractions of wild edible greens for the prevention and treatment of postmenopausal syndrome - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 산나물 추출물 또는 이의 분획물을 함유하는 여성 폐경기 증후군 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 물, 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 윤판나물(Disporum uniflorum) 또는 환삼덩굴(Humulus japonicus)의 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 여성 폐경기 증후군 예방 및 치료용 조성물 또는 건강식품에 관한 것이다.
The present invention relates to a composition for the prevention and treatment of female menopausal syndrome containing wild herbs extract or fractions thereof, and more specifically, yunpan ( Disporum uniflorum ) or Humulus japonicus extracted with water, alcohol or a mixed solvent thereof It relates to a composition or health food for the prevention and treatment of female menopausal syndrome containing an extract or a fraction thereof as an active ingredient.
여성은 나이가 들면서 성적으로 성숙하게 되는 일련의 과정을 거치게 되는데 이 시기를 사춘기(思春期, puberty)라고 한다. 이는 한 개인의 신체적 구조와 정서가 그 본래의 기능을 다할 수 있는 상태에 이르는 과정을 말한다. 사춘기 이후 여성은 여성호르몬인 에스트로겐(Estrogen)과 프로게스테론(Progesterone)을 분비하게 된다. 호르몬들의 분비를 조절하는 것은 시상하부(Hypothalamus)이며 이것의 지시를 받아 호르몬을 분비하는 것은 뇌하수체(Pituitary Gland)이다. 뇌하수체에서 분비되는 성선자극호르몬(Gonadotropin)이 신호를 전달하면 월경주기를 조절하고, 임신을 가능하게 하는 호르몬인 난포자극호르몬(Folliocle Stimulating Hormone; FSH)과 황체형성호르몬 (Lutenizing Hormone; LH)이 분비되고, 이는 다시 난소에 작용하여 에스트로겐과 프로게스테론을 분비하게 된다. 그러나 나이가 들면서, 난소의 기능이 저하되고, 이로 인해 에스트로겐 분비가 크게 감소하게 되어, 난포자극호르몬(FSH) 및 황체형성호르몬(LH)에 대한 반응이 감소하고, 초기 난포기가 단축되어 월경주기가 더욱 단축되며, 배란기가 더욱 단축되고, 프로게스테론 생성이 감소된다. 결국, 난포가 반응하지 못하게 되어 에스트로겐을 생성하지 못하게 된다. 이처럼 배란이 중단되어 월경이 사라지는 것을 폐경이라 하고, 폐경 또는 그 이전에 호르몬의 감소로 인한 폐경기 증상이 나타나게 된다. 에스트로겐의 분비 감소는 여성의 비뇨, 생식계통뿐 아니라 신체의 다른 부위에서 영향을 미치므로 에스트로겐의 분비 감소는 신체전반에 걸쳐 큰 영향을 미치게 된다. 폐경기 이후 여성에게는 에스트로겐의 급격한 감소로 인하여, 안면홍조현상(Hot Flush)이나 급작스런 심장박동 변화 및 수면장애 등의 증상이 생기는데, 이것이 가장 빈번한 폐경기 증상이다. 이러한 에스트로겐의 부족은 신경증, 과민성, 집중력 저하, 우울한 기분, 불안증세, 자신감과 성적 욕구의 상실로 이어지기도 한다. 또한, 에스트로겐의 감소로 피의 공급이 원활하게 이루어 지지 않아 피부와 질 점막의 탄력과 수분을 잃게 된다. 예로 눈, 코, 입의 점막이 마르는 경우, 눈이 불편하거나, 목이 타는 느낌을 받기도 한다. 때로는 요로나 질이 마르기도 하여, 질 건조증과 반복되는 요로간염으로 인해 고통을 호소하는 경우도 있다. 이밖에 골다공증, 아테롬성심장질환등이 있고, 이는 만성 질환을 초래하기 때문에, 폐경기 여성에 대한 치료의 필요성이 점차 부각되고 있으며, 이러한 폐경기여성의 증상치료를 위한 방법으로 인위적으로 에스트로겐을 투여하는 호르몬 대체 요법(Hormone Replacement Therapy : HRT)이 널리 이용되고 있다. As women get older, they go through a series of sexual maturity processes, called puberty. It is the process of reaching a state in which an individual's physical structure and emotions can fulfill their original functions. After puberty, women secrete female hormones, estrogen and progesterone. It is the hypothalamus that controls the secretion of hormones and the pituitary gland secrets hormones under its direction. When the gonadotropin secreted by the pituitary gland transmits a signal, the hormones that control menstrual cycle and allow pregnancy are secreted by Folliocle Stimulating Hormone (FSH) and Luteizing Hormone (LH). This in turn acts on the ovary to secrete estrogen and progesterone. However, as we age, the function of the ovary decreases, which leads to a significant decrease in estrogen secretion, a decrease in response to follicle stimulating hormone (FSH) and luteinizing hormone (LH), and shortening of the early follicular phase, the menstrual cycle. Is further shortened, the ovulatory phase is further shortened, and progesterone production is reduced. Eventually, the follicles will not be able to react, producing estrogens. This cessation of ovulation is stopped menstruation is called menopause, menopause symptoms due to the reduction of hormones before or during menopause. Reduced secretion of estrogens affects the urinary and reproductive systems of women as well as other parts of the body. In postmenopausal women, the rapid decrease in estrogen causes symptoms such as hot flushes, sudden heartbeat changes, and sleep disorders, which are the most frequent menopausal symptoms. This lack of estrogen can lead to neurosis, irritability, poor concentration, depressed mood, anxiety, loss of confidence and sexual desire. In addition, due to the reduction of estrogen blood supply is not made smoothly and lose the elasticity and moisture of the skin and vaginal mucosa. For example, if the mucous membranes of your eyes, nose, and mouth are dry, you may feel uncomfortable or thirsty. Occasionally, the urinary tract or vagina may dry up, causing pain due to vaginal dryness and repeated urinary tract hepatitis. In addition, osteoporosis, atherosclerosis, and the like, which cause chronic diseases, and the need for treatment for postmenopausal women is gradually increasing, and the replacement of hormones for artificially administering estrogen as a method for treating the postmenopausal women. Hormone Replacement Therapy (HRT) is widely used.
에스트로겐은 천연에스트로겐과 합성에스트로겐의 두 가지 유형이 있다. 합성에스트로겐 호르몬제제의 투여는 경구 투여가 가장 널리 사용되는 방법이며, 비경구 투여으로는 경피패취, 경피 크림, 또는 젤, 질크림 등을 사용하는 방법이 있다. 그러나 이러한 인위적인 합성 호르몬 투입의 경우, 갱년기 증상 개선에는 효과적이나 장기간 사용시 자궁암 또는 유방암, 정맥혈전증, 담낭질환을 유발할 가능성이 높다는 주장이 제기되면서 논란이 가열되고 있다. 따라서, 상기와 같은 호르몬 대체요법에 사용되는 합성에스트로겐의 대체물로서 합성에스트로겐과 비슷한 활성은 가지면서, 부작용이 적은 천연물 유래, 특히 식물 유래의 천연에스트로겐 을 찾고자 하는 연구가 활발히 진행되고 있는 추세이다. 특히 식물 유래의 천연에스트로겐을 흔히 식물성 에스트로겐(Phytoestrogen)이라고 칭한다.There are two types of estrogens: natural and synthetic estrogens. Oral administration is the most widely used method of administering a synthetic estrogen hormone, and parenteral administration includes transdermal patches, transdermal creams, or gels and vaginal creams. However, the use of artificial synthetic hormones is effective in improving menopausal symptoms, but controversy has been heated as a claim that long-term use is likely to cause uterine cancer or breast cancer, venous thrombosis, and gallbladder disease. Therefore, as a substitute for the synthetic estrogens used in the hormone replacement therapy as described above, there is a trend to actively search for natural estrogens derived from natural products, especially plant-derived, having similar activities as synthetic estrogens and having fewer side effects. In particular, natural estrogens derived from plants are commonly referred to as phytoestrogen.
식물성에스트로겐(Phytoestrogen)이란, 일반적으로 여성호르몬 에스트로겐과 기능 및 구조가 유사한 식물로부터 유래한 비스테로이드성 화합물을 지칭하며, 식물의 줄기, 뿌리, 꽃이나 종자에서 발견된다. 식물성 에스트로겐은 크게 콩과 칡의 이소플라본(Isoflavone), 클로버의 쿠메스탄(Coumestan), 아마종자의 리그난(Lignan)이 있다. 그 외 플라바논(Flavanones), 플라본(Flavones), 디하이드로칼콘(Dihydrocalchones) 등이 있다. 이소플라본은 식물내에서는 바이오카닌 A(Biochanin A)와 포르모노네틴(Formononetin)의 비활성형 배당체로 존재하며, 체내로 흡수되어 장내 박테리아의 글루코시다제(Glucosidase)에 의해 각각 에스트로겐과 유사한 구조를 갖는 제니스테인(Genistein)과 다이드제인(Daidzein)으로 변환되어 에스트로겐과 같은 활성을 나타내게 된다. 식물성에스트로겐의 대표적인 예로, 제니스테인은 세포의 단백질 타이로신 인산화효소(Protein tyrosine kinase)를 억제하여 암세포의 성장을 억제하는 항암효과가 있음이 보고된바 있다(The Journal of Biological Chemistry., 262(12), 5592-5, 1987; Cancer Research., 49, 5111-7, 1989). 그러나 효과가 없거나 자궁암 및 유방암의 유전적 소인을 가지고 있는 사람들에게 있어서는 오히려 암을 유발할 수 있다는 보고 또한 잇따르고 있다. 따라서 제니스테인의 부작용을 보완할 수 있는 새로운 식물성에스트로겐을 개발하는 것이 필요하다.
Phytoestrogen generally refers to a nonsteroidal compound derived from a plant that is similar in function and structure to female hormone estrogen and is found in the stem, root, flower or seed of a plant. Phytoestrogens are largely composed of soybean and isoflavone, clover, coumestan, and flax seed lignan. Others include Flavanones, Flavones, and Dihydrocalchones. Isoflavones exist in plants as inactive glycosides of Biochanin A and Formononetin, and are absorbed into the body and have a structure similar to estrogens by glucosidase of intestinal bacteria. It is converted into genistein and daidzein, and shows estrogen-like activity. As a representative example of phytoestrogens, genistein has been reported to have an anticancer effect of inhibiting the growth of cancer cells by inhibiting protein protein tyrosine kinase ( The Journal of Biological Chemistry ., 262 (12), 5592-5, 1987; Cancer Research., 49, 5111-7, 1989). However, there are also reports that it may cause cancer in people who are ineffective or have genetic predisposition to uterine and breast cancer. Therefore, it is necessary to develop new phytoestrogens that can supplement the side effects of genistein.
윤판나물(Disporum uniflorum)과 환삼덩굴(Humulus japonicus)의 어린순은 산나물로써 식용(장준근, 2003, 몸에좋은 산야초, 넥서스북스)하였었기 때문에 부작용 및 안전성 측면에서 매우 유리하다고 할 수 있다. 보다 자세하게 윤판나물은 백합과로 한국, 중국, 일본, 사할린섬에 분포한다. 윤판나물은 보통 관상용으로 심으며, 이른 봄 어린순을 나물로 먹는다. 민간요법에서는 기침, 식체 또는 폐결핵에 약재로 쓰인다. 환삼덩굴은 열을 내리고 소변을 잘 나가게 하며 어혈을 없애고 몸 안에 있는 독을 풀어 주는 효능이 있다. 또한 소변불리, 학질, 설사, 이질, 폐결핵, 폐농양, 폐염을 치료한다. <본초강목(本草綱目)>에는 삼초(三招)를 윤활하게 하고 오곡을 소화되게 하며 오장(五臟)을 보익하고, 뱃속에 있는 갖가지 벌레를 죽이며 온역을 다스린다고 적혀 있다. 또한 이른 봄에 싹튼 어린순을 나물로 먹기도 한다
The young shoots of Disporum uniflorum and Humulus japonicus were edible (Jang Jun-geun, 2003, healthy wild grasses, Nexus Books) as wild herbs, which is very advantageous in terms of side effects and safety. More specifically, the Yunpanmul is a lily family and is distributed in Korea, China, Japan, and Sakhalin Island. Yunpannamul is usually planted for ornamental purposes, and young spring shoots are eaten as herbs. In folk medicine, it is used as a medicine for cough, planting or pulmonary tuberculosis. Hwansam vine has the effect of lowering the fever, making the urine go out, removing the blood and releasing the poison in the body. It also treats urine deficiency, malaria, diarrhea, dysentery, pulmonary tuberculosis, lung abscess, and pneumonia. The main herbaceous tree (本草綱目) is said to lubricate samcho (三招), to digest five grains, to supplement five intestines, to kill various insects in the stomach, and to control the whole area. It also eats young shoots sprouting in early spring.
이에, 본 발명자들은 새로운 식물성에스트로겐 대체 물질을 국내 자생식물 특히 산나물을 대상으로 검색하던 중, 에스트로겐 반응부위(Estrogen Response Element)에 대한 활성을 나타내는 윤판나물(Disporum uniflorum) 또는 환삼덩굴(Humulus japonicus) 추출물을 유효성분으로 하는 조성물을 발견하고, 이들이 유방조직 유래 세포의 생장을 촉진함을 확인함으로써, 상기 조성물이 식물성 에스트로겐 활성을 가져 호르몬 대체용 조성물로 사용할 수 있으며, 따라서 여성 폐경기 증후군 예방 및 치료에 이용될 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.
Accordingly, the present inventors searched for new phytoestrogens for domestic native plants, especially wild vegetables, while extracts of the sperm uniflorum or Humulus japonicus showing activity against the estrogen response element. By discovering a composition comprising the active ingredient and confirming that they promote the growth of breast tissue-derived cells, the composition has a phytoestrogens activity can be used as a hormone replacement composition, thus used in the prevention and treatment of female menopausal syndrome The present invention has been completed by revealing that it can be.
본 발명의 목적은 폐경기 여성에 있어서의 폐경기 증후군 증상을 효과적으로 예방 및 치료할 수 있는 호르몬 대체요법용으로, 합성에스트로겐을 대체할 수 있는, 산나물 추출물 또는 이의 분획물을 함유한 여성 폐경기 증후군 예방 및 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
An object of the present invention is a hormone replacement therapy for effectively preventing and treating menopausal syndrome symptoms in postmenopausal women, a composition for preventing and treating female menopausal syndrome containing wild herbs extract or a fraction thereof, which can replace synthetic estrogen. To provide.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 윤판나물(Disporum uniflorum) 또는 환삼덩굴(Humulus japonicus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 여성 폐경기 증후군 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a composition for preventing and treating female menopausal syndrome containing the extract of yunpanmul ( Disporum uniflorum ) or Humulus japonicus as an active ingredient.
또한, 본 발명은 상기 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 여성 폐경기 증후군 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.The present invention also provides a composition for the prevention and treatment of female menopausal syndrome containing the fraction of the yunpanmul or hwansamsu vine extract as an active ingredient.
또한, 본 발명은 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물을 유효성분으로 함유하는 여성 폐경기 증후군 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a health food for preventing and improving menopausal syndrome female containing yunpanmul or hwansam vine extract as an active ingredient.
아울러, 본 발명은 상기 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 여성 폐경기 증후군 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.
In addition, the present invention provides a health food for the prevention and improvement of female menopausal syndrome containing the fraction of the yunpanmul or hwansamsu vine extract as an active ingredient.
본 발명의 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 폐경기 여성에서 에스트로겐 결핍에 의해 발생하는 안면홍조증, 골다공증, 정맥혈전증 등과 같은 폐경기 증후군을 예방, 완화 또는 치료하기 위해 시행하는 호르몬 대체 요법(Hormone replacement therapy; HRT)용 조성물로 유용하게 이용될 수 있으며, 특히 윤판나물, 환삼덩굴은 어린순을 나물로 먹을 정도로 부작용이 적고, 안전한 물질이다.
The composition containing the yunpanmul or hwansamvine extract of the present invention or a fraction thereof as an active ingredient is carried out to prevent, alleviate or treat menopausal syndrome such as hot flashes, osteoporosis, venous thrombosis caused by estrogen deficiency in postmenopausal women. It can be usefully used as a composition for hormone replacement therapy (Hormone replacement therapy) (HRT), especially yunpannamul, hwansam vine is a safe substance with little side effects enough to eat young shoots as herbs.
도 1은 윤판나물 추출물에 의한 에스트로겐 반응 부위(Estrogen Responsive Element; ERE)에 의해 유도된 루시퍼레이즈 활성 유도 효과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 윤판나물 분획물에 의한 에스트로겐 반응 부위(Estrogen Responsive Element; ERE)에 의해 유도된 루시퍼레이즈 활성 유도 효과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 환삼덩굴 추출물에 의한 에스트로겐 반응 부위(Estrogen Responsive Element; ERE)에 의해 유도된 루시퍼레이즈 활성 유도 효과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 윤판나물 및 환삼덩굴 추출물에 의한 인간 유방유래 세포주인 MCF-7의 생장촉진 효과를 MTT 실험법으로 확인한 그래프이다.
도 5는 윤판나물 및 환삼덩굴 추출물에 의한 유방유래 세포주인 MCF-7의 생장촉진 효과를 집락형성 분석법으로 확인한 그래프이다.1 is a graph showing the effect of inducing luciferase activity induced by Estrogen Responsive Element (ERE) by Yunpanmul extract.
Figure 2 is a graph showing the effect of inducing luciferase activity induced by the Estrogen Responsive Element (ERE) by the yunpanmul fraction.
Figure 3 is a graph showing the effect of inducing luciferase activity induced by the Estrogen Responsive Element (ERE) by the hwangi vine extract.
Figure 4 is a graph confirming the growth promoting effect of MCF-7 human breast-derived cell line by yunpanmul and hwansam vine extract by MTT test method.
5 is a graph confirming the growth-promoting effect of MCF-7, a breast-derived cell line by yunpanmul and hwansamvine extract by colony formation assay.
이하, 본 발명에서 사용한 용어를 설명한다.
Hereinafter, terms used in the present invention will be described.
본 발명에서 사용되는 용어 "예방"은 본 발명의 조성물의 투여로 여성 폐경기 증후군 증상을 억제시키는 모든 행위를 의미한다.As used herein, the term "prevention" refers to any action that inhibits the symptoms of female menopausal syndrome by administration of a composition of the invention.
본 발명에서 사용되는 용어 "치료" 및 "개선"은 본 발명의 조성물의 투여로 여성 폐경기 증후군 증상이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.As used herein, the terms "treatment" and "improvement" refer to all actions in which female menopausal syndrome symptoms improve or benefit from administration of a composition of the present invention.
본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.As used herein, the term "administration" means providing a subject with a composition of the present invention in any suitable manner.
본 발명에서 사용되는 용어 "개체"는 본 발명의 조성물을 투여하여 여성 폐경기 증후군에 걸린 인간, 원숭이, 개, 염소, 돼지 또는 쥐 등 모든 동물을 의미한다.As used herein, the term "individual" refers to any animal, including humans, monkeys, dogs, goats, pigs, or rats, having the female menopausal syndrome by administering the composition of the present invention.
본 발명에서 사용되는 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜 또는 위험 비율로 여성 폐경기 증후군을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 이는 개체의 여성 폐경기 증후군의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시에 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
As used herein, the term “pharmaceutically effective amount” means an amount sufficient to treat female menopausal syndrome at a reasonable benefit or risk ratio applicable to medical treatment, which means the type, severity, and drug of the female menopausal syndrome in the individual. Can be determined according to the activity of the drug, the sensitivity to the drug, the time of administration, the route of administration and the rate of excretion, the duration of treatment, the factors including the drug used simultaneously and other factors well known in the medical field.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명은 윤판나물(Disporum uniflorum) 또는 환삼덩굴(Humulus japonicus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 여성 폐경기 증후군 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.The present invention provides a composition for the prevention and treatment of female menopausal syndrome containing the extract of yunpanmul ( Disporum uniflorum ) or Humulus japonicus as an active ingredient.
또한, 본 발명은 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물의 유기용매 분획물을 유효성분으로 함유하는 여성 폐경기 증후군 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.The present invention also provides a composition for the prevention and treatment of female menopausal syndrome containing the organic solvent fractions of Yunpanmul or hwansamsu vine extract as an active ingredient.
상기 여성 폐경기 증후군은 안면홍조, 골다공증 및 정맥혈전증으로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.The female menopausal syndrome is preferably any one selected from the group consisting of hot flashes, osteoporosis and venous thrombosis, but is not limited thereto.
본 발명의 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물은 하기와 같은 단계로 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:Yunpanmul or hwansamvine extract of the present invention is preferably prepared in the following steps, but is not limited thereto:
1) 건조한 윤판나물 또는 환삼덩굴을 추출용매를 가하여 추출하는 단계;1) extracting the dried yunpanmul or hwansam vine by adding an extraction solvent;
2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계;2) filtering the extract of step 1);
3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압농축하여 추출물을 제조하는 단계; 및3) preparing the extract by concentrating the filtered extract of step 2) under reduced pressure; And
4) 단계 3)의 추출물을 추가적으로 유기용매로 추출하여 분획물을 제조하는 단계.4) extracting the extract of step 3) with an additional organic solvent to prepare a fraction.
상기 방법에 있어서, 윤판나물 또는 환삼덩굴은 채취한 것, 양식한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 상기 윤판나물 또는 환삼덩굴은 잎, 줄기 또는 뿌리를 모두 사용할 수 있으며, 바람직하게는 윤판나물의 잎과 줄기부위, 환삼덩굴은 지상부위를 각각 사용할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 윤판나물 또는 환삼덩굴은 생육단계 중 모든 시기가 사용가능하지만 바람직하게는 어린순을 이용하는 것이 좋다.In the above method, yunpanmul or hwansam vine can be used without limitation, such as harvested, cultured or commercially available. The yunpan herbs or hwansam vines can be used both leaves, stems or roots, preferably the leaves and stems of the yunpan herbs, hwansam vines can be used above ground parts, but is not limited thereto. The yunpanmul or hwansam vine can be used at any time during the growth stage, but preferably a young shoot.
상기 추출 용매는 물, 알코올 또는 이의 혼합물, 바람직하게는 C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 용매를 사용하는 것이 바람직하며, 메탄올 또는 에탄올로 추출하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 추출 용매의 양은 윤판나물 또는 환삼덩굴 건조 중량의 2 내지 10 배로 하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 추출 방법은 열수추출, 침지 추출, 환류 냉각 추출 및 초음파 추출 등의 추출 방법을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 초음파 추출방법으로 1회 내지 5회 추출될 수 있다. 추출시 온도는 10℃ 내지 100℃ 인 것이 바람직하며 상온인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 추출 시간은 1일 내지 7일인 것이 바람직하고, 3일 내지 7일인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. The extraction solvent is preferably a solvent selected from water, an alcohol or a mixture thereof, preferably a lower alcohol of C 1 to C 4 or a mixed solvent thereof, more preferably extracted with methanol or ethanol, but is not limited thereto. It doesn't happen. The amount of the extraction solvent is preferably 2 to 10 times the dry weight of yunpanmul or hwansam vine, but is not limited thereto. The extraction method may be an extraction method such as hot water extraction, immersion extraction, reflux cooling extraction and ultrasonic extraction, it may be preferably extracted one to five times by the ultrasonic extraction method. When the extraction temperature is preferably 10 ℃ to 100 ℃ and more preferably room temperature, but is not limited thereto. The extraction time is preferably 1 day to 7 days, more preferably 3 to 7 days, but is not limited thereto.
상기 추출물을 제조하는 방법은 초임계추출, 아임계추출, 고온추출, 고압추출 또는 초음파추출법 등의 추출장치를 이용한 방법 또는 XAD 및 HP-20을 포함한 흡착 수지를 이용하는 방법 등 당업계의 통상적인 추출방법을 사용할 수 있으며, 가온하며 환류 추출 또는 상온에서 추출하는 것이 바람직하나, 이에 한정하는 것은 아니다. 상기 추출 회수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 3회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다. The method of preparing the extract is conventional extraction in the art, such as a method using an extraction device such as supercritical extraction, subcritical extraction, high temperature extraction, high pressure extraction or ultrasonic extraction method or using an adsorption resin containing XAD and HP-20. The method may be used, but is preferably warmed and extracted at reflux or at room temperature, but is not limited thereto. The extraction number is preferably 1 to 5 times, more preferably 3 times repeated extraction is not limited thereto.
상기 유기용매는 n-헥산, 에틸아세테이트, n-부탄올, 물로 순차적으로 분획하여 수득하는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다. The organic solvent is preferably obtained by sequentially fractionating n-hexane, ethyl acetate, n-butanol, and water, but is not limited thereto.
본 발명의 한가지 실시예에서는 윤판나물 또는 환삼덩굴의 건조물을 적당한 크기로 분쇄하여 추출용기에 넣고 에탄올을 넣고 용액을 끓이며 환류 추출한 후, 일정시간 방치한 다음 거름종이 등으로 여과하여 에탄올 추출물을 수득하였다. 그런 다음, 상기 윤판나물 또는 환삼덩굴의 추출물을 추가적으로 n-헥산, 에틸아세테이트, n-부탄올, 물로 순차적으로 분획하여 n-헥산 분획물, 에틸아세테이트 분획물, n-부탄올 또는 물 분획물을 수득하였다.In one embodiment of the present invention, the dried leaf of yunpanmul or hwansam vines are ground to an appropriate size, put in an extraction container, ethanol is added, the solution is boiled and refluxed, left for a certain time and then filtered through a filter paper to obtain an ethanol extract. . Then, the extract of the yunpanmul or hwansam vine was further fractionated sequentially with n-hexane, ethyl acetate, n-butanol, water to obtain an n-hexane fraction, ethyl acetate fraction, n-butanol or water fraction.
본 발명의 한가지 실시예에서는 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물 또는 분획물이 에스트로겐 활성이 있는지 알아보기 위해, pERE-비탈로게닌-Luc 플라스미드(pERE-vitallogenin-Luc plasmid)를 트랜스펙션(transfection)된 MCF-7(인간 유방암 세포주)에서 루시퍼레이즈 활성을 측정하여 에스트로겐반응부위(Estrogen Responsive Element; ERE) 활성화 정도를 확인하였다. 그 결과, 본 발명의 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물 또는 분획물이 대조군과 비교하여 볼 때, 농도 의존적으로 현저히 루시퍼레이즈 활성을 증가시켜, 상기 추출물 및 분획물이 에스트로겐 반응부위를 강력하게 활성화시키는 것을 알 수 있었다(도 1 내지 도 3 참조). In one embodiment of the present invention, MCF- transfected pERE-vitallogenin-Luc plasmid (pERE-vitallogenin-Luc plasmid) in order to determine whether the yunpanmul or hwangi vine extract or fraction has estrogen activity Luciferase activity was measured in 7 (human breast cancer cell lines) to confirm the degree of activation of the Estrogen Responsive Element (ERE). As a result, it was found that the yunpanmul or hwansamsu vine extract or fraction of the present invention significantly increased luciferase activity in a concentration-dependent manner, compared to the control group, so that the extract and fraction strongly activated the estrogen reaction site. (See FIGS. 1-3).
본 발명의 또다른 한가지 실시예에서는 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물 또는 분획물이 호르몬이 결핍된 배양조건에서 MCF-7 세포의 생장에 미치는 영향을 알아보기 위해, MTT 실험법과 집락형성분석법(Colongenic assay)을 이용하여 확인하였다. 그 결과, MTT 실험법과 집락형성분석법 모두에서 본 발명의 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물 또는 분획물이 MCF-7 세포의 생장을 현저히 유도하는 것을 확인하였다(도 4 및 도 5 참조). In another embodiment of the present invention in order to determine the effect of yunpanmul or hwansam vine extract or fraction on the growth of MCF-7 cells in hormone-deficient culture conditions, MTT test method and colony assay (Colongenic assay) It confirmed using. As a result, it was confirmed in both the MTT test method and the colony formation method that the yunpanmul or hwansam vine extract or fraction of the present invention significantly induced the growth of MCF-7 cells (see FIGS. 4 and 5).
이는 호르몬이 결핍된 배양조건에서 인체 유방암 유래 세포주인 MCF-7 세포의 생장은 억제되며, 이러한 조건에서 에스트로겐 성분을 추가시 이에 의해 MCF-7 세포의 생장이 활발히 증가되므로, 이런 호르몬이 결핍된 배양조건에서 특정 성분 처리 후 MCF-7 세포의 생장을 관찰하게 되면 특정 성분의 에스트로겐 효능을 간접적으로 확인할 수 있는 것이다.This suppresses the growth of MCF-7 cells, which are human breast cancer-derived cell lines under culture conditions that are hormone-deficient, and increases the growth of MCF-7 cells by adding estrogen components under these conditions. Observing the growth of MCF-7 cells after treatment with specific components in the conditions can indirectly confirm the estrogen efficacy of the specific components.
상기 실험 결과들을 종합해 볼 때, 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물, 또는 이들의 분획물은 현저한 에스트로겐 활성이 있음을 알 수 있었다. 즉, 본 발명의 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물 또는 이의 분획물은 에스트로겐 반응부위를 활성화시키며, 호르몬 결핍조건에서 인간 유방암 MCF-7 세포주의 생장을 유도함을 확인함으로써, 상기 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물, 또는 이들의 분획물이 식물성 에스트로겐 활성을 가지는 것을 알 수 있다. Summarizing the above experimental results, it can be seen that the yunpanmul or hwansam vine extract, or fractions thereof have significant estrogen activity. That is, the yunpanmul or hwansamvine extract of the present invention or fractions thereof activate the estrogen reaction site, and by confirming that the growth of human breast cancer MCF-7 cell line under hormonal deficiency conditions, the yunpanmul or hwansamvine extract, or these It can be seen that the fraction of has phytoestrogens activity.
따라서 에스트로겐 활성을 나타내는 본 발명의 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물, 또는 이들의 분획물을 단독 또는 조합으로 포함하는 조성물들은 에스트로겐 결핍에 의해 나타나는 여성 폐경기 증후군 증상의 예방 및 치료용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.
Therefore, the composition containing the yunpanmul or hwansamvine extract, or fractions thereof of the present invention showing estrogen activity may be usefully used as a composition for the prevention and treatment of symptoms of female menopausal syndrome caused by estrogen deficiency. .
상기 본 발명의 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물 또는 이의 분획물을 0.1 내지 50 중량%로 포함하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.The composition comprising the yunpanmul or hwansam vine extract of the present invention or a fraction thereof, preferably contains 0.1 to 50% by weight of the yunpanmul or hwansam vine extract or a fraction thereof based on the total weight of the composition, but is not limited thereto. .
본 발명의 조성물은 약제의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.The composition of the present invention may further comprise suitable carriers, excipients and diluents commonly used in the manufacture of a medicament.
본 발명에 따른 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.The compositions according to the invention can be used in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols and the like, oral formulations, external preparations, suppositories and sterile injectable solutions, respectively, according to conventional methods. have. Examples of carriers, excipients and diluents that can be included in the composition of the present invention include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, Cellulose, methylcellulose, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. When formulated, diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents, and surfactants are usually used. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and such solid preparations include at least one excipient in the composition of the present invention, for example, starch, calcium carbonate, sucrose (sucrose), lactose (lactose), gelatin, etc. are mixed and prepared. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used. Oral liquid preparations include suspensions, solvents, emulsions, and syrups, and may include various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin. . Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories. As the non-aqueous solvent and suspending agent, propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate and the like can be used. As the base of the suppository, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 조성물은 1일 0.0001 내지 1 g/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 200 ㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
The preferred dosage of the composition of the present invention varies depending on the condition and the weight of the patient, the degree of disease, the type of drug, the route of administration and the period of time, but can be appropriately selected by those skilled in the art. However, for the preferred effect, the composition of the present invention is preferably administered at 0.0001 to 1 g / kg, preferably at 0.001 to 200 mg / kg. Administration may be administered once a day or may be divided several times. The dose is not intended to limit the scope of the invention in any way.
또한, 본 발명은 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물을 유효성분으로 함유하는 여성 폐경기 증후군 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a health food for preventing and improving menopausal syndrome female containing yunpanmul or hwansam vine extract as an active ingredient.
아울러, 본 발명은 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 여성 폐경기 증후군 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.In addition, the present invention provides a health food for the prevention and improvement of female menopausal syndrome containing a fraction of Yunpannamul or hwansamsu vine extract as an active ingredient.
상기 여성 폐경기 증후군은 안면홍조, 골다공증 및 정맥혈전증으로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.The female menopausal syndrome is preferably any one selected from the group consisting of hot flashes, osteoporosis and venous thrombosis, but is not limited thereto.
본 발명의 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물, 또는 이들의 분획물은 에스트로겐 반응부위를 활성화시키고, 호르몬 결핍조건에서 인간 유방암 MCF-7 세포주의 생장을 유도하여, 식물성 에스트로겐 활성을 가짐을 확인함으로써 에스트로겐 결핍에 의해 나타나는 여성 폐경기 증후군 증상의 예방 및 개선용 건강식품의 유효성분으로 유용하게 이용될 수 있음을 알 수 있다.Yunpanmul or hwansamvine extract of the present invention, or fractions thereof activate the estrogen response site, induce the growth of human breast cancer MCF-7 cell line under hormonal deficiency conditions, confirming that it has phytoestrogens activity by estrogen deficiency It can be seen that it can be usefully used as an active ingredient in the health food for preventing and improving the symptoms of female menopausal syndrome.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 비스켓, 떡, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강 식품을 모두 포함한다.There is no particular limitation on the kind of food. Examples of foods to which the above-mentioned substances may be added include dairy products including drinks, meat, sausages, breads, biscuits, rice cakes, chocolates, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums and ice cream, various soups, Beverages, alcoholic beverages, vitamin complexes, and the like, and include all healthy foods in the conventional sense.
본 발명의 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물, 또는 이들의 분획물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강식품 중의 상기 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.The yunpanmul or hwansam vine extract of the present invention, or a fraction thereof, may be added to a food as it is or used with other foods or food ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method. The amount of the active ingredient to be mixed can be suitably determined according to its use purpose (for prevention or improvement). In general, the amount of the extract in the health food can be added to 0.1 to 90 parts by weight of the total food weight. However, in the case of long-term intake for health and hygiene or health control purposes, the amount may be below the above range, and the active ingredient may be used in an amount above the above range because there is no problem in terms of safety.
본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.The health functional beverage composition of the present invention has no particular limitation on the other ingredients other than the above-mentioned extract as an essential ingredient in the indicated ratio, and may contain various flavors or natural carbohydrates as an additional ingredient such as ordinary beverages. Examples of the above-mentioned natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose and the like; And conventional sugars such as polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol. As flavoring agents other than those mentioned above, natural flavoring agents (tauumatin, stevia extract (for example, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) can be advantageously used. The proportion of said natural carbohydrates is generally about 1-20 g, preferably about 5-12 g per 100 ml of the composition of the present invention.
상기 외에 본 발명의 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물, 또는 이들의 분획물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물, 또는 이들의 분획물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물, 또는 이들의 분획물 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
In addition to the above, the yunpanmul or hwansam vine extract of the present invention, or fractions thereof are various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), synthetic flavors and natural flavors, such as flavoring agents, coloring agents and neutralizing agents (cheese, chocolate, etc.) , Pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated drinks and the like. In addition, the yunpanmul or hwansamsu vine extract of the present invention, or a fraction thereof may contain a pulp for the production of natural fruit juice and fruit juice beverage and vegetable beverage. These components can be used independently or in combination. The proportion of such additives is not so critical, but is generally selected from the range of 0.1 to about 20 parts by weight per 100 parts by weight of the yunpanmul or hwansamvine extract, or fractions thereof.
이하 본 발명을 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 상세히 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in detail by Examples, Experimental Examples and Preparation Examples.
단, 하기 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 한정되는 것은 아니다.
However, the following Examples, Experimental Examples and Preparation Examples are merely illustrative of the present invention, and the content of the present invention is not limited by the following Examples, Experimental Examples, and Preparation Examples.
<실시예 1> 산나물 추출물의 제조Example 1 Preparation of Wild Vegetable Extract
윤판나물 및 환삼덩굴의 경우 강원도 평창에서 채집한 것을 사용하였으며, 이들을 세척하고 건조하여 사용하였다. 윤판나물은 잎과 줄기부위, 환삼덩굴은 지상부위를 세절한 후 추출용기에 넣고 에탄올(Ethanol)을 넣었다. 이들을 상온에서 3 ~ 7일 동안 방치한 후, 거름종이로 여과하여 윤판나물 추출물 및 환삼덩굴 추출물을 각각 얻을 수 있었다. 구체적으로, 윤판나물 건조물 20 g에 700 mL 에탄올을 추가 후 추출 및 농축하여 추출물 2.8 g을 얻었다. 환삼덩굴 건조물 21 g을 900 mL 에탄올을 이용해 3회 추출 후 농축하여 1.3 g의 추출물을 얻었다.
In the case of yunpan herbs and hwansam vines were collected from Pyeongchang, Gangwon-do, they were washed and dried. The leafy stems were leaves and stems, and the ground ginseng vines were chopped above the ground and put into an extraction container and ethanol (Ethanol) was added. After leaving these at room temperature for 3 to 7 days, the filter paper was filtered with a filter paper to obtain yunpannamul extract and hwansam vine extract, respectively. Specifically, 700 mL of ethanol was added to 20 g of yunpanmul dried material, followed by extraction and concentration to obtain 2.8 g of extract. 21 g of dried ginseng vines were extracted three times with 900 mL of ethanol and concentrated to obtain 1.3 g of extract.
<실시예 2> 산나물 분획물의 제조Example 2 Preparation of Wild Vegetable Fractions
상기 <실시예 1>에서 제조한 윤판나물 추출물을 n-헥산, 에틸아세테이트, n-부탄올 및 물로 순차적으로 분획하여, n-헥산에서 144.9 ㎎, 에틸아세테이트에서 149.3 ㎎, n-부탄올에서 88.3 ㎎ 및 물에서 486.3 mg의 분획물을 얻을 수 있었다. 또한, 상기 <실시예 1>에서 제조한 환삼덩굴 추출물을 n-헥산, 에틸아세테이트, n-부탄올 및 물로 순차적으로 분획하여, n-헥산에서 140.5 ㎎, 에틸아세테이트에서 145.4 ㎎, n-부탄올에서 85.2 ㎎ 및 물에서 480.5 mg의 분획물을 얻을 수 있었다. The yunpanmul extract prepared in Example 1 was sequentially partitioned into n-hexane, ethyl acetate, n-butanol and water, 144.9 mg in n-hexane, 149.3 mg in ethyl acetate, 88.3 mg in n-butanol, and 486.3 mg of fractions were obtained in water. In addition, the extract of the Korean Peninsula vine extract prepared in Example 1 was sequentially partitioned into n-hexane, ethyl acetate, n-butanol and water, and 140.5 mg in n-hexane, 145.4 mg in ethyl acetate, and 85.2 in n-butanol. 480.5 mg of the fraction could be obtained in mg and in water.
상기의 추출물 및 분획물은 DMSO(Dimethyl sulfoxide)에 녹인 후 하기 실험에 이용되었다.
The extracts and fractions were dissolved in DMSO (dimethyl sulfoxide) and used in the following experiment.
<실험예 1> 본 발명의 추출물 또는 분획물에 의한 에스트로겐 반응부위(Estrogen Responsive Element) 활성화 효과 측정Experimental Example 1 Determination of Estrogen Responsive Element Activation Effect by Extracts or Fractions of the Present Invention
상기 <실시예 1> 및 <실시예 2>에서 제조한 윤판나물 추출물, 환삼덩굴 추출물, 또는 이들의 분획물을 대상으로 에스트로겐 효과를 MCF-7 유방암 세포주(American Type of Cell Culture, ATCC)를 이용하여 측정하였다. MCF-7 세포를 1 × 105 세포/웰의 밀도로 시딩(seeding)하고 24시간 동안 37℃, 5% CO2에서 배양하였다. 이후 pERE-비탈로게닌-Luc 플라스미드(pERE-vitallogenin-Luc plasmid)를 트랜스펙션(transfection)시켰다. 24시간 배양 후 DMSO에 녹인 윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물 또는 분획물, 및 비교군으로서 대두에서 분리된 제니스테인을 10 μM 농도로 처리하였다. 이때, 대조군으로서 DMSO만을 처리하였다. 24시간 처리 후 세포를 용해(lysis)한 후 듀얼-루시퍼레이즈 분석시스템(Dual-Luciferase assay system)을 이용하여 루시퍼레이즈의 활성을 측정하고 대조군에 대한 활성을 대조분석하였다. The estrogen effect of the yunpanmul extract, hwansam vine extract, or fractions thereof prepared in <Example 1> and <Example 2> using MCF-7 breast cancer cell line (American Type of Cell Culture, ATCC) Measured. MCF-7 cells were seeded at a density of 1 × 10 5 cells / well and incubated at 37 ° C., 5% CO 2 for 24 hours. Then, the pERE-vitalogogenin-Luc plasmid was transfected (pERE-vitallogenin-Luc plasmid). After 24 hours of cultivation, the yunpanmul or hwansam vine extract or fraction dissolved in DMSO, and genistein isolated from soybean as a comparative group were treated at a concentration of 10 μM. At this time, only DMSO was treated as a control. After 24 hours, the cells were lysed, and then the luciferase activity was measured using a Dual-Luciferase assay system, and the activity of the control group was analyzed.
그 결과, 하기 표 1, 및 도 1 내지 도 3에서 보는 바와 같이, 윤판나물 추출물, 환삼덩굴 추출물, 및 이들의 분획물을 각각 농도별로 처리했을 때, 대조군에 비해 루시퍼레이즈 활성을 유의적으로 증가시켰으며, 상기 루시퍼레이즈 활성은 농도의존적으로 증가하는 것으로 나타났다(표 1, 및 도 1 내지 도 3).As a result, as shown in Table 1, and Figures 1 to 3, when the Yunpanmul extract, hwansam vine extract, and their fractions were treated for each concentration, the luciferase activity significantly increased compared to the control group. In addition, the luciferase activity was found to increase concentration-dependently (Table 1, and FIGS. 1 to 3).
<실험예 2> MTT 실험법을 통한 본 발명의 추출물 또는 분획물에 의한 MCF-7 세포 증식 정도의 비교Experimental Example 2 Comparison of MCF-7 Cell Proliferation by Extracts or Fractions of the Present Invention Through the MTT Method
상기 <실시예 1>에서 제조한 윤판나물 추출물 또는 환삼덩굴 추출물을 대상으로, MTT 실험법(MTT assay)을 통해 세포증식정도를 MCF-7 유방암 세포주(American Type of Cell Culture, ATCC)를 대상으로 측정하였다. MCF-7 유방암 세포주를 1 × 103 세포/웰의 밀도로 시딩(seeding)하고 24시간 동안 37℃, 5% CO2에서 배양하였다. 24시간 배양 뒤, 10% 숯 덱스트란 처리(charcoal dextran treated) FBS가 포함된 배지에 DMSO에 녹인 윤판나물 추출물 또는 환삼덩굴 추출물을 농도별로 처리하였으며, 양성대조군으로 에스트라디올을 처리하였고, 대조군으로는 DMSO만 처리하였다. 이후 3일 간격으로 각 에스트로젠 성분이 함유된 배지를 교체 처리하였다. 최초 처리일로부터 6일 후, MTT 실험법을 통해 세포증식 정도를 비교하였다. Measuring the degree of cell proliferation through MTT assay (MTT assay) in the yunpanmul extract or hwansam vine extract prepared in <Example 1> in the MCF-7 breast cancer cell line (American Type of Cell Culture, ATCC) It was. MCF-7 breast cancer cell lines were seeded at a density of 1 × 10 3 cells / well and incubated at 37 ° C., 5% CO 2 for 24 hours. After incubation for 24 hours, the ethanol extract or round vine extract dissolved in DMSO was treated by concentration in a medium containing 10% charcoal dextran treated FBS, and treated with estradiol as a positive control. Only DMSO was treated. Thereafter, the media containing each estrogen component was replaced at intervals of three days. Six days after the initial treatment, the degree of cell proliferation was compared by MTT assay.
그 결과, 윤판나물 추출물 또는 환삼덩굴 추출물이 MCF-7 세포주의 세포증식을 유의적으로 증가시키는 것으로 나타났다(도 4).As a result, it was found that Yunpan sprout extract or hwansam vine extract significantly increased cell proliferation of MCF-7 cell line (FIG. 4).
<실험예 3> 집락형성분석법(Clonogenic assay)를 통한 본 발명의 추출물 또는 분획물에 의한 MCF-7 세포 증식 정도의 비교Experimental Example 3 Comparison of MCF-7 Cell Proliferation by Extracts or Fractions of the Present Invention Through a Colonogenic Assay
상기 <실시예 1>에서 제조한 윤판나물 추출물 또는 환삼덩굴 추출물을 대상으로, 집락형성분석법(Clonogenic assay)를 통해 세포증식정도를 MCF-7 유방암 세포주(American Type of Cell Culture, ATCC)를 대상으로 측정하였다. MCF-7 유방암 세포주를 1 × 103 세포/웰의 밀도로 시딩(seeding)하고 24시간 동안 37℃, 5% CO2에서 배양하였다. FBS에 포함된 에스트로겐 영향을 배제하기 위해 10% charcoal dextran treated FBS가 포함된 배지에 48시간 동안 배양하였다. 이후 4일 간격으로 각 에스트로겐 성분이 함유된 배지를 교체 처리하였다. 제니스테인을 양성대조군으로써 처리하였고, 윤판나물 및 환삼덩굴의 추출물은 농도별로 처리하였으며, 대조군은 DMSO만을 처리하였다. 최초 처리로부터 12일 후, 형성된 세포 콜로니를 Coomasie Brillant Blue-R250으로 염색 후, 세포집락 형성 정도를 관찰하였다. 이후 i-MaxTM Gel Image analysis system을 이용하여 사진촬영하고, Alpha View Software를 이용하여 점밀도(Spot Density)를 측정 후, 대조군에 대한 비율을 계산한 후, 그래프로 나타내었다. In the yunpanmul extract or hwansamsu vine extract prepared in <Example 1>, the cell proliferation of the MCF-7 breast cancer cell line (American Type of Cell Culture, ATCC) through colonization assay (Clonogenic assay) Measured. MCF-7 breast cancer cell lines were seeded at a density of 1 × 10 3 cells / well and incubated at 37 ° C., 5% CO 2 for 24 hours. In order to exclude the effect of estrogen contained in FBS, it was incubated for 48 hours in a medium containing 10% charcoal dextran treated FBS. Thereafter, the medium containing each estrogen component was replaced at intervals of 4 days. Genistein was treated as a positive control group, extracts of yunpanmul and hwansam vine were treated by concentration, and the control group was treated only with DMSO. After 12 days from the initial treatment, the formed cell colonies were stained with Coomasie Brillant Blue-R250, and the degree of colony formation was observed. Thereafter, photographs were taken using an i-Max TM Gel Image analysis system, and spot density was measured using Alpha View Software.
그 결과, 윤판나물 추출물 또는 환삼덩굴 추출물이 MCF-7 세포주의 세포증식을 대조군에 비해 유의적으로 증가시키는 것으로 나타났다(도 5).
As a result, it was found that Yunpan sprout extract or hwansam vine extract significantly increased the cell proliferation of MCF-7 cell line compared to the control (Fig. 5).
하기에 본 발명의 추출물을 포함하는 약학적 조성물의 제조예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
Hereinafter, the preparation examples of the pharmaceutical composition including the extract of the present invention will be described, but the present invention is not intended to be limited thereto, but is intended to be described in detail.
<제조예 1> 산제의 제조Production Example 1 Preparation of Powder
윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물 500 ㎎Yunpanmul or Prunus vine Extract 500 mg
유당 100 ㎎
탈크 10 ㎎
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
The above ingredients are mixed and filled in an airtight cloth to prepare a powder.
<제조예 2> 정제의 제조Preparation Example 2 Preparation of Tablet
윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물 500 ㎎Yunpanmul or Prunus vine Extract 500 mg
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎2 mg magnesium stearate
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
After mixing the above components, tablets are prepared by tableting according to a conventional method for preparing tablets.
<제조예 3> 캅셀제의 제조Production Example 3 Preparation of Capsule
윤판나물 또는 환삼덩굴 분획물 500 ㎎Yunpanmul or ginseng vine fraction 500 mg
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎2 mg magnesium stearate
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
The above components are mixed according to a conventional capsule preparation method and filled in gelatin capsules to prepare capsules.
<제조예 4> 주사제의 제조Preparation Example 4 Preparation of Injection
윤판나물 또는 환삼덩굴 분획물 500 ㎎Yunpanmul or ginseng vine fraction 500 mg
주사용 멸균 증류수 적량Sterile sterilized water for injection
pH 조절제 적량pH adjuster
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
According to the conventional method for preparing an injection, the amount of the above ingredient is prepared per ampoule (2 ml).
<제조예 5> 액제의 제조Production Example 5 Preparation of Liquid
윤판나물 또는 환삼덩굴 분획물 100 ㎎Yunpanmul or
이성화당 10 g10 g of isomerized sugar
만니톨 5 g5 g of mannitol
정제수 적량Purified water
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
According to the conventional method for preparing a liquid, each component is added and dissolved in purified water, lemon flavor is added, the above components are mixed, purified water is added, the whole is adjusted to 100 ml by adding purified water, and then filled in a brown bottle. The solution is prepared by sterilization.
<제조예 6> 건강 식품의 제조Production Example 6 Preparation of Health Food
윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물 1000 ㎎Yunpannamul or Prunus vine Extract 1000 mg
비타민 혼합물 적량Vitamin mixture proper amount
비타민 A 아세테이트 70 ㎍70 μg of Vitamin A Acetate
비타민 E 1.0 ㎎Vitamin E 1.0 mg
비타민 0.13 ㎎0.13 mg of vitamin
비타민 B2 0.15 ㎎0.15 mg of vitamin B 2
비타민 B6 0.5 ㎎0.5 mg of vitamin B 6
비타민 B12 0.2 ㎍Vitamin B 12 0.2 g
비타민 C 10 ㎎
비오틴 10 ㎍10 μg biotin
니코틴산아미드 1.7 ㎎Nicotinic Acid 1.7 mg
엽산 50 ㎍
판토텐산 칼슘 0.5 ㎎Calcium Pantothenate 0.5mg
무기질 혼합물 적량Mineral mixture
황산제1철 1.75 ㎎Ferrous Sulfate 1.75 mg
산화아연 0.82 ㎎Zinc Oxide 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 ㎎Magnesium carbonate 25.3 mg
제1인산칼륨 15 ㎎Potassium monophosphate 15 mg
제2인산칼슘 55 ㎎Dibasic calcium phosphate 55 mg
구연산칼륨 90 ㎎Potassium Citrate 90 mg
탄산칼슘 100 ㎎
염화마그네슘 24.8 ㎎Magnesium chloride 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
The composition ratio of the above-mentioned vitamin and mineral mixture is mixed with a composition suitable for a health food in a preferred embodiment, but the compounding ratio may be arbitrarily modified. The granules may be prepared and used for preparing a health food composition according to a conventional method.
<제제예 7> 건강 음료의 제조Preparation Example 7 Preparation of Healthy Drinks
윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물 1000 ㎎Yunpannamul or Prunus vine Extract 1000 mg
구연산 1000 ㎎Citric acid 1000 mg
올리고당 100 g100 g oligosaccharides
매실농축액 2 gPlum concentrate 2 g
타우린 1 g1 g of taurine
정제수를 가하여 전체 900 ㎖Add 900 ml of purified water
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 건강음료 조성물 제조에 사용하였다.After mixing the above components according to the conventional healthy beverage manufacturing method, and stirred and heated at 85 ℃ for about 1 hour, the resulting solution is filtered and obtained in a sterilized 2 L container, sealed sterilization and refrigerated and then stored in a healthy beverage Used to prepare the composition.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
Although the compositional ratio is relatively mixed with a component suitable for a favorite drink, it is also possible to arbitrarily modify the compounding ratio according to the regional or national preference such as the demand class, the demanding country, and the use purpose.
<제조예 8> 기타 건강식품의 제조Preparation Example 8 Preparation of Other Health Foods
<8-1> 음료의 제조<8-1> Preparation of Drink
꿀 522 ㎎522 mg of honey
치옥토산아미드 5 ㎎Chioctosanamide 5 mg
니코틴산아미드 10 ㎎
염산리보플라빈나트륨 3 ㎎Riboflavin Sodium Hydrochloride 3 mg
염산피리독신 2 ㎎
이노시톨 30 ㎎Inositol 30 mg
오르트산 50 ㎎Orthoic acid 50 mg
윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물 0.48~1.28 ㎎Yunpanmul or Prunus vine Extract 0.48 ~ 1.28 mg
물 200 ㎖200 ml of water
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 음료를 제조하였다.
A beverage was prepared using the above-mentioned composition and content by a conventional method.
<8-2> 츄잉껌의 제조 <8-2> Preparation of Chewing Gum
껌베이스 20 %
설탕 76.36~76.76 %Sugar 76.36-76.76%
윤판나물 또는 환삼덩굴 분획물 0.24~0.64 %Yunpanmul or Prunus vine Fraction 0.24 ~ 0.64%
후르츠향 1 %1% fruit flavor
물 2 %
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 츄잉껌을 제조하였다.
Chewing gum was prepared using the above-mentioned composition and content by a conventional method.
<8-3> 캔디의 제조<8-3> Preparation of Candy
설탕 50~60 %50-60% sugar
물엿 39.26~49.66 %Starch syrup 39.26 ~ 49.66%
윤판나물 또는 환삼덩굴 분획물 0.24~0.64 %Yunpanmul or Prunus vine Fraction 0.24 ~ 0.64%
오렌지향 0.1 %Orange flavor 0.1%
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 캔디를 제조하였다.
The composition and the content of the candy were prepared using a conventional method.
<8-4> 밀가루 식품의 제조<8-4> Preparation of Flour Food
윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물 0.5 내지 5 중량부를 밀가루 100 중량부에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.
0.5 to 5 parts by weight of yunpanmul or hwansam vine extract was added to 100 parts by weight of wheat flour, and bread, cake, cookies, crackers and noodles were prepared using the mixture to prepare foods for health promotion.
<8-5> 유제품(dairy products)의 제조<8-5> Production of Dairy Products
윤판나물 또는 환삼덩굴 추출물 5 내지 10 중량부를 우유 100 중량부에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
5 to 10 parts by weight of yunpanmul or hwansam vine extract was added to 100 parts by weight of milk, and various dairy products such as butter and ice cream were prepared using the milk.
<8-6> 선식의 제조<8-6> Preparation of Wire
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입고 60 메쉬의 분말로 제조하였다. 검은콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다. 상기에서 제조한 곡물류 및 종실류와 본 발명의 윤판나물 또는 환삼덩굴 분획물을 다음과 같은 비율로 배합하여 제조하였다.Brown rice, barley, glutinous rice, and yulmu were alphad by a known method, and then dried and roasted. Black soybeans, black sesame seeds, and perilla were also steamed and dried in a known manner, and then roasted to prepare a powder having a particle size of 60 mesh. The grains and seeds produced above and the yunpannamul or hwansam vine fraction of the present invention were prepared by combining the following ratios.
현미 30 % Brown Rice 30%
율무 15 %15% rate
보리 20 %
들깨 7 % Perilla 7%
검정콩 7 % Black Bean 7%
검은깨 7 %Black sesame 7%
윤판나물 또는 환삼덩굴 분획물 3 %Yunpanmul or Prunus vine Fraction 3%
영지 0.5 %Ganoderma 0.5%
지황 0.5 %
Foxglove 0.5%
상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명 조성물인 윤판나물 또는 환삼덩굴의 추출물 또는 분획물은 뚜렷한 에스트로겐 활성을 나타내며, 산나물로서 식용이 가능한 소재로부터 유래하였기 때문에 합성 에스트로겐에 비해 상대적으로 안전한 폐경기 여성의 폐경기 증후군 증상의 예방, 완화 및 치료용 호르몬 대체용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.
As described above, the extracts or fractions of the yunpanna rim or hwansam vine which is the composition of the present invention show distinct estrogen activity and are relatively safer than the synthetic estrogen in menopausal women because they are derived from edible materials as wild herbs. It can be usefully used as a hormone replacement composition for prevention, alleviation and treatment.
Claims (10)
A composition for preventing and treating female menopausal syndrome, comprising the extract of yunpanmul ( Disporum uniflorum ) or Humulus japonicus , or a fraction thereof.
The method of claim 1, wherein the extract is water, C 1 ~ C 4 lower alcohol or a mixture thereof, characterized in that the composition for preventing and treating female menopausal syndrome.
3. The composition for preventing and treating female menopausal syndrome according to claim 2, wherein the lower alcohol is methanol or ethanol.
The method of claim 1, wherein the fraction is n-hexane fraction, ethyl acetate fraction, n-butanol fraction or water fraction obtained by sequentially dividing Yunpannamul or hwansamsu vine extract with n-hexane, ethyl acetate, n-butanol and water. A composition for preventing and treating female menopausal syndrome, characterized in that.
The method of claim 1, wherein the female menopausal syndrome is any one selected from the group consisting of hot flashes, osteoporosis, and venous thrombosis.
Health food for the prevention and improvement of female menopausal syndrome containing Disporum uniflorum or Humulus japonicus extract, or fractions thereof as an active ingredient.
The method of claim 6, wherein the extract is water, lower alcohol of C 1 ~ C 4 or a mixture of these, characterized in that the female food for preventing and improving menopause syndrome characterized in that the extraction.
The method of claim 6, wherein the lower alcohol is a female food for preventing and improving menopause syndrome, characterized in that the ethanol.
The method of claim 6, wherein the fraction is n-hexane fraction, ethyl acetate fraction, n-butanol fraction or water fraction obtained by sequentially dividing Yunpannamul or hwansamsu vine extract with n-hexane, ethyl acetate, n-butanol and water. Health foods for the prevention and improvement of female menopause syndrome, characterized in that.
The method of claim 6, wherein the female menopausal syndrome is any one selected from the group consisting of hot flashes, osteoporosis and venous thrombosis health food for preventing and improving female menopause syndrome.
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