KR20040082951A - Phytoestrogenic composition comprising an extract of chinese licorice root or isoliquiritin - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 에스트로젠 활성 및 항암 활성을 나타내는 감초(Glycyrrhiza uralensisFisch) 추출물 또는 이솔리퀴리틴(isoliquiritin)을 유효성분으로 하는 파이토에스트로젠(phytoestrogen) 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a phytoestrogen composition comprising Glycyrrhiza uralensis Fisch extract or isoliquiritin as an active ingredient exhibiting estrogen and anticancer activity.
최근 폐경기 증상의 치료를 위한 방법으로 널리 이용되고 있는 호르몬 대체요법 (hormone replacement therapy; HRT)에서 암 또는 심혈관계 질환 발생의 위험이 있는 합성 에스트로젠의 대체물로서 식물성 에스트로젠인 '파이토에스트로젠'이 주목받고 있다. 파이토에스트로젠의 대표적인 종류로는 리그난(lignans), 아이소플라본(isoflavons)이 있는데 리그난은 식물성 기름, 전곡, 채소류, 콩류, 과일이 주요한 급원 식품이고, 아이소플라본은 주로 콩과 콩류 제품에 많이 들어 있다. 이러한 파이토에스트로젠의 중요한 기능은 암세포를 증식시키는 효소의 작용을 막고 정상세포의 분열을 촉진하므로 유방암과 전립선암을 예방하는 것이다. 또한 골다공증, 심장순환계 질환 및 갱년기 증상의 예방과 치료에도 도움이 되는 것으로 알려져 있다.Phytoestrogens, phytoestrogens, have been attracting attention as a substitute for synthetic estrogens that are at risk of developing cancer or cardiovascular disease in hormone replacement therapy (HRT), which is widely used as a method for treating menopausal symptoms. . Representative types of phytoestrogens are lignans and isoflavons, which are the main sources of vegetable oils, whole grains, vegetables, legumes, and fruits, and isoflavones are mainly found in soybean and legume products. The important function of phytoestrogens is to prevent breast cancer and prostate cancer by preventing the action of enzymes that proliferate cancer cells and promote the division of normal cells. It is also known to help prevent and treat osteoporosis, cardiovascular disease and menopausal symptoms.
감초는 콩과 다년초로 시베리아, 몽고, 중국 북부 등지에서 나는 약용식물이다. 감초 추출물은 글리시리직 산(glycyrrhizic acid), 글리시리헤티민 산(glycyrrhetic acid), 리퀴리틴(liquiritin), 이솔리퀴리틴(iso-liquiritin) 등의 정류된 성분으로 사용되고 있으며, 특히 천연 항생제의 역할을 하여 땀띠나 여드름에도 효과가 좋으며 염증을 진정시키는 소염 작용도 갖고 있다.Licorice is a legume and perennial herb, a medicinal plant found in Siberia, Mongolia and northern China. Licorice extract is used as a rectified component such as glycyrrhizic acid, glycyrrhetic acid, liquiritin, iso-liquiritin, and especially natural antibiotics. It acts as a good for sweat bands and acne, and also has anti-inflammatory effects to calm inflammation.
이에 본 발명자들은 새로운 파이토에스트로젠을 찾기 위해 연구를 거듭한 결과, 감초의 추출물 및 이솔리퀴리틴이 에스트로겐 활성을 나타내면서도 유방암 세포 등에 대해 증식 억제 효과를 나타냄을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors have completed the present invention by confirming that the extract of licorice and isoliquiritin exhibits proliferation inhibitory effect on breast cancer cells and the like while showing an estrogen activity as a result of repeated studies to find a new phytoestrogen.
본 발명의 목적은 에스트로젠 활성을 나타내면서도 암 세포에 대해 증식 억제 효과가 있는 새로운 파이토에스트로젠 및 이를 함유하는 조성물을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a new phytoestrogen and a composition containing the same, while exhibiting estrogen activity and having a proliferation inhibitory effect on cancer cells.
도 1은 효모 분석법(Yeast assay)으로 측정한 감초 추출물(a) 및 이솔리퀴리틴(b)의 에스트로젠 반응(ER)이고,1 is an estrogen reaction (ER) of licorice extract (a) and isoliquiritin (b) measured by a yeast assay,
도 2는 효모 분석법으로 측정한 감초 추출물의 안드로젠 반응(AR)이고,Figure 2 is an androgen reaction (AR) of licorice extract measured by the yeast assay,
도 3은 다양한 농도의 EtOH로 추출한 감초 추출물의 MCF-7 유방암 세포 및 비스페놀 A에 대한 억제 효과를 나타낸 것이고,Figure 3 shows the inhibitory effect on MCF-7 breast cancer cells and bisphenol A of licorice extract extracted with various concentrations of EtOH,
도 4는 다양한 농도의 이솔리퀴틴의 MCF-7 유방암 세포에 대한 억제 효과를 나타낸 것이고,Figure 4 shows the inhibitory effect of various concentrations of isoliquitin on MCF-7 breast cancer cells,
도 5는 추출 용매를 달리하여 제조한 감초 추출물의 MCF-7 유방암 세포 및 비스페놀 A에 대한 억제 효과를 나타낸 것이고,5 shows the inhibitory effect on MCF-7 breast cancer cells and bisphenol A of licorice extract prepared by different extraction solvents,
도 6은 추출 용매를 달리하여 제조한 감초 추출물의 MCF-7 유방암 세포에 대한 세포독성을 나타낸 것이고,Figure 6 shows the cytotoxicity of MCF-7 breast cancer cells of licorice extract prepared by different extraction solvents,
도 7은 조직병리학적 검사를 위한 자궁 및 질의 절개 위치를 나타낸 것이고,Figure 7 shows the location of the incision of the uterus and vagina for histopathological examination,
도 8은 감초 추출물 및 BPA의 투여 기간 동안의 체중변화를 나타낸 것이고,8 shows the weight change during the administration of licorice extract and BPA,
도 9는 감초 추출물 처리 후 자궁의 절대 중량을 나타낸 것이고,Figure 9 shows the absolute weight of the uterus after licorice extract treatment,
도 10은 감초 추출물 처리 후 자궁의 상대 중량을 나타낸 것이고,Figure 10 shows the relative weight of the uterus after licorice extract treatment,
도 11은 감초 추출물 처리 후 질의 절대 중량을 나타낸 것이고,11 shows the absolute weight of the vagina after licorice extract treatment,
도 12는 감초 추출물 처리 후 질의 상대 중량을 나타낸 것이고,12 shows the relative weight of the vagina after licorice extract treatment,
도 13은 자궁 상피세포의 조직사진이고,13 is a tissue picture of uterine epithelial cells,
도 14는 질 상피세포의 조직사진이다.14 is a histogram of vaginal epithelial cells.
상기 목적에 따라, 본 발명에서는 이솔리퀴리틴을 포함하는 감초(Glycyrrhiza uralensisFisch)의 유기 용매 추출물 또는 이솔리퀴리틴을 유효성분으로 함유하는 파이토에스트로젠(phytoestrogen) 조성물을 제공한다.According to the above object, the present invention provides a phytoestrogen composition containing an organic solvent extract or isoliquiritin of Glycyrrhiza uralensis Fisch containing isoliquiritin as an active ingredient.
또한, 본 발명에서는 이솔리퀴리틴을 유효성분으로 함유하는 파이토에스트로젠 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a phytoestrogen composition containing isoliquiritin as an active ingredient.
본 발명의 감초 추출물은, 감초 또는 이의 건조물을 유기용매로 추출함으로써 제조할 수 있다.The licorice extract of the present invention can be produced by extracting licorice or its dried product with an organic solvent.
구체적으로는, 감초 또는 이의 건조물 100 g에 유기 용매 1 내지 5 ℓ를 가하고 60 내지 90 ℃에서 추출하는 공정을 1 내지 3회 반복한 후, 얻어진 추출액을 여과하고 감압 농축한 다음 건조함으로써 감초 추출물을 얻을 수 있다.Specifically, 1 to 5 L of an organic solvent is added to 100 g of licorice or its dried product, and the extraction process at 60 to 90 ° C. is repeated 1 to 3 times. After that, the obtained extract is filtered, concentrated under reduced pressure, and dried to obtain licorice extract. You can get it.
본 발명에서 상기 추출 공정에 사용할 수 있는 유기 용매로는 C1-C4알콜, C1-C4알콜 수용액, 에틸 아세테이트(EtOAc), 트리클로로메틸(CHCl3), 헥산 등을 예시할 수 있으며, 저급 알콜로 바람직한 것은 메탄올 및 에탄올이다.Examples of the organic solvent that may be used in the extraction process in the present invention include C 1 -C 4 alcohol, C 1 -C 4 alcohol aqueous solution, ethyl acetate (EtOAc), trichloromethyl (CHCl 3 ), hexane and the like. Preferred lower alcohols are methanol and ethanol.
또한, 이솔리퀴리틴은 화학적으로 합성할 수 있으며, 감초로부터 추출할 수도 있다. 구체적으로, 감초 또는 이의 건조물 100 g에 유기 용매 1 내지 5 ℓ를 가하고 60 내지 90 ℃에서 추출한 다음, 에틸 아세테이트(EtOAc) 및 트리클로로메틸(CHCl3)로 추출하여 에틸 아세테이트 층의 추출물을 수득하고, 이를 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(용출액 = CHCl3: MeOH = 4:1) 후 역상 칼럼 크로마토그래피(용출액 = MeOH : H2O: = 3:2)하여 수득할 수 있으며, 이의 화학 구조는 하기 화학식 1에 나타낸 바와 같다.In addition, isoliquirithin can be synthesized chemically and can be extracted from licorice. Specifically, 1 to 5 L of an organic solvent was added to 100 g of licorice or its dried product, extracted at 60 to 90 ° C., and then extracted with ethyl acetate (EtOAc) and trichloromethyl (CHCl 3 ) to obtain an extract of the ethyl acetate layer. This can be obtained by silica gel column chromatography (eluent = CHCl 3 : MeOH = 4: 1) and then reverse phase column chromatography (eluent = MeOH: H 2 O: = 3: 2), and the chemical structure thereof is represented by the following Chemical Formula 1 As shown in.
본 발명의 감초 추출물 및 이솔리퀴리틴은 에스트로젠성은 나타내나 안드로젠성은 나타내지 않고, 내분비계 장애물질인 비스페놀-A의 활성을 억제하며, 유방암 세포를 비롯한 암 세포의 증식을 저해하므로, 파이토에스트로젠으로서 호르몬 대체 치료 및 유방암의 예방 및 치료를 위해 사용될 수 있다. 본 발명의 감초 추출물들은 100 ㎍/ml의 농도에서, 이솔리퀴리틴은 100 ㎍/ml의 농도에서 MCF-7 유방암 세포주의 증식을 억제하였으며, 특히 감초의 헥산, CHCl3및 EtOAc 추출물들은 10 ㎍/ml의 낮은 농도에서도 증식 억제 효과를 나타내었다.Licorice extract and isoliquiritin of the present invention exhibits estrogen but no androgens, inhibits the activity of bisphenol-A, an endocrine barrier, and inhibits the proliferation of cancer cells including breast cancer cells. It can be used for alternative treatment and for the prevention and treatment of breast cancer. The licorice extracts of the present invention inhibited the proliferation of MCF-7 breast cancer cell lines at a concentration of 100 μg / ml and isoliquiritin at a concentration of 100 μg / ml, in particular hexane, CHCl 3 and EtOAc extracts of licorice The low concentration of / ml showed a proliferation inhibitory effect.
이에 따라, 본 발명에서는 이솔리퀴리틴을 포함하는 감초의 유기 용매 추출물 또는 이솔리퀴리틴을 유효 성분으로 함유하는, 파이토에스트로젠 조성물을 제공한다.Accordingly, the present invention provides a phytoestrogen composition comprising an organic solvent extract or isoliquiritin of licorice containing isoliquiritin as an active ingredient.
본 발명의 감초 추출물 또는 이솔리퀴리틴은 통상적인 방법에 따라 약제학적으로 허용되는 적절한 담체 또는 부형제와 혼합하거나 희석제로 희석하여 상기한 기능을 갖는 약학 조성물을 제조할 수 있다. 적합한 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자이리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 상기 약학 조성물은 충전제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 포유 동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 제형은 정제, 알약, 분말, 새세이(sachet), 엘릭서(elixir), 현탁액, 에멀젼, 용액, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 멸균 주사용액, 멸균 분말 등의 형태일 수 있다.Licorice extract or isoliquiritin of the present invention may be mixed with a suitable pharmaceutically acceptable carrier or excipient or diluted with a diluent according to conventional methods to prepare a pharmaceutical composition having the above functions. Examples of suitable carriers, excipients and diluents include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, ziitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, Microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. The pharmaceutical composition may further include fillers, anti-coagulants, lubricants, wetting agents, fragrances, emulsifiers, preservatives and the like. Pharmaceutical compositions of the invention can be formulated using methods well known in the art to provide rapid, sustained or delayed release of the active ingredient after administration to a mammal. The formulations may be in the form of tablets, pills, powders, sachets, elixirs, suspensions, emulsions, solutions, syrups, aerosols, soft or hard gelatin capsules, sterile injectable solutions, sterile powders and the like.
본 발명의 약학 조성물은 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있다. 본 발명의 감초 추출물 및 분획물의 통상적인 1일 투여량은 1 내지 500 mg/kg 체중, 바람직하게는 10 내지 100 mg/kg 체중의 범위이고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있으며, 이솔리퀴리틴의 통상적인 1일 투여량은 0.1 내지 50 mg/kg 체중, 바람직하게는 1 내지 10 mg/kg 체중의 범위이고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 활성 성분의 실제 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별 및 체중, 및 질환의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 하며, 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.The pharmaceutical compositions of the invention can be administered via several routes including oral, transdermal, subcutaneous, intravenous or intramuscular. Typical daily dosages of licorice extracts and fractions of the present invention range from 1 to 500 mg / kg body weight, preferably from 10 to 100 mg / kg body weight, and can be administered once or in several doses, isoli Typical daily doses of quiritine range from 0.1 to 50 mg / kg body weight, preferably 1 to 10 mg / kg body weight, and may be administered once or in several doses. However, it is to be understood that the actual dosage of the active ingredient should be determined in light of several relevant factors such as the route of administration, the age, sex and weight of the patient, and the severity of the disease, and therefore the dosage should in any way be regarded as the present invention. It does not limit the scope of.
또한, 본 발명의 감초 추출물 또는 이솔리퀴리틴은 파이토에스트로젠 활성및 암 예방을 통한 건강 증진의 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은, 일반적으로 건강 식품의 경우 전체 식품 중량의 0.1 내지 50 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 1 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료의 경우 100 m1를 기준으로 0.1 내지 50 g, 바람직하게는 0.1 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다. 또한, 이솔리퀴리틴은 일반적으로 건강 식품의 경우 전체 식품 중량의 0.01 내지 5 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 0.1 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료의 경우 100 m1를 기준으로 0.01 내지 5 g, 바람직하게는 0.01 내지 0.1 g의 비율로 가할 수 있다.In addition, licorice extract or isoliquiritin of the present invention may be added to food or beverages for the purpose of health promotion through phytoestrogens activity and cancer prevention. At this time, the amount of the extract in the food or beverage, in the case of healthy foods can generally be added to 0.1 to 50% by weight, preferably 0.1 to 1% by weight of the total food weight, based on 100 m1 for healthy drinks 0.1 to 50 g, preferably 0.1 to 1 g may be added. In addition, isoliquiritin can generally be added at 0.01 to 5% by weight, preferably 0.01 to 0.1% by weight of the total food weight for healthy foods, 0.01 to 5 g based on 100 m1 for healthy drinks, Preferably it can be added in the ratio of 0.01-0.1 g.
본 발명의 건강 음료 조성물은 필수 성분으로서 상기 감초 추출물 또는 이솔리퀴리틴을 함유하는 외에는 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.The health beverage composition of the present invention, except for containing the licorice extract or isoliquiritin as an essential ingredient, there is no particular limitation on the liquid component and may contain various flavors or natural carbohydrates, etc. as additional ingredients, as in general beverages. .
상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 크실리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등), 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.Examples of the above-mentioned natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose and the like; And conventional sugars such as polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol. As flavoring agents other than those mentioned above, natural flavoring agents (tauumatin, stevia extract (e.g., rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.), and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) can be advantageously used. have.
상기 외에 본 발명의 음료에는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제,안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.In addition to the above, the beverage of the present invention includes various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavors such as synthetic flavors and natural flavors, coloring and neutralizing agents (such as cheese and chocolate), pectic acid and salts thereof, alginic acid and the like. Salts, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated beverages, and the like. These components can be used independently or in combination.
이하, 하기 실시예에 의하여 본 발명을 좀더 상세하게 설명하고자 한다. 단. 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the following examples. only. The following examples are only for illustrating the present invention, but the scope of the present invention is not limited thereto.
실시예 1: 감초 추출물의 제조Example 1: Preparation of Licorice Extract
감초 100 g당 2 L의 80 % EtOH을 첨가한 후 환류 냉각장치를 이용하여 70 내지 80 ℃에서 3시간 동안 1차 추출한 후 냉각하고, 여과지(Whatman No. 1 filter) 상에서 여과하였다. 필요에 따라 여과지 상의 잔류물을 대상으로 1차와 동일한 조건으로 2차 추출한 후 여과하였다. 여액을 농축하여 EtOH를 제거하고 동결건조하였다.After addition of 2 L of 80% EtOH per 100 g of licorice, the extract was first extracted at 70 to 80 ° C. for 3 hours using a reflux condenser, followed by cooling and filtering on a filter paper (Whatman No. 1 filter). If necessary, the residue on the filter paper was subjected to second extraction under the same conditions as the first, followed by filtration. The filtrate was concentrated to remove EtOH and lyophilized.
한편, CHCl3, 헥산, 70 % MeOH, EtOAc, 물, 20, 40 및 60 % EtOH 수용액, 및 100 % EtOH을 이용하여 상기와 동일한 방법으로 추출물을 얻어 동결건조하였다.Meanwhile, extracts were obtained by lyophilization using CHCl 3 , hexane, 70% MeOH, EtOAc, water, 20, 40 and 60% EtOH aqueous solution, and 100% EtOH in the same manner as described above.
동결건조된 각 추출물 100 mg을 1 ml의 80 % EtOH에 녹여 100 mg/ml의 시료 원액을 만든 후 필요에 따라 80 % 에탄올을 사용하여 원하는 농도로 희석하였다.100 mg of each lyophilized extract was dissolved in 1 ml of 80% EtOH to prepare a 100 mg / ml sample stock solution, and diluted to the desired concentration using 80% ethanol as needed.
실시예 2: 감초 추출물로부터 이솔리퀴리틴의 분리Example 2: Isolation of Isoliquiritin from Licorice Extract
상기 실시예 1에서 수득된 EtOH 층 추출물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(용출액 = CHCl3: MeOH = 4:1)한 후 역상 칼럼 크로마토그래피(용출액 = MeOH : H2O: = 3:2)하여 노란색 분말의 이솔리퀴리틴을 수득하였다.The EtOH layer extract obtained in Example 1 was subjected to silica gel column chromatography (eluent = CHCl 3 : MeOH = 4: 1), and then reversed phase column chromatography (eluent = MeOH: H 2 O: = 3: 2) to give a yellow powder. Isoliquiritin was obtained.
이의1H-NMR 및13C-NMR 데이터는 하기 표 1에 나타내었다.Its 1 H-NMR and 13 C-NMR data is shown in Table 1 below.
시험예 1: 효모 분석(yeast assay)Test Example 1: Yeast Assay
상기 실시예 1 및 2에서 제조한 감초 추출물 및 이솔리퀴리틴이 호르몬 활성을 나타내는지를 확인하기 위하여, 인간 에스트로젠 또는 안드로젠 수용체를 발현하는 재조합 효모에 상기 추출물을 적용하여 호르몬 생성능을 조사하였다.In order to confirm whether the licorice extract and isoliquiritin prepared in Examples 1 and 2 exhibited hormonal activity, the extract was applied to recombinant yeast expressing human estrogen or androgen receptor to investigate the hormone production ability.
인간 에스트로젠 수용체(hER) 또는 안드로젠 수용체(hAR) 유전자와 리포터로서 β-gal 유전자를 발현하는 벡터를 포함하는 재조합 효모인 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) ER+ LYS 8127(Duke University Medical Center(미국)의 Dr. Donald P. McDonnell로부터 공여 받음)를 효모 질소 기질(아미노산 부재, 67 mg/ml), 1 % 덱스트로즈, L-리신(36 ㎍/ml) 및 L-히스티딘(24 ㎍/ml)을 첨가한 선택적 성장 배지(Sigma, USA)에 넣은 후 진탕 배양기(200 rpm)에서 증식시켰다. 증식된 효모를 배지에 적정 농도로 희석하고 500 μM의 CuSO4(Sigma, USA)를 첨가한 후 50 ㎖ 튜브에 적정량을 분주하였다. 효모 에스트로젠 반응(yeast estrogen response; YER) 실험군과 효모 안드로젠 반응(yeast androgen response; YAR) 실험군에는 상기 실시예 1에서 제조한 100 ㎍/ml 및 1 mg/ml 농도의 100 % EtOH 감초 추출물을 0.1 중량%로 처리하였으며, 실시예 2에서 분리한 10 ㎍/ml 및 100 ㎍/ml 농도의 이솔리퀴리틴을 처리하였다. 대조군에는 디메틸 설폭사이드(Sigma, USA)를 처리하였다. 또한, 양성 대조군으로서 에스트로젠성 시험에서는 에스트라디올을, 안드로젠성 시험에서는 노르-테스토스테론을 각각 10-9M을 DMSO에 용해시켜 처리하였다. Saccharomyces cerevisiae ER + LYS 8127 (Duke University Medical Center) Donated from Dr. Donald P. McDonnell, USA), yeast nitrogen substrate (without amino acid, 67 mg / ml), 1% dextrose, L-lysine (36 μg / ml) and L-histidine (24 μg / ml) was added to selective growth medium (Sigma, USA) and then grown in shake incubator (200 rpm). Proliferated yeast was diluted to the appropriate concentration in the medium, 500 μM of CuSO 4 (Sigma, USA) was added and the appropriate amount was dispensed into 50 ml tubes. In the yeast estrogen response (YER) test group and the yeast androgen response (YAR) test group, 100% EtOH licorice extract of 100 μg / ml and 1 mg / ml concentration prepared in Example 1 was used. %, And isoliquiritin at 10 μg / ml and 100 μg / ml concentrations isolated in Example 2. The control group was treated with dimethyl sulfoxide (Sigma, USA). In addition, as a positive control in the estrogen sex estradiol, the androgen resistance test test Nord - to the 10 -9 M, respectively were treated with testosterone was dissolved in DMSO.
각각의 물질이 처리된 상기 실험군 및 대조군을 진탕 배양기 (200 rpm)에서 18시간 동안 배양한 후 각 튜브의 배양액을 100 ㎍/ml 및 1 mg/ml의 동일한 농도로 희석하고 96 웰 마이크로타이터 플레이트(Nunc, Netherland)의 각 웰에 100 ㎕씩 분주하였다. 각 웰에 2 ㎎/㎖ o-니트로페닐-β-D-갈락토피라노사이드(Sigma, USA), 0.1 % 라우릴 설페이트(Sigma, USA), 50 mM β-머캅토에탄올(BDH chemical LTD, England) 및 200 U/㎖ 옥살리티케이즈(oxalyticase; Enzogenetics, USA)를 포함하는 Z 완충액을 100 ㎕씩 분주하고, 20분 후 발색 정도를 마이크로플레이트 판독기로 420 nm 파장에서 측정하였다.The experimental group and the control group treated with each material were incubated for 18 hours in a shake incubator (200 rpm), and then the culture solution of each tube was diluted to the same concentration of 100 µg / ml and 1 mg / ml, and the 96-well microtiter plate. 100 μl was dispensed into each well of (Nunc, Netherland). Each well contains 2 mg / ml o-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside (Sigma, USA), 0.1% lauryl sulfate (Sigma, USA), 50 mM β-mercaptoethanol (BDH chemical LTD, England) and Z buffer containing 200 U / ml oxalyticase (Enzogenetics, USA) were dispensed in 100 μl aliquots and after 20 minutes the color development was measured at 420 nm wavelength with a microplate reader.
모든 데이타는 통계 프로그램인 SAS를 이용하여 ANOVA 분석 후 던넷t테스트(Dunnett'st-test)를 실시하여 유의수준 P<0.05에서 분석하였다.All data are subjected to deonnet t test (Dunnett's t -test) and then analyzed using ANOVA statistical program SAS was analyzed at the significance level of P <0.05.
상기 방법으로 측정한 감초 추출물 및 이솔리퀴리틴의 에스트로젠 반응(ER) 및 안드로젠 반응(AR)은 도 1a, 1b 및 도 2에 각각 나타내었다.The estrogen reaction (ER) and androgen reaction (AR) of licorice extract and isoliquiritin measured by the above method are shown in FIGS. 1A, 1B and 2, respectively.
도 1a에서 볼 수 있는 바와 같이, 감초 추출물은 100 ㎍/ml에서 가장 높은 에스트로젠성을 나타내었고, 100 ㎍/ml과 1 mg/ml에서 농도의존적으로 에스트로젠성을 나타내었으며, 이들의 에스트로젠성은 양성대조군인 에스트라디올보다 높은 수준이었으며, 도 1b에서 볼 수 있는 바와 같이, 이솔리퀴리틴은 10 ㎍/ml에서 가장 높은 에스트로젠성을 나타내었고, 10 ㎍/ml과 100 ㎍/ml에서 농도의존적으로 에스트로젠성을 나타내었으며, 이들의 에스트로젠성은 양성대조군인 에스트라디올보다 높은 수준이었다.As can be seen in Figure 1a, licorice extract showed the highest estrogenity at 100 ㎍ / ml, concentration-dependent estrogen at 100 ㎍ / ml and 1 mg / ml, their estrogenity positive control group It was higher than phosphorus estradiol, and as can be seen in FIG. 1B, isoliquiritin showed the highest estrogenity at 10 μg / ml and concentration-dependent estrogen at 10 μg / ml and 100 μg / ml Their estrogenity was higher than that of estradiol, a positive control.
또한, 도 2의 안드로젠성 검색 결과에서, 감초 추출물은 1 mg/ml의 농도에서양성 대조군으로 사용된 노르-테스토스테론보다는 적지만 대조군보다는 높은 안드로젠성을 나타내었다. 그러나 100 ㎍/ml의 농도에서는 안드로젠성이 나타나지 않는 것으로 확인되었다.In addition, in the androgenicity search result of FIG. 2, the licorice extract showed less androgenicity than the nor-testosterone used as a positive control at a concentration of 1 mg / ml. However, it was confirmed that androgenicity did not appear at the concentration of 100 μg / ml.
시험예 2: MCF-7 세포주의 증식 억제 및 비스페놀-A(BPA) 활성 억제 분석Test Example 2: Analysis of inhibition of proliferation and inhibition of bisphenol-A (BPA) activity of MCF-7 cell line
5 x 104cells/ml의 MCF-7 세포(ATCC HTB-22)를 6-웰 배양판에 넣고 24시간 동안 부착시킨 후, 5 % 우 태아 혈청(FBS)과 3 ㎖/ℓ의 PSN 항생제 혼합물(Gibco, USA)이 첨가된 페놀-레드 결핍 D-배지(Gibco, USA)로 5 % CO2, 95 % 공기, 100 % 습도, 37℃가 유지되는 배양기에서 24시간 배양하였다.5 x 10 4 cells / ml of MCF-7 cells (ATCC HTB-22) were placed in a 6-well culture plate and allowed to attach for 24 hours, followed by a mixture of 5% fetal bovine serum (FBS) and 3 ml / l PSN antibiotic (Gibco, USA) added phenol-red deficient D-medium (Gibco, USA) was incubated for 24 hours in an incubator maintained at 5% CO 2 , 95% air, 100% humidity, 37 ℃.
24시간 후 배지를 제거하고, 배양된 세포들을 5 % DCC-FBS (dextran-coated charcoal-stripped FBS; Hyclone, USA)와 3 ml/ℓ의 PSN 항생제 혼합물을 포함하는 페놀-레드 결핍 D-배지(시험 배지)에 실시예 1에서 제조한 다양한 감초 추출물들(10 ㎍/ml, 10 ㎍/ml 또는 1 mg/ml 농도)이 1 중량%로 첨가된 배지 또는 실시예 2에서 제조한 이솔리퀴리틴이 100 ㎍/ml, 200 ㎍/ml, 300 ㎍/ml, 400 ㎍/ml 또는 500 ㎍/ml 농도로 첨가된 배지에서 각각 37℃로 3일 동안 배양하였다. 그 기간 동안 각 시험 배지는 한 번 교체해주고, 72시간 후 0.1 N NaOH (Sigma Co.) 1 ㎖로 처리하여 세포를 수거한 후 분광광도계로 OD 260 nm에서 DNA 함량을 측정하였다.After 24 hours, the medium was removed and the cultured cells were removed with a phenol-red deficient D-medium containing 5% DCC-FBS (dextran-coated charcoal-stripped FBS; Hyclone, USA) and 3 ml / L PSN antibiotic mixture. Test lipodium) or the isoliquiritin prepared in Example 2 to which the licorice extract prepared in Example 1 (10 μg / ml, 10 μg / ml or 1 mg / ml concentration) was added at 1 wt% The medium was incubated at 37 ° C. for 3 days in 100 μg / ml, 200 μg / ml, 300 μg / ml, 400 μg / ml or 500 μg / ml respectively. During this period, each test medium was changed once, and after 72 hours, cells were harvested by treatment with 1 ml of 0.1 N NaOH (Sigma Co.) and the DNA content was measured at OD 260 nm with a spectrophotometer.
한편, 감초 추출물이 내분비계 장애물질로서 암 유발 활성이 있는 비스페놀-A(BPA)의 활성을 억제할 수 있는지를 조사하기 위해, 상기 실험에서 감초 추출물 대신에 BPA를 처리하거나, 감초 추출물과 BPA를 동시에 처리하였다. 이 때 BPA는 예비 시험에서 MCF-7 세포 증식 효과가 가장 높았던 16 ㎍/ml을 처리하였으며, 감초 추출물과 BPA 동시 처리군에서 감초 추출물은 감초 단독 처리군과 동량이 처리되도록 2배 농축하여 사용하였다.On the other hand, to investigate whether licorice extract can inhibit the activity of cancer-inducing bisphenol-A (BPA) as an endocrine disruptor, in the experiments, BPA instead of licorice extract, or licorice extract and BPA It was treated at the same time. At this time, BPA was treated with 16 ㎍ / ml, the highest MCF-7 cell proliferation effect in the preliminary test, and licorice extract in the licorice extract and BPA simultaneous treatment group was used twice concentrated to the same amount as licorice alone treatment group. .
도 3은 다양한 농도의 EtOH로 추출한 감초 추출물의 MCF-7 유방암 세포와 비스페놀 A 억제 효과를 나타낸 것으로, 여기에서 추출용매인 EtOH의 농도를 0 내지 100 %로 하여 추출한 감초 추출물을 이용하여 배양한 MCF-7 세포에서는 에탄올의 농도가 증가할수록 증식 억제 효과가 증가하였다. 또한, 감초 EtOH 0 % 추출물(물 추출물)은 MCF-7 유방암 세포와 비스페놀 A에 대하여 억제 효과를 나타내지 못했다.Figure 3 shows MCF-7 breast cancer cells and bisphenol A inhibitory effect of licorice extract extracted with various concentrations of EtOH, MCF cultured using the licorice extract extracted with the concentration of EtOH as an extraction solvent from 0 to 100% In -7 cells, the effect of inhibiting proliferation increased with increasing ethanol concentration. In addition, licorice EtOH 0% extract (water extract) did not show an inhibitory effect on MCF-7 breast cancer cells and bisphenol A.
도 4는 다양한 농도의 이솔리퀴리틴의 MCF-7 유방암 세포 억제 효과를 나타낸 것으로, 여기에서 보듯이, 100 ㎍/ml 농도의 이솔리퀴리틴에서는 유방암 세포의 유의적인 증식을 보이지 않았으며, 특히 300 ㎍/ml 농도의 이솔리퀴리틴에서는 우수한 유방암 증식 억제효과를 나타내었다.Figure 4 shows the inhibitory effect of MCF-7 breast cancer cells of various concentrations of isoliquirithin, as shown here, in the isoliquiritin concentration of 100 ㎍ / ml did not show a significant proliferation of breast cancer cells, in particular Isoliquiritin at 300 ㎍ / ml concentration showed excellent breast cancer growth inhibitory effect.
도 5는 용매에 따른 감초 추출물의 MCF-7 유방암 세포와 비스페놀 A 억제 효과를 나타낸 것으로, 헥산, EtOAc, CHCl3, 70 % MeOH로 각각 추출한 감초 추출물을 80 % EtOH로 103배 및 104배 희석하여 10 ㎍/ml 또는 100 ㎍/ml 농도로 사용한 결과이다. 여기서 시험 물질들은 100배와 1000배 희석율에서 세포의 형태가 변하는 등의 세포 독성 경향을 보여 104배 희석하여 사용하였다.5 shows the inhibitory effect of licorice extract according to the solvent MCF-7 breast cancer cells and bisphenol A. Licorice extract extracted with hexane, EtOAc, CHCl 3 , 70% MeOH, respectively, 10 3 times and 10 4 times with 80% EtOH. Dilution resulted in 10 μg / ml or 100 μg / ml. The test compounds were diluted to show cytotoxicity tendency such as changing the shape of the cell at 100-fold and 1000-fold dilution for 10 four times.
도 5에서 볼 수 있는 바와 같이, 각 용매를 사용하여 제조한 10 ㎍/ml 내지 100 ㎍/ml 농도의 감초 추출물들이 MCF-7 유방암 세포와 비스페놀 A 억제 효과를 나타내었다.As can be seen in FIG. 5, licorice extracts of 10 μg / ml to 100 μg / ml prepared using each solvent exhibited inhibitory effects on MCF-7 breast cancer cells and bisphenol A.
한편, 100배 희석한 1 mg/ml의 농도의 감초 추출물을 사용하여 상기 실험을 반복한 경우, 추출물의 농도가 높아 흡광도 측정이 불가능하였다. 따라서 추출물 처리 후 살아 있는 세포를 트리판 블루(Trypan blue)로 염색하여 계수하는 트리판 블루 염색법을 통해 항-증식 효과를 측정하였다. 결과는 도 6에 나타내었다.On the other hand, when the experiment was repeated using a licorice extract of 100 mg diluted 1 mg / ml, the concentration of the extract was high, it was impossible to measure the absorbance. Therefore, the anti-proliferative effect was measured by trypan blue staining, which counts and counts living cells by trypan blue after extract treatment. The results are shown in FIG.
도 6은 헥산, EtOAc, CHCl3, 70 % MeOH를 추출용매로 사용하여 추출한 감초 추출물을 1 mg/ml 농도에서 72 시간 처리 후 MCF-7 세포수를 관찰한 결과로서, 모든 추출물에서 암 세포 사멸 효과가 관찰되었다. 도 6으로부터 알 수 있듯이, 세포 수 또한 현저하게 감소되어 사멸되었음을 알 수 있다.6 is a result of observing the number of MCF-7 cells after 72 hours treatment of licorice extract extracted using hexane, EtOAc, CHCl 3 , 70% MeOH as the extraction solvent at 1 mg / ml concentration, cancer cell death in all extracts The effect was observed. As can be seen from Figure 6, it can be seen that the number of cells also decreased significantly and died.
시험예 3: 미성숙 자궁증식 시험법(Immature Uterotrophic Assay)Test Example 3: Immature Uterotrophic Assay
MCF-7 세포주를 이용한 세포 증식 분석에서 억제효과가 있었던 감초의 80 % EtOH 추출물을 이용하여 미성숙 자궁증식 시험법(Kang, K.S. et al.,Toxicology Letters, 118, 109-115, 2000)을 실시하였다.Immature uterine proliferation assay (Kang, KS et al., Toxicology Letters , 118, 109-115, 2000) was performed using 80% EtOH extract of licorice, which had inhibitory effect in cell proliferation assay using MCF-7 cell line. .
40 마리의 생후 18일 된 미성숙 스프라그-다우리(Sprague-Dawley) 랫트를 온도 22±3℃, 상대습도 50±10 %, 환기 회수 10-12회/hr, 조명시간 12시간, 조도150-200 룩스의 사육 환경에서 AIN-76A 식이(1 kg 당 티아민 HCl 0.6 g, 리보플라빈 0.6 g, 피리독신 HCl 0.7 g, 니아신 3.0 g, 판토텐산 칼슘 1.6 g, 엽산 0.2 g, 비오틴 0.02 g, 비타민 B12 (0.1%) 1.0 g, 비타민 A 팔미테이트 (500,000 IU/g) 0.8 g, 비타민 D3 (400,000 IU/g) 0.25 g, 비타민 E 아세테이트 (500 IU/g) 10.0 g, 메나디온 소듐 비설파이트 0.08 g, 미세 분말 슈크로즈 981.15 g)를 공급하면서 유지하였다. 각 랫트에게 비스페놀 A(40 mg/ml/100 g 체중) 및 감초 EtOH 추출물(10 mg 또는 50 mg/ml/100g 체중)을 각각 옥수수유에 현탁시켜 3일 동안 매일 1회씩 동시에 피하주사한 후, 마지막 투여일로부터 24시간 후에 경추탈골하여 치사시켰다.Forty 18-day-old immature Sprague-Dawley rats were subjected to temperature 22 ± 3 ° C, relative humidity 50 ± 10%, ventilation times 10-12 times / hr, lighting time 12 hours, illuminance 150- AIN-76A diet in a 200 lux breeding environment (0.6 g thiamine HCl, 0.6 g riboflavin 0.6 g, pyridoxine HCl 0.7 g, niacin 3.0 g, calcium pantothenate 1.6 g, folic acid 0.2 g, biotin 0.02 g, vitamin B12 (0.1%) ) 1.0 g, Vitamin A Palmitate (500,000 IU / g) 0.8 g, Vitamin D3 (400,000 IU / g) 0.25 g, Vitamin E Acetate (500 IU / g) 10.0 g, Menadione Sodium Bisulfite 0.08 g, Fine Powder Sucrose 981.15 g) was maintained while feeding. Each rat was suspended in corn oil with bisphenol A (40 mg / ml / 100 g body weight) and licorice EtOH extract (10 mg or 50 mg / ml / 100g body weight), respectively, and subcutaneously injected once daily for three days. 24 hours after the day of administration was cervical distal bone and lethal.
부검 시, 자궁에 있는 액체나 지방을 깨끗이 제거한 다음 무게를 측정하고, 10 % 포르말린에 고정한 후 통상적인 방법을 거쳐 조직 표본을 작성하고 조직병리학적 검사를 실시하였다. 조직병리학적 검사를 위한 자궁 및 질의 절개 위치는 도 6에 나타낸 바와 같다. 특히, 현미경을 통해 자궁 내강의 상피세포(luminal epithelium)의 높이를 측정하고, 질 상피세포를 주의 깊게 관찰하였다.At necropsy, the liquid or fat in the uterus was removed, weighed, fixed in 10% formalin, and tissue samples were prepared by conventional methods and histopathological examinations were performed. The location of the uterine and vaginal incisions for histopathological examination is shown in FIG. 6. In particular, the height of the luminal epithelium of the uterine lumen was measured through a microscope, and vaginal epithelial cells were carefully observed.
시험 중 측정된 시험동물의 체중 등에 관한 자료의 통계학적 분석을 위하여 편도(one-way) ANOVA를 실시하여 p=0.05 수준에서 군간 유의성을 검정하였고 유의성이 인정되면, 던넷 t-테스트를 실행하여 대조군과 시험군 간의 통계학적 유의성을 검정하였다 (p<0.05).One-way ANOVA was performed for statistical analysis of data on the body weight of test animals measured during the test, and the significance was tested at the p = 0.05 level. The statistical significance between and test group was tested (p <0.05).
최초 주사시부터 치사시까지 매일 체중을 측정한 결과, 도 8로부터 볼 수 있는 바와 같이, 시험 전기간 동안 체중증가율은 정상적으로 나타났다.As a result of measuring the body weight daily from the first injection to the lethality, as shown in FIG. 8, the weight gain rate was normal during the whole test period.
또한, 적출된 자궁 및 질의 절대 중량은 도 9 및 11에서 볼 수 있는 바와 같이, BPA 투여군과 비교할 때 억제효과가 나타나지 않았다. 그러나, 적출된 자궁 및 질의 절대 중량을 부검 직전의 체중으로 나눈 상대 중량은 도 10 및 12에 나타낸 바와 같이, 감초 추출물에 농도의존적으로 BPA에 대한 억제효과가 있는 경향이 나타나고 통계상 유의적인 변화가 보였다. 절대 중량이 단지 각 개체의 장기를 측정한 데이터에 불과하다면, 상대 중량은 개체마다의 체중을 고려해 그 개체에서 각 장기가 차지하고 있는 중량을 계산 한 값이므로 더욱 의미가 크다고 할 수 있다.In addition, the absolute weight of the extracted uterus and vagina did not show an inhibitory effect as compared with the BPA-administered group, as shown in FIGS. 9 and 11. However, the relative weight obtained by dividing the absolute weight of the extracted uterus and vagina by the weight immediately before necropsy tends to have a concentration-dependent inhibitory effect on BPA on licorice extract, as shown in FIGS. 10 and 12. Seemed. If the absolute weight is only the data of the organs of each individual, the relative weight is more meaningful because it is the weight of each organ in the individual considering the weight of each individual.
조직병리학적 검사 결과, 자궁 상피세포와 질 상피세포의 경우 모두 무처리 대조군에 비해 BPA 투여군에서 상피세포의 두께가 커지는 것을 확인할 수 있었고, 감초 추출물을 함께 처리한 경우에 10 mg/ml 및 50 mg/ml에서 농도의존적으로 BPA에 의한 상피세포 증식을 억제하는 것으로 나타났다(도 13 및 14).As a result of histopathological examination, both the uterine epithelial cells and the vaginal epithelial cells were found to have an increased thickness of the epithelial cells in the BPA-administered group compared with the untreated control group. It was shown to inhibit epithelial cell proliferation by BPA in a concentration-dependent manner at / ml (Figs. 13 and 14).
도 13은 자궁 상피세포의 조직사진으로, A-1은 무처리 대조군, A-2는 BPA 투여군, A-3는 감초 50 mg/ml/100g + BPA 투여군, A-4는 감초 10 mg/ml/100g + BPA 투여군이다. 또한, 도 13은 질 상피세포의 조직사진으로, B-1은 무처리 대조군, B-2는 BPA 투여군, B-3는 감초 50 mg/ml/100g + BPA 투여군, B-4는 감초 10 mg/ml/100g + BPA 투여군이다.Figure 13 is a histological picture of uterine epithelial cells, A-1 is a non-treated control group, A-2 is BPA administration group, A-3 is licorice 50 mg / ml / 100g + BPA administration group, A-4 is licorice 10 mg / ml / 100g + BPA administration group. In addition, Figure 13 is a tissue picture of vaginal epithelial cells, B-1 is a non-treated control group, B-2 is BPA administration group, B-3 is licorice 50 mg / ml / 100g + BPA administration group, B-4 is licorice 10 mg / ml / 100g + BPA administration group.
제제예 1: 약학적 제제의 제조Formulation Example 1 Preparation of Pharmaceutical Formulation
다음의 성분들을 혼합하여 경질 젤라틴 캅셀에 충진함으로써 캅셀제를 제조하였다:Capsules were prepared by mixing the following ingredients to fill hard gelatine capsules:
양 (㎎/캅셀)Volume (mg / capsule)
활성 성분 20Active ingredients 20
(감초 추출물 또는 이솔리퀴리틴)(Licorice Extract or Isoliquiritin)
건조 전분 160Dry starch 160
마그네슘 스테아레이트 20Magnesium Stearate 20
총 200 ㎎Total 200 mg
제제예 2: 감초 추출물 또는 이솔리퀴리틴을 포함하는 식품Formulation Example 2: Food Containing Licorice Extract or Isoliquiritin
실시예 1 및 2에서 제조한 본 발명의 감초 추출물 또는 이솔리퀴리틴을 포함하는 식품들을 하기와 같이 제조하였다.Foods containing licorice extract or isoliquiritin of the present invention prepared in Examples 1 and 2 were prepared as follows.
(1) 밀가루 식품의 제조(1) Preparation of flour food
밀가루에 0.5 중량%의 감초 추출물 또는 0.05 중량%의 이솔리퀴리틴을 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 국수 등을 제조하여 건강 증진용 식품을 수득하였다.0.5% by weight licorice extract or 0.05% by weight of isoliquiritin was added to the flour, and bread, noodles, and the like were prepared using the mixture to obtain a food for health promotion.
(2) 유제품 (dairy products)의 제조(2) Manufacture of dairy products
우유에 1 중량%의 감초 추출물 또는 0.1 중량%의 이솔리퀴리틴을 첨가하고 이 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다. 그러나, 감초 추출물을 치즈 제조시에는 응고된 우유 단백질에, 요구르트 제조시에는발효 후에 수득된 응고된 우유 단백질에 첨가하였다.To the milk was added 1% by weight licorice extract or 0.1% by weight isoliquiritin and the milk was used to prepare various dairy products such as butter and ice cream. However, licorice extract was added to coagulated milk protein in cheese production and coagulated milk protein obtained after fermentation in yogurt production.
(3) 쥬스의 제조(3) Preparation of Juice
감초 추출물 1 내지 5 g 또는 이솔리퀴리틴 0.1 내지 0.5 g을 토마토 또는 사과 쥬스 1,000 ㎖에 가하여 건강 증진용 쥬스를 수득하였다.1-5 g of licorice extract or 0.1-0.5 g of isoliquiritin was added to 1,000 ml of tomato or apple juice to obtain health promoting juice.
감초 추출물 또는 이솔리퀴리틴을 함유하는 본 발명의 조성물은 파이토에스트로젠 활성 및 항암 활성을 나타내므로, 호르몬 대체 치료 및 암의 예방 및 치료를 위해 유용하게 사용될 수 있다.Since the composition of the present invention containing licorice extract or isoliquiritin exhibits phytoestrogens activity and anticancer activity, it can be usefully used for hormone replacement therapy and prevention and treatment of cancer.
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