KR20100127210A - 비특이적 질환용 일반 마커로서의 ykl-40 - Google Patents
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Abstract
q본 발명은 대상자에 있어서 비특이적 질환 또는 장애의 존재 여부를 진단하기 위한 방법에 관한 것으로, YKL-40 측정치가 기준치를 상회하면 비특이적 질환 또는 장애가 존재함을 가리키는 것이다. 대상자는 다양한 질환 또는 장애에 시달릴 수 있다. 기준치는 건강하나 개체로부터 얻은 기준치일 수도 있고 또는 동일 대상자로부터 이전체 측정하여둔 값일 수도 있다. 본 발명은 또한 대상자에 있어서 비특이적 질환 또는 장애의 위중도를 분류하는 방법에 관한 것으로서, 여기서 YKL-40의 측정치가 하나 이상의 기준치를 상회하거나 하회하는 것에 의해 상기 비특이적 질환 또는 장애의 위중도를 분류한다. 본 발명은 또한 본 발명의 방법에서 사용될 수 있는 키트 및 디바이스에 관한 것이기도 하며, 이러한 키트 및 디바이스는 시료 중의 YKL-40의 수준을 측정하기 위한 수단; 및 상기 YKL-40의 측정치를 YKL-40의 하나 이상의 기준치와 비교하기 위한 수단을 포함하여 이루어진다.
Description
본 발명은 대상자에 있어서 YKL-40 측정치가 기준치를 상회할 경우 비특이적 질환 또는 장애가 존재하는 것임을 가리키는 것인, 비특이적 질환 또는 장애의 존재 여부를 진단하기 위한 방법에 관한 것이다. 대상자는 여러가지 질환 또는 장애를 겪을 수 있다. 본 발명은 또한 대상자에 있어서 비특이적 질환 또는 장애의 위중도를 분류하기 위한 방법에 관한 것이기도 한데, 여기서는 YKL-40의 측정치가 하나 이상의 기준치를 상회 또는 하회하는 것에 의해 상기 비특이적 질환 또는 장애의 위중도를 판정한다. 본 발명은 또한 시료 중 YKL-40의 수준을 측정하기 위한 수단; 및 YKL-40의 측정치를 YKL-40의 적어도 하나의 기준치와 대조하기 위한 수단을 포함하는, 본 발명의 방법에 사용될 수 있는 키트 및 디바이스에 관한 것이기도 하다.
질병, 질환 또는 한가지 이상의 증상을 치료하고자 할 경우에는, 그 원인이 되는 질병 또는 장애를 진단하여야 할 필요가 있다. 신체적 및 정신적 질환의 양자 모두를 비롯한 수종의 질환으로부터 많은 증상들이 일어날 수 있다. 따라서, 질병의 진단은 성공적인 치료에 있어 가장 중요시된다. 치료 결과는 많은 경우 질병의 진행 정도와, 그에 따라, 진단되기까지 소요된 시간에 좌우되며, 조기 개재가 매우 중요할 수 있다. 그러나, 환자가 의료의 도움을 필요로 하기까지는, 적어도 몇가지 증상의 발현을 필요로 한다. 그러나, 예를 들어, 다양한 암 질환과 생활습관 질환, 예컨대, 동맥경화증, 관상심장질환, 당뇨병, 고혈압, 간섬유증, 만성폐쇄 폐병 등과 같은 질환에 있어서는, 환자가 그 증상을 알아채지 못한 채로 질병이 진행되는 경우가 많다.
어떤 질환은 생활습관을 시의 적절하게 변화시키는 것만으로도 효과적으로 치유되거나 심지어 예방할 수도 있다. 따라서, 건강 검진에 참여하는 빈도가 점차 증가하고 있다. 건강 검진은 어떤 증상을 그 출발점으로 삼지 않는 경우가 많다. 환자를 진단하기 위해, 증상이 이미 존재하는 것인지 또는 건강 검진과 관련한 것인지, 의사는 그 규명을 위하여 출발점을 필요로 한다.
예전에는 "적혈구 침강속도" (침강속도라고도 칭함)가 염증의 존재 여부를 가리키는 지시자로서 널리 이용되어왔다. 침강속도는 1시간의 기간 동안 적혈구가 침전되는 속도이다. 염증 반응이 존재하면, 혈액 중 고비율의 피브리노겐이 적혈구 세포로 하여금 서로 달라붙게 만든다. 침강속도는 여하한 원인이나 염증 포커스에 의해 증가된다. 기저 침강속도는 여성의 경우 약간 더 높고 연령이 높을수록 증가하는 경향이 있다. 증상이 없는 개체에서의 침강속도의 유용성은 그러나 그 민감도와 특이성이 저조함으로 인해, 제한적일 수밖에 없음에도 불구하고, 질병에 걸린 것인지 약간 의심스러울 경우에는, 일종의 질병 지수로서 이용되어 왔다.
현재 바이오마커인 C-반응성 단백질 (CRP: C-reactive protein)은 염증의 초기 진단에 있어 기존에 사용되어 오던 침강속도를 거의 대체하고 있다. CRP는 급성 또는 만성 염증 또는 감염 지시자이며, 따라서 C-반응성 단백질의 증가가 곧 어떤 증상의 진단적 징후를 가리키는 것이 아님에도 불구하고, 염증의 존재 여부 및 강도를 반영하는, 의약에서의 테스트수준이다. 혈청 CRP 수준에 있어서 양성 응답을 일으킬 수 있는 증상의 예로는 예컨대 류마티스성 관절염, 루푸스, 류마티스열, 암, 심장 질환, 심혈관 질환, 염증성 장질환 및 세균 또는 바이러스 감염을 들 수 있다. 그러나, 이러한 질환에 걸린 환자들 전부에서 혈청 CRP 수준이 증가하지는 않으므로, 이들 환자에서는 혈청 CRP 수준이 질병 지수로서 이용될 수 없다.
발명의 개요
본 발명은 대상자에 있어서 비특이적 질환 또는 장애의 존재 여부를 진단하기 위한 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은:
i) 대상자로부터 얻은 시료 중의 YKL-40의 수준을 측정하는 단계; 및
ii) 상기한 YKL-40 측정치를 YKL-40의 기준치와 비교하는 단계
를 포함하여 이루어지며, 이 때, 상기 시료 중의 YKL-40 측정치가 기준치를 상회할 경우에는 비특이적 질환 또는 장애가 존재하는 것임을 가리키는 것이다. 바람직하게는, YKL-40의 기준치는 건강한 개체로부터 얻은 시료들 중의 YKL-40 수준을 측정하여 얻은 평균치인 것이 좋다. 별법으로, YKL-40의 기준치는 동일한 대상자로부터 이전에 측정하여 둔 YKL-40 수준일 수 있으며, 이 경우, 상기 이전에 측정하여 둔 YKL-40 수준에 비해, 시료 중의 YKL-40 수준이 1.10의 팩터만큼 증가할 경우 곧 비특이적 질환 또는 장애가 존재하는 것임을 가리키는 것이다.
본 발명은 또한 대상자에 있어서 비특이적 질환 또는 장애의 위중도를 분류(classification)하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은:
i) 대상자로부터 얻은 시료 중의 YKL-40 수준을 측정하는 단계; 및
ii) 상기 YKL-40 수준을 YKL-40의 하나 이상의 기준치와 비교하는 단계
를 포함하여 이루어지며, 이 때, 상기 비특이적 질환 또는 장애의 위종도는 상기 비교에 의하여 추론되는 것이다. 바람직하게는 YKL-40의 하나 이상의 기준치는 건강한 개체로부터 얻은 시료 중의 YKL-40 수준을측정함으로써 제공받을 수 있다. 별법으로, YKL-40의 기준치는 동일 대상자로부터 이전에 측정하여 둔 YKL-40 수준일 수 있다.
본 발명은 또한 비특이적 질환 또는 장애의 존재 여부를 진단하기 위한 디바이스에 관한 것이기도 한데, 여기서 상기 디바이스는 시료 중 YKL-40 수준을 측정하기 위한 수단; 및 YKL-40의 측정치를 YKL-40의 적어도 한가지 기준치와 비교하기 위한 수단을 포함하여 이루어지는 것이다. 본 발명의 바람직한 실시 상태에서, 상기 디바이스는 컷 오프 (cut-off) 값을 나타내는 단일 기준치를 포함하는 것이 좋다.
또한, 전술한 바와 같은 본 발명은 i) 시료 중 YKL-40의 수준을 측정하기위한 수단; ii) YKL-40의 측정치를 YKL-40의 적어도 한가지 기준치와 비교하기 위한 수단; 및 iii) 시료를 제공하는 대상자의 연령에 따라, YKL-40의 기준치를 어떻게 연령에 연동시켜 조정하는지에 관한 임의의 지시사항을 포함하여 이루어지는 키트 오브 파트 (a kit of parts)에 관한 것이다.
본 발명자들은 놀랍게도 YKL-40 수준이 비특이적 질환 또는 장애의 존재 여부를 가리키는 일반적인 바이오마커로서 사용될 수 있음을 발견하였다. 따라서, 본 발명의 방법에 따라, YKL-40 수준을 이용하여 비특이적 질환 또는 장애의 존재 여부를 진단할 수 있다.
다음의 정의들은 본 발명의 설명을 단순화시키기 위해 제공된다. 따라서, 하기 정의들은 발명의 내용을 한정하는 의도가 아니며 본 발명의 범위는 어디까지나 특허청구범위와 명세서 전반의 기재 내용을 참조로 정해지는 것이다.
본 발명에서 "비특이적 질환 또는 장애 (a non-specific disease or disorder)", "비특이적 질환" 또는 "비특이적 장애"라는 용어는 예컨대 아직까지 특이적인 질환 또는 장애로서 진단되지 않은 한가지 이상의 질환 또는 장애를 의도하는 것이다. 비특이적 질환 또는 장애를 갖는 대상자는 건강하지 않다는 점, 즉 어떤 형태의 질환이나 장애를 갖는다는 점에서 일반 집단과 구별될 수 있다. 따라서, 비특이적 질환 또는 장애의 존재 여부의 진단은 그 대상자에 특이 질환이나 장애가 존재하는지에 관한 정보는 제공하지 않는다.
본 발명에서 "일반 바이오마커 (general biomarker)"라는 용어는 건강한 대상자에 반대되게, 대상자에 있어서 질병이나 장애의 존재여부를 지시해주는 바이오마커를 의미하는 것이다. 일반 바이오마커는 대상자에 있어서 특이 질환 또는 장애의 진단 또는 그에 관한 정보는 제공하여 주지 않지만, 초기 검진에 사용되기는 한다. 그렇지만, 예컨대 검출 수준 미만의 수준, 또는 소정의 컷오프 값 미만과 같이, 일반 바이오마커가 부재한다고 해서, 대상자에 있어서 아무런 질환이나 장애가 존재하지 않는다는 증거로 해석하지는 않는다. 일반 바이오마커는 특이 질환의 추가적인 진단을 위한 출발점으로서, 질환 또는 장애의 존재 여부를 최초로 가리키는데 사용될 수 있다.
염증의 경우 널리 사용되는 일반 바이오마커의 예로는 혈청 C-반응성 단백질 (CRP)를 들 수 있다. CRP는 종종 조기 검진과 관련하여 이용되며, 예컨대, 심장 질환, 심혈관계 질환, 세균 감염, 바이러스 감염 등의 위험의 대략적인 지시자로서 사용된다. 그러나, 질병이나 장애가 있는 몇몇 환자들은 혈청 CRP 수준을 나타내지 않거나 그러한 수준의 증가도 보이지 않으며, 이에 따라 CRP 수준은 이러한 질환에 걸린 모든 환자들에 있어서 질병 지수로서 사용될 수 없다.
CRP가 널리 사용되고 잘 알려지기 전에는, 적혈구 침강속도 (침강 속도라고도 칭해짐)가 염증의 비특이 측정치로서, 즉 질병 지수로서 조기 검진에서 사용되었다.
본 발명의 방법은 YKL-40 수준 형태의 새로운 일반 바이오마커를 제공하며 비특이적 질환 또는 장애의 존재 여부를 진단하거나 비특이적 질환 또는 장애의 위중도를 분류하는 방법을 제공한다. 또한 YKL-40은 비특이적 질환 또는 장애가 존재하는지를 결정하는데 뿐만 아니라 질병의 상태, 즉 비특이적 질환 또는 장애의 위중도를 측정하는데도 이용될 수 있다. 달리 말해서, YKL-40 수준은 질병 지수로서 유용한 것으로 밝혀졌다. 따라서, YKL-40은 대상자에 있어서 질병이나 질환이 질병 또는 질환이 다소 심각한 상태로 진전 중인지를 분류하는데 이용될 수 있다. 본 발명자들은 YKL-40이 혈청 CRP보다 광범위한 일반 바이오마커라는 것을 발견하였다.
따라서, 본 발명의 첫 번째 구체예는 대상자에 있어서 비특이적 질환 또는 장애의 존재 여부를 진단하기 위한 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은
iii) 대상자로부터 얻은 시료 중의 YKL-40 수준을 측정하는 단계; 및
iv) 상기 YKL-40 수준을 YKL-40의 기준치와 비교하는 단계
를 포함하여 이루어지며, 여기서 상기 시료 중의 YKL-40 수준이 기준치를 상회할 경우에는 비특이적 질환이나 장애가 존재함을 가리키는 것으로 한다.
본 발명의 방법은 예컨대 한가지 이상의 질환이나 장애와 같이, 여하한 질환 또는 장애의 존재 여부를 진단하는 것과 관련이 있다. 상기 질환 또는 장애는 예컨대 YKL-40 수준이 증가하는 그러한 질환이나 장애일 수 있다.
개체에 있어서 혈청 또는 혈장 YKL-40 수준은 장기간 안정하며 일중 (diurnal) 또는 주중 (we따ly) 변화와 무관한 것으로 밝혀졌다; 또한 상기 수준은 20분 이상의 운동과도 무관한 것으로 나타났다. 따라서, 어떤 개체에 대한 혈청 또는 혈장 YKL-40 수준을 일회 측정하여 본 발명의 방법에 이용할 수 있다. 바람직하게는, 전날 과도한 음주를 하지 않은 대상자 및 예컨대 세균 감염과 같은 명백한 증상이 없는 대상자로부터 얻은 시료가 좋다. YKL-40의 1차 측정치 결과를 확인하기 위해, 필요하다면 나중에 (예컨대, 2주 후) 2차로 또는 그 이상의 시료를 얻을 수도 있다.
예컨대 혈장 또는 혈청과 같은 YKL-40의 증가된 수준은 몇가지 다양한 종류의 질환 및 장애를 반영하는 것일 수 있으며, YKL-40의 이러한 증가된 수준은 일반적으로 건강한 대상자에게서는 관찰되지 않는다. 따라서, YKL-40 수준은 본 발명에 따른 질병 지수로서 이용될 수 있다.
본 발명의 두 번째 구체예는 비특이적 질환 또는 장애의 존재 여부를 가리키는 바이오마커로서의 YKL-40의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 이 구체예에 관한 추가 상세는 본 발명의 상기 방법을 설명하는 부분을 통해 명확히 이해된다. 따라서, 본 발명의 방법에 관하여 언급된 모든 특징들은 비특이적 질환 또는 장애의 존재 여부를 가리키기 위한 바이오마커로서의 YKL-40의 용도에 대해서도 그대로 준용된다.
본 발명은 또한 대상자에 있어서 YKL-40 수준 증가가 존재하는지, 예컨대 혈장 또는 혈청 YKL-40 수준이 증가했는지를 측정하기 위한 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은:
v) 대상자로부터 얻은 시료 중의 YKL-40 수준을 측정하는 단계; 및
vi) 상기 YKL-40 수준을 YKL-40 기준치와 비교하는 단계
를 포함하여 이루어지며, 여기서 시료 중의 YKL-40 수준이 기준치를 상회하면 상기 대상자에 있어서 YKL-40 수준의 증가가 존재하는 것을 가리키는 것으로 한다. 기준치는 본 발명에 설명된 여하한 기준치일 수 있고, 특히 "기준치 (reference levels)" 섹션에 설명되어 있는 바와 같다. 이 방법은 본 발명에 설명된 바와 같이, 대상자에 있어서 예컨대 어떠한 질환이나 장애와 같이, 비특이적 질환 또는 장애가 존재하는지를 진단하는데 바람직하게 이용될 수 있다.
본 발명의 세 번째 구체예는 대상자에 있어서 비특이적 질환 또는 장애의 존재 여부를 진단하기 위한 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은:
i) 대상자로부터 얻은 시료 중의 YKL-40 수준을 측정하는 단계; 및
ii) 상기 YKL-40 수준을 YKL-40 기준치와 비교하는 단계 (여기서 상기 기준치는 동일 대상자의 이전에 미리 측정해둔 YKL-40 수준이다)
를 포함하여 이루어지며, 여기서 시료 중의 YKL-40 수준이 YKL-40 기준치에 비해 1.10 팩터만큼 증가하면 비특이적 질환 또는 장애가 존재하는 것을 가리키는 것이다. 본 발명의 이 세 번째 구체예에 관한 추가 상세는 본 발명의 상기 첫 번째 구체예와 관련한 설명으로부터 자명하다. 따라서, 본 발명의 첫 번째 구체예와 관련한 설명은 달리 언급하지 않는 한, 본 발명의 이 세 번째 구체예에 그대로 준용된다.
본 발명의 네 번째 구체예는 대상자에 있어서 비특이적 질환 또는 장애의 위중도를 분류하기 위한 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은:
iii) 대상자로부터 얻은 시료 중의 YKL-40 수준을 측정하는 단계; 및
iv) 상기 YKL-40 수준을 YKL-40의 하나 이상의 기준치와 비교하는 단계
를 포함하여 이루어지며, 여기서 상기 비특이적 질환 또는 장애의 위중도는 상기 비교로부터 연역된다. 바람직하게는, YKL-40의 한가지 이상의 기준치는 건강한 개체로부터의 시료 중의 YKL-40 수준을 측정함으로써 제공될 수 있다. 별법으로, YKL-40의 기준치는 동일 대상자로부터 이전에 얻은 YKL-40 측정치일 수 있다. 이러한 기준치의 종류는 후술하는 바와 같으며 특히 "기준치" 섹션 부분에 상술되어 있다.
본 발명자들은 놀랍게도 YKL-40의 하나 이상의 기준치와의 비교에 의해 비특이적 질환 또는 장애의 위중도를 분류하기 위한 바이오마커로서, 본 발명의 이 네 번째 구체예에 YKL-40 수준을 이용할 수 있다는 것을 발견하였다. 본 발명자들은 또한 질환이나 장애의 상태가 더 심해지는지 또는 완화되는지를 경시적으로, 그 질환 또는 장애의 위중도를 반복적으로 및/또는 연속적으로 분류함으로써, YKL-40 수준이, 그 질환 또는 장애의 진전 여부를 추적하는데 있어서 마커로서 사용될 수 있다는 것을 발견하였다. 이것은 대상자에 있어서 YKL-40 측정치를, 동일 대상자로부터 이전에 얻은 측정치인 하나 이상의 기준치와 비교하는 경우 특히 흥미로우며 합당하다. 따라서, 본 발명의 방법에 따라, YKL-40 수준은 대상자에 있어서 질병 또는 장애의 위종도를 분류하는데 이용되리 수 있을 뿐만 아니라, 질환 또는 장애의 위중도를 분류하고 추적하는데도 이용될 수 있다.
동일 질환에 걸린 환자들이라도 질병 위중도는 현저하게 차이가 날 수 있다 (즉, 질병의 심각성 등급이 다를 수 있음). 본 발명에서 "위중 단계 (severe stage)", "위중도 (severity)", "덜 위중" 및 "더 위중" 등의 용어는 예컨대 치유중이라는 예후, 생존의 예후, 질병이 진전된다는 예후에 따른 위중도의 등급, 또는 질병의 여러가지 소정 단계에 따른 위중도 등급을 의미하는 것이다. 이러한 단계들은 여러가지 증상, 및/또는 전통적으로 측정가능한 바이오마커 수준, 신체 기능 등에 따를 수 있다. 한 명의 동일한 대상자에 있어서의 질병 진행에 촛점을 맞출 경우, 보다 심각한 단계라 함은 질병이 악화되었음을 가리키는 것인 반면, 먼저 측정된 것보다 덜 위중한 단계라 함은, 예컨대 만족스러운 치료에 의해, 질병 상태가 호전됨을 가리키는 것이다.
본 발명의 이러한 네 번째 구체예에 관한 부가적인 상세는 본 발명의 첫 번째 또는 세 번째 구체예에서 전술된 설명으로부터 자명하다. 따라서, 본 발명의 첫 번째 또는 세 번째 구체예와 관련된 모든 특징들은 달리 언급하지 않는 한, 본 발명의 이 네 번째 구체예에도 준용된다.
본 발명의 다섯 번째 구체예는 질병 또는 장애의 위중도를 분류하기 위한 바이오마커로서의 YKL-40의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 구체예의 추가 상세는 전술한 본 발명의 방법과 관련한 설명으로부터 자명하다. 따라서, 본 발명의 방법에 관련한 모든 특징들은 질병 또는 장애의 위중도를 분류하는데 있어서 바이오마커로서의 YKL-40의 용도에도 그대로 준용된다.
본 발명에 따른 방법은 CRP에 의해 동정될 수도 있는 질병의 존재 여부 또는 위중도를 동정하는데 이용될 수 있지만, CRP 수준의 측정으로는 반응을 나타내지 않는 질병들을 동정하는데도 이용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 한가지 실시 상태에서, 비특이적 질환 또는 장애는 상승된 C-반응성 단백질 수준을 제공하지 않는 한가지 이상의 질환이나 장애 또는 일군의 질환 또는 장애이다.
본 발명에 따른 방법은 개인 맞춤형 의약에서 병행 진단 테스트와 관련한 진단 툴로서 사용될 수 있다. 이는 예컨대, YKL-40 리간드와 관련된 것이거나, 또는 질병 또는 장애를 치료하는데 사용되는 기타 모든 종류의 활성 화합물과 관련된 것일 수 있다.
본 발명에서 "경감시키다"라는 용어는 질병 상태가 개선되거나 더 나아지는 것; 질병 상태와 관련하여 그 위중도 또는 진행 속도가 감소하는 것, 질병의 퇴행이나 치유를 포함하며, 또는 연관된 통증이 감소하는 것과 같이, 그 위중도가 감소되는 것으로 인지되는 상태를 모두 포괄한다.
본 발명에서 "항체"라는 용어는 YKL-40의 에피토프 결정인자와 결합할 수 있는 Fab 및 F(ab').sub.2와 같은 면역글로불린 분자의 활성 부분 또는 단편 및 면역글로불린 분자를 의미한다. 항체의 예로는 온전한 (intact) 면역로불린 분자 또는 면역 활성을 유지하는 그의 단편을 들 수 있다. 본 발명에서 "항원"이라 함은 전장 길이의 면역원성 YKL-40 분자 또는 그의 단편을 의미한다.
본 발명에서 "생물학적 시료"라는 용어는 대상자 또는 개체로부터 얻은 시료를 의미한다.
본 발명에서 "바이오마커"라는 용어는 병리적 또는 생리적 상태와 같은, 특정 생물학적 특성의 분자 수준의 지시자를 의미한다.
본 발명에서 "질병/질환" 및/또는 "장애"라는 용어는 대상자 또는 개체에 있어서 질병, 손상, 또는 장애를 의미한다. 장애는 종종 선천적 유형의 질병 또는 손상이다.
본 발명에서 "대상자" 및/또는 "개체"라는 용어는 어떤 종, 특히 바람직하게는 포유동물 종의 단일 멤버를 의미한다. 본 발명에서 "포유동물"이라 함은 인간과 비인간을 모두 포함한다. "환자"라는 용어는 질환 또는 장애를 앓고 있는 개체를 의미한다.
본 발명에서 "hnRNA"라는 용어는 이종핵 (heteronuclear) RNA를 의미한다. 본 발명에서 "mAb"라는 용어는 모노클로날 항체를 의미한다. 본 발명에서 "mRNA"라 함은 메신저 RNA를 가리킨다. 본 발명에서 "RNA"는 천연 또는 합서어 유래의 모든 종류의 RNA를 의미한다. 본 발명에서 YKL-40과 관련하여 "실질적으로 순수하다"라는 의미는 YKL-40와 함께 자연에서 발견될 수 있는 다른 분자들이 본질적으로 없는 실질적으로 온전한 분자를 가리킨다.
YKL
-40
YKL-40은 그의 N-말단의 세개의 아미노산, 즉 티로신(Y), 라이신 (K) 및 류신(L)과 그의 분자량이 약 40 kDa라는 데서 유래한 이름이다 (요한센 외, 1992). 인간의 YKL-40의 완전한 아미노산 (SEQ ID NO:2) 및 그의 코딩 서열 (SEQ ID NO:1)은 GeneBank에서 수탁번호: 80927로 찾아볼 수 있다. 인간의 YKL-40은 383개 아미노산의 단일 폴리펩타이드 사슬을 함유하며 계통발생적으로 고도로 보존된 헤파린- 및 키틴-결합 혈장 당단백질이다. 인간의 YKL-40 및 상동체와 다른 포유동물 간의 서열 동일성은: 돼지 (84% 서열 동일성), 소 (83%), 염소 (83%), 양 (83%), 기니픽, 래트 (80%), 및 마우스 (73%)이다. YKL-40은 "포유동물의 키티나제-유사 단백질"의 일원이지만 키티나제 활성은 갖지 않는다. 정상적인 인간 단핵구에서는 시험관내 YKL-40 발현이 부재하지만 혈관 평활근 세포, 암세포 및 관절염성 연골세포에 의한, 활성화 단핵구 및 호중구에 의한 대식세포 분화의 후기 단계 동안에는 많이 유발된다. 생체내에서 YKL-40 mRNA 및 단백질은 거대세포 관절염, 염증성 활막, 사르코이드 병변이 있는 개체의 죽상경화판, 관절염성 혈관과 같이, 염증이 있는 조직 중의 대식세포 아집단 및 종양주위 대식세포에 의해 발현된다.
YKL-40의 유발을 주도하는 분자 과정과 그의 정확한 기능은 아직 알려져 있지 않다. YKL-40은 분비된 단백질인데 이는, 그의 작용 부위가 대개 세포외임을 시사하는 것이다; 그러나, YKL-40의 특이적인 세포 표면 또는 가용성 수용체는 이제까지 동정된 바 없다. YKL-40은 섬유모세포와 연골세포의 성장인자이며, IGF-1과 상승적으로 작용하고, TNF와 IL-6에 의해 조절되며, NF-카파B의 지속적인 활성화를 필요로 한다 (레클리스 외, 2002, 링 외, 2004, 레클리스 외, 2005). 섬유모세포를 YKL-40로 처리하면 AKT의 포스포릴화에 의한 IL-1 및 TNF의 염증 반응을 길항시킬 수 있기 때문에, ASK1 매개형 신호 경로를 약화시킬 수 있다. 이는 메탈로프로테나제 및 IL-8 발현수준의 감소를 야기시킨다 (레클리스 외, 2002, 링 외, 2004, 레클리스 외 2005). 뿐만 아니라, YKL-40은 I형, II형 및 III형 콜라겐에 결합하여 I형 콜라겐 피브릴 형성 속도를 조절한다 (빅 외, 2006). 이러한 관찰사실은 YKL-40이 염증성 환경에 있어서 보호적 역할을 수행하여, 세포외 매트릭스의 분해를 제한함으로써, 조직 리모델링을 제어할 수 있음을 시사한다. YKL-40은 또한 상피 세포의 화학주성인자로서 작용하여, 그의 이주를 자극하며 혈관 평활근 세포의 이주와 부착을 증진시키므로 (밀리스 외, 1986, 니시카와 외, 2003; 섀클턴 외, 1995), 혈관형성에 모종의 역할을 하는 것으로 여겨진다. YKL-40은 또한 섬유모세포의 성장 인자이며 조직 리모델링이 일어나는 동안 세포외 매트릭스를 보존하는 항이화 효과를 갖는다 (드 슈니크 외, 2001, 레클리스 외, 2002, 링 외, 2004, 레클리스 외, 2005). 또한, 죽상경화판의 대식세포는 YKL-40 mRNA를 발현하며, 특히 병변 내에 더 깊이 침윤된 대식세포와 최고 YKL-40 발현은 죽상동맥경화증의 초기 병변의 대식세포에서 발견되는 것으로 나타났다 (부트 외, 1999). 또한, YKL-40은 그의 혈장 및 혈청 농도가 몇몇 염증성 질환에서 증가되기 때문에, 급성 병기 단백질인 것으로 간주될 수 있다.
YKL-40의 생물학적 효과를 매개하는 세포 수용체들은 아직까지 알려져 있지 않지만, 세포질의 신호 전달 경로의 활성화는 YKL-40이 세포막에서 시그날링 성분들과 상호반응함을 시사한다.
본 발명의 한가지 목적은 YKL-40 유전자의 전사 산물을 검출하는 것이다. 상기 유전자의 전사 산물은 따라서 YKL-40 단백질의 hnRNA, mRNA, 전장 단백질, 단편화된 단백질, 또는 펩타이드일 수 있다. 하나 이상의 단백질, RNA 전사산물, 단편 및/또는 펩타이드는 동시에 검출될 수도 있다. 본 발명의 또 다른 구체예는 RT-PCR에 의한 RNA의 검출과 같은 PCR 기반 분석에 의한 검출 뿐만 아니라, YKL-40 단백질, 그의 단편 또는 펩타이드의 항체 검출과 같은 면역분석법에 의한 것과 같은 이용가능한 모든 수단에 의하여 전사산물을 검출하는 것이다.
YKL
-40의 검출
본 발명의 펩타이드 및 폴리뉴클레오타이드는 YKL-40, YKL-40 펩타이드 및 이를 코딩하는 뉴클레오타이드의 기능적 유도체를 포함한다. "기능적 유도체"라 함은 어떤 분자의 "단편", "변이체", "유사체" 또는 "화학적 유도체"를 의미한다. 본 발명의 DNA 서열과 같은 분자 "단편"은 그 분자의 여하한 뉴클레오타이드 서브세트를 모두 포함한다. 이러한 분자의 "변이체"는 자연 발생적인 분자 전체 또는 그의 단편과 실질적으로 유사한 자연 발생적인 분자를 가리킨다. 분자의 "유사체"라 함은 분자 전체 또는 그의 단편과 실질적으로 유사한 비천연 분자를 가리키는 것이다.
두 개의 분자의 아미노산 서열이 실질적으로 서로 동일하다면, 이들은 서로 "실질적으로 유사하다"고 말할 수 있다. 실질적으로 유사한 아미노산 분자들은 유사한 생물학적 활성을 갖는다. 따라서, 두개의 분자들이 유사한 활성을 갖는다면, 이들 분자들 중 하나가 다른 분자에서는 발견되지 않는 아미노산 잔기를 부가적으로 함유하거나, 또는 아미노산 잔기 서열이 동일하지 않다고 해도, 이들은 본 발명에서 사용하는 의미의 변이체인 것으로 고려된다.
또한, 어떤 분자가 보통은 그 분자의 일부가 아닌 화학적 부분을 부가적으로 함유하는 경우, 그 분자는 다른 분자의 "화학적 유도체"로 칭한다. 이러한 부분들은 그 분자의 용해도, 흡수성, 생물학적 반감기 등을 개선시키는 것일 수 있다. 이러한 부분들은 또한 그 분자의 독성을 감소시키고, 그 분자의 바람직하지 못한 여하한 부작용 등을 제거 또는 감소시키는 것일 수 있다. 이러한 효과를 매개하는 부분들은 예컨대 Remington's Pharmaceutical Sciences, (제16판, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1980)에 예시되어 있다.
YKL-40 일차 아미노산 서열을 약간 변형시키면 본 발명에 설명된 YKL-40 펩타이드와 비교할 때 실질적으로 유사한 활성을 갖는 단백질과 펩타이드가 만들어질 수 있다. 이러한 변형은 위치 지향적인 돌연변이와 같이 의도적인 것일 수도 있고, 자연발생적인 것일 수도 있다. 이들 변형에 의해 생산되는 펩타이드들은 모두 이들이 YKL-40의 생물학적 활성을 갖는 한 본 발명에 포함된다. 또한, 하나 이상의 아미노산의 결실 역시도 그의 생물학저거 활성을 유의적으로 변경시킴이 없이, 결과적인 분자의 구조에 변형을 초래할 수 있다. 이에 의하여, 보다 작은 활성 분자들을 개발할 수 있는데 이들은 용도가 더 광범위할 수 있다. 예컨대, 어떤 효소가 목적하는 촉매 활성이나 항원 활성을 발휘하는데 있어서 필요하지 않은 아미노 또는 카르복시 말단의 아미노산들을 제거할 수 있다.
후술하는 본 발명의 면역분석법과 치료 방법에서는 폴리클로날 항체나 모노클로날 항체를 사용할 수 있다. 몇몇 항 YKL-40 분자들은 시판 중에 있거나 또는 본 발명이나 공지 기술분야에서 일어날 수 있다. 폴리클로날 항체는 실질적으로 순수한 YKL-40 또는 항원성 YKL-40 펩타이드를 적절한 비인간 포유동물에게 수차례 피하주사 또는 근육주사함으로서 얻을 수 있다. YKL-40 펩타이드의 항원성은 그 펩타이드로 면역된 바 있는 동물의 항체 반응의 강도를 측정하는 종래 기술에 의해 측정할 수 있다. 일반적으로, 항 YKL-40 항체를 일으키는데 이용되는 YKL-40 펩타이드는 YKL-40에 대한 친화도가 비교적 높은 항체의 고역가 생산을 유도할 수 있는 것이어야 한다. 본 발명의 한가지 실시 상태에서 YKL-40 수준은 딥스틱을 이용하여 측정한다.
필요하다면, 면역화 펩타이드를, 본 발명에 속한 분야에 잘 알려진 기술을 이용하여 컨쥬게이션에 의해 캐리어 단백질에 커플링시킬 수 있다. 펩타이드에 화학적으로 커플링되는, 이와 같이 흔히 사용되는 캐리어들의 예로는 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH), 갑상선글로불린, 소혈청 알부민 (BSA), 및 파상풍 독소를 들 수 있다. 이렇게 커플링된 펩타이드를 이용하여 동물 (예컨대 마우스 또는 토끼)을 면역화시킨다. YKL-40은 포유동물 종 간에 보존될 수 있으므로, YKL-40 단백질의 면역원성을 증강시키기 위해 담체 단백질을 사용하는 것이 바람직하다.
상기 포유동물로부터 채취된 혈액 시료로부터 항체를 얻는다. 폴리클로날 항체를 얻는 기술은 본 발명이 속한 분야에 잘 알려져 있다. 예컨대, Methods of Enzymology, "Production of Antisera With Small Doses of Immunogen: Multiple Intradermal Injections", Langone 외 편집 (Acad. Press, 1981)). 동물에 의해 생산된 폴리클로날 항체는, 예컨대, 그에 대하여 항체가 생성된 펩타이드가 결합되어 있는 매트릭스에 상기 항체를 결합 및 용리시킴으로써 추가 정제할 수 있다. 당업자들은 모노클로날 항체 뿐만 아니라 폴리클로날 항체의 정제 및/또는 농축을 위한 면역학 분야의 다양한 기술들을 익히 알 것이다. 예컨대 Coligan 외, Unit 9, Current Protocols in Immunology, Wiley Interscience, 1991).
그러나, 바람직하게는, 생산된 YKL-40 항체는 모노클로날 항체 ("mAb's")인 것이 좋다. 모노클로날 항체를 제조하기 위해서는, 마우스 또는 래트를 면역화시키는 것이 좋다. 본 발명에서 사용되는 "항체"라는 용어에는 온전한 분자 뿐만 아니라, 에피토프 결정인자와 결합할 수 있는 그의 단편, 예컨대, Fab 및 F(ab').sub.2가 포함된다. 또한, 본 발명의 문맥 상, "본 발명의 mAb"라 함은 YKL-40에 대한 특이성이 있는 모노클로날 항체를 가리킨다.
mAbs를 분비하는 하이브리도마의 일반적인 제조 방법은 기술 분야에 잘 알려져 있다 (Kohler 및 Milstein, 1975). 간단히 설명하자면, 콜러와 밀스타인이 설명한 바와 같이, 이 기술은 흑색종, 기형암 또는 자궁경부암, 신경아교종 또는 폐암에 걸린 5인의 암환자의 유출지역의 임파절로부터 임파구를 분리하고 (시료는 외과수술 표본으로부터 수득함), 세포를 한데 모은 다음 SHFP-1로 세포를 융합시키는 것을 포함한다. 암 세포주에 결합된 항체들의 생산 여부에 대해 하이브리도마를 스크리닝한다.
mAb들 간의 YKL-40 특이성 확인은 목적하는 mAb의 원소 반응 패턴을 측정하는 비교적 일상적인 스크리닝 기술 (예컨대 효소결합 면역흡수분석법 또는 "ELISA")에 의해 수행할 수 있다. 시험 대상 mAb가 전술한 바와 같이 분리된 YKL-40에 대한 본 발명mAb의 결합을 방지하는지를 측정함으로써, 만일 시험 대상 mAb가 본 발명의 mAb와 경쟁하여, 본 발명의 mAb에 의한 결합을 감소시키는 것으로 나타날 경우에는, 이들 두가지 모노클로날 항체들이 동일하거나 밀접하게 연관된 에피토프에 결합할 확률이 높다고 결정하는 것처럼, 과도한 실험 없이도, 본 발명의 mAb와 시험 대상 mAb가 동일한 특이성을 갖는지 평가할 수 있다. 시험 대상 mAb가 본 발명의 mAb와 동일한 특이성을 갖는지 알아보는 또 다른 방법은 본 발명의 mAb를 그것과 일반적으로 반응하는 항원과 함께 예비 인큐베이션시킨 다음, 시험 대상 mAb가 항원에 결합하는 능력이 저해되었는지를 측정하는 것이다. 시험 대상 mAb가 저해된 경우에는, 본 발명의 mAb와 동일 또는 밀접히 연관된 에피토프 특이성을 가질 확률이 매우 높다.
면역분석 과정
이용된 면역분석 과정은 개체에서의 YKL-40 수준의 감소가 건강한 인간에 존재하는 정상 수준 및/또는 그 개체에서 측정된 배경 수준과 구별될 수 있을 정도로 정량적이어야 한다. 검출가능한 표지 (직접 또는 간접)를 이용한 고체상 경쟁 분석 및 샌드위치 분석이 따라서 선호된다. 표지는 항체가 YKL-40 항원에 결합되었는지를 가리키는 검출가능한 신호를 제공해준다. 항체 또는 항원을 방사능 동위원소, 효소, 형광 분자, 화학발광 분자, 생물발광 분자 및 콜로이드 금을 비롯한, 검출가능한 신호를 제공하는 기술 분야에 알려진 표지로 표지시킬 수 있다. 공지의 분석법 중, 방사능면역분석법 (RIA) 또는 효소결합 면역분석법 (ELISA)가 그 감도 면에서 가장 바람직하다. 따라서 방사능동위원소가 표지로서 바람직하다.
이에 따라, 본 발명에 따른 방법의 특정 실시 상태에서는 면역분석법을 이용하여 YKL-40 수준을 측정한다. 이 실시 상태의 한가지 버젼에서의 면역분석법은 경쟁적 면역분석법이다.
본 발명의 한가지 실시 상태에서, 면역분석법은 YKL-40을 측정하기 위한 모노클로날 항체를 이용한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 면역분석법은 YKL-40을 측정하기 위한 폴리클로날 항체를 이용한다.
본 발명의 방법이 면역분석법을 이용하는 경우에는, YKL-40을 측정함에 있어서, 방사능동위원소, 효소, 형광 분자, 화학발광 분자, 생물발광 분자 및 콜로이드 금속으로 이루어진 군으로부터 선택된 검출가능한 표지를 이용할 수 있다.
항체에 직접 결합할 수 있거나, 또는 YKL-40 항원에 간접적으로 결합할 수 있는 금속 이온의 예는 본 발명이 속한 기술 분야의 당업자에게 익히 알려져 있으며, 예컨대, 125I, 111In, 97Ru, 67Ga, 68Ga, 72As, 89Zr, 90Y 및 201Tl을 들 수 있다. 125I (나트륨염, 아머샴, 영국)는 항원 결합 특이성의 저하 없이, 간편하게 부착할 수 있기 때문에 특히 바람직하다. 125I로 YKL-40를 표지시키는 것은 살라신스키 등 (1981)의 방법에 따라 실시할 수 있다. 125I 표지를 제공하는데 사용되는 요오도겐 (1,3,4,6-테트라클로로-3알파, 6알파-디페닐 글리코우릴)은 영국 체스터에 소재하는 Pierce and Warriner사로부터 구입가능하다.
본 발명의 바람직한 특정 실시 상태에서, 스트렙트아비딘-코팅된 마이크로플레이트 웰, 바이오티닐화된 Fab 모노클로날 포획 항체, 및 알칼리성 포스파타제 표지된 폴리클로날 검출 항체를 이용하여, 2개소, 샌드위치형 효소결합 면역흡수 분석법 (ELISA)(예컨대 시판하는 Quidel, 미국 캘리포니아) (Harvey 외, 1998)에 의해 YKL-40의 혈장 수준을 2회 측정할 수 있다. Quidel을 사용하자 ELISA 회수율은 102%였고 검출 한계는 10 ㎍/L이었다. 이와 관련한 감도는 제로 결합값의 표준 편차의 두배에 상응하는 검출가능한 질량인 것으로서 정의된다. 표준 곡선은 일반적으로 20 내지 300 ㎍/l 사이에서 선형일 것이다. 분석내 변이계수 (intra-assay coefficients of variations)는 5% (40 ㎍/L에서), 4% (104 ㎍/L에서), 그리고 4% (155 ㎍/L에서)였다. 분석간 변이계수는 <6% 였다.
본 발명의 또 다른 실시 상태에서 방사능면역분석법이 사용되며, 여기서는 스탠다드 또는 시료를 실질적으로 동 부피의 YKL-40 항혈청 및 YKL-40 트레이서와 함께 인큐베이션시킨다. 스탠다드과 시료를 일반적으로 2회씩 분석한다. 본 발명의 분석 감도 (검출 한계)는 약 10 ㎍/l이다. 이와 관련한 감도는 제로 결합값의 표준 편차의 두배에 상응하는 검출가능한 질량인 것으로서 정의된다. 표준 곡선은 일반적으로 20 내지 100 ㎍/l 사이에서 선형일 것이다. 다음의 예에서 설명된 분석의 경우, 분석내 및 분석간 변이계수는 각각 <6.5%와 <12% 였다.
당업자들은, RIA만큼 민감할 필요는 없다고 해도, 방사능동위원소를 제외한 다른 표지를 이용하는 분석 방법은 어떤 장점을 가져야 한다는 것과, 그에 따라 그러한 방법은 RIA 포맷의 대체법으로서 사용될 수 있음을 이해할 것이다.
예를 들어서, 효소결합 면역흡수 분석법 (ELISA)은 ELISA 마이크로타이터 플레이트 판독기 및 많은 연구 및 임상 실험실에서 쉽게 입수가능한 시약을 이용하여 쉽게 자동화시킬 수 있다. 형광 표지, 화학발광 표지 및 생물발광 표지는 비록, 분석에 있어서 항체와 결합된 항원을 정량하는데 있어서 방사능동위원소만큼 유용하지는 않다고 해도, 육안으로 검출가능하다는 장점을 갖는다.
PCR
기반 분석
또한, 당업자라면, 생물학적 시료 중의 YKL-40의 존재 여부를 검출 및 정량하는데 있어서, 면역분석법 이외의 다른 수단도 사용할 수 있음을 이해할 것이다. 예를 들어, 기술 분야에 알려진 정량적 폴리머라제 연쇄반응 (PCR) 프로토콜을 사용하여 YKL-40을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 검출할 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 방법의 한가지 실시 상태에서는 YKL-40 수준을 PCR 기반 분석법에 의해 측정한다. 정량적인 PCR을 수행하기 위한 바람직한 방법은 경쟁자 템플레이트를 이용하여 수행하는 경쟁적 PCR 기술인데, 상기 경쟁자 템플레이트는 하나 이상의 염기쌍에 인공 돌연변이를 일으켜서 표적 YKL-40 유전자 템플레이트와는 서열이나 크기를 달리하는 경쟁자를 유발한다. 프라이머들 중 하나를 바이오티닐화시키거나 또는 바람직하게는 아민화시켜서 수득된 PCR 산물의 한쪽 가닥 (대개 안티센스 가닥)이 아미노-카르복실, 아미노--아미노, 바이오틴-스트렙트아비딘 또는 기타 적절한 결합을 통해, 적절한 반응물질에 단단히 결합되어 있는 고상 지지체에 단단하게 고정될 수 있게 한다. 가장 바람직한 것은, PCR 산물, 고상 지지체 및 반응물 간의 결합이 공유결합이어서, 변성 조건 하에서 언커플링되지 않게끔 하는 것이다.
일단 PCR 산물의 아민화 가닥 또는 바이오티닐화된 가닥이 고정되면, 결합되지 않은 상보 가닥들을 알칼리성 변성 세척에 의해 분리하고 반응 환경으로부터 제거한다. 표적 및 경쟁자 핵산에 대응하는 서열 특이적인 올리고뉴클레오타이드 ("SSO": sequnce-specific oligonuleotides)를 검출 태그로 표지시킨다. 이어서 SSO를 제거된 미결합 센스 가닥으로부터 경쟁 부재 하에 안티센스 가닥과 혼성화시킨다. 적절한 분석 시약을 첨가하고, 표지 태그와 사용된 고상 지지체 수단에 적합한 ELISA 측정 수단, 바람직하게는 ELISA 마이크로플레이트 판독기에 의해 혼성화도를 측정한다. 표적과 경쟁자 템플레이트를 포함하는 PCR 반응 증폭 템플레이트로부터 개별적으로 유도된 표준 곡선을 이용하여, 측정값을 비교함으로써 표적 핵산 함량을 구하였다. 이 방법은 정량적이며, PCR 횟수에 구애받지 않고, PCR 산물 중의 상보가닥과 SSO 프로브 간의 경쟁에 의해 영향받지 않는다는 점에서 유리하다.
별법으로, 중합 단계의 일부와 혼성화 단계 전체를 고상 지지체 위에서 실시할 수 있다. 이 방법에서는, PCR 산물의 가닥보다는 고상 지지체 상에 포획되는 것은 뉴클레오타이드 중합 프라이머 (바람직하게는 올리고뉴클레오타이드)이다. 이어서 표적 및 경쟁자 핵산 PCR 산물을 고상 지지체에 용액 중에 첨가하여 중합 단계를 수행한다. 중합 산물의 결합되지 않은 센스 가닥을 전술한 변성 조건 하에서 제거한다.
표적 대 경쟁자 핵산 비율은 전술한 바와 같이 적절한 측정 수단 (바람직하게는 ELISA 판독기)과 표준 곡선을 이용함으로써, 표지된 올리고뉴클레오타이드 SSO 프로브를 검출함으로써 구할 수 있다. 이 방법은 효율성이 매우 높아서 중합 단계 중의 연쇄 반응이 필요하지 않을 수도 있으며, 이에 따라, 방법을 수행하는데 소요되는 시간도 단축된다. 최종 중합 산물을 반응 시험관으로부터 중합을 위한 고상 지지체로 옮길 필요가 없기 때문에, 이 방법의 정확도 역시도 향상되며, 이에 따라, 그의 손실 또는 손상 가능성도 적어진다. 그러나, 특정 시료의 경우 필요할 때는, PCR을 이용하여 별도의 반응 시험관에서 표적과 경쟁자 핵산을 증폭시킨 다음, 고상 지지체 상에서 최종 중합을 수행할 수도 있다.
반응의 마지막 몇번의 사이클 동안 반응 용액에 당업자에게 알려진, 결합된 PCR 산물의 형성을 가리키는 검출가능한 여러개의 시그날을 제공할 수 있는 분자들 (예컨대 표적과 경쟁장 PCR 산물의 형성을 가리키는 여러가지 색상을 형성할 표지된 뉴클레오타이드 발색단)을 첨가할 수 있다. 표적과 경쟁자 핵산 사이의 비율은 ELISA나 다른 적절한 측정 수단 및 고정된 혼성화 프라이머의 3' 말단에 커플링된 검출 태그와 반응하는 시약에 의해서도 측정할 수 있다. 이 방법은 또한 통상적인 비경쟁식 PCR 프로토콜을 실시함으로써 시료 (시료를 정량하지 않음) 중에 특정 유전자가 존재하는지를 검출하도록 변형시킬 수도 있다.
본 발명이 속한 기술 분야에서 통상의 기술을 가진 당업자들은, 전술한 방법에서 사용되기에 적절한 프라이머를 어떻게 선택할지에 관해 쉽게 알 수 있을 것이다. 전술한 기술과 관련한 부가적인 상세는 Kohsaka 외, Nuc.Acids Res., 21:3469-3472, 1993; Bunn 외, 미국특허 제5,213,961; 및 Innis 외, PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Acad.Press, 1990 에 자세히 설명되어 있다. 이들 문헌의 기재 사항은 오로지 정량적 PCR 프로토콜과 관련한 종래기술을 설명하기 위한 목적으로 본 발명에 참조된다.
기준치 (
reference
levels
)
YKL-40 수준이 증가한다는 것은 비특이적 질환 또는 장애가 존재함을 가리키는 것이므로, 이러한 비특이적 질환 또는 장애의 존재를 진단하는데 이용될 수 있다. 주어진 대상자의 YKL-40 수준이 증가하는지 여부는 측정치를 기준치와 비교함으로써 확인할 수 있다. 기준치는 또한 예컨대 비특이적 질환 또는 장애의 증가된 위중도를 각각 반영하는 하나 이상의 기준치일 수도 있고, 또는 기준치는 예컨대 동일 대상자로부터의 시료의 이전 측정에 의해 얻은 하나 이상의 기준치일 수도 있다.
이전에는, 예컨대 다양한 질병 또는 건강한 개체에 대해 YKL-40 수준이 보고되어 옴으로 해서, 정상 수준을 가리키는 것으로 되어 있었다. 그러나, 이러한 앞서 보고된 건강한 개체로부터의 "정상적인" YKL-40 수준은 "건강한 대상자"가 시간이 경과하여도 건강한 채로 남아있는지에 관하여 후속적인 경시 조사에 의해 뒷받침되지 않은 건강한 개체들로부터의 값을 포함한다. 이에 따라, 이전에 보고된 YKL-40 수준은 시료 채취 당시 잠재적으로 동정되지 않은 질병에 걸린 개체들의 경우를 포함하며, 이때문에, 보고된 YKL-40 수준은 진정한 "정상 수준"을 나타내지 못하였다. 이와 같이 예컨대 건강한 개체들로부터 얻은 이러한 앞서 보고된 YKL-40 수준 역시도 연령 효과를 고려하지 못한채 예컨대 평균 수준으로서만 보고되어 왔다.
본 발명에 포함된 실시에로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명자들은 진정한 "정상 수준 (normal level)"을 표현하는 방법을 동정해냈다. 이 정상 수준은 건강한 개체들의 대집단에 기반하여 동정되었으며 이러한 개체들이 진정한 "건강한 개체들"인지에 관해 후속적으로 경시 조사를 행하였다. 본 발명자들은 놀랍게도, 동정된 "정상 수준"이 본 발명의 방법에 따라, 대상자에서, 예컨대 비특이적 질환 또는 장애와 같은 질환 또는 장애의 존재를 진단하는데 이용될 수 있음을 발견하였다. 본 발명자들은 또한 YKL-40 수준에 연령이 크나큰 영향을 미친다는 것과, 본 발명의 방법을 이용할 때는 이러한 사실을 고려해야만 한다는 것도 밝혀냈다.
YKL-40의 기준치는 여러가지 방식으로 표현할 수 있다; 전통적인 기준치는 다양한 연령대의 건강한 개체들 그룹으로부터 얻을 수 있다. 본 발명자들은 YKL-40 수준에 연령이 미치는 영향력을 조사하였으며, YKL-40 측정치를 연령 특이적인 그룹과 비교하는 것이 바람직하다는 것을 발견하였다.
개체의 연령 특이적인 그룹은 0 내지 10세, 10세 내지 20세, 20세 내지 30세, 30세 내지 40세, 40세 내지 50세, 50세 내지 60세, 60세 내지 70세, 70세 내지 80세, 80세 내지 90세, 90세 내지 100세 등과 같은 연령대별 개체들로 이루어질 수 있다. 그 인터벌은 2년의 연령차, 3년, 4년 또는 5년의 연령차, 6년, 7년, 8년, 9년, 10년의 연령차 (기재된 바와 같음), 12년, 15년, 20년 또는 그 이상의 연령차일 수 있다. 인터벌은 또한 개방형일 수 있으며, 예컨대 개체들은 모두 20, 30, 40,50, 60 또는 기타 연령을 넘을 수 있다.
본 발명자들은 혈장 YKL-40 수준이 남성과 여성 간에 통계적인 차이가 없음을 발견하였다 (후술하는 실시예 1 참조). 따라서, 기준치 계산을 위한 기본값 형성의 발판이 된 개체들의 그룹은 혼성 그룹일 수도 있고 동일한 성별만으로 이루어진 개체들의 그룹일 수도 있다. 기준치는 또한 질병 또는 장애의 존재 여부에 대해 진단받고자 하는 바로 그 개체로부터 얻을 수도 있다. 예를 들어서, 질병 또는 장애 진단에 앞서서 (발병 전) 및 질병 또는 장애의 증상이 수립되기 전에 (증상 발현 전)에 얻은 하나 이상의 시료에서 YKL-40 수준을 측정할 수 있다.
본 발명의 바람직한 실시 상태에서, YKL-40의 기준치는 건강한 개체들로부터 얻은 시료에 있어서의 YKL-40 수준을 측정함으로써 얻은 평균 수준이며, 더욱 바람직하게는, 이렇게 얻은 평균 수준이 연령별로 조정된 평균 수준이면 더욱 좋다.
특히 본 발명의 한가지 실시 상태에서, 평균 수준은 YKL-40 혈장 수준이 약 14 내지 약 168 ㎍/L (2.5% - 97.5% 백분위수 범위), 바람직하게는 혈장 수준이 약 124 ㎍/L (95% 백분위수), 더욱 바람직하게는 혈장 수준이 92 ㎍/L (90% 백분위수) 미만인 것이 좋다. 바람직하기로는, 평균 수준은 YKL-40 혈장 수준 범위가 약 35 내지 약 55 ㎍/l, 예컨대, 약 40 내지 약 50 ㎍/l인 것이 좋다. 본 발명의 더욱 특이적인 실시 상태에서, 중앙값 (median level)은 YKL-40 혈장 수준이 약 42 ㎍/l인 것이다. 연령이 증가함에 남성과 여성 모두에서 혈장 YKL-40 수준도 증가하며 여성과 남성에 있어서 혈장 YKL-40의 차이는 없다. 이러한 혈장 YKL-40 수준은 건강한 대상자의 시료에서 발견되며 이들 건강한 대상자들로 된 대규모 그룹을 연구하여 발견되며 이에 의해 본 발명에 따른 방법에서 사용될 수 있는 혈장 YKL-40 수준의 기준치로 될 수 있다 (후수하는 실시예 1 참조).
본 발명이 연령-조정된 평균 수준을 이용하는 경우, 평균 수준은 여성의 경우 0.5 ㎍/l/1년, 남성의 경우는 0.8 ㎍/l/1년 만큼 연령-조정된다. 이 연령 조정은 예를 들어서, 본 발명의 세 번째 및 네 번째 구체예서 예시된 바와 같이, 동일 대상자에 있어서 앞서 측정된 YKL-40 수준에 대해 수행하는 것이 바람직하다. 별법으로, 기준치는 일련의 YKL-40 연령 의존성 기준치, 예컨대, 건강한 개체들의 연령 분포형 아집단으로부터의 시료 중의 YKL-40 수준을 측정함으로써 수득된 YKL-40의 하나 이상의 기준치일 수 있다. 전술한 바와 같이, 예컨대, 연령 특이적 개체 그룹, 예컨대 개체들 모두가 동일한 10년 주기 (데케이드)에 태어난 경우와 같이, 전술한 바와 같이 개체들의 연령 특이적 그룹으로부터 기준치를 얻을 수 있다. 예컨대, 각각이 다음 연령군에 속하는 건강한 개체들 그룹에 있어서의 평균 YKL-40 혈장 수준인 일련의 기준치를 들 수 있다: 30 내지 39세, 40세 내지 49세, 50세 내지 59세, 및 60세 내지 69세. 바람직한 YKL-40 연령 의존성 기준치 세트에 관하여 이하에 더욱 상세히 설명한다.
본 발명에 따른 방법의 특정 실시 상태에서, YKL-40의 하나 이상의 기준치 중 하나는 건강한 개체들에서 측정된 바와 같은 YKL-40의 75번째 백분위수에 해당하는 연령 조정된 컷오프 값이다.
본 발명에 따른 방법의 또 다른 특정 실시 상태에서, YKL-40의 하나 이상의 기준치 중 하나는 건강한 개체들에서 측정된 바와 같은 YKL-40의 85번째 백분위수에 해당하는 연령 조정된 컷오프 값이다.
본 발명에 따른 방법의 또 다른 특정 실시 상태에서, YKL-40의 하나 이상의 기준치 중 하나는 건강한 개체들에서 측정된 바와 같은 YKL-40의 90번째 백분위수에 해당하는 연령 조정된 컷오프 값이다.
본 발명에 따른 방법의 또 다른 특정 실시 상태에서, YKL-40의 하나 이상의 기준치 중 하나는 건강한 개체들에서 측정된 바와 같은 YKL-40의 95번째 백분위수에 해당하는 연령 조정된 컷오프 값이다.
본 발명에 따른 방법의 또 다른 특정 실시 상태에서, YKL-40의 하나 이상의 기준치 중 하나는 건강한 개체들에서 측정된 바와 같은 YKL-40의 97.5번째 백분위수에 해당하는 연령 조정된 컷오프 값이다.
본 발명에 따른 방법의 바람직한 실시 상태에서 YKL-40의 하나 이상의 기준치는 건강한 개체들로부터의 시료 중 YKL-40 수준을 측정함으로서 얻은 YKL-40의 기준치 세트를 포함한다; 첫 번째 기준치는 YKL-40의 중앙값이고, 두 번째 기준치는 건강한 개체에 있어서 YKL-40의 75번째 백분위수, 세 번째 기준치는 YKL-40의 85번째 백분위수, 네 번째 기준치는 YKL-40의 90번째 백분위수, 다섯 번째 기준치는 YKL-40의 95번째 백분위수, 여섯번째 기준치는 YKL-40의 97.5번째 백분위수이며, 일곱번째 기준치는 YKL-40의 중앙값의 팩터 4.5이며 여덟번째 기준치는 건강한 개체에 있어서 YKL-40의 중앙값의 팩터 5이다.
기준치를 특정하는 또 다른 방법은 컷오프 값을 사용하는 것이다. 컷오프 값은 전형적으로는 일정 숫자의 개체들을 두개의 그룹; 즉, YKL-40 수준이 특정 컷오프 값을 상회하는 그룹과 YKL-40 수준이 특정 컷오프 값을 하회하는 그룹으로 나눈 값이다. 컷오프 값은 여하한 종류의 생물학적 시료 중에서 측정된 바와 같은 생리적인 YKL-40 수준을 나타내는 값이거나 또는 당업자에 의해 선택된 값일 수 있다.
컷오프 값은 개체가 특정 카테고리 내에 속하는지와 관련하여 예스인지 노우인지를 지시하는데 이용될 수 있으며, 본 발명과 관련하여서는, 비특이적 질환의 존재 여부나 또는 비특이적 질환이나 장애의 위중도의 여러가지 단계들에 대응한다.
본 발명의 한가지 실시 상태에서 YKL-40의 기준치는 연령 조정된 컷오프 값, 예컨대, 약 80 ㎍/l 혈청 YKL-40의 컷오프 값, 예컨대, 약 90 ㎍/l 혈청, 약 100 ㎍/l 혈청, 약 110 ㎍/l 혈청, 약 120 ㎍/l 혈청, 약 130 ㎍/l 혈청 YKL-40일 수 있다. 바람직하게는, 약 100 ㎍/l 혈청 YKL-40인 것이 좋다. 연령 조정은 본 발명 명세서의 다른 곳에 설명된 바와 같이 행할 수 있다.
따라서, 본 발명의 바람직한 실시 상태에서, YKL-40의 기준치는 건강한 개체에 있어서, 혈장 YKL-40의 90번째 백분위수에 대응하는 연령 조정된 컷오프 값, 예컨대, 연령이 약 50세인 대상자의 경우 92 ㎍/l의 YKL-40 혈장 값, 또는 연령이 약 60세인 대상자의 경우 111 ㎍/l의 YKL-40 혈장 값이며; 더욱 바람직하게는 건강한 개체에 있어서, 혈장 YKL-40의 95번째 백분위수에 대응하는 연령 조정된 컷오프 값, 예컨대, 연령이 약 50세인 대상자의 경우 100 ㎍/l의 YKL-40 혈장 값, 또는 연령이 약 60세인 대상자의 경우 124 ㎍/l의 YKL-40 혈장 값이다. 95번째 백분위수 혈장 수준이 연령 조정된 것이고 컷오프 값으로서 적용될 경우, YKL-40 수준에 있어서, 보다 큰 잠재적인 개체 변이가 허용된다. 본 발명의 방법을 한명의 개체 대상자에 대하여 사용할 경우, 95번째 백분위수나 심지어 97.5번째 백분위수를 이용하여도 좋다. 그러나, 본 발명의 방법의 몇가지 경우에서는, 90번째 백분위수 혈장 YKL-40 수준을 적용하는 것이 좋다. 이것은 예컨대, 이 방법을 아직까지 증상이 일어난 적이 없는 비특이적 질환을 동정할 목적으로 검진하는데 적용되는 경우이다. 마찬가지로, 예컨대 검진 목적일 경우, 건강한 개체의 혈장 YKL-40 수준의 70번째 백분위수, 75번째 백분위수, 또는 85번째 백분위수를 사용하는 것이 타당할 수 있으며, 어느 백분위수를 사용할지는 어느 정도 수준의 민감도가 요구되는지에 따라 달라질 것이다. 예컨대 컷오프 값에서 선택된 백분위수가 낮을수록, 민감도는 높아진다. 낮은 백분위수를 이용함으로써, 예컨대 아직 질환이나 장애가 초기 단계에 있는 것과 같이, 질환 또는 장애에 의해 아직 또는 그다지 크게 영향을 받지 않은 대상자들이 발견될 수 있을 것이다. 그러나, 선택된 백분위수가 낮을수록 비특이적 질환 또는 장애가 실제로 없으면서 검진에서 발견될 수 있는 대상자의 비율이 높아지는데, 이는 아마도 잠재적인 개체별 생물학적 다양성 때문일 것이다.
따라서, 시료 중의 YKL-40의 측정치가 하나 이상의 기준치를 상회하는지를 결정함으로써 본 발명의 네 번째 구체예에 따른 비특이적 질환 또는 장애의 위중도를 분류할 수 있다. 달리 말해서, YKL-40의 하나 이상의 기준치와 시료로부터의 YKL-40 측정치를 비교함으로써,비특이적 질환 또는 장애의 분류가 가능하며, 여기서 YKL-40의 수준이 높을수록 그 비특이적 질환 또는 장애는 더 심한 것으로 분류된다.
별법으로, 컷오프 값은 또한 3610명의 건강한 대상자에서 정의되는 다음의 백분위수에 대응하는 혈장 YKL-40 수준으로서 달리 정의될 수 있다:
연령에 따라
70% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로서 정의됨 = 3.1 + 0.02 x 연령 (세)),
75% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로서 정의됨 = 3.2 + 0.02 x 연령 (세)),
90% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로서 정의됨 = 3.5 + 0.02 x 연령 (세)); 및
95% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로서 정의됨 = 3.6 +0.02 x 연령
컷오프 값은 또한 3610명의 건강한 대상자에서 정의되는 다음의 백분위수에 대응하는 혈장 YKL-40 수준으로서도 정의될 수 있다:
연령에 따라
70% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로서 정의됨 = 3.1 + 0.02 x 연령 (세)),
75% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로서 정의됨 = 3.2 + 0.02 x 연령 (세)),
85% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로서 정의됨 = 3.4 + 0.02 x 연령 (세)),
90% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로서 정의됨 = 3.5 + 0.02 x 연령 (세)),
95% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로서 정의됨 = 3.6 + 0.02 x 연령 (세)), 및
97.5% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로서 정의됨 = 3.9 + 0.02 x 연령 (세)),
본 발명에 따른 방법의 바람직한 구체예에서 YKL-40의 기준치는 전술한 공식에 대상자 연령을 직접 대입하여 산출한다. 상기 공식은 도 3a와 도 3b에도 설명되어 있으며, 이들 도면을 이용하여 직접 계산하지 않고도 컷오프 값을 직접 결정할 수 있을 것이다. 도 3a와 도 3b는 또한 예컨대 90번째 백분위수와 95번째 백분위수 모두에서 대상자 연령과 YKL-40 측정치를 직접 비교할 수 있게 해준다. 그에 따라 YKL-40 측정치가 기준치와 다르게 되는 연장점을 직접 가리켜준다. 90번째 백분위수에 대하여 전술한 공식을 사용하면, 약 20세, 약 30세, 약 40세, 약 50세, 약 60세, 및 약 70세의 대상자의 컷 값은: 각각 약 49 ㎍/l, 약 60 ㎍/l, 약 74 ㎍/l, 약 90 ㎍/l, 약 110 3/l, 및 약 134 ㎍/l YKL-40이다. 이에 대응해서, 95번째 백분위수에 대하여 상기 공식을 적용하면, 다음의 컷오프 값이 얻어진다: 각각 약 55 ㎍/l, 약 67 ㎍/l, 약 81 ㎍/l, 약 99 ㎍/l, 약 122 ㎍/l, 및 약 148 ㎍/l YKL-40.
본 발명에 따른 방법의 한가지 실시 상태에서 YKL-40의 기준치는 건강한 개체들의 혈청 또는 혈장 YKL-40 수준의 70번째 백분위수에 대응하는 연령 조정된 컷오프 값이다. 더욱 바람직하게는 연령 조정된 컷오프 값은 70번째 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로서 정의됨) = 3.1 + 0.02 x 연령 (세)이다.
본 발명에 따른 방법의 또 다른 실시 상태에서 YKL-40의 기준치는 건강한 개체들의 혈청 또는 혈장 YKL-40 수준의 75번째 백분위수에 대응하는 연령 조정된 컷오프 값이다. 더욱 바람직하게는 연령 조정된 컷오프 값은 75번째 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로서 정의됨) = 3.2 + 0.02 x 연령 (세)이다.
본 발명에 따른 방법의 또 다른 실시 상태에서 YKL-40의 기준치는 건강한 개체들의 혈청 또는 혈장 YKL-40 수준의 85번째 백분위수에 대응하는 연령 조정된 컷오프 값이다. 더욱 바람직하게는 연령 조정된 컷오프 값은 85번째 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로서 정의됨) = 3.4 + 0.02 x 연령 (세)이다.
본 발명에 따른 방법의 또 다른 실시 상태에서 YKL-40의 기준치는 건강한 개체들의 혈청 또는 혈장 YKL-40 수준의 90번째 백분위수에 대응하는 연령 조정된 컷오프 값이다. 더욱 바람직하게는 연령 조정된 컷오프 값은 90번째 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로서 정의됨) = 3.5 + 0.02 x 연령 (세)이다.
본 발명에 따른 방법의 또 다른 실시 상태에서 YKL-40의 기준치는 건강한 개체들의 혈청 또는 혈장 YKL-40 수준의 95번째 백분위수에 대응하는 연령 조정된 컷오프 값이다. 더욱 바람직하게는 연령 조정된 컷오프 값은 95번째 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로서 정의됨) = 3.6 + 0.02 x 연령 (세)이다.
본 발명에 따른 방법의 또 다른 실시 상태에서 YKL-40의 기준치는 건강한 개체들의 혈청 또는 혈장 YKL-40 수준의 97.5번째 백분위수에 대응하는 연령 조정된 컷오프 값이다. 더욱 바람직하게는 연령 조정된 컷오프 값은 97.5번째 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로서 정의됨) = 3.9 + 0.02 x 연령 (세)이다.
본 발명의 방법에 따른 특정 실시 상태에서 YKL-40의 기준치는 각각 70번째, 75번째, 85번째, 90번째, 95번째, 또는 97.5번째 백분위수에 대응하는, 바로 앞서 언급한 연령 조정된 컷오프 값들 중 2개 이상으로서 정의된 YKL-40 연령 의존 컷오프 값 세트이다.
본 발명의 첫 번째 또는 네 번째 측면의 바람직한 실시 상태에서, YKL-40의 기준치는 전술한 공식에 의해 바람직하게 산출되는 바와 같이, 70번째, 75번째, 85번째, 90번째, 95번째, 및 97.5번째 백분위수들 중 2개 이상의 백분위수에 의해 정의되는 YKL-40 연령 의존성 컷오프 값 세트이다. YKL-40 연령 의존성 컷오프 값 세트는 예컨대 20-29세, 30-39세, 40-49세 등의 연령 그룹 세트에 대해서도 계산될 수 있으며, 예컨대 여기서 컷오프 값은 그 연령 그룹에서 가장 높은 값이다. 본 발명의 첫 번째 또는 네 번째 구체예의 바람직한 한가지 실시 상태에서 컷오프 값 세트는 다음과 같다:
마찬가지로, 본 발명에 따른 방법에서 사용될 바람직한 연령 의존성 컷오프 값을 상기 공식에 의해 보다 세분시켜 다음과 같이 얻었다:
전술한 바와 같이 YKL-40 연령 의존성 기준치 세트를 본 발명의 방법에 이용할 수 있다. 건강한 대상자들에 대한 바람직한 연령 의존성 기준치 세트는 상기 공식에 의해 계산할 수 있다. 따라서, 본 발명의 방법에 사용될 바람직한 연령 의존성 기준치는 다음과 같다:
마찬가지로, 본 발명에 따른 방법에서 사용될 바람직한 연령 의존성 기준치를 상기 공식에 의해 보다 세분시켜 다음과 같이 얻었다:
본 발명의 또 다른 실시 상태에서, 시료 중 YKL-40 측정치가 약 25% 이상, 예컨대 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 80% 이상, 약 90% 이상, 약 100% 이 상, 약 110% 이상, 약 120% 이상, 약 130% 이상 또는 약 150% 이상 증가할 경우, 시료 중의 YKL-40의 측정치가 기준치를 상회한다고 하며, 그에 따라 비특이적 질환 또는 장애가 존재함을 가리키는 것으로 한다.
본 발명의 세 번째 및 네 번째 구체예와 관련하여 전술한 바와 같이, 기준치는 동일한 대상자로부터 이전에 측정된 값일 수 있다. 따라서, 본 발명의 세 번째 구체예에서 상기 방법은 대상자의 비특이적 질환 또는 장애의 존재를 진단하기 위한 방법이며, 상기 방법은:
i) 대상자로부터 얻은 시료 중의 YKL-40 수준을 측정하는 단계; 및
ii) 상기 YKL-40 수준을 YKL-40의 기준치와 비교하는 단계로서, 여기서 상기 기준치는 동일 대상자에 대하여 이전에 측정된 값인 것인 단계
를 포함하여 이루어지며, 여기서 시료 중의 YKL-40 수준이 YKL-40의 기준치에 비하여 1.10 팩터만큼 증가하는 경우 비특이적 질환 또는 장애의 존재를 가리키는 것이다. 바람직하게는, YKL-40의 기준치는 필요하다면, 연령 조정된 기준치, 예컨대, 여성의 경우 0.5 ㎍/l/1년 남성의 경우 0.8 ㎍/l/1년을 더하여 얻은 값이다. 이것은 이전에 앞은 기준치가 3년 이상 전에, 예컨대 5년 이상 전, 8년 이상 전, 또는 10년 이상 전에 얻은 값일 경우 적합하다. 예를 들어, 이전에 얻은 기준치가 10년도 더 넘게 전에 얻은 것일 경우.
적용된 기준치가 동일 대상자로부터 이전에 얻은 YKL-40 측정치인 경우, 시료 중의 YKL-40 수준이 약 109% 이상 증가하면, 시료 중의 YKL-40 측정치는 기준치보다 훨씬 높다고 말하며, 그에 따라, 비특이적 질환 또는 장애가 존재함을 강하게 시사하는 것이다. 다음에 계산례를 나타내었는데, 여기서는 이전에 얻은 YKL-40 수준이 50 ㎍/l이고, 109% 만큼 증가된 YKL-40 수준은 다음과 같이 계산된다: 50 ㎍/l + (50x1.09) ㎍/l = 50 ㎍/l + 54.5 ㎍/l = 104.5 ㎍/l. YKL-40 수준에 영향을 미칠 수 있는 여하한 방법상의 변형, 생물학적 다양성이 약 109% 이상의 증가에 포괄된다. 상세한 내용은 후술하는 실시예 2를 참조.
전술한 바와 같이, 본 발명자들은 여성의 경우 YKL-40 수준의 증가가 1년에 0.5 ㎍/l, 남성의 경우 1년에 0.8 ㎍/l임을 발견하였다. 따라서, 동일한 대상자에서 이전에 측정된 YKL-40 수준과 비교하여 측정치가 상기 증가분보다 더 크게 증가한 경우에는, 비특이적 질환 또는 장애가 존재할 위험이 있거나, 또는 기존의 비특이적 질환 또는 장애의 위중도가 더 심화됨을 가리키는 것이다. 따라서, 전술한 109% 미만의 증가는 질환 또는 장애의 존재 또는 질환 또는 장애의 악화를 가리키는 것일 수 있다. 따라서, 예를 들어 약 25세인 여성의 경우 이전에 측정한 YKL-40 수준이 약 60 ㎍/l이고, 5년 후에 새로 측정한 경우, 연령으로 인한 증가분은 약 2.5 ㎍/l이므로, 새로 측정시의 연령에 따라 보정된 값은 약 62.5 ㎍/l이어야 한다. 만일 측정치가 이 값 대신 약 66 ㎍/l이라면, 비특이적 질환이나 장애가 존재할 수 있음을 시사하는 것이다.
기준치가 동일 개체에 대하여 이전에 측정하여 얻은 값일 경우, 본 발명에 따른 방법의 특히 바람직한 실시 상태에서, 시료 중의 YKL-40 수준이 YKL-40 기준치에 비해 팩터 1.10만큼 증가한 경우 비특이적 질환 또는 장애가 존재함을 가리키며, 이 때 그 증가분이 YKL-40 기준치에 비해 더욱 바람직하게는, 팩터 1.25, 예컨대 약 팩터 1.30, 또는 팩터 1.40;더욱 좋기로는 적어도 약 팩터 1.50 , 예컨대 팩터 1.60, 팩터1,70, 팩터 1.75; 더더욱 좋기로, 적어도 팩터 1.75, 예컨대 팩터 1.80, 팩터 1.90, 팩터 2; 가장 좋기로는 적어도 팩터 2, 예컨대 팩터 2.10, 팩터 2.20, 팩터 2.25 또는 팩터 2.50만큼 증가한 경우에는 비특이적 질환 또는 장애가 존재함을 가리킨다. 기준치 50 ㎍/l에 비해서 YKL-40 수준이 팩터 1.10만큼 증가한 경우는 다음과 같이 계산된다: 50 ㎍ x 1.10 = 55 ㎍/l (즉, 새로운 수준은 55 ㎍/l임).
전술한 내용으로부터, 증가폭이 클수록 비특이적 질환 또는 장애가 존재함을 더욱 강하게 시사하는 것이다. 본 발명의 세 번째 구체예의 바람직한 실시 상태에서 시료 중의 YKL-40 수준이 동일 개체에서 이전에 얻은 YKL-40 기준치에 비해 팩터 2, 예컨대 적어도 팩터 2만큼 증가되었다면, 이는 비특이적 질환 또는 장애가 존재함을 가리키는 것이다. 팩터 2 이상 증가한 경우는 전술한 유의적인 증가 109% 이상에 대응한다.
만일 동일 대상자에 대하여 이전에 측정한 YKL-40 수준이 이미 비특이적 질환 또는 장애가 존재할 것으로 예상되는 수준인 경우, 본 발명의 첫 번째 구체예를 참조하면, 비특이적 질환 또는 장애가 악화되지 않는 한, 시간 경과에 따른 증가분은 여성의 경우 연령 의존 증가분인 0.5 ㎍/l/1년을 초과하지 않고, 남성의 경우 0.8 ㎍/l/1년을 초과하지 않을 것으로 예상된다. 이 경우, 증가를 설명하는 팩터가 낮은 것이 특히 바람직하다. 따라서, 시료 중의 YKL-40 수준이 YKL-40의 기준치에 비해 좋기로는 적어도 팩터 1.10만큼 증가하면 비특이적 질환 또는 장애가 존재함을 시사하거나 또는 비특이적 질환 또는 장애가 악화됨을 가리키는 것이다.
또한, 기준치가 동일 개체에서 이전에 측정된 값인 경우의 본 발명에 따른 방법의 한가지 실시 상태에서, 시료 중의 YKL-40 수준이 기준치에 비해 팩터 0.90만큰 감소한 경우에는 병세가 호전되었음을 가리킨다. 따라서, 시료 중의 YKL-40 측정치가 YKL-40 기준치에 비해 적어도 팩터 0.90만큼 감소한 경우, 더욱 좋기로는 YKL-40 기준치에 비해 적어도 팩터 0.80, 예컨대 팩터 0.70만큼 감소한 경우; 더욱 좋기로는 팩터 0.60; 더더욱 좋기로는 팩터 0.50; 가장 좋기로는 적어도 팩터 0.48만큼, 예컨대 팩터 0.45, 팩터 0.43, 팩터 0.40 또는 팩터 0.38만큼 감소한 경우에는 비특이적 질환 또는 장애 증세가 덜 심한 단계로 경감되거나, 또는 심지어는 그 대상자가 치유됨을 나타내는 것이다. YKL-40 수준이 적어도 팩터 0.90만큼 감소하였다고 기재한 경우, 그 의미는, 그 수준이 팩터 0.90 또는 예컨대 0.80, 0.70 등으로 감소한 것임을 의미하며, 즉, 100 ㎍/l의 수준이 적어도 90 ㎍/l 또는 그 이하의 값으로 감소한 것임을 의미한다.
본 발명의 세 번째 구체예의 보다 바람직한 실시 상태에서 시료 중의 YKL-40 수준이 YKL-40 기준치에 비해 52% 감소되었다는 것은 비특이적 질환 또는 장애가 그 비특이적 질환 또는 장애의 덜 위중한 단계로 완화되었음을 가리키는 것이다. 예컨대, 이전에 측정된 YKL-40 수준이 100 ㎍/l이고, YKL-40 수준이 52%만큼 감소된 경우: 100 ㎍/l - (100x0.52) ㎍/l = 100 ㎍/l - 52 ㎍/l = 48 ㎍/l인 것으로 계산된다. 약 52% 감소는 YKL-40 수준에 영향을 미칠 수 있는 모든 방법 변형, 생물학적 다양성을 모두 포괄하는 것으로서, 이하의 실시예 2에 더욱 자세히 설명되어 있다.
본 발명의 네 번째 구체예에서는, 하나 이상의 YKL-40 기준치에 대한 시료 중의 YKL-40 수준의 증가를 측정함으로써, 비특이적 질환 또는 장애의 위중도를 분류한다. 따라서, 한가지 실시 상태에서 시료 중의 YKL-40 수준이 YKL-40 기준치에 비해 적어도 팩터 1.10 이상 만큼 증가하면, 더욱 좋기로는 YKL-40 기준치에 비해 시료의 YKL-40 수준이 적어도 팩터 1.25, 예컨대 팩터 1.30, 또는 팩터 1.40; 더욱 좋기로는 적어도 팩터 1.50 만큼 증가하면, 예컨대 팩터 1.60, 팩터 1.70 또는 팩터 1.75만큼 증가하면; 더욱 바람직하기로는 적어도 팩터 1.75만큼, 예컨대 팩터 1.80, 또는 팩터 1.90, 또는 팩터 2만큼 증가하면; 가장 좋기로는 적어도 팩터 2만큼, 예컨대 팩터 2.1, 팩터 2.20, 팩터 2.25, 또는 팩터 2.50만큼 증가하면, 비특이적 질환 또는 장애가 그 비특이적 질환 또는 장애의 보다 심각한 상태로 진전되었음을 가리키는 것이다. 증가폭을 측정하기 위해 이러한 팩터를 이용하는 것은 본 발명의 나머지 구체예와 관련하여 추가로 설명한다.
본 발명의 네 번째 구체예의 보다 바람직한 실시 상태에서 YKL-40 기준치에 비해 시료 중의 YKL-40 수준이 109% 증가하였다면, 이는 비특이적 질환 또는 장애가 보다 위중한 상태로 진전되었음을 가리킨다. 이전에 측정된 YKL-40 수준이 50 ㎍/l이고, ㎍ 수준이 109%만큼 증가한 경우라면 다음과 같이 계산된다: 50 ㎍/l + (50x1.09) ㎍/l = 50 ㎍/l + 54.5 ㎍/l = 104.5 ㎍/l.
마찬가지로, 하나 이상의 기준치와 비교한 시료 중의 YKL-40 수준 감소를 측정함으로써 본 발명의 네 번째 구체예에 따라 비특이적 질환 또는 장애의 위중도를 분류할 수 있다. 따라서, 한가지 실시 상태에서, YKL-40 기준치에 비해 시료 중의 YKL-40 수준이 적어도 팩터 0.90 만큼 감소된 경우, 더욱 바람직하게는 YKL-40 기준치에 비해서 적어도 팩터 0.80 만큼, 예컨대 팩터 0.70만큼 감소한 경우; 더욱 좋기로는 적어도 팩터 0.60; 더욱 좋기로는 적어도 팩터 0.50; 가장 좋기로는 적어도 팩터 0.48, 예컨대 팩터 0.45, 팩터 0.43, 팩터 0.40 또는 팩터 0.38 만큼 감소된 경우에는, 비특이적 질환 또는 장애가 덜 위중한 상태로 호전되었음을 가리키는 것이다. 증가분을 측정하는데 있어서 이러한 팩터의 사용은 본 발명의 나머지 구체예들과 관련하여 전술한 바 있다.
본 발명의 네 번째 구체예의 더욱 바람직한 실시 상태에서 YKL-40 기준치에 비해 시료 중의 YKL-40 수준이 52% 감소되었다는 것은 비특이적 질환 또는 장애가 덜 위중한 단계로 호전되었음을 가리키는 것이다.
본 발명의 네 번째 구체예의 바람직한 실시 상태는 대상자에 있어서 비특이적 질환 또는 장애의 위중도를 분류하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은
i) 대상자로부터 얻은 시료 중의 YKL-40 수준을 측정하는 단계; 및
ii) 상기 YKL-40 수준을 YKL-40의 하나 이상의 기준치와 비교하는 단계로서, 상기 기준치는 동일 대상자로부터 이전에 측정된 하나 이상의 YKL-40 측정치인 것인 단계
를 포함하여 이루어지며, 여기서 시료 중의 YKL-40의 수준이 YKL-40의 기준치에 비해 적어도 팩터 1.10만큼 증가한 경우에는 그 질환 또는 장애가 보다 심각한 단계로 진전되었음을 가리키고; 시료 중의 YKL-40 수준이 YKL-40 기준치에 비해 적어도 팩터 0.90만큼 감소하였다면 이는 그 질환 또는 장애가 덜 위중한 단계로 호전되었음을 가리키는 것이다.
전술한 내용으로부터 증가폭이 클수록 그 질환 또는 장애의 위중도는 더 악화된 것임을 알 수 있다. 본 발명의 네 번째 구체예의 바람직한 실시 상태에서, 시료 중의 YKL-40 수준이 동일 개체에 대하여 이전에 측정된 수준으로서의 YKL-40 기준치에 비해 팩터 2만크, 에컨대 적어도 팩터 2만큼 증가한 경우에는, 그 질환 또는 장애가 더욱 심각한 상태로 진행되었음을 가리키는 것이다.
기타
바이오마커
YKL-40은 비특이적 질환 또는 장애의 존재 여부를 지시하거나 또는 비특이적 질환 또는 장애의 위중도를 분류하기 위한 독립적인 일반 바이오마커이며, 그에 따라 이용될 수 있다. 나아가, YKL-40은 예컨대 C-반응성 단백질 (CRP), ESR, 암배아 항원 (CEA), CA-125, 인간 상피 성장인자 수용체 2 (HER2), CA19-9, 락테이트 데히드로게나제 (LDH), 조직 억제제 메탈로 프로티나제 1 (TIMP-1), 뇌 나트륨 이뇨 단백질 (BNP), 인터류킨, 종양 괴사인자-알파, 호모시스테인, 아밀로이드 A 단백질, 임신 관련 혈장 단백질 A, 트로포닌, 가용성 세포간 부착 분자-1, 가용성 UPAR, III형 프로콜라겐의 아미노말단 프로펩타이드 (P-III-NP), 단구 화학유인성 단백질-1, 피브린 D-이량체, 성장분화인자-15, 허혈-변형 알부민, 지단백질 관련 포스포리파제 A2, 매트릭스 메탈로프로티나제, 펜트락신 3, 분비형 포스포리파제 A2 그룹 IIA, 세포간 부착 분자-1, 심장형 지방산 결합 단백질 (H-FABP), 미오신 경쇄-1 (MLC-1), P-셀렉틴 및 CKMB와 같은 다른 공지의 바이오마커들과 함께 조합되어 사용될 수도 있다. 전술한 바이오마커들 중, 가용성 형태와 비가용성 형태의 단백질 모두가 본 발명에 적합하며, 예컨대 UPAR 및 가용성 UPAR; 세포간 부착 분자-1 및 가용성 세포간 부착 분자-1 및 그 밖의 것들을 들 수 있다. 전술한 마커들의 수준은 면역분석법 또는 PCR 기반 분석법 또는 몇가지 분석법을 조합하여 사용함으로써, 혈액, 혈청, 혈장 또는 조직 시료와 같은 생물학적 시료에서 측정할 수 있다
따라서, 본 발명의 또 다른 구체예는 기타의 바이오마커의 수준과 조합하여 그의 YKL-40 수준에 따라 대상자를 진단하는 수단을 제공하는 것으로서, 여기서 상기한 기타의 바이오마커는 비제한적인 예로서 C-반응성 단백질 (CRP), ESR, 암배아 항원 (CEA), CA-125, 인간 상피 성장인자 수용체 2 (HER2), CA19-9, 락테이트 데히드로게나제 (LDH), 조직 억제제 메탈로 프로티나제 1 (TIMP-1), 뇌 나트륨 이뇨 단백질 (BNP), 인터류킨 및 종양 괴사인자-알파, 호모시스테인, 아밀로이드 A 단백질, 임신 관련 혈장 단백질 A, 트로포닌, 가용성 세포간 부착 분자-1, 가용성 UPAR, III형 프로콜라겐의 아미노말단 프로펩타이드 (P-III-NP), 단구 화학유인성 단백질-1, 피브린 D-이량체, 성장분화인자-15, 허혈-변형 알부민, 지단백질 관련 포스포리파제 A2, 매트릭스 메탈로프로티나제, 및 CKMB; 바람직하게는 C-반응성 단백질, ESR, 암배아 항원 (CEA), CA-125, 인간 상피 성장인자 수용체 2 (HER2), CA19-9, 락테이트 데히드로게나제 (LDH), 뇌 나트륨 이뇨 단백질 (BNP), 인터류킨, 종양 괴사인자-알파, 호모시스테인, 아밀로이드 A 단백질, 임신 관련 혈장 단백질 A, 트로포닌, 가용성 세포간 부착 분자-1, 가용성 UPAR, III형 프로콜라겐의 아미노말단 프로펩타이드 (P-III-NP), 단구 화학유인성 단백질-1, 피브린 D-이량체, 성장분화인자-15, 허혈-변형 알부민, 지단백질 관련 포스포리파제 A2, 매트릭스 메탈로프로티나제, 및 CKMB로 이루어진 군으로부터 선택된다. 이들 부가적인 바이오마커들 중 C-반응성 단백질, 뇌 나트륨 이뇨 단백질 및 호모시스테인이 특히 흥미롭다.
본 발명의 이 구체예의 특정 실시 상태에서 부가적인 마이오마커는 C-반응성 단백질, ESR, 암배아 항원 (CEA), CA-125, 인간 상피 성장인자 수용체 2 (HER2), CA19-9, 락테이트 데히드로게나제 (LDH), 조직 억제제 메탈로 프로티나제 1 (TIMP-1), 뇌 나트륨 이뇨 단백질, 인터류킨, 종양 괴사인자-알파, 호모시스테인, 아밀로이드 A 단백질, 임신 관련 혈장 단백질 A, 트로포닌, 가용성 세포간 부착 분자-1, 가용성 UPAR, III형 프로콜라겐의 아미노말단 프로펩타이드 (P-III-NP), 단구 화학유인성 단백질-1, 피브린 D-이량체, 성장분화인자-15, 허혈-변형 알부민, 지단백질 관련 포스포리파제 A2, 매트릭스 메탈로프로티나제, 및 CKMB로 이루어진 군으로부터 선택되며; 더욱 바람직하게는 C-반응성 단백질, 뇌 나트륨 이뇨 단백질 및/또는 호모시스테인 중에서 선택되는 것이 좋다.
상기한 실시 상태들은 필요한 모든 의약 및 또는 채취 장비와, 해당 장비에 대한 사용 지침 및 선택된 분석법의 실시 지침과 함께, 키트 오브 파트 내에 포함될 수 있다.
생물학적 시료
생물학적 시료는 대상자로부터 얻은 시료이다. 따라서 생물학적 시료는 조직, 혈액, 혈청, 혈장 시료, 뇨, 뇌척수액, 윤활액, 복수 및 타액으로 이루어진 군에서 선택된 시료일 수 있다. 본 발명에 특히 적합한 것은 혈액, 혈청 또는 혈장이며, 혈청 또는 혈장인 것이 더욱 바람직하다. 본 발명이 속한 기술 분야의 당업자들은 어떤 분석 시료가 특정 질환 또는 질병, 또는 일반적인 건강 상태를 진단하는데 가장 적합할지 쉽게 결정할 수 있을 것이다.
대상자
본 발명에서 대상자라 함은 종, 바람직하게는 포유동물 종의 단일 멤버를 가리킨다. 포유동물 종이면 본 발명의 목적에 부합하며, 특히 다음의 종류가 적절하다: 마우스, 래트, 기니픽, 햄스터, 토끼, 고양이, 개, 돼지, 소, 말, 양, 원숭이 및 인간. 본 발명에서 가장 바람직한 대상자는 인간이다. 대상자들은 본 명세서에서 문맥에 따라 환자 또는 개체라고도 칭해진다.
디바이스
본 발명의 또 다른 측면은 비특이적 질환 또는 장애의 존재를 진단하기 위한 디바이스에 관한 것으로서, 여기서 상기 디바이스는 시료 중의 YKL-40의 수준을 측정하기 위한 수단; 및 YKL-40의 적어도 하나의 기준치와 상기 YKL-40 측정치를 비교하기 위한 수단을 포함하여 이루어진다. 시료 중의 YKL-40의 수준을 측정하기 위한 수단은 예컨대 면역분석법, PCR 기반 분석법 또는 효소 분석법과 같이 전술한 모든 분석 시스템에 적용되는 테스트 시스템일 수 있다. 본 발명의 디바이스에서는 면역분석법이 바람직하다.
본 발명에 따른 디바이스는 예컨대 생물학적 시료 중의 YKL-40 수준을 측정하기 위하여 고상 지지체 상에 설치되는 신속한, 정성 및/또는 정량 테스트 시스템일 수 있다.
고상 지지체는 전술한 모든 분석법, 특히 면역분석법을 수행하는데 있어서 여하한 상(phase)에서든지 이용될 수 있으며, 여기에는 딥스틱, 막, 흡수 패드, 비드, 마이크로타이터 웰, 시험관 등이 포함된다. 테스트 수행자나 또는 자가 테스트의 경우 환자 자신에 의해 간편하게 이용될 수 있으면서, 사전 훈련이 전혀 또는 거의 필요 없는 간편한 테스트 디바이스가 바람직하다. 이러한 통상적인 테스트 시스템의 제조 및 사용은 다양한 특허문헌, 의학 잡지 또는 과학 문헌에 잘 설명되어 있다. 스틱을 사용할 경우, 항 YKL-40 항체를 스틱의 한쪽 말단에 결합시켜서 항체가 있는 쪽의 말단이 생물학적 시료에 침지될 수 있도록 만든다. 별법으로, 피펫, 드롭퍼, 족집게 등에 의해, 시료를 항체가 코팅된 딥스틱 상에 적용시킬 수 있으며, 또는 신체로부터 스틱에 직접 분출시킬 수도 있다. 따라서, 본 발명의 이 측면의 바람직한 실시 상태에서, 디바이스는 딥스틱인 것이 좋다.
본 발명의 이러한 구체예에서 액체(fluid) 상태이거나 액체로 전환될 수 있는 생물학적 시료가 바람직하다. 특히 신체에서 액체로서 수득가능한 생물학적 시료가 바람직하며; 그의 비제한적인 예로서, 혈액, 혈청, 혈장, 뇨, 뇌척수액, 윤활액, 복수, 정액 및 타액을 들 수 있다. 더욱 바람직하게는 혈청과 혈장 시료가 좋다.
YKL-40에 대한 항체는 IgA, IgG 또는 IgM, Fab 단편 등과 같은 여하한 이소형일 수 있다. 항체는 본 발명에 참조로 통합된 Harlow 및 Lane의 방법 (Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988)에 설명된 바에 따라 제조된 모노클로날 또는 폴리클로날 항체일 수 있다. 면역분석법 섹션도 참조할 것. 항체는 직접 또는 간접 수단에 의해 고상 지지체에 적용될 수 있다. 간접 결합은 YKL-40 결합 부위를 분석 용액에 최대한 노출시켜 주는데 이는, 상기 결합 부위가 그 자체로는 지지체에 대한 결합에 이용되지 않기 때문이다. 폴리클로날 항체는 YKL-40의 여러가지 에피토프들을 인식할 수 있음으로 해서 분석 감도를 향상시켜주므로 폴리클로날 항체를 이용할 수 있다. 별법으로, YKL-40에 대한 모노클로날 항체를 이용할 수도 있다.
고상 지지체는 고상 지지체에 YKL-40 항체를 결합시킨 후 비특이적으로 차단시키는 것이 바람직하다. 주변 영역을 비특이적으로 차단하는 전체 또는 유도된 소의 혈청 알부민, 또는 다른 동물로부터 얻은 알부민, 동물의 전혈청, 카제인, 탈지유 등을 이용하여 수행할 수 있다.
YKL-40 특이 항체가 결합되어 있는 고상 지지체 상에 시료를 적용시켜, YKL-40이 상기 항체를 통해 고상 지지체에 결합하게끔 한다. 과량의 시료와 결합되지 않은 시료 성분들을 제거하고 고상 지지체를 세척하여 항체-항원 복합체가 고상 지지체 상에 유지되도록 하는 것이 좋다. 고상 지지체는 Tween-20, Tween-80 또는 도데실 황산나트륨과 같은 세정제를 함유할 수 있는 세정액을 이용하여 세척할 수 있다.
고상 지지체에 YKL-40을 결합시킨 후, YKL-40와 반응하는 2차 항체를 적용시킨다. 2차 항체는 바람직하게는 가시성(visible) 표지를 이용하여 표지시키는 것이 좋다. 표지는 가용성이거나 입자상일 수 있고 염색된 면역글로불린 결합 물질, 간단한 염료 또는 염료 폴리머, 염색된 라텍스 비드, 염료-함유 리포좀, 염색된 세포 또는 생물체, 또는 금속성, 유기, 무기 또는 염료 고체를 함유할 수 있다. 기술 분야에 잘 알려진 다양한 수단에 의해 YKL-40 항체에 표지를 결합시킬 수 있다. 본 발명의 몇몇 실시 상태에서 표지는 신호 생산 시스템에 커플링될 수 있는 효소일 수 있다. 가시성 표지의 예로는 알칼라인 포스파타제, 베타-갈락토시다제, 호스래디쉬 퍼옥시다제, 및 비오틴을 들 수 있다. 많은 효소-크로모겐 또는 효소-기질-크로모겐 복합체가 알려져 있으며 효소-결합 분석에 사용된다.
시료와 동시에, 대응하는 단계들을 공지량의 YKL-40과 함께 수행할 수 있으며 그러한 단계는 분석 표준일 수 있다.
고상 지지체를 다시 세척하여 표지된 미결합 항체를 제거하고, 표지된 항체를 가시화시켜 정량한다. 표지의 축적 여부는 일반적으로 육안으로 평가한다. 이러한 육안 검사에 의해, 사용된 표지에 따라, 여러가지 색상, 예컨대, 적색, 황색, 갈색, 또는 녹색을 검색할 수 있다. 축적된 표지는 또한 반사 분석기, 비디오 영상 분석기 등과 같은 광학 검출 디바이스를 이용하여 검색할 수도 있다. 축적된 표지의 가시 강도는 시료 내의 YKL-40의 농도와 상관관계가 있을 수 있다. 축적된 표지의 가시 강도와 YKL-40의 양 사이의 상관관계는 가시 강도를 참조 스탠다드 세트와 비교함으로써 얻을 수 있다. 바람직하게는, 스탠다드를 미지의 시료와 동일한 방식으로 분석하며, 더욱 바람직하게는, 동일하거나 상이한 고상 지지체 상에서 시료와 함께 분석한다. 사용될 스탠다드의 농도는 용액 1 리터 당 YKL-40 1 ㎍, 용액 1 리터 당 YKL-40 약 1 mg 이하 범위이며, 바람직하게는 피검 혈청 시료의 경우 그 범위는 40 ㎍/l 내지400 ㎍/l YKL-40이 될 것이다. 바람직하게는, YKL-40 스탠다드들을 여러가지 상이한 농도로 사용하면 색상 강도를 비교함으로써 미지 물질을 보다 정확히 정량할 수 있다. 110 ㎍/l YKL-40과 유사한 색상 강도는 예컨대 200 ㎍/l과 유사한 색상 강도와 비교할 때 음성인 것으로 여겨진다.
본 발명에 설명된 딥스틱이나 또는 기타의 고상 지지체 기반 테스트 시스템에서 사용되는 디바이스는 따라서 하나 이상의 스탠다드/대조군(control fields)을 비교함으로써 생물학적 시료 중의 YKL-40의 대략적인 수준을 측정하는데 이용될 수 있다. 따라서, YKL-40의 농도는 본 발명 디바이스의 스탠다드/대조군에 적용된 YKL-40의 두개의 농도 사이의 범위에 들도록 할 수 있다. 별법으로, YKL-40의 농도는 딥스틱의 대조군에 적용되는 컷오프값으로서 선택된 농도인 YKL-40의 컷오프 값보다 높거나 낮은 것으로 판정될 수 있다. 디바이스 내 및/또는 디바이스 상에서 이용가능한 기준치/스탠다드가 복수개일 수도 있고, 또는 디바이스 내 및/또는 디바이스 상에서 이용가능한 기준치/스탠다드가 하나일 수도 있다. 후자의 경우, 상기 디바이스는 즉, 시료의 YKL-40 수준이 기준치보다 높은지 또는 낮은지를 알아보기 위해, 하나의 기준치를 이용하여 시료내의 YKL-40 수준을 비교하기 위한, 예스 노 테스트로서 이용될 수 있다. 본 발명의 디바이스의 바람직한 실시 상태에서, 상기 디바이스는 컷오프 값을 나타내는 단일한 기준치를 포함한다. 기준치는 본 명세서의 전술한 "기준치" 섹션에서 설명된 바와 같은 기준치이면 어느 것이든 무방하다.
각각의 단계마다 용기들을 사용후 세척할 경우, 각각의 단계들을 동일한 용기, 예컨대 하나의 시험관에서 수행할 수 있으나, 각각의 단계, 즉, 시료용, 세척용 및 검출가능한 표지를 개발하기 위한 용도로 세개의 용기들을 각기 별도로 사용하면 신속하고도 간편한 현장 분석을 가장 바람직하게 수행할 수 있다.
따라서, 본 발명의 한가지 목적은 생물학적 시료가 기원하는 개체의 YKL-40의 기준치에 따른 분류에 이용하기 위하여 생물학적 시료의 YKL-40 수준을 딥스틱을 이용하여 측정하는 것이다 (도 9A 및 9B 참조).
본 발명의 이 구체예의 또 다른 실시 상태에서 상기 디바이스는 YKL-40 이외의 부가적인 바이오마커, 예컨대, 다음의 비제한적인 그룹, 즉: C-반응성 단백질 (CRP), ESR, 암배아 항원 (CEA), CA-125, 인간 상피 성장인자 수용체 2 (HER2), CA19-9, 락테이트 데히드로게나제 (LDH), 조직 억제제 메탈로 프로티나제 1 (TIMP-1), 뇌 나트륨 이뇨 단백질 (BNP), 인터류킨, 종양 괴사인자-알파, 호모시스테인, 아밀로이드 A 단백질, 임신 관련 혈장 단백질 A, 트로포닌, 가용성 세포간 부착 분자-1, 가용성 UPAR, III형 프로콜라겐의 아미노말단 프로펩타이드 (P-III-NP), 단구 화학유인성 단백질-1, 피브린 D-이량체, 성장분화인자-15, 허혈-변형 알부민, 지단백질 관련 포스포리파제 A2, 매트릭스 메탈로프로티나제, 펜트락신 3, 분비형 포스포리파제 A2 그룹 IIA, 세포간 부착 분자-1, 심장형 지방산 결합 단백질 (H-FABP), 미오신 경쇄-1 (MLC-1), P-셀렉틴 및 CKMB와 같은 기타의 바이오마커를 분석하기 위한 수단을 추가로 함유한다. 바람직하게는, 상기 디바이스는 C-반응성 단백질 및/또는 뇌 나트륨 이뇨 단백질 및/또는 호모시스테인을 분석하기 위한 수단을 포함하는 것이 좋다.
본 발명의 이 구체예의 특정 실시 상태에서 상기 디바이스는 C-반응성 단백질, ESR, 암배아 항원 (CEA), CA-125, 인간 상피 성장인자 수용체 2 (HER2), CA19-9, 락테이트 데히드로게나제 (LDH), 조직 억제제 메탈로 프로티나제 1 (TIMP-1), 뇌 나트륨 이뇨 단백질 (BNP), 인터류킨, 종양 괴사인자-알파, 호모시스테인, 아밀로이드 A 단백질, 임신 관련 혈장 단백질 A, 트로포닌, 가용성 세포간 부착 분자-1, 가용성 UPAR, III형 프로콜라겐의 아미노말단 프로펩타이드 (P-III-NP), 단구 화학유인성 단백질-1, 피브린 D-이량체, 성장분화인자-15, 허혈-변형 알부민, 지단백질 관련 포스포리파제 A2, 매트릭스 메탈로프로티나제, 및 CKMB로 이루어진 군으로부터 선택된 부가적인 바이오마커를 분석하기 위한 수단; 더욱 바람직하게는 C-반응성 단백질, 뇌 나트륨 이뇨 단백질 및/또는 호모시스테인을 분석하기 위한 수단을 포함한다.
디바이스와 관련한 적어도 하나의 기준치는 전술한 "기준치" 섹션에서 설명된 YKL-40의 기준치이면 어느 것이든 무방하다. 본 발명에 따른 디바이스의 한가지 특정 실시 상태에서, 상기 디바이스는 컷오프 값을 나타내는 단일 기준치를 포함한다.
본 발명의 이러한 측면의 또 다른 특정 실시 상태에서, 상기 디바이스는 YKL-40 측정치를 YKL-40의 연령 조정된 기준치들의 세트와 비교하기 위한 수단을 포함한다.
본 발명의 이 측면의 또 다른 특정 실시 상태에서, 상기 디바이스는 YKL-40의 측정치를 다음 표에 정의된 바와 같은 연령 의존성 컷오프 값들의 세트와 비교하기 위한 수단을 포함한다:
키트
오브
파트(
Kit
of
parts
)
본 발명에 따라 YKL-40을 분석하는데 사용되는 모든 물질과 시약들을 하나의 키트에 한데 모아놓을 수 있는데, 이러한 키트는 적어도, 개체로부터 얻은 생물학적 시료 중의 YKL-40의 수준을 평가하는데 도움을 주는 구성요소들 및, 그 사용방법에 관한 지침서를 포함한다.
상기한 구성요소들은 면역분석법과 같이YKL-40 수준을 측정하기 위한 방법 또는 YKL-40 검출에 특이적인 면역분석법을 수행하는데 필요한 파트들일 수 있다. 필요에 따라, 키트는 YKL-40의 검출 및 생물학적 시료로부터 얻은 동일품의 수준을 측정하기 위하여 PCR 기분 분석을 수행하기 위한 구성요소를 추가로 또는 대체하는 방식으로 포함할 수 있다. 키트 오브 파트는 하나 이상의 생물학적 시료를 얻기 위한 장비를 추가로 포함할 수 있는데, 이러한 장비는 예컨대 시린지, 바이알 등일 수 있다. 키트 오브 파트는 일회용으로 또는 반복 사용용도로 포장될 수 있고, 그 내부의 구성요소들은 일회용으로 사용한 후 폐기되는 것일 수도 있고, 또는 반복 사용을 가능하게 할 정도의 품질을 가질 수도 있다.
본 발명의 또 다른 구체예는 다음, 즉:
i) 시료 중 YKL-40의 수준을 측정하기 위한 수단;
ii) 상기 YKL-40 측정 수준을 적어도 YKL-40의 적어도 하나의 기준치와 비교하는 수단; 및
iii) 시료를 제공하는 대상자의 연령에 따라, YKL-40의 기준치를 어떻게 연령에 맞게 조정하는지에 관한 임의의 지침서
를 포함하여 이루어지는 키트 오브 파트에 관한 것이다.
적어노 하나의 기준치는 "기준치" 섹션에 설명된 바와 같은 YKL-40의 기준치이다.
시료 중의 YKL-40의 수준을 측정하는 수단은 YKL-40를 기지 농도로 함유하는 하나 이상의 용액, 세정액, 기질에 대한 효소의 직간접적인 작용에 의하여 색상 또는 색조를 변화시키는 색소원(chromogen) 용액, 검출될 수 있도록 표지에 컨쥬게이션된 항 YKL-40 항체, 상기 용액들을 옮기기 위한 피펫, 상기 용액들을 담을 시험관 및 YKL-40에 대한 폴리클로날 항체를 표면에 담지하며, 특히 시험관 내로 삽입하기에 적합한 고상 지지체를 함유할 수 있다. 키트는 또한 하나 이상의 시료를 동시에 또는 개별적으로 분석하는데 사용하기 위한 항 YKL-40 항체를 갖는 하나 이상의 고상 지지체, 및 필요에 따라 표지를 발현시키기 위한 시약을 포함할 수 있다. YKL-40 측정치를 YKL-40의 하나 이상의 기준치와 비교하기 위하여 포함되는 수단은 미지의 시료와 함께 새로 분석될 수 있는 YKL-40 스탠다드일 수 있다. 이러한 키트는 각각의 개별 시약들에 대한 별개 용기들을 포함할 수 있다.
전술한 테스트 키트에서, 시약들은 보관용 보틀에 담겨있거나 또는 하나 이상의 시험관에 시약 또는 대조품들을 미리 채워둘 수 있다.
키트의 구성성분들은 건조 또는 동결건조된 형태로 제공될 수도 있다. 시약 또는 성분들이 건조 형태로 제공될 경우, 일반적으로 적절한 용매를 부가하여 재조성시킨다. 다른 용기 수단에 용매를 제공할 수도 있다.
본 발명의 키트는 또한, 예컨대 사출 성형 또는 블로우 성형된 플라스틱 용기와 같이, 목적하는 바이알을 담을 수 있는 시판되는 밀폐 용기에 바이알 또는 시험관과 같이 시약을 수납하기 위한 수단을 일반적으로 포함한다. 키트는 또한 분석을 수행하는 일련의 지침서들도 포함한다.
본 발명의 이 구체예의 또 다른 실시 상태에서 키트는 YKL-40 이외의 부가적인 바이오마커, 예컨대 다음의 비제한적인 그룹: C-반응성 단백질 (CRP), ESR, 암배아 항원 (CEA), CA-125, 인간 상피 성장인자 수용체 2 (HER2), CA19-9, 락테이트 데히드로게나제 (LDH), 조직 억제제 메탈로 프로티나제 1 (TIMP-1), 뇌 나트륨 이뇨 단백질 (BNP), 인터류킨, 종양 괴사인자-알파, 호모시스테인, 아밀로이드 A 단백질, 임신 관련 혈장 단백질 A, 트로포닌, 가용성 세포간 부착 분자-1, 가용성 UPAR, III형 프로콜라겐의 아미노말단 프로펩타이드 (P-III-NP), 단구 화학유인성 단백질-1, 피브린 D-이량체, 성장분화인자-15, 허혈-변형 알부민, 지단백질 관련 포스포리파제 A2, 매트릭스 메탈로프로티나제, 펜트락신 3, 분비형 포스포리파제 A2 그룹 IIA, 세포간 부착 분자-1, 심장형 지방산 결합 단백질 (H-FABP), 미오신 경쇄-1 (MLC-1), P-셀렉틴 및 CKMB으로부터 선택된 하나 이상의 바이오마커를 분석하기 위한 수단을 포함한다.
본 발명의 이 구체예의 특정 실시 상태에서 키트는 C-반응성 단백질, ESR, 암배아 항원 (CEA), CA-125, 인간 상피 성장인자 수용체 2 (HER2), CA19-9, 락테이트 데히드로게나제 (LDH), 조직 억제제 메탈로 프로티나제 1 (TIMP-1), 뇌 나트륨 이뇨 단백질 (BNP), 인터류킨, 종양 괴사인자-알파, 호모시스테인, 아밀로이드 A 단백질, 임신 관련 혈장 단백질 A, 트로포닌, 가용성 세포간 부착 분자-1, 가용성 UPAR, III형 프로콜라겐의 아미노말단 프로펩타이드 (P-III-NP), 단구 화학유인성 단백질-1, 피브린 D-이량체, 성장분화인자-15, 허혈-변형 알부민, 지단백질 관련 포스포리파제 A2, 매트릭스 메탈로프로티나제 및 CKMB로 이루어진 군으로부터 선택되는 부가적인 바이오마커를 분석하기 위한 수단; 더욱 바람직하게는 C-반응성 단백질, 뇌 나트륨 이뇨 단백질 및/또는 호모시스테인을 분석하기 위한 수단을 포함한다.
바람직하게는 키트는 C-반응성 단백질 및/또는 뇌 나트륨 이뇨 단백질 및/또는 호모시스테인을 분석하기 위한 수단을 포함하는 것이 좋다.
본 발명에 따른 키트는 또한 상기 "디바이스" 섹션에서 전술한 바와 같은 디바이스를 추가로 포함할 수 있다.
본 명세서에서 인용된 모든 특허 및 비특허 문헌들은 그 내용 전체로서 본 발명에 참고 통합된다.
도 1. 2116명의 건강한 여성과 1494명의 건강한 남성에 있어서의 연령과 성별에 따른, YKL-40의 혈청 농도. 1991-1994년도에 채혈 당시 참가자들은 공지의 질병을 앓고 있지 않았으며 그 이후의 16년간 건강을 유지하였다 (즉, 아무도 죽지 않았고, 암, 허혈성 심혈관 질환, 간 질환, 당뇨병, 만성 폐쇄폐병, 천식, 류마티스성 관절염, 염증성 장질환 및 폐렴에 걸리지 않았다). 이들 건강한 참가자들에 있어서 평균 혈장 YKL-40은 42 ㎍/L (2.5%-97.5% 백분위수 범위 (백분위수 범위); 14-168 ㎍/L; 90% 백분위수 92 ㎍/L; 95% 백분위수 124 ㎍/L). 혈장 YKL-40 수준은 연령이 증가할수록 남성과 여성 모두에서 증가하였다 (트렌드 테스트 p<0.0001). 혈장 YKL-40과 연령 간의 스피어맨 상관계수 (Spearman's rho)는 0.41 (p<0.0001)이었다. 여성과 남성 간의 혈장 YKL-40에는 아무런 차이가 없었다 (만-휘트니 U; p=0.27).
도 2. 929명의 건강한 참가자 (여성 463명과 남성 466명)에 있어서 YKL-40의 혈장 농도. 1991-1994년 시험에서 혈중 YKL-40 측정을 최초로 받고 2001-2003년도 시험을 통하여 2차로 혈중 YKL-40 수준을 측정받음. 평균 증가치는 여성에 있어서 0.5 ㎍/L/1년 (사분위 범위(interquartile range) -0.6 - 2.1 ㎍/L/1년)이었고 남성의 경우에는 0.8 ㎍/L/1년 (-0.3 - 2.9 ㎍/L/1년)이었다. 이는 건강을 유지한 대상자들에 있어서 혈장 YKL-40이 매우 안정하다는 것을 설명하는 것으로서, 회귀 희석비율 0.8042를 컴퓨팅시켰다. 남성과 여성 사이에 통계적 차이는 없었다.
도 3a. 2116명의 건강한 여성과 1494명의 건강한 남성의 YKL-40 혈장 농도를 측정하였다. 참가자들은 1991-1994년 채혈 당시 알려진 질병에 걸리지 않았었고 이후 16년간 건강 상태를 유지하였다 (즉, 아무도 죽지 않았고, 암, 허혈성 심혈관 질환, 간 질환, 당뇨병, 만성 폐쇄폐병, 천식, 류마티스성 관절염, 염증성 장질환 및 폐렴에 걸리지 않았다). 도면은 연령에 따른 이들 건강한 참가자들의 50% 백분위수 혈장 YKL-40 (원), 70% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로 정의됨 = 3.1 + 0.02 x 연령 (세)), 75% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로 정의됨 = 3.2 + 0.02 x 연령 (세)), 90% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로 정의됨 = 3.5 + 0.02 x 연령 (세)) 및 95% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로 정의됨 = 3.6 +0.02 x 연령 (세))를 도시한다. 여성과 남성 데이터를 합쳤다.
도 3b. 도 3a에 대응하며, 혈장 YKL-40의 부가적인 백분위수를 추가하였다: 85% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로 정의됨 = 3.4 + 0.02 x 연령 (세)), 및 97.5% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로 정의됨 = 3.9 + 0.02 x 연령 (세)).
도 4a. YKL-40의 혈장 농도 증가에 따른 일반 집단의 장수 및 생존능 (5개의 성별 및 10세-연령 백분위수 카테고리로 나눔: 0-33% 백분위수, 34-66%, 67-90%, 91-95%, 및 96-100%). 기초가 되는 타임-스케일은 각각 좌절단 연령 (left-truncated age)과 후속 시간이었다. 팔로우-업은 채혈시 개시되어 사망시 또는 2007년 7월 중 빨리 도래하는 시기에 종결되었다. 여성과 남성의 자료를 합쳤다. 비교를 위해 동일 집단에서의 흡연 현황이 미치는 영향을 나타내었다.
도 4b. 혈장 YKL-40 백분위수 카테고리, 흡연 상태, 성별 및 연령에 따른 절대적인 10년 사망률. 코펜하겐시 건강 연구 1991-1994 시험에 참가 8899명의 참가자에 대하여 이후 16년에 걸친 연구 결과에 기초함. P 값은 로그-랭크 추세 (log-rank trend)를 위한 시험이다. 연령별 그룹 <50세, 50-70세, 및 >70세 각각에 대하여 좌측에서 우측으로 혈장 YKL-40 백분위수 카테고리 0-33%, 34-66%, 67-90%, 91-95%, 및 96-100%가 주어졌다.
도 5. 16명의 건강한 대상자의 YKL-40 혈청 수준에 있어서의 개체에 따른 일중 변이를 나타낸 그래프.
도 6. 38명의 건강한 대상자에 있어서 3주일의 기간에 걸친 혈청 YKL-40 수준에 있어서의 개체 변이를 나타낸 그래프.
도 7. 23명의 개체에 대하여 3주일간 각각 4회 측정된 평균 혈청 YKL-40 수준 (각각의 막대는 각 대상자에 있어서 1회 측정의 평균치를 나타낸다)을 나타낸 그래프.
도 8. 4주일에 걸쳐 채혈된 30명의 건강한 여성의 개별적인 혈청 YKL-40 수준 및 3년 후 21명의 여성에 대하여 동일한 측정을 반복한 결과를 나타낸 그래프.
도 9A 및 도 9B 상기내용으로부터 나타난 딥스틱 실시 상태.
도 2. 929명의 건강한 참가자 (여성 463명과 남성 466명)에 있어서 YKL-40의 혈장 농도. 1991-1994년 시험에서 혈중 YKL-40 측정을 최초로 받고 2001-2003년도 시험을 통하여 2차로 혈중 YKL-40 수준을 측정받음. 평균 증가치는 여성에 있어서 0.5 ㎍/L/1년 (사분위 범위(interquartile range) -0.6 - 2.1 ㎍/L/1년)이었고 남성의 경우에는 0.8 ㎍/L/1년 (-0.3 - 2.9 ㎍/L/1년)이었다. 이는 건강을 유지한 대상자들에 있어서 혈장 YKL-40이 매우 안정하다는 것을 설명하는 것으로서, 회귀 희석비율 0.8042를 컴퓨팅시켰다. 남성과 여성 사이에 통계적 차이는 없었다.
도 3a. 2116명의 건강한 여성과 1494명의 건강한 남성의 YKL-40 혈장 농도를 측정하였다. 참가자들은 1991-1994년 채혈 당시 알려진 질병에 걸리지 않았었고 이후 16년간 건강 상태를 유지하였다 (즉, 아무도 죽지 않았고, 암, 허혈성 심혈관 질환, 간 질환, 당뇨병, 만성 폐쇄폐병, 천식, 류마티스성 관절염, 염증성 장질환 및 폐렴에 걸리지 않았다). 도면은 연령에 따른 이들 건강한 참가자들의 50% 백분위수 혈장 YKL-40 (원), 70% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로 정의됨 = 3.1 + 0.02 x 연령 (세)), 75% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로 정의됨 = 3.2 + 0.02 x 연령 (세)), 90% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로 정의됨 = 3.5 + 0.02 x 연령 (세)) 및 95% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로 정의됨 = 3.6 +0.02 x 연령 (세))를 도시한다. 여성과 남성 데이터를 합쳤다.
도 3b. 도 3a에 대응하며, 혈장 YKL-40의 부가적인 백분위수를 추가하였다: 85% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로 정의됨 = 3.4 + 0.02 x 연령 (세)), 및 97.5% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로 정의됨 = 3.9 + 0.02 x 연령 (세)).
도 4a. YKL-40의 혈장 농도 증가에 따른 일반 집단의 장수 및 생존능 (5개의 성별 및 10세-연령 백분위수 카테고리로 나눔: 0-33% 백분위수, 34-66%, 67-90%, 91-95%, 및 96-100%). 기초가 되는 타임-스케일은 각각 좌절단 연령 (left-truncated age)과 후속 시간이었다. 팔로우-업은 채혈시 개시되어 사망시 또는 2007년 7월 중 빨리 도래하는 시기에 종결되었다. 여성과 남성의 자료를 합쳤다. 비교를 위해 동일 집단에서의 흡연 현황이 미치는 영향을 나타내었다.
도 4b. 혈장 YKL-40 백분위수 카테고리, 흡연 상태, 성별 및 연령에 따른 절대적인 10년 사망률. 코펜하겐시 건강 연구 1991-1994 시험에 참가 8899명의 참가자에 대하여 이후 16년에 걸친 연구 결과에 기초함. P 값은 로그-랭크 추세 (log-rank trend)를 위한 시험이다. 연령별 그룹 <50세, 50-70세, 및 >70세 각각에 대하여 좌측에서 우측으로 혈장 YKL-40 백분위수 카테고리 0-33%, 34-66%, 67-90%, 91-95%, 및 96-100%가 주어졌다.
도 5. 16명의 건강한 대상자의 YKL-40 혈청 수준에 있어서의 개체에 따른 일중 변이를 나타낸 그래프.
도 6. 38명의 건강한 대상자에 있어서 3주일의 기간에 걸친 혈청 YKL-40 수준에 있어서의 개체 변이를 나타낸 그래프.
도 7. 23명의 개체에 대하여 3주일간 각각 4회 측정된 평균 혈청 YKL-40 수준 (각각의 막대는 각 대상자에 있어서 1회 측정의 평균치를 나타낸다)을 나타낸 그래프.
도 8. 4주일에 걸쳐 채혈된 30명의 건강한 여성의 개별적인 혈청 YKL-40 수준 및 3년 후 21명의 여성에 대하여 동일한 측정을 반복한 결과를 나타낸 그래프.
도 9A 및 도 9B 상기내용으로부터 나타난 딥스틱 실시 상태.
실시예
다음에 실시예를 들어 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하나 본 발명의 범위가 이들 실시예 기재 범위로 한정되는 것은 아니며 본 발명의 범위는 오직 첨부된 특허청구범위에 의해서만 정의되는 것이다.
실시예
1
정상적인 대상자에 있어서 혈장
YKL
-40 수준 및 독립 위험 인자로서의 혈장
YKL
-40
방법
참가자
본 발명자들은 덴마크의 일반 인구집단의 집단-기반 예상 연구, 즉 1991-1994년도의 코펜하겐시 심장 연구 시험 (Bojesen 외, 2003; Nordestgaard 외, 2007; Schnohr 외, 2002)을 이용하였다. 코펜하겐 거주자들 중 성별과 5세 단위의 연령 그룹으로 계층화시킨 후 20대 이상의 참가자들을 무작위로 선발하였다. 선발된 17180명의 대상자들 중, 10135명이 참가하였고, 8899명의 참가자들에 대하여 YKL-40 측정을 위한 혈장을 채취할 수 있었다. 1991-1994 시험 이래 2007년 7월까지 이들의 고유한 중앙 개인 등록번호 (Central Person Registry number)를 이용하여 이후 16년간 참가자들을 관리하였다. 추적 관리는 100% 완벽하였다. 대략 99%는 백인 덴마크 후손들이었다. 채혈 당시 (1991-1994), 1763명의 참가자들이 혈장 YKL-40 수준의 증가와 연관이 있는 것으로 알려진 질병 (암, 허혈성 심혈관 질환, 간 질환, 당뇨병, 만성폐쇄 폐병, 천식, 류마티스성 관절염, 염증성 장질환 또는 폐렴)에 걸려있었다. 추적 관리 기간 중, 상기 질환들 중 적어도 한가지가 부가적으로 3526명 중에서 발병하였다. 3059명은 사망하였다. 나머지 3610명의 참가자들은 추적관리 종기까지 건강하게 남아있었다.
코펜하겐시 심장 연구 집단의 2001-2003 시험의 929명의 참가자들의 혈액 시료를 이용하여 YKL-40을 2차로 측정하였다. 이들 참가자들은 1991-1994년과 2001-2003년 시험에서 아무런 질병도 없는 사람들로 선발하였으며, 이에 의해 회귀 희석 편견을 보정할 수 있었다 (Clarke R, 1999).
참가자들에게 자가 질문지에 답을 적도록 하고, 이를 참가 당일에 참가자 자신과 조사관에 의해 검정하였다. 참가자들의 흡연 실태에 따라, 비흡연자, 과거 흡연자 및 현재 흡연자 군으로 나누었다.
종점 (
endpoints
)
참가자들 고유의 국립 덴마크 중앙 개인 등록번호를 이용하여 세가지 서로 다른 집단으로부터 사망 및 사망률에 대한 정보를 수집하였다. 사망 정보는 국립 덴마크 중앙 개인 등록번호 시스템 (Juel 외, 1999)으로부터 얻었다. 1976년부터 2007년 7월까지늬 ICD8 및ICD10 코드의 사망률 정보를 국립 덴마크 환자 등기부 934)로부터 얻어서 이를 혈장 YKL-40의 증가된 수준과 연관된 다음의 진단 군으로 세분하였다: 허혈성 심혈관 질환, 간 질환, 당뇨병, 만성 폐쇄 폐병, 천식, 류마티스성 관절염, 염증성 장질환 또는 폐렴. 암 진단은 국립 덴마크 암 등기부 (1947년부터 2004년까지)로부터 구하였으며 이에 의하면 덴마크의 암 환자의 98%는 국립 덴마크 암 등기부에 등재되어 있다 (2004년부터 2007년 7월까지).
윤리적인 측면
모든 환자들은 서면 정보 동의서를 작성해주었다. 이 연구는 헤를레브 하스피틀과 덴마크 윤리위원회에 의해 승인받았으며 (No. 100.2039/91 및 01-144/01, Copenhagen and Frederiksberg committee), Declaration of Helsinki에 의해 수행되었다.
YKL-40 분석
스트렙트아비딘-코팅된 마이크로플레이트 웰, 바이오티닐화된 Fab 모노클로날 포획 항체 및 알칼라인 포스파타제-표지된 폴리클로날 검출 항체를 이용하여, 시판되는 이중면 샌드위치형 효소결합 면역흡수 분석 (ELISA) (Quidel Corporation, San Diego, California) (Harvey 외, 1998)에 의해서, -80℃에서 12-15년간 동결시킨 시료에 대하여 YKL-40의 혈장 수준을 두번씩 측정하였다. ELISA 회수는 102%였고 검출 한계는 10 ㎍/L이었다. 분석내 변이계수 (intra-assay coefficients of variations)는 5% (40㎍/L)에서, 4% (104 ㎍/L에서), 그리고 4% (155 ㎍/L에서)였다. 분석간 변이계수는 <6%였다.
통계 분석
STATA 버젼 10.0 (Stata Corp LP, College Station, Texas)을 이용하였다. 이면 (two-sided) P<0.05이면 유의적인 것으로 고려하였다. 만-휘트니 랭크 합산 테스트 (Mann-Mann-Whitney rank-sum test)와 스피어맨 맨 상관계수 (Spearman's rho)를 이용하였다. 성별 및 10세 단위 연령 그룹의 혈장 YKL-40 백분위수에 따라 혈장 YKL-40 수준을 정규화하여 분류하였다: 백분위수 카테고리는 0-33%, 34-66%, 67-90%, 91-95%, 및 96-100% 였다. 하기 표 3에서는 오직 세가지 백분위수 카테고리, 즉 0-33%, 34-90%, 및 91-100% 만이 이용되었다.
카플란-마이어 곡선은 모든 참가자들에 있어서 좌절단 연령과 후속 관리 기간에 대한 누적 생존률을 플로팅하였다. 카플란-마이어 곡선은 또한 후속 관리 기간중의 암, 허혈성 심혈관 질환, 간 질환, 당뇨병, 만성 폐쇄 폐병 및 천식에 걸린 참가자들의 서브그룹에 있어서의 누적 생존률을 플로팅하였다. 혈장 YKL-40 백분위수 카테고리들 간의 차이들을 로그-랭크 테스트를 이용하여 시험하였다. 콕스 회귀 분석법을 이용하여 사망률에 대한 95% 신뢰구간과 위험 비율 (Hazard ratios)을 계산하였다. 위험 비율을 채혈시 성별, 연령 (10 분위수) 및 흡연 습관 (비흡연자/이전에 과거 흡연자/현재 흡연자)과 같은 다른 위험 인자를 감안하여 조정하였다. 트렌드-테스트를 위해, 혈장 YKL-40 카테고리 표지 0, 1, 2, 3, 및 4 또는 0, 1, 및 2 (표 3의 결과에서만)를 콕스 회귀에서 연속 변수로서 사용하였다. YKL-40 카테고리를 갖는 모델에 네스트된 YKL-40 카테고리가 없는 모델의 가능성 비율 테스트의 Chi-제곱 값 (1 df)를 이용하여 트렌드-테스트용 P 값을 계산하였다. 본 발명자들은 숀펠드 잔차 (Schonefeld residuals)에 기초한 경시적인 위험의 비례원칙을 시험한 결과 아무런 위배 사항을 발견하지 못하였다. 기초 공변량 (baseline covariates)에 대한 정보는 99% 이상이었고; 공변량에 대한 정보가 불완전한 개체는 다원 분석으로부터 배제하였다. 비변수법을 이용하여 회귀 희석 편견에 대한 위험 비율을 보정하였다 (Clarke 외, 1999). 이 보정을 위해, 본 발명자들은 1991-1994 기초 시험과 후속의 2001-2003 시험 두가지 모두에 참가한 929명의 건강한 개체들로부터 얻은 혈장 YKL-40 값을 이용하였다; 그러나, 주요 분석은 8899명 참가자 전원에 대하여 실시하였다. 0.8042의 회귀 희석 비율을 컴퓨팅시켰다.
혈장 YKL-40 백분위수 카테고리에 의한 절대적인 10년 사망률을 채혈 당시, 다음의 공변량을 포함하는 포아송 회귀 모델로부터의 회귀계수를 이용하여 평가하였다: 성별, 연령 (<50세, 50-70세, >70세), 및 흡연 습관 (비흡연자, 이전의 과거 흡연자, 현재 흡연자). 절대 사망률은 평가된 발생률 (건수/10년) 백분율로서 제시하였다.
결과
건강한 참가자에 있어서 혈장 YKL-40
연구 집단은 20세 내지 95세 (평균 연령 59세)의 8899명의 참가자 (56% 여성)로 구성되었다. 성별 및 나이에 맞게 조정된 혈장 YKL-40 백분위수 카테고리에 따른 모든 참가자들의 기초 특징들을 표 4에 나타내었다. 7136명 (80%)의 참가자들은 1991-1994년 채혈 당시 아무도 공지 질환을 앓고 있지 않았다. 추적 관리 기간인 이후 16년 사이에 3576명에게서 질환이 발생하여 추적관리 기간 말기에는 3610명의 참가자만이 건강한 채로 남아있었다. 이들 건강한 참가자들의 혈장 YKL-40의 중앙값은 42 ㎍/L (2.5% - 97.5% 백분위수 범위: 14 - 168 ㎍/L; 90% 백분위수 92 ㎍/L; 95% 백분위수 124 ㎍/L)이었다. 혈장 YKL-40 수치는 남성과 여성 모두에서, 나이가 들수록 증가하였다 (트렌드 테스트 p<0.0001) (도 1). YKL-40과 연령 간의 스피어맨 상관계수는 0.41 (p<0.0001)이었다. 남성과 여성의 혈장 YKL-40에는 차이가 없었다 (만-휘트니 U; p=0.27).
1991-1994년 채혈 당시 아무런 공지 질병을 앓지 않았고, 이후 16년간의 추적관리 기간에서도 건강한 채로 남아있었던 2116명의 건강한 여성과 1494명의 건강한 남성 그룹 (즉, 이들 중 아무도 죽지 않았고, 암, 허혈성 심혈관계 질환, 간 질환, 당뇨병, 만성 폐쇄 폐병, 천식, 류마티스성 관절염, 염증성 장질환 및 폐렴에 걸리지 않음) 중 YKL-40의 혈장 농도를 도 3으로부터 확인할 수 있다. 이 도면은 이들 건강한 참가자들에 있어서 평균 혈장 YKL-40를 도시한다. 연령에 따른 70% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로서 정의됨 = 3.1 + 0.02 x 연령 (세)), 75% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로서 정의됨 = 3.2 + 0.02 x 연령 (세)), 90 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로서 정의됨 = 3.5 + 0.02 x 연령 (세)) 및 95% 백분위수 (ln(혈장 YKL-40)으로서 정의됨 = 3.6 +0.02 x 연령 (세)). 여성과 남성의 값을 합하였다.
혈청 CRP (Kushner et al, 2006)의 경우와 대조적으로, 본 발명자들은 혈장 YKL-40는 성별 간에 차이가 없음을 발견하였다. 또한, 본 발명자들은 건강한 참가자들의 이러한 대규모 집단에서 혈장 YKL-40이 시간이 지나도 안정하게 유지됨을 발견하였다.
1991-1994년 시험 당시 혈중 YKL-40을 최초로 측정하고 2001-2003 시험시 혈중 YKL-40을 두 번째로 측정한 929명의 건강한 참가자 (463명의 여성과 466명의 남성)의 혈장 YKL-40의 중앙 증가값 (median increase)은 여성의 경우 0.5 ㎍/L/1년 (사분위수 (interquartile) 범위 -0.6 - 2.1 ㎍/L/1년), 남성의 경우 0.8 ㎍/L/1년 (-0.3 - 2.9 ㎍/L/1년)인 것으로 나타났다. 남성과 여성간의 차이는 유의적이지 않았다.
YKL-40의 중앙 혈장 농도는 건강을 유지한 참가자들에 비해서 질병 (암, 허혈성 심혈관 질환, 간 질환, 당뇨병, 만성 폐쇄성 폐병, 및 천식)이 발병한 참가자의 경우 더 높았다 (표 1).
염증성 바이오마커인 혈청 C-반응성 단백질 (CRP)이 약간 상승할 경우 건강한 개체와 질병에 걸린 개체들 모두에 있어서 사망을 시사하는 것으로 나타났기 때문에 (Kushner 외, 2006), 본 발명자들은 낮은 혈장 CRP (즉 ≤ 1.75 mg/L)에서 혈장 YKL-40의 예상값도 연구하였다. 혈장 YKL-40 농도의 예상값이 CRP에 대해 독립적인지에 대하여도 조사하였다. 혈장 CRP 농도가 낮은 (즉 ≤ 1.75 mg/L) 4453명의 참가자의 경우, 사망의 위험 비율은, 혈장 YKL-40 백분위수 카테고리 0-33% (log10 p for trend)에 대하여 혈장 YKL-40 백분위수 카테고리 34-66%에 있어서는 1.0 (95% CI, 0.8-1.2), 혈장 YKL-40 카테고리 67-90%에 있어서는 1.4 (1.1-1.7), 카테고리 91-95%의 경우에는 2.3 (1.6-3.3), 그리고 카테고리 96-100%의 경우에는 3.4 (2.5-4.8)였다. 혈장 CRP > 1.75 mg/L (log10 p for trend 18.3)인 참가자들의 경우에도 유사한 결과가 나타났다 (표 2). 따라서, 이들 대상자에 있어서, 사망 위험 비율은 혈장 YKL-40 수준이 증가할수록 대단히 유의적으로 증가하였으며, 이는, 혈장 YKL-40가 혈장 CRP와 독립적임을 확인해주는 것이다.
증가된 혈장 YKL-40과 증가된 사망 위험률은 특정 종류의 질환과 연관되어 있지는 않았으나, 1991-1994년 채혈 전에, 또는 이후 16년의 추적 관리 기간 중에 암, 허혈성 심혈관 질환, 간 질환, 당뇨병 및 만성 폐쇄 폐병에 걸린 것으로 진단된 참가자들에 있어서 혈장 YKL-40이 증가된 것으로 밝혀졌다.
혈장 YKL-40의 증가와 사망 위험률 증가 사이의 연관성은 흡연 여부와 사망 위험간의 연관성과 비슷하거나 더 높았다. 뿐만 아니라, 흡연 상태, 연령 및 성별을 비롯한 다변량 콕스 분석 결과, 혈장 YKL-40은 독립적인 위험 인자임이 밝혀졌는데, 이는, 다시 말해서 혈장 YKL-40 백분위수 카테고리가 연령, 성별, 혈장 CRP, 흡연 상태 또는 질병 (암, 허혈성 심혈관계 질환 및 기타 증가된 혈장 YKL-40와 연관된 다른 질환들)과 무관한 조기 사망의 위험 인자임을 나타내는 것이다. 혈장 YKL-40의 증가는 흡연과 연관이 있다 (트렌드, p=0.0005).
덴마크 일반 인구 집단의 성인을 대상으로 한 이 연구에서, 본 발명자들은 YKL-40의 혈장 농도가 증가하면 조기 사망을 예상할 수 있음을 발견하였다. 혈장 YKL-40이 증가된 참가자들과 혈장 YKL-40이 낮은 참가자들 간의 중앙 생존 연령의 차이는 14세였고, 이들 두 그룹 간의 채혈 후 15년의 추적관리 기간시 생존한 참가자들의 백분율 차이는 26%였다.
잘 특징화된 대상자들의 대규모 집단 (코호트)에 대하여, 장기간의 추적 관리 기간으로, 추적 관리에 아무런 손실 없이 혈장 YKL-40의 예상값을 평가하였다는 것은 이 연구의 한가지 강점이다.
일반 집단에서 사망률 위험 인자로서 혈장 YKL-40
16년의 추적 관리 기간 중, 8899명의 참가자들 중 3059명이 사망하였다. 혈장 YKL-40의 증가 (성별 및 10세 단위에 따라 5개의 백분위수 카테고리로 분류함)는 모든 조기 사망원인의 위험성 증가와 연관이 있었다 (로그 랭크 테스트, p=3.8*10-46) (표 3 및 도 4a). 혈장 YKL-40이 낮은 참가자 (백분위수 0-33%) 대 혈장 YKL-40이 높은 참가자 (백분위수 96-100%)의 중앙 생존 연령은 83세 대 69세로 더 높았고, 15년 생존률도 70% 대 44%로 더 높았다. 따라서, 혈장 YKL-40의 증가가 중앙 생존 연령과 15년 생존률에 미치는 영향은 흡연 상태가 미치는 효과와 유사하거나 오히려 더 높았다 (표 3 및 도 4a).
전체 사망에 대하여 다인수에 대해 조정된 (채혈 당시의 성별, 연령 및 흡연 상태) 위험 비율은 혈장 YKL-40 백분위수 카테고리 0-33% (p-trend, p=1.0*10-37)에 대하여, 혈장 YKL-40 백분위수 카테고리 34-66%의 경우 1.2 (95% CI, 1.1-1.3), 혈장 YKL-40 백분위수 카테고리 67-90%의 경우 1.6 (1.4-1.8), 91-95%의 경우 2.3 (1.9-2.8), 그리고 혈장 YKL-40 백분위수 카테고리 96-100% 의 경우2.8 (2.4-3.4)이었다. 이러한 평가값은 급사의 경우를 감안한 조정 후 일정하게 유지되었다 (표 2).
암에 걸린 참가자들, 허혈성 심혈관계로 사망한 참가자들 및 기타 질환에 걸린 참가자들의 경우, 혈장 YKL-40 백분위수 카테고리 증가 및 사망 위험에 대하여 다인수에 대해 조정된 위험 비율 (log10 p for trend 각각 11.4, 12.5, 및 15.1)간에 매우 높은 유의적 연관성이 발견되었다 (표 2)
절대 10년 사망률 (
Absolute
10-
year
mortality
)
최저의 절대 10년 사망률은 혈장 YKL-40 백분위수 카테고리 0-33% 중 연령이 <50세인 비흡연 여성에서 나타난 1.2%였다 (도 4b). 절대 10년 사망률은 여성보다 남성에서 더 높았고 연령이 증가할수록 더 높아졌으며 비흡연자보다 이전에 흡연 경험이 있는자가 더 높고 현재 흡연자는 더 높았다. 최고의 절대 10년 사망률은 96-100% 혈장 YKL-40 백분위수 카테고리 중 >70세의 흡연 여성 및 남성에서 각각 78%와 90%로 나타났다 (도 4b).
결론적으로, 일반 집단으로부터의 이러한 대규모 예상 연구에서 본 발명자들은 YKL-40의 혈장 농도 증가와 조기 사망이 강한 연관성을 가진다는 것과 이는 흡연과는 독립적이라는 것을 발견하였다.
실시예
2
건강한 대상자들에 있어서 YKL-40의 혈청 농도의
일중
, 주중 및 장기간 변이
재료 및 방법
기준 인터벌
245명의 건강한 대상자 (여성/남성 134/111, 중앙 연령 49세, 범위 18-79)의혈청을 수집하였다.
일중
변이 (
Diurnal
Variation
)
16명의 건강한 대상자 (10/6, 48세, 범위 32-66)로부터 24시간 동안 혈청을 7회 수집하였다 (제1일: 10 AM, 1 PM, 4 PM, 7 PM, 10 PM; 제2일: 7 AM, 10 AM).
3주일에 걸친 일간 (
day
-
to
-
day
) 변이
병원 직원 (21/17, 41세, 범위 22-66) 중에서 모집한 38명의 대상자로부터 3주일 (제1, 2, 8, 15 및 22일) 동안 오전 8시 (8 AM)에 5회 혈청을 수집하였다. 제8일에는 오후 2시 (2 PM)에도 혈청을 수집하였다.
2년에 걸친 주일간 (
week
-
to
-
week
) 변이
병원 직원 (14/9, 42세, 범위 31-66) 중에서 모집한 23명의 대상자로부터 3주일 (제1, 2, 8, 15 및 22일) 동안 오전 8시 (8 AM)에 혈청을 수집하고 이를 6개월 후, 12개월 후 및 24개월 후에도
3년에 걸친 변이
30명의 건강한 여성 (48세, 범위 24-62)로부터 4주일 동안 (제1,8, 15, 22 및 29일) 8 AM과 10 AM 사이에 혈청을 수집하고, 이를 21명의 대상자에 대하여 3년간 반복하였다.
운동 후의 변이
14명의 대상자 (10/4, 50세, 범위 35-64)에 대하여 운동 전, 에르고미터 자전거를 이용한 이상성 (biphasic) 25분 운동 프로그램 직후, 및 운동 후 1시간 및 3시간 후에 혈청을 수집하였다. 본 연구에 포함된 건강한 대상자들은 이전에 의료 이력이 없었고, 질병의 증상이나 징후도 없었으며, 약물 섭취 경험도 없는 대상자들이었다.
윤리적 측면
본 연구는 지역 과학윤리 위원회의 승인을 받았으며 Declaration of Helsinki에 따라 수행되었다. 대상자들에게 구두와 서면으로 연구 내용을 설명하였으며 대상자 전원이 서면 정보 동의서를 주었다. 대상자들 모두에게 언제든지 연구를 그만두어도 좋다는 정보를 제공하였다.
YKL
-40
ELISA
혈액 시료의 적절한 취급은 질병 경과와 관계가 있는 것은 아니지만 방법학적 변이를 나타낼 수 있기 때문에, 혈청 YKL-40 중의 변화를 최소화시키는데 있어서 중요하다 (Johansen 외, 2006, A; Johansen 외, 2006, B; 및 Harvey 외, 1998). 혈액 시료를 실온에서 응고시키고, ½-2 시간 이내에 최소 2500g에서 10분간 원심분리하여 혈청을 -80℃에서 분석시까지 보관하였다. 스트레트아비딘-코팅된 마이크로플레이트 웰, 바이오티닐화된 Fab 모노클로날 포획 항체, 및 알칼라인 포스파타제-표지된 폴리클로날 검출 항체를 이용하여, 시판되는 2중면 샌드위치형 효소결합 면역분석(ELISA) 키트 (Quidel Corporation, San Diego, CA)에 의해 혈청 YKL-40을 2회 측정하였다. (Harvey 외, 1998). ELISA 회수율은 102%였으며 검출 한계는 20 ㎍/L이었다 (Johansen 외, 2006, B; 및 Harvey 외, 1998). 분석내 변이계수(CV)는 ≤5.0%였고 분석간 CV는 ≤10.2%였다 (개인 관측). 각각의 대상자로부터 얻은 시료를 동일한 ELISA 플레이트 상에서 분석하였다.
통계 분석
중앙 또는 기하 수단, 변이계수 및 95% 신뢰 구간 및 범위를 이용하여 혈청 YKL-40에 대한 설명적 통계를 제시하였다. 혈청 YKL-40의 분포는 왜곡되어 있기 때문에 통계학저거 평가를 위해 로그 변환 (자연)이 이용된다. 로그 스케일 상에서 YKL-40에 대한 선형 회귀를 이용하여 기준 인터벌을 평가하였다. 경시적 (24시간, 3주일, 6개월, 12개월, 24개월 및 3년 동안의 변이성)으로 분석된 혈청 YKL-40의 변이성을 CV에 의해 나타내고 이를 YKL-40 ELISA의 분석내 및 분석간 CV와 비교하였다. 대상자내, 대상자간 및 횟수별 변이 성분들을 평가하였으며 YKL-40 로그 변환된 (다중 모델: multiplicative model) 무작위 효과 모델을 감안하여 기하학적 수단의 변이 계수로 나타내었다 (Kirkwood, 1979). 로그 스케일로 한 개인에 있어서 YKL-40의 2회 측정치 간의 차이에 대한 95% 신뢰 구간을 계산하고 다시 변환시켰다. 총 변이량과 비교된 대상자들간의 상대적인 균일성을 클라스내 상관계수에 의해 평가하였다. 일중 장기간 변이 분석 및 운동활동 분석에 있어서의 혈청 YKL-40을 반복 측정하여 일반 선형 모델을 이용하여 분석하였다. P 값 <5%는 유의적인 것으로 고려되었다. 복수회 테스트에 대한 P 값을 본페로니 보정을 이용하여 보정하였다. 모든 통계적 계산은 SAS (9.1, SAS Institute, Cary, NC, USA)를 이용하여 수행하였다.
결과
건강한 대상자들에 있어서 중앙 혈청 YKL-40은 43 ㎍/l (범위: 20-184 ㎍/L; 5-95% 인터벌: 20-124)이었고, 남성과 여성 간에는 아무런 차이가 없었다 (P=0.54). 혈청YKL-40은 연령 (rho=0.45; P<0.0001)이 증가할수록 함께 증가하였다. 의존성 변수 (로그 변환됨)로서 혈청 YKL-40 및 설명저거 변수로서 연령과 성별을 이용함으로써, 연령 및 성별을 감안하여 조정된 혈청 YKL-40에 대한 정상적인 기준 인터벌을 구축하였다. 상한값은 주어진 연령과 성별에 대한 95번째 백분위로서 정의하였다. 연령에 대한 대상자간 CV는 45%였다.
도 5는 24시간 동안 7회 시점에서의 혈청 YKL-40에 있어서의 개체별 일중 변이를 도시한 도면이다. 평균 혈청 YKL-40은 10 AM부터 10 PM (P=0.01)까지 23% 증가하였지만, 다중 테스트에 대하여 보정하자 유의적이지는 않았다. 기타 다른 유의적인 차이도 관찰되지 않았다.
25분간 자전거를 탄 후에도 혈청 YKL-40에는 아무런 변화가 발견되지 않았다 (P>0.08, 선형 모델).
도 6은 3주일 동안 6회의 시점에서 측정시 (제1, 2, 8, 15 및 22일의 8 AM) 혈청 YKL-40의 개체별 주간 변화를 도시한 도면이다. 각각의 대상자에 있어서 혈청 YKL-40의 중앙 일별 CV는 16%였다. 제8일에 시료들을 8 AM과 2 PM에서 수집하였는데 혈청 YKL-40는 약간 증가하였다 (47 ㎍/L 대 52, 8% 차이, P<0.0001).
도 7은 3주일 동안 5회의 시점에서 (제1, 2, 8, 15 및 22일의 8 AM, 제1 라운드) 측정하고 이를 6개월 후 (제2 라운드), 12개월 후 (제3 라운드) 및 24개월 후 (제4 라운드)에 반복하여 측정한 혈청 YKL-40의 개체별 변이를 도시한 도면이다. 각각의 대상자에 대한 혈청 YKL-40의 중앙 일별 CV는 16% (범위 0-92%), 16% (0-63%, 제1 라운드), 19% (5-92%, 제2 라운드), 15% (0-64%, 제3 라운드), 및 21% (0-47%, 제4 라운드)였다. 4회의 라운드에 걸쳐서 전체적인 증감은 검색되지 않았다 (P=0.09). 로그 변환된 혈청 YKL-40을 이용한 무작위 효과 모델을 이용한 변이 성분들의 평가 결과 대상자간 CV (within subject CV) 27.3% 및 24개월에 걸친 CV 8.8%로 나타났다. 경시적인 변이 및 분석간 변이를 포괄하는 대상자간 CV는 24개월의 기간에 걸쳐 30.2%였다. 24개월에 걸친 클라스내 (intraclass) 상관계수는 72.4%였다. 분석간 변이를 비롯한 대상자간 혈청 YKL-40에서 평가된 변이는 동일 대상자에 대한 2회의 측정치 사이의 차이에 대한 95% 신뢰 한계를 결과시키는데, 이는, 2번째 YKL-40 측정이 52% 감소하거나 109% 증가한 것이고 이러한 강도 차이가 유의적이며 전분석 (pre-analytical) 조건, 방법학적 다양성 및 정상적인 생물학적 다양성을 반영한 것만이 아닐 경우이다.
도 8은 1개월간 5회의 시점에서의 측정 및 3년 후 이를 반복한 측정에서의 혈청 YKL-40의 개체별 주간 변화를 도시한 도면이다. 혈청 YKL-40의 중앙 CV는 17% (제1 라운드) 및 13% (제2 라운드)였다. 2회의 라운드 (n=21) 모두에서 분석된 대상자들에 있어서 두개의 기간 사이에 혈청 YKL-40 변화는 관찰되지 않았다 (P=0.37, 선형 모델). 로그 변환된 혈청 YKL-40을 이용한 무작위 효과 모델을 이용한 변이 성분들의 평가 결과 대상자간 CV는 27.3%, 3년에 걸친 CV는 28.8%로 나타났다. 대상자내 변이 (within subject variation)과 경시 변이를 포함한 대상자간 변이 (between subject variaion)은 54%였다. 3년에 걸친 클라스내 (intraclass) 상관계수는 72.2%였는데 이는 대상자간 변이에 비해 대상자내 변이가 비교적 낮음을 시사하는 것이다.
결론
본 연구는 혈청 YKL-40이, 단기간 뿐만 아니라, 최대 3년의 장기 채혈 기간에 있어서도 분석간 변이를 비롯한 ~30%의 대상자내 CV를 나타내서, 건강한 대상자들에서 안정함을 입증하는 것이다. 혈청 YKL-40의 대상자간 변이는 정상 기준 인터벌을 결정하는 연구에서 45%였는데 이는 본 연구의 건강한 대상자들에 대하여 행한 다른 연구에서 발견된 것과 유사한 수치이다.
혈청 YKL-40의 클라스내 상관관계는 2년과 3년의 기간에서 72.4%와 72.%였는데 이는 대상자간 변이에 비할 때 대상자내 변이가 비교적 낮음을 가리키는 것이다. 본 연구에서 발견된 클라스내 상관관계는 다른 혈청학 마커에서 발견된 것과 유사하며, 예컨대, Ockene 등은 고민감성 C-반응성 단백질에 대한 클라스내 상관계수가 66%임을 보고한 바 있다 (Ockene 외, 2001).
분석간 변이를 포함하여 건강한 대상자에서 혈청 YKL-40의 본 발명에서 평가된 변이 혈청 YKL-40의 >109%의 증가 또는 >52%의 감소는 유의적인 것으로 고려되며 단지 예비 분석 조건, 방법학적 다양성 및 정상적인 생물학적 다양성을 반영한데 그친 것이 아니다.
결론적으로, 본 발명의 연구 결과 혈청 YKL-40에는 유의적인 일중 변이도 없었고 신체 운동 효과에 따른 변이도 없는 것으로 나타났다. 혈청 YKL-40의 대상자간 변이에 비해 대상자내 변이가 비교적 낮은 것으로 입증되었는데 이는 YKL-40이 신뢰할만한 바이오마커임을 확인해주는 것이다.
참고문헌
<110> HERLEV HOSPITAL
HVIDOVRE HOSPITAL
RIGSHOSPITALET
<120> YKL-40 as a general marker for non-specific disease
<130> CH-109278
<150> DK PA 2008 00089
<151> 2008-01-23
<150> DK PA 2008 01292
<151> 2008-09-15
<150> DK PA 2008 01293
<151> 2008-09-15
<150> DK PA 2008 01294
<151> 2008-09-15
<160> 2
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 1741
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1
ctaggtagct ggcaccagga gccgtgggca agggaagagg ccacaccctg ccctgctctg 60
ctgcagccag aatgggtgtg aaggcgtctc aaacaggctt tgtggtcctg gtgctgctcc 120
agtgctgctc tgcatacaaa ctggtctgct actacaccag ctggtcccag taccgggaag 180
gcgatgggag ctgcttccca gatgcccttg accgcttcct ctgtacccac atcatctaca 240
gctttgccaa tataagcaac gatcacatcg acacctggga gtggaatgat gtgacgctct 300
acggcatgct caacacactc aagaacagga accccaacct gaagactctc ttgtctgtcg 360
gaggatggaa ctttgggtct caaagatttt ccaagatagc ctccaacacc cagagtcgcc 420
ggactttcat caagtcagta ccgccattcc tgcgcaccca tggctttgat gggctggacc 480
ttgcctggct ctaccctgga cggagagaca aacagcattt taccacccta atcaaggaaa 540
tgaaggccga atttataaag gaagcccagc cagggaaaaa gcagctcctg ctcagcgcag 600
cactgtctgc ggggaaggtc accattgaca gcagctatga cattgccaag atatcccaac 660
acctggattt cattagcatc atgacctacg attttcatgg agcctggcgt gggaccacag 720
gccatcacag tcccctgttc cgaggtcagg aggatgcaag tcctgacaga ttcagcaaca 780
ctgactatgc tgtggggtac atgttgaggc tgggggctcc tgccagtaag ctggtgatgg 840
gcatccccac cttcgggagg agcttcactc tggcttcttc tgagactggt gttggagccc 900
caatctcagg accgggaatt ccaggccggt tcaccaagga ggcagggacc cttgcctact 960
atgagatctg tgacttcctc cgcggagcca cagtccatag aaccctcggc cagcaggtcc 1020
cctatgccac caagggcaac cagtgggtag gatacgacga ccaggaaagc gtcaaaagca 1080
aggtgcagta cctgaaggat aggcagctgg caggcgccat ggtatgggcc ctggacctgg 1140
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aggatgcact cgctgcaacg tagccctctg ttctgcacac agcacggggg ccaaggatgc 1260
cccgtccccc tctggctcca gctggccggg agcctgatca cctgccctgc tgagtcccag 1320
gctgagcctc agtctccctc ccttggggcc tatgcagagg tccacaacac acagatttga 1380
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tgtaagactc gggattagta cacacttgtt gatgattaat ggaaatgttt acagatcccc 1500
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cattttggca agctctatca ccaaggagcc aaacatccta caagacacag tgaccatact 1620
aattataccc cctgcaaagc cagcttgaaa ccttcactta ggaacgtaat cgtgtcccct 1680
atcctacttc cccttcctaa ttccacagct gctcaataaa gtacaagagt ttaacagtgt 1740
g 1741
<210> 2
<211> 383
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Met Gly Val Lys Ala Ser Gln Thr Gly Phe Val Val Leu Val Leu Leu
1 5 10 15
Gln Cys Cys Ser Ala Tyr Lys Leu Val Cys Tyr Tyr Thr Ser Trp Ser
20 25 30
Gln Tyr Arg Glu Gly Asp Gly Ser Cys Phe Pro Asp Ala Leu Asp Arg
35 40 45
Phe Leu Cys Thr His Ile Ile Tyr Ser Phe Ala Asn Ile Ser Asn Asp
50 55 60
His Ile Asp Thr Trp Glu Trp Asn Asp Val Thr Leu Tyr Gly Met Leu
65 70 75 80
Asn Thr Leu Lys Asn Arg Asn Pro Asn Leu Lys Thr Leu Leu Ser Val
85 90 95
Gly Gly Trp Asn Phe Gly Ser Gln Arg Phe Ser Lys Ile Ala Ser Asn
100 105 110
Thr Gln Ser Arg Arg Thr Phe Ile Lys Ser Val Pro Pro Phe Leu Arg
115 120 125
Thr His Gly Phe Asp Gly Leu Asp Leu Ala Trp Leu Tyr Pro Gly Arg
130 135 140
Arg Asp Lys Gln His Phe Thr Thr Leu Ile Lys Glu Met Lys Ala Glu
145 150 155 160
Phe Ile Lys Glu Ala Gln Pro Gly Lys Lys Gln Leu Leu Leu Ser Ala
165 170 175
Ala Leu Ser Ala Gly Lys Val Thr Ile Asp Ser Ser Tyr Asp Ile Ala
180 185 190
Lys Ile Ser Gln His Leu Asp Phe Ile Ser Ile Met Thr Tyr Asp Phe
195 200 205
His Gly Ala Trp Arg Gly Thr Thr Gly His His Ser Pro Leu Phe Arg
210 215 220
Gly Gln Glu Asp Ala Ser Pro Asp Arg Phe Ser Asn Thr Asp Tyr Ala
225 230 235 240
Val Gly Tyr Met Leu Arg Leu Gly Ala Pro Ala Ser Lys Leu Val Met
245 250 255
Gly Ile Pro Thr Phe Gly Arg Ser Phe Thr Leu Ala Ser Ser Glu Thr
260 265 270
Gly Val Gly Ala Pro Ile Ser Gly Pro Gly Ile Pro Gly Arg Phe Thr
275 280 285
Lys Glu Ala Gly Thr Leu Ala Tyr Tyr Glu Ile Cys Asp Phe Leu Arg
290 295 300
Gly Ala Thr Val His Arg Thr Leu Gly Gln Gln Val Pro Tyr Ala Thr
305 310 315 320
Lys Gly Asn Gln Trp Val Gly Tyr Asp Asp Gln Glu Ser Val Lys Ser
325 330 335
Lys Val Gln Tyr Leu Lys Asp Arg Gln Leu Ala Gly Ala Met Val Trp
340 345 350
Ala Leu Asp Leu Asp Asp Phe Gln Gly Ser Phe Cys Gly Gln Asp Leu
355 360 365
Arg Phe Pro Leu Thr Asn Ala Ile Lys Asp Ala Leu Ala Ala Thr
370 375 380
Claims (66)
- 대상자에 있어서, 비특이적 질환 또는 장애의 존재 여부를 진단하는 방법으로서, 상기 방법은:
v) 대상자로부터 얻은 시료 중의 YKL-40 수준을 측정하는 단계; 및
vi) 상기 YKL-40 수준을 YKL-40의 기준치와 비교하는 단계
를 포함하여 이루어지며, 여기서 상기 시료 중의 YKL-40 수준이 기준치를 상회하면 비특이적 질환 또는 장애가 존재하는 것을 가리키는 것인 방법. - 제1항에 있어서, YKL-40의 기준치는 건강한 개체로부터 얻은 시료 중의 YKL-40 수준을 측정함으로써 얻은 평균치인 것인 방법.
- 제2항에 있어서, YKL-40의 기준치는 연령 조정된 (age adjusted) 평균치인 것인 방법.
- 선행하는 항 중 어느 하나의 항에 있어서, YKL-40의 기준치는 건강한 개체에 있어서 혈청 또는 혈장 YKL-40 수준의 70번째 백분위수에 대응하는 연령 조정된 컷오프 값인 것인 방법.
- 제4항에 있어서, 상기 연령 조정된 컷오프 값은 ln(혈장 YKL-40)= 3.1 + 0.02 x 연령 (세)로서 정의되는 70번째 백분위수인 것인 방법.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, YKL-40의 기준치는 건강한 개체에 있어서 혈청 또는 혈장 YKL-40 수준의 75번째 백분위수에 대응하는 연령 조정된 컷오프 값인 것인 방법.
- 제6항에 있어서, 상기 연령 조정된 컷오프 값은 ln(혈장 YKL-40)= 3.2 + 0.02 x 연령 (세)로서 정의되는 75번째 백분위수인 것인 방법.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, YKL-40의 기준치는 건강한 개체에 있어서 혈청 또는 혈장 YKL-40 수준의 80번째 백분위수에 대응하는 연령 조정된 컷오프 값인 것인 방법.
- 제8항에 있어서, 상기 연령 조정된 컷오프 값은 ln(혈장 YKL-40)= 3.4 + 0.02 x 연령 (세)로서 정의되는 85번째 백분위수인 것인 방법.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, YKL-40의 기준치는 건강한 개체에 있어서 혈청 또는 혈장 YKL-40 수준의 90번째 백분위수에 대응하는 연령 조정된 컷오프 값인 것인 방법.
- 제10항에 있어서, 상기 연령 조정된 컷오프 값은 ln(혈장 YKL-40)= 3.5 + 0.02 x 연령 (세)로서 정의되는 90번째 백분위수인 것인 방법.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, YKL-40의 기준치는 건강한 개체에 있어서 혈청 또는 혈장 YKL-40 수준의 95번째 백분위수에 대응하는 연령 조정된 컷오프 값인 것인 방법.
- 제12항에 있어서, 상기 연령 조정된 컷오프 값은 ln(혈장 YKL-40)= 3.6 + 0.02 x 연령 (세)로서 정의되는 95번째 백분위수인 것인 방법.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, YKL-40의 기준치는 건강한 개체에 있어서 혈청 또는 혈장 YKL-40 수준의 97.5번째 백분위수에 대응하는 연령 조정된 컷오프 값인 것인 방법.
- 제14항에 있어서, 상기 연령 조정된 컷오프 값은 ln(혈장 YKL-40)= 3.9 + 0.02 x 연령 (세)로서 정의되는 97.5번째 백분위수인 것인 방법.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, YKL-40의 기준치는 제4항 내지 제15항 중 두 개 이상의 항에서 정의된 YKL-40 연령 의존성 컷오프 값들의 세트인 것인 방법.
- 제1항에 있어서, YKL-40의 기준치는 건강한 개체들의 연령 분포된 서브집단으로부터 얻은 시료 중의 YKL-40 수준을 측정함으로써 얻은 YKL-40 연령 의존성 기준치들의 세트인 것인 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 방법은 대상자에 있어서 비특이적 질환 또는 장애의 존재 여부를 진단하기 위한 방법으로서, 상기 방법은:
iii) 대상자로부터 얻은 시료 중의 YKL-40 수준을 측정하는 단계; 및
iv) 상기 YKL-40 수준을 YKL-40의 기준치와 비교하는 단계로서 상기 기준치는 동일 대상자에 대하여 이전에 측정한 YKL-40 측정치인 것인 단계
를 포함하여 이루어지며, 여기서 상기 시료 중의 YKL-40 수준이 기준치에 비하여 적어도 1.10의 팩터만큼 증가한 것이면 비특이적 질환이나 장애가 존재함을 가리키는 것인 방법. - 제20항에 있어서, 상기 YKL-40의 기준치는 연령에 대해 조정된 것인 방법.
- 제20항 또는 제21항에 있어서, 상기 기준치는 여성의 경우 1년에 0.5 ㎍/l을 더하고, 남성의 경우 1년에 0.8 ㎍/l을 더하여 연령 조정하는 것인 방법.
- 제20항 내지 제22항 중 어느 하나의 항에 있어서, 시료 중의 YKL-40 수준이 약 109% 이상 증가한 경우에는 시료 중의 YKL-40의 상기 수준이 상기 기준치를 유의적으로 상회하였다고 말하며, 그에 따라 비특이적 질환 또는 장애가 존재함을 가리키는 것으로 하는 것인 방법.
- 제20항 내지 제22항 중 어느 하나의 항에 있어서, 시료 중의 YKL-40의 수준이 YKL-40의 기준치에 비하여 적어도 1.10의 팩터만큼 증가한 경우, 더욱 바람직하게는 YKL-40 기준치에 비해 적어도 팩터 1.25, 예컨대 약 팩터 1.30, 또는 팩터 1.40; 더욱 좋기로는 적어도 팩터 1.50, 예컨대 팩터 1.60, 팩터1,70, 팩터 1.75; 더더욱 좋기로, 적어도 팩터 1.75, 예컨대 팩터 1.80, 팩터 1.90, 또는 팩터 2; 가장 좋기로는 적어도 팩터 2, 예컨대 팩터 2.10, 팩터 2.20, 팩터 2.25 또는 팩터 2.50만큼 증가한 경우에는 비특이적 질환 또는 장애가 존재함을 가리키는 것으로 하는 방법.
- 대상자에 있어서, 비특이적 질환 또는 장애의 위중도를 분류하는 방법으로서, 상기 방법은:
vii) 대상자로부터 얻은 시료 중의 YKL-40의 수준을 측정하는 단계; 및
viii) 상기 YKL-40 수준을 YKL-40의 하나 이상의 기준치와 비교하는 단계
를 포함하여 이루어지고, 여기서 상기 비특이적 질환 또는 장애의 위중도는 상기 비교로부터 추론되는 것인 방법. - 제25항에 있어서, YKL-40의 하나 이상의 기준치는 건강한 개체로부터 얻은 시료 중의 YKL-40 수준을 측정함으로써 제공되는 것인 방법.
- 제26항 또는 제26항에 있어서, 상기 YKL-40의 하나 이상의 기준치는 하나 이상의 연령 조정된 기준치인 것인 방법.
- 제25항 내지 제27항 중 어느 하나의 항에 있어서, YKL-40의 하나 이상의 기준치는 건강한 개체들의 연령 조정된 서브집단으로부터 얻은 시료들 중의 YKL-40 수준을 측정함으로써 얻은 YKL-40 연령 의존성 기준치들의 세트인 것인 방법.
- 제25항 내지 제28항 중 어느 하나의 항에 있어서, YKL-40의 하나 이상의 기준치들 중 하나는 건강한 개체들 중 YKL-40의 75번째 백분위수에 대응하는 연령 조정된 컷오프 값인 것인 방법.
- 제25항 내지 제29항 중 어느 하나의 항에 있어서, YKL-40의 하나 이상의 기준치들 중 하나는 건강한 개체들 중 YKL-40의 80번째 백분위수에 대응하는 연령 조정된 컷오프 값인 것인 방법.
- 제25항 내지 제30항 중 어느 하나의 항에 있어서, YKL-40의 하나 이상의 기준치들 중 하나는 건강한 개체들 중 YKL-40의 90번째 백분위수에 대응하는 연령 조정된 컷오프 값인 것인 방법.
- 제25항 내지 제31항 중 어느 하나의 항에 있어서, YKL-40의 하나 이상의 기준치들 중 하나는 건강한 개체들 중 YKL-40의 95번째 백분위수에 대응하는 연령 조정된 컷오프 값인 것인 방법.
- 제25항 내지 제32항 중 어느 하나의 항에 있어서, YKL-40의 하나 이상의 기준치들 중 하나는 건강한 개체들 중 YKL-40의 97.5번째 백분위수에 대응하는 연령 조정된 컷오프 값인 것인 방법.
- 제25항에 있어서, 상기 하나 이상의 기준치들은 동일한 대상자로부터 이전에 측정하여 얻은 YKL-40의 하나 이상의 측정치인 것인 방법.
- 제34항에 있어서, YKL-40의 하나 이상의 기준치들은 여성의 경우 1년에 0.3 ㎍/l을 더하고 남성의 경우 1년에 0.8 ㎍/l을 더함으로써 연령 조정된 YKL-40 혈장 수준인 것인 방법.
- 제34항 또는 제35항에 있어서, 시료 중의 YKL-40 수준이 YKL-40 기준치에 비해 적어도 1.10의 팩터만큼, 더욱 바람직하게는 YKL-40 기준치에 비해 적어도 팩터 1.25, 예컨대 약 팩터 1.30, 또는 팩터 1.40; 더욱 좋기로는 적어도 팩터 1.50, 예컨대 팩터 1.60, 팩터1,70, 팩터 1.75; 더더욱 좋기로, 적어도 팩터 1.75, 예컨대 팩터 1.80, 팩터 1.90, 또는 팩터 2; 가장 좋기로는 적어도 팩터 2, 예컨대 팩터 2.10, 팩터 2.20, 팩터 2.25 또는 팩터 2.50만큼 증가한 경우에는 그 비특이적 질환 또는 장애가 보다 위중한 상태로 진전된 것임을 가리키는 것으로 하는 방법.
- 제34항 내지 제36항 중 어느 하나의 항에 있어서, 시료 중의 YKL-40의 수준이 YKL-40 기준치에 비해 적어도 0.90의 팩터만큼 감소한 경우, 더욱 좋기로는 YKL-40 기준치에 비해 적어도 팩터 0.80, 예컨대 팩터 0.70만큼 감소한 경우; 더욱 좋기로는 팩터 0.60; 더더욱 좋기로는 팩터 0.50; 가장 좋기로는 적어도 팩터 0.48만큼, 예컨대 팩터 0.45, 팩터 0.43, 팩터 0.40 또는 팩터 0.38만큼 감소한 경우에는 그 비특이적 질환 또는 장애 증세가 덜 위중한 단계로 경감된 것임을 가리키는 것으로 하는 방법.
- 제34항 내지 제37항 중 어느 하나의 항에 있어서, 시료 중의 YKL-40의 수준이 YKL-40 기준치에 비해 109% 증가하면 그 비특이적 질환 또는 장애가 보다 위중한 단계로 진전된 것임을 가리키는 것으로 하는 방법.
- 제34항 내지 제38항 중 어느 하나의 항에 있어서, 시료 중의 YKL-40의 수준이 YKL-40 기준치에 비해 52% 감소하면 그 비특이적 질환 또는 장애가 덜 위중한 단계로 경감된 것임을 가리키는 것으로 하는 방법.
- 제25항 내지 제39항 중 어느 하나의 항에 있어서, 시료 중의 YKL-40의 측정치가 하나 이상의 기준치를 상회하면 비특이적 질환 또는 장애의 분류를 제공하는 것인 방법.
- 제25항 내지 제40항 중 어느 하나의 항에 있어서, 비특이적 질환 또는 장애의 분류는 시료로부터 얻은 YKL-40 측정치를 YKL-40의 하나 이상의 기준치와 비교하여, YKL-40 수준이 높을수록 그 비특이적 질환 또는 장애가 더 위중한 것으로 분류하는 것인 방법.
- 선행하는 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 질환 또는 장애는 C-반응성 단백질 수준의 증가를 나타내지 않는 1종 이상의 질환이나 장애 또는 질환 또는 장애들의 그룹인 것인 방법.
- 선행하는 항 중 어느 하나의 항에 있어서, YKL-40 수준은 면역분석법을 이용하여 측정하는 것인 방법.
- 선행하는 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 면역분석법은 경쟁적 면역분석법인 방법.
- 선행하는 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 면역분석법은 YKL-40을 측정하기 위한 방사능동위원소, 효소, 형광 분자, 화학발광성 분자, 생물발광성 분자 및 콜로이드 금속으로 이루어진 군으로부터 선택된 검출가능한 표지를 이용하는 것인 방법.
- 선행하는 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 면역분석법은 YKL-40을 측정하기 위한 모노클로날 항체를 이용하는 것인 방법.
- 제1항 내지 제45항 중 어느 하나의 항에 있어서, 면역분석법은 YKL-40을 측정하기 위한 폴리클로날 항체를 이용하는 것인 방법.
- 제1항 내지 제42항 중 어느 하나의 항에 있어서, YKL-40 수준은 PCR 기반 분석으로 측정하는 것인 방법.
- 선행하는 항 중 어느 하나의 항에 있어서, YKL-40 수준이 측정되는 것과 동일한 시료에서 하나 이상의 부가적인 바이오마커의 수준을 측정하는 방법.
- 선행하는 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 하나 이상의 부가적인 바이오마커는 C-반응성 단백질 (CRP), ESR, 암배아 항원 (CEA), CA-125, 인간 상피 성장인자 수용체 2 (HER2), CA19-9, 락테이트 데히드로게나제 (LDH), 조직 억제제 메탈로 프로티나제 1 (TIMP-1), 뇌 나트륨 이뇨 단백질 (BNP), 인터류킨, 종양 괴사인자-알파, 호모시스테인, 아밀로이드 A 단백질, 임신 관련 혈장 단백질 A, 트로포닌, 가용성 세포간 부착 분자-1, 가용성 UPAR, III형 프로콜라겐의 아미노말단 프로펩타이드 (P-III-NP), 단구 화학유인성 단백질-1, 피브린 D-이량체, 성장분화인자-15, 허혈-변형 알부민, 지단백질 관련 포스포리파제 A2, 매트릭스 메탈로프로티나제, 펜트락신 3, 분비형 포스포리파제 A2 그룹 IIA, 세포간 부착 분자-1, 심장형 지방산 결합 단백질 (H-FABP), 미오신 경쇄-1 (MLC-1), P-셀렉틴 및 CKMB로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
- 선행하는 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 하나 이상의 부가적인 바이오마커는 C-반응성 단백질, 뇌 나트륨 이뇨 단백질 및 호모시스테인으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
- 선행하는 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 딥스틱을 이용하여 YKL-40 수준을 측정하는 방법.
- 선행하는 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 생물학적 시료는 혈액, 혈청 또는 혈장인 방법.
- 선행하는 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 생물학적 시료는 혈청 또는 혈장인 방법.
- 선행하는 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 대상자는 포유동물, 바람직하게는 인간인 방법.
- 비특이적 질환 또는 장애의 존재 여부를 가리키는 바이오마커로서의 YKL-40의 용도.
- 비특이적 질환 또는 장애의 존재 여부를 가리키는 바이오마커로서의 YKL-40의 용도.
- 비특이적 질환 또는 장애의 위중도를 분류하기 위한 바이오마커로서의 YKL-40의 용도.
- 비특이적 질환 또는 장애의 존재 여부를 진단하기 위한 디바이스로서, 상기 디바이스는 시료 중의 YKL-40의 수준을 측정하기 위한 수단; 및 상기 YKL-40의 측정치를 YKL-40의 하나 이상의 기준치와 비교하기 위한 수단을 포함하는 것인 디바이스.
- 제59항에 있어서, 상기 디바이스는 딥스틱인 것인 디바이스.
- 제69항 또는 제60항에 있어서, 상기 디바이스는 컷오프 값을 나타내는 하나의 기준치를 포함하는 것인 디바이스.
- 제59항 또는 제60항에 있어서, 상기 디바이스는 YKL-40의 측정치를 연령 조정된 YKL-40의 기준치들의 세트와 비교하기 위한 수단을 포함하는 것인 디바이스.
- i) 시료 중의 YKL-40의 수준을 측정하기 위한 수단;
ii) 상기 YKL-40의 측정치를 YKL-40의 적어도 하나의 기준치와 비교하기 위한 수단; 및
iii) 시료를 제공하는 대상자의 연령에 따라, YKL-40의 기준치를 연령에 따라 어떻게 조정하는지에 대한 임의의 지침서
를 포함하여 이루어지는 키트 오브 파트 (kit of parts). - 제64항에 있어서, 상기 키트는 C-반응성 단백질 (CRP), ESR, 암배아 항원 (CEA), CA-125, 인간 상피 성장인자 수용체 2 (HER2), CA19-9, 락테이트 데히드로게나제 (LDH), 조직 억제제 메탈로 프로티나제 1 (TIMP-1), 뇌 나트륨 이뇨 단백질 (BNP), 인터류킨, 종양 괴사인자-알파, 호모시스테인, 아밀로이드 A 단백질, 임신 관련 혈장 단백질 A, 트로포닌, 가용성 세포간 부착 분자-1, 가용성 UPAR, III형 프로콜라겐의 아미노말단 프로펩타이드 (P-III-NP), 단구 화학유인성 단백질-1, 피브린 D-이량체, 성장분화인자-15, 허혈-변형 알부민, 지단백질 관련 포스포리파제 A2, 매트릭스 메탈로프로티나제, 펜트락신 3, 분비형 포스포리파제 A2 그룹 IIA, 세포간 부착 분자-1, 심장형 지방산 결합 단백질 (H-FABP), 미오신 경쇄-1 (MLC-1), P-셀렉틴 및 CKMB로 이루어진 군으로부터 선택된 부가적인 바이오마커를 분석하기 위한 수단을 더 포함하는 것인 키트 오브 파트.
- 제64항 또는 제65항에 있어서, 제59항 내지 제63항 중 어느 하나의 항에 기재된 디바이스를 하나 이상 포함하는 것인 키트 오브 파트.
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JP2002533387A (ja) | 1998-12-23 | 2002-10-08 | ジー.ディー.サール & カンパニー | 腫瘍治療の複合療法としてインテグリン拮抗物質と一つ以上の抗腫瘍剤を使用する方法 |
US20020103141A1 (en) | 1998-12-23 | 2002-08-01 | Mckearn John P. | Antiangiogenic combination therapy for the treatment of cancer |
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WO2001029081A1 (en) | 1999-10-18 | 2001-04-26 | Akzo Nobel N.V. | Modified peptides and peptidomimetics for use in immunotherapy |
US7668661B2 (en) | 2000-04-28 | 2010-02-23 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Liver disease-related methods and systems |
DE10127572A1 (de) | 2001-05-30 | 2002-12-05 | Pathoarray Gmbh | Werkzeuge zur Diagnostik, molekularen Definition und Therapieentwicklung chronischer entzündlicher Gelenkerkrankungen |
CA2454342A1 (en) | 2001-07-24 | 2003-02-06 | Yale University | Methods, compositions and kits relating to chitinases and chitinase-like molecules and inflammatory disease |
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US6986995B2 (en) | 2002-02-28 | 2006-01-17 | Prometheus Laboratories, Inc. | Methods of diagnosing liver fibrosis |
AU2003226925A1 (en) | 2002-04-08 | 2003-10-27 | Hvidovre Hospital | Timp-1 as a postoperative marker for recurrent cancer |
AU2003292231A1 (en) | 2002-12-12 | 2004-06-30 | Novartis Ag | Methods for diagnosing and treating schizophrenia |
WO2005039487A2 (en) * | 2003-09-10 | 2005-05-06 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Method for early detection of ovarian cancer |
JP2005102601A (ja) | 2003-09-30 | 2005-04-21 | Hubit Genomix Inc | 慢性腎不全患者の二次性副甲状腺機能亢進症を検査する方法、試薬及びキット |
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US20050209181A1 (en) | 2003-11-05 | 2005-09-22 | Huda Akil | Compositions and methods for diagnosing and treating mental disorders |
WO2005081980A2 (en) | 2004-02-25 | 2005-09-09 | Medimmune, Inc. | Methods and compositions relating to chitinases and chitinase-like molecules and modulation of osteoclasts |
FR2870348B1 (fr) | 2004-05-14 | 2010-08-27 | Univ Angers | Methode pour diagnostiquer la presence et/ou la severite d'une pathologie hepathique chez un sujet |
WO2006050475A2 (en) | 2004-11-03 | 2006-05-11 | Brigham And Women's Hospital, Inc. | Identification of dysregulated genes in patients with neurological diseases |
WO2006054297A2 (en) | 2004-11-17 | 2006-05-26 | Compugen Ltd. | Novel nucleotide and amino acid sequences, and assays and methods of use thereof for diagnosis |
ES2534752T3 (es) | 2004-12-07 | 2015-04-27 | Toray Industries, Inc. | Nuevo péptido antigénico contra el cáncer y utilización del mismo |
DE602006019205D1 (de) | 2005-02-28 | 2011-02-10 | Bio Y As | Monoklonale ykl-40-antikörper |
GB0512299D0 (en) | 2005-06-16 | 2005-07-27 | Bayer Healthcare Ag | Diagnosis prognosis and prediction of recurrence of breast cancer |
EP1928496A4 (en) | 2005-08-31 | 2011-01-05 | Medimmune Inc | C / CLP ANTAGONISTS AND METHOD OF USE |
US7608395B2 (en) | 2005-09-15 | 2009-10-27 | Baylor Research Institute | Systemic lupus erythematosus diagnostic assay |
WO2007056523A2 (en) | 2005-11-08 | 2007-05-18 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Methods for diagnosing and monitoring the progression of cancer |
US7908090B2 (en) | 2005-11-30 | 2011-03-15 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Signatures for human aging |
WO2007067813A2 (en) | 2005-12-09 | 2007-06-14 | Fox Chase Cancer Center | Methods and compositions for assessing alterations in gene expression patterns in clinically normal tissues obtained from heterozygous carriers of mutant genes associated with cancer and methods of use thereof |
US20070178504A1 (en) | 2005-12-22 | 2007-08-02 | Tracey Colpitts | Methods and marker combinations for screening for predisposition to lung cancer |
CA2637350A1 (en) | 2006-01-20 | 2007-07-26 | Child Health Research Institute Inc | Method of treatment, prophylaxis and diagnosis of pathologies of the bone |
EP1986655A4 (en) | 2006-02-06 | 2009-12-23 | Tethys Bioscience Inc | MARKERS ASSOCIATED WITH OSTEOPOROSE AND METHOD OF USE THEREOF |
GB0603251D0 (en) | 2006-02-17 | 2006-03-29 | Isis Innovation | DNA conformation |
US20080026485A1 (en) | 2006-04-18 | 2008-01-31 | Wolfgang Hueber | Antibody profiling for determination of patient responsiveness |
US20100048679A1 (en) | 2006-06-13 | 2010-02-25 | Bayhill Therapeutics, Inc. | Polynucleotide therapy |
EP2450710B1 (en) | 2006-07-14 | 2020-09-02 | The Regents of The University of California | Cancer biomarkers and methods of use thereof |
MX2009002414A (es) | 2006-09-08 | 2009-05-20 | Medimmune Llc | Anticuerpos anti-cd19 humanizados y su uso en el tratamiento de oncologia, transplante y enfermedad autoinmunitaria. |
WO2008048508A2 (en) | 2006-10-13 | 2008-04-24 | Vermillion, Inc. | Prognostic biomarkers in patients with ovarian cancer |
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AT504702A1 (de) | 2006-12-22 | 2008-07-15 | Arc Austrian Res Centers Gmbh | Set von tumormarkern |
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NZ586746A (en) * | 2008-01-23 | 2012-07-27 | Righospitalet | Classification of individuals suffering from cardiovascular diseases according to survival prognoses as found by measuring the levels of biomarker ykl-40 |
WO2010028656A1 (en) * | 2008-09-15 | 2010-03-18 | Herlev Hospital, Region Hovedstaden | Methods for classifying the severity of diseases or disorders |
EP2340437A1 (en) * | 2008-09-15 | 2011-07-06 | Herlev Hospital | Ykl-40 as a marker for gastrointestinal cancers |
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