KR20090042994A - 4-아미노퀴나졸린 유도체 및 이의 사용방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 신규한 4-아미노퀴나졸린, 이들의 유도체, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 및 이의 수화물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물 및 EGFR 및 HER-2의 억제제를 투여함으로써 유익하게 치료되는 질환 및 병태를 치료하는 방법에서의 그러한 조성물의 용도를 제공한다.

Description

4-아미노퀴나졸린 유도체 및 이의 사용방법{4-AMINOQUINAZOLINE DERIVATIVES AND METHODS OF USE THEREOF}

본 출원은 2006년 8월 22일자 출원된 미국가출원 제60/839,503호에 대한 우선권을 주장한다.

본 발명은 신규한 4-아미노퀴나졸린, 이들의 유도체, 이들의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 및 수화물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물 및 EGFR 및 HER2의 억제제를 투여함으로써 유익하게 치료되는 질환 및 병태를 치료하는 방법에서의 그러한 조성물의 용도를 제공한다.

N-[3-클로로-4-(3-플루오로벤질옥시)페닐]-6-[5-[2-(메틸설포닐)에틸아미노메틸]푸란-2-일]퀴나졸린-4-아민 비스(4-메틸벤젠설포네이트) 수화물로도 알려진 라파티닙(Lapatinib)은 표피 성장 인자 수용체(Epidermal Growth Factor Receptor : EGFR; ErbBl) 및 인간 표피 수용체 타입 2(human epidermal receptor Type 2 : HER2; ErbB2) 둘 모두의 티로신 키나아제 활성을 억제한다.

라파티닙은 종양이 HER2를 과발현하며 이전의 치료에 실패한 진행된 유방암 및 전이성 유방암을 앓고 있는 환자의 치료에 대해서 카페시타빈(capecitabine)과 함께 미국에서 승인되었다. 라파티닙은 임상 관련 농도에서 시토크롬 P450 서브타 입 3A4(CYP3A4)에 의해서 대사되고 또한 이를 억제한다. FDA 승인 수준은 강한 CYP3A4 억제제와의 동시 투여를 피하거나 CYP3A4 억제제인 화합물의 투여를 요하는 환자에서의 라파티닙의 투여를 감소시킬 것을 제안하고 있다(http://www.fda.gov/cder/foi/label/2007/0220591bl.pdf). 위장 독성, 임상 약물 제한 관점은 혈장 농도 보다도 투여된 양과 관련되는 듯함을 주의해야 한다(참조: Burris HA et al., J Clin Oncol 2005; 23:5305). 이러한 사항은 소화기관에서의 국소 약물 농도가 라파티닙의 독성에 대한 원인이며 주어진 경구 용량에 대한 증가된 혈장 농도는 이의 치료 범위를 증가시키며 그로 인해서 관련된 부작용의 증가를 초래하지 않으면서 그 유용성을 향상시키는 듯함을 제시하고 있다.

라파티닙과 화학적으로 관련된 화합물은 또한 ErbBl, ErbB2 및/또는 ErbB4 (HER4)에 대한 효능적인 티로신 키나아제 억제 활성을 지니는 것으로 기재되어 있고 공지되어 있다. 이에 대해서는 미국특허 제6,727,256호를 참조할 수 있다.

라파티닙의 유익한 활성에도 불구하고, 상기된 질환 및 병태를 치료하고자 하는 새로운 화합물에 대한 요구가 계속되고 있다.

도면의 간단한 설명

도 1은 라파티닙과 비교한 CYP3A4 SUPERSOMES™중의 본 발명의 다양한 화합물의 안정성을 도시하고 있다.

도 2는 래트에서의 라파티닙의 정맥내 투여 후와 비교한 본 발명의 다양한 화합물의 약동성을 도시하고 있다.

도 3은 래트에서의 라파티닙의 정맥내 투여 후와 비교한 본 발명의 다양한 화합물의 약동성을 시험하는 별도의 실험을 도시하고 있다.

발명의 상세한 설명

용어 "개선" 및 "치료"는 상호 교환적으로 사용되며, 치료학적 치료 및 예방적 치료 둘 모두를 포함한다. 상기 두 용어 모두는 질환(본원에 기재된 질환 또는 질병, 예를 들어, 신생물)의 발전 또는 진행을 감소시키거나, 억제하거나, 완화시키거나, 저하시키거나, 또는 안정화시킴을 의미한다.

"질환"은 세포, 조직 또는 기관의 정상적인 기능을 손상시키거나 이를 방해하는 어떠한 병태 또는 질병을 의미한다.

천연의 동위원소 존재비의 일부 변화가 합성에 사용된 화학물질의 기원에 따라서 합성된 화합물에서 발생됨을 인지해야 할 것이다. 따라서, 라파타닙의 제조물은 소량의 변성된 및/또는 ¹³C-함유 동위 이성질체를 본질적으로 함유할 것이다. 이러한 변화에도 불구하고, 자연에 풍부한 안정한 수소 및 탄소 동위원소의 농도는 발명의 화합물의 안정한 동위원소 치환에 비해서 작고 무시할 만하다. 참조예(Wada E et al., Seikagaku 1994, 66:15; Ganes LZ et al., Comp Biochem Physiol Mol Integr Physiol 1998, 119:725). 본 발명의 화합물에서, 특정의 위치가 중수소를 지니는 것으로 지정되는 경우에, 그 위치에서의 중수소의 존재비는 0.015%인 중수소의 자연 존재비에 비해서 실질적으로 큰 것으로 이해된다. 중수소를 지니는 것으로 지정된 위치는 전형적으로는 상기 화합물에서 중수소로 지정된 각각의 원자에서 3000(45%의 중수소 혼입) 이상의 최소 동원원소 농축 인자(enrichment factor) 를 지닌다.

본원에 사용된 용어 "동위원소 농축 인자"는 특정된 동위원소의 동위원소 존재와 천연의 존재 사이의 비를 의미한다.

다른 구체예에서, 본 발명의 화합물은 3500(각각의 지정된 중수소 원자에서의 52.5%의 중수소 혼입) 이상의 각각의 지정된 중수소 원자에 대한 동위원소 농축 인자, 4000(60% 중수소 혼입) 이상, 4500(67.5% 중수소 혼입) 이상, 5000(75% 중수소 혼입) 이상, 5500(82.5% 중수소 혼입) 이상, 6000(90% 중수소 혼입) 이상, 6333.3(95% 중수소 혼입) 이상, 6466.7(97% 중수소 혼입) 이상, 6600(99% 중수소 혼입) 이상, 또는 6633.3(99.5% 중수소 혼입) 이상의 각각의 지정된 중수소 원자에 대한 동위원소 농축 인자를 지닌다.

본 발명의 화합물에서, 특정의 동위원소로 특별히 지정되지 않은 어떠한 원자는 그 원자의 어떠한 안정한 동위원소를 나타냄을 의미한다. 달시 언급되지 않는 한, 위치가 "H" 또는 "수소"로서 특별히 지정되는 경우, 위치는 그 천연 존재 동위원소 조성으로 수소를 지니는 것으로 이해된다.

용어 "동위 이성질체"는 동위원소 조성에서만 본 발명의 특정 화합물과 상이한 화학종을 나타낸다.

본원에서 사용된 용어 "화합물"은 또한 이의 어떠한 염, 용매화물 또는 수화물을 포함하는 것으로 의도된다.

본 발명의 화합물의 염은 산과 본 발명의 화합물의 염기성 기, 예컨대, 아미노 작용기, 또는 염기와 본 발명의 화합물의 산성기, 예컨대, 카르복실 작용기 사 이에 형성된다. 또 다른 구체예에 따르면, 화합물은 약제학적으로 허용되는 산부가염이다.

본원에 사용된 용어 "약제학적으로 허용되는"은 정상적인 의학적 판단 범위내에서 과도한 독성, 자극, 및 알레르기 반응 등이 없이 사람 및 다른 포유 동물의 조직과 접촉 사용하기에 적합하며 합리적인 이익/위험 비의 균형을 이룬 성분을 나타낸다. "약제학적으로 허용되는 염"은 수용자에 투여시에 본 발명의 화합물을 직접적으로 또는 간접적으로 제공할 수 있는 어떠한 비-독성 염을 의미한다. "약제학적으로 허용되는 짝이온"은 수용자에 투여시에 염으로부터 방출되는 경우에 독성이 아닌 염의 이온 부분이다.

약제학적으로 허용되는 염을 형성시키는데 통상적으로 사용된 산은 무기산, 예컨대, 이황화수소, 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산 및 인산, 및 유기산, 예컨대, 파라-톨루엔설폰산, 살리실산, 타르타르산, 바이타르타르산, 아스코르브산, 말레산, 베실산(besylic acid), 푸마르산, 글루콘산, 글루쿠론산, 포름산, 글루탐산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠설폰산, 락트산, 옥살산, 파라-브로모페닐설폰산, 탄산, 석신산, 시트르산, 벤조산, 및 아세트산, 및 이들의 관련된 무기 및 유기산을 포함한다. 그러한 약제학적으로 허용되는 염은 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 포스페이트, 모노히드로겐포스페이트, 디히드로겐포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트, 클로라이드, 브로미드, 요오디드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포르메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레 이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말레이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥신-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로벤조에이트, 히드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 설포네이트, 자일렌 설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-히드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레에이트, 타르트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 및 그 밖의 염을 포함한다. 한 가지 구체예에서, 약제학적으로 허용되는 산부가염은 무기산, 예컨대, 염산 및 브롬화수소산과 형성된 염, 특히, 유기산, 예컨대 말레산과 형성된 염을 포함한다.

본원에서 사용된 용어 "수화물"은 비-공유 분자간 힘에 의해서 결합된 화학양론적 또는 비-화학양론적 양의 물을 추가로 포함하는 화합물을 의미한다.

본원에서 사용된 용어 "용매화물"은 비-공유 분자간 힘에 의해서 결합된 화학양론적 또는 비-화학양론적 양의 용매, 예컨대, 물, 아세톤, 에탄올, 메탄올, 디클로로메탄, 또는 2-프로판올 등을 추가로 포함하는 화합물을 의미한다.

본 발명의 화합물(예, 화학식 (I) 또는 (Ia)의 화합물)은, 예를 들어, 중수소 치환 등에 의해서, 비대칭 탄소 원자를 함유할 수 있다. 그리하여, 본 발명의 화합물은 각각의 거울상이성체, 또는 두 거울상이성체의 혼합물로서 존재할 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 라세미 혼합물 둘 모두, 및 다른 가능한 입체 이성체로부터 실질적으로 유리되는 각각의 입체 이성체를 포함할 것이다. 본원에서 사용된 용어 "다른 입체 이성체로부터 실질적으로 유리"는 25% 미만의 다른 입체 이성체, 바람직하게는 10% 미만의 다른 입체 이성체, 더욱 바람직하게는 5% 미만의 다른 입체 이성체, 가장 바람직하게는 2% 미만의 다른 입체 이성체, 또는 "X"%미만의 다른 입체 이성체(여기서, X는 0 내지 100의 수이다)가 존재함을 의미한다. 주어진 화합물에 대한 각각의 거울상이성체를 얻거나 합성하는 방법은 본 기술분야에 공지되어 있으며, 최종 화합물 또는 출발 물질 또는 중간체에 실시상 적용될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "안정한 화합물"은 이들의 제조에 허용되기에 충분한 안정성을 지니며 본원에 기재된 목적(예, 치료 생성물로의 제형화, 치료 화합물의 생산에서의 사용을 위한 중간체, 분리가능한 또는 저장 가능한 중간체 화합물, 치료제에 반응하는 질환 또는 병태의 치료)에 유용하게 충분한 시간동안 화합물의 완전한 상태를 유지하는 화합물을 나타낸다.

"²H" 및 "D"는 중수소를 나타낸다.

"입체 이성체"는 거울상이성체 및 부분입체 이성체 둘 모두를 나타낸다.

"3차", "^t", 및 "t-"은 각각 3차를 나타낸다.

"US"는 미국을 나타낸다.

"FDA"는 식품의약국(Food and Drug Administration)을 나타낸다.

"NDA"는 신약 신청( New Drug Application)을 나타낸다.

용어 "신생물 질환"은 부적절하게 높은 수준의 세포 분할, 부적절하게 낮은 수준의 아폽토시스, 또는 이들 둘 모두에 의해서 초래되거나 이를 초래하는 질환을 의미한다. 예를 들어, 암은 증식성 질환의 예이다. 암의 예는 이로 한정하고자 하는 것은 아니지만, 백혈병(leukemia)(예를 들어, 급성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병(acute lymphocytic leukemia), 급성 골수성 백혈병(acute myelocytic leukemia), 급성 골수아구 세포성 백혈병(acute myeloblastic leukemia), 급성 전골수성 백혈병(acute promyelocytic leukemia), 급성 골수단구성 백혈병(acute myelomonocytic leukemia), 급성 단구성 백혈병(acute monocytic leukemia), 급성 적백혈병(acute erythroleukemia), 만성 백혈병(chronic leukemia), 만성 골수성 백혈병(chronic myelocytic leukemia), 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia)), 진성적혈구증가증(polycythemia vera), 림프종(lymphoma) (호지킨 질환(Hodgkin's disease), 비-호지킨 질환), 왈덴스트룀 마크로글로불린혈증(Waldenstrom's macroglobulinemia), 중쇄 질환(heavy chain disease), 및 고형 종양(solid tumor), 예컨대, 육종(sarcoma) 및 암종(carcinoma) (예, 섬유육종(fibrosarcoma), 점액육종(myxosarcoma), 지방육종(liposarcoma), 연골육종(chondrosarcoma), 골육종(osteogenic sarcoma), 척삭종(chordoma), 맥관육종(angiosarcoma), 내피육종(endotheliosarcoma), 림프관육종(lymphangiosarcoma), 림프관내피육종(lymphangioendotheliosarcoma), 윤활막종(synovioma), 중피종(mesothelioma), 유잉종양(Ewing's tumor), 평활근육종(leiomyosarcoma), 횡문근육종(rhabdomyosarcoma), 결장암(colon carcinoma), 췌장암(pancreatic cancer), 유방암(breast cancer), 난소암(ovarian cancer), 전립선암(prostate cancer), 편평 세포 암종(squamous cell carcinoma), 기저 세포암(basal cell carcinoma), 샘 암종(adenocarcinoma), 한선암종(sweat gland carcinoma), 피지샘암(sebaceous gland carcinoma), 유두암종(papillary carcinoma), 유두 샘암종(papillary adenocarcinoma), 낭샘암종(cystadenocarcinoma), 수질성 암종(medullary carcinoma), 기관지암(bronchogenic carcinoma), 신장 세포 육종(renal cell carcinoma), 간암(hepatoma), 담관 암종(bile duct carcinoma), 융모막 암종(choriocarcinoma), 정상피종(seminoma), 배아암종(embryonal carcinoma), 윌름스 종양(Wilms' tumor), 자궁경부암(cervical cancer), 자궁암(uterine cancer), 고환암(testicular cancer), 폐암(lung carcinoma), 소세포 폐암(small cell lung carcinoma), 방광암(bladder carcinoma), 상피 암종(epithelial carcinoma), 신경교종(glioma), 성상세포종(astrocytoma), 수모세포종(medulloblastoma), 두개인두종(craniopharyngioma), 상의세포종(ependymoma), 송과체종(pinealoma), 혈관모세포종(hemangioblastoma), 청신경초종(acoustic neuroma), 희돌기신경교종(oligodendroglioma), 신경초종(schwannoma), 수막종(meningioma), 흑색종(melanoma), 신경모세포종(neuroblastoma), 및 망막모세포종(retinoblastoma))을 포함한다. 림프증식성 질환이 또한 증식성 질환인 것으로 여겨진다.

본 명세서 전반에 걸쳐서, "각각의 Y"는 적용될 수 있는 모든 "Y"기(Y^1a, Y^1b, Y^1c, Y^2a, Y^2b, Y^3a, Y^3b, Y^4a, Y^4b, Y^5a, Y^5b)를 포함한다.

용어 "중원자(heavy atom)"는 자연에 우세하게 분포된 동위원소 보다 더 높은 원자량를 지니는 동위원소를 나타낸다. 용어 "안정한 중원자"는 비방사성 중원 자를 나타낸다.

치료 화합물

본 발명은 신생물의 치료에 유리한 생약학적 성질을 지니는 신규한 4-아미노퀴나졸린을 제공한다.

한 가지 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식(I)의 화합물, 또는 이의 염, 또는 이의 수화물 또는 용매화물을 제공한다:

상기 식에서,

R은 산소이고, Q는 탄소이며, R과 Q를 포함하는 고리는 옥사졸이거나;

R은 질소이고, Q는 황이며, R과 Q를 포함하는 고리는 티아졸이고;

Z는 수소 또는 불소이고;

X는 염소 또는 브롬이고;

각각의 Y는 독립적으로 수소와 중수소로부터 선택되고;

하나 이상의 Y는 중수소이다.

한 가지 선택된 구체예에서, Z는 불소이다.

또 다른 구체예에서, R은 산소이다.

또 다른 구체예에서, X는 염소이다.

또 다른 구체예에서, Z는 수소이다.

선택된 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식(Ia)의 화합물, 또는 이의 염, 또는 이의 수화물 또는 용매화물을 제공한다:

상기 식에서, 각각의 Y는 화학식(I)에 대해서 상기 정의된 바와 같다.

화학식(I) 또는 (Ia)의 한 가지 구체예에서, 공통의 탄소 원자에 결합된 각각의 Y는 동일하다.

화학식 (I) 또는 (Ia)의 또 다른 구체예에서, Y^1a, Y^1b, 및 Y^1c는 동시에 중수소이다.

화학식 (I) 또는 (Ia)의 또 다른 구체예에서, Y^2a 및 Y^2b는 동시에 중수소이다. 더욱 특정의 구체예에서, 공통의 탄소원자에 결합된 각각의 Y는 동일하며; Y^2a 및 Y^2b는 동시에 중수소이고; 각각의 Y¹, 각각의 Y³, 각각의 Y⁴ 및 각각의 Y⁵중 하나 이상은 중수소이다.

화학식 (I) 또는 (Ia)의 또 다른 구체예에서, Y^3a 및 Y^3b는 동시에 중수소이다.

화학식 (I) 또는 (Ia)의 또 다른 구체예에서, Y^4a 및 Y^4b는 동시에 중수소이다. 더욱 특정의 구체예에서, 공통의 탄소원자에 결합된 각각의 Y는 동일하고; Y^4a 및 Y^4b가 동시에 중수소이고; 각각의 Y¹, 각각의 Y², 각각의 Y³ 및 각각의 Y⁵중 하나 이상은 중수소이다. 또 다른 특정의 구체예에서, 공통의 탄소원자에 결합된 각각의 Y는 동일하며; Y^2a, Y^2b, Y^4a 및 Y^4b는 동시에 중수소이다.

화학식 (I) 또는 (Ia)의 또 다른 구체예에서, Y^5a와 Y^5b는 동시에 중수소이다.

화학식 (I) 또는 (Ia)의 또 다른 구체예에서, 화합물은 둘 이상, 셋 이상, 넷 이상, 다섯 이상, 여섯 이상, 일곱 이상, 여덜 이상, 또는 아홉 이상의 중수소를 함유한다.

한 가지 구체예에서, 화학식 (I) 또는 (Ia)의 화합물은 분리된다.

또 다른 구체예에서, 화학식 (I) 또는 (Ia)의 화합물의 염은 약제학적으로 허용되는 염이다. 더욱 특정의 구체예에서, 화학식 (I) 또는 (Ia)의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염은 토실레이트 염이다.

또 다른 구체예에서, 화합물은 표 1(하기)에 기재된 화합물(Cmpd)중 어느 하나로부터 선택된 화학식(Ia)의 화합물이다.

표 1: 화학식(Ia)의 예시적인 구체예

또 다른 구체예에서, 상기된 구체예중 어느 한 구체예에서 중수소로 지정되지 않은 어떠한 원자는 그의 천연 동위원소 존재비로 존재한다.

본 발명에 의해서 밝혀진 치환체 및 변형의 조합은 단지 적합한 화합물의 형성을 유도하는 조합이다.

또 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식(I)의 화합물 및 화학식(I)의 화합물의 가벼운 동위 이성체를 함유하거나 이를 기본으로 하는 혼합물로서, 혼합물중 50% 이상, 60% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 또는 95% 이상이 화학식(I)의 화합물인 혼합물을 제공한다.

화합물 합성

화학식(I)의 화합물은 유기 합성 분야에서 공지된 수단에 의해서 제조될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물 및 이의 중간체의 모든-수소 동위 이성체에 대한 경로가 미국특허 제6,727,256호에 기재되어 있다. 표적 화합물중에 중수소를 혼입시키는 방법이 광범위하게 문헌화되어 있다. 예를 들어, 문헌[The Journal of Labelled Compounds and Radiopharmaceuticals (John Wiley & Sons)]을 참조할 수 있는데, 이의 대부분의 내용은 중수소의 생활성 유기 소분자내로의 특이적 혼입에 대한 상세한 실험적 설명을 포함하고 있다. 또한, 예를 들어, 문헌[Leis HJ, Curr Org Chem, 1998, 2:131] 및 그에 참조된 문헌, 및 문헌[Moebius G, Zfi-Mitteilungen 1989, 150:297]을 참조할 수 있다. 중수소-표지된 시약의 적합한 시판 공급원에는 다른 공급원 중에서도 Isotec, Inc. (Miamisburg, OH); Cambridge Isotope Laboratories (Andover, MA); ICON Services Inc. (Summit, NJ); 및 C/D/N Isotopes, Inc. (Pointe-Claire, Quebec, Canada)가 있다. 특정의 중간체는 정제(예, 여과, 증류, 승화, 결정화, 분쇄, 고형상 추출, 및 크로마토그래피) 없이 또는 정제하여 사용될 수 있다. 예시적인 합성 방법이 이하 및 본원의 실시예에서 나타내고 설명되어 있다.

Q, R, X, Z 및 각각의 Y가 상기된 바와 같은 화학식(I)의 화합물을 합성하는 통상적인 방법은 도식 A에 도시되어 있다:

도식 A

도식 A에 나타낸 바와 같이, 퀴나졸린 (V)의 치환된 4-(벤질옥시)-아닐린 (VI)와의 반응은 화합물 (VII)을 생성시키며, 이는 이어서 (예, 팔라듐 촉매의 존재하에) 보론산(VIII)과 결합하여 중간체 (IX)를 생성시킨다. 아민 (X)에 의한 (IX)의 환원성 아민화는 화합식(I) 또는 (Ia)의 화합물을 생성시킨다.

상기된 특정의 방법 및 화합물은 제한되는 것으로 의도된 것이 아니다. 도식에서의 화학적 구조는 본원에서 동일한 가변 명칭(즉, R¹, R², 또는 R³ 등)으로 지칭되거나 그렇지 않은 본원에서의 화합물의 화학식에 상응하는 위치의 화학적 기 정의(부분, 원자, 등)로 적절히 정의되는 가변체를 도시하고 있다. 또 다른 화합 물의 합성에 사용하기 위한 화합물 구조에서의 화학적 기의 적합성은 본 기술분야의 전문가의 지식 내에 있다. 본원에 도식으로 명확히 나타내지 않은 경로내의 것들을 포함한, 화학식(I)의 화합물 및 이들의 합성 전구체를 합성하는 추가의 방법은 본 기술분야의 전문가인 화학자의 수단내에 있다. 반응조건을 최적화하고, 필요한 경우, 경쟁 부산물을 최소로 하는 방법이 본 기술분야에서 공지되어 있다. 본원에 인용된 합성 참고문헌 외에, 반응 도식 및 원안은 당업자에 의해서 시판중인 구조-조사 가능한 데이타베이스 소프트웨어, 예를 들어, SciFinder® (CAS division of the American Chemical Society), STN® (CAS division of the American Chemical Society), CrossFire Beilstein® (Elsevier MDL), 또는 인터넷 검색 엔진, 예컨대, Google® 또는 키워드 데이타베이스, 예컨대, US Patent and Trademark Office text database를 이용함으로써 결정될 수 있다.

본원에 기재된 방법은 또한 추가로, 본원에 특별히 기재된 단계 전에 또는 그 후에, 본 발명의 화합물의 궁극적인 합성을 가능하게 하기 위해서, 적합한 보호기를 첨가하고 제거하는 단계들을 포함할 수 있다. 또한, 다양한 합성 단계는 목적하는 화합물을 생성하도록 교대로 또는 순서대로 수행될 수 있다. 적용 가능한 화합물을 합성하기에 유용한 합성 화학적 변환 및 보호기 방법(보조 및 탈보호)는 본 기술분야에 공지되어 있으며, 예를 들어, 문헌[Larock R, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); Greene TW et al., Protective Groups in Organic Synthesis, 3^rd Ed., John Wiley and Sons (1999); Fieser L et al., Fieser and Fieser 's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); and Paquette L, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995)] 및 그 후속판에 기재된 방법을 포함한다.

약제학적 조성물

본 발명은 또한 유효량의 화학식 (I) 또는 (Ia)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 또는 이의 용매화물 또는 수화물; 및 허용되는 담체를 포함한 비발열성(pyrogen-free) 조성물을 제공한다. 바람직하게는, 본 발명의 조성물은 담체가 약제학적으로 허용되는 담체인 약제학적 용도("약제학적 조성물")로 제형화된다. 담체(들)은 제형의 다른 성분과 혼화 가능하다는 면에서 및 약제학적으로 허용되는 담체의 경우에 약물에 사용된 양에서 그 부형제에 유해하지 않다는 면에서 "허용되는"이다

본 발명의 약제학적 조성물중에 사용될 수 있는 약제학적으로 허용되는 담체, 보조제, 및 비히클은, 이로 한정되는 것은 아니지만, 이온 교환제, 알루미나, 알루미늄 스테아레이트, 레시틴, 혈청 단백질, 예컨대, 인간 혈청 알부민, 완충물질, 예컨대, 포스페이트, 글리신, 소르브산, 칼륨 소르베이트, 포화된 식물성 지방산의 부분 글리세라이드 혼합물, 물, 염 또는 전해질, 예컨대, 프로타민 설페이트, 디소듐 하이드로겐 포스페이트, 포타슘 하이드로겐 포스페이트, 염화나트륨, 아연 염, 콜로리드성 실리카, 마그네슘 트리실리케이트, 폴리비닐 피롤리돈, 셀룰로오즈-기재 물질, 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 카르복시메틸셀룰로오즈, 폴리아크릴레이트, 왁스, 폴리에틸렌-폴리옥시프로필렌-블록 폴리머, 폴리에틸렌 글리콜 및 면실유를 포함한다.

본 발명의 약제학적 조성물은 경구, 직장내, 비내, 국소(구강 및 설하 포함), 질내, 또는 비경구(예를 들어, 피하, 근육내, 정맥내, 수막내 및 피내 포함) 투여에 적합한 조성물을 포함한다. 특정의 구체예에서, 본원에 기재된 화학식의 화합물은 경피 투여(예, 경피 패취 또는 이온 영동 기술을 이용)될 수 있다. 다른 제형은 통상적으로 단위 용량형, 예를 들어, 정제, 서방성 캡슐에, 및 리포좀내에 존재할 수 있으며, 제약 분야에 공지된 방법에 의해서 제조될 수 있다. 참조예[Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.), ed. A. R. Gennaro, Lippincott Williams & Wilkins, 2000; and Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York].

치료에 사용하기 위한, 화학식(I)의 화합물을 포함하는 조성물은 본원에 기재된 방법을 이용함으로써 제조된다. 예를 들어, 약제학적으로 허용되는 완충제, 예컨대, 생리식염수중에 제형화된 그러한 화합물을 포함하는 약제학적 조성물은 전신투여될 수 있다. 바람직한 투여 경로는, 예를 들어, 환자에게 연속적이고 지속적인 약물 수준을 제공하는 피하, 정맥내, 복강내, 근육내, 또는 피내 주사를 포함한다. 사람 환자 또는 그 밖의 동물의 치료는 생리학적으로 허용되는 담체중의 치료학적 유효량의 화학식(I)의 화합물을 사용함으로써 수행될 것이다. 적합한 담체 및 이들의 제형화는, 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences by E. W. Martin]에 기재되어 있다. 투여되는 치료제의 양은 투여 방식, 환자의 연령 및 체중, 및 신생물 질환의 임상적 증상에 따라 다양하다. 일반적으로, 양은 다른 신생물 질환, 예컨대, 전이성 암을 포함한 유방암의 치료에 사용된 다른 작용제에 대해서 사용된 양의 범위일 것이지만, 특정의 경우에는 더 적은 양이 필요할 수 있는데, 그 이유는 화합물의 감소된 산화 및 증가된 반감기 때문이다. 화합물은 본 기술분야의 전문가에게는 공지된 진단 방법에 의해서 측정된 신생물 질환의 임상적 또는 생리학적 증상을 조절하는 용량으로 투여된다.

약제학적 조성물의 제형화

신생물 질환의 치료를 위한 화학식(I)의 화합물의 투여는, 임의로 다른 성분과 혼합되어, 종양 질환, 예컨대, 유방암, 특히, 전이성 유방암을 개선시키거나, 감소시키거나, 안정화시키기에 효과적인 치료 농도를 유도하는 적합한 수단에 의할 수 있다. 화합물은 어떠한 적합한 담체 물질중에 어떠한 적절한 양으로 함유될 수 있으며, 일반적으로는 조성물 전체 중량의 1 내지 95중량%의 양으로 존재한다. 조성물은 비경구(예, 피하, 정맥내, 근육내, 또는 복강내) 투여 경로에 적합한 용량형으로 제공될 수 있다. 약제학적 조성물은 통상의 약제학적 관행에 따라서 제형화될 수 있다. 참조예[Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.), ed. A. R. Gennaro, Lippincott Williams & Wilkins, 2000 and Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York].

본 발명에 따른 약제학적 조성물은 투여시에 실질적으로 즉각적으로, 또는 투여후 어떠한 소정의 시점에 또는 소정의 시간동안 활성 화합물을 방출하도록 제 형화될 수 있다. 후자의 조성물은 일반적으로 방출 조절형 제형(controlled release formulation)으로 공지되어 있으며, 이는 (i) 지연된 시간 동안 체내에서 실질적으로 일정한 약물 농도를 유도하는 제형; (ii) 소정의 지체 시간(lag time) 후에, 지연된 시간 동안 체내에서 실질적으로 일정한 약물 농도를 유도하는 제형; (iii) 활성 물질의 혈장 수준에서의 변동(톱니형 약동 패턴: sawtooth kinetic pattern)과 연관된 바람직하지 않은 부작용을 동시에 최소로 하면서 체내에서 비교적 일정한 효과적 수준을 유지시킴에 의해서 소정의 시간 동안 작용을 지속시키는 제형; (iv) 치료되는 조직내의 또는 그 조직에 인접한 방출 제어형 조성물의 공간적 위치에 의해서 작용을 편재시키는 제형; (v) 투여를 편리하게 하여 용량이 예를 들어, 매일 한번, 2 또는 3일에 한번, 또는 1주에 한번, 또는 2주에 한번 투여되게 하는 제형; 및 (vi) 담체 또는 화학적 유도체를 사용하여 치료제를 특정의 세포형, 예컨대, 일차 암부위로부터 전이되는 유방 조직 또는 세포에 존재하는 신생물 세포에 전달함으로써 신생물 질환을 표적 치료하는 제형을 포함한다. 일부 적용의 경우에, 방출 제어형 제형은 치료 화합물의 감소된 대사 속도에 기여하고, 혈장 수준을 치료 수준으로 지속시키기 위한 낮 동안의 빈번한 투여를 필요없게 할 수 있다.

방출 속도가 화합물의 대사 속도보다 더 중요한 경우에 방출을 제어하기 위해서 어떠한 많은 전략이 추구될 수 있다. 한 가지 예로, 제어된 방출은, 예를 들어, 다양한 형태의 방출 제어형 조성물 및 코팅을 포함한 다양한 제형 파라메타 및 성분의 적절한 선택에 의해서 달성된다. 따라서, 치료제는 적절한 부형제와 함께 약제학적 조성물로 제형화되며, 그러한 약제학적 조성물은 투여시에 제어된 방식으로 치료제를 방출한다. 그러한 예에는 단일 또는 다중 단위 정제 또는 캡슐 조성물, 오일 용액, 현탁액, 에멀젼, 마이크로캡슐, 미소구체, 분자 복합체, 나노입자, 패취, 및 리포좀이 포함된다.

요구되는 경우, 약제학적 조성물중의 본 발명의 화합물의 용해도 및 생체이용성이 본 기술분야에 공지된 방법에 의해서 향상될 수 있다. 한 가지 방법은 제형중에 지질 부형제의 사용을 포함한다. 참조["Oral Lipid-Based Formulations: Enhancing the Bioavailability of Poorly Water-Soluble Drugs (Drugs and the Pharmaceutical Sciences)," David J. Hauss, ed. Informa Healthcare, 2007; and "Role of Lipid Excipients in Modifying Oral and Parenteral Drug Delivery: Basic Principles and Biological Examples," Kishor M. Wasan, ed. Wiley-Interscience, 2006].

생체 이용성을 향상시키는 또 다른 공지된 방법은 폴록사머(poloxamer), 예컨대, LUTROL™ 및 PLURONIC™ (BASF Corporation), 또는 에틸렌 산화물 및 프로필렌 산화물의 블록 코폴리머와 함께 임으로 제형화된 무정형의 본 발명의 화합물의 사용이다. 이에 대해서는 미국특허 제7,014,866호 및 미국특허 공보 제20060094744호 및 제20060079502호를 참조할 수 있다.

비경구 조성물

약제학적 조성물은 용량형 또는 제형으로, 또는 통상의 비독성 약제학적으로 허용되는 담체 및 보조제를 함유하는 적합한 전달 장치 또는 이식체를 통해서 주 사, 주입 또는 이식(피하, 정맥내, 근육내, 복강내 등)에 의해서 비경구 투여될 수 있다. 그러한 조성물의 제형 및 제제는 약제학적 제형 기술분야에서의 전문가에게는 공지되어 있다. 제형은 상기 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy]에서 찾아볼 수 있다.

비경구 사용을 위한 조성물은 단위 용량형(예, 단위 용량 앰플)으로, 또는 몇 가지 용량을 함유하는 바이알(vial)로 제공될 수 있으며, 적합한 보존제가 첨가될 수 있다(이하 참조). 조성물은 용액, 현탁액, 에멀젼, 주입 장치, 또는 이식으리 위한 전달 장치의 형태일 수 있거나, 사용전에 물 또는 또 다른 적합한 비히클로 재구성되는 건조 분말로서 존재할 수 있다. 치료제(들)인 화학식(I)의 활성 화합물 외에, 조성물은 적합한 비경구 허용 담체 및/또는 부형제를 포함할 수 있다. 활성 화학치료제(들)은 방출 제어를 위해서 미소구체, 마이크로캡슐, 또는 리포좀 등에 혼입될 수 있다. 또한, 조성물은 현탁제, 용해제, 안정화제, pH-조절제, 등장성 조절제, 및/또는 분산제를 포함할 수 있다.

상기된 바와 같이, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 무균 주사에 적합한 형태로 존재할 수 있다. 그러한 조성물을 제조하기 위해서, 적합한 활성 치료제(들)은 비경구 허용 액체 비히클에 용해되거나 현탁된다. 사용될 수 있는 허용 가능한 비히클 및 용매는 물, 및 적절한 양의 염산, 수산화나트륨 또는 적합한 완충액에 의해서 적합한 pH로 조정된 물, 및 1,3-부탄디올, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액 및 덱스트로스 용액이다. 수성 제형은 또한 하나 이상의 보존제(예, 메틸, 에틸 또는 n-프로필 p-히드록시벤조에이트)를 함유할 수 있다. 이들 화합물중 하나가 물에 거의 용해되지 않거나 약간만 용해되는 경우에, 용해 향상 또는 가용화제가 첨가될 수 있거나, 용매가 10 내지 60%w/w의 프로필렌 글리콜 등을 포함할 수 있다.

방출 제어형 비경구 조성물

방출 제어형 비경구 조성물은 수성 현탁액, 미소구체, 미소캡슐, 자성 미소구체, 오일 용액, 오일 현탁액, 또는 에멀젼의 형태로 존재할 수 있다. 대안적으로, 활성 약물은 생체 적합성 담체, 리포좀, 마노입자, 이식체 또는 주입 장치에 혼입될 수 있다.

미소구체 및/또는 미소캡슐의 제조에 사용되는 물질은, 예를 들어, 생분해성/생침식성 중합체, 예컨대, 폴리갈락틴, 폴리-(이소부틸시아노아크릴레이트), 폴리(2-히드록시에틸-L-글루탐-닌) 및 폴리(락트산)이다. 방출 제어형 비경구 제형을 제형화하는 경우에 사용될 수 있는 생체 적합성 담체는 탄수화물(예, 덱스트란), 단백질(예, 알부민), 지단백질, 또는 항체이다. 이식체에 사용하기 위한 물질은 비-생분해성(예, 폴리디메틸 실록산) 또는 생분해성(예, 폴리(카프롤락톤), 폴리(락트산), 폴리(글리콜산) 또는 폴리(오르토 에스테르) 또는 이들의 조합물)일 수 있다.

경구용 고형 용량형

경구용 제형은 비-독성의 약제학적으로 허용되는 부형제와 혼합된 활성 성분(들)을 함유하는 정제를 포함한다. 그러한 정제는 본 기술분야의 전문가에게는 공지되어 있다. 부형제는, 예를 들어, 불활성 희석제 또는 충전체(예, 수크로즈, 소르비톨, 당(sugar), 만니톨(mannitol), 미세결정상 셀룰로오즈, 감자 전분을 포함한 전분, 탄산칼슘, 염화나트륨, 락토오즈, 인산칼슘, 황산칼슘, 또는 인산나트륨); 과립화제 및 붕해제 (예, 미세결정상 셀룰로오즈를 포함한 셀룰로오즈, 감자 전분을 포함한 전분, 크로스카르멜로스 나트륨, 알기네이트, 또는 알긴산); 결합제 (예, 수크로즈, 글루코오즈, 소르비톨, 아카시아, 알긴산, 나트륨 알기네이트, 젤라틴, 전분, 선젤라틴화된 전분, 미세결정상 셀룰로오즈, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 카르복시메틸셀룰로오즈 나트륨, 메틸셀룰로오즈, 히드록시프로필 메틸셀룰로오즈, 에틸셀룰로오즈, 폴리비닐피롤리돈, 또는 폴리에틸렌 글리콜); 및 윤활제, 활제(glidant), 및 항-접착제(anti-adhesive) (예, 마그네슘 스테아레이트, 아연 스테아레이트, 스테아르산, 실리카, 수소화된 식물성 오일 또는 탈크)이다. 그 밖의 약제학적으로 허용되는 부형제는 착색제, 향미제, 가소제, 습윤제, 및 완충제, 등일 수 있다.

정제는 비코팅되거나 공지된 기술에 의해서 코팅되어 위장 기관에서의 붕해 및 흡수를 지연시키고, 그리하여 장시간에 걸친 지속된 작용을 제공할 수 있다. 코팅은 활성약물이 소정의 패턴(예, 방출 제어형 제형을 달성하기 위해서)으로 방출되도록 구성되거나, 활성약물이 위 통과 후까지 방출되지 않도록(장용피) 구성될 수 있다. 코팅은 당 코팅, 필름 코팅(예, 히드록시프로필 메틸셀룰로오즈, 메틸셀룰로오즈, 메틸 히드록시에틸셀룰로오즈, 히드록시프로필셀룰로오즈, 카르복시메틸셀룰로오즈, 아크릴레이트 코폴리머, 폴리에틸렌 글리콜 및/또는 폴리비닐피롤리돈 기재), 또는 장용피(enteric coating)(예, 메타크릴산 코폴리머, 셀룰로오즈 아세 테이트 프탈레이트, 히드록시프로필 메틸셀룰로오즈 프탈레이트, 히드록시프로필 메틸셀룰로오즈 아세테이트 석시네이트, 폴리비닐 아세테이트 프탈레이트, 셀락(shellac), 및/또는 에틸셀룰로오즈 기재)일 수 있다. 추가로, 시간 지연 물질, 예를 들어, 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트가 사용될 수 있다.

고형 정제 조성물은 원하지 않는 화학적 변화(활성 치료물질의 방출 전에 화학적 분해)로부터 조성물을 보호하도록 구성된 코팅을 포함할 수 있다. 코팅은 상기 문헌[Encyclopedia of Pharmaceutical Technology]에 기재된 바와 유사한 방법으로 고형 용량형상에 적용될 수 있다.

본 발명의 화합물은 신생물의 치료를 위한 하나 이상의 활성 치료제와 함께 정제중에서 함께 혼합되거나, 둘 이상의 활성 치료제가 정제 내에서 분할될 수 있다. 한 가지 예로, 첫 번째 활성 화학치료제가 정제의 내부에 함유되고 두 번째 활성 치료제가 외부에 함유되어서, 두 번째 활성 치료제의 실질적인 부분이 첫 번째 치료제의 방출 전에 방출되게 한다.

경구용 제형은 또한 씹을 수 있는 정제로서, 또는 활성 성분이 불활성 고형 희석제(예, 감자 전분, 락토오즈, 미세결정상 셀룰로오즈, 탄산칼슘, 인산칼슘 또는 카올린)와 혼합되는 경질 젤라틴 캡슐로서, 또는 활성 성분이 물 또는 오일 매질, 예를 들어, 땅콩유, 액체 파라핀, 또는 올리브 오일과 혼합되는 연질 젤라틴 캡슐로서 존재할 수 있다. 분말 및 과립은 상기된 성분을 사용함으로써 믹서, 유동상 장치 또는 분사 건조 장치를 사용한 통상의 방법으로 정제 및 캡슐로 제조될 수 있다.

방출 제어형 경구 용량형

경구용의 방출 제어형 조성물은, 예를 들어, 활성물질의 용해 및/또는 확산을 조절함으로써 본원에 기재된 활성 치료제를 방출하도록 구성될 수 있다. 용해 또는 확산 제어 방출은 화합물의 정제, 캡슐, 펠릿 또는 과립 제형의 적절한 코팅에 의해서, 또는 화합물을 적절한 매트릭스에 혼입시킴으로써 달성될 수 있다. 방출 제어 코팅은 상기된 코팅 물질중 하나 이상 및/또는 쉘락, 밀납, 글리코왁스, 카스터 왁스(castor wax), 카나우바 왁스(carnauba wax), 스테아릴 알코올, 글리세릴 모노스테아레이트, 글리세릴 디스테아레이트, 글리세롤 팔미토스테아레이트, 에틸셀룰로오즈, 아크릴 수지, 디-폴리락트산, 셀룰로오즈 아세테이트 부티레이트, 폴리비닐 클로라이드, 폴리비닐 아세테이트, 비닐 피롤리돈, 폴리에틸렌, 폴리메타크릴레이트, 메틸메타크릴레이트, 2-히드록시메타크릴레이트, 메타크릴레이트 하이드로겔, 1,3 부틸렌 글리콜, 에틸렌 글리콜 메타크릴레이트, 및/또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함할 수 있다. 방출 제어형 매트릭스 제형에서, 매트릭스 물질은 또한, 예를 들어, 수화된 메틸셀룰로오즈, 카나우바 왁스 및 스테아릴 알코올, 카르보폴 934(carbopol 934), 실리콘, 글리세릴 트리스테아레이트, 메틸 아크릴레이트-메틸 메타크릴레이트, 폴리비닐 클로라이드, 폴리에틸렌, 및/또는 할로겐화된 플루오로카본을 포함할 수 있다.

하나 이상의 치료 화합물을 함유하는 방출 제어형 조성물은 또한 부양성 정제 또는 캡슐(즉, 경구 투여시에 특정의 시간 동안 위 내용물의 상부에 뜨는 정제 또는 캡슐)의 형태로 존재할 수 있다. 화합물(들)의 부양성 정제 제형은 화합물(들)과 부형제 및 20 내지 75%w/w의 히드로콜로이드, 예컨대, 히드록시에틸셀룰로오즈, 히드록시프로필셀룰로오즈, 또는 히드록시프로필메틸셀룰로오즈의 혼합물을 과립화시킴으로써 제조될 수 있다. 얻은 과립은 이어서 정제로 압축될 수 있다. 위액과 접촉시에, 정제는 그 표면 주위에 실질적으로 물-불투성 겔 방벽을 형성한다. 그러한 겔 방벽은 1 미만의 밀도를 유지시키는데 관여하여, 정제가 위액중에 부양 유지되게 한다.

약제학적 제형은 단위 용량당 소정량의 활성 성분을 함유하는 단위 용량형으로 존재할 수 있다. 그러한 단위는 치료되는 상태, 투여 경로, 및 환자의 연령, 체중 및 상태에 따라서, 예를 들어, 0.5mg 내지 1200mg, 바람직하게는, 1 mg 내지 1000mg, 더욱 바람직하게는, 5mg 내지 400mg의 화학식 (I) 또는 (Ia)의 화합물을 함유할 수 있거나, 약제학적 제형은 단위 용량당 소정량의 활성 성분을 함유하는 단위 용량형으로 존재할 수 있다. 대안적인 구체예에서, 본 발명의 화합물의 단위용량 제형은 약 100mg 내지 2,000mg의 화학식 (I) 또는 (Ia)의 화합물; 또는 약 250mg 내지 1500mg의 화학식 (I) 또는 (Ia)의 화합물을 함유할 수 있다. 바람직한 단위 용량 제형은 상기된 바와 같은 활성 성분의 일일 용량 또는 서브 용량, 또는 이의 적절한 분획을 함유하는 제형이다. 추가로, 그러한 약제학적 제형은 제약 분야에서 공지된 방법중 어떠한 방법에 의해서 제조될 수 있다.

상기된 제형중 어떠한 제형에서, 화학식 (I) 또는 (Ia)의 화합물은 단일 용량형으로 하나 이상의 제 2 치료제와 조합될 수 있다. 그러한 제 2 치료제는, 이 로 한정되는 것은 아니지만, 그 밖의 항-종양제 및 면역억제제를 포함한다. 그러한 조합 용량형에 유용한 제 2 치료제의 예는, 이로 한정되는 것은 아니지만, 카페시타빈(capecitabine), 파조파닙(pazopanib), 트라스투주맙(trastuzumab), 도세탁셀(docetaxel), 레트로졸(letrozole), 타목시펜(tamoxifen), 풀베스트란트(fulvestrant), 파클리탁셀, 카르보플라틴(carboplatin), 베바시주맙(bevacizumab), 독소루비신, 시클로포스파미드, 시스플라틴(cisplatin), 비노렐빈(vinorelbine), 에버롤리무스(everolimus), 발프로산, 토포테칸, 옥살리플라틴(oxaliplatin) 및 젬시타빈(gemcitabine)을 포함한다.

치료 방법

한 가지 구체예에서, 본 발명은 세포를 화학식 (I) 또는 (Ia)의 화합물과 접촉시키는 단계를 포함하여, 세포에서의 ErbB-1, ErbB-2, 또는 ErbB-4-연관된 단백질 키나아제 활성을 억제하는 방법을 제공한다.

또 다른 구체예에서, 본 발명은 종양 질환을 앓고 있거나 그에 민감한 대상자를 치료하는 방법을 제공한다. 화학식(I) 또는 (Ia)의 화합물은 유방암, 특히, 전이성 유방암의 치료에 특히 유용하지만, 본 발명이 그렇게 제한되는 것은 아니다. 본 발명이 이용되는 예시적인 종양은, 이로 한정되는 것은 아니지만, 백혈병(예를 들어, 급성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병(acute lymphocytic leukemia), 급성 골수성 백혈병(acute myelocytic leukemia), 급성 골수아구 세포성 백혈병(acute myeloblastic leukemia), 급성 전골수성 백혈병(acute promyelocytic leukemia), 급성 골수단구성 백혈병(acute myelomonocytic leukemia), 급성 단구성 백혈병(acute monocytic leukemia), 급성 적백혈병(acute erythroleukemia), 만성 백혈병(chronic leukemia), 만성 골수성 백혈병(chronic myelocytic leukemia), 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia)), 진성적혈구증가증(polycythemia vera), 림프종(lymphoma) (호지킨 질환(Hodgkin's disease), 비-호지킨 질환), 왈덴스트룀 마크로글로불린혈증(Waldenstrom's macroglobulinemia), 중쇄 질환(heavy chain disease), 및 고형 종양(solid tumor), 예컨대, 육종(sarcoma) 및 암종(carcinoma) (예, 섬유육종(fibrosarcoma), 점액육종(myxosarcoma), 지방육종(liposarcoma), 연골육종(chondrosarcoma), 골육종(osteogenic sarcoma), 척삭종(chordoma), 맥관육종(angiosarcoma), 내피육종(endotheliosarcoma), 림프관육종(lymphangiosarcoma), 림프관내피육종(lymphangioendotheliosarcoma), 윤활막종(synovioma), 중피종(mesothelioma), 유잉종양(Ewing's tumor), 평활근육종(leiomyosarcoma), 횡문근육종(rhabdomyosarcoma), 결장암(colon carcinoma), 췌장암(pancreatic cancer), 유방암(breast cancer), 난소암(ovarian cancer), 전립선암(prostate cancer), 편평 세포 암종(squamous cell carcinoma), 기저 세포암(basal cell carcinoma), 샘암종(adenocarcinoma), 한선암종(sweat gland carcinoma), 피지샘암(sebaceous gland carcinoma), 유두암종(papillary carcinoma), 유두 샘암종(papillary adenocarcinoma), 낭샘암종(cystadenocarcinoma), 수질성 암종(medullary carcinoma), 기관지암(bronchogenic carcinoma), 신장 세포 육종(renal cell carcinoma), 간암(hepatoma), 담관 암종(bile duct carcinoma), 융모막 암 종(choriocarcinoma), 정상피종(seminoma), 배아암종(embryonal carcinoma), 윌름스 종양(Wilms' tumor), 자궁경부암(cervical cancer), 자궁암(uterine cancer), 고환암(testicular cancer), 폐암(lung carcinoma), 소세포 폐암(small cell lung carcinoma), 방광암(bladder carcinoma), 상피 암종(epithelial carcinoma), 신경교종(glioma), 성상세포종(astrocytoma), 수모세포종(medulloblastoma), 두개인두종(craniopharyngioma), 상의세포종(ependymoma), 송과체종(pinealoma), 혈관모세포종(hemangioblastoma), 청신경초종(acoustic neuroma), 희돌기신경교종(oligodendroglioma), 신경초종(schwannoma), 수막종(meningioma), 흑색종(melanoma), 신경모세포종(neuroblastoma), 및 망막모세포종(retinoblastoma))을 포함한다.

특정의 구체예에서, 대상자는 유방암, 식도선암종(esophageal adenocarcinoma), 식도편평상피세포암(esophageal squamous cell carcinoma), 자궁경부암(cervical cancer), 두경부암(head and neck cancer), 고형 종양(solid tumor), 비-호지킨 림프종(non-Hodgkins' Lymphoma), 위암, 난소암, 복막암(peritoneal cancer), 뇌 및 CNS 종양(Brain and CNS tumor)(신경아교종(glioma), 다형성 교모세포종(glioblastoma multiforme), 신경아교육종(gliosarcoma)), 전립선암, 자궁내막암, 직장결장암, 비소세포 폐암, 간암, 신장암, 췌장암을 앓고 있거나 이들에 대해 민감한 대상자이다.

본 발명의 또 다른 특징으로, 본 발명은 포유 동물의 erbB2, erbB4, 또는 EGF (erbB1) 수용체 양성 신생물을 치료하는 방법을 제공한다. 특정의 구체예에 서, 대상자는 erbB 양성 유방암을 앓고 있거나 이에 민감한 대상자이다. 더욱 특정의 구체예에서, 유방암은 erbB2, erbB4 또는 EGF 수용체 양성 또는 과발현성인 암이다. 더욱 특정의 구체예에서, 유방암은 erbB2 또는 EGF 수용체 양성인 암이다. 또 다른 특정의 구체예에서, 유방암은 통상의 화학치료제에 반응하지 않는 유방암, 및/또는 이의 질환 또는 증상이다. 이러한 방법은 화학식 (I) 또는 (Ia)의 화합물을 포함하는 치료학적 유효량의 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상자(예, 포유동물, 예컨대, 사람)에게 투여함을 포함한다. 본 발명의 화합물의 "치료학적 유효량"은 질환 또는 질병 또는 그 증상을 치료하는데 충분한 양이다.

본 발명의 방법은 본원에 기재된 유효량의 화합물, 또는 본원에 기재된 조성물을 대상자(그러한 치료를 필요로 하는 것으로 확인된 대상자를 포함)에게 투여하여 그러한 효과를 생성시킴을 포함한다. 그러한 치료를 필요로 하는 대상자를 확인하는 것은 대상자 또는 건강 전문가의 판단에 있으며 주관적(예, 소견) 또는 객관적(예, 시험 또는 진단 방법으로 측정 가능)일 수 있다. 질환, 질병 또는 증상의 "위험에 있는" 또는 그에 민감한 대상자를 확인하는 것은 대상자 또는 건강분야 종사자의 진단 시험 또는 소견(예, 유전 시험, 효소 또는 단백질 마커(예컨대, 포스포릴화된 EGF 수용체, c-ErbB2, 또는 c-erbB-4), 및 가족력 등)에 의해서 어떠한 객관적 또는 주관적 결정에 의해 달성될 수 있다.

본원에서 사용된 용어 "치료하다", "치료하는", 및 "치료" 등은 관련된 질병 및/또는 증상을 감소시키거나 호전시킴을 의미한다. 배제하고자 하는 것은 아니지만, 질병 또는 병태의 치료는 질병, 병태 또는 그와 관련된 증상이 완전히 제거되 는 것을 요하지는 않음을 이해할 수 있을 것이다.

병합치료

임의로, 본 발명의 화합물은 어떠한 다른 표준 활성 항-신생물 치료요법과 함께 투여된다. 그러한 치료요법은 당업자에게는 공지되어 있으며, 항-신생물 치료제, 다른 화학치료제와의 병합 치료제, 호르몬, 항체 또는 면역억제제 뿐만 아니라 수술 및/또는 방사선 치료를 포함한다.

항-신생물 치료요법은, 예를 들어, 2002년 1월 14일자로 출원된 국제특허출원 PCT/US02/01130호에 기재되어 있으며, 이는, 이로 한정되는 것은 아니지만, 항-미세소관 작용제, 예컨대, 디터페노이드(diterpenoid) 및 빈카 알칼로이드(vinca alkaloid); 백금 배위 착물; 알킬화제, 예컨대, 질소 머스타드, 옥사자포스포린, 알킬설포네이트, 니트로소우레아, 및 트리아젠; 항생제, 예컨대, 안트라사이클린, 악티노마이신 및 블레오마이신; 토포이소머라제 II 억제제, 예컨대, 에피포도필로톡신(epipodophyllotoxin); 항대사물질, 예컨대, 퓨린 및 피리미딘 유사체 및 안티-폴레이트 화합물(anti-folate compound); 토포이소머라제 I 억제제, 예컨대, 캄프토테신; 호르몬 및 호르몬 유사체; 신호 전달 경로 억제제; 비-수용체 티로신 키나아제 혈관신생 억제제; 면역치료제; 프로아폽토시스 작용제(proapoptotic agent); 및 세포주기 신호 억제제를 포함하는 항-신생물 치료제를 기재하고 있다.

항-미소세관 또는 항-유사분열 작용제는 세포주기의 M 기 또는 유사분열 기(phase) 동안 종양 세포의 미소세관에 작용하는 기 특이적 작용제(phase specific agent)이다. 항-미소세관 작용제의 예는, 이로 한정되는 것은 아니지만, 디터페노이드 및 빈카 알칼로이드를 포함한다. 천연 공급원으로부터 유래되는 디터페노이드는 세포주기의 G2/M 기에서 작동하는 기 특이적 항암제이다. 디터페노이드는 미소세관의 [베타]-튜불린 서브단위를 안정화시키는데, 그러한 단백질과 결합함으로써 안정화시킨다. 단백질 외형의 분해는 억제되는 유사분열 및 후속된 세포 치사에 의해서 억제된다. 디터페노이드의 예는, 이로 한정되는 것은 아니지만, 파클리탁셀 및 이의 유사체 도세탁셀을 포함한다. 파클리탁셀, 즉, (2R,3S)-N-벤조일-3-페닐이소세린와의 5[베타],20-에폭시-1,2[알파],4,7,[베타]10[베타],13[알파]-헥사-히드록시탁스-11-엔-9-온 4,10-디아세테이트 2-벤조에이트 13-에스테르는태평양 주목(Pacific yew tree Taxus brevifolia)으로부터 분리되는 천연 디터펜(diterpene) 생성물이며 주사 가능한 용액 TAXOL®로서 구입 가능하다. 도세탁셀, 즉, 5[베타]-20-에폭시-1,2[알파],4,7[베타],10[베타],13[알파]-헥사히드록시탁스-11-엔-9-온 4-아세테이트 2-벤조에이트, 트리수화물과의 (2R,35)-N-카르복시-3-페닐이소세린, N-3차-부틸 에스테르, 13-에스테르는 주사 가능한 용액인 TAXOTERE®로서 구입 가능하다. 빈카 알칼로이드는 페리윙클(periwinkle) 식물로부터 유래되는 기 특이적 항신생물 작용제이다. 빈카 알칼로이드의 예는, 이로 한정되는 것은 아니지만, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 및 비노렐빈(vinorelbine)을 포함한다.

빈블라스틴, 즉, 빈카류코블라스틴 설페이트(vincaleukoblastine sulfate)는주사 가능한 용액인 VELBAN®로서 구입 가능하다. 빈크리스틴, 즉, 빈카류코블라스틴, 22-옥소-, 설페이트는 주사 가능한 용액인 ONCOVIN®으로서 구입 가능하다. 비노렐빈 타르트레이트의 주사 가능한 용액(NAVELBINE®)으로서 구입 가능한 비노렐빈, 즉, 3',4'-디데히드로-4'-데옥시-C'-노르빈카류코글라스틴 [R-(R^*,R^*)-2,3-디히드록시부탄디오에이트(1:2)(염)]은 반합성 빈카 알칼로이드이다. 백금 배위 착물은 DNA와 상호작용하는 비-기 특이적 항암제이다. 백금 배위 착물의 예는, 이로 한정되는 것은 아니지만, 시스플라틴, 올살리플라틴 및 카르보플라틴을 포함한다. 시스플라틴, 즉, 시스-다이암민디클로로플라티넘(cis-diamminedichloroplatinum)은 주사 가능한 용액인 PLATINOL®로서 구입 가능하다. 카르보플라틴, 플라티넘, 디암민[1,1-시클로부탄-디카르복실레이트(2-)-0,0']는 주사 가능한 용액인 PARAPLATIN®으로 구입 가능하다. 알킬화제는 비-기 특이적 항암제 및 강한 친전자체이다. 알킬화제의 예는, 이로 한정되는 것은 아니지만, 질소 머스타드, 예컨대, 시클로포스파미드, 멜팔란, 및 클로람부실(chlorambucil); 알킬 설포네이트, 예컨대, 부설판(busulfan); 니트로소우레아, 예컨대, 카르무스틴(carmustine); 및트리아젠, 예컨대, 다카르바진(dacarbazine)을 포함한다.

시클로포스파미드, 2-[비스(2-클로로에틸)아미노]테트라히드로-2H-1,3,2-옥사자포스포린 2-옥사이드 모노수화물은 주사 가능한 용액 또는 정제로서 CYTOXAN®로 구입 가능하다. 멜팔란, 4-[비스(2-클로로에틸)아미노]-L-페닐알라닌은 주사 가능한 용액 또는 정제로서 ALKERAN®으로 구입 가능하다. 클로람부실, 4-[비스(2-클로로에틸)아미노]벤젠부타노산은 LEUKERAN® 정제로서 구입 가능하다. 부설판, 1,4-부탄디올 디메탄설포네이트는 MYLERAN® 정제로서 구입 가능하다. 카르 무스틴, 1,3-[비스(2-클로로에틸)-1-니트로소우레아는 동결건조된 물질의 단일 바이알로서 BiCNU®로 구입 가능하다. 다카르바진, 5-(3,3-디메틸-1-트리아제노)-이미다졸-4-카르복사미드는 물질의 단일 바이알로서 DTIC-Dome®으로 구입 가능하다.

항생 항-신생물은 DNA와 결합하거나 이에 관여하는 비-기 특이적 작용제이다. 항생 항-신생물 작용제는, 이로 한정되는 것은 아니지만, 악티노마이신, 예컨대, 닥티노아미신, 안트라사이클린, 예컨대, 다우노루비신(daunorubicin) 및 독소루비신; 및 블레오마이신(bleomycin)을 포함한다. 악티노마이신 D로도 공지된 닥티노아미신은 COSMEGEN®로서 주사 가능한 형태로 구입 가능하다. 다우노루비신, (8S-시스-)-8-아세틸-10-[(3-아미노-2,3,6-트리데옥시-[알파]-L-릭소-헥소피라노실)옥시]-7,8,9,10-테트라히드로-6,8,11-트리히드록시-1-메톡시-5,12 나프타센디온 하이드로클로라이드는 DAUNOXOME®로서의 리포좀성 주사 가능한 형태 또는 CERUBIDINE®로서의 주사 가능한 형태로 구입 가능하다. 독소루비신, (8S,1OS)-10-[(3-아미노-2,3,6-트리데옥시-[알파]-L-릭소-헥소피라노실)옥시]-8-글리콜로일, 7,8,9,10-테트라히드로-6,8,11-트리히드록시-1-메톡시-5,12 나프타센디온 하이드로클로라이드는 RUBEX® 또는 ADRIAMYCIN RDF®로서 주사 가능한 형태로 구입 가능하다. 블레오마이신, 스트렙토마이세스 베르티실러스 균주로부터 유래한 세포독성 글리코펩티드 항생제의 혼합물은 BLENOXANE®로서 구입 가능하다.

토포이소머라제 II 억제제는, 이로 한정되는 것은 아니지만, 에피포도필로톡신을 포함한다. 에피포도필로톡신의 예는, 이로 한정되는 것은 아니지만, 에토포시드(etoposide) 및 테니포시드(teniposide)를 포함한다. 에토포시드, 4'-데메틸- 에피포도필로톡신 9[4,6-0-(R)-에틸이덴-[베타]-D-글루코피라노시드]는 VePESID®로서의 주사 가능한 용액 또는 캡슐로 구입 가능하고, 통상적으로는 VP-16으로 공지되어 있다. 테니포시드는 4'-데메틸-에피포도필로톡신 9[4,6-0-(R)-테닐리덴-[베타]-D-글루코피라노시드]는 VUMON®으로서의 주사 가능한 용액으로 구입 가능하고, 일반적으로는 VM-26으로 공지되어 있다.

항대사성 신생물 작용제는 DNA 합성을 억제함으로써 또는 퓨린 또는 피리미딘 염기 합성을 억제하고 그에 의해서 DNA 합성을 제한함으로써 세포주기의 S 기(DNA 합성)에서 작용하는 기 특이적 항-신생물 작용제이다. 항대사성 항-신생물 작용제의 예는, 이로 한정되는 것은 아니지만, 플루오로우라실, 메토트렉세이트, 시타라빈(cytarabine), 메르캅토퓨린, 티오구아닌, 및 젬시타빈을 포함한다. 5-플루오로우라실, 5-플루오로-2,4-(1H,3H) 피리미딘디온은 플루오로우라실로서 구입 가능하다. 그 밖의 플루오로피리미딘 유사체는 5-플루오로 데옥시우리딘(플록수리딘) 및 5-플루오로데옥시우리딘 모노포스페이트이다. P 시타라빈, 4-아미노-1-[베타]-D-아라비노푸라노실-2(1H)-피리미디논은 CYTOSAR-U®로서 구입 가능하고, 일반적으로는 Ara-C로서 공지되어 있다. 그 밖의 시티딘 유사체는 5-아자시티딘 및 2',2'-디플루오로데옥시시티딘 (젬시타빈)이다. 시타라빈은 류코페니아, 트롬보시토페니아(thrombocytopenia) 및 뮤코시티스(mucositis)를 유도한다.

메르캅토퓨린, 1,7-디히드로-6H-퓨린-6-티온 모노수화물은 PURINETHOL®로서 구입 가능하다. 유용한 메르캅토퓨린 유사체는 아자티오프린이다. 티오구아닌, 2-아미노-1,7-디히드로-6H-퓨린-6-티온은 TABLOID®로서 구입 가능하다. 그 밖의 퓨린 유사체는 펜토스타틴, 에리트로히드록시노닐라데닌, 플루다라빈 포스페이트, 및 클라드리빈을 포함한다. 젬시타빈, 2'-데옥시-2',2'-디플루오로시티딘 모노하이드로클로라이드 ([베타]-이성체)는 GEMZAR®로서 구입 가능하다.

메토트렉세이트, N-[4[[(2,4-디아미노-6-프테리디닐)메틸]메틸아미노]벤조일]-L-글루탐산은 메토트렉세이트 소듐으로서 구입 가능하다.

캄프토테신 및 캄프토테신 유도체를 포함한 캄프토테신은 토포이소머라제 I 억제제로서 구입 가능하거나 그로서 개발중에 있다. 캄프토테신의 예는, 이로 한정되는 것은 아니지만, 이리노테칸, 토포테칸 및 다양한 하기된 7-(4-메틸피페라지노-메틸렌)-10,11-에틸렌디옥시-20-캄프토테신의 다양한 광학 이성체를 포함한다.

이리노테칸 HCl, (4S)-4,11-디에틸-4-히드록시-9-[(4-피페리디노피페리디노)카르보닐옥시]-1H-피라노[3',4',6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-3,14(4H,12H)-디온 하이드로클로라이드는 주사 가능한 용액인 CAMPTOSAR®로서 구입 가능하다. 이리노테칸은 이의 활성 대사물질 SN-38과 함께 토포이소머라제 I-DNA 복합체에 결합하는 캄프토테신의 유도체이다. 토포테칸 HCl, (S)-1O-[(디메틸아미노)메틸]-4-에틸-4,9-디히드록시-1H-피라노[3',4',6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-3,14-(4H,12H)-디온 모노하이드로클로라이드는 주사 가능한 용액인 HYCAMTIN®로서 구입 가능하다. 또한 관심에 대상인 물질은 화학명칭 "7-(4-메틸피페라지노-메틸렌)-10,11-에틸렌디옥시-20(R,S)-캄프토테신 (라세미 혼합물) 또는 "7-(4-메틸피페라지노-메틸렌)-10,11-에틸렌디옥시-20(R)-캄프토테신 (R 거울상이성체) 또는 "7-(4-메틸피페라지노-메틸렌)-10,11-에틸렌디옥시-20(S)-캄프토테신 (S 거울상이성체)로 공지된 R 및 S 거울상이성체: EMI5.0 뿐만 아니라 라세미 혼합물(R,S) 형태를 포함하는 현재 개발중의 캄프토테신 유도체이다. 그러한 화합물 뿐만 아니라 이와 관련된 화합물 및 그 제조 방법이 미국특허 제6,063,923호; 제5,342,947호; 제5,559,235호; 제5,491,237호 및 1997년 11월 24일자 출원된 계류중인 미국특허출원 제08/977,217호에 기재되어 있다.

호르몬 및 호르몬 유사체가 호르몬과 암의 성장 및/또는 성장의 결여 사이의 관계에 있는 암을 치료하기에 유용한 화합물이다. 암 치료에 유용한 호르몬 및 호르몬 유사체는, 이로 한정되는 것은 아니지만, 어린이의 급성 백혈병 및 악성 림프종을 치료하는데 유용한 아데노코르티코스테로이드, 예컨대, 프레드니손 및 프레드니솔론; 에스트로겐 수용체를 함유하는 부신피질암 및 호르몬 의존성 유방암의 치료에 유용한 아미노글루테티미드 및 그 밖의 아로마타제 억제제, 예컨대, 아나스트로졸, 레트로졸, 보로졸 및 엑스메스탄(exemestane); 호르몬 의존성 유방암 및 자궁내막암의 치료에 유용한 프로게스틴, 예컨대, 메게스트롤 아세테이트; 전립선암 및 양성 전립선 비대증의 치료에 유용한 에스트로겐, 안드로겐, 및 항-안드로겐, 예컨대, 플루타미드(flutamide), 닐루타미드(nilutamide), 비칼루타미드(bicalutamide), 사이프로테론 아세테이트 및 5[알파]-리덕타제, 예컨대, 피나스테리드(finasteride) 및 두타스테리드(dutasteride); 호르몬 의존성 유방암 및 그 밖의 민간성 암의 치료에 유용한 항-에스트로겐, 예컨대, 타목시펜, 토레미펜(toremifene), 랄록시펜(raloxifene), 드롤록시펜(droloxifene), 요독시펜(iodoxifene), 및 풀베스트란트(fulvestrant), 및 선택적 에스트로겐 수용체 조 절제(selective estrogen receptor modulators (SERMS)), 미국특허 제5,681,835호, 제5,877,219호, 및 제6,207,716호에 기재된 것들; 및 전립선암의 치료를 위한 황체형성 호르몬(LH) 및/또는 난포자극 호르몬(FSH)의 분비를 자극하는 생식선자극호르몬-분비 호르몬(GnRH) 및 이의 유사체, LHRH 효능제 및 길항제, 예컨대, 고세렐린 아세테이트 및 류프롤리드(leuprolide)를 포함한다.

신생물을 치료하는데 유용한 모노클로날 항체는 트라스투주맙(trastuzumab) (HERCEPTIN®) 및 항-Her2 항체 및 베바시주맙(bevacizumab)(AVASTIN®) 및 항-VEGF 항체를 포함한다. 본 발명의 화합물과의 조합에 유용한 그 밖의 항-신생물 작용제는 파조파닙(pazopanib), VEGF 억제제, 및 항-형관생성 특성을 지니는 것으로 여겨지는 발프로산을 포함한다.

본 발명에 따른 병합 치료요법은 하나 이상의 화학식(I)의 화합물의 투여 뿐만 아니라 다른 항-신생물 작용제를 포함한 다른 치료제, 예컨대, 면역억제성 에버롤리무스의 임의적 사용을 포함한다. 그러한 병합 작용제들은 함께 또는 개별적으로 투여될 수 있으며, 개별적으로 투여되는 경우에, 동시에 투여되거나 가까운 시간간격 또는 긴 시간 간격으로 어떠한 순서로 연속적으로 투여될 수 있다. 화학식(I)의 화합물 및 다른 약제학적 활성제(들)의 양 및 관련 투여 시점은 요구된 병합치료 효과를 달성하기 위해서 선택될 것이다.

한 가지 구체예에서, 암을 앓고 있거나 이에 민감한 대상자를 치료하는 방법은 이를 필요로 하는 대상자에게 화학식(I) 또는 화학식(Ia)의 화합물이 아닌 항-신생물 치료요법으로부터 선택된 두 번째 치료요법 및 면역억제제를 투여하는 추가 의 단계를 포함한다.

한 가지 특정의 구체예에서, 대상자는 유방암을 앓고 있거나 그에 민감한 대상자이며, 두 번째 치료제는 카페시타빈, 파조파닙, 트라스투주맙, 도세탁셀, 레트로졸, 타목시펜, 풀베스트란트, 파클리탁셀, 카르보플라틴, 베바시주맙, 독소루비신 및 시클로포스파미드로부터 선택된다.

또 다른 특정의 구체예에서, 대상자는 자궁경부암을 앓고 있거나 이에 민감한 대상자이며, 두 번째 치료제는 파조파닙이다.

또 다른 특정의 구체예에서, 대상자는 두경부암을 앓고 있거나 이에 민감한 대상자이고, 두 번째 치료요법은 방사선 치료 및 시스플라틴으로부터 선택된다.

또 다른 특정의 구체예에서, 대상자는 고형 종양을 앓고 있거나 이에 민감한 대상자이며, 두 번째 치료제는 비노렐빈, 에버롤리무스(everolimus), 파클리탁셀, 발프로산, 도세탁셀 및 토포테칸으로부터 선택된다.

또 다른 특정의 구체예에서, 대상자는 비-호지킨 림프종을 앓고 있거나 이에 민감한 대상자이고, 두 번째 치료제는 에버롤리무스이다.

또 다른 특정의 구체예에서, 대상자는 위암을 앓고 있거나 이에 민감한 대상자이며, 두 번째 치료제는 파클리탁셀이다.

또 다른 특정의 구체예에서, 대상자는 난소암을 앓고 있거나 이에 민감한 대상자이며, 두 번째 치료제는 카르보플라틴 및 토포테칸으로부터 선택된다.

또 다른 특정의 구체예에서, 대상자는 악성 신경아교종을 앓고 있거나 이에 민감한 대상자이며, 두 번째 치료제는 파조파닙이다.

또 다른 특정의 구체예에서, 대상자는 복막암을 앓고 있거나 이에 민감한 대상자이고, 두 번째 치료제는 토포테칸이다.

또 다른 특정의 구체예에서, 대상자는 췌장암을 앓고 있거나 이에 민감한 대상자이고, 두 번째 치료제는 옥살리플라틴 및 젬시타빈으로부터 선택된다.

항신생물 활성을 지니는 화합물의 검정

임으로, 본원에 기재된 화합물은 당업자에게 공지된 표준 검정을 이용함으로써 신생 세포의 생존, 증식 또는 침습성을 완화시키거나, 안정화시키거나, 감소시키는 이들의 능력에 대해서 시험된다. 신생 세포 성장은 정상 세포의 성장 또는 증식을 지배하는 조절 기작과 동일한 기작에 주어지지 않는다. 신생물의 성장 또는 증식을 감소시키는 화합물은 신생물의 치료에 유용하다. 세포 성장 및 증식을 검정하는 방법은 본 기술분야에 공지되어 있다. 참고예[Kittler et al., Nature, 2004, 432(7020): 1036-40 and Miyamoto et al., Nature, 2002, 416(6883):865-9]. 세포증식에 대한 검정은 일반적으로 세포 복제 동안의 DNA 합성에 대한 측정을 포함한다. 한 가지 구체예에서, DNA 합성은 표지된 DNA 전구체, 예컨대, ([³H]-티미딘 또는 5-브로모-2^*-데옥시우리딘[BrdU]을 사용함으로써 검출되며, 그러한 전구체는 세포(또는 동물)에 첨가되고, 세포주기(복제)의 S 기 동안의 게놈성 DNA내로의 이들 전구체의 혼입이 검출된다[문헌: Ruefli-Brasse et al., Science, 2003, 302(5650):1581-4; Gu et al., Science, 2003, 302(5644):445-9]. 신생 세포의 생존을 감소시키는 화합물이 항-신생물 치료제로서 유용하다. 세포 생활성을 측정하 는 검정이 본 기술 분야에 공지되어 있으며, 예를 들어, 문헌[Crouch et al., J Immunol Meth, 160:81-8; Kangas et al., Med Biol, 1984, 62:338-43; Lundin et al., Meth Enzymol, 1986, 133:27-42; Petty et al., J Biolumin Chemilumin, 1995, 10:29-34; and Cree et al. Anticancer Drugs, 1995, 6:398-404]에 기재되어 있다. 세포 생활성은 MTT (3-(4,5-디메틸티아졸릴)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로미드)[문헌: Barltrop, Bioorg Med Chem Lett, 1991, 1:611; Cory et al., Cancer Comm 1991, 3:207-12,; Paull, J Heterocyclic Chem, 1988, 25:911]를 포함한 다양한 방법을 이용함으로써 검정될 수 있다. 세포 생활성에 대한 검정이 또한 이용 가능하다. 이들 검정은, 이로 한정되는 것은 아니지만, 루시페라제 기술을 이용하여 ATP를 검출하고 배양중의 세포의 건강도 또는 세포의 수를 정량화하는 CELLTITER-GLO® Luminescent Cell Viability Assay (Promega), 및 락테이트 데하이드로게나제 (LDH) 세포독성 검정(Promega)인 CELLTITER-GLO® Luminescent Cell Viability Assay을 포함한다.

신생 세포 치사를 증가(예, 아폽토시스 증가)시키는 화합물이 항-신생물 치료제로서 특히 유용하다. 세포 아폽토시스를 측정하는 검정은 당업자에게 공지되어 있다. 아폽토시스 세포는 광학 현미경을 이용에 의해서 명확히 관찰될 수 있는 크로마틴 응축, 세포 수축 및 막 블레빙(membrane blebbing)을 포함한 특성적 형태 변화가 특징이다. 아폽토시스의 생화학적 특성은 DNA 단편화, 특정 위치에서의 단백질 분해, 증가된 미토콘트리아 막 투과성, 및 세포막 표면상의 포스파티딜세린의 출현을 포함한다. 아폽토시스의 검정은 본 기술분야에 공지되어 있다. 예시적인 검정은 TUNEL (Terminal Deoxynucleotidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling) 검정법, 카스파제 활성 (특히, 카스파제-3) 검정, 및 fas-리간드(fas-ligand) 및 아넥신 V(annexin V)에 대한 검정을 포함한다. 아폽토시스를 검출하는 구입 가능한 생성물은, 예를 들어, Apo-ONE® Homogeneous Caspase-3/7 Assay, FragEL TUNEL 키트 (ONCOGENE RESEARCH PRODUCTS, San Diego, CA), ApoBrdU DNA Fragmentation Assay (BIOVISION, Mountain View, CA), 및 Quick Apoptotic DNA Ladder Detection Kit (BIOVISION, Mountain View, CA)을 포함한다.

신생 세포는 이들의 최초 위치에서 신체의 먼 지점까지 전이되거나 확장되는 성향을 지닌다. 전이 잠재성 또는 침습성에 대한 검정은 당업자에게는 공지되어 있다. 그러한 검정은 접촉 억제의 상실에 대한 시험관내 검정[문헌: Kim et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 2004, 101:16251-6], 시험관내 증가된 연성 당 콜로니 형성[문헌: Zhong et al., Int J Oncol, 2004, 24(6): 1573-9], 루이스 폐암(3LL)의 폐 전이 모델[문헌: Datta et al., In Vivo, 2002, 16:451-7] 및 메트리겔-기재 세포 침습 검정(Matrigel-based cell invasion assays)[문헌: Hagemann et al. Carcinogenesis, 2004, 25:1543-1549]을 포함한다. 세포 침습성에 대한 생체내 스크리닝 방법은 당업자에게 공지되어 있으며, 예를 들어, 무흉선 누드 마우스에서의 종양유발성 스크리닝을 포함한다. 메트리겔-기재 세포 침습 검정(Matrigel-Based Cell Invasion Assay (BD Bioscience, Franklin Lakes, NJ))이 전이를 평가하는 시험관내 검정에서 통상적으로 사용된다.

요구되는 경우, 본원에 기재된 스크리닝 방법중 어떠한 방법을 이용한 선택 된 화합물은 동물 신생물 모델을 이용함으로써 이들의 효능에 대해서 시험된다. 한 가지 구체예에서, 마우스에는 신생 사람 세포가 주입된다. 신생 세포를 함유하는 마우스에는 이어서 실험적으로 측정되는 기간 동안 매일 비히클(PBS) 또는 후보 화합물이 주입(복강내)된다. 마우스는 이어서 안락사되며 신생 조직이 수거되고 본원에 기재된 방법에 의해서 erbB2, erbB4, 또는 EGF 수용체 mRNA 또는 단백질 수준에 대해서 분석된다. 대조 수준에 비해서 erbB2 또는 erbB4 mRNA 또는 단백질 발현을 감소시키는 화합물은 대상자(예, 사람 환자)에서의 신생물의 치료에 효능적인 것으로 예상된다. 또한, EGF 수용체의 포스포릴화를 감소시키거나 EGF 수용체 활성을 감소시키는 화합물이 신생물 질환, 예컨대, 유방암의 치료에 유용하다.

요구되는 경우, 종양 로딩에 대한 후보 화합물의 효과는 사람 신생물 세포가 주입된 마우스에서 분석된다. 신생 세포는 덩어리를 형성하도록 성장하게 한다. 마우스는 이어서 실험적으로 측정하고자 하는 기간 동안 매일 화학식(I) 또는 (Ia)의 화합물 또는 비히클(PBS)로 매일 처리된다. 마우스는 안락사되며 신생 조직이 수거된다. 선택된 후보 화합물로 처리된 마우스에서의 신생 조직의 덩어리가 상응하는 대조 마우스에 존재하는 신생 조직의 덩어리와 비교된다.

진단 방법 및 키트

본 발명의 화합물 및 조성물은 또한 용액 또는 생물학적 샘플, 예컨대, 혈장중의 라파티닙의 농도를 측정하여 라파티닙의 대사를 시험하는 방법 및 다른 분석적 연구에서 시약으로서 유용하다.

한 가지 구체예에 따르면, 본 발명은 용액 또는 생물학적 샘플에서 라파티닙 의 농도를 측정하는 방법으로서, a) 미지 농도의 화학식(Ia)의 화합물을 생물학적 샘플의 용액에 첨가하는 단계; b) 용액 또는 생물학적 샘플을 화학식(Ia)의 화합물로부터 라파티닙을 구분하는 측정 장치에 가하는 단계; c) 측정 장치를 교정하여 화학식(Ia)의 화합물의 검출된 양을 생물학적 샘플 또는 용액에 첨가된 화학식(Ia)의 화합물의 공지된 농도와 상호 관련시키는 단계; d) 교정된 측정 장치로 생물학적 샘플중의 라파티닙의 양을 측정하는 단계; 및 e) 화학식(Ia)의 화합물에 대해서 얻은 검출된 양과 농도 사이의 상호관련에 의해서 샘플의 용액중의 라파티닙의 농도를 측정하는 단계를 포함하여, 라파티닙의 농도를 측정하는 방법을 제공한다.

상응하는 화학식(Ia)의 화합물로부터 라파티닙을 구별할 수 있는 측정 장치는 동위원소 존재에서만 서로 상이한 두 화합물을 구별할 수 있는 어떠한 측정 장치를 포함한다. 예시적인 측정 장치는 질량 분광계, NMR 분광계, 또는 IR 분광계를 포함한다.

또 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식(I) 또는 (Ia)의 화합물의 대사 안정성을 평가하는 방법으로서, 화합물을 일정한 시간 동안 대사 효소 공급원과 접촉시키는 단계, 및 그 시간 후의 화학식(I) 또는 (Ia)의 화합물의 양을 그 대상 생성물과 비교하는 단계를 포함하여, 화학식(I) 또는 (Ia)의 화합물의 대사 안정성을 평가하는 방법을 제공한다.

이와 관련된 구체예에서, 본 발명은 화합물 투여 후 환자에서의 화학식(I) 또는 (Ia)의 화합물의 대사 안정성을 평가하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 대상자에게 화학식(I) 또는 (Ia)의 화합물을 투여한 후 일정 시점에서 환자로부터 의 혈청, 소변 또는 대변 샘플을 얻는 단계, 및 혈청, 소변 또는 대변 샘플중의 화합물의 양을 화합물의 대사 생성물과 비교하는 단계를 포함한다.

본 발명은 신생물(암)을 치료하는데 사용되는 키트를 제공한다. 그러한 키트는 (a) 화학식(I) 또는 (Ia)의 화합물, 또는 이의 염, 또는 이의 수화물 또는 용매화물을 포함하며 컨테이너 내에 존재하는 약제학적 조성물 및 (b) 약제학적 조성물을 사용하여 신생물(암)을 치료하는 방법을 기재한 지시서를 포함한다. 특정의 구체예에서, 키트는 HER-2 양성 유방암을 치료하는데 사용된다.

컨테이너는 약제학적 조성물을 함유할 수 있는 어떠한 용기 또는 그 밖의 밀봉된 또는 밀봉 가능한 장치일 수 있다. 그러한 예에는 병, 앰플, 각각의 분할부 또는 챔버가 단일 용량의 조성물을 보유하는 분할된 또는 다중-챔버 홀더 병, 각각의 분할부가 단일 용량의 조성물을 보유하는 분할된 호일 팩킷(divided foil packet), 또는 단일 용량의 조성물을 분배하는 분배기를 포함한다. 컨테이너는 약제학적으로 허용되는 물질, 예를 들어, 종이 또는 카드보드 박스, 유리 또는 플라스틱 병 또는 자(jar), 재밀봉 가능한 백(예를 들어, 상이한 컨테이너내로 넣기 위한 정제의 "재충전물"을 보유하도록), 또는 치료 스케쥴에 따라서 팩(pack)으로부터 가압되는 개별적인 용량을 보유한 블리스터 팩(blister pack)으로 제조된 본 기술분야에 공지된 어떠한 통상의 모양 또는 형태일 수 있다. 사용되는 용기는 관련된 정확한 용량형에 좌우될 수 있으며, 예를 들어, 통상의 카드보드 박스는 액체 현탁액을 보유시키는데 일반적으로 사용될 수 없을 것이다. 하나 이상의 컨테이너가 단일 패키지에 함께 사용되어 단일 용량형이 시판될 수 있다. 예를 들어, 정 제는 병에 함유될 수 있으며, 이는 이어서 박스에 함유된다. 한 가지 구체예에서, 컨테이너는 블리스터 팩이다.

본 발명의 키트는 또한 약제학적 조성물의 단위 용량을 투여하고 측정하기 위한 장치를 포함할 수 있다. 그러한 장치는 조성물이 흡입 가능한 조성물인 경우의 흡입기; 조성물이 주사 가능한 조성물인 경우의 주사기 및 주사 바늘; 조성물이 경구 액체 조성물인 경우의 용적 표시가 있거나 없는 주사기, 스픈, 펌프 또는 용기; 또는 키트에 존재하는 조성물의 용량 제형화에 적절한 그 밖의 어떠한 측정 또는 전달 장치를 포함할 수 있다.

특정의 구체예에서, 본 발명의 키트는 컨테이너의 개별적 용기내에 제 2 치료제, 예컨대, 본 발명의 화합물과 동시 투여하기 위한 상기된 것들중 하나를 포함하는 약제학적 조성물을 포함할 수 있다.

본 발명은 일반적으로 기재되어 있지만, 이러한 본 발명은 본 발명의 특정의 특징 및 구체예의 예시를 위해서 단순히 포함되고 있으며 어떠한 방식으로든 본 발명을 제한하고자 하는 것이 아닌 이하 실시예를 참조하면 더욱 용이하게 이해될 것이다.

실시예

실시예 1: 비-중수소화된 중간체 (17)의 제조

도식 1.

도식 1은 Y^3a, Y^4a 및 Y^4b가 모두 수소인 본 발명의 화합물의 제조에 유용한 특정의 중간체의 합성방법을 도시하고 있다. 도식 1의 합성방법이 이하 추가로 기재된다.

2-클로로-1-(3-플루오로벤질옥시-4-니트로벤젠) (12). 분쇄된 탄산칼륨 (73.1 g, 0.5300 mol, 1.3 equiv)을 DMF (300 mL)중의 2-클로로-4-니트로페놀 (10) (77.6 g, 0.4484 mol, 1.1 equiv)의 용액에 서서히 첨가하였다. 진한 황색 현탁액이 형성되었으며, 반응 온도를 23 내지 42℃로 상승시켰다. 반응 혼합물을 80℃로 가열하고, 3-플루오로벤질브로미드 (11) (77.1 g, 50 mL, 0.4077 mol, 1.0 equiv)을 약 0.5 시간에 걸쳐서 80 내지 85℃에서 적가하고, DMF(25mL)를 사용하여 첨가 깔대기를 세정하였다. 진한 현탁액을 약 95℃에서 4.5 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 이어서 10℃로 냉각시켰다. H₂O (500 mL)를 <20 ℃에서 적가하였다. 황색 현탁액을 H₂O (750 mL)로 추가로 희석시키고 1 시간 동안 교반하였다. 고형물을 여과하고, H₂O (2 x 1 L)로 세척하고, 필터상에서 2 시간 동안 건조시키고, 이어서 밤새 공기 건조시켰다. 고형물을 10% 톨루엔/헵탄(500 mL)으로 세척한 다음, 헵탄(500 mL)으로 세척하고, 필터 상에서 1 시간 동안 건조시키고, 이어서 진공 오븐중의 약 40℃에서 7 시간 동안 건조시켜 111.3 g (97%)의 화합물(12)를 황색빛-백색 고형물로서 수득하고 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.

3-클로로-4-(3-플루오로벤질옥시)페닐아민 (13). 화합물(12) (56.2 g, 0.20 mol) 및 5% Pt-C (5.0 g, 50% H₂O) 및 THF (500 mL)의 혼합물을 H₂의 흡수가 정지될 때까지 30 psi의 H₂하에서 수소화시켰다(약 2.75시간). 혼합물을 셀라이트 패드를 통해서 여과하고, 셀라이트 패드를 THF (750 mL)로 세척하였다. 여액을 감암하에 소용적으로 농축시키고, 잔류 THF를 톨루엔(300mL)와 함께 증발시켰다. 혼합물을 소용적으로 농축시키고 씨딩(seeding)하였다. 결정화가 완료되면, 잔류 톨루엔을 헵탑(2 x 300mL)과 동시 증발시켰다. 잔류 고형물을 헵탄(200mL)로 분쇄하고, 여과하고, 건조시켜 47.6 g (95%)의 화합물(13)을 갈색빛-백색 고형물로서 수득하고 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.

4-클로로-6-요오도퀴나졸린 (14). 2-아미노-5-요오도벤조산(101.3g; 0.3852 mol) 및 포름아미드(210 mL)의 현탁액을 약 165℃에서 3.75시간 동안 가열하였으며, 이때, 약 100℃에서 어두운 갈색 용액이 형성되었다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진한 현탁액을 50% 수성 에탄올 ("EtOH") (500 mL)로 희석시켰다. 고형물 을 여과하고, 50% 수성 EtOH (250 mL)로 세척하고, 필터상에서 0.5 시간 동안 건조시켰다. 고형물을 EtOH/헵탄 (1:1 v/v, 500 mL)으로 세척한 다음, 헵탄(250 mL)으로 세척하였다. 고형물을 밤새 공기 건조시킨 다음, 40℃의 진공 오븐중에서 7 시간 동안 건조시켜 73.9 g (71%)의 6-요오도퀴나졸린-4-올을 회색빛 갈색 고형물로서 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.

옥살릴 클로라이드 (11.8 g, 8.1 mL, 92.6 mmol, 2.0 equiv)를 6-요오도퀴나졸린-4-올 (12.6 g, 46.2 mmol, 1.0 equiv), DMF (0.5 ml) 및 1,2-디클로로에탄 (300 mL)의 현탁액에 첨가하여 반응 온도를 21 내지 25℃로 상승시켰다. 혼합물을 약 75℃에서 밤새 가열하였다. NaHCO₃로 켄칭된 분취액의 TLC (50% EtOAc/헵탄)는 반응이 불완전함을 나타냈다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 옥살릴 클로라이드 (2.0 mL, 0.5 equiv)를 첨가하고, 혼합물을 7 시간 동안 환류시켰다. 등명한 짙은 갈색 용액을 실온으로 냉각시키고, 10% Na₂CO₃ 수용액 (500 mL)에 아주 서서히 부었다. 수성 혼합물을 EtOAc (500 mL)로 추출하였다. 대부분의 수성상을 분리하고, 잔류 혼합물을 여과하여 계면에서의 일부의 불용물을 제거하였다. 여액의 상을 분리하고, 유기상을 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 감압하에 농축시켰다. 생성되는 고형물을 냉 헵탄(약 200mL)로 분쇄하고, 여과하고, 건조시켜서 11.2g(84%)의 화합물(14)을 밝은 갈색 고형물로서 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.

[3-클로로-4-(3-플루오로벤질옥시)페닐](6-요오도퀴나졸린-4-일)아민 하이드 로클로라이드 (15). 2-프로판올 (300 mL)중의 화합물(14) (12.5 g, 43.0 mmol)의 현탁액에 화합물(13) (11.2 g, 44.3 mmol)을 첨가하였다. 생성되는 현탁약을 4 시간 동안 환류시키고, 이어서, 휘발물을 감압하에 제거하고, 미정제 고형물을 고온의 아세톤 (400 mL)으로 분쇄하고, 60℃에서 2 시간 동안 건조시켜 화합물(15) (16.4 g, 70%)를 엷은 황색 고형물로서 수득하였다.

5-{4-[3-클로로-4-(3-플루오로벤질옥시)페닐아미노]퀴나졸린-6-일}푸란-2-카르브알데하이드 (17). 에탄올 (270 mL)중의 화합물(15) (19.4 g, 35.8 mmol)의 현탁액에 트리에틸아민 (24.9 mL, 179 mmol)을 첨가한 다음, 5-포르밀푸란-2-보론산(16) (10.0 g, 71.6 mmol)을 첨가하였다. 생성되는 혼합물을 질소로 20분 동안 퍼징하고, Pd(dppf)Cl₂-CH₂Cl₂ (1.18 g, 1.43 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 2 시간 동안 환류시키고, 휘발물을 감압하에 제거하였다. 미정제 잔류물을 물(500 mL)에 취하였다. 침전물을 여과하고, 물로 세척하고, 메탄올(200mL)로 분쇄하고, 60℃에서 건조시켜서 화합물(17)(16.O g, 94%)을 황갈색 고형물로서 수득하였다.

실시예 2: 화합물 (100) 토실레이트 염 및 라파티닙 토실레이트 염의 제조

도식 2

도식 2는 화합물(100) 및 라파티닙의 토실레이트 염의 합성방법을 도시하고 있다. 도식 2의 합성방법을 이하 추가로 기재한다.

2-메탄설포닐에틸아민, 하이드로클로라이드 (18). 2-메틸설파닐에틸아민 (5.0 g, 54.9 mmol, 1.0 equiv), 포화된 NaHCO₃ 용액 (100 ml) 및 THF (200 mL)의 혼합물을 약 13℃로 냉각시키고, 디-3차-부틸 디카르보네이트(13.2 g, 60.4 mmol, 1.1 equiv)를 반응 온도를 약간 증가(2℃)시키면서 서서히 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하고 3 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H₂O (100 mL) 및 에틸 아세 테이트 ("EtOAc") (200 mL)로 희석시켰다. 유기 상을 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔류하는 엷은 황색 오일을 진공하에 1 시간 동안 넣어서 12.7 g의 미정제 2-메탄설파닐에틸)카르밤산, 3차-부틸 에스테르를 오일 함유 잔류물 t-BuOH 및/또는 Boc₂O로서 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.

70-75% MCPBA (27.0 g, 109.8 mmol)을 서서히 냉각(17 내지 20℃)시키면서 DCM (300 mL)중의 미정제 2-메탄설파닐에틸)카르밤산, 3차-부틸 에스테르 (12.7 g) 및 NaHCO₃ (10.1 g, 120.8 mmol)의 현탁액에 분획으로 첨가하였다. 첨가를 완료한 경우, 진한 백색 현탁액을 실온에서 2 시간 동안 교반하였으며, 이때, Tlc (EtOAc/헵탄, 1 :1, v/v) 및 LCMS는 산화가 완료됨을 나타냈다. 혼합물을 DCM (200 ml)으로 희석시키고, 후속하여, 10% 수성 Na₂CO₃ (200 mL), H₂O (200 mL) 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켜 엷은 황색 오일을 수득하였다. 씨딩하여 결정화를 유도하였다. 고형물을 냉 헵탄으로 분쇄하고, 여과하고, 건조시켜서 10.6 g (2-메틸설파닐에틸아민로부터 86%)의 (2-메탄설포닐에틸)카르밤산, 3차-부틸 에스테르를 백색 고형물로서 수득하였다.

디에틸 에테르(50 mL)중의 2M HCl을 EtOAc (250 mL)중의 (2-메탄설포닐에틸)카르밤산, 3차-부틸 에스테르 (10.6 g, 47.5 mmol)의 용액에 첨가하였다. 약 0.25 시간 후에 침전물이 형성되기 시작하였다. 현탁액을 실온에서 밤새 교반하였다. TLC 및 LCMS는 반응이 완료됨을 나타냈다. 디에틸 에테르(120 mL)중의 2M HCl을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 고형물을 수거하고, EtOAc (100 mL)로 세척하고, N₂하에 건조시켜서 5.9 g (78%)의 화합물 (18)을 백색 고형물로서 수득하였다.

2-메탄설포닐-1,1-d ₂ -에틸아민 하이드로클로라이드 (18-d ₂ ). 무수 THF (100 mL)중의 2-메탄설포닐아세토니트릴 (5.95 g, 50 mmol)의 용액에 실온의 THF (50 mL, 50 mmol)중의 1.0 M BD₃의 용액을 첨가하였다. 첨가 후에, 반응을 50℃에서 밤새 가열하고, 실온으로 냉각시키고, 이어서, 메탄올(300mL)로 서서히 켄칭시켰다. 생성되는 용액을 3 시간 동안 환류시키고, 진공하에 증발시켰다. 미정제 잔류물을 THF (300 mL)에 취하고, 중탄산나트륨 포화용액 (300 mL) 및 Boc₂O (10.9 g, 50 mmol)를 첨가하였다. 생성되는 용액을 밤새 교반하고, EtOAc (3 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 진공하에 증발시켜 점성 오일(13g)을 수득하였다. 미정제 오일을 1,4-디옥산 (100 mL)에 용해시키고, 1,4-디옥산 (100 mL)중의 4.0 M 염화수소 용액을 첨가하였다. 용액을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 진공하에 증발시키고, 메탄올을 제거하여 2-메탄설포닐-1,1-d₂-에틸아민 하이드로클로라이드를 백색 고형물(4.7 g, 75%)로서 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.

5-{4-[3-클로로-4-(3-플루오로벤질옥시)페닐아미노]퀴나졸린-6-일}푸란-2-일 메틸-(2-메탄설포닐에틸)카르밤산, 3차-부틸 에스테르 (20). 트리에틸아민 (4.4 mL, 31.8 mmol)을 DCM (500 ml)중의 화합물(18) (4.0 g, 25.05 mmol)의 현탁액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물(17)(7.1 g, 15 mmol)을 첨가하고, 현탁액을 실온에서 1 시간 동안 교반하여 등명한 황갈색 용액을 수득하였다. NaBH(OAc)₃ (9.7 g, 50.1 mmol)을 첨가하고, 생성되는 현탁액을 밤새 교반한 다음, 수성 10% Na₂CO₃ (300 mL)를 서서히 첨가함으로써 켄칭시켰다. 30분 후에, 수성 상을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트 (3 x 200 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켜서 갈색 오일을 수득하였다. 미정제 오일을 THF (300 mL)에 취하고, 중탄산나트륨 포화용액 및 Boc₂O (6.6 g, 30 mmol)를 첨가하였다. 생성되는 용액을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 에틸 아세테이트 (3 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 진공하에 증발시켜서 미정제 오일을 수득하고, 이를 용리액으로서 3:1 EtOAc/헵탄에 의해서 실리카겔 컬럼 상에서 정제하여 화합물(20)(7.0 g, 69%)을 황갈색 포말로서 수득하였다.

[3-클로로-4-(3-플루오로벤질옥시)페닐](6-{5-[(2-메탄설포닐에틸아미노)-메틸]푸란-2-일}-퀴나졸린-4-일)아민 4-톨루엔설포네이트 염(라파티닙 토실레이트 염). 수욕중의 DCM (240 mL)중 화합물(20)(7.0 g, 10.3 mmol)의 용액에 TFA (20 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 그 후에, 휘발물을 감압하에 제거하여 점성 오일을 수득하고, 이를 중탄산나트륨 포화용액(200mL)로 중 화시켰다. 생성되는 현탁액을 에틸 아세테이트 (3 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 진공하에 증발시켜서 황갈색 고형물(6 g)을 수득하였다. 고형물을 65℃의 순수한 에탄올(300mL)에 용해시키고, 에탄올(25 mL)중의 p-톨루엔설폰산 모노수화물 (1.84 g, 9.7 mmol)의 용액을 그 온도에서 적가하였다. 생성되는 현탁액을 환류 조건하에 1 시간 동안 교반하였다. 현탁액을 실온으로 다시 냉각시키고, 여과하고, 소량의 에탄올로 세척하였다. 수거된 고형물을 70℃에서 밤새 건조시켜서 라파티닙 토실레이트 염(6.77 g, 93%)을 엷은 황색 고형물로서 수득하였다.

체류시간(HPLC, 방법: 20 mm C 18-RP 컬럼 - 구배방법 95% ACN에서 1.7분 보유시키면서 3.3분 이내의 2-95% ACN + 0.1% 포름산): 2.71 min. MS (M + H⁺): 581.1. 원소분석 (C₃₆H₃₄ClFN₄O₇S₂): 계산치: C=57.40, H=4.55, Cl=4.71, F=2.52, N=7.44, S=8.51. 실측치: C=57.24, H=4.47, Cl=4.92, F=2.62, N=7.40, S=8.53.

(5-{4-[3-클로로-4-(3-플루오로벤질옥시)페닐아미노]퀴나졸린-6-일}푸란-2-일메틸)-(2-메탄설포닐-1,1-d ₂ -에틸)카르밤산, 3차-부틸 에스테르 (19). 트리에틸 아민 (4.4 mL, 31.8 mmol)을 DCM (500 ml)중의 화합물(18-d₂)(4.05 g, 25.05 mmol)의 현탁액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물(17) (7.1 g, 15 mmol)을 첨가하고, 현탁액을 실온에서 1 시간 동안 교반하여 등명한 갈색 용액을 수득하였다. 이러한 용액에 NaBH(OAc)₃ (9.7 g, 50.1 mmol)를 첨가하였다. 현탁액을 밤새 교반하고, 수성 10% Na₂CO₃ (300 mL)를 서서히 첨가함으로써 켄칭시켰다. 30분 후에, Boc₂O (6.6 g, 30 mmol)를 첨가하였다. 생성되는 용액을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 층을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트 (3 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고 진공하에 증발시켜서 미정제 오일을 수득하고, 이를 용리액으로서 3: 1 EtOAc/헵탄에 의해서 실리카겔 컬럼상에서 정제하여 화합물(19) (6.0 g, 59%)를 황갈색 포말로서 수득하였다.

[3-클로로-4-(3-플루오로벤질옥시)페닐](6-{5-[(2-메탄설포닐-1,1-d ₂ -에틸아미노)메틸]푸란-2-일}-퀴나졸린-4-일)아민, 4-톨루엔설포네이트 염 (화합물(100)토실레이트 염). 수욕중의 DCM (240 mL)중 화합물(19) (6.0 g, 8.8 mmol)의 용액에 TFA (20 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였으며, 이때, 휘발물을 감압하에 제거하여 점성 오일을 수득하고, 이를 중탄산나트륨 포화용액(300mL)로 중화시켰다. 생성되는 현탁액을 에틸 아세테이트 (3 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고 진공하에 건조시켜서 황갈색 고형물(5.1 g)을 수득하였다. 고형물을 65℃의 순수한 에탄올(300mL)에 용해시키고, 에탄올(25mL)중의 p-톨루엔설폰산 모노수화물 (1.56 g, 8.22 mmol)의 용액을 그 온도에서 첨가하였다. 생성되는 현탁액을 환류 조건하에 1 시간 동안 교반하였다. 현탁액을 실온으로 다시 냉각시키고, 여과하고, 소량의 에탄올로 세척하였다. 수거된 고형물을 70℃에서 밤새 건조시켜서 화합물(100) 토실레이트 염(5.32 g, 80%)을 황색 고형물로서 수득하였다.

체류시간 (HPLC, 방법: 20 mm C 18-RP 컬럼 - 구배 방법 95% ACN에서 1.7분 보유시키면서 3.3분 이내의 2-95% ACN + 0.1% 포름산): 2.71 min. MS (M + H⁺): 582.9. 원소 분석 (C₃₆H₃₂D₂ClFN₄O₇S₂): 계산치: C=57.25, H=4.80, Cl=4.69, F=2.52, N=7.42, S=8.49. 실측치: C=56.87, H=4.30, Cl=5.47, F=2.54, N=7.31, S=8.49.

실시예 3: 트리부틸주석(Tributylstannyl) 시약 (24)의 합성

도식 3

도식 3은 본 발명의 화합물을 합성하는데 사용된 트리부틸주석의 합성방법을 도시하고 있다. 도식 3의 합성방법이 이하 추가로 기재된다.

5-브로모-푸란-2-카르복실산 메톡시-메틸-아미드 (23). 도식 3에 기재된 바와 같이, 얼음/물 조(bath)수욕중의 디클로로메탄 ("DCM") (800 mL)중 1-에틸-3-(3'-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 ("EDCI")·HCl (75.0 g, 391.6 mmol)의 현탁액에 트리에틸아민 (124.8 mL, 890.0 mmol)을 첨가하였다. 5 분 후에, 5-브로모-2-푸로산(22) (68 g, 356.0 mmol) 및 무수 HOBt (52.9 g, 391.6 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 얼음/물 조(bath)중에서 추가로 10분 동안 교반하고, O-메틸-n-메틸히드록실아민 하이드로클로라이드 (38.2 g, 391.6 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 밤새 실온으로 가온하였다. 반응을 물(1.5 L)로 켄칭시키고, 층을 분리하였다. 수성층을 DCM (2 x 500 mL)로 추출하고, 합한 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고 진공하에 건조시켜서 미정제 오일을 얻고 이를 용리액으로서 1:4 EtOAc/헵탄으로 실리카겔 컬럼상에서 정제하여 화합물(23) (78 g, 85%)을 엷은 황색 오일로서 수득하였다.

5-트리부틸주석-푸란-2-카르복실산 메톡시-메틸-아미드 (24). -20℃의 무수 THF (450 mL)중의 비스(트리부틸주석) (200 g, 344.8 mmol)의 용액에 nBuLi (헥산중의 1.6 M, 210.6 mL, 336.9 mmol)을 20분에 걸쳐서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 -50℃로 냉각시키고, 구리(I) 브로미드 디메틸 설파이드 복합체(34.6 g, 168.5 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 -40℃로 다시 가온하고, 그 온도에서 20분 동안 정치시켰다. 이어서, 반응 혼합물을 -78℃로 냉각하고, THF (150 mL)중 의 화합물(23)(26.3 g, 112.3 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 -78℃에서 3 시간 동안 교반하고, 이어서, -40℃에서 1시간 동안 교반하였다. 냉각욕을 제거하고, 반응을 20 wt% 암모늄 클로라이드 (1.5 L)로 컨칭시키고, MTBE (1.0 L)로 희석시켰다. 15분 후에, 층을 분리하고, 수성층을 MTBE (2 x 1.0 L)로 추출하였다. 합한 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고 진공하에 건조시켰다. 미정제 잔류물을 1:1 MTBE/헵탄에 취하고, 실리카겔 컬럼(2kg)상에 직접 로딩하고, 1:1 MTBE/헵탄으로 용리시켜서 화합물(24)(34.0 g, 68%)를 엷은 황색 오일로서 수득하였다.

실시예 4: 모노-중수소화된 중간체 (17)의 제조

도식 4

도식 4는 Y^3a가 중수소이고, Y^4a 및 Y^4b가 모두 수소인 본 발명의 화합물을 제조하는데 유용한 특정의 중간체에 대한 합성방법을 도시하고 있다. 도식 4의 합성 방법이 이하 추가로 기재된다.

5-{4-[3-클로로-4-(3-플루오로-벤질옥시)-페닐아미노]-퀴나졸린-6-일}-푸란-2-카르복실산 메톡시-메틸-아미드 (25). 실온의 1,2-디메톡시에탄 (700 mL)중의 화합물(15) (27.0 g, 53.3 mmol)의 현탁액에 트리에틸아민 (7.5 mL, 53.3 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 교반하고, 30분 동안 질소로 퍼징하였다. 상기 형성된 용액에 화합물(24)(34.0 g, 76.5 mmol)를 첨가한 다음, (PPh₃)₂PdCl₂ (2.7 g)를 첨가하였다. 반응이 완료될 때까지(약 24 내지 48시간), 반응물을 50℃에서 가열하였다. 반응이 완료되면, 진공하에 증발시켜서 80%의 용매를 제거하고, MTBE (500 mL)로 희석시켰다. 침전물을 여과하고, MTBE (500 mL) 및 물(500 mL)로 세척하고, 50℃에서 밤새 건조시켜서 화합물(25)(22.0 g, 77%)를 황갈색 고형물로서 수득하였다. 소량의 샘플을 용리액으로서 1:1 내지 4:1 EtOAc/헵탄으로 실리카겔 컬럼상에서 정제하여 화합물(25)를 백색 고형물로서 수득하였다.

5-{4-[3-클로로-4-(3-플루오로벤질옥시)페닐아미노]퀴나졸린-6-일}푸란-2-카르브알데하이드-d(17-d1). 얼음/물/염 욕(bath)중의 THF중 화합물(25)(22.0 g, 41.3 mmol)의 용액에 리튬 알루미늄 중수소화물(lithium aluminum deuteride)(1.73 g, 41.3 mmol)을 분획으로 첨가하면서 내부 온도를 5℃ 미만으로 유지시켰다. 반응물을 냉각조에서 1 시간 동안 교반하고, 중수소 산화물(20mL)로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트 (1.0 L)로 희석시키고 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켜서 정량적인 수율로 표제 화합물(17-d1)을 황갈색 고형물로서 수득하였다.

실시예 5: 헵타-중수소화된 아민 시약(30)의 합성방법

도식 5

도식 5는 Y^1a, Y^1b, Y^1c, Y^2a, Y^2b, Y^5a 및 Y^5b가 동시에 중수소인 본 발명의 화합물을 합성하는데 사용되는 헵타중수소화된 아민 시약의 합성방법을 도시하고 있다. 도식 5의 합성방법이 이하 추가로 기재된다.

2-(2-브로모-1,1,2,2-d ₄ -에틸)-이소인돌-1,3-디온 (27). 주위 온도의 무수 DMF(580mL)중의 1,2-디브로모에탄-d₄(100 g, 521.1 mmol)의 용액에 프탈이미드 칼륨 염(26) (48.3 g, 260.6 mmol)을 첨가하였다. 생성되는 혼합물을 실온에서 48시간 동안 교반하고, 여과하고, 소량의 DMF로 세척하였다. 여액을 MTBE (1.6 L)로 희석시키고, 물(1.4 L)로 세척하였다. 수성층을 MTBE (2 x 1.2 L)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(2 x 1.0 L)세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 진공하에 증발시켜서 미정제 백색 고형물을 수득하고, 이를 헵탄(600mL)로 분쇄하여 화합물(27)(105 g, 비스 알킬화 생성물 함유)을 백색 고형물로서 수득하였다.

2-(2-d ₃ -메틸설파닐-1,1,2,2-d ₄ -에틸)-이소인돌-1,3-디온 (28). 0℃의 DMF(360mL)중의 화합물(27)(66.8 g, 258.7 mmol)의 용액에 나트륨 하이드로겐 설파 이드 수화물 (23.0g, 310 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물 0℃에서 20분 동안 교반하고, 주위 온도에서 1 시간 동안 교반하였다. 수욕중에서 상기 형성된 반응 혼합물에 탄산칼륨 (47.6 g, 344.9 mmol)을 첨가한 다음, 요오도메탄-d₃(50 g, 344.9 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하고, 물(1.5L)로 켄칭시키고, MTBE (3 x 1.0L)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(1.5 L) 및 물(1.5 L)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 진공하에 증발시켜서 미정제 고형물을 수득하고, 이를 용리액으로서 1:4 MTBE/헵탄으로 실리카겔 컬럼상에서 정제하여 화합물(28)(39.72 g, 67%)을 백색 고형물로서 수득하였다.

(2-d ₃ -메탄설포닐-1,1,2,2-d ₄ -에틸)-카르밤산 3차-부틸 에스테르 (29). 에탄올 (1.3 L)중의 화합물(28)(39.7 g, 174.0 mmol)의 용액에 하이드라진 일수화물 (10.4 g, 208.8 mmol)을 첨가하였다. 반응을 환류 조건하에 밤새 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 에틸 에테르(1.5L)로 희석시키고, 여과하고, 에틸 에테르(500mL)로 세척하였다. 여액을 30℃에서 진공하에 증발시켜서 등명한 오일을 수득하였다. 오일을 THF/물 (300 mL/300 mL)에 취하고, Boc₂O (45.6 g, 208.8 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 에틸 아세테이트 (3 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고 진공하에 증발시켜서 미정제 오일을 얻고, 이를 용리액으로서 1:4 MTBE/헵탄으로 실리카겔 컬럼상에서 정제하여 등명한 오일(20.0 g)을 수득하였다. 오일(20 g, 101.0 mmol)을 수욕중의 DCM (575 mL)에 용해시키고, 중탄산나트륨(19.3 g, 230.0 mmol)을 첨가하였 다. 3-클로로페록시벤조산(41.5 g, 201.5 mmol)을 분획으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, DCM (1.7 L) 및 물(1.7 L)로 희석시켰다. 층을 분리하고, 수성층을 DCM (1 L)로 추출하였다. 합한 유기층을 10wt% 탄산칼륨 (1.0 L) 및 물(1.0 L)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 진공하에 증발시켜서 고형물을 수득하고, 이를 헵탄 (400 mL)으로 분쇄하여 화합물(29)(25.3 g, 63%)를 결정상 백색 고형물로서 수득하였다.

2-d ₃ -메탄설포닐-1,1,2,2-d ₄ -에틸아민 하이드로클로라이드 (30). 1,4-디옥산 (50 mL)중의 화합물(29) (13.0 g, 56.2 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 (250 mL)중의 4.0 M HCl을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 진공하에 증발시켜 정량적인 수율로 화합물(30)을 백색 고형물로서 수득하였다.

실시예 6: 화합물(101) 토실레이트 염의 합성

도식 6

도식 6은 화합물(101) 토실레이트 염의 합성방법을 도시하고 있다. 도식 6의 합성방법이 이하 추가로 기재된다.

(5-{4-[3-클로로-4-(3-플루오로벤질옥시)페닐아미노]퀴나졸린-6-일}푸란-2-일-메틸-d ₂ )-(2-메탄설포닐-1,1-d ₂ -에틸)카르밤산, 3차-부틸 에스테르(31). DCM (400 mL)중의 상기 제조된 화합물(18-d2)(4.7 g, 37.5 mmol)의 현탁액에 트리에틸아민 (8.0 mL, 50 mmol)을 첨가하였다. 10분 후에, 화합물(17-d1) (6.4 g, 13.5 mmol) 및 황산나트륨 (20 g)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반한 후에, 소듐 하이드로듀테라이드(sodium borodeuteride)(1.88 g, 45.8 mmol)를 분획으로 첨가하였다. 생성되는 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 중수소 산 화물(200mL)중의 10wt% 탄산칼륨으로 켄칭시켰다. 20분 후에, Boc₂O (10.9 g, 50.0 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 층을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트 (2 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고 진공하에 건조시켜서 미정제 잔류물을 수득하고, 이를 용리액으로서 에틸 아세테이트로 실리카겔 컬럼 상에서 정제하여 화합물(31)(6.7 g, 72%)을 점성 오일로서 수득하였다.

[3-클로로-4-(3-플루오로벤질옥시)페닐]-(6-{5-[(2-메탄설포닐-1,1-d ₂ -에틸아미노)-d ₂ -메틸]-푸란-2-일}-퀴나졸린-4-일)아민 디-토실레이트(화합물(101) 토실레이트 염). 실온의 1,4-디옥산 (40 mL)중의 화합물(31)(6.7 g, 9.77 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 (200 mL)중의 4.0 M HCl을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하고, 이어서, 진공하에 농축시켰다. 생성되는 황색 고형물을 에틸 아세테이트 (300 mL)에 현탁시키고, 중수소 산화물(100mL)중의 10 wt% 탄산칼륨으로 중화시켰다. 층을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트 (2 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고 진공하에 건조시켜서 황갈색 포말(3.5 g, 5.99 mmol)로서 수득하였다. 황갈색 포말을 THF (15 mL)에 용해시키고, 60℃의 순수한 에탄올(50mL)중의 p-톨루엔설포네이트 일수화물 (2.85 g, 15.0 mmol)의 용액에 첨가하였다. 현탁액을 1 시간 동안 환류시키고, 실온으로 냉각시켰다. 침전물을 흡인 여과하여 수거하고, 소량의 순수한 에탈올로 세척하고, 이어서, 40℃에서 4 시간 동안 건조시켜서 표제 화합물(화합물 (101) 토실레이트 염 )(3.6g)을 황색 고형물로서 수득하였다.

체류시간 (HPLC, 방법: 20 mm C 18-RP 컬럼 - 구배 방법 95% ACN에서 1.7분 보유시키면서 3.3분 이내의 2-95% ACN + 0.1% 포름산): 2.72 min. MS (M + H⁺): 585.3. 원소 분석 (C₄₃H₃₈D₄ClFN₄O₁₀S₃): 계산치: C=55.56, H=4.55, Cl=3.81, F=2.04, N=6.03, S=10.35. 실측치: C=55.61, H=4.45, Cl=4.22, F=2.14, N=5.92, S=10.37.

실시예 7: 화합물(102) 토실레이트 염의 합성

도식 7

도식 7은 화합물(102) 토실레이트 염의 합성을 도시하고 있다. 도식 7의 합성방법이 이하 추가로 기재되고 있다.

(5-{4-[3-클로로-4-(3-플루오로벤질옥시)페닐아미노]퀴나졸린-6-일}푸란-2-일메틸-d ₂ -)-(2-d ₃ -메탄설포닐-1,1,2,2-d ₄ -에틸)카르밤산, 3차-부틸 에스테르 (33). DCM (850 mL)중의 화합물(30)(약 65.0 mmol)의 현탁액에 트리에틸아민 (9.1 mL, 65 mmol)을 첨가하였다. 10분 후에, 화합물(17-d1) (12.0 g, 25.2 mmol) 및 황산나트륨(20 g)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반시킨 후에, 소듐 보로듀테라이드(3.5 g, 85.7 mmol)를 분획으로 첨가하였다. 생성되는 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 중수소 산화물(300mL)중의 10 wt% 탄산칼륨으로 켄칭시켰 다. 20분 후에, Boc₂O (14.2 g, 65.0 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 층을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트 (2 x 400 mL)추출하였다. 합한 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고 진공하에 건조시켜서 미정제 잔류물을 수득하고, 이를 용리액으로서 에틸 아세테이트로 실리카겔 컬럼상에서 정제하여 화합물(33)(8.0 g, 46%)을 오랜지색 포말로서 수득하였다.

[3-클로로-4-(3-플루오로-벤질옥시)-페닐]-(6-{5-[(2-d ₃ -메탄설포닐-1,1,2,2-d ₄ -에틸아미노)-d ₂ -메틸]-푸란-2-일}-퀴나졸린-4-일)아민 디토실레이트(화합물(102) 토실레이트 염). 실온의 1,4-디옥산 (50 mL)중의 화합물(33)(8.0 g, 11.6 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 (300 mL)중의 4.0 M HCl을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하고 진공하에 증발시켰다. 황색 고형물을 에틸 아세테이트 (400 mL)에 현탁시키고, 중수소 산화물(200mL)중의 10 wt% 탄산칼륨으로 중화시켰다. 층을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트 (2 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고 진공하에 건조시켜서 오랜지색 고형물(약 11.6 mmol)을 수득하였다. 고형물을 THF (40 mL)에 용해시키고, 60℃의 순수한 에탄올(150mL)중의 p-톨루엔설포네이트 일수화물 (5.5 g, 29.0 mmol)의 용액에 첨가하였다. 현탁액을 환류 조건하에서 1 시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 침전물을 흡인 여과에 의해서 수거하고, 소량의 순수한 에탄올로 세척하고, 이어서, 40℃에서 4 시간 동안 건조시켜서 표제 화합물(화합물(102) 토실레이트 염)(7.9 g)을 황색 고형물로서 수득하였다.

체류시간 (HPLC, 방법: 20 mm C18-RP 컬럼 - 구배 방법 95% ACN에서 1.7분 보유시키면서 3.3분 이내의 2-95% ACN + 0.1% 포름산): 2.74 min. MS (M + H⁺): 590.1. 원소 분석 (C₄₃H₃₃D₉ClFN₄O₁₀S₃): 계산치: C=55.27, H=4.53, Cl=3.79, F=2.03, N=6.03, S=10.29. 실측치: C=55.28, H=4.56, Cl=3.90, F=2.00, N=6.00, S=10.16.

실시예 8: 화합물(103) 토실레이트 염의 합성

도식 8

도식 8은 화합물(103) 토실레이트 염의 합성방법을 도시하고 있다. 도식 8의 합성방법이 이하 추가로 기재되어 있다.

(5-{4-[3-클로로-4-(3-플루오로벤질옥시)페닐아미노]퀴나졸린-6-일}푸란-2-일메틸)-(2-d ₃ -메탄설포닐-1,1,2,2-d ₄ -에틸)카르밤산, 3차-부틸 에스테르 (35). DCM (850 mL)중의 화합물(30)(약 56.2 mmol)의 현탁액에 트리에틸아민 (9.1 mL, 65 mmol)을 첨가하였다. 10분 후에, 화합물(17) (13.0 g, 27.4 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반한 후에, 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드(17.8 g, 91.5 mmol)를 분획으로 첨가하였다. 생성되는 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 중수소 산화물(300mL)중의 10 wt% 탄산칼륨으로 켄칭시켰다. 20분 후에, Boc₂O(14.2 g, 65.0 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 2 시간 동안 교반 하였다. 층을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트 (2 x 400 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고 진공하에 증발시켜서 미정제 잔류물을 수득하고, 이를 용리액으로서 에틸 아세테이트로 실리카겔 컬럼상에서 정제하여 화합물(35)(10.5 g, 56%)을 오랜지색 포말로서 수득하였다.

[3-클로로-4-(3-플루오로-벤질옥시)-페닐]-(6-{5-[(2-d ₃ -메탄설포닐-1,1,2,2-d ₄ -에틸아미노)-메틸]-푸란-2-일}-퀴나졸린-4-일)아민 디토실레이트(화합물(103) 토실레이트 염). 실온의 1,4-디옥산중의 화합물(35) (10.5 g, 15.3 mmol)의 용액에 1,4-디옥산(200mL)중의 4.0 M HCl을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하고, 진공하에 증발시켰다. 황색 고형물을 에틸 아세테이트 (300 mL)에 현탁시키고, 중수소 산화물(200mL)중의 10 wt% 탄산칼륨으로 중화시켰다. 층을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트 (400 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고 진공하에 건조시켜서 황갈색 고형물(6.0 g, 10.2 mmol)을 수득하였다. 황갈색 고형물을 THF (20 mL)에 용해시키고, 60℃의 순수한 에탄올(80mL)중의 p-톨루엔설포네이트 일수화물 (4.9 g, 25.5 mmol)의 용액에 첨가하였다. 현탁액을 환류 조건하에 1 시간 동안 교반하고, 이어서, 실온으로 냉각시켰다. 침전물을 흡인 여과에 의해서 수거하고, 소량의 순수한 에탄올로 세척하고, 이어서, 40℃에서 4 시간 동안 건조시켜서 표제 화합물(화합물(103) 토실레이트 염)(4.8 g)을 황색 고형물로서 수득하였다.

체류시간 (HPLC, 방법: 20 mm C18-RP 컬럼 - 구배 방법 95% ACN에서 1.7분 보유시키면서 3.3분 이내의 2-95% ACN + 0.1% 포름산): 2.72 min. MS (M + H⁺): 588.3. 원소 분석 (C₄₃H₃₅D₇ClFN₄O_1OS₃): 계산치: C=55.38, H=4.54, Cl=3.80, F=2.04, N=6.01, S=10.32. 실측치: C=55.07, H=4.24, Cl=4.50, F=2.06, N=5.86, S=10.17.

실시예 9: 디-듀테로 중간체(40)의 합성

도식 9

도식 9는 Y^4a 및 Y^4b가 동시에 중수소인 본 발명의 화합물의 추가의 합성에 사용된 통상의 중간체의 합성방법을 도시하고 있다. 도식 9의 합성 단계가 이하 상세히 기재되어 있다.

3-플루오로-α,α-d2-벤질 알코올 (37). -78℃의 THF(2.0L)중의 메틸 3-플루오로벤조에이트 (36; 182 g, 1.181 mol)의 용액에 LiAlD₄ (50 g, 1.181 mol)를 분획으로 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 이어서, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응이 완료되면, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 이어서, 물 (50 mL), 15 wt% 수산화나트륨(50 mL), 및 물 (50 mL)로 서서히 켄칭시켰다. 생성되는 혼합물을 약 2 시간 동안 교반하고, 셀라이트를 통해서 여과하고, 셀라이트를 THF로 세척하였다. 진공하에 여액에서 용매를 제거하고, THF에 용해시키고, 이어서, 진공하에 다시 증발시켜서 화합물(37)(125.1 g)을 수율 83%의 등명한 오일로서 수득하였다.

3-플루오로-α,α-d ₂ -벤질 브로미드 (38). -20℃의 디클로로메탄(1.64L)중의 화합물(37) (125.1 g, 976.3 mmol)의 용액에 브롬화인(165 mL, 1.753 mol)을 적가하였다. 반응물을 -20℃에서 3 시간 동안 교반하고, 0℃로 가온하고, 추가로 1 시간 동안 교반하고, 이어서, 물(1.5L)로 켄칭시키고, 고형 탄산칼륨을 사용하여 서서히 pH8이 되게 하였다. 층을 분리하고, 수성층을 디클로로메탄 (2 x 1.0 L)으로 추출하였다. 합한 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 진공하에 용매를 제거하여 화합물 (38)(160.5 g, 86%)을 등명한 오일로서 수득하였다.

2-클로로-1-(3-플루오로-α,α-d ₂ -벤질옥시-4-니트로벤젠 (39). DMF (650 mL)중의 2-클로로-4-니트로페놀 (10; 160.4 g, 924.1 mmol, 1.1 equiv)의 용액에 탄산칼륨 분말(73.1 g, 0.53 mol, 1.3 equiv)을 첨가하여, 완만한 발열반응을 유도하였다. 생성되는 진한 황색 현탁액을 교반하고, 80℃로 가열한 다음, 80 내지 85℃에서 30분에 걸쳐서 3-플루오로-α,α-d₂-벤질브로미드 (38; 160.5 g, 840.1 mmol, 1.0 equiv)를 첨가하고, DMF (25 mL)를 사용하여 첨가 깔대기를 세정하였다. 진한 현탁액을 약 95℃로 가열하고 4.5 시간 동안 교반한 다음, 먼저 실온으로 냉각시키고, 이어서 10℃로 냉각시킨 다음, 물(2.7 L)로 켄칭하면서, 20℃ 미만의 온도를 유지시켰다. 현탁액을 실온에서 1 시간 동안 교반하고, 고형물을 여과에 의해서 제거하고, H₂O (2 x 2.1 L)로 세척하고, 필터 페이퍼상에서 2 시간 동안 건조시키고, 밤새 공기 건조시키고, 10% 톨루엔/헵탄 (1.1 L)으로 추가로 세척한 다음, 헵탄 (1.1 L)으로 세척하고, 필터 페이퍼 상에서 1 시간 동안 건조시키고, 이어서, 40℃의 진공 오븐에서 밤새 건조시켜서 정량적인 수율로 화합물(39)를 황색 고형물로서 수득하였다.

3-클로로-4-(3-플루오로-α,α-d ₂ -벤질옥시)페닐아민 (40). THF (1.0 L)중의 화합물(39) (약 420 mmol) 및 5% Pt-C (12.0 g, 50% H₂O 함유)의 혼합물을 30psi의 H₂에서 수소화시키는데, H₂의 소모가 중단될 때까지 수소화시킨다(약 2.75시간). 혼합물을 동일한 규모의 이중 반응의 생성 혼합물과 함께 셀라이트 패드를 통해서 여과하고, 셀라이트 패드를 THF (2.0 L)로 세척하였다. 여액을 진공하에 농축시켜 서 고형물을 수득하고, 이를 헵탄 (1.0 L)중의 10% MTBE로 분쇄하여 화합물(40)(179.3 g, 84%)을 황색 고형물로서 수득하였다.

실시예 10. 디-듀테로 중간체(43)의 합성

도식 10

도식 10은 Y^4a 및 Y^4b가 동시에 중수소이고, Y^3a가 수소인 화학식(I)의 화합물을 제조하는데 사용되는 일반적인 중간체의 합성방법을 도시하고 있다. 도식 10의 상세한 사항이 이하 기재되어 있다.

[3-클로로-4-(3-플루오로-α,α-d ₂ -벤조일옥시)페닐](6-요오도퀴나졸린-4-일)아민 하이드로클로라이드 (41). 2-프로판올 (2.2 L)중의 화합물(14) (약 400 mmol)의 현탁액에 화합물(40) (104.5 g, 412.0 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 조건하에 4 시간 동안 교반하고 실온으로 냉각시키고, 밤새 교반하였다. 생성되는 침전물을 여과하여 제거하고, 아세톤 (1.2 L)으로 세척하고, 60℃에서 2 시간 동안 건조시켜 화합물(41)(191 g, 88%)을 황색 고형물로서 수득하였다.

5-{4-[3-클로로-4-(3-플루오로-α,α-d ₂ -벤질옥시)페닐아미노]퀴나졸린-6-일}푸란-2-카르브알데하이드 (43). 에탄올 (360 mL, 사용전에 질소로 퍼징됨)중의 화합물(41) (24.2 g, 47.7 mmol)의 현탁액에 트리에틸아민 (26.8 mL, 190.8 mmol, 사용전에 질소로 퍼징됨)을 첨가한 다음, 5-포르밀푸란-2-보론산(42; 10.0 g, 71.6 mmol) 및 Pd(dppf)Cl₂.DCM (1.57 g)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 조건하에 2 시간 동안 교반하고, 휘발물을 감압하에 제거하였다. 미정제 잔류물을 물(500 mL)로 분쇄하고, 이어서, 메탄올 (500 mL)로 분쇄하고, 60℃에서 건조시켜서 화합물(43)(18.0)을 황갈색 고형물로서 수득하였다.

실시예 11. 보론산 시약(46)의 합성

도식 11

도식 11은 본 발명의 화합물의 추가의 합성에 사용되는 보론산 시약의 합성방법을 도시하고 있다. 도식 11의 상세한 설명이 이하 기재되어 있다.

5-브로모-푸란-2-카르복실산 메톡시-메틸-아미드 (45). 얼음/물 조(bath)중의 DCM (800 mL)중 EDCI·HCl (75.0 g, 391.6 mmol)의 현탁액에 트리에틸아민 (124.8 mL, 890.0 mmol)을 첨가하였다. 5분 후에, 5-브로모-2-푸로산(44; 68 g, 356.0 mmol) 및 무수 HOBt (52.9 g, 391.6 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 10분 동안 얼음/물 조(bath)에서 교반하고, O-메틸-N-메틸히드록실아민 하이 드로클로라이드 (38.2 g, 391.6 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온으로 자동적으로 밤새 가온하였다. 반응물을 물(1.5L)로 켄칭하고, 층을 분리하였다. 수성층을 DCM (2 x 500 mL)로 추출하고, 합한 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고 진공하에 증발시켜서 미정제 오일을 수득하고, 이를 용리액으로서 1:4 EtOAc/헵탄으로 실리카겔 컬럼상에서 정제하여 화합물(45) (78 g, 85%)을 엷은 황색 오일로서 수득하였다.

5-(메톡시(메틸)카르바모일)푸란-2-일보론산 (46). 15℃의 무수 THF (2.0 L)중의 비스[2-(N,N-디메틸아미노)에틸]에테르(76.8 g, 480 mmol)의 용액에 THF중의 2.0 M 이소프로필마그네슘 클로라이드(240 mL, 480 mmol)를 15분에 걸쳐서 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반한 다음, THF (100 mL)중의 화합물(45)(93.6 g, 400 mmol)를 첨가하고, 내부 온도를 15℃ 미만으로 유지시켰다. 생성되는 혼합물을 20분 동안 주위 온도에서 교반하고, 트리메틸보레이트(83.2 g, 800 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 0℃에서 30분 동안 계속 교반하였다. 반응물을 1.0M 염산으로 켄칭하고, 혼합물을 pH6이 되게 한 다음, 염화나트륨으로 포화시키고, EtOAc (3 x 1.0 L)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 진공하에 증발시켰다. 미정제 고형물을 1:1 EtOAc/헵탄 (1.0 L)로 분쇄하고 진공하에 60℃에서 건조시켜서 화합물(46)(33.3 g)을 황색 고형물로서 수득하였다.

실시예 12. 트리-중수소화된 중간체(48)의 합성

도식 12

도식 12는 Y^4a, Y^4b 및 Y^3a가 동시에 중수소인 본 발명의 화합물을 합성하는 방법에 사용된 트리중수소화된 중간체의 합성방법을 도시하고 있다. 도식 12의 상세한 사항이 이하 기재되어 있다.

5-{4-[3-클로로-4-(3-플루오로-α,α-d ₂ -벤질옥시)-페닐아미노]-퀴나졸린-6-일}-푸란-2-카르복실산 메톡시-메틸-아미드 (47). 에탄올 (630 mL, 사용전에 질소로 퍼징됨)중의 화합물(41)(42.5 g, 83.6 mmol)의 현탁액에 트리에틸아민 (43.9 mL, 사용전에 질소로 퍼징됨)을 첨가한 다음, 화합물(46)(33.3 g, 167.2 mmol) 및 Pd(dppf)Cl₂.DCM (2.75 g)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 조건하에 2 시간 동안 교반하고, 휘발물을 감압하에 제거하였다. 미정제 잔류물을 1:1 EtO Ac/헵탄으로 실리칼겔 컬럼상에서 정제하여 화합물(47) (9.7 g)을 황색 고형물로서 수득하였다.

5-{4-[3-클로로-4-(3-플루오로-α,α-d ₂ -벤질옥시)페닐아미노]퀴나졸린-6- 일}푸란-2-카르브알데하이드-d(48). 얼음/물/염 조(bath)중에서 냉각된 THF (720 mL)중의 화합물(47)(9.8 g, 18.3 mmol)의 용액에 리듐 알루미늄 듀테라이드(768 mg, 18.3 mmol)를 분획으로 첨가하여 내부온도가 5℃ 미만으로 유지되게 하였다. 반응물을 냉각조에서 1 시간 동안 교반하고, 이어서, 중수소 산화물(1mL), 중수소 산화물(1mL)중의 15 wt% NaOD, 및 중수소 산화물 (1 mL)로 실질적으로 켄칭시켰다. 생성되는 혼합물을 셀라이트로 여과하고, 여과 케이크를 THF (300 mL)로 세척하였다. 여액을 진공하에 증발시켜서 정량적인 수율로 화합물(48)을 황색 고형물로서 수득하였다.

실시예 13. 화합물(104) 토실레이트 염의 합성

도식 13

도식 13은 화합물(104) 토실레이트 염의 제조방법을 도시하고 있다. 도식 13의 상세한 사항이 이하 기재되어 있다.

중간체 (49). DCM (300 mL)중의 아민 하이드로클로라이드 (18-d2) (14.0 mmol)의 현탁액에 트리에틸아민 (3.5 mL, 25.2 mmol)을 첨가하였다. 현탁액을 10분 동안 교반한 후에, 화합물(48)(8.4 mmol) 및 황산나트륨(20 g)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 3 시간 동안 실온에서 교반하고, 이어서, 소듐 보로듀테라이드(1.17 g, 28.06 mmol)를 분획으로 첨가하였다. 생성되는 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 0℃의 중수소 산화물(300mL)중의 10 wt% 탄산칼륨으로 켄칭하였다. 20분 후 에, Boc₂O (14.0 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 층을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트 (2 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 진공하에 농축시켜 미정제 잔류물을 수득하고, 이를 용리액으로서 에틸 아세테이트로 실리카겔 컬럼상에서 정제하여 화합물 (49)을 점성 오일 또는 포말로서 수득하였다.

화합물(104) 토실레이트 염. 실온의 1,4-디옥산(mmol당 3mL)중의 화합물(49)의 용액에 1,4-디옥산(mmol당 10mL)중의 4.0M HCl을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하고, 진공하에 농축시켰다. 생성되는 황색 고형물을 에틸 아세테이트 (300 mL)에 현탁시키고, 물(100mL)중의 10 wt% 탄산칼륨으로 중화시켰다. 층을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트 (2 x)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 진공하에 농축시켜서 황갈색 포말을 수득하였다. 그러한 포말을 THF (mmol당 4 mL)에 용해시키고, 60℃의 순수한 에탄올(mmol당 14mL)중의 p-톨루엔설포네이트 일수화물 (2.5 eq)의 용액에 첨가하였다. 현탁액을 환류 조건에서 1 시간 동안 교반하고, 이어서 실온으로 냉각시켰다. 침전물을 흡인 여과에 의해서 수거하고, 소량의 순수한 에탄올로 세척하고, 60℃에서 밤새 건조시켜서 화합물(104) 토실레이트 염을 황색 고형물로서 수득하였다. 평균 수율은 알데하이드로부터 약 70%였다.

HPLC (방법: 20 mm C18-RP 컬럼 - 구배 방법 95% ACN에서 2분 보유시키면서 4분 이내의 2-95% ACN; 파장: 254 nm): 체류시간: 4.15 분. MS (M+H⁺): 587.1. 원소 분석 (C₄₃H₃₆D₆ClFN₄O_1OS₃·H₂O): 계산치: C=54.39, H=4.67, F=2.00, N=5.90. 실측치: C=54.19, H=4.32, F=2.02, N=5.76

실시예 14. 화합물(105) 토실레이트 염의 합성

도식 14

도식 14는 화합물(105) 토실레이트 염의 제조방법을 도시하고 있다. 도식 14의 상세한 사항이 이하 기재되어 있다.

중간체 50. 중간체 (50)는, 화합물(18-d2) 대신 아민 하이드로클로라이드 (30)을 사용함을 제외하고는, 중간체(49)와 유사한 방법으로 합성된다.

화합물(105) 토실레이트 염. 실온의 1,4-디옥산(mmol당 3mL)중의 화합물(50)(1.0 eq)의 용액에 1,4-디옥산 (mmol당 10 mL)중의 4.0 M HCl을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하고, 진공하에 농축시켰다. 생성되는 황색 고형물을 에틸 아세테이트 (mmol당 40 mL)에 현탁시키고, 중수소 산화물(100mL)중의 10 wt% 탄산칼륨으로 중화시켰다. 층을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트 (2 x)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 진공하에 농축시켜서 황갈색 포말을 수득하였다. 그러한 포말을 THF(mmol당 4mL)중에 용해시키고, 이어서, 60℃의 무수 에탄올(mmol당 14mL)중의 p-톨루엔설포네이트 일수화물(2.5 eq)의 용액에 첨가하였다. 현탁액을 환류 조건하에 1 시간 동안 교반하고, 이어서 실온으로 냉각하였다. 침전물을 흡인 여과하여 수거하고, 소량의 무수 에탄올로 세척하고, 이어서, 60℃에서 밤새 건조시켜서 화합물(105) 토실레이트 염을 황색 고형물로서 수득하였다. 수율은 알데하이드로부터 약 70%였다.

HPLC (방법: 20 mm C 18-RP 컬럼 - 구배 방법 95% ACN에서 2분 보유시키면서 4분내의 2-95% ACN; 파장: 254 nm): 체류시간: 4.23 분. MS (M+H⁺): 592.2.

실시예 15. 화합물(106) 토실레이트 염의 합성

도식 15

도식 15는 화합물(106) 토실레이트 염의 제조방법을 도시하고 있다. 도식 15의 상세한 사항이 이하 기재되어 있다.

중간체 51. 중간체(51)는, 화합물(18-d2) 대신 아민 하이드로클로라이드 (18)을 사용함을 제외하고는, 중간체(49)와 유사한 방법으로 합성된다.

화합물(106) 토실레이트 염. 화합물(106)은, 화합물(49) 대신 중간체(51)를 사용함을 제외하고는, 화합물(104) 토실레이트 염과 유사한 방법으로 제조된다.

HPLC (방법: 20 mm C18-RP 컬럼 - 구배 방법 95% ACN에서 2분 보유시키면서 4분동안의 2-95% ACN; 파장: 254 nm): 체류시간: 4.24 min. MS (M+H⁺): 585.0. 원소 분석 (C₄₃H₃₈D₄ClFN₄O_1OS₃): 계산치: C=55.57, H=4.55, F=2.04, N=6.03. 실측치: C=55.46, H=4.30, F=2.07, N=5.94.

실시예 16. 화합물(107) 토실레이트 염의 합성

도식 16

도식 16은 화합물(107) 토실레이트 염의 제조방법을 도시하고 있다. 도식 16의 상세한 사항이 이하 기재되어 있다.

중간체 52. DCM (500 mL)중의 아민 하이드로클로라이드 (18)(25 mmol)의 현탁액에 트리에틸아민 (4.7 mL, 31.8 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 1 시간 동안 교반하고, 이때 화합물(43)(7.1 g, 15.0 mmol)을 첨가하고, 실온에서 1 시간 동안 계속 교반하였다. 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드(9.7 g, 40.1 mmol)를 분획으로 첨가하고, 생성되는 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 0℃의 물(300mL)중의 10 wt% 탄산칼륨으로 켄칭하고, 이어서 20분 동안 교반하였다. 생성되는 혼합물에 Boc₂O (25 mmol)를 첨가하면서 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 층을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트 (2 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 황산나트륨상에서 건조시키고, 진공하에 농축시켜 미정제 잔류물을 수득하고, 이를 용리액으로서 에틸 아세테이트로 실리카겔 컬럼상에서 정제하여 화합물(52)를 포말로서 수득하였다.

화합물(107) 토실레이트 염. 화합물(017) 토실레이트 염은, 화합물(49) 대신 중간체(52)를 사용함을 제외하고는, 화합물(104) 토실레이트 염과 유사한 방법으로 제조된다.

HPLC (방법: 20 mm C 18-RP 컬럼 - 구배 방법 95% ACN에서 2분 보유시키면서 4분 동안 2-95% ACN; 파장: 254 nm): 체류시간: 4.24 분. MS (M+H⁺): 583.2. 원소 분석 (C₄₃H_4OD₂ClFN₄O₁₀S₃·0.1H₂O): 계산치: C=55.58, H=4.58, Cl=3.82, F=2.04, N=6.03. 실측치: C=55.25, H=4.42, Cl=3.91, F=2.02, N=5.95.

실시예 17. 화합물(108) 토실레이트의 합성

도식 17

도식 17은 화합물(108) 토실레이트 염의 제조방법을 도시하고 있다. 도식 17의 상세한 사항이 이하 기재되어 있다.

중간체 (53). 중간체(53)은, 화합물(18) 대신 아민 하이드로클로라이드 (18-d2)를 사용함을 제외하고는, 중간체(52)와 유사한 방법으로 합성된다.

화합물(108) 토실레이트 염. 화합물(108) 토실레이트 염은, 화합물(49) 대신 중간체(53)를 사용함을 제외하고는, 화합물(104) 토실레이트 염과 유사한 방법으로 제조된다.

HPLC (방법: 20 mm C18-RP 컬럼 - 구배 방법 95% ACN에서 2분 보유시키면서 4분 동안의 2-95% ACN; 파장: 254 nm): 체류시간: 4.24 분. MS (N+H⁺): 585.0. 원소 분석 (C₄₃H3₈D₄ClFN₄O_1OS₃·1.5H₂O): 계산치: C=54.00, H=4.74, Cl-3.71, F=1.99, N=5.86. 실측치: C=53.71, H=4.41, Cl=3.89, F=1.82, N=5.74.

실시예 18. 사람 간의 마이크로솜(Microsome)에서의 대사 안정성에 대한 평가

본 발명의 화합물의 대사 안정성을 본 기술분야에서는 공지되어 있는 하나 이상의 마이크로솜 검정으로 평가할 수 있다. 참조예[Obach, R.S. Drug Metab Disp 1999, 27, p. 1350 "Prediction of human clearance of twenty-nine drugs from hepatic microsomal intrinsic clearance data: An examination of in vitro half-life approach and nonspecific binding to microsomes"; Houston, J.B. et al., Drug Metab Rev 1997, 29, p. 891 "Prediction of hepatic clearance from microsomes, hepatocytes, and liver slices"; Houston, J.B. Biochem Pharmacol 1994, 47, p. 1469 "Utility of in vitro drug metabolism data in predicting in vivo metabolic clearance"; Iwatsubo, T et al., Pharmacol Ther 1997, 73, p. 147 "Prediction of in vivo drug metabolism in the human liver from in vitro metabolism data"; and Lave, T. et al., Pharm Res 1997, 14, p. 152 "The use of human hepatocytes to select compounds based on their expected hepatic extraction ratios in humans"]. 이들 각각은 그 전체 내용이 본원에 통합된다.

본 연구의 목적은 풀링된(pooled) 간 마이크로좀 배양물중의 시험 화합물의 대사안정성을 측정하고 주요 대사물의 검출을 위한 전체 스캔 LC-MS 분석을 수행하기 위한 것이다. 풀링된 사람 간 마이크로좀에 노출된 시험 화합물 샘플을 HPLC-MS(또는 MS/MS) 검사를 이용하여 분석하였다. 대사 안정성을 측정하기 위하여, 다중 반응 모니터링(multiple reaction monitoring: MRM)을 이용하여 시험 화합물의 소멸을 측정하였다. 대사물 검출을 위해서, Ql 전체 스캔을 서베이 스캔(survey scan)으로서 사용하여 주요 대사물을 검사하였다.

실험 과정: 사람 간 마이크로좀을 흡수 시스템 L.P.(Absorption Systems L.P. (Exton, PA))로부터 얻었다. 실험에 사용된 매트릭스에 대한 상세 사항이 이하 기재된다. 인큐베이션 혼합물을 다음과 같이 제조하였다:

반응 혼합물 조성물:

간 마이크로좀 0.1 내지 2mg/mL

NADPH 1 mM

칼륨 포스페이트, pH 7.4 100 mM

염화마그네슘 1O mM

시험 화합물(라파티닙 및 화합물(100-108))의 토실레이트 염 0.1 내지 1.0μM

각각의 실험을 위해서, 동일한 양의 화합물 및 동일한 양의 마이크로좀을 사용하였다. 각각에 대한 양은 실험마다 달리하였다.

시험 화합물과 간 마이크로좀의 인큐베이션: 반응 혼합물, 마이너스 공동인자(minus cofactor)의 배양물을 제조하였다. 반응 혼합물의 분취액(공동인자 없이)을 37℃의 진탕 항온 수조에서 3분 동안 인큐베이션하였다. 반응 혼합물의 또 다른 분취액을 음성 대조군으로서 준비하였다. 시험 화합물을 실험에 따라서 반응 혼합물 및 음성 대조군에 최종 농도 0.1 내지 1 μM로 첨가하였다. 반응 혼합물의 분취액을 플레인 유기 용액(plain organic solvent)(시험 화합물이 아님)의 첨가에 의해서 블랭크 대조군으로서 제조하였다. 반응을 공동인자(음성 대조군내로 첨가하지는 않음)의 첨가에 의해서 개시시키고, 이어서 37℃의 진탕 항온조에서 인큐베이션하였다. 분취액(200 μL)을 삼중으로 0, 10, 20, 40 및 60분에 분취하고, 800μL의 빙냉 50/50 아세토니트릴/dH2O와 합하여 반응을 종결시켰다. 양성 대조군, 테스토스테론 및 프로파놀롤을 별도의 반응으로 시험 화합물과 동시에 진행시켰다.

모든 샘플을 LC-MS (또는 MS/MS)를 이용하여 분석하였다. 대사 안정성에 대한 LC-MRM-MS/MS 방법을 이용하였다. 또한, Ql 전체 스캔 LC-MS 방법을 블랭크 매트릭스 및 시험 화합물 인큐베이션 샘플에 대해서 수행하였다. Ql 스캔이 서베이 스캔으로서 작용하여 가능한 대사물을 나타낼 수 있는 어떠한 독특한 샘플 피크를 확인하였다. 이들 대사물의 가능한 대사물의 질량이 Ql 스캔으로부터 측정될 수 있다.

라파티닙, 화합물(101) 및 화합물(102)의 토실레이트 염을 사용한 유사한 실험을 래트 간 마이크로좀으로 수행하였다.

이들 마이크로좀 검정의 결과(데이타는 기재하지 않음)는 라파티닙에 비교한 두 가지의 중수소화된 화합물의 안전성 사이에 상당한 차이가 없음을 나타냈다. 이론으로 한정하고자 하는 것은 아니지만, 본 발명자들은 이들 마이크로좀 안정성 실험이 본 발명의 화합물 및 라파티닙의 낮은 용해도 및 높은 단백질 결합성에 의해서 혼동된 것으로 여기고 있다.

실시예 19: CYP3A4 SUPERSOMES™에서의 대사 안정성 평가. SUPERSOME™ 시스템은 높은 화합물의 농도가 필요하지 않기 때문에, 본 발명의 화합물 및 라파티닙의 비교 안정성을 연구하기 위한 대안으로서 선택되었다. 이러한 낮은 단백질 농도는 다른 마이크로좀 단백질에 대한 라파티닙 및 본 발명의 화합물의 비-특이적 결합을 피한다.

사람 CYP3 A4 + P450 리덕타제 SUPERSOMES™은 GenTest (Woburn, MA, USA)로부터 구매하였다. 10OmM 포타슘 포스페이트 완충액 (pH 7.4)중의 25pmol의 SUPERSOMES™, 2.OmM NADPH, 3.OmM MgCl, 및 0.1 μM의 다양한 화학식(I)의 화합물(화합물(101), (102), 104), (105), (106), (107) 또는 (108)의 각각의 토실레이트 염)을 함유한 1.0mL 반응 혼합물을 37℃에서 삼중으로 인큐베이션하였다. 양성 대조군은 화학식(I)의 화합물 대신 0.1 μM의 라파티닙 토실레이트 염을 함유하였다. 음성 대조군은 GenTest (Woburn, MA, USA)로부터 구매한 대조 컨트롤 인섹트 셀 시토졸(Control Insect Cell Cytosol)(어떠한 사람 대사성 효소가 없는 곤충 세포 마이크로좀)을 사용하였다. 분취액(50 μL)은 각각의 샘플로부터 제거되고 다중 웰 플레이트의 웰(well)에 0, 2, 5, 7, 12, 20, 및 30분에 위치되며 이들 각각에 내부 표준으로서 3μM의 할로페리돌(haloperidol)을 함유한 50μL의 빙냉 아세토니트릴을 첨가하여 반응을 중지시켰다.

제거된 분취액을 함유하는 플레이트를 이어서 -20℃ 냉동기에 15분 동안 넣어서 냉각시켰다. 냉각 후에, 100 μL의 탈이온 수를 플레이트내의 모든 웰에 첨가하였다. 플리이트를 이어서 3000rpm에서 10분 동안 원심분리기에서 회전시켰다. 상등물의 분획(100μL)을 이어서 제거하고, 새로운 플레이트에 위치시키고, 질량 분광계를 사용하여 분석하였다.

30분 후의 각각의 시험된 화합물의 안정성을 하기 표 2에 나타낸다.

표 2. CYP3A4 SUPEROMES ™에서의 화학식(Ia)의 화합물의 안정성

도 1은 본 검정에서의 라파티닙, 화합물(102), 화합물(107) 및 화합물(108)의 토실레이트 염 각각의 대사에 대한 시간 과정을 나타낸다.

이들 결과는 본 발명의 중수소화된 화합물이 라파티닙보다 시토크롬 P450 산화에 더 내성이며, 그로 인해서 사람 대상에게 투여되는 경우에 유리하게 더 장시간 지속된 효과를 나타내고/거나 라파티닙 보다 더 적은 용량으로 투여될 수 있으면서, 동일한 치료효과를 제공하여, 바람직하지 않은 부작용을 피할 수 있음을 확인시켜 주고 있다.

실시예 20: 래트에서의 약동성 평가. 18마리의 스프라그-다울리 래트(Sprague-Dawley rat)를 각각 6마리 3 그룹으로 분할하여 라파티닙, 화합물(101), 화합물(102) 및 화합물(104)의 토실레이트 염의 정맥내 용량의 약동적 과정(pharmacokinetic fate)을 시험 및 비교하였다.

화합물을 투여하기 전에 펜토바르비탈(pentobarbital (TP 40 mg/kg))을 사용하여 래트를 마취시켰다. 10% DMSO/90% H₂O중의 라파티닙, 화합물(101) 및 화합물(102)의 토실레이트 염의 별도의 2mg/mL 용액을 제조하였다. 래트에게 목정맥 캐뉼라(jugular cannula)를 통해서 화합물의 단일 환제 2mg/kg 용량을 투여한 후 염수로 세척하였다. 투여 후 5, 15, 및 30분, 및 1, 2, 4, 6, 9, 12, 및 24 시간에 혈액 샘플(0.25mL)를 목동맥으로부터 취하였다. 혈액 샘플을 동물로부터 제거 15분 이내에 원심분리하고, 혈장 분획을 제거하고, 분석할 때까지 -20℃에서 저장하였다. 샘플을 LC-MS로 분석하였다.

도 2 및 도 3은 이들 실험의 결과를 나타낸다. 화합물(101) 및 화합물(102) 둘 모두는 라파티닙보다 현저하게 더 긴 반감기를 나타냈다(도 2). 유사하게, 화 합물(104)는 또한 라파티닙 보다 더 긴 반감기를 나타냈다. 라파티닙의 계산된 반감기는 1.0 ± 0.05 h이었다. 화합물(101) 및 화합물(104)의 반감기는 각각 2.3 ± 0.2 h 및 2.3± 0.3 h이었다.

라파티닙, 화합물(101) 및 화합물(102)의 토실레이트 염의 경구 투여(20mg/kg)(데이타는 기재되지 않음)를 이용한 유사한 실험은 라파티닙 보다 더 긴 반감기를 나타내는 화합물(101) 및 화합물 (102) 둘 모두와 유사한 결과를 입증하고 있다.

실시예 22. 시험관내 생물학적 활성. 라파티닙 뿐만 아니라 화합물(101), 화합물(102) 및 화합물(103)의 토실레이트 염을 다양한 키나아제 활성, 및 세포 증식에 대한 이들의 효과에 대해서 검정하였다. 검정은 상기된 바와 같은 Cerep (Redmond, WA USA)에 의해서 수행하였다.

EGFR 키나아제 검정(Cerep 카탈로그 번호:768-E)를 문헌[Weber W et al., J Biol Chem, 1984, 259:14631-36]에 기재된 방법에 따라서 수행하였다. 검정에 사용된 EGFR 키나아제는 A-431 세포로부터 얻었다. 다양한 농도의 시험 화합물(0.1 nM, 1 nM, 3 nM, 10 nM, 30 nM, 100 nM, 300 nM, 및 1 μM)을 키나아제, ATP 및 0.1 μM의 비오티닐화된 펩티드 비오티닐-βAβAβAAEEEEYFELVAKKK와 함께 22℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 포스포-비오티닐-βAβAβAAEEEEYFELVAKKK의 생성이 균일한 시간 분해 형광(Homogeneous Time Resolved Fluorescence)(HTRF®)에 의해서 검출되었다.

HER2 키나아제 검정(Cerep 카탈로그 번호:768-her2)을 문헌[Qian X et al., Proc Natl Acad Sci USA, 1992, 89:1330-34]에 기재된 방법에 따라서 수행하였다. 곤충 세포에서 발현된 재조합 사람 HER2 키나아제를 본 검정에서 사용하였다. 다양한 농도의 시험 화합물(0.1 nM, 1 nM, 3 nM, 10 nM, 30 nM, 100 nM, 300 nM, 및 1 μM)을 키나아제, ATP 및 0.6μM의 비오티닐화된 펩티드 비오티닐-βAβAβAAEEEEYFELVAKKK와 함께 22℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 포스포-비오티닐-βAβAβAAEEEEYFELVAKKK의 생성이 균일한 시간 분해 형광(Homogeneous Time Resolved Fluorescence)(HTRF®)에 의해서 검출되었다.

HER4 키나아제 검정(Cerep 카탈로그 번호:768-her4)이 문헌[Plowman GD et al., Proc Natl Acad Sci USA, 1993, 90:1746-50]에 기재된 방법에 따라서 수행되었다. 곤충 세포에서 발현된 재조합 사람 HER2 키나아제가 본 검정에서 사용되었다. 다양한 농도의 시험 화합물(0.1 nM, 1 nM, 3 nM, 10 nM, 30 nM, 100 nM, 300 nM, 및 1 μM)을 키나아제, ATP 및 0.6μM의 비오티닐화된 βAβAβAAEEEEYFELVAKKK와 함께 22℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 포스포-비오티닐-βAβAβAAEEEEYFELVAKKK의 생성이 HTRF®에 의해서 검출되었다.

세포 증식 검정(Cerep 카탈로그 번호: 791-4)을 문헌[Handler JA et al., J Biol Chem, 1990, 265:3669-73]에 기재된 방법에 따라서 수행하였다. A-431 세포를 [³H]-티미딘 및 다양한 농도의 시험 화합물(0.1 nM, 1 nM, 3 nM, 10 nM, 30 nM, 100 nM, 300 nM, 및 1 μM)의 존재하에 EGF (1 ng/ml)으로 자극시켰다. 37℃에서 24 시간 성장 후에, 세포를 수확하고, [³H]-티미딘 혼입을 섬광계수(scintillation counting)에 의해서 측정하였다.

이들 검정의 결과를 이하 표 3에 기재한다.

표 3. 화학식(Ia)의 화합물의 생물학적 활성

이들 결과는 본 발명의 화합물이 세포증식을 억제함에 있어서 뿐만 아니라 요구된 키나아제 표적에 대해서 라파니닙과 유사한 효능을 지님을 입증하고 있다.

더 이상의 설명이 필요없이, 상기된 설명 및 예시적인 실시예를 이용하는 당업자라면, 본 발명의 화합물을 제조하고 이를 이용하며 주장하고 있는 방법을 실시할 수 있는 것으로 사료된다. 상기된 설명 및 실시예를 특정의 바람직한 구체예에 대한 상세한 설명에 불과하다는 것이 이해될 수 있을 것이다. 당업자에게는 다양한 변화 및 등가물이 본 발명의 사항 및 범위를 벗어나지 않으면서 얻어질 수 있다는 것이 자명할 것이다.

Claims (22)

1. 하기 화학식(Ia)의 화합물, 또는 이의 염, 또는 이의 수화물 또는 용매화물:

   

   (Ia)

   상기 식에서, 각각의 Y는 독립적으로 수소 또는 중수소로부터 선택되며; 하나 이상의 Y가 중수소이다.
2. 제 1항에 있어서, 공통의 탄소원자에 결합된 각각의 Y가 동일한 화합물.
3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, Y^1a, Y^1b 및 Y^1c가 동시에 중수소인 화합물.
4. 제 1항 또는 제 3항에 있어서, Y^2a 및 Y^2c가 동시에 중수소인 화합물.
5. 제 1항 내지 제 4항중 어느 한 항에 있어서, Y^3a 및 Y^3b가 동시에 중수소인 화합물.
6. 제 1항 내지 제 5항중 어느 한 항에 있어서, Y^4a 및 Y^4b가 동시에 중수소인 화합물.
7. 제 1항 내지 제 6항중 어느 한 항에 있어서, Y^5a 및 Y^5b가 동시에 중수소인 화합물.
8. 제 1항에 있어서, 하기 표에 기재된 화합물 중 어느 한 화합물 또는 이들중 어느 한 화합물의 토실레이트 염으로부터 선택되는 화합물:

   
9. 제 1항 내지 제 8항중 어느 한 항에 있어서, 중수소로 지정되지 않은 어느 한 원자가 그 천연 동위원소 존재비(natural isotopic abundance)로 존재하는 화합물.
10. 제 1항의 화합물 및 허용되는 담체를 포함하는 비발열성(pyrogen-free) 조성물.
11. 제 10항에 있어서, 약제학적 투여를 위해서 제형화되며, 담체가 약제학적으로 허용되는 담체인 조성물.
12. 제 11항에 있어서, 항-신생물 작용제 및 면역억제제로부터 선택된 제 2 치료제를 추가로 포함하는 조성물.
13. 제 12항에 있어서, 제 2 치료제가 카페시타빈(capecitabine), 파조파닙(pazopanib), 트라스투주맙(trastuzumab), 도세탁셀(docetaxel), 레트로졸(letrozole), 타목시펜(tamoxifen), 풀베스트란트(fulvestrant), 파클리탁셀, 카르보플라틴(carboplatin), 베바시주맙(bevacizumab), 독소루비신, 시클로포스파미드, 시스플라틴(cisplatin), 비노렐빈(vinorelbine), 에버롤리무스(everolimus), 발프로산, 토포테칸, 옥살리플라틴(oxaliplatin) 및 젬시타빈(gemcitabine)으로부터 선택되는 조성물.
14. 세포를 제 1항의 화합물과 접촉시키는 단계를 포함하여, 세포에서의 erbB-1, 또는 erbB-2의 티로신 키나아제 활성을 억제하는 방법.
15. 제 11항의 조성물을 신생물(neoplasia)을 앓고 있거나 이에 민감한 대상자에게 투여하는 단계를 포함하여, 신생물을 앓고 있거나 이에 민감한 대상자를 치료하는 방법.
16. 제 15항에 있어서, 신생물이 백혈병(leukemia)(예를 들어, 급성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병(acute lymphocytic leukemia), 급성 골수성 백혈병(acute myelocytic leukemia), 급성 골수아구 세포성 백혈병(acute myeloblastic leukemia), 급성 전골수성 백혈병(acute promyelocytic leukemia), 급성 골수단구성 백혈병(acute myelomonocytic leukemia), 급성 단구성 백혈병(acute monocytic leukemia), 급성 적백혈병(acute erythroleukemia), 만성 백혈병(chronic leukemia), 만성 골수성 백혈병(chronic myelocytic leukemia), 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia)), 진성적혈구증가증(polycythemia vera), 림프종(lymphoma) (호지킨 질환(Hodgkin's disease), 비-호지킨 질환), 왈덴스트룀 마크로글로불린혈증(Waldenstrom's macroglobulinemia), 중쇄 질환(heavy chain disease), 및 고형 종양(solid tumor), 예컨대, 육종(sarcoma) 및 암종(carcinoma) (예, 섬유육종(fibrosarcoma), 점액육종(myxosarcoma), 지방육종(liposarcoma), 연골육종(chondrosarcoma), 골육종(osteogenic sarcoma), 척삭종(chordoma), 맥관육종(angiosarcoma), 내피육종(endotheliosarcoma), 림프관육종(lymphangiosarcoma), 림프관내피육종(lymphangioendotheliosarcoma), 윤활막종(synovioma), 중피종(mesothelioma), 유잉종양(Ewing's tumor), 평활근육종(leiomyosarcoma), 횡문근 육종(rhabdomyosarcoma), 결장암(colon carcinoma), 췌장암(pancreatic cancer), 유방암(breast cancer), 난소암(ovarian cancer), 전립선암(prostate cancer), 편평 세포 암종(squamous cell carcinoma), 기저 세포암(basal cell carcinoma), 샘암종(adenocarcinoma), 한선암종(sweat gland carcinoma), 피지샘암(sebaceous gland carcinoma), 유두암종(papillary carcinoma), 유두 샘암종(papillary adenocarcinoma), 낭샘암종(cystadenocarcinoma), 수질성 암종(medullary carcinoma), 기관지암(bronchogenic carcinoma), 신장 세포 육종(renal cell carcinoma), 간암(hepatoma), 담관 암종(bile duct carcinoma), 융모막 암종(choriocarcinoma), 정상피종(seminoma), 배아암종(embryonal carcinoma), 윌름스 종양(Wilms' tumor), 자궁경부암(cervical cancer), 자궁암(uterine cancer), 고환암(testicular cancer), 폐암(lung carcinoma), 소세포 폐암(small cell lung carcinoma), 방광암(bladder carcinoma), 상피 암종(epithelial carcinoma), 신경교종(glioma), 성상세포종(astrocytoma), 수모세포종(medulloblastoma), 두개인두종(craniopharyngioma), 상의세포종(ependymoma), 송과체종(pinealoma), 혈관모세포종(hemangioblastoma), 청신경초종(acoustic neuroma), 희돌기신경교종(oligodendroglioma), 신경초종(schwannoma), 수막종(meningioma), 흑색종(melanoma), 신경모세포종(neuroblastoma), 및 망막모세포종(retinoblastoma))인 방법.
17. 제 16항에 있어서, 대상자가 유방암, 식도선암종(esophageal adenocarcinoma), 식도편평상피세포암(esophageal squamous cell carcinoma), 자궁경부암(cervical cancer), 두경부암(head and neck cancer), 고형 종양(solid tumor), 비-호지킨 림프종(non-Hodgkins' Lymphoma), 위암, 난소암, 복막암(peritoneal cancer), 뇌 및 CNS 종양(Brain and CNS tumor)(신경아교종(glioma), 다형성 교모세포종(glioblastoma multiforme), 신경아교육종(gliosarcoma)), 전립선암, 자궁내막암, 직장결장암, 비소세포 폐암, 간암, 신장암, 췌장암을 앓고 있거나 이들에 대해 민감한 대상자인 방법.
18. 제 16항 또는 제 17항에 있어서, 신생물이 erbB2-, erbB4-, 또는 EGF-수용체 양성인 방법.
19. 제 18항에 있어서, 신생물이 erbB2- 또는 EGF-수용체 양성인 방법.
20. 제 19항에 있어서, 신생물이 유방암인 방법.
21. 제 15항 내지 제 20항중 어느 한 항에 있어서, 다른 항-신생물 요법, 화학치료제, 호르몬제, 항체 작용제, 면역 억제제, 수술 치료 및/또는 방사선 요법으로 이를 필요로 하는 대상자를 치료하는 추가의 단계를 포함하는 방법.
22. 제 21항에 있어서,

    a. 대상자가 유방암을 앓고 있거나 그에 민감한 대상자이거나, 대상자가 카페시타빈, 파조파닙, 트라스투주맙, 도세탁셀, 레트로졸, 타목시펜, 풀베스트란트, 파클리탁셀, 카르보플라틴, 베바시주맙, 독소루비신 또는 시클로포스파미드로 추가로 치료되거나,

    b. 대상자가 자궁경부암을 앓고 있거나 그에 민감한 대상자이거나, 대상자가 파조파닙으로 추가로 치료되거나,

    c. 대상자가 두부 암, 또는 경부암을 앓고 있거나 그에 민감한 대상자이거나, 대상자가 방사선 치료 또는 시스플라틴으로 추가로 치료되거나,

    d. 대상자가 고형암을 앓고 있거나 그에 민감한 대상자이거나, 대상자가 비노렐빈, 에버롤리무스, 파클리탁셀, 발프로산, 도세탁셀 또는 토포테칸으로 추가로 치료되거나,

    e. 대상자가 비-호지킨 림프종을 앓고 있거나 그에 민감한 대상자이거나, 대상자가 에버롤리무스로 추가로 치료되거나,

    f. 대상자가 위암을 앓고 있거나 그에 민감한 대상자이거나, 대상자가 파클리탁셀로 추가로 치료되거나,

    g. 대상자가 난소암을 앓고 있거나 그에 민감한 대상자이거나, 대상자가 카르보플라틴 또는 토포테칸으로 추가로 치료되거나,

    h. 대상자가 악성 신경아교종을 앓고 있거나 그에 민감한 대상자이거나, 대상자가 파조파닙으로 추가로 치료되거나,

    i. 대상자가 복막암을 앓고 있거나 그에 민감한 대상자이거나, 대상자가 토 포테칸으로 추가로 치료되거나,

    j. 대상자가 취장암을 앓고 있거나 그에 민감한 대상자이거나, 대상자가 옥살리플라틴 또는 젬시타빈으로 추가로 치료되는 방법.

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