CN108187055B - 一种具有协同增效作用的抗癌组合物 - Google Patents

一种具有协同增效作用的抗癌组合物 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种具有协同增效作用的抗癌组合物，具体为包括有效量的至少一种VEGF/VEGFR抑制剂和2位(含N‑芳基哌嗪结构)取代喹唑啉类衍生物的组合物。本发明的组合物能够明显抑制肿瘤细胞的生长，减少抗癌药的使用，降低治疗风险和成本，具有广阔的应用前景。

Description

一种具有协同增效作用的抗癌组合物
技术领域
本发明涉及一种具有协同增效作用的抗癌组合物、其制备方法及用途。
背景技术
癌症(Cancer)，又称为恶性肿瘤，由细胞的不正常增生引起。这些异常增生的细胞会侵入到身体的其他部分。目前治疗癌症的传统方法包括手术、放疗、化疗免疫疗法、基因治疗等。由于影响肿瘤发生发展的原因十分复杂，并且治疗过程中易产生耐药性及肿瘤的复发，使得肿瘤治疗的难度更大。
在整个肿瘤组织中只有一小部分肿瘤细胞具有致瘤性，即肿瘤干细胞(Cancerstem cell，CSC)，CSC的产生与癌细胞的自我更新能力，对传统化疗耐药及肿瘤复发转移等息息相关。舒尼替尼(SN)是多靶点的小分子TKI，作用靶点包括血管内皮细胞生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor，VEGFR)、血小板内皮源性生长因子(Plateletderived growth factor receptor，PDGFR)等，但SN治疗乳腺癌取得较差的临床效果，SN会诱导瘤内缺氧引发CSC数量的增加。
多巴胺(Dopamine，DA)儿茶酚胺和苯乙胺家族中的重要化合物，近年来有研究表明，DA可以通过激动多巴胺D1受体(D1Dopamine receptor，D1DR)降低肿瘤干细胞的比例从而增加SN***的药效。2位(含N-芳基哌嗪结构)取代喹唑啉类衍生物C2和C17与D1DR有较强的亲和性，但并未见到此类化合物对肿瘤的作用的相关报道。
发明内容
本发明人在研究肿瘤治疗过程中发现2位(含N-芳基哌嗪结构)取代喹唑啉类衍生物与D1DR有较强的亲和性，其与SN联用可以显著增强SN抑制肿瘤的效果。
本发明人在研究初期，开展了化合物与SN联用对两种胰腺癌细胞体外增殖的抑制作用，结果显示两药联用后协同指数小于1，提示两药具有协同增效的作用(见实施例1)。并且两药联用可以显著降低肿瘤细胞的集落形成能力(参见实施例4)。在体内实验中，人源胰腺癌异种移植瘤模型中化合物与SN联用均能显著增强SN的抗肿瘤作用，且无明显的药物毒性。
因此，本发明的一个目的是提供一种具有协同增效作用的抗癌组合物，包括有效量的至少一种抗癌药物和一种有效量的非抗癌药物，所述抗癌药物为VEGF/VEGFR抑制剂；所述非抗癌药物为2位(含N-芳基哌嗪结构)取代喹唑啉类衍生物；所述的2位(含N-芳基哌嗪结构)取代喹唑啉类衍生物可使以血管内皮生长因子VEGF或其受体为靶点的抗癌药物的治疗效果产生协同增效作用。
根据本发明的一个方面，所述的VEGF/VEGFR抑制剂，优选为小分子的VEGFR抑制剂和VEGF的单克隆抗体，其中，小分子的VEGFR抑制剂优选为索拉非尼(Sorafenib，Bayer/Onyx，2005)、舒尼替尼(Sunitinib，pFizer，2006)、帕唑帕尼(Pazopanib，GSK，2009)、阿西替尼(Axitinib，pFizer，2012)及其在药学上可接受的盐中的一种或几种，最优选为舒尼替尼(Sunitinib，SN)及其在药学上可接受的盐。VEGF的单克隆抗体优选为贝伐单抗(Bevacizumab，Genentech,2004)、兰尼单抗(Ranibizumab，Genentech，2006)。
所述的药学上可接受的盐是通过常规的化学方法从母体化合物合成的，所述母体化合物包含碱性的或酸性的部分。通常，所述盐是比如通过这些化合物的游离酸或碱形式和化学当量的合适的碱或酸在水中或在有机溶剂或在水和有机溶剂的混合物中反应而制备的。通常，非水介质如***、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是优选的。酸加成盐的例子包含无机酸加成盐如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐，和有机酸加成盐如醋酸盐、三氟醋酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、扁桃酸盐、安乃近和对甲苯磺酸盐。碱加成盐的例子包含无机盐如钠、钾、钙和铵盐，以及有机的碱金属盐如乙二胺、乙醇胺、N，N-二亚烃基乙醇胺、三乙醇胺和碱性的氨基酸盐。
根据本发明的一个方面，所述癌意味着包含肿瘤、瘤形成和任何其它的恶性组织或细胞。具体包括结肠癌或直肠癌，转移性结肠直肠癌，肺癌，非鳞状非小细胞肺癌，乳腺癌，转移性乳腺癌，转移性HER2阴性乳腺癌，脑癌，成人成胶质细胞瘤，儿童成胶质细胞瘤，儿童抵抗性成胶质细胞瘤，胶质瘤，室管膜瘤，星形细胞瘤，成神经管细胞瘤，儿童成神经管细胞瘤，神经胶质瘤，少突神经胶质瘤或脑膜瘤，肾癌如晚期肾细胞癌，膀胱癌，***，结肠癌(包括结肠直肠癌)，食管癌，胃癌，头颈部癌，肝癌，肺癌(小细胞肺癌和非小细胞肺癌)，鳞状非小细胞肺癌，黑素瘤，骨髓瘤，成神经细胞瘤，卵巢癌，胰腺癌，***癌，肉瘤(包括骨肉瘤)，皮肤癌(包括鳞状细胞癌)，胃癌，睾丸癌，甲状腺癌，子宫癌，间皮瘤，胆管癌，平滑肌肉瘤，脂肪肉瘤，鼻咽癌，神经内分泌癌，卵巢癌，唾液腺癌，或梭形细胞癌。
根据本发明的一个方面，所述有效量的至少一种抗癌药物和有效量的非抗癌药物在相同时间或不同时间施用。在相同时间施用时，所述组合物中的各组分以同一或独立的制剂形式使用。在不同时间使用时，所述组合物的各组分可使用相同或不同的剂型。
根据本发明的一个方面，说明书通篇使用的术语“联合”或“联用”或“联合给药”或“联合用药”指的是包括在相同的或独立的药物制剂中的治疗剂在相同时间或不同时间的使用。
本发明的另一目的是提供一种抗癌制剂，其包括所述的具有协同增效作用的抗癌组合物和药学上的常规辅料。所述常规辅料包括润滑剂、填充剂、表面活性剂、增溶剂、助溶剂等。
根据本发明的一个方面，所述抗癌制剂中的每种药物可单独或共同为片剂、胶囊剂、混悬剂、溶液剂、注射剂等。
本发明实现了以下有益效果：
(1)通过一种或多种抗癌药(VEGF/VEGFR抑制剂)和2位(含N-芳基哌嗪结构)取代喹唑啉类衍生物联合用于某种肿瘤的治疗，体外可显著抑制肿瘤细胞的生长，体内可显著抑制肿瘤体积，其效果显著好于抗癌药单用。
(2)本发明的联合用药能够在保证相同抗癌活性的基础下大大减少了抗癌药的使用，减少了较大剂量下抗癌药物所致的治疗风险和毒副作用(通常单用抗癌药的毒副作用都比较大)。
(3)本发明的2位(含N-芳基哌嗪结构)取代喹唑啉类衍生物可显著降低肿瘤干细胞(与肿瘤耐药性密切相关)的比例，说明本发明可作为良好的解决方案解决癌症治疗领域令人棘手的肿瘤耐药性问题。
附图说明
图1为C2，C17和SN单药分别对SW1990和PANC-1两种胰腺癌细胞增殖抑制作用的效果图。A和B分别为C2对SW1990和PANC-1细胞增殖抑制作用；C和D分别为C17对SW1990和PANC-1细胞增殖抑制作用；E和F分别为SN对SW1990和PANC-1细胞增殖抑制作用。
图2为C2与SN联用对人胰腺癌细胞增殖抑制作用的效果图。A和B分别为两药单用和不同浓度的联用对SW1990和PANC-1细胞增殖的抑制作用；C和D分别为两药不同浓度联用在SW1990和PANC-1细胞中的协同指数，协同指数小于1代表二者具有协同作用。
图3为C17与SN联用对人胰腺癌细胞增殖抑制作用的效果图。A和B分别为两药单用和不同浓度的联用对SW1990和PANC-1细胞增殖的抑制作用；C和D分别为两药不同浓度联用在SW1990和PANC-1细胞中的协同指数，协同指数小于1代表二者具有协同作用。
图4为C2和C17对人胰腺癌细胞集落形成能力抑制作用的效果图。A和B分别为不同浓度C2对SW1990和PANC-1细胞集落形成能力的抑制作用；C和D分别为不同浓度C17对SW1990和PANC-1细胞集落形成能力的抑制作用。
图5为C2与SN联用对耐阿霉素的人乳腺癌细胞系MCF-7/Adr体外集落形成抑制作用的效果图。
图6为C2和C17抑制人胰腺癌细胞PANC-1中肿瘤干细胞作用的效果图。
图7为C2与SN联用对体内胰腺癌移植瘤模型中肿瘤生长抑制作用的效果图。A，雌性nu/nu裸鼠分别给与空白对照，吉西他滨GEM 15mg/kg，SN 10mg/kg，C2 100mg/kg，SN10mg/kg+C2 100mg/kg时肿瘤体积的生长曲线；B，各组肿瘤拍照结果；C，各组小鼠体重变化；D，给药第28天，处死动物，将小鼠解剖，取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏称重并计算各脏器重量相对于小鼠净重的百分比，及脏器指数；E，给药第28天，小鼠眼眶采全血测定血常规结果。
图8为C2与SN联用对体内胰腺癌人源移植瘤模型中肿瘤生长抑制作用的效果图。A，NOD/SCID小鼠分别给与空白对照，SN 10mg/kg，C2 100mg/kg，SN 10mg/kg+C2 100mg/kg时肿瘤体积的生长曲线；B，各组肿瘤拍照结果；C，各组小鼠体重变化；D，给药第28天，处死动物，将小鼠解剖，取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏称重并计算各脏器重量相对于小鼠净重的百分比，及脏器指数；E，给药第28天，小鼠眼眶采全血测定血常规结果。
具体实施方式
为了更好的理解本发明，本发明人提供了下述的实施例，然而，这些实施例仅仅是作为说明性的目的而给出的，并且不解释为对本发明的限制，因为其中许多变化是可能的，而不脱离本发明的主旨和范围。本发明的组合物和方法虽然在特定实施方案加以描述，但所属技术领域的技术人员显而易见，可使所述组合物或/和方法的步骤或步骤的顺序发生变化，但不偏离本发明的概念和范畴。更具体来说，显而易见的在化学上和生物学上相关的其他药理过程类似的药物可以取代本文所述的药物，同时达到相同或相似的效果。所述技术领域的技术人员显而易见的对所有这种相似的替换或修饰都应被认为在本发明的范畴和概念内。
本发明研究了VEGFR抑制剂SN和2位(含N-芳基哌嗪结构)取代喹唑啉类衍生物联用对肿瘤细胞的体外增殖，集落形成以及对两种胰腺癌异种移植瘤模型的抗肿瘤药效。
实施例1
C2、C17和SN单用对胰腺癌细胞增殖的抑制作用
取对数生长期细胞，用0.25％胰酶-0.53mmol/L EDTA溶液消化、离心、重新混悬并计数。将SW1990细胞和PANC-1细胞均按6000个/孔接种于96孔细胞培养板。培养24h后，进行给药。对于SW1990细胞，C2单药给药组的终浓度为：0.1、1、2.5、5、10、15、50、100μM；对于PANC-1细胞，C2单药给药组的终浓度为：0.1、1、2、6、8、10、20、50μM。在两种细胞系中，C17单药给药组的终浓度为：1、5、10、15、20、25、30、50、100μM。在两种细胞系中，SN单药给药组的终浓度为：0.1、0.5、1、5、7、10、15、50、100μM。每组设6个平行孔。继续孵育48h。孵育结束后弃去培养基，每孔加入100μL预先预冷的10％三氯乙酸(TCA，w/v)溶液，4℃固定1h；弃去TCA溶液，自来水冲洗5次，自然晾干；每孔加入100μl 0.4％磺酰罗丹明B(SRB)染料，室温下染色30min；弃去SRB染料，用1％醋酸溶液洗5次，自然晾干；每孔加入200μl 10mmol/L Tris溶液(pH10.5)，振荡器上振摇10min使与肿瘤细胞碱性氨基酸残基结合的SRB溶解，酶标仪测定540nm波长处吸光度。空白对照组和药物处理组的吸光度表示为ODcontrol,540和ODsample,540。其中一块96孔细胞培养板不给药处理，铺板24h后同按上述步骤处理。其平均吸光度设为OD0h，540。细胞存活率按公式1.1计算：
结果显示(参见图1)：C2在SW1990和PANC-1两个细胞系中的IC50分别为4.32μM和6.40μM(图1A、B)，C17在SW1990和PANC-1两个细胞系中的IC50分别为12.56μM和10.53μM(图1C、D)，SN在SW1990和PANC-1两个细胞系中的IC50分别为2.41μM和8.26μM(图1E、F)，
实施例2
C2与SN联用对人胰腺癌细胞增殖的抑制作用
取对数生长期细胞，用0.25％胰酶-0.53mmol/L EDTA溶液消化、离心、重新混悬并计数。将SW1990细胞和PANC-1细胞均按6000个/孔接种于96孔细胞培养板。培养24h后，进行给药。对于SW990细胞的三个平行的96孔板，SN的浓度依次为0、1、5μmol/L，对于PANC-1细胞的四个平行的96孔板，SN的浓度依次为0、2、5、10μmol/L，而每1个96孔板中，C2的浓度均设置为0、1、2、4μmol/L，每组设6个平行孔。继续孵育48h。用SRB法测定各孔在540nm下的吸光度。采用文献报道的方法计算协同指数CI(combination index,CI)的大小。按照公式2.1计算联合给药组的理论吸光度，实测吸光度与理论值的比值即为协同指数(公式2.2)。CI值小于、等于和大于1，分别表示C2和SN具有协同、加和和拮抗作用。
结果显示(参见图2)：对于SW1990细胞(图2A、C)和PANC-1细胞(图2B、D)，C2显著增强了SN对癌细胞的抑制作用，C2为2、4μmol/L时，两药联用后协同指数(CI)小于1，说明两药联用具有协同增效作用。
实施例3
C17与SN联用对人胰腺癌细胞增殖的抑制作用
取对数生长期细胞，用0.25％胰酶-0.53mmol/L EDTA溶液消化、离心、重新混悬并计数。将SW1990细胞和PANC-1细胞均按6000个/孔接种于96孔细胞培养板。培养24h后，进行给药。对于两种细胞的四个平行的96孔板，C17的浓度依次为0、1、4、10μmol/L,每1个96孔板中，SN的浓度均设置为0、1、2、5μmol/L，每组设6个平行孔。继续孵育48h。用SRB法测定各孔在540nm下的吸光度。采用文献报道的方法计算协同指数CI(combination index,CI)的大小。按照公式3.1计算联合给药组的理论吸光度，实测吸光度与理论值的比值即为协同指数(公式2.2)。CI值小于、等于和大于1，分别表示C17和SN具有协同、加和和拮抗作用。
结果显示(参见图3)：对于SW1990细胞(图3A、C)和PANC-1细胞(图3B、D)，C17在较高剂量时显著增强了SN对癌细胞的抑制作用，C17为10μmol/L时两药联用后协同指数(CI)小于1，说明两药联用具有协同增效作用。
实施例4
C2和C17对人胰腺癌细胞体外集落形成的作用
本实施探究了C2和C17对人胰腺癌细胞在体外集落形成能力的影响。
取对数生长期的SW1990细胞和PANC-1细胞，用0.25％胰酶-0.53mmol/L EDTA溶液消化、离心、重新混悬并计数。用培养基分别将SW1990细胞与PANC-1细胞混悬液稀释至2000个/mL和1500个/mL，每孔加入1mL培养基与1mL细胞混悬液于6孔板中，使每孔细胞分别为2000个和1500个。接种后的6孔板置于细胞培养箱。培养24h后，进行给药。对于SW1990细胞，配制C2的浓度为0.5μmol/L和2μmol/L的含药培养基，配制C17的浓度为0.5μmol/L和0.75μmol/L的含药培养基。对于PANC-1细胞，配制C2的浓度为0.5μmol/L和1μmol/L的含药培养基，配制C17的浓度为0.5μmol/L和1μmol/L的含药培养基。空白对照组的培养基加入等体积的DMSO，所有体系中DMSO的浓度为0.5％。
给药48h后，吸弃各孔培养基，每孔用0.5mL PBS漂洗一次，每孔加入2mL新鲜培养基，每2天换液一次。接种10天后，吸弃培养基，每孔加入0.5mL PBS漂洗一次，吸弃PBS后每孔加入1mL甲醇，室温下固定10min。吸弃甲醇，用1mL 0.5％结晶紫溶液染色10min。吸弃结晶紫溶液，用自来水冲洗6孔板以洗去未结合的染料，自然晾干。利用Amersham Imager600将6孔板拍照，并用Image Quant TL 7.0统计克隆集落形成数量，将各组进行比较。
结果显示(参见图4A、B、C、D)：C2和C17对人胰腺癌细胞SW1990和PANC-1在体外的集落形成能力均有显著影响，浓度越高，其抑制肿瘤细胞集落形成的效果越强。
实施例5
C2与SN联用对人乳腺癌细胞体外集落形成的作用
本实施探究了C2与SN联用对人乳腺癌细胞在体外集落形成能力的影响。
取对数生长期的MCF-7/Adr细胞，用0.25％胰酶-0.53mmol/L EDTA溶液消化、离心、重新混悬并计数。用培养基将分别将MCF-7/Adr细胞混悬液稀释至1000个/mL，每孔加入1mL培养基与1mL细胞混悬液于6孔板中，使每孔细胞为1000个。接种后的6孔板置于细胞培养箱。培养24h后，进行给药。给药组设置如下：C2 2μmol/L，SN 0.5μmol/L，C2 2μmol/L+SN0.5μmol/L。空白对照组的培养基加入等体积的DMSO，所有体系中DMSO的浓度为0.5％。
给药48h后，吸弃各孔培养基，每孔用0.5mL PBS漂洗一次，每孔加入2mL新鲜培养基，每2天换液一次。接种10天后，吸弃培养基，每孔加入0.5mL PBS漂洗一次，吸弃PBS后每孔加入1mL甲醇，室温下固定10min。吸弃甲醇，用1mL 0.5％结晶紫溶液染色10min。吸弃结晶紫溶液，用自来水冲洗6孔板以洗去未结合的染料，自然晾干。利用Amersham Imager600将6孔板拍照，并用Image Quant TL 7.0统计克隆集落形成数量，将各组进行比较。
结果显示(参见图5)：SN 0.5μmol/L对人乳腺癌细胞MCF-7/Adr在体外的集落形成能力没有显著影响，但C2 2μmol/L与SN 0.5μmol/L联用能显著降低肿瘤细胞的集落形成能力。
实施例6
C2和C17对人胰腺癌干细胞比例的影响
取对数生长期的PANC-1细胞，用0.25％胰酶-0.53mmol/L EDTA溶液消化、离心、重新混悬并计数。用培养基将PANC-1细胞混悬液稀释至6×105个/mL，每瓶加入5mL培养基与1mL细胞混悬液于25cm2细胞培养瓶中，使每瓶细胞为6×105个。接种后的培养瓶置于细胞培养箱。培养24h后，进行给药。C2和C17给药组设置如下：DMSO，C2 2μmol/L，C2 4μmol/L，C172μmol/L，C17 4μmol/L，所有体系中DMSO的浓度为1％。
给药48h后，将细胞消化为单细胞悬液，在300×g下离心7min，弃去上清液，加入10mL在4℃冰箱中预冷的PBS重悬细胞，在300×g下离心7min，弃去上清液，加入1mL平衡至室温的ALDH缓冲液重悬细胞。用台盼蓝染色法对活细胞计数。用ALDH缓冲液将细胞稀释至1×106个/mL。每个样品分别取0.5mL细胞悬液于2个2mL离心管中，分别记为该样品的对照管和检测管。加入5μL 1.5mmol/L的DEAB(二乙氨基苯甲醛，针对ALDH的特异性抑制剂，用于背景荧光的对照)储备液于对照管中。分别加入2.5μL活化的ALDH底物于对照管和检测管中，立即混合均匀。将各对照管和检测管置于37℃水浴中孵育45min。在4℃300×g下离心5min，弃去上清液，加入0.5mL在冰上中预冷的ALDH缓冲液重悬细胞。过200目细胞筛，于流式细胞仪上进样检测。
结果显示(参见图6)：C2和C17均可降低PANC-1细胞中肿瘤干细胞的比例，浓度越高，其抑制肿瘤干细胞比例的效果越强。
实施例7
SN和C2联用对体内胰腺癌移植瘤模型中肿瘤生长的抑制作用
取对数生长期的SW1990细胞，经过0.25％胰酶-0.53mmol/L EDTA溶液消化制备成单细胞悬液，1,000rpm离心5min，弃掉上清液，加入少量无血清1640培养基将细胞重新吹打混匀并计数，按照计数结果将细胞密度用无血清1640调整为1.75×107个/mL。在无菌条件下将稀释的细胞悬液接种于5周龄雌性nu/nu裸鼠右侧腋下，每只注射0.2mL(约含有3.5×106个细胞),观察接种情况。用游标卡尺测量肿瘤的长径(Dmax)和短径(Dmin)，计算肿瘤体积V(V＝Dmax×Dmin2/2)。
接种后，肿瘤生长到50～100mm3时将小鼠随机分为5组，每组5只。每组的给药方案为：(1)空白对照组：每天灌胃0,2ml 1,2-丙二醇溶液；(2)GEM组：每三日尾静脉注射0.1mL含GEM的生理盐水，GEM给药剂量为15mg/kg；(3)SN组：每天灌胃0.2ml SN的1，2-丙二醇溶液，给药剂量为10mg/kg；(4)C2组：每天灌胃0.2ml C2的1，2-丙二醇溶液，给药剂量为100mg/kg；(5)联合给药组：每天灌胃0.1ml SN的1，2-丙二醇溶液及0.1mL C2的1，2-丙二醇溶液，SN的给药剂量为10mg/kg，C2的给药剂量为100mg/kg。其中，空白对照组为隐形对照组，GEM为吉西他滨，为阳性对照组。
给药第0天开始，每隔一天测量动物的肿瘤大小及体重，观察动物的生存状态，是否出现不良反应。给药28天后，小鼠眼眶采出全血20μL，迅速加入2mL稀释液中，轻微震荡混合均匀后上机测定血常规。处死动物，将小鼠解剖，取出肿瘤，按照组别摆放后拍照，取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏，浸泡于生理盐水中，用滤纸吸干后称重，计算动物个脏器的脏器指数。计算公式为：
结果显示(图7)：C2单用对肿瘤体积并没有显著的抑制作用，但C2和SN联用能显著降低肿瘤大小且药效稍优于阳性对照组GEM(图7A、B)，给药期间裸鼠体重无显著变化(图7C)，主要脏器无明显损伤(图7D)，业务明显的血液毒性(图7E)。以上结果表明，C2可以显著增加SN对人胰腺癌细胞接种的异种移植瘤的肿瘤抑制作用，C2与SN联用安全性良好。
实施例8
SN和C2联用对体内胰腺癌人源移植瘤模型中肿瘤生长的抑制作用
从临床患者体内通过手术切除得到的胰腺癌组织，取出一部分将其切成约2mm×2mm×3mm的小块，用灭菌的骨穿针将其注入约6周龄的NOD/SCID小鼠右侧腹部皮下，称为第一代人源异种移植瘤(Patient-derived xenograft,PDX)模型鼠(F1)；至肿瘤生长至约500mm3时，处死小鼠并迅速取出肿瘤，将一部分置于冻存管，加入含10％DMSO的FBS，置于液氮中冻存；另一部分肿瘤切成2mm×2mm×3mm的小块，按照上述方法接种至NOD/SCID小鼠皮下，称为第二代PDX模型鼠(F2)，以此类推。本实验所用的PDX模型鼠为第三代(F3)。
第三代接种后，肿瘤生长到80～100mm3时将小鼠随机分为4组，每组5只。每组的给药方案分别为：(1)空白对照组：每天灌胃0,2ml 1,2-丙二醇溶液；(2)SN组：每天灌胃0.2mlSN的1，2-丙二醇溶液，给药剂量为10mg/kg；(3)C2组：每天灌胃0.2ml C2的1，2-丙二醇溶液，给药剂量为100mg/kg；(4)联合给药组：每天灌胃0.1ml SN的1，2-丙二醇溶液及0.1mLC2的1，2-丙二醇溶液，SN的给药剂量为10mg/kg，C2的给药剂量为100mg/kg。
给药第0天开始，每隔一天测量动物的肿瘤大小及体重，观察动物的生存状态，是否出现不良反应。给药28天后，小鼠眼眶采出全血20μL，迅速加入2mL稀释液中，轻微震荡混合均匀后上机测定血常规。处死动物，将小鼠解剖，取出肿瘤，安祖摆放后拍照，取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏，浸泡于生理盐水中，用滤纸吸干后称重，计算动物个脏器的脏器指数。
结果显示(参见图8)：C2单用对肿瘤体积并没有显著的抑制作用，但C2和SN联用能显著降低肿瘤大小(图8A、B)，给药期间裸鼠体重无显著变化(图8C)，主要脏器无明显损伤(图8D)且没有明显的血液毒性(图8E)。以上结果表明，C2可以显著增加SN对人源组织接种的异种移植瘤的肿瘤抑制作用，C2与SN联用安全性良好。
讨论：从体外结果可以看出，C2，C17与SN联用可以显著增加SN对肿瘤细胞生长的抑制作用，C2，C17可以显著降低肿瘤细胞的集落形成能力以及胰腺癌干细胞的比例。在体内实验中，C2可以显著增加SN的抗肿瘤药效。在两种胰腺癌移植瘤模型中，C2与SN联用可以显著增加抗肿瘤药效，且无明显的血液毒性和***毒性，说明该联用方案有广阔的应用前景。

Claims (7)

1.一种具有协同增效作用的抗癌组合物，其特征在于，所述组合物包括有效量的至少一种VEGF/VEGFR抑制剂和含N-芳基哌嗪结构的2位取代喹唑啉类衍生物C2或C17；其中所述的VEGF/VEGFR抑制剂选自舒尼替尼、帕唑帕尼、阿西替尼、索拉非尼及其在药学上可接受的盐中的一种或几种；
其中，所述含N-芳基哌嗪结构的2位取代喹唑啉类衍生物C2或C17的结构分别为：
C2：
C17：
2.根据权利要求1所述的具有协同增效作用的抗癌组合物，其特征在于，所述的VEGF/VEGFR抑制剂为舒尼替尼或其在药学上可接受的盐。
3.根据权利要求1所述的具有协同增效作用的抗癌组合物，其特征在于，所述的癌为实体癌。
4.根据权利要求1所述的具有协同增效作用的抗癌组合物，其特征在于，所述的癌为选自乳腺癌、膀胱癌、***、结肠癌、食管癌、头颈部癌、肝癌、肺癌、黑素瘤、骨髓瘤、成神经细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、肾癌、肉瘤、皮肤癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、间皮瘤、胆管细胞癌、鼻咽癌、神经内分泌癌、或唾液腺癌中的一种或多种；
其中，所述肺癌为小细胞肺癌、非小细胞肺癌和非鳞状非小细胞肺癌中的一种或多种，所述肉瘤包括骨肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤，所述皮肤癌包括鳞状细胞癌、梭形细胞癌，所述肾癌包括晚期肾细胞癌。
5.根据权利要求1所述的具有协同增效作用的抗癌组合物，其特征在于，所述的癌为胰腺癌和乳腺癌中的一种或两种。
6.一种具有抗癌作用的药物制剂，包括权利要求1-5中任一项所述的抗癌组合物和药剂学的常规辅料，所述药物制剂的剂型为药剂学领域的常规剂型，其中不同种类的药物单独包装或共同包装，不同种类的药物为同一剂型或不同剂型。
7.权利要求1-5中任一项所述的具有协同增效作用的抗癌组合物在制备乳腺癌和胰腺癌抗癌药物中的应用。
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