KR20080098488A

KR20080098488A - Ｈｉｖ 치료

Info

Publication number: KR20080098488A
Application number: KR1020087019225A
Authority: KR
Inventors: 데이르드레 맥킨토시
Original assignee: 아임스코 리미티드
Priority date: 2006-01-06
Filing date: 2007-01-05
Publication date: 2008-11-10
Also published as: WO2007077465A3; JP2009522345A; US20140072530A1; GB0600202D0; EA015924B1; KR20140114443A; AP2008004560A0; CA2635562A1; ZA200806505B; JP5180095B2; US20120208745A1; AU2007203991A1; IL192618A0; EA200870158A1; AU2007203991B2; BRPI0706311A2; IL192618A; MX2008008768A; AP2913A; NZ569604A

Abstract

본 발명은 프로오피오멜라노코르틴(proopiomelanocortin: POMC) 및 부신 피질 자극 호르몬 방출 인자(corticotropin releasing factor: CRF) 펩티드를 이용한 HIV 치료 방법 및 의약제 제조에 상기 펩티드를 이용하는 용도뿐만 아니라 이의 산물에 관한 것이다.

Description

ＨＩＶ 치료{Treatment of HIV}

본 발명은 HIV 치료 방법, 및 HIV 치료용 의약제 제조에 POMC 및/또는 CRF 펩티드를 이용하는 용도에 관한 것이다.

인체 면역 결핍 바이러스/후천성면역결핍증(HIV/AIDS) 전염병은 전세계 2천만 명 사망의 원인이 되었고, 지금도 대략 4천만 명에게 영향을 주고있다. 이는 특히 개발도상국에 심각한 사회-경제적 충격을 준다. 지금까지, HIV 및 AIDS에 대해 유일하게 효과적인 방법은 현저하게 고활성 항바이러스 요법(highly active anti-retroviral therapy, 이하 HAART)이다. 그러나 이것은 전세계에 걸쳐서 유효하지 않고, 유독한 부작용이 있을 수 있고, 종종 치료를 필요로 하는 사람들의 대부분은 치료를 받을 능력이 없다. 그러므로 효과 있는 치료용 HIV 백신 또는 예방법에 대한 요구가 점점 극단적으로 긴급하게 되었다.

국제특허 출원 제 PCT/GB2005/050108호는 환자의 질병 범위의 치료에 부신 피질 자극 호르몬 방출 인자(corticotropin releasing factor: CRF) 및/또는 프로오피오멜라노코르틴(proopiomelanocortin: POMC) 펩티드를 이용하는 용도를 기술한 다. 치료될 수 있는 질병의 목록은 국제특허 출원 제 PCT/GB2005/050108호에서 참조할 수 있다. 염소 혈청 산물의 제조는 국제특허 출원 제 WO03/004049호 및 제 WO03/064472호에서 기술된다; 본 발명자들은 지금 상기 혈청 산물이 본 발명에서 사용될 CRF 및 POMC 펩티드의 유용한 출처가 될 수 있다고 생각한다.

본 발명자들은 CRF 및/또는 POMC 펩티드가 HIV 치료, 및 특히 환자의 CD4+ 및 CD8 세포수를 증가 및/또는 바이러스 부하의 감소에 유용한 것을 발견하였다.

CRF는 시상 하부에서 생성되는 펩티드로, 스트레스 반응에 포함되는 것으로 생각된다. 인간 CRF는 OMIM(online mendelian inheritance in man, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/에서 접속가능)의 엔트리 122560에서 상세히 기술된다. 또한 인간 CRF의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열도 알려져있고, GENBANK 접근번호는 BC011031이다. 인간 CRF의 서열 및 크기 데이터의 지식은 숙련자가 염소 CRF를 포함하는 비-인간 CRF에 대한 동등한 정보를 결정하는 것을 가능하게 할 것이다. 또한 CRF는 부신 피질 자극 호르몬 분비 촉진 호르몬(corticotropin releasing hormone; CRH)을 일컫는다.

"CRF 펩티드"는 상응하는 서열, 구조, 또는 기능을 갖는 모든 펩티드를 의미한다. 상기 참조된 GENBANK 엔트리에서 인간 CRF에 대한 상기 기준 뉴클레오티드 및/또는 아미노산 서열은, 상기 펩티드의 구조 또는 기능에 영향을 주지 않는 정도 까지 변화될 수 있는 것은, 숙련자에게 명백할 것이다. 특히 대립 형질 변이 및 기능적인 돌연변이체는 상기 정의에 포함된다. 돌연변이체는 보존적인 아미노산 치환; 및 CRF의 단편 및 파생체를 포함할 것이다.

환자에 CRF의 투여는 프로오피오멜라노코르틴(proopiomelanocortin: POMC) 및 이와 관련된 성분 펩티드의 생성을 자극하는 내인성 CRF의 생성을 자극하는 것으로 생각된다.

POMC는 뇌하수체(뿐만 아니라 다수의 다른 기관, 흑색종과 같은 특정 종양 및 정상 피부 세포)에서 생성한, 숙주에서 많은 효과를 나타내는 부신피질 호르몬 세트의 전구체 펩티드(프로호르몬)이다. POMC는 알파, 베타, 및 감마 멜라닌 세포 자극호르몬(melanocyte stimulating hormone; MSH); 부신피질자극호르몬(adrenocorticotrophin; ACTH); 베타 및 감마 리포트로핀(lipotropin; LPH); 및 베타 엔돌핀의 전구체이다. 상기 호르몬 모두는 단일의 큰 전구체인 POMC로부터 쪼개져서, 본 명세서에서 "POMC 산물"로 불린다.

인간 POMC는 OMIM(online mendelian inheritance in man, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/에서 접속가능)의 엔트리 176830에서 상세히 기술된다. 또한 인간 POMC의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열도 알려져있고, GENBANK 접근번호는 BC065832이다. 인간 POMC는 31 kDa 분자량의 글라이코실화한 단백질 전 구체이다.

"POMC 펩티드"는 상응하는 서열, 구조, 또는 기능을 갖는 모든 펩티드를 의미한다. 상기 참조된 GENBANK 엔트리에서 인간 POMC에 대한 상기 기준 뉴클레오티드 및/또는 아미노산 서열은, 상기 펩티드의 구조 또는 기능에 영향을 주지 않는 정도까지 변화될 수 있는 것은, 숙련자에게 명백할 것이다. 특히 대립 형질 변이 및 기능적인 돌연변이체는 상기 정의에 포함된다. 돌연변이체는 보존적인 아미노산의 치환을 포함할 것이다. 본 명세서에서 "POMC 펩티드"는 MSH, ACTH 중 적어도 하나의 형태, LPH, β엔돌핀, met-엔케팔린(enkephalin) 및 leu-엔케팔린 중 적어도 하나의 형태; 및 바람직하게는 α, β, 및 γ MSH 모두; ACTH; β 및 γ LPH; 및 β엔돌핀, met-엔케팔린 및 leu-엔케팔린에 대한 전구체로 작용하는 모든 펩티드를 나타낸다.

발명의 요약

본 발명의 첫번째 측면에 따라, 환자에게 부신 피질 자극 호르몬 방출 인자(corticotropin releasing factor: CRF) 펩티드를 투여하는 단계를 포함하는 HIV 치료 방법을 제공한다.

상기 치료법은 하기 효과들 중 하나 이상을 얻기 위해 사용될 것이다: 바이러스 부하의 감소; CD4 세포의 증가; 또는 CD8 세포의 증가.

본 발명자들은 상기 치료법이 인간 환자가 HIV 및 AIDS에 저항하도록 성공적으로 사용될 수 있다고 생각한다. 이론에 제한되지 않고, 본 발명자들은 상기 치료법이 바이러스 복제 및 확산에 필요한 과민성 면역반응 수준의 억제에 의해 신체에서 바이러스가 퍼지는 것을 제한 및 통제할 것으로 생각한다. 또한, 바이러스 복제 및 확산을 유지하고 자극하는 전-염증성 사이토카인의 필연적인 생성 및 2차감염(opportunistic infection)에 의해 유도된 염증을 조절할 것이다. HIV 환자의 바이러스 부하를 감소시키기 때문에, 혈액 내 CD4 및 CD8의 수를 증가시키고, 성욕을 향상시키고, 식욕을 자극하고, 및 HIV / AIDS 환자의 생명의 질을 현저히 향상시킨다.

상기 CRF는 비-인간 CRF: 편리하게는 유제 동물의 CRF; 및 가장 바람직하게는 염소 CRF일 수 있다. 특히 염소가 출혈 또는 면역반응과 같은 생리적인 스트레스에 의해 자극될 때, 염소 혈청이 CRF를 함유하는 것이 의외로 확인되었다. 이것은 본 발명의 약학적 조성물을 위한 CRF의 공급을 편리하게 한다. 또한 CRF가 환자에게서 자립 효력이 있을 수 있다는 것은, CRF의 초기 양의 투여가 환자에게서 CRF의 내인성 생성을 유도하고, 따라서 CRF의 저 수준의 초기 투여는 환자에게 POMC 펩티드 수준의 증가를 포함하는 현저한 효과를 가질 수 있을 것으로 생각된다. 물론 염소 이외의 동물에게서 수득한, 즉 다른 출처의 펩티드 또는 재조합 펩티드도 사용될 수 있다.

본 발명에서 사용되는 펩티드는 경구 또는 비경구로 투여될 것이다. 비경구 투여 방법은 국소, 동맥, 근육내, 피하, 골수강내, 척수강, 뇌실내, 정맥, 복강내, 또는 비내 투여 방법을 포함한다. 유효 성분 이외에, 투여된 조성물은 약학적 투여방법에 적합한 제조방법에 따라, 활성 화합물의 가공을 쉽게 하는 부형제 및 다른 성분을 포함하는 약학적으로 허용 가능한 운반체를 포함할 것이다.

경구 투여용 약학적 조성물은 당해 기술에 알려진 약학적으로 허용 가능한 운반체를 이용하여 경구 투여에 적당한 조제로 제형 될 수 있다. 상기 운반체는 정제, 환약, 당의정, 캡슐, 액제, 젤, 시럽, 슬러리, 현탁액 및 개체가 섭취하기에 적합한 형태로 조성물을 제형 하는 것을 가능하게 한다.

경구 투여용 약학적 제조는 고형 부형제와 활성 화합물을 조합하고, 정제 또는 당의정 중핵을 수득하고자 하는 경우, 적합한 추가의 화합물을 추가한 후에 선택적으로 결과 혼합물을 분쇄, 및 과립 혼합물 가공을 통해 수득 될 수 있다. 적합한 부형제로는 유당, 자당, 만니톨, 소르비톨을 포함하는 설탕과 같은 탄수화물 또는 단백질 충전물; 옥수수, 밀, 쌀, 감자, 또는 다른 식물의 전분; 메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 또는 카르복시메틸셀룰로오스나트륨과 같은 셀룰로오스; 및 아라비아 고무 및 트래거캔스 고무를 포함하는 고무질; 뿐만 아니라, 젤라틴 및 콜라겐과 같은 단백질을 포함한다. 필요한 경우, 가교 결합된 폴리비닐 피롤리돈, 한천, 알긴산, 또는 이의 염과 같은 붕해제 또는 용해제가 첨가될 수 있다.

당의정 중핵은 농축 설탕 용액과 같은 것으로 적절히 코팅되어 제공될 수 있고, 또한 상기 농축 설탕 용액은 아라비아 고무, 활석, 폴리비닐 피롤리돈, 카보폴 젤, 폴리에틸렌 글리콜, 이산화티탄, 래커 용액 및 적당한 유기 용매 또는 용매 혼합액을 포함할 수 있다. 염료 또는 안료는 제품 확인 또는 활성 화합물의 성질을 나타내기 위해 정제 또는 당의정 코팅제에 추가될 수 있다.

경구 투여용 약학적 제법은 젤라틴으로 만든 압입 캡슐뿐만 아니라, 글리세롤 또는 소르비톨과 같은 코팅제 및 젤라틴으로 만든 연질, 포장 캡슐을 포함한다. 압입 캡슐은 유당 또는 전분과 같은 충전물 또는 결합제, 활석 또는 마그네슘 스테아르산염과 같은 윤활제, 및 선택적으로 안정제와 혼합된 활성성분을 포함할 수 있다. 연질 캅셀에서, 상기 활성 성분은 안정제의 유무에 관계없이 지방유와 같은 적절한 액체, 파라핀 액체, 또는 폴리에틸렌 글리콜 액체에, 용해되거나 현탁 될 수 있다.

비경구 투여용 약학적 제형은 활성 화합물의 수용성 용액을 포함한다. 주사를 위해, 본 발명의 상기 약학적 조성물은 수용성 용액, 바람직하게는 Hanks 용액, 링거 용액 또는 생리적 완충 식염수와 같은 생리적으로 호환가능한 완충용액에 제형 될 수 있다. 수용성 현탁액 주사는 카르복시메틸셀룰로오스나트륨, 소르비톨 또는 덱스트란과 같은 현탁액의 점도를 증가시키는 물질을 포함할 수 있다. 추가로, 활성 화합물의 현탁액은 적당한 유성 주사 현탁액으로 제조될 수 있다. 적합한 친유성 용매 또는 용액에는 참기름과 같은 지방유, 또는 에틸 올레산염 또는 트리글리세라이드와 같은 합성 지방산 에스테르 또는 리포솜을 포함한다. 선택적으로, 상기 현탁액은 고농도 용액으로 제조하는 것을 가능하게 하는 상기 화합물의 용해성을 증가시키는 적절한 안정제 또는 물질을 포함할 수 있다.

국소 또는 비강 투여를 위해, 침투될 특정 경계에 적합한 침투제를 제형에 이용할 수 있을 것이다.

본 발명에서 사용을 위한 약학적 조성물은 당해 기술에서 알려진 표준 제조 절차에 따라 실질적으로 제조될 수 있다.

본 발명에서 사용을 위한 펩티드 또는 조성물은 동결건조될 수 있다. 이는 제품의 저장 기간 및 안정성을 개선하고, 수송성을 향상시킨다. 이는 온난한 기후에서의 사용, 및 냉각 장치의 이용이 손쉽지 않은 곳에서 특히 유리하다. 동결건조한 제품은 투여 전에 재구성될 수 있다.

상기 방법은 추가로 하나 이상의 펩티드 조절 또는 방출 인자를 투여하는 단계를 포함할 수 있고, 이는 환자의 다양한 세포에 의하여, 추가의 펩티드 방출의 캐스케이드를 유도할 수 있다. 이러한 추가의 인자들은 바람직하게는 CRF와 같은 출처, 특히 염소 혈청에서 유래한다. 적절한 인자들로는 다른 것들 중에서 α-HLA, TGF-β, 및 IL-10을 포함한다.

바람직한 구체화에서, 상기 방법은 하나 이상의 바소프레신, 베타 엔돌핀, 및 엔케팔린을 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 특정 구체화에서, 상기 방법은 CRF 결합 단백질인, CRF-BP를 투여하는 단계를 포함할 것이다. 이것은 CRF와 결합하고, 환자에게서 연속적인 CRF의 방출을 위한 저장소로 작동할 것이다.

상기 방법은 추가로, POMC 펩티드 또는 POMC 산물을 투여하는 단계를 포함할 것이다; 특정 POMC 산물은 내인성 POMC가 생성될 수 있기 전에, 원하는 반응을 수득하기 위해 또는 추가의 생성을 자극하기 위해, 환자에게 투여할 때에 유용할 수 있다.

본 발명의 추가의 측면에서, 환자에게 POMC 펩티드 및/또는 POMC 산물을 투여하는 단계를 포함하는 HIV 치료 방법을 제공한다.

바람직하게는 상기 POMC는 비-인간 POMC; 편리하게는 유제 동물의 POMC; 및 가장 바람직하게는 염소 POMC이다. 비록 POMC가 뇌하수체에서 생성되고, 따라서 혈청에 적어도 유의한 수준으로 존재할 것으로 예상되지 않았더라도, 특히 염소가 출혈 또는 면역반응과 같은 생리적인 스트레스에 의해 자극될 때, 염소 혈청이 POMC, POMC-관련 펩티드, 및 POMC 캐스케이드 관련 분자를 함유하는 것이 의외로 확인되었다. 이것은 본 발명의 약학적 조성물을 위한 POMC의 공급을 편리하게 한다. 또한 POMC가 환자에게서 자립 효력이 있을 수 있다는 것은, CRF의 초기 양의 투여가 환자에게서 CRF의 내인성 생성을 유도하고; 따라서 CRF의 저 수준의 초기 투여는 환자에게 현저한 효과를 줄 수 있을 것으로 생각된다. CRF 펩티드와 마찬가지로, 염소 이외의 출처의 POMC 펩티드는 물론 재조합 POMC를 포함해서 이용될 수 있다.

개체에 POMC 및 이와 관련된 분자의 투여시, 개체에 손쉽게 이용될 수 있는 형태로 하나 이상의 POMC의 산물을 제공하기 위하여 펩티드가 단백질 분해되고; 또한 시상하부-뇌하수체-부신(hypothalamo-pituitary-adrenal; HPA) 축을 자극하는 분자 캐스케이드의 유도가 있다고 생각된다.

본 발명의 추가의 측면에 따라, 알파, 베타, 및 감마 멜라닌 세포 자극호르몬(melanocyte stimulating hormone; MSH); 부신피질자극호르몬(adrenocorticotrophin; ACTH); 베타 및 감마 리포트로핀(lipotropin; LPH); 및 베타 엔돌핀 중 두 개 이상을 투여하는 단계를 포함하는 HIV 치료 방법을 제공한다. POMC 투여시 단백질분해와 유사하게, POMC에서 유래한 개별 호르몬의 2개 이상의 투여에 의하여 유사한 효과를 달성하는 것이 가능할 수 있다. 상술한 호르몬은 개별 펩티드, 또는 하나 이상의 전구체 분자(예를 들면, POMC의 부분적인 손상 생성물질)로 제공될 수 있다. 바람직하게는 3, 4, 5, 6 또는 7개의 호르몬이 (선택적으로 CRF와 함께) 상기 분자의 연속된 생성을 위한 캐스케이드를 유도하는 약학적 조성물에 포함된다. 상기 다양한 성분들은 하나 이상의 상기 성분에 결합하는 하나 이상의 운반체 분자와 조합하여 제공될 수 있고, 그래서 상기 성분의 방출용 저장소 또는 저장기로 작용한다. 또한 운반체 분자는 POMC 및 이와 관련된 펩티드와 조합하여 사용될 수 있다.

POMC 또는 CRF 펩티드의 최적 투여량은 결정되는 것이 아니다; 그러나 개체에 0.01 및 10 ㎎/㎏ 사이; 더욱 바람직하게는 0.01 및 5 ㎎/㎏ 사이, 0.025 및 2 ㎎/㎏ 사이 및 가장 바람직하게는 0.05 및 1 ㎎/㎏ 사이의 투여량으로 상기 펩티드를 투여하는 것이 적합하다.

정확한 투여량은 질병의 특성 및 심각성뿐만 아니라 환자의 나이, 성별 및 체중, 제형 및 투여 방법에 따라 다를 수 있다. 식이, 투여 시간, 환자 상태, 약의 조성, 및 반응 감수성과 같은 다른 인자들이 고려될 수 있다. 효과적인 치료 방식은 치료에 책임 있는 임상의에 의해 결정될 수 있다. 한 번 이상 투여될 수 있고, 전형적으로 적어도 3회, 5회 또는 그 이상의 일련의 투여시 더욱 이롭다. 투여를 반복하는 것이 상기 조성물의 유리한 효과를 유지하는 데에 바람직할 것이다.

상기 치료는 비록 사용될 대체 경로로 근육내 또는 병변내 주사, 경구, 에어로졸, 비경구, 또는 국부 주사를 포함하더라도, 어떠한 효과적인 경로에 의해, 바람직하게는 피하 주사에 의해 투여될 수 있다.

상기 치료는 비록 다른 제형이 사용될 수 있을지라도, 바람직하게는 액제로 투여된다. 상기 액제는 동결건조 제조에 의해 재구성될 수 있다. 예를 들면, 상기 치료는 적절한 약학적으로 허용 가능한 운반체와 혼합될 수 있고, 경구, 국부 또는 비경구 투여에 적합한 조성물로 고형(정제, 환약, 캡슐, 과립 등)으로 제형 될 수 있다.

또한, 본 발명은 HIV 치료용 의약제의 제조에 CRF를 이용하는 용도를 제공한다. 또한, HIV의 치료용 의약제의 제조에 POMC를 이용하는 용도를 제공한다. 이것들은 상기 논의된 여러 가지 다른 성분과 조합하여 투여되는 것이 바람직하더라도, CRF 또는 POMC는 분리, 정제된 CRF 또는 POMC일 것이다. 특히, 생물활성 운반 단백질 및 바소프레신이 이용될 것이다.

본 발명의 상기 및 다른 측면은 포함된 도면에 관하여서만 예로 기술될 것이다:

도 1 내지 도 4는 혈청 성분의 트립신 분해 산물의 질량 분석을 나타낸다; 및,

도 5 내지 도 9는 상기 조성물의 치료에 따라 환자의 염증 프로파일이 변화하는 것의 증거를 나타낸다.

국제특허 출원 제WO03/004049호 및 제WO03/064472호에서 염소 혈청 조성물의 생성을 기술한다. 상기 생성 방법의 요약을 하기에 기술한다.

혈청 조성물의 제조

10⁹/㎖ 바이러스성 입자의 농도로 HIV-3b의 근육내 주사를 이용하여, 정상적인 상업적 상등액에 현탁된 분해된 HIV-3b 바이러스로 근육내 주사하여 염소를 접종하였다. 상기 바이러스는 사전에 60℃에서 30분 동안 열처리로 사멸하였다. 최적화된 절차에 따라, 4주 동안 매주 마다 상기 염소에 주사하였고, 6주째에 시료를 얻기 위해, 상기 동물의 혈액을 채취하였다.

멸균 조건하에서 상기 염소로부터 대략 400 cc의 혈액을 채취하였다. 상기 동물은 일단 혈액이 보충되면, 일반적으로 10 내지 14일 내에 혈액을 다시 채취될 수 있다. 전-출혈 방식은 혈청의 활성 성분의 생성을 자극하는 데에 유용할 것이다. 모든 연속적인 제조 단계는 특별한 다른 규정이 없는 한 바람직하게는 4℃에서 실행되었다. 상기 혈액은 혈청을 분리하기 위해 원심분리하였고, 상기 혈청은 큰 혈괴 및 미립자 물질을 제거하기 위하여 걸러 담아졌다. 이후 상기 혈청은 과포화 염화 황산염(4℃에서 47% 용액)으로 처리하여, 항체 및 다른 물질들을 침전하였다. 상기 결과 용액은 Beckman J6M/E 원심분리기에서 45분 동안 3500 rpm으로 원심분리한 후, 상기 상등 액체를 제거하였다. 상기 침전된 면역 글로불린 및 다른 고형물은 상기 침전물을 충분히 재용해하기 위해, PBS(phosphate buffered saline) 완충용액에 재현탁 하였다.

상기 용액은 4℃에서 10,000 달톤의 분자량 컷-오프를 가진 투석기를 이용하여 PBS 완충용액으로 투석되었다. 투석 후, 상기 산물은 0.2 마이크론 여과를 통해서 멸균 용기로 걸러졌고, 단백질을 4 내지 5 ㎎/㎖의 농도로 보정하였다. 상기 용액은 1 ㎖씩 바이알에 담았고, 사용 전까지 -22℃에 보관하였다.

혈청 조성물의 분석

국제특허 출원 제 PCT/GB2005/050108호는 상기 방법으로 제조한 상기 혈청 조성물이 POMC 및 CRF 펩티드를 포함한다고 보고하였고, 상기 혈청의 효력에 상기 펩티드의 활성 역할을 제안하였다. 상기 혈청 분석의 요약은 하기에 기재한다.

상기 조성물의 시료를 젤에서 크기별로 분획하였고, β엔돌핀에 대한 항체를 이용하여 웨스턴 브랏을 수행하였다. 비록 나타난 분자량이 대략 31 kDa이었고, β엔돌핀의 기대 크기보다 훨씬 컸지만, 강한 신호가 검출되었고, β엔돌핀의 존재를 지시하였다. 이는 β엔돌핀이 더 큰 펩티드(POMC의 그것과 일관된 크기)의 일부로 시료 내에 존재하는 것을 제안한다.

또한 본 발명자들은 상기 조성물에 질량 분석을 수행하였고, 적어도 두 개의 POMC-유래 펩티드; β엔돌핀 및 부신 피질 자극 호르몬을 검출하였다. 또한 CRH-BP(corticotropin releasing hormone binding protein;부신피질자극호르몬분비촉진호르몬 결합 단백질)를 확인하였다.

도 1 내지 4

Thermofinnegan LCQ 질량 분석법에 의해 상기 산물에서 POMC 펩티드 및 CRF-BP가 확인되었다. CRF는 주로 하수체전엽에 있는 ACTH의 합성 및 분비를 조절한다. CRF와 CRF-BP 이외에 POMC 및/또는 그것의 성분 펩티드의 투여는 POMC 펩티드의 전신 및 지속적으로 높은 농도의 생성을 강화하는 캐스케이드 효과를 개시하는 것으로 생각된다. CRF-BP에는 CRF를 위한 저장소로 작동하는 기능이 있다.

도 1 내지 도 4는 SDS-PAGE에 의해 오염된 단백질에서 분리된 산물의 트립신 분해물의 질량 분석에서 얻은 결과를 나타낸다. 상기에서 언급한 바와 같이, 상기 분자의 일부는 POMC 캐스케이드의 유도 물질 및 조절제이다. 더욱 집중된 분석(예를 들면 펩티드 분획, 면역침전 및 농축)을 사용한 추가의 조사는 더 많은 펩티드의 존재를 나타낼 것이다. 도 1은 POMC-유래 부신 피질 자극 호르몬의 존재를 지시하고, 도 2는 CRF-BP, 도 3은 프로엔케팔린 A, 및 도 4는 프로엔케팔린 B의 존재를 지시한다. CRF-BP의 존재는 상기 생성물질이 어떤 CRF를 포함하는지를 제안하고, 또한 POMC 및 관련 펩티드가 분명히 존재하는 것을 제안한다.

또한, 본 발명자들은 환자 자신의 혈청으로 상기 혈청 조성물 처리의 효과를 조사하였다. 그 효과를 하기에 기술한다.

치료된 환자에게서 전-염증성 TH -1 프로파일로부터 항-염증성 TH -2 사이토카인 프로파일로 전환된 것에 대한 증거

도 5는 기술된 방법으로 제조된 염소 혈청 산물로 치료 전후에 두 그룹의 환자(건강한 지원자)의 혈청에 있는 TGF-β의 수준을 나타낸다. 두 그룹의 환자들(각 그룹당 n=3)은 생성된 TGF-β의 농도에 따라 다른 반응을 나타내었지만, 모든 환자에서 치료에 대하여 혈청 수준의 증가를 나타내었다(pre sera = 치료 전 환자의 혈청 수준; post 2^nd 및 post 5^th = 투여 2일 및 5일 후). 상기 데이터는 치료에 의해 항-염증성 사이토카인 TGF-β의 농도의 증가가 유도되는 것을 나타낸다.

도 6은 치료 전(pre-sera) 및 후에 하나의 환자 그룹의 혈청에서 IL-4의 수준을 나타낸다. 치료 후(post 2^nd)에 IL-4의 수준이 환자의 혈청 (n=5)에서 현저하게 증가된 것을 볼 수 있다. 그러나 투여 5일째에 모든 환자에게서 IL-4의 수준이 떨어졌으나, 치료 전에 나타난 것보다 높게 유지되었다. IL-4는 TH-1 세포로부터 전-염증성 사이토카인의 생성을 줄이는 것으로 알려져 있다. 모든 환자에게서 나타낸 농도의 일관된 변화는 TH-1을 TH-2로 변화에 있어서 IL-4의 역할과 일관될 것이다.

도 7은 치료 전후에 하나의 그룹의 환자의 혈청에서 IL-6 수준을 나타낸다. 치료 후(post 2^nd 및 post 5^th), IL-6 수준은 환자의 혈청(n=4)에서 감소된 것을 볼 수 있다.

도 8은 치료 전후에 하나의 그룹의 환자의 혈청에서 IFN-γ 수준을 나타낸다. 치료 후(post 2^nd 및 post 5^th), IFN-γ 수준은 환자의 혈청에서 감소된 것을 볼 수 있다.

도 9는 인간 말초 혈구 세포(peripheral blood cells; PBMCs)의 처리에 의해 단핵세포의 일부에서 항-염증성 사이토카인 IL-10의 생성을 유도하는 것을 나타낸다. T 및 B 림프구 및 단핵세포는 인간 지원자로부터 수득한 PBMC에서 분리하였다. 모든 유형의 세포는 16시간 동안 동일한 복용량의 생성물질로 치료하였고, ELISA를 이용하여 이것들의 상등액의 IL-10 함량을 분석하였다. T 세포 집단에 의해 생성된 IL-10 수준은 치료에 의해 영향을 받지 않았고, 오직 B 세포에서 IL-10 농도의 작은 증가가 유도되었음을 볼 수 있다. 그러나 치료에 의해 단핵구 집단에서 IL-10의 현저한 증가가 유도되었다. 모든 결정은 세 번씩 반복한 +/- 표준 편차에서 수행되었다. 상기 데이터는 적어도 3개의 분리된 실험을 대표한다.

요약 및 결론

본 발명자들은 상기 및 국제특허 출원 제 PCT/GB2005/050108호에서, 기술된 바와 같은 상기 염소 혈청 산물이 POMC 펩티드 및 산물, 및 CRF 펩티드를 포함하는 것을 보여준다. 또한 본 발명자들은 상기 혈청 산물의 투여가 환자의 염증성 프로파일의 변화를 유도하는 것을 보여준다.

국제특허 출원 제 WO03/004049호는 기술된 대로 제조된 염소 혈청 산물의 HIV 환자의 치료를 위한 용도를 기술한다. HIV에 대한 혈청의 유리한 결과는 항-FAS 및 항-HLA 분자의 존재로부터 유래하는 것으로 상기 문헌에서 건의되고; POMC 또는 CRF 펩티드가 존재할 수 있다는 것을 제안하지는 않는다. 상기 문헌은 혈청 실험에서 환자에게서 CD4 및 CD8 세포 수의 증가, 바이러스 부하의 감소, 및 P24 수치의 감소를 발견한다.

또한 국제특허 출원 제 WO02/07760호는 HIV 환자를 치료하는 동일한 염소 혈청 산물의 제조방법 및 용도를 기술한다. 상기 문헌에서 생체 외에서 SIV의 중화를 나타내는 실험적인 데이터를 보고한다. 상기 문헌의 실시예 3은 상기 기술된 것과 동일한 방법으로 염소 혈청 산물의 제조방법을 기술한다. 상기 혈청의 투여는 HIV 바이러스 부하의 감소(플라스마 ㎖ 당 HIV-1 RNA의 카피 수로 정의), 및 CD4 및 CD8 세포 수의 증가의 결과를 도출한다. 다시, 상기 특성이 POMC 또는 CRF 펩티드의 존재에서 유래할 수 있다는 제안은 없다.

국제특허 출원 제 PCT/GB2005/050108호에서의 발견, 및 염소 혈청 생성물질이 POMC 펩티드 및 산물, 및 CRF 펩티드를 포함하고, 및 상기 펩티드 및 산물은 생물학적 활성제이고, 본 명세서에 기재된 데이터로 비추어, 본 발명자들은 상기 펩티드 및 산물이 바이러스 부하의 감소, CD4 세포 수의 증가, 및 CD8 세포 수의 증가 중 어느 하나 이상의 효과를 얻기 위한, 인간 환자의 HIV 및/또는 AIDS 치료에 유용할 수 있다고 생각한다.

또한, HIV는 신경병리학의 범위 및 신경퇴행을 이끄는 중추신경계(central nervous system; CNS)의 다양한 병변을 유도하는 것으로 알려져 있다. 상기는 HIV 뇌염, HIV 백질뇌병증, 축삭 손상을 포함하고, 및 다양한 심각성의 신경원 손실과 관련된 다발성 영양장애를 확산한다. 후자는 아폽토시스 과정에서 유래한 것으로 생각된다. 상기 조건은 인식 기능의 손실 및 치매를 유발한다. 퇴행성 신경질환(PCT/G2005/050108 참조)에 대한 POMC/CRF 펩티드의 기술한 효력에 비추어, HIV/AIDS 자체뿐만 아니라 HIV/AIDS의 상기 증상을 완화하기 위하여 상기 펩티드가 이용될 수 있을 것이다.

HIV 바이러스에 감염된 사람들에서 시상하부 뇌하수체 신장(hypothalamo pituitary adrenal; HPA) 축이 기능장애인 것이 보고되어 있다. 사이토카인 네트워크의 조작에는 HIV 감염의 조절에 유리한 효력을 가질 수 있다. 염증세포의 멜라노코르틴(melanocortin) 수용체의 자극은 HIV 감염의 과정을 바꾸는 효과적인 치료 시도일 것이다. 본 명세서에서 기술된 혈청 산물에 존재하는 프로오피오멜라노코르틴-유래 펩티드는 부신 피질 자극 호르몬[adrenocorticotropic hormone; ACTH(1-39)], α-멜라닌세포자극호르몬[melanocyte-stimulating hormone; α-MSH(1-13)], 및 관련 아미노산 서열을 포함한다. 멜라노코르틴 펩티드에는 유력한 항염증/항사이토카인 활성이 있다.

인터루킨 1(interleukin 1; IL-1) 및 종양 괴사 인자(tumor necrosis factor; TNF)와 같은 사이토카인은 HIV 감염 환자에 유해할 수 있다. HIV 환자 혈액에서 IL-1 및 TNF-α의 생성에 대한 멜라노코르틴의 효력을 조사하였다. α-MSH(1-13), α-MSH(11-13), ACTH(1-24), 또는 ACTH(1-39)의 존재 여부와 관련 없이, LPS로 자극받은 전혈 시료에서 사이토카인 생성을 측정하였을 때, 농도-의존적으로 멜라로코르틴이 양쪽 사이토카인의 생성을 감소시켰다는 것을 발견하였다. 정상 말초혈구세포(peripheral blood mononuclear cells; PBMC)에서 수행된 다른 실험에서, α-MSH(1-13)에 의해 HIV 외피 당단백질 gp 120에 의해 유도된 IL-1β 및 TNF-α의 생성이 억제되는 것을 발견하였다. 상기 결과는 염증세포에서 멜라노코르틴 수용체를 자극하는 것이 HIV 복제를 촉진하는 사이토카인의 생성을 감소시키는 새로운 방법이 될 수 있을 것을 제안한다.

POMC 및 CRF 펩티드 및 산물은, 개별적으로 또는 조합하여, HPA 축을 조절할 수 있는 새로운 약학적 산물을 제공하고, 멜라노코르틴 및 멜라노코르틴 생성 조절자의 출처로서 역할을 수행한다. 특히 과민성 전-염증성 TH1 사이토카인을 항-염증성 TH2 프로파일로 전환하는 것으로 보인다. 그리하여 상기 생성 및 염증성 사이토카인의 방출은 조절된다.

HIV 감염은 다중 경로에 의한 단핵구-대식 세포의 감염에 의해 촉진된다는 생각을 지지하는 증거가 존재한다. AIDS에서 2차 감염에 의한 NF-kB의 활성화는 CCR5 수용체의 발현 및 TNF-α의 발현을 증대시키고, 상기 둘은 HIV 감염을 유지하는 것을 가능하게 한다. 또한 바이러스 부하의 감소는 감염 및/또는 염증이 생긴 조직의 치료와 관련되어 있고; 추가로 이것은 면역 활성 및 바이러스 복제 사이의 연결을 유지한다는 것을 발견하였다.

따라서, 전-염증성 사이토카인 및 대식 세포 활성화의 수준 및 조직 염증을 감소시키는 POMC/CRF 펩티드 및/또는 산물로 환자를 치료하는 것은 뇌와 같은 신체 기관으로 감염이 퍼질 가능성과 환자의 세포질 전염성을 감소시킬 것이다.

Claims

환자에게 부신 피질 자극 호르몬 방출 인자(corticotropin releasing factor: CRF) 펩티드를 투여하는 단계를 포함하는 HIV 치료 방법.
제 1항에 있어서, 하기 효과들 중 하나 이상이 달성되는 것을 특징으로 하는 방법: 바이러스 부하의 감소; CD4 세포의 증가; 및 CD8 세포의 증가.
제 1항에 있어서, 상기 CRF는 비-인간 CRF인 것을 특징으로 하는 방법.
제 3항에 있어서, 상기 CRF는 염소 CRF인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1항 내지 제 4항 중의 어느 한 항에 있어서, 추가로 하나 이상의 펩티드 조절 또는 방출 인자를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 5항에 있어서, 상기 인자는 α-HLA, TGF-β, 및 IL-10으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1항 내지 제 6항 중의 어느 한 항에 있어서, 바소프레신, 베타 엔돌핀, 및 엔케팔린 중 하나 이상을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1항 내지 제 7항 중의 어느 한 항에 있어서, CRF 결합 단백질인, CRF-BP를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1항 내지 제 8항 중의 어느 한 항에 있어서, POMC(proopiomelanocortin) 펩티드 또는 POMC 산물을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
환자에게 POMC 펩티드 및/또는 POMC 산물을 투여하는 단계를 포함하는 HIV 치료 방법.
알파, 베타, 및 감마 멜라닌 세포 자극호르몬(melanocyte stimulating hormone; MSH); 부신피질자극호르몬(adrenocorticotrophin; ACTH); 베타 및 감마 리포트로핀(lipotropin; LPH); 및 베타 엔돌핀 중 두 개 이상을 투여하는 단계를 포함하는 HIV 치료 방법.
HIV 치료용 의약제의 제조에 CRF 펩티드를 이용하는 용도.
HIV 치료용 의약제의 제조에 POMC 펩티드 및/또는 POMC 산물을 이용하는 용도.