BRPI0706311A2 - método de tratamento de hiv, e, uso de um peptìdeo - Google Patents

Abstract

MéTODO DE TRATAMENTO DE HJV, E, USO DE UM PEPTìDEO. Descrevemos métodos de tratamento de HIV, empregando-se peptídeos de proopiomelanocortina (POMC) e de fator de liberação de corticotropina (CRE) e seus produtos, bem como usos de tais peptídeos na preparação de medicamentos.

Description

"MÉTODO DE TRATAMENTO DE HIV, E, USO DE UM PEPTÍDEO"

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se a métodos de tratamento de HIVe ao uso de peptídeos POMC e/ou CRF, na preparação de medicamentos parao tratamento de HTV.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

A síndrome da imunodeficiência humana/ imunodeficiênciaadquirida (HTV/AIDS) epidêmica causou acima de 20 milhões de mortes pelomundo todo e atualmente afeta cerca de 40 milhões de pessoas. Isto tem umsério impacto sócio-econômico, particularmente em países emdesenvolvimento. Até hoje a única arma eficaz contra HIV e AIDS é aterapia, notavelmente terapia anti-retroviral notavelmente altamente ativa(HAART). Entretanto, esta não é disponível mundialmente, pode ter efeitoscolaterais tóxicos e com freqüência aqueles mais necessitados são privados detratamento. Portanto, a necessidade de uma vacina HIV terapêutica outratamento profilático eficazes tornou-se crescentemente de extrema urgência.

O Pedido de Patente Internacional PCT/GB2005/050108descreve o uso de peptídeos do fator de liberação da corticotropina (CRF)e/ou proopiomelanocortina (POMC), no tratamento de uma faixa de distúrbiosem pacientes. O leitor é reportado para a PCT/GB2005/050108, para uma listados distúrbios que podem ser tratados. A preparação de um produto de soro decabra é descrito nos pedidos de Patente Internacional W003/004049 eW003/064472; acreditamos agora que este produto de soro pode ser umafonte útil de peptídeos de CRF e POMC que podem ser usados na presenteinvenção.

Descobrimos agora que os peptídeos CRF e/ou POMC sãoúteis no tratamento de HTV e, em particular, na redução da carga viral e/ouaumento das contagens de células CD4+ e CD8 nos pacientes.

O CRF é um peptídeo produzido no hipotálamo e acredita-seestar envolvido na resposta a estresse. O CRF humano é descrito em detalhesna entrada 122560 de OMIM (herança mendeliana em homem online,acessível através de http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). A seqüência denucleotídeo e amino ácida do CRF humano é também conhecida e tem onúmero de acesso do GENBANK BCO11031. O conhecimento dos dados deseqüência e de tamanho para o CRF humano permitirá à pessoa hábildeterminar a informação equivalente para o CRF humano, incluindo CRF decabra. O CRF é também conhecido como hormônio de liberação dacorticotropina (CRH).

Por "um peptídeo CRF" pretendemos significar qualquerpeptídeo tendo uma correspondente seqüência, estrutura ou função. Seráevidente para a pessoa hábil que as seqüências de nucleotídeo e/ou aminoácidos canônicas, dadas para o CRF humano na entrada do GENBANKreferida acima, pode, ser variadas a um certo grau, sem afetar a estrutura oufunção do peptídeo. Em particular, variantes alélicas e mutantes funcionaissão incluídos dentro desta definição. Os mutantes podem incluir substituiçõesamino ácidas conservativas; e fragmentos e derivativos de CRF.

A administração do CRF a um paciente acredita-se estimular aprodução do CRF endógeno, que, por sua vez, estimula a produção daproopiomelanocortina (POMC) e seus peptídeos componentes relacionados.

A POMC é um peptídeo (pró-hormônio) produzido naglândula pituitária (bem como em numerosos outros órgãos, em certostumores tais como melanomas e em células da pele normais), que é oprecursor de um conjunto de hormônios corticotróficos, que exercemnumerosos efeitos sobre o hospedeiro. A POMC é o precursor do hormônioestimulante dos alfa, beta e gama melanócitos (MSH); A adrenocorticotrofina(ACTH); beta e gama lipotropina (LPH); e beta endorfina. Todos esteshormônios são clivados de um único grande precursor, POMC, e são denominados aqui "produtos POMC".A POMC humana é descrita em detalhes na entrada 176830 deOMIM (herança mendeliana em homem on-line, acessível através dehttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/). A seqüência de nucleotídeo e de amino ácidoda POMC humana é também conhecida e tem o número de acesso doGENBANK BC065832. A POMC humana dá origem a um precursor deproteína glicosilado, tendo um peso molecular de 31 kDa.

Por "um peptídeo POMC" pretendemos significar qualquerpeptídeo tendo uma correspondência seqüência, estrutura ou função. Seráevidente para a pessoa hábil que as seqüências de nucleotídeo e/ou aminoácido canônicas, fornecidas para POMC humana na entrada do GENBANKreferenciada acima, podem ser variadas em um certo grau, sem afetar aestrutura ou função do peptídeo.

Em particular, as variantes alélicas emutantes funcionais são incluídos dentro desta definição. Os mutantes podemincluir substituições amino ácidas conservativas. "Um peptídeo POMC",como aqui usado, refere-se a qualquer peptídeo atuando como um precursorpara pelo menos uma forma de MSH, ACTH, pelo menos uma forma de LPH,endorfina β, met-encefalina e leu-encefalina; e, preferivelmente, todos osMSH α, β e γ; ACTH; LPH β e γ; e endorfina β, met-encefalina eleuencefalina.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

De acordo com um primeiro aspecto da presente invenção, éprovido um método de tratamento de HIV compreendendo administrar umpeptídeo de fator de liberação de corticotropina (CRF) a um paciente.

O tratamento pode ser usado para obter-se um ou mais dosseguintes efeitos: uma redução da carga viral; um aumento das células CD4;ou um aumento das células CD8.

Acreditamos que o tratamento pode ser usado com sucessocontra HTV e AIDS em pacientes humanos. Sem desejarmos ficar presos ateoria, acreditamos que o tratamento limita e controla os vírus espalhados nocorpo, reduzindo os níveis da resposta imune hiperativa, necessária parareplicação e espalhamento viral. Além disso, pode controlar a inflamaçãoeliciada por infecções oportunistas e a conseqüente produção de citocinas pró-inflamatórias, que suportam e estimulam a replicação e espalhamento viral.Como tal, reduz a carga viral em pacientes com HIV, aumenta as contagensde CD4 e CD8 no sangue, melhora a libido, estimula o apetite e melhorasignificativamente a qualidade de vida dos pacientes com HIV / AIDS.

O CRF pode ser CRF não-humano; CRF convenientementeungulado; e muitíssimo preferivelmente CRF de cabra. Foisurpreendentemente identificado que o soro de cabra contém CRF,particularmente quando a cabra é estimulada por estresse fisiológico, tal comosangramento ou imunização. Este provê uma fonte conveniente para CRFpara as composições farmacêuticas da presente invenção. Também acredita-seque o CRF pode ter um efeito de auto-sustentação no paciente, pelo fato deque a administração de uma quantidade inicial de CRF conduz à produçãoendógena de CRF no paciente; assim, uma administração inicial de um baixonível de CRF pode ter um efeito significativo no paciente, incluindo umaumento nos níveis de peptídeos de POMC. Naturalmente, os peptídeosobtidos de animais que não cabras podem ser usados, como o podem osrecombinantes ou outras fontes de peptídeo.

A administração de peptídeos como usada na presente invenção pode ser realizada oral ou parenteralmente. Métodos de suprimentoparenteral incluem administração tópica, intra-arterial, intramuscular,subcutânea, intramedular, intratecal, intraventricular, intravenosa,intraperitoneal ou intranasal. Além dos ingredientes ativos, composiçõesadministradas podem compreender veículos farmaceuticamente aceitáveisadequados, compreendendo excipientes e outros componentes que facilitem oprocessamento dos compostos ativos dentro das preparações adequadas paraadministração farmacêutica.As composições farmacêuticas para administração oral podemser formuladas utilizando-se veículos farmaceuticamente aceitáveisconhecidos na arte, em dosagens adequadas para administração oral. Taisveículos possibilitam que as composições sejam formuladas como tabletes,pílulas, drágeas, cápsulas, líquidos, géis, xaropes, lamas, suspensões esimilares, adequados para ingestão pelo indivíduo.

As preparações farmacêuticas para uso oral podem ser obtidasatravés da combinação dos compostos ativos com um excipiente sólido,opcionalmente moendo-se uma mistura resultante e processando-se a misturade grânulos, após adicionar compostos adicionais adequados se desejado, paraobterem-se núcleos de tabletes ou drágeas. Excipientes adequados incluemcarboidrato ou cargas de proteína, tais como açúcares, incluindo lactose,sacarose, manitol, sorbitol; amido de milho, trigo, arroz, batata ou outrasplantas; celulose tal como metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose ou sódiocarboximetilcelulose; e gomas incluindo arábica e tragacanto; bem comoproteínas, tais como gelatina e colágeno. Se desejado, podem ser adicionadosagentes desintegrantes ou solubilizantes, tais como polivinilpirrolidonareticulada, ágar, ácido algínico ou um seu sal.

Podem ser providos núcleos de drágea com revestimentosadequados, tais como soluções de açúcar concentradas, que podem tambémconter goma arábica, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietilenoglicol, bióxido de titânio, soluções de laca, e solventes orgânicos ou misturasde solventes adequados. Matérias corantes ou pigmentos podem seradicionados aos revestimentos de tabletes ou drágeas para identificação doproduto ou para caracterizar a quantidade de composto ativo.

Preparações farmacêuticas que podem ser usadas oralmenteincluem cápsulas de empurrar-ajustar feitas de gelatina, bem como cápsulasmacias seladas, feitas de gelatina e um revestimento tal como glicerol ousorbitol. As cápsulas de empurrar-ajustar podem conter ingredientes ativosmisturados com uma carga ou aglutinantes, tais como lactose ou amidos,lubrificantes tais como talco ou estearato de magnésio e, opcionalmente,estabilizantes. Nas cápsulas macias, os compostos ativos podem serdissolvidos ou suspensos em líquidos adequados, tais como óleos graxos,parafina líquida ou polietileno glicol líquido, com ou sem estabilizantes.

As formulações farmacêuticas para administração parenteralincluem soluções aquosas de compostos ativos. Para injeção, as composiçõesfarmacêuticas da invenção podem ser formuladas em soluções aquosas,preferivelmente em tampões fisiologicamente compatíveis, tais como soluçãode Hanks, solução de Ringer ou solução salina fisiologicamente tamponada.

As injeções de suspensão aquosa podem conter substâncias que aumentam aviscosidade da suspensão, tais como carboximetilcelulose sódica, sorbitol oudextrano. Adicionalmente, as suspensões dos compostos ativos podem serpreparadas como suspensões de injeção oleosas apropriadas. Solventes ouveículos lipofílicos adequados incluem óleos graxos, tais como óleo degergelim ou ésteres de ácido graxo sintéticos, tais como etil oleato outriglicerídeos, ou lipossomas. Opcionalmente, a suspensão pode tambémconter estabilizantes ou agentes adequados, que aumentam a solubilidade doscompostos para permitir a preparação de soluções altamente concentradas.

Para administração tópica ou nasal, penetrantes apropriadospara a barreira particular a ser permeada podem ser usados na formulação.

As composições farmacêuticas para uso na presente invençãopodem ser manufaturadas substancialmente de acordo com procedimentos demanufatura padrão conhecidos na arte.

Os peptídeos ou composições para uso na presente invençãopodem ser liofilizados. Isto melhora a vida e estabilidade na armazenagem doproduto e melhora a transportabilidade. Isto é particularmente benéfico parauso em climas quentes e onde instalações de refrigeração não podem serprontamente disponíveis. O produto liofilizado pode ser reconstituído antes daadministração.

O método pode ainda compreender administrar um ou maisfatores reguladores ou de liberação de peptídeo, que podem induzir umacascata de liberação de outros peptídeos, por uma variedade de células dopaciente. Tais fatores adicionais são preferivelmente derivados da mesmafonte que o CRF, em particular soro de cabra. Fatores adequados incluem a-HLA, TGF-β e IL-10, entre outros.

Nas formas de realização preferidas, o método podecompreender administrar um ou mais de vasopressina, beta endorfina e umaencefalina. Em certas formas de realização, o método pode compreenderadministrar proteína de ligação CRF, CRF-BP. Esta pode ligar-se a CRF epode atuar como um reservatório para subseqüente liberação do CRF aopaciente.

O método pode ainda compreender administrar um peptídeoPOMC ou um produto POMC; certos produtos POMC podem ser úteis paraadministrar a um paciente para estimular mais produção ou para obter umadesejada resposta antes da POMC endógena ser produzida.

Um outro aspecto da presente invenção fornece um método detratamento de HIV, compreendendo administrar um peptídeo de POMC e/ouum produto POMC a um paciente.

Preferivelmente, a POMC é uma POMC não-humana; POMCconvenientemente ungulada; e muitíssimo preferivelmente POMC de cabra.Embora a POMC seja produzida no glândula pituitária e assim não se esperarestar presente no soro, pelo menos em níveis significativos, foisurpreendentemente identificado que o soro de cabra contém POMC,peptídeos relacionados com POMC e moléculas associadas com a cascata dePOMC, particularmente quando a cabra é estimulada por estresse fisiológico,tal como sangramento ou imunização. Isto provê uma fonte conveniente dePOMC para as composições farmacêuticas da presente invenção. Acredita-setambém que a POMC pode ter um efeito auto-sustentável no paciente, pelofato de que a administração de uma quantidade inicial de POMC resulta naprodução endógena de POMC no paciente; assim, uma administração inicialde um baixo nível de POMC pode ter um efeito significativo no paciente.Como com os peptídeos CRF, as fontes de peptídeos de POMC que não decabra podem, naturalmente, ser usadas, incluindo POMC recombinante.

Acredita-se que, na administração de POMC e suas moléculasassociadas com um indivíduo, o peptídeo é proteolisado para fornecer um oumais dos produtos de POMC em uma forma prontamente disponível para oindivíduo; há também a indução de uma cascata molecular que estimula oeixo hipotálamo-pituitária-adrenal (ΗΡΑ).

De acordo com um outro aspecto da invenção, é fornecido ummétodo de tratamento do HIV, compreendendo administrar dois ou maishormônios estimulantes dos melanócitos (MSH) alfa, beta e gama;adrenocorticotrofina (ACTH); lipotropina beta e gama (LPH); e endorfinabeta. Dada a provável proteólise de POMC na administração, pode serpossível obterem-se efeitos similares pela administração de dois ou mais doshormônios individuais derivados de POMC. Os hormônios citados podem serprovidos como peptídeos individuais ou como uma ou mais moléculasprecursoras (por exemplo, produtos de decomposição parcial de POMC).Preferivelmente, três, quatro, cinco, seis ou sete dos hormônios estãoincluídos na composição farmacêutica que (opcionalmente junto com CRF)induz uma cascata para produção continuada de tais moléculas. Os várioscomponentes podem ser fornecidos em combinação com uma ou maismoléculas veículo, que se ligam a um ou mais dos componentes e, assim,atuam como um depósito ou reservatório para liberação do componente. Umamolécula veículo pode também ser usada em combinação com POMC e seuspeptídeos relacionados.

A dosagem ótima de peptídeos de POMC ou CRP ainda nãofoi determinada; entretanto, pode ser apropriado administrar os peptídeos emuma dosagem entre 0,01 e 10 mg/kg ao indivíduo; mais preferivelmente entre0,01 e 5 mg/kg, entre 0,025 e 2 mg/kg e, muitíssimo preferivelmente, entre0,05 e 1 mg/kg.

A dosagem precisa a ser administrada pode ser variada,dependendo de tais fatores como idade, sexo e peso do paciente, do método eformulação de administração bem como da natureza e severidade do distúrbioa ser tratado. Outros fatores tais como dieta, tempo de administração,condição do paciente, combinações de medicamentos e sensibilidade dereação podem ser considerados. Um regime de tratamento eficaz pode serdeterminado pelo clínico responsável pelo tratamento. Uma ou maisadministrações podem ser feitas e, tipicamente, os benefícios são observadosapós uma série de pelo menos três, cinco ou mais administrações.

Administração repetida pode ser desejável para manter os efeitos benéficos dacomposição.

O tratamento pode ser administrado por qualquer via eficaz,preferivelmente por injeção subcutânea, embora vias alternativas que podemser usadas incluem injeção intramuscular ou intralesional, oral, aerossol,parenteral ou tópica.

O tratamento é preferivelmente administrado como umaformulação líquida, embora outras formulações possam ser usadas. Aformulação líquida pode ser reconstituída de uma preparação liofilizada. Porexemplo, o tratamento pode ser misturado com veículos farmaceuticamenteaceitáveis adequados e pode ser formulado como sólidos (tabletes, pílulas,cápsulas, grânulos etc.) em uma composição adequada para administraçãooral, tópica ou parenteral.

A invenção também provê o uso de CRF na preparação de ummedicamento para o tratamento de HIV. Também é provido o uso de POMCna preparação de um medicamento para o tratamento de HIV. O CRF ou aPOMC pode ser isolado, CRF ou POMC purificado, embora prefira-se quesejam administrados em combinação com os vários outros componentes,como discutido acima. Em particular, podem ser usadas proteínas veículobioativas e vasopressina.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

Estes e outros aspectos da presente invenção serão agoradescritos por meio de exemplo somente com referência aos desenhos anexos,em que:

As Figuras 1 a 4 mostram análises de espectrometria de massade digestos trípticos de componentes de soro; e

As Figuras 5 a 9 mostram evidência para uma mudança doperfil inflamatório de pacientes, em seguida ao tratamento com a composição.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

As publicações de patente internacionais W003/004049 eW003/064472 descrevem a produção de uma composição de soro de cabra.Um resumo do método de produção é dado abaixo.

Preparação da composição de soro

Uma cabra é inoculada por injeção intramuscular com vírusHIV-3b lisado, suspenso em um sobrenadante comercial normal, utilizando-seuma injeção intramuscular de HIV-3b, em uma concentração de IO9 partículasvirais por ml. O vírus é previamente morto por calor a 60 0C por 30 minutos.No procedimento otimizado, a cabra é injetada cada semana por quatrosemanas, em seguida a seis semanas o animal é sangrado para obter-se oreagente.

Aproximadamente 400 cm de sangue são retirados de umacabra sob técnica estéril. O animal pode tipicamente ser ressangrado em 10 a14 dias, uma vez o volume de sangue seja restabelecido. Um regime de pré-sangramento pode ser útil para estimular a produção dos compostos ativos dosoro. Todas as etapas de preparação subseqüentes são preferivelmenterealizadas a 40 0C, a menos que de outro modo especificado. O sangue é entãocentrifugado para separar o soro e o soro filtrado para remover grandescoágulos e matéria particulada. O soro é então tratado com sulfato de amôniosupersaturado (solução de 47% a 4 0C), para precipitar anticorpos e outrosmateriais. A solução resultante é centrifugada em uma centrífuga BeckmanJ6M/E a 3500 rpm por 45 minutos, após o que o fluido sobrenadante éremovido. A imunoglobulina precipitada e o outro material sólido sãoressuspensos em tampão PBS (solução salina tamponada com fosfato),suficiente para redissolver o precipitado.

A solução é então submetida a diafiltragem contra um tampãoPBS com um corte de peso molecular de 10.000 Daltons a 4 0C. Após adiafiltragem o produto é filtrado através de um filtro de 0,2 micros para dentrode um recipiente estéril e ajustado a uma concentração de proteína de 4 a 5mg/ml. A solução é colocada em frascos para fornecer doses únicas de 1 ml earmazenada a -22 0C antes do uso.

Análise da composição do soro

PCT/GB2005/050108 informa que a composição de soropreparada desta maneira contém peptídeos de POMC e CRF e sugere umpapel ativo para estes peptídeos nos efeitos do soro. Um resumo da análise dosoro é dado abaixo.

Uma amostra da composição foi fracionada em tamanho emum gel e uma Western blot realizada usando-se anticorpos para β endorfina.Um forte sinal foi detectado, indicando a presença de β endorfina, embora oaparente peso molecular fosse de aproximadamente 31 kDa, muito maior doque o tamanho esperado da β endorfina. Isto sugeriu que a β endorfina estavapresente na amostra como parte de um peptídeo maior; o tamanho sendoconsistente com aquela da POMC.

Também realizados espectrometria de massa na composição edetectamos pelo menos dois peptídeos derivados de POMC, moléculasrelacionadas com β endorfina e corticotrofina. CRH-BP (proteína de ligaçãode hormônio liberador da corticotropina) foi também identificada.

Figuras 1 a 4

Os peptídeos POMC e CRF-BP foram identificados noproduto por espectrometria de massa Thermofinnegan LCQ. O CRF regulaprincipalmente a síntese e secreção de ACTH na pituitária anterior. Aadministração de POMC e/ou seus peptídeos componentes, além de CRF eCRF-BP, pensa-se iniciar um efeito cascata, assim aumentando a produção deconcentrações elevadas sistêmicas e sustentadas de peptídeos de POMC. ACRF-BP tem a capacidade de atuar como um reservatório para CRF.

As Figuras 1 a 4 mostram as observações obtidas por análisede espectrometria de massa de digestos trípticos do produto separado dasproteínas contaminantes por SDS-PAGE. Como mencionado acima, algumasdestas moléculas são indutoras e reguladoras da cascata de POMC. Maisinvestigação utilizando-se análise mais focalizada (p.ex., fracionamento,imunoprecipitação e concentração de peptídeos) revelará mais dos peptídeospresentes. A Fig. 1 indica a presença de uma corticotropina derivada dePOMC, Figura 1 de CRF-BP, Figura 3 da proencefalina A e Figura 4 daproencefalina Β. A presença de CRF-BP sugere que o produto contém algumCRF, enquanto POMC e peptídeos relacionados estejam claramente presentes.

Também investigamos os efeitos do tratamento com acomposição de soro em soros dos próprios pacientes. Estes efeitos sãodescritos abaixo.

Evidência de uma mudança de um perfil pró-inflamatório TH-1 para um perfil antiinflamatório de citocina TH2 em pacientes tratados

A Figura 5 mostra os níveis de TGF-β no soro de dois gruposde pacientes (voluntários saudáveis) antes e após o tratamento com produto desoro de cabra preparado como descrito. Os dois grupos de pacientes (n = 3para cada grupo) mostram diferentes respostas com respeito às concentraçõesde TGF-β produzido, porém todos os pacientes mostraram um aumento nosníveis de soro, em resposta ao tratamento (pré-soros = níveis de soro dospacientes antes do tratamento; pós 2a. e pós 5 a. = após a 2a. e 5 a.administração). Os dados mostram que o tratamento induz aumentadaconcentração do TGF-β de citocina anti-inflamatório.

A Figura 6 mostra os níveis de IL-4 no soro de um grupo depacientes antes (pré-soros) e após tratamento. Pode ser visto que, após otratamento (pós 2o.) os níveis de IL-4 são significativamente aumentados nossoros dos pacientes (n = 5). Entretanto, em seguida à 5a. administração, osníveis de IL-4 caíram em todos os pacientes, porém permaneceram maiselevados do que tinham estado pré-tratamento. IL-4 é sabido regulardescendentemente a produção das citocinas pró-inflamatórias de células TH-1. Pode ser que as mudanças consistentes de concentração, vistas em todos ospacientes, sejam consistentes com o papel de IL-4 na mudança de TH-I paraTH-2.

A Figura 7 mostra os níveis de IL-6 no soro de um grupo depacientes antes e após o tratamento. Pode ser visto que, após o tratamento(pós 2o. e pós 5o.) os níveis de IL-6 são reduzidos nos soros dos pacientes (n= 4).

A Figura 8 mostra os níveis de IFN-γ no soro de um grupo depacientes antes e após o tratamento. Pode ser visto que, após o tratamento(pós 2o. e pós 5o.) os níveis de IFN-γ são reduzidos nos soros dos pacientes.

A Figura 9 mostra que o tratamento das células sangüíneasperiféricas humanas (PBMCs) induz a produção de IL-IO da citocinaantiinflamatória na subpopulação de monócitos. Os linfócitos e os monócitosTeB foram separados das PBMCs obtidas de voluntários humanos. Todos ostipos de célula foram tratados com doses equivalentes do produto por 16 h eseus sobrenadantes ensaiados quanto ao conteúdo de IL-10, usando-seELISA. Pode ser visto que os níveis IL-IO produzidos pela população decélulas T não foram afetados pelo tratamento e que somente um pequenoaumento em IL-IO foi induzido nas células B. Entretanto, uma elevaçãosignificativa de concentração de IL-IO foi induzida na população demonócitos, pelo tratamento. Todas as determinações foram feitas em triplicata± desvios padrão. Estes dados são representativos de pelo menos trêsexperimentos separados.

Sumário e Conclusões

Mostramos acima e em PCT/GB2005/050108 que o produtode soro de cabra como descrito contém peptídeos e produtos POMC epeptídeos CRF. Também mostramos que a administração do produto de soroinduz uma mudança no perfil inflamatório dos pacientes.

O WO 03/004049 descreve o uso de produto de soro de cabra,preparado como descrito para o tratamento de pacientes com HIV. E sugeridonaquela publicação que os resultados benéficos do soro em HIV resultam dapresença de moléculas anti-FAS e anti-HLA; não há sugestão de que ospeptídeos POMC ou CRF podem estar presentes. A publicação observa que ospacientes que receberam o soro experimentam um aumento a contagem decélulas CD4 e CD8, redução da carga viral e redução dos valores P24.

O WO 02/07760 também descreve a preparação e uso domesmo produto de soro de cabra para tratar pacientes com HIV. A publicaçãorelata dados experimentais mostrando a neutralização de SIV in vitro. OExemplo 3 da publicação descreve a preparação de produto de soro de cabrada mesma maneira que o descrito acima. A administração do soro resulta emuma diminuição da carga viral HIV (definida como o número de cópias deRNA HIV-I por ml de plasma) e um aumento da contagem de células CD4 eCD8. Repetindo, nenhuma sugestão é feita de que estas propriedades podemresultar da presença de peptídeos POMC ou CRF .

Em vista dos achados da PCT/GB2005/050108 e dos dadosapresentados aqui de que o produto de soro de cabra contém peptídeos eprodutos POMC e peptídeos CRF e de que estes peptídeos e produtos sãoagentes biológicos ativos, acreditamos que estes peptídeos e produtos podemser úteis no tratamento de HIV e/ou AIDS em pacientes humanos, para obter-se, entre outros efeitos, um ou mais de uma redução da carga viral, aumentoda contagem de células CD4 e um aumento da contagem das células CD8.

O HIV é também sabido induzir uma variedade de lesões dosistema nervoso central (CNS), que resulta em neurodegeneração e uma faixade neuropatologias. Estas incluem encefalite HTV, leucoencefalopatia HIV,avaria axonal e poliodistrofia difusa, que é associada com perda neural deseveridade variável. A última pensa-se resultar de um processo apoptótico.

Estas condições resulta em perda de função cognitiva e demência. Em vistados efeitos descritos dos peptídeos POMC / CRF nos distúrbiosneurodegenerativos (vide PCT/G2005/050108), é provável que tais peptídeospossam ser usados para aliviar estes sintomas de HIV / AIDS, bem como ospróprios HIV / AIDS.

Foi também informado que o eixo hipotálamo pituitáriaadrenal (HPA) em pessoas infectadas com o vírus HIV é disfuncional. Amanipulação da rede de citocina poderia ter efeitos benéficos no controle dainfecção por HIV. A estimulação dos receptores da melanocortina sobre ascélulas inflamatórias poderia ser uma abordagem terapêutica eficaz paraalterar o curso da infecção por HIV. Os peptídeos derivados daproopiomelanocortina, presentes no produto de soro descrito aqui, incluemhormônio adrenocorticotrópico [ACTH (1-39)], hormônio estimulador do a-melanócito [α-MSH (1 - 13)] e seqüências amino ácidas relacionadas. Ospeptídeos de melanocortina têm potente atividadeantiinflamatória/anticitocina.

As citocinas tais como interleucina 1 (IL-I) e fator de necrosetumoral (TNF) podem ser prejudiciais em pacientes infectados com HIV. Osefeitos das melanocortinas sobre a produção de IL-I e TNF-α no sangue depacientes HIV foram investigados. Quando a produção de citocina foi medidaem amostras de sangue integral, estimuladas com LPS, na presença ouausência de ct-MSH (1-13), a-msh (11-13), ACTH (1-24) ou ACTH (1-39),foi constatado que as melanocortinas reduziram a produção de ambascitocinas em uma maneira dependente da concentração. Em experimentosseparados em células mononucleares sangüíneas periféricas normais (PBMC),a-MSH (1-13) foi constatado inibir a produção da IL-I β e do TNF-ainduzidos pela glicoproteína gp 120 do invólucro de HIV. Estes resultadossugerem que a estimulação dos receptores da melanocortina nas célulasinflamatórias poderia ser uma nova maneira de reduzir a produção dascitocinas que promovem a replicação do HIV.

Os peptídeos e produtos de POMC e CRF, individualmente ouem combinação, fornecem um novo produto farmacêutico, que tem a capacidadede regular o eixo HPA e servir como uma fonte de melanocortinas e regulador daprodução da melanocortina. Em particular ele parece converter uma citocinaTHl pró-inflamatória hiperativa em um perfil de ΊΓΗ2 antiinflamatório. Assim, aprodução e liberação das citocinas inflamatórias é regulada.

Existe evidência que apoiam a noção de que a infecção porHIV é facilitada pela infecção dos macrófagos-monocíticos por múltiplostrajetos. A ativação de NF-kB por infecções oportunistas de AIDS aumenta aexpressão dos receptores de CCR5 e a expressão de TNF-α, ambos sendopermissivos para sustentar infecções por HIV. Adicionalmente, foi constatadoque uma redução da carga viral é associada com o tratamento de tecidoinfectado e/ou inflamado; isto ainda sustenta a ligação entre a ativação imunee a replicação viral. Assim, o tratamento de pacientes com peptídeos e/ouprodutos POMC / CRF, que reduzem a inflamação dos tecidos e os níveis decitocinas pró-inflamatórias e a ativação dos macrófagos, reduzirá ainfectividade celular no paciente e, possivelmente, o espalhamento dainfecção para os órgãos do corpo, tais como o cérebro.

Claims (13)

1. Método de tratamento de HIV, caracterizado pelo fato decompreender administrar um peptídeo de fator de liberação de corticotropina(CRF) a um paciente.

2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de um ou mais dos seguintes efeitos ser conseguido: uma redução dacarga viral; um aumento das células CD4; ou um aumento das células CD8.

3. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de o CRF ser CRF não-humano.

4. Método de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelofato de o CRF ser CRF de cabra.

5. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a-4, caracterizado pelo fato de compreender ainda administrar um ou mais defatores reguladores ou de liberação de peptídeo.

6. Método de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelofato de os fatores serem selecionados do grupo compreendendo α-HLA, TGF-β e IL-10.

7. Método de acordo com qualquer uma das reivindicaçõesprecedentes, caracterizado pelo fato de compreender administrar uma ou maisde vasopressina, beta endorfma e uma encefalina.

8. Método de acordo com qualquer uma das reivindicaçõesprecedentes, caracterizado pelo fato de compreender administrar proteína deligação de CRF, CRF-BP.

9. Método de acordo com qualquer uma das reivindicaçõesprecedentes, caracterizado pelo fato de compreender administrar um peptídeoPOMC ou um produto POMC.

10. Método de tratamento de HIV, caracterizado pelo fato decompreender administrar um peptídeo POMC e/ou um produto de POMC aum paciente.

11. Método de tratamento de HIV, caracterizado pelo fato decompreender administrar dois ou mais de hormônio estimulante demelanócitos alfa, beta e gama (MSH); adrenocorticotrofma (ACTH); beta egama lipotropina (LPH); e beta endorfina.

12. Uso de um peptídeo de CRF, caracterizado pelo fato de serna preparação de um medicamento para o tratamento de HIV.

13. Uso de um peptídeo de POMC e/ou um produto de POMC,caracterizado pelo fato de ser na preparação de um medicamento para otratamento de HIV.