JPH08143592A - インターフェロン−γ産生促進剤 - Google Patents
インターフェロン−γ産生促進剤Info
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- JPH08143592A JPH08143592A JP6290737A JP29073794A JPH08143592A JP H08143592 A JPH08143592 A JP H08143592A JP 6290737 A JP6290737 A JP 6290737A JP 29073794 A JP29073794 A JP 29073794A JP H08143592 A JPH08143592 A JP H08143592A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 ＩＦＮ−γの産生促進が望ましい疾病の治療
又は予防に有用な新規な薬剤を提供する 【構成】 アミノ酸配列 Thr-Asp-Asp-Thr-Ala-Ile-Val-Leu-Leu-Lys からなるペプチドを有効成分とするインターフェロン−
γ産生促進剤。
又は予防に有用な新規な薬剤を提供する 【構成】 アミノ酸配列 Thr-Asp-Asp-Thr-Ala-Ile-Val-Leu-Leu-Lys からなるペプチドを有効成分とするインターフェロン−
γ産生促進剤。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、配列表中の配列番号１
で示されるペプチドを有効成分とするインターフェロン
−γ産生促進剤に関する。
で示されるペプチドを有効成分とするインターフェロン
−γ産生促進剤に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決すべき課題】生体は細菌や
ウイルス等の感染に対し免疫応答反応によって対抗する
が、その免疫応答反応の担い手となるマクロファージや
リンパ球が産生する液性因子を、一般にサイトカインと
呼ぶ。
ウイルス等の感染に対し免疫応答反応によって対抗する
が、その免疫応答反応の担い手となるマクロファージや
リンパ球が産生する液性因子を、一般にサイトカインと
呼ぶ。
【０００３】サイトカインに分類される物質の中にイン
ターロイキン（以下、「ＩＬ」という。）と呼ばれる一
群の物質が存在し、それらは、現在インターロイキン１
〜１５（以下、それぞれ「ＩＬ−１」〜「ＩＬ−１５」
という。）に分類されている。
ターロイキン（以下、「ＩＬ」という。）と呼ばれる一
群の物質が存在し、それらは、現在インターロイキン１
〜１５（以下、それぞれ「ＩＬ−１」〜「ＩＬ−１５」
という。）に分類されている。
【０００４】ＩＬ−１は、リンパ球活性化因子と呼ばれ
ていた物質であり、１０-10モル以下という極微量で、
種々の生理活性作用を示し、生体の恒常性維持機構に深
く関与していることが知られている。このＩＬ−１の生
理活性に着目し、ＩＬ−１を医薬品等として利用する研
究が進められた。しかし、ＩＬ−１は種々の生理活性を
有するため、これを生体に大量に投与すると、目的とす
る作用以外の作用も同時に発現し、生体の恒常性維持が
図れなくなるという危険性があった。そこで、その危険
性を回避するため、ＩＬ−１の持つ生理作用のうちの一
部の生理活性作用のみを有する物質（一般に「ＩＬ−１
様活性物質」と呼ばれている。）をＩＬ−１の代わりに
利用する研究が進められた。
ていた物質であり、１０-10モル以下という極微量で、
種々の生理活性作用を示し、生体の恒常性維持機構に深
く関与していることが知られている。このＩＬ−１の生
理活性に着目し、ＩＬ−１を医薬品等として利用する研
究が進められた。しかし、ＩＬ−１は種々の生理活性を
有するため、これを生体に大量に投与すると、目的とす
る作用以外の作用も同時に発現し、生体の恒常性維持が
図れなくなるという危険性があった。そこで、その危険
性を回避するため、ＩＬ−１の持つ生理作用のうちの一
部の生理活性作用のみを有する物質（一般に「ＩＬ−１
様活性物質」と呼ばれている。）をＩＬ−１の代わりに
利用する研究が進められた。
【０００５】ＩＬ−１様活性物質の一つとして配列番号
１で示されるポリペプチド（以下、「Ｐ−１０」とい
う。）が見出され、その生理活性として、特異的抗体産
生増強作用及びコンカナバリンＡ共存下における胸腺細
胞に対する増強作用を有することが確認された（特開平
３−１７０４９８号公報）。
１で示されるポリペプチド（以下、「Ｐ−１０」とい
う。）が見出され、その生理活性として、特異的抗体産
生増強作用及びコンカナバリンＡ共存下における胸腺細
胞に対する増強作用を有することが確認された（特開平
３−１７０４９８号公報）。
【０００６】さらに、最近、Ｐ−１０が肝癌細胞の増殖
を抑制する一方、正常肝細胞の増殖を促進することが報
告された（サイトカイン、Vol.6, No.3, 1994:pp265-27
1（本文献中で、Ｐ−１０．２と称しているものは本明
細書でいうＰ−１０と同一物質である。））。本文献に
は、ＩＬ−１は肝癌細胞の増殖を抑制しなかったことも
記載されていることから、Ｐ−１０のＩＬ−１様活性で
はない、新たな生理活性が見出された。
を抑制する一方、正常肝細胞の増殖を促進することが報
告された（サイトカイン、Vol.6, No.3, 1994:pp265-27
1（本文献中で、Ｐ−１０．２と称しているものは本明
細書でいうＰ−１０と同一物質である。））。本文献に
は、ＩＬ−１は肝癌細胞の増殖を抑制しなかったことも
記載されていることから、Ｐ−１０のＩＬ−１様活性で
はない、新たな生理活性が見出された。
【０００７】そこで、本発明は、Ｐ−１０の未知の生理
活性を探求すべく、リンパ球等のいわゆる免疫担当細胞
ではない、肝細胞に対するＰ−１０の作用を明らかに
し、Ｐ−１０の新たな用途を見出すことを目的とする。
活性を探求すべく、リンパ球等のいわゆる免疫担当細胞
ではない、肝細胞に対するＰ−１０の作用を明らかに
し、Ｐ−１０の新たな用途を見出すことを目的とする。
【０００８】
【課題を解決する手段】本発明者らは、上記目的を達成
するため、鋭意研究を重ねた結果、Ｐ−１０がインター
フェロン−γ（以下、「ＩＦＮ−γ」という。）の産生
を特異的に促進させることを見出し本発明を完成させ
た。
するため、鋭意研究を重ねた結果、Ｐ−１０がインター
フェロン−γ（以下、「ＩＦＮ−γ」という。）の産生
を特異的に促進させることを見出し本発明を完成させ
た。
【０００９】すなわち、本発明は、アミノ酸配列（配列
番号１） Thr-Asp-Asp-Thr-Ala-Ile-Val-Leu-Leu-Lys からなるペプチド（すなわち「Ｐ−１０」）を有効成分
とするＩＦＮ−γ産生促進剤を第一の要旨とする。さら
に、本発明は、Ｐ−１０のＩＦＮ−γ産生促進作用に基
づく抗ウイルス剤を第二の要旨とする。
番号１） Thr-Asp-Asp-Thr-Ala-Ile-Val-Leu-Leu-Lys からなるペプチド（すなわち「Ｐ−１０」）を有効成分
とするＩＦＮ−γ産生促進剤を第一の要旨とする。さら
に、本発明は、Ｐ−１０のＩＦＮ−γ産生促進作用に基
づく抗ウイルス剤を第二の要旨とする。
【００１０】以下、本発明を詳細に説明する。本発明の
ＩＦＮ−γ産生促進剤は、生体の細胞に働きかけ、後述
の生理活性を有するＩＦＮ−γを細胞に産生させること
を促すものである。
ＩＦＮ−γ産生促進剤は、生体の細胞に働きかけ、後述
の生理活性を有するＩＦＮ−γを細胞に産生させること
を促すものである。
【００１１】ここで、ＩＦＮは、ウイルスや核酸などの
刺激を受けた動物細胞が産生し、細胞外に分泌される抗
ウイルス蛋白質として見出された物質であり、その後の
研究により、抗ウイルス作用のみでなく、抗腫瘍作用や
免疫系の活性化等様々な活性を示すことが明らかにされ
た。ＩＦＮは、α型、β型及びγ型に大別され、ウイル
ス等以外のレクチンやマイトジェンなどの刺激によっ
て、Ｔ細胞等から産生されるものをγ型（ＩＦＮ−γ）
と呼ぶ。ＩＦＮ−γは、抗ウイルス作用は示すが、ＩＦ
Ｎ−α及びβとは構造上の類似性もなく、その作用する
細胞上のレセプターも異なっており、その性質や作用も
ＩＦＮ−α及びβとはかなり異なっている。それ故、現
在では、ＩＦＮ−γは、抗ウイルス作用を示すが、イン
ターロイキン類として位置づけられている。
刺激を受けた動物細胞が産生し、細胞外に分泌される抗
ウイルス蛋白質として見出された物質であり、その後の
研究により、抗ウイルス作用のみでなく、抗腫瘍作用や
免疫系の活性化等様々な活性を示すことが明らかにされ
た。ＩＦＮは、α型、β型及びγ型に大別され、ウイル
ス等以外のレクチンやマイトジェンなどの刺激によっ
て、Ｔ細胞等から産生されるものをγ型（ＩＦＮ−γ）
と呼ぶ。ＩＦＮ−γは、抗ウイルス作用は示すが、ＩＦ
Ｎ−α及びβとは構造上の類似性もなく、その作用する
細胞上のレセプターも異なっており、その性質や作用も
ＩＦＮ−α及びβとはかなり異なっている。それ故、現
在では、ＩＦＮ−γは、抗ウイルス作用を示すが、イン
ターロイキン類として位置づけられている。
【００１２】ＩＦＮ−γの生理活性としては、上述の抗
ウイルス作用、抗腫瘍作用、細胞障害性Ｔリンパ球の誘
導促進作用、ナチュラルキラー細胞活性の誘導作用、好
中球の活性化作用、マクロファージの活性化作用、ＭＨ
ＣクラスIIの発現促進作用、ＩＬ−２リセプターの発現
促進作用、Ｆｃリセプターの発現促進作用等が知られて
いる。
ウイルス作用、抗腫瘍作用、細胞障害性Ｔリンパ球の誘
導促進作用、ナチュラルキラー細胞活性の誘導作用、好
中球の活性化作用、マクロファージの活性化作用、ＭＨ
ＣクラスIIの発現促進作用、ＩＬ−２リセプターの発現
促進作用、Ｆｃリセプターの発現促進作用等が知られて
いる。
【００１３】また、ＩＦＮは、元々生体の異物に対する
防御機構の一端を担う生体内物質であり、極めて選択毒
性が高く、生体にとって安全性の高いものである。
防御機構の一端を担う生体内物質であり、極めて選択毒
性が高く、生体にとって安全性の高いものである。
【００１４】生体細胞を刺激してＩＦＮ−γの分泌を促
進させる本発明のＰ−１０を有効成分とする薬剤（以
下、「本発明薬剤」という。）は、ＩＦＮ−γの有する
生理活性を当然に引き出しうるものである。従って、本
発明薬剤は、抗ウイルス剤、抗腫瘍剤、抗細菌感染症剤
として使用できるものである。
進させる本発明のＰ−１０を有効成分とする薬剤（以
下、「本発明薬剤」という。）は、ＩＦＮ−γの有する
生理活性を当然に引き出しうるものである。従って、本
発明薬剤は、抗ウイルス剤、抗腫瘍剤、抗細菌感染症剤
として使用できるものである。
【００１５】本発明薬剤の有効成分であるＰ−１０の正
常細胞に対する安全性は、上述の文献（サイトカイン）
及び後述する試験例１によって確認し、ＩＦＮ−γ産生
促進作用は、試験例２及び３の実験によって確認した。
常細胞に対する安全性は、上述の文献（サイトカイン）
及び後述する試験例１によって確認し、ＩＦＮ−γ産生
促進作用は、試験例２及び３の実験によって確認した。
【００１６】本発明薬剤は、ヒトその他の温血動物のＩ
ＦＮ−γの産生促進が望ましい疾病、例えば癌、ウイル
ス感染症、細菌感染症（例えば、肝膿腫、肝アメーバー
症）等の治療及び予防に適用できるが、特に癌の治療及
び、ウイルス感染症の治療及び予防に好適に用いること
ができる。
ＦＮ−γの産生促進が望ましい疾病、例えば癌、ウイル
ス感染症、細菌感染症（例えば、肝膿腫、肝アメーバー
症）等の治療及び予防に適用できるが、特に癌の治療及
び、ウイルス感染症の治療及び予防に好適に用いること
ができる。
【００１７】本発明薬剤は、各種剤型、例えば錠剤、顆
粒剤、カプセル剤、散剤等の経口剤、注射剤、貼付剤、
軟膏等の経皮剤、経粘膜剤、インプラント剤、点眼剤等
に調製して用いることができる。
粒剤、カプセル剤、散剤等の経口剤、注射剤、貼付剤、
軟膏等の経皮剤、経粘膜剤、インプラント剤、点眼剤等
に調製して用いることができる。
【００１８】本発明薬剤の製剤化に当たっては、製薬学
的に許容しうる賦形剤、補助剤、他の薬効成分を添加す
ることが可能である。添加する賦形剤等としては、例え
ば塩化ナトリウム、グリシン、乳糖、マンニトール、ソ
ルビトール、ショ糖、澱粉、デキストラン、ゼラチン等
が挙げられる。
的に許容しうる賦形剤、補助剤、他の薬効成分を添加す
ることが可能である。添加する賦形剤等としては、例え
ば塩化ナトリウム、グリシン、乳糖、マンニトール、ソ
ルビトール、ショ糖、澱粉、デキストラン、ゼラチン等
が挙げられる。
【００１９】本発明薬剤のＰ−１０含有量は、剤型によ
り異なるが、一般に固体及び半固体形態の場合には製剤
重量に対し５〜１００重量％、また液体形態の場合には
０．０１〜１０重量％とすることが望ましい。
り異なるが、一般に固体及び半固体形態の場合には製剤
重量に対し５〜１００重量％、また液体形態の場合には
０．０１〜１０重量％とすることが望ましい。
【００２０】本発明薬剤の投与量は、投与対象となるヒ
トを含む温血動物の種類、治療又は予防すべき疾患の種
類、症状の軽重、投与部位、剤型、医師の判断等により
広範に変えることができ、投与量の上限及び下限は固定
されないが、本発明薬剤の有効成分であるＰ−１０の量
で、一般に１日当たり５μｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、好まし
くは１０μｇ〜４ｍｇ／ｋｇとすることができる。な
お、本発明薬剤は、一日当たり上記投与量となるよう
に、一日一回又は数回に分けて投与することができる。
トを含む温血動物の種類、治療又は予防すべき疾患の種
類、症状の軽重、投与部位、剤型、医師の判断等により
広範に変えることができ、投与量の上限及び下限は固定
されないが、本発明薬剤の有効成分であるＰ−１０の量
で、一般に１日当たり５μｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、好まし
くは１０μｇ〜４ｍｇ／ｋｇとすることができる。な
お、本発明薬剤は、一日当たり上記投与量となるよう
に、一日一回又は数回に分けて投与することができる。
【００２１】本発明薬剤は、その有効成分であるＰ−１
０の薬効を損なわない限り、他の薬剤、例えば制癌剤、
抗ウイルス剤、抗生物質、化学療法剤等の疾病治療剤、
ビタミン剤、糖液等の栄養補給剤などと併用することが
できる。
０の薬効を損なわない限り、他の薬剤、例えば制癌剤、
抗ウイルス剤、抗生物質、化学療法剤等の疾病治療剤、
ビタミン剤、糖液等の栄養補給剤などと併用することが
できる。
【００２２】本発明の第二の要旨であるＰ−１０のＩＦ
Ｎ−γ産生促進作用に基づく抗ウイルス剤（以下、「本
発明抗ウイルス剤」という。）は、治療又は予防すべき
疾患がウイルス感染症である以外は、上述した本発明薬
剤と同様である。すなわち、その投与剤型、Ｐ−１０含
有量、投与量等は、本発明薬剤について説明したとおり
である。
Ｎ−γ産生促進作用に基づく抗ウイルス剤（以下、「本
発明抗ウイルス剤」という。）は、治療又は予防すべき
疾患がウイルス感染症である以外は、上述した本発明薬
剤と同様である。すなわち、その投与剤型、Ｐ−１０含
有量、投与量等は、本発明薬剤について説明したとおり
である。
【００２３】本発明抗ウイルス剤が適用されるウイルス
感染症としては、例えば、Ｂ型肝炎ウイスル、Ｃ型肝炎
ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルスによるウイルス性肝炎等が
挙げられるが、これらに限定されるものではない。
感染症としては、例えば、Ｂ型肝炎ウイスル、Ｃ型肝炎
ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルスによるウイルス性肝炎等が
挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００２４】
【実施例】以下、実施例により本発明をより詳細に説明
する。
する。
【００２５】試験例１：正常マウス肝細胞の増殖におけ
るＰ−１０の影響 正常マウス肝細胞株であるＮＣＴＣ Ｃｌｏｎｅ１４６
９（以下、「Ｃｌｏｎｅ１４６９」という。）の細胞増
殖がＰ−１０によってどのような影響を受けるかを試験
した。細胞増殖反応は、ブロモデオキシウリジンの取り
込みにより測定した。
るＰ−１０の影響 正常マウス肝細胞株であるＮＣＴＣ Ｃｌｏｎｅ１４６
９（以下、「Ｃｌｏｎｅ１４６９」という。）の細胞増
殖がＰ−１０によってどのような影響を受けるかを試験
した。細胞増殖反応は、ブロモデオキシウリジンの取り
込みにより測定した。
【００２６】細胞増殖の検出は、免疫組織化学的検出シ
ステム（細胞増殖検出キット、アマシャム社製）を用い
て測定した。Ｃｌｏｎｅ１４６９細胞（２×１０4個／
ｍｌ）にＰ−１０を添加し、２４穴平底プレート（コー
ニング社製）にて培養し、さらに、１μｇ／ｍｌのブロ
モデオキシウリジンを添加し、６時間培養した。リン酸
緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．２）で３回洗浄後、
細胞を酸−エタノールで３０分間固定し、さらに、抗−
ブロモデオキシウリジンモノクローナル抗体１００μｌ
／ｗｅｌｌとペルオキシダーゼ標識抗マウスＩｇＧ１０
０μｌ／ｗｅｌｌを添加し、ブロモデオキシウリジンを
取り込んだ細胞は０．０３％Ｈ2Ｏ2、０．０３％ＮｉＣ
ｌ2含有ＤＡＢ（ジアミノベンジジン）溶液を添加して
染色し、顕微鏡下で測定した。
ステム（細胞増殖検出キット、アマシャム社製）を用い
て測定した。Ｃｌｏｎｅ１４６９細胞（２×１０4個／
ｍｌ）にＰ−１０を添加し、２４穴平底プレート（コー
ニング社製）にて培養し、さらに、１μｇ／ｍｌのブロ
モデオキシウリジンを添加し、６時間培養した。リン酸
緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．２）で３回洗浄後、
細胞を酸−エタノールで３０分間固定し、さらに、抗−
ブロモデオキシウリジンモノクローナル抗体１００μｌ
／ｗｅｌｌとペルオキシダーゼ標識抗マウスＩｇＧ１０
０μｌ／ｗｅｌｌを添加し、ブロモデオキシウリジンを
取り込んだ細胞は０．０３％Ｈ2Ｏ2、０．０３％ＮｉＣ
ｌ2含有ＤＡＢ（ジアミノベンジジン）溶液を添加して
染色し、顕微鏡下で測定した。
【００２７】本試験結果を下記表１に示す。
【００２８】
【表１】
【００２９】表１の結果から、Ｐ−１０は正常肝細胞の
増殖を促進することがわかる。
増殖を促進することがわかる。
【００３０】試験例２：Ｐ−１０が肝癌細胞及び正常肝
細胞のサイトカイン分泌に与える影響 肝細胞が分泌することが知られているサイトカインの分
泌が、Ｐ−１０によってどのような影響を受けるかを調
べるため、Ｃｌｏｎｅ１４６９及びマウス肝癌細胞株で
あるＭＨ１３４のサイトカイン分泌細胞数の変動をＥＬ
ＩＳＰＯＴ（Enzyme-linked immunospot ）法に従い測
定した。
細胞のサイトカイン分泌に与える影響 肝細胞が分泌することが知られているサイトカインの分
泌が、Ｐ−１０によってどのような影響を受けるかを調
べるため、Ｃｌｏｎｅ１４６９及びマウス肝癌細胞株で
あるＭＨ１３４のサイトカイン分泌細胞数の変動をＥＬ
ＩＳＰＯＴ（Enzyme-linked immunospot ）法に従い測
定した。
【００３１】すなわち、サイトカインとしては、ヘルパ
ーＴ細胞１（Ｔh１）由来のＩＦＮ−γ及び、ヘルパー
Ｔ細胞２（Ｔh２）由来のＩＬ−４、ＩＬ−５及びＩＬ
−１０を検出した。
ーＴ細胞１（Ｔh１）由来のＩＦＮ−γ及び、ヘルパー
Ｔ細胞２（Ｔh２）由来のＩＬ−４、ＩＬ−５及びＩＬ
−１０を検出した。
【００３２】Ｃｌｏｎｅ１４６９細胞及びＭＨ１３４細
胞にＰ−１０を添加し、４２時間培養した。培養液を遠
心分離後、細胞を集め、それぞれの細胞を１％ウシ胎児
血清含有ＲＰＭＩ １６４０培養液（日水製薬社製）に
５×１０4個／０．５ｍｌの濃度で懸濁し、ミリセル
（直径１２ｍｍ）の各ｗｅｌｌ（０．５ｍｌ容）に分注
し、２４穴平底プレート（コーニング社製）中、５％炭
酸ガス存在下、３７℃で６時間培養した。６時間後に培
養液を捨て、ミリセル膜表面をセル・スクラッパー（住
友ベークライト社製）にて軽くこすり付着している細胞
を除去し、ミリセル膜表面をトリス緩衝生理食塩水（Ｔ
ＢＳ、ｐＨ７．６）にて３回洗浄した。
胞にＰ−１０を添加し、４２時間培養した。培養液を遠
心分離後、細胞を集め、それぞれの細胞を１％ウシ胎児
血清含有ＲＰＭＩ １６４０培養液（日水製薬社製）に
５×１０4個／０．５ｍｌの濃度で懸濁し、ミリセル
（直径１２ｍｍ）の各ｗｅｌｌ（０．５ｍｌ容）に分注
し、２４穴平底プレート（コーニング社製）中、５％炭
酸ガス存在下、３７℃で６時間培養した。６時間後に培
養液を捨て、ミリセル膜表面をセル・スクラッパー（住
友ベークライト社製）にて軽くこすり付着している細胞
を除去し、ミリセル膜表面をトリス緩衝生理食塩水（Ｔ
ＢＳ、ｐＨ７．６）にて３回洗浄した。
【００３３】次いで、ミルセル膜に２％過酸化水素含有
ＴＢＳを加え、１０分間反応させた後、ミリセル膜を１
％Ｔｗｅｅｎ ２０（シグマ社製）含有ＴＢＳ（ＴＢＳ
Ｔ）にて５回洗浄した。ミリセル膜に３％ウシ血清アル
ブミン（ＢＳＡ）（シグマ社製）含有ＴＢＳを加え、３
７℃で１時間反応させて、ミリセル膜の各ｗｅｌｌの膜
をブロックした。その後、ミリセル膜をＴＢＳＴにて３
回洗浄し、各ｗｅｌｌにそれぞれビオチン標識抗マウス
・ＩＦＮ−γ抗体、ビオチン標識抗マウス・ＩＬ−４抗
体、ビオチン標識抗マウス・ＩＬ−５抗体及びビオチン
標識抗マウス・ＩＬ−１０抗体（それぞれファーミンゲ
ン社製、５００倍希釈したもの）を０．２ｍｌを加えて
一昼夜放置した後、ミリセル膜をＴＢＳＴにて４回洗浄
した。
ＴＢＳを加え、１０分間反応させた後、ミリセル膜を１
％Ｔｗｅｅｎ ２０（シグマ社製）含有ＴＢＳ（ＴＢＳ
Ｔ）にて５回洗浄した。ミリセル膜に３％ウシ血清アル
ブミン（ＢＳＡ）（シグマ社製）含有ＴＢＳを加え、３
７℃で１時間反応させて、ミリセル膜の各ｗｅｌｌの膜
をブロックした。その後、ミリセル膜をＴＢＳＴにて３
回洗浄し、各ｗｅｌｌにそれぞれビオチン標識抗マウス
・ＩＦＮ−γ抗体、ビオチン標識抗マウス・ＩＬ−４抗
体、ビオチン標識抗マウス・ＩＬ−５抗体及びビオチン
標識抗マウス・ＩＬ−１０抗体（それぞれファーミンゲ
ン社製、５００倍希釈したもの）を０．２ｍｌを加えて
一昼夜放置した後、ミリセル膜をＴＢＳＴにて４回洗浄
した。
【００３４】各ｗｅｌｌは、アビジン・ペルオキシダー
ゼ（ベクター・ラボラトリー社製、ＡＢＣキット）を加
えて３０分間反応させ、ＴＢＳにて３回洗浄し、０．２
ｍｇ／ｍｌジアミノベンジジン（ＤＡＢ）及び０．００
３％過酸化水素含有ＴＢＳを加えて１０分間反応後、各
ｗｅｌｌ中に形成されたスポットを顕微鏡下で計数し
た。
ゼ（ベクター・ラボラトリー社製、ＡＢＣキット）を加
えて３０分間反応させ、ＴＢＳにて３回洗浄し、０．２
ｍｇ／ｍｌジアミノベンジジン（ＤＡＢ）及び０．００
３％過酸化水素含有ＴＢＳを加えて１０分間反応後、各
ｗｅｌｌ中に形成されたスポットを顕微鏡下で計数し
た。
【００３５】形成されたスポットの数は、それぞれのサ
イトカインを産生している細胞の数に相当する。
イトカインを産生している細胞の数に相当する。
【００３６】表２に本試験の結果を示す。
【００３７】
【表２】
【００３８】表２の結果から、Ｃｌｏｎｅ１４６９細胞
及びＭＨ１３４細胞は、Ｐ−１０の刺激が無くてもサイ
トカインを分泌している細胞が存在することがわかる。
及びＭＨ１３４細胞は、Ｐ−１０の刺激が無くてもサイ
トカインを分泌している細胞が存在することがわかる。
【００３９】正常肝細胞株であるＣｌｏｎｅ１４６９で
は、Ｐ−１０の添加によってＩＦＮ−γを分泌する細胞
数のみが有意に増加しているが、ＩＬ−４、５及び１０
については対照群と有意差がない。また、肝癌細胞株で
あるＭＨ１３４では、いずれのサイトカインについて
も、Ｐ−１０の添加によって有意に変動していないこと
がわかる。
は、Ｐ−１０の添加によってＩＦＮ−γを分泌する細胞
数のみが有意に増加しているが、ＩＬ−４、５及び１０
については対照群と有意差がない。また、肝癌細胞株で
あるＭＨ１３４では、いずれのサイトカインについて
も、Ｐ−１０の添加によって有意に変動していないこと
がわかる。
【００４０】上記の結果から、Ｐ−１０は、正常肝細胞
のＩＦＮ−γの産生を特異的に促進することがわかる。
のＩＦＮ−γの産生を特異的に促進することがわかる。
【００４１】試験例３：Ｐ−１０が正常肝細胞のＩＦＮ
−γ分泌に与える影響 上記試験例２において、Ｐ−１０の添加により正常肝細
胞Ｃｌｏｎｅ１４６９細胞のＩＦＮ−γ分泌が促進され
たことが確認された。そこで、本試験においては、正常
肝細胞のＩＦＮ−γ分泌におけるＰ−１０濃度の影響を
調べた。
−γ分泌に与える影響 上記試験例２において、Ｐ−１０の添加により正常肝細
胞Ｃｌｏｎｅ１４６９細胞のＩＦＮ−γ分泌が促進され
たことが確認された。そこで、本試験においては、正常
肝細胞のＩＦＮ−γ分泌におけるＰ−１０濃度の影響を
調べた。
【００４２】試験は、Ｐ−１０濃度を下記表３に示す濃
度とした以外は、試験例２と同様に実施した。本試験結
果を表３に示す。
度とした以外は、試験例２と同様に実施した。本試験結
果を表３に示す。
【００４３】
【表３】
【００４４】表３の結果から、Ｐ−１０を１０、５０及
び１００μｇ／ｍｌ添加した場合、それぞれ対照群の約
２．１倍、３．２倍及び３．０倍多くの細胞がＩＦＮ−
γを分泌していることがわかる。
び１００μｇ／ｍｌ添加した場合、それぞれ対照群の約
２．１倍、３．２倍及び３．０倍多くの細胞がＩＦＮ−
γを分泌していることがわかる。
【００４５】以上の試験例から、Ｐ−１０は、正常肝細
胞を刺激してＩＦＮ−γの産生を特異的に促進させるこ
とが明らかになった。
胞を刺激してＩＦＮ−γの産生を特異的に促進させるこ
とが明らかになった。
【００４６】
【発明の効果】本発明薬剤は、正常な生体細胞にとって
安全性が高く、正常な生体細胞、特に肝細胞にＩＦＮ−
γの産生を促進させることができ、ＩＦＮ−γの生理活
性に基づく有用な薬効を期待できる。
安全性が高く、正常な生体細胞、特に肝細胞にＩＦＮ−
γの産生を促進させることができ、ＩＦＮ−γの生理活
性に基づく有用な薬効を期待できる。
【００４７】すなわち、本発明によって、ＩＦＮ−γの
産生促進が望ましい疾病の治療又は予防に有用な新規な
薬剤が提供された。
産生促進が望ましい疾病の治療又は予防に有用な新規な
薬剤が提供された。
【００４８】
【表４】
Claims (3)
- 【請求項１】 アミノ酸配列（配列番号１） Thr-Asp-Asp-Thr-Ala-Ile-Val-Leu-Leu-Lys からなるペプチドを有効成分とするインターフェロン−
γ産生促進剤。 - 【請求項２】 正常肝細胞におけるインターフェロン−
γの産生を促進する請求項１に記載のインターフェロン
−γ産生促進剤。 - 【請求項３】 インターフェロン−γ産生促進作用に基
づく抗ウイルス剤。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29073794A JP3585274B2 (ja) | 1994-11-25 | 1994-11-25 | インターフェロン−γ産生促進剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29073794A JP3585274B2 (ja) | 1994-11-25 | 1994-11-25 | インターフェロン−γ産生促進剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08143592A true JPH08143592A (ja) | 1996-06-04 |
| JP3585274B2 JP3585274B2 (ja) | 2004-11-04 |
Family
ID=17759876
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP29073794A Expired - Fee Related JP3585274B2 (ja) | 1994-11-25 | 1994-11-25 | インターフェロン−γ産生促進剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3585274B2 (ja) |
-
1994
- 1994-11-25 JP JP29073794A patent/JP3585274B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3585274B2 (ja) | 2004-11-04 |
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