KR20070057789A - 인터루킨-21 수용체 활성의 상쇄 - Google Patents

인터루킨-21 수용체 활성의 상쇄 Download PDF

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Abstract

인터루킨-21 (IL-21) 또는 IL-21 수용체 ("IL-21R" 또는 "MU-1") 의 길항제를 사용하여 인터루킨-21 (IL-21)/IL-21 수용체 (MU-1) 활성을 억제하기 위한 방법 및 조성물이 기재된다. IL-21/IL-21R 길항제는 예를 들어 염증성 장질환 (IBD), 류머티즘성 관절염 (RA), 이식/이식편 거부, 건선, 천식, 섬유증 및 전신 홍반 루푸스 (SLE) 를 포함하는 자가면역 또는 염증성 장애의 예를 들어 치료, 경감 또는 예방을 위한 생체 내 면역 억제를 유도하기 위해 사용할 수 있다.

Description

인터루킨-21 수용체 활성의 상쇄 {ANTAGONIZING INTERLEUKIN-21 RECEPTOR ACTIVITY}
본 출원은 2004 년 8 월 5 일 출원된 미국 가출원 제 60/599,086 호, 및 2004 년 12 월 23 일 출원된 미국 가출원 제 60/639,176 호 (둘 다 본원에 전체가 참조로서 인용됨) 의 혜택을 청구한다.
발명분야
본 발명은 인터루킨-21 (IL-21) 수용체 길항제를 사용하여 인터루킨-21 (IL-21)/IL-21 수용체 (MU-1) 활성을 상쇄, 감소 및/또는 억제하기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다. 본원에 기재된 방법 및 조성물은 면역치료제로서 유용하다.
인간 IL-21 은 IL-2, IL-4 및 IL-15 에 서열 상동을 보이는 사이토카인이다 (Parrish-Novak et al. (2000) Nature 408:57-63). 인터루킨 사이토카인 간의 낮은 서열 상동에도 불구하고, 사이토카인은 계열의 대표적인 "4-나선형-번들" 구조 내의 공통의 주름을 공유한다. 대부분의 사이토카인은 계열 I 또는 계열 II 사이토카인 수용체와 결합한다. 계열 II 사이토카인 수용체에는 IL-10 및 인터페론에 대한 수용체가 포함되는 반면, 계열 I 사이토카인 수용에는 IL-2 에서 IL-7, IL-9, IL-11, IL-12, IL-13, 및 IL-15 뿐 아니라, 조혈 성장 인자, 렙틴, 및 성 장 호르몬에 대한 수용체가 포함된다 (Cosman (1993) Cytokine 5:95-106).
인간 IL-21 수용체 (IL-21R) 는 림프 조직에서, 특히 NK, B, 및 T 세포에 의해, 발현되는 계열 I 사이토카인 수용체이다 (Parrish-Novak et al. (2000) supra). 인간 인터루킨-21 (IL-21) 및 그의 수용체 (IL-21R) 를 엔코딩하는 뉴클레오티드 및 아미노산 서열은 문헌 [WO 00/53761; WO 01/85792; Parrish-Novak et al. (2000) supra; 및 Ozaki et al. (2000) Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A. 97:11439-44] 에 기재되어 있다. IL-21R 은 IL-2 수용체 β 사슬 및 IL-4 수용체 α 사슬과 가장 높은 서열 상동을 갖는다 (Ozaki et al. (2000) supra). 리간드 결합시, IL-21R 은 IL-2, IL-3, IL-4, IL-7, IL-9, IL-13 및 IL-15 에 대한 수용체와 공유하는 공통 감마 사이토카인 수용체 사슬 (γc) 과 결합한다 (Ozaki et al. (2000) supra; Asao et al. (2001) J Immunol . 167:1-5). 넓게 퍼진 IL-21R 의 림프 분포는 IL-21 이 면역 조절 역할을 할 수 있다는 것을 제시한다. 게다가, 시험관 내 연구는 IL-21 이 B 세포, CD4+ 및 CD8+ T 세포, 및 NK 세포의 기능을 뚜렷하게 조정하는 것을 보여주고 있다 (Parrish-Novak et al. (2000) supra; Kasaian et al. (2002) Immunity. 16:559-69). 그럼에도 불구하고, 생체 내에서의 IL-21 의 조절 효과를 지지하는 증거는 제한된다.
발명의 요약
인터루킨-21 (IL-21) 과 IL-21 수용체 (또한 본원에서 "IL-21R" 또는 "MU-1" 로서 언급됨) 사이의 활성 및/또는 상호 작용을, 예를 들어, IL-21 또는 IL-21R 의 길항제를 사용하여 간섭하기 위한 방법 및 조성물이 기재되어 있다 (또한 본원에서 "IL-21/IL-21R 길항제" 또는 "길항제" 또는 "IL-21/IL-21R 경로 길항제" 로서 언급됨).
예를 들어, 본 발명자들은 IL-21 길항제, 예를 들어, Fc 면역글로불린 영역에 융합된 IL-21R 의 세포외부 도메인이 포함되는 융합 단백질을 사용하여 IL-21R 활성을 감소시키는 것이, 염증성 장질환 (IBD), 류머티즘성 관절염 (RA), 이식/이식편 (transplant/graft) 거부, 이식편 대 숙주 질환, 천식, 전신 홍반 루푸스 (SLE) (사구체신염의 형태를 포함함), 및 건선 (실시예 7-14) 과 같은 염증성 및/또는 자가면역 장애의 예측에 알맞은 여러 상이한 동물 모델에서 염증성 증상을 경감시킨다는 것을 제시하고 있다. IL-21R mRNA 의 발현은 콜라겐-유도 관절염 (CIA) 마우스의 발에서 상향조절된다 (실시예 8). 게다가, IL-21R 결핍 마우스는 천식 모델에서 증상의 감소를 나타내었다 (실시예 12). 따라서, IL-21/IL-21R 활성의 길항제는 예를 들어, 염증성 또는 자가면역 장애의 치료 또는 예방을 위해 생체 내 면역 억제를 유도하기 위해 사용할 수 있다. 또한 상기 길항제는 면역 세포-관련 장애, 예를 들어, 성숙 T 세포 (예를 들어, 성숙 CD8+ 또는 성숙 CD4+ T 세포), 성숙 NK 세포, B 세포, 대식세포 및 거핵세포 중 하나 이상의 비정상 활성과 관련된 장애의 치료 또는 예방을 위해 사용할 수 있다.
따라서, 한 관점에서, 본 발명은 대상자에서의 염증성 또는 자가면역 장애의 치료 (예를 들어, 치유, 억제, 지연), 경감 (예를 들어, 줄임, 완화, 감소, 저하) 및/또는 예방 (예를 들어, 발병의 예방, 또는 재발 또는 도짐의 예방) 방법을 특징 으로 한다. 방법에는 IL-21/IL-21R 길항제를, 예를 들어, 장애를 치료, 경감, 또는 예방하기에 충분한 양으로 또는 면역 세포 활성 및/또는 세포 수를 억제 또는 감소시키기에 충분한 양으로 대상자에게 투여하는 것이 포함된다.
IL-21/IL-21R 길항제는 대상자에게 단독, 또는 IL-21/IL-21R 길항제의 조합, 또는 본원에 기재되는 기타 치료적 양식과 병용 투여할 수 있다. 바람직하게는, 대상자는 염증성 또는 자가면역 장애로 고생하거나 이에 대한 위험이 있는 포유동물, 예를 들어 인간이다. 예를 들어, 방법은 대상자에서의 염증성 또는 자가면역 장애의 치료 또는 예방을 위해 사용할 수 있다. 이러한 장애의 예에는: 이식/이식편 거부; 인슐린 의존성 당뇨병 (예를 들어, 유형 I); 다발성 경화증; 관절염성 장애 (예를 들어, 류머티즘성 관절염 (RA), 연소자성 류머티즘성 관절염, 골관절염, 건선성 관절염, 또는 강직성 척추염 (바람직하게는, RA)); 중증근육 무력증; 혈관염; 전신 홍반 루푸스 (SLE); 사구체신염; 자가면역성 갑상샘염; 피부 염증성 장애 (예를 들어, 피부염 (아토피성 피부염 및 습진성 피부염 포함), 피부경화증, 또는 건선); 홍반 루푸스; 섬유증 또는 섬유증성 장애 (예를 들어, 폐섬유증 또는 간섬유증); 호흡기성 장애 (예를 들어, 천식 또는 COPD); 아토피성 장애 (예를 들어, 알레르기 포함); 또는 장 염증성 장애 (예를 들어, IBD, 예를 들어, 크론병 (Crohn's disease) 또는 궤양성 대장염) 이 포함되나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 IL-21 또는 IL-21R 길항제를 사용하는, 홍반 루푸스, 피부 염증성 장애 (예를 들어, 건선), 장 염증성 장애 (예를 들어, IBD, 크론병, 궤양성 대장 염), 이식/이식편 거부, 천식, 아토피성 장애, 또는 류머티즘성 관절염으로부터 선택되는 장애의 치료가 바람직하다.
한 구현예에서, IL-21/IL-21R 길항제는 예를 들어, IL-21 또는 IL-21R 과 상호작용하고, 바람직하게는, 포유동물, 예를 들어, 인간 IL-21 또는 IL-21R (본원에서 각각 "IL-21 길항제" 및 "IL-21R 길항제" 로서 언급됨) 에 결합하고, IL-21 및/또는 IL-21R 활성 중 하나 이상을 감소 또는 억제한다. 바람직한 길항제는 IL-21 또는 IL-21R 에 높은 친화력으로, 예를 들어, 약 107 M-1 이상, 바람직하게는 약 108 M-1, 더욱 바람직하게는, 약 109 M-1 ∼ 1010 M-1 또는 더욱 강한 친화력의 상수로 결합한다.
예를 들어, IL-21/IL-21R 길항제는 IL-21 을 중화하여 IL-21R 활성을 감소 및/또는 억제할 수 있다. 한 구현예에서, 길항제는 비-IL-21R 단편, 예를 들어, 면역글로불린 Fc 영역에 융합된 IL-21R 의 단편을 포함하는 융합 단백질일 수 있다. 다른 구현예에서, 길항제는 항-IL-21R 또는 항-IL-21 항체 또는 그의 항원-결합 단편, IL-21 수용체의 가용성 형태, 펩티드 또는 작은 분자 억제제이다.
한 구현예에서, IL-21/IL-21R 길항제는 항-IL-21R 또는 항-IL-21 항체, 또는 그의 항원-결합 단편이다; 예를 들어, 항체는 IL-21, 예를 들어, 인간 IL-21, 또는 IL-21 수용체, 예를 들어, 인간 IL-21 수용체 폴리펩티드, 또는 그의 항원-결합 단편 (예를 들어, Fab, F(ab')2, Fv 또는 단일 사슬 Fv 단편) 에 결합하는 단일클론 또는 단일 특이성 항체이다. 바람직하게는, 항체는 인간, 인간화된, 키메라성, 또는 인간 IL-21 또는 인간 IL-21 수용체 폴리펩티드에 대해 시험관 내에서 생성된 항체이다. 바람직하게는, 항체는 중화 항체이다.
다른 구현예에서, IL-21/IL-21R 길항제에는 IL-21 폴리펩티드의 전장, 또는 단편, 예를 들어, IL-21 폴리펩티드, 예를 들어, 인간 IL-21 폴리펩티드의 억제성 IL-21 수용체-결합 도메인 (예를 들어, SEQ ID NO: 19 에서 제시된 아미노산 서열, 또는 이와 적어도 85%, 90%, 95%, 98% 이상 일치하는 서열을 갖는; 또는 SEQ ID NO: 18 로 제시된 해당하는 뉴클레오티드 서열 또는 이와 적어도 85%, 90%, 95%, 98% 이상 일치하는 서열에 의해 엔코딩되는 본원에 기재된 인간 IL-21 폴리펩티드) 이 포함된다. 대안적으로는, 길항제에는 IL-21 수용체 폴리펩티드의 전장 (예를 들어, SEQ ID NO: 2 의 대략 아미노산 1-538 또는 20-538; 또는 SEQ ID NO: 10 의 대략 아미노산 1-529 또는 20-529), 또는 단편, 예를 들어, IL-21 수용체 폴리펩티드의 IL-21-결합 도메인, 예를 들어, IL-21R 의 가용성 단편 (예를 들어, 쥣과 또는 인간 IL-21R 의 세포외부 도메인; 예를 들어, SEQ ID NO: 2 (인간) 의 대략 아미노산 1-235, 1-236, 20-235, 20-236, 또는 SEQ ID NO: 10 (쥣과) 의 대략 아미노산 1-236, 20-236, 또는 SEQ ID NO: 1 또는 9 의 해당하는 뉴클레오티드, 또는 이와 적어도 85%, 90%, 95%, 98% 이상 일치하는 서열에 의해 엔코딩되는 도메인을 포함하는 IL-21R 의 단편) 이 포함된다.
한 구현예에서, 길항제는 상기 언급한 IL-21 또는 IL-21 수용체 폴리펩티드 또는 그의 단편을 포함하고, 예를 들어, 두 번째 부분, 예를 들어, 폴리펩티드 (예를 들어, 면역글로불린 사슬, GST, Lex-A 또는 MBP 폴리펩티드 서열) 에 융합된 융 합 단백질이다. 바람직한 구현예에서, 융합 단백질에는 IL-21 에 결합할 수 있는 IL-21R 폴리펩티드의 단편 이상, 예를 들어, IL-21R 의 가용성 단편 (예를 들어, 쥣과 또는 인간 IL-21R 의 세포외부 도메인 (예를 들어, SEQ ID NO: 2 (인간) 의 대략 아미노산 1-235, 1-236, 20-235, 20-236, 또는 SEQ ID NO: 10 (쥣과) 의 대략 아미노산 1-236, 20-236, 또는 SEQ ID NO: 1 또는 9 의 해당하는 뉴클레오티드거나, 이와 적어도 85%, 90%, 95%, 98% 이상 일치하는 서열에 의해 엔코딩되는 것을 포함하는 IL-21R 의 단편) 이 포함되고, 예를 들어, 두 번째 부분, 예를 들어, 폴리펩티드 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD 및 IgE 를 포함하는 다양한 동종형의 면역글로불린 사슬, Fc 단편, 중쇄 불변 영역) 에 융합된다. 예를 들어, 융합 단백질에는, 예를 들어, 인간 면역글로불린 Fc 사슬 (예를 들어, 인간 IgG, 예를 들어, 인간 IgG1, 예를 들어, 자연적으로 발생하는 인간 IgG1 또는 인간 IgG1 의 돌연변이된 형태) 에 융합된 인간 IL-21R 의 세포외부 도메인 (예를 들어, SEQ ID NO: 2 의 대략 아미노산 1-235, 1-236, 20-235, 20-236) 이 포함될 수 있다. 한 구현예에서, 인간 Fc 서열은, 예를 들어, Fc 수용체 결합을 감소시키기 위해 자연적으로 발생하는 서열로부터 하나 이상의 아미노산에서 돌연변이 (예를 들어, SEQ ID NO: 28 의 잔기 254 및 257 에서 돌연변이됨) 되어 있다. 다른 구현예에서, 융합 단백질에는 예를 들어, 쥣과 면역글로불린 Fc 사슬 (예를 들어, 쥣과 IgG, 예를 들어, 쥣과 IgG2a 또는 쥣과 IgG2a 의 돌연변이된 형태) 에 융합된 쥣과 IL-21R 의 세포외부 도메인 (예를 들어, SEQ ID NO: 10 (쥣과) 의 대략 아미노산 1-236, 20-235) 이 포함될 수 있다.
융합 단백질에는 부가적으로 첫 번째 부분, 예를 들어, IL-21R 단편이, 두 번째 부분, 예를 들어, 면역글로불린 단편에 연결되는 연결자 서열이 포함될 수 있다. 다른 구현예에서, 발현, 입체적 유연성, 검출 및/또는 단리 또는 정제를 용이하게 하기 위해 부가적인 아미노산 서열을 융합 단백질의 N- 또는 C-말단에 첨가할 수 있다.
본 발명의 방법에 사용할 수 있는 길항제성 융합 단백질의 예는 도 7 - 15 에 제시된다. 한 구현예에서, 융합 단백질에는 예를 들어, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 37, 또는 SEQ ID NO: 39 로부터 선택되는 아미노산 서열, 또는 이와 적어도 85%, 90%, 95%, 98% 이상 일치하는 서열이 포함된다. 다른 구현예에서, 융합 단백질에는 예를 들어, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, 또는 SEQ ID NO: 38 로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 이와 적어도 85%, 90%, 95%, 98% 이상 일치하는 서열에 의해 엔코딩되는 아미노산 서열이 포함된다. 바람직한 융합 단백질은 SEQ ID NO: 25 또는 SEQ ID NO: 29 로서 제시되는 아미노산 서열 (각각, 도 8A-8C 및 10A-10C), 또는 이와 적어도 85%, 90%, 95%, 98% 이상 일치하는 서열을 갖는다. 다른 구현예에서, 융합 단백질에는, 예를 들어, SEQ ID NO: 24 또는 SEQ ID NO: 28 로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열 (각각, 도 8A-8C 및 10A-10C), 또는 이와 적어도 85%, 90%, 95%, 98% 이상 일치하는 서열에 의해 엔코딩되는 아미노산 서열이 포함된다. 가장 바람직하게는, 융합 단백질 은 SEQ ID NO: 29 로서 제시되는 아미노산 서열을 갖거나, SEQ ID NO: 28 로서 제시되는 뉴클레오티드 서열 (도 10A-10C) 에 의해 엔코딩되는 아미노산 서열을 갖는다.
본원에 기재된 IL-21/IL-21R 길항제, 예를 들어, 본원에 기재된 융합 단백질은, 또다른 기능성 분자, 예를 들어, 또다른 펩티드 또는 단백질 (예를 들어, Fab' 단편) 로 유도되거나 이에 연결될 수 있다. 예를 들어, 융합 단백질 또는 항체, 또는 항원-결합 부분은, 하나 이상의 다른 분자 본체, 그 중에서도 예컨대 항체 (예를 들어, 이중특이성 또는 다중특이성 항체), 독소, 방사성동위원소, 세포독성제 또는 세포증식 억제제에 작용적으로 연결될 (예를 들어, 화학적 커플링, 유전적 융합, 비공유 결합 또는 기타에 의해) 수 있다.
한 구현예에서, 본원에 기재된 IL-21/IL-21R 길항제, 예를 들어, 그의 약학 조성물을, 병용 요법으로, 즉, 기타 작용제, 예를 들어, 염증성 또는 자가면역 장애, 예를 들어, 관절염성 장애 (RA, 연소자성 류머티즘성 관절염, 골관절염, 건선성 관절염, 또는 강직성 척추염 포함); SLE; 사구체신염; 피부 염증성 장애 (예를 들어, 건선); 호흡기 장애 (예를 들어, 천식, COPD); 아토피성 장애; 섬유증성 장애 (예를 들어, 폐섬유증 또는 간섬유증); 장 염증성 장애 (예를 들어, IBD, 예를 들어, 크론병 또는 궤양성 대장염); 또는 이식/이식편 거부 중 하나 이상으로부터 선택되는 장애의 치료에 유용한 치료제와 병용으로 투여한다. 예를 들어, 병용 요법에는 하나 이상의 부가적 치료제, 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 사이토카인 및 성장 인자 억제제, 면역억제제, 항-염증제, 대사 억제제, 효소 억제제, 및 /또는 세포독성제 또는 세포증식 억제제 중 하나 이상과 함께 제형화되고/되거나 함께 투여되는, 하나 이상의 IL-21/IL-21R 길항제, 예를 들어, 항-IL-21 또는 항-IL-21R 항체 또는 그의 항원-결합 단편; IL-21R 융합 단백질; 가용성 IL-21R 수용체; 펩티드 억제제 또는 소분자 억제제) 가 포함된다.
하나 이상의 IL-21/IL-21R 길항제와 함께 제형화하고/하거나 함께 투여할 수 있는 바람직한 부가적 치료제의 예에는: TNF 길항제 (예를 들어, TNF 에 결합하는 키메라성, 인간화된, 인간 또는 시험관 내-생성된 항체, 또는 그의 항원-결합 단편; TNF 수용체의 가용성 단편, 예를 들어, p55 또는 p75 인간 TNF 수용체 또는 그의 유도체, 예를 들어, 75 kdTNFR-IgG (75 kDa TNF 수용체-IgG 융합 단백질, ENBREL™), p55 kDa TNF 수용체-IgG 융합 단백질; TNF 효소 길항제, 예를 들어, TNFα 전환 효소 (TACE) 억제제); IL-6, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-22 의 길항제; T 세포 및 B 세포 제거제 (예를 들어, 항-CD4 또는 항-CD22 항체); 소분자 억제제, 예를 들어, 메토트렉세이트 및 레플루노마이드; 시롤리무스 (라파마이신) 및 그의 유사체, 예를 들어, CCI-779; Cox-2 및 cPLA2 억제제; NSAID; p38 억제제, TPL-2, Mk-2 및 NFκb 억제제; RAGE 또는 가용성 RAGE; P-셀렉틴 또는 PSGL-I 억제제 (예를 들어, 소분자 억제제, 그에 대한 항체, 예를 들어, P-셀렉틴에 대한 항체); 에스트로겐 수용체 베타 (ERB) 작동제 또는 ERB-NFκb 길항제 중 하나 이상이 포함되나 이에 한정되는 것은 아니다. 하나 이상의 IL-21/IL-21R 길항제와 함께 제형화하고/하거나 함께 투여할 수 있는 가장 바람직한 부가적 치료제에는 TNF 수용체의 가용성 단편, 예를 들어, p55 또는 p75 인간 TNF 수용체 또는 그의 유도 체, 예를 들어, 75 kdTNFR-IgG (75 kDa TNF 수용체-IgG 융합 단백질, ENBREL™); 메토트렉세이트, 레플루노마이드, 또는 시롤리무스 (라파마이신) 또는 그의 유사체, 예를 들어, CCI-779 중 하나 이상이 포함된다.
또 다른 측면에서, 면역 세포 활성 (예를 들어, 성숙 T 세포 (성숙 CD8+, CD4+, 림프절 T 세포, 기억 T 세포), 성숙 NK 세포, B 세포, 항원 제시 세포 (APC), 예를 들어, 수지상 세포, 대식세포 또는 거핵세포, 또는 세포의 개체군, 예를 들어, 혼합된 또는 상당히 정제된 면역 세포 개체군 중 하나 이상의 활성의 감소 방법이 제공된다. 방법에는 면역 세포를 IL-21/IL-21R 길항제, 예를 들어, 본원에 기재된 길항제와, 면역 세포 활성을 감소시키기에 적합한 양으로 접촉시키는 것이 포함된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-21 폴리펩티드에 결합할 수 있는 IL-21R 폴리펩티드의 단편 이상, 예를 들어, IL-21R 의 가용성 단편 (예를 들어, 쥣과 또는 인간 IL-21R 의 세포외부 도메인; 예를 들어, SEQ ID NO: 2 (인간) 의 대략 아미노산 1-235, 1-236, 20-235, 20-236, 또는 SEQ ID NO: 10 (쥣과) 의 대략 아미노산 1-236, 20-236 또는, SEQ ID NO: 1 또는 SEQ ID NO: 9 의 해당하는 뉴클레오티드에 의해 엔코딩되는, 또는 이와 적어도 85%, 90%, 95%, 98% 이상 일치하는 서열을 포함하는 IL-21R 의 단편) 및, 예를 들어, 두 번째 부분, 예를 들어, 폴리펩티드 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD 및 IgE 를 포함하는 다양한 동종형의 면역글로불린 사슬, Fc 단편, 중쇄 불변 영역) 에 융합되는 단편을 포 함하는 융합 단백질을 특징으로 한다. 예를 들어, 융합 단백질에는 예를 들어, 인간 면역글로불린 Fc 사슬 (예를 들어, 인간 IgG, 예를 들어, 인간 IgG1 또는 인간 IgG1 의 돌연변이된 형태) 에 융합된 인간 IL-21R 의 세포외부 도메인, 예를 들어, SEQ ID NO: 2 의 대략 아미노산 1-235, 1-236, 20-235, 20-236 이 포함될 수 있다. 한 구현예에서, 인간 Fc 서열은 Fc 수용체 결합을 감소시키기 위해 야생형 서열로부터 하나 이상의 아미노산에서 돌연변이 (예를 들어, SEQ ID NO: 28 의 잔기 254 및 257 에서 돌연변이됨) 되었다. 다른 구현예에서, 융합 단백질에는 예를 들어, 쥣과 면역글로불린 Fc 사슬 (예를 들어, 쥣과 IgG, 예를 들어, 쥣과 IgG2a 또는 쥣과 IgG2a 의 돌연변이된 형태) 에 융합된 쥣과 IL-21R 의 세포외부 도메인, 예를 들어, SEQ ID NO: 10 (쥣과) 의 대략 아미노산 1-236, 20-236 이 포함될 수 있다. 융합 단백질에는 IL-21R 단편을 두 번째 부분에 연결하는 연결자 서열이 부가적으로 포함될 수 있다. 다른 측면에서, 발현, 검출 및/또는 단리 또는 정제를 용이하게 하기 위해 부가적인 아미노산 서열을 융합 단백질의 N- 또는 C-말단에 첨가할 수 있다.
또한 본 발명은 본원에 기재된 융합 단백질을 엔코딩하는 핵산 서열을 특징으로 한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 핵산을 함유하는 숙주 세포 및 벡터를 특징으로 한다. 바람직하게는, 숙주 세포는 진핵 세포, 예를 들어, 포유동물 세포, 곤충 세포, 또는 효모 세포, 또는 원핵 세포, 예를 들어, E. coli 이다. 예를 들어, 포유동물 세포는 배양된 세포 또는 세포주일 수 있다. 예시적 포유동물 세포에는 림프구 세포주 (예를 들어, NSO), 중국 햄스터 난소 세포 (CHO), COS 세포, 난모 세포, 및 유전자도입 동물로부터의 세포, 예를 들어, 포유동물 상피 세포가 포함된다. 예를 들어, 본원에 기재된 융합 단백질을 엔코딩하는 핵산을 유전자도입 동물에서 발현할 수 있다. 한 구현예에서, 핵산은 조직-특이적 프로모터 (예를 들어, 포유동물-특이적 프로모터) 의 조절 하에 있고, 항체는 유전자도입 동물에서 생성된다. 예를 들어, 융합 단백질은 유전자도입 동물, 예컨대 유전자도입 소, 돼지, 말, 양, 염소 또는 설치동물의 젖으로 분비된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 융합 단백질, 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 융합 단백질의 제조 방법을 제공한다. 방법은 하기를 포함한다: (a) 적합한 배양 배지 중에서 본 발명의 숙주 세포의 배양물을 키우고 (b) 상기 배양물로부터 융합 단백질을 정제함. 또한 상기 방법에 따라 제조되는 단백질이 제공된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 약학적으로 허용가능한 담체 및 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 IL-21/IL-21R 길항제 (예를 들어, 본원에 기재된 융합 단백질) 가 포함되는 조성물, 예를 들어, 약학 조성물을 제공한다. 한 구현예에서, 조성물, 예를 들어, 약학 조성물은, 2 가지 이상의 IL-21/IL-21R 길항제의 조합을 포함한다. 또한 IL-21/IL-21R 길항제 및 약물, 예를 들어, 치료제 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 사이토카인 및 성장 인자 억제제, 면역억제제, 항-염증제, 대사 억제제, 효소 억제제, 및/또는 세포독성제 또는 세포증식 억제제 중 하나 이상) 또는 항원, 예를 들어, 항원성 펩티드 및/또는 항원-제시 세포의 조합이 본 발명의 범주 내에 있다.
한 구현예에서, 약학 조성물에는 약학적으로 허용가능한 담체 중의 IL-21/IL-21R 길항제 및 하나 이상의 부가적 치료제가 포함된다. 조성물, 예를 들어, 약학 조성물 중에서, 하나 이상의 IL-21/IL-21R 길항제와 함께 제형화할 수 있는 바람직한 부가적 치료제의 예에는: TNF 길항제 (예를 들어, TNF 에 결합하는 키메라성, 인간화된, 인간 또는 시험관 내 생성된 항체, 또는 그의 항원-결합 단편; TNF 수용체의 가용성 단편, 예를 들어, p55 또는 p75 인간 TNF 수용체 또는 그의 유도체, 예를 들어, 75 kdTNFR-IgG (75 kDa TNF 수용체-IgG 융합 단백질, ENBREL™), p55 kDa TNF 수용체-IgG 융합 단백질; TNF 효소 길항제, 예를 들어, TNFα 전환 효소 (TACE) 억제제); IL-6, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-22 의 길항제; T 세포 및 B 세포 제거제 (예를 들어, 항-CD4 또는 항-CD22 항체); 소분자 억제제, 예를 들어, 메토트렉세이트 및 레플루노마이드; 시롤리무스 (라파마이신) 및 그의 유사체, 예를 들어, CCI-779; Cox-2 및 cPLA2 억제제; NSAID; p38 억제제, TPL-2, Mk-2 및 NFκb 억제제; RAGE 또는 가용성 RAGE; P-셀렉틴 또는 PSGL-1 억제제 (예를 들어, 소분자 억제제, 그에 대한 항체, 예를 들어, P-셀렉틴에 대한 항체); 에스트로겐 수용체 베타 (ERB) 작동제 또는 ERB-NFκb 길항제 중 하나 이상이 포함되나 이에 한정되는 것은 아니다. 하나 이상의 IL-21/IL-21R 길항제와 함께 제형화하고/하거나 함께 투여할 수 있는 가장 바람직한 부가적 치료제에는 TNF 수용체의 가용성 단편, 예를 들어, p55 또는 p75 인간 TNF 수용체 또는 그의 유도체, 예 를 들어, 75 kdTNFR-IgG (75 kDa TNF 수용체-IgG 융합 단백질, ENBREL™); 메토트렉세이트, 레플루노마이드, 또는 시롤리무스 (라파마이신) 또는 그의 유사체, 예를 들어, CCI-779 중 하나 이상이 포함된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 대상자, 예를 들어, 포유동물, 예를 들어, 인간에서의 아토피성 장애의 치료, 경감 또는 예방 방법을 특징으로 한다. 방법은, 대상자에게 IL-21/IL-21R 길항제를, 예를 들어, 장애를 치료, 경감 또는 예방하기에 적합한 양으로 또는 면역 세포 활성 및/또는 세포 수를 억제 또는 감소시키기에 적합한 양으로 투여하는 것을 포함한다. 한 구현예에서, 아토피성 장애는 알레르기성 천식이다. 또 다른 구현예에서, 아토피성 장애는 아토피성 피부염, 두드러기, 습진, 알레르기성 비염, 또는 알레르기성 위장염이다. 한 구현예에서, IL-21/IL-21R 길항제는 또 다른 치료제, 예를 들어, 사이토카인 억제제, 면역억제제, 항-염증제, 효소 억제제, 류코트리엔 길항제, 기관지 확장제, 베타 2-아드레날린수용체 작동제, 항무스카린성, 또는 비만 세포 안정제와 병용으로 투여할 수 있다. 아토피성 장애를 치료, 경감 또는 예방하기 위해 IL-21/IL-21R 길항제와 병용으로 투여할 수 있는 바람직한 치료제의 예에는, 예를 들어, TNF 길항제, IL-6 길항제, IL-12 길항제, IL-15 길항제, IL-17 길항제, IL-18 길항제, IL-22 길항제, T 세포-제거제, B 세포-제거제, 메토트렉세이트, 레플루노마이드, 시롤리무스 (라파마이신) 또는 그의 유사체, Cox-2 억제제, cPLA2 억제제, NSAID, 및 p38 억제제가 포함된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 대상자에서의 자가면역 장애의 치료, 경감 또 는 예방 방법을 특징으로 한다. 방법은 대상자에게 IL-21/IL-21R 길항제를, 예를 들어, 장애를 치료, 경감 또는 예방하기에 적합한 양으로 또는 면역 세포 활성 및/또는 세포 수를 억제 또는 감소시키기에 적합한 양으로 투여하는 것을 포함한다. 한 구현예에서, 자가면역 장애는 루푸스, 예를 들어, SLE 이다. 한 구현예에서, IL-21/IL-21R 길항제는 또 다른 치료제, 예를 들어, 사이토카인 억제제, 성장 인자 억제제, 면역억제제, 항-염증제, 대사 억제제, 효소 억제제, 세포독성제 또는 세포증식 억제제와 병용으로 투여할 수 있다. 자가면역 장애를 치료, 경감 또는 예방하기 위해 IL-21/IL-21R 길항제와 병용으로 투여할 수 있는 바람직한 치료제의 예에는, 예를 들어, TNF 길항제, IL-6 길항제, IL-12 길항제, IL-15 길항제, IL-17 길항제, IL-18 길항제, IL-22 길항제, T 세포-제거제, B 세포-제거제, 클로로퀴논, 히드록시클로로퀴논, 메토트렉세이트, 레플루노마이드, 시롤리무스 (라파마이신) 또는 그의 유사체, Cox-2 억제제, cPLA2 억제제, NSAID, 및 p38 억제제가 포함된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 대상자에서의 섬유증성 장애의 치료, 경감 또는 예방 방법을 특징으로 한다. 방법은 대상자에게 IL-21/IL-21R 길항제를, 예를 들어, 장애를 치료, 경감 또는 예방하기에 적합한 양으로 또는 면역 세포 활성 및/또는 세포 수를 억제 또는 감소시키기에 적합한 양으로 투여하는 것을 포함한다. 예를 들어, 대상자는 내부 기관의 섬유증 (예를 들어, 간섬유증, 신장섬유증 또는 폐섬유증), 피부 섬유증 장애, 또는 눈의 섬유증성 상태를 가지거나 이에 대한 위험이 있을 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 대상자에 대한 기관, 조직, 또는 세포의 이식 또는 이식술 방법을 특징으로 한다. 방법에는 대상자에게 IL-21/IL-21R 길항제를, 예를 들어, 이식 또는 이식술 전, 그 동안 또는 그 후에 투여하는 것이 포함된다. 이식/이식술되는 기관 및 조직은 예를 들어, 심장, 신장, 간, 폐, 췌장, 골수, 연골, 망막, 신경 조직, 및 그의 세포가 포함될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 한 구현예에서, IL-21/IL-21R 길항제는 또 다른 치료제, 예를 들어, 사이토카인 억제제, 성장 인자 억제제, 면역억제제, 항-염증제, 대사 억제제, 효소 억제제, 세포독성제 및 세포증식 억제제와 병용으로 투여한다. IL-21/IL-21R 길항제와 병용으로 투여할 수 있는 바람직한 치료제의 예에는, 예를 들어, 라파마이신, 시클로스포린, 항-CTLA-4 항체, 항-CD40 항체, 항-CD40L 항체, 및 항-CD154 항체가 포함된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 이식/이식편 거부의 증상 또는 이식/이식편 거부와 관련된 장애, 예를 들어, 섬유증 또는 이식편 대 숙주 질환 (GVHD) 에 대한 이식/이식편 수여자의 평가 및 치료 방법을 특징으로 한다. 방법에는 이식/이식편 거부의 증상을 갖는 대상자를 확인하고 IL-21/IL-21R 길항제를, 예를 들어, 이식 거부의 증상을 치료 또는 경감하기에 적합한 양으로 투여하는 것이 포함된다. 이식/이식편 거부의 증상에는 예를 들어, 염증, 저하된 기관 기능, 비정상 생검 및 섬유증이 포함된다. 또 다른 구현예에서, 본 발명은 IL-21/IL-21R 길항제의 투여에 의한, 이식/이식편 거부 또는 이식/이식편 거부와 관련된 장애의 치료, 경감 또는 예방 (예를 들어, 위험의 감소) 방법을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 대상자에서의 이식/이식편 거부 또는 이식/이식편 거부와 관련된 장애의 치료, 경감 또는 예방 방법을 특징으로 한다. 방법은 대상자에게 IL-21/IL-21R 길항제를 치료, 경감 또는 예방 (예를 들어, 위험의 감소) 하기에 적합한 양으로 또는 면역 세포 활성 및/또는 세포 수를 억제 또는 감소시키기에 적합한 양으로 투여하는 것을 특징으로 한다. 이식되는 기관 또는 조직에는, 예를 들어, 심장, 신장, 간, 폐, 췌장, 및 골수가 포함될 수 있다. 한 구현예에서, IL-21/IL-21R 길항제는 또 다른 치료제, 예를 들어, 사이토카인 억제제, 성장 인자 억제제, 면역억제제, 항-염증제, 대사 억제제, 효소 억제제, 세포독성제 또는 세포증식 억제제와 병용으로 투여할 수 있다. 이식/이식편 거부를 치료, 경감 또는 예방하기 위해 IL-21/IL-21R 길항제와 병용으로 투여할 수 있는 바람직한 치료제의 예에는, 예를 들어, 라파마이신, 시클로스포린, 항-CTLA-4 항체, 항-CD40 항체, 항-CD40L 항체, 및 항-CD154 항체가 포함된다.
하기 일련의 용어는 본원에서 서로 상호교환적으로 사용된다: "MU-1" 및 "IL-21R" 및 펩티드, 폴리펩티드, 및 단백질.
다르게 정의되지 않는다면, 본원에 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 당업자에 의해 통상 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것들과 유사 또는 등가인 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 시험에서 사용될 수 있더라도, 적합한 방법 및 재료가 하기에 기재된다. 본원에 언급된 모든 문헌, 특허 출원, 특허 및 기타 참조는 전체가 참고로서 인용된다. 상충되는 경우, 정의를 포함하는 본 명세서는 조정될 것이다. 또한, 재료, 방 법, 및 실시예는 단지 예시적인 것이고 제한하는 것으로 의도되는 것은 아니다.
본 발명의 기타 특징 및 장점은 하기 상세한 설명 및 청구항에서 명백해질 것이다.
도 1 은 쥣과 IL-21R/MU-1 의 전장 cDNA 서열을 묘사한다. 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 9 의 뉴클레오티드 1-2628 에 해당한다.
도 2A-2B 는 쥣과 및 인간 IL-21R/ MU-1 의 아미노산 서열을 묘사한다. 도 2A 는 쥣과 IL-21R/MU-1 의 아미노산 서열을 묘사한다 (SEQ ID NO: 10 의 아미노산 1-529 에 해당함). 10.1 의 점수 (굵은 글씨체) 를 갖는 아미노산 1-19 에서 예상되는 (SPScan 에 의해 예상됨) 선도 서열이 있다. SEQ ID NO: 10 의 아미노산 237-253 (밑줄쳐짐) 에서 예상되는 막통과 도메인이 있다. 예상되는 신호 모티프에는 하기 영역이 포함된다: Box 1: 아미노산 265-274 및 Box 2: 아미노산 310-324 (굵은 글씨체 및 밑줄쳐짐); 6 개의 티로신이 SEQ ID NO: 10 의 아미노산 위치 281, 319, 361, 368, 397, 및 510 에 위치한다. WSXWS 모티프 (SEQ ID NO: 8) 는 아미노산 잔기 214 ∼ 아미노산 잔기 218 (큰, 굵은 글씨체 내) 에 위치한다. 잠재적 STAT 도킹 부위에는 SEQ ID NO: 10 의 아미노산 393-398 및 아미노산 510-513 이 포함된다. 도 2B 는 인간 MU-1 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 2 에 해당함) 을 묘사한다. 예상되는 신호 서열의 위치 (SEQ ID NO: 2 의 대략 아미노산 1-19); WSXWS 모티프 (SEQ ID NO: 2 의 대략 아미노산 213-217); 및 막통과 도메인 (SEQ ID NO: 2 의 대략 아미노산 236-252, 236-253, 236-254 (밑줄 쳐짐)) 이 표시된다. 또한 잠재적 JAK 결합 부위, 신호 모티프 및 STAT 도킹 부위가 표시된다. 상기 부위의 대략적 위치는 상자로 표시된다.
도 3 은 인간 및 쥣과 MU-1 cDNA 서열 (각각, SEQ ID NO: 1 의 핵산 1-2665 및 SEQ ID NO: 9 의 핵산 1-2628 에 해당함) 의 GAP 비교를 묘사한다. HuMU-1 = 인간 MU-1, murMU-1 = 쥣과 MU-1. Gap 파라미터: Gap 중량 = 50, 평균 일치 = 10.000, 길이 중량 = 3, 평균 불일치 = 0.000, 일치 백분율 = 66.116.
도 4 는 인간 MU-1 단백질 (SEQ ID NO: 2 의 아미노산에 해당함) 및 쥣과 MU-1 단백질 (SEQ ID NO: 10 의 아미노산에 해당함) 의 GAP 비교를 묘사한다. 정렬은 BLOSUM62 아미노산 치환 매트릭스에 의해 생성되었다 (Henikoff and Henikoff (1992) Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A. 89:10915-19). Gap 파라미터 = Gap 중량: 8, 평균 일치 = 2.9 12, 길이 중량 = 2, 평균 불일치 = -2.003; 일치 백분율 = 65.267.
도 5 는 인간 MU-1 (SEQ ID NO: 2 에 해당함), 쥣과 MU-1 (SEQ ID NO: 10 에 해당함), 및 인간 IL2 베타 사슬 (GENBANK® Accession No. M26062) 의 아미노산의 다중 서열 정렬을 묘사한다. 선도 및 막통과 도메인은 밑줄쳐 있다. 보존된 사이토카인 수용체 모듈 모티프는 굵은 글씨체로 표시된다. 잠재적 신호 영역은 밑줄과 굵은 글씨체로 표시된다.
도 6 은 MU-1 을 통한 신호를 묘사한다. MU-1 은 클론 E7 EPO-MU-1 키메라에서 STAT 5 를 인산화시킨다. 실시예 3 에서 구체화된 조건 하에서, MU-1 을 통한 신호는 시험된 모든 시간 지점에서 STAT 5 의 인산화를 야기한다. 대조군 또는 키메라성 BAF-3 세포에 IL-3 로의 처리는 STAT 3 의 인산화를 야기하나, STAT 1 또는 5 는 야기하지 않는다.
도 7A-7B 는 아미노 말단에서 꿀벌 선도 서열 및 His6 택 (SEQ ID NO: 23 의 아미노산 1-44) 에 융합된 인간 IL-21R 단량체의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 2 의 아미노산 20-235 에 해당함) 의 정렬을 묘사한다. 뉴클레오티드 및 아미노산 서열은 각각, SEQ ID NO: 22 및 SEQ ID NO: 23 으로서 제시된다.
도 8A-8C 는 인간 면역글로불린 G1 (IgG1) Fc 서열 (SEQ ID NO: 25 의 아미노산 244-467 에 해당함) 에 연결자 (SEQ ID NO: 25 의 아미노산 236-243 에 해당함) 를 통해 C-말단에서 융합된 인간 IL-21R 세포외부 도메인 (SEQ ID NO: 2 의 아미노산 1-235 에 해당함) 의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열의 정렬을 묘사한다. 뉴클레오티드 및 아미노산 서열은 각각, SEQ ID NO: 24 및 SEQ ID NO: 25 로서 제시된다.
도 9A-9C 는 인간 면역글로불린 G1 (IgG1) Fc 서열 (SEQ ID NO: 27 의 아미노산 244-467 에 해당함) 및 His6 서열 택 (SEQ ID NO: 27 의 아미노산 468-492 에 해당함) 의 정렬에 연결자 (SEQ ID NO: 27 의 아미노산 236-243 에 해당함) 를 통해 C-말단에서 융합된 인간 IL-21R 세포외부 도메인 (SEQ ID NO: 2 의 아미노산 1-235 에 해당함) 의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열, 을 묘사한다. 뉴클레오티드 및 아미노산 서열은 각각, SEQ ID NO: 26 및 SEQ ID NO: 27 로서 제시된다.
도 10A-10C 는 인간 면역글로불린 G1 (IgG1) Fc 돌연변이된 서열 (SEQ ID NO: 29 의 아미노산 244-467 에 해당함) 에 연결자 (SEQ ID NO: 29 의 아미노산 236-243 에 해당함) 를 통해 C-말단에서 융합된 인간 IL-21R 세포외부 도메인 (SEQ ID NO: 2 의 아미노산 1-235 에 해당함) 의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열의 정렬을 묘사한다. 인간 Fc 서열은 Fc 수용체 결합을 감소시키기 위해 야생형 서열로부터 잔기 254 및 257 에서 돌연변이되어 있다. 뉴클레오티드 및 아미노산 서열은 각각, SEQ ID NO: 28 및 SEQ ID NO: 29 로서 제시된다.
도 11A-11B 는 로돕신 서열 택에 C-말단에서 융합된 인간 IL-21R 세포외부 도메인 (SEQ ID NO: 2 의 아미노산 1-235 에 해당함) 의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열의 정렬을 묘사한다. 뉴클레오티드 및 아미노산 서열은 각각, SEQ ID NO: 30 및 SEQ ID N0:31 로서 제시된다.
도 12A-12C 는 EK 분열 부위 및 돌연변이된 IgG1 Fc 영역 (SEQ ID NO: 33 의 아미노산 236-470 에 해당함) 에 C-말단에서 융합된 인간 IL-21R 세포외부 도메인 (SEQ ID NO: 2 의 아미노산 1-235 에 해당함) 의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열의 정렬을 묘사한다. 뉴클레오티드 및 아미노산 서열은 각각, SEQ ID NO: 32 및 SEQ ID NO: 33 으로서 제시된다.
도 13A-13B 는 마우스 면역글로불린 G2a (IgG2a) 에 C-말단에서 융합된 쥣과 IL-21R 세포외부 도메인의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열의 정렬을 묘사한다. 뉴클레오티드 (유전자) 및 아미노산 서열은 각각, SEQ ID NO: 34 및 SEQ ID NO: 35 로서 제시된다.
도 14A-14B 는 Flag 및 His6 서열 택에 C-말단에서 융합된 쥣과 IL-21R 세포외부 도메인의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열의 정렬을 묘사한다. 뉴클레오티드 (유전자) 및 아미노산 서열은 각각, SEQ ID NO: 36 및 SEQ ID NO: 37 로서 제시된다.
도 15A-15B 는 Flag 및 His6 서열 택에 C-말단에서 융합된 (꿀벌 선도) 쥣과 IL-21R 세포외부 도메인의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열의 정렬을 묘사한다. 뉴클레오티드 (유전자) 및 아미노산 서열은 각각, SEQ ID NO: 38 및 SEQ ID NO: 39 로서 제시된다.
도 16 은 콜라겐-유도 관절염 (CIA) 마우스 모델을 사용하는 실험에 대한 예방적, 치료적 및 반-치료적 처리를 요약하는 시간계획표이다.
도 17 은 처리 후 날짜의 함수로서 반-치료적 CIA 마우스에서의 MuIL-21RFc (200 ㎍/마우스 3x/주) 의 효과를 묘사하는 그래프이다. 마우스 Ig (200 ㎍/마우스 3x/주) 를 대조군으로서 사용하였다.
도 18A-18B 는 음성 대조군 (패널 B) 과 비교하여 CIA (패널 A) 마우스의 관절염 발에서의 증가된 IL-21R mRNA 의 발현을 나타내는 사진이다.
도 19 및 20 은 IgG 대조군과 비교하여 muIL-21RFc 및 mEnbrel 로 처리된 래트에서 IBD-유사 증상의 임상 점수의 뚜렷한 감소를 나타내는 선형 그래프를 묘사한다. 도 19, 우측 패널은, 정상 인간 소장의 림프구 및 림프절에서의 MU-1 mRNA 의 제자리 (in situ) 혼성화를 나타내는 사진이다.
도 21 은 MuIL-21RFc 의 투여 후, 래트 IBD 모델에서의 질환 경중도의 조직학적 점수의 감소를 요약하는 표이다.
도 22 는 IL-21, muIL-21RFc 또는 대조군 (GFP) 을 발현하는 레트로바이러스성 형질도입된 T 세포를 주사한 마우스에서의 입양 전달 후 날짜에 대한 이식편 생존 백분율을 나타내는 선형 그래프이다.
도 23 은 MuIL-21RFc 의 투여 후 CD45RB고 입양 전달 모델에서의 건선성 병변의 임상 점수의 향상을 나타내는 선형 그래프이다. 도 23, 좌측 면은 MuIL-21RFc 로 처리 전 및 후 마우스의 사진을 나타낸다.
도 24 는 인산 완충 식염수 (PBS) 또는 OVA 로 유발된 난백알부민 (OVA)-감작된 마우스의 기도 과민감성 (AHR) 의 수치를 묘사하는 선형 그래프이다. 마우스에게 순차적으로 증가하는 투여량의 메타콜린을 투여하였다. Penh (증가된 중단) 변화는 AHR 의 지표이다.
도 25A-25D 는 PBS 또는 OVA 로 유발된 OVA-감작된 마우스의 기관지 폐포 세척액 (BALF) 에서의 세포 수를 묘사하는 막대 그래프이다. 도 25A 는 총 BALF 세포 수를 묘사한다. 도 25B 는 BALF 에서의 호산구의 수를 묘사한다. 도 25C 는 BALF 에서의 림프구의 수를 묘사한다. 도 25D 는 BALF 에서의 중성구의 수를 묘사한다. 채워지지 않은 막대는 PBS-유발된 WT 마우스를 표시한다; 채워진 막대는 OVA-유발된 WT 마우스를 표시한다; 회색 막대는 PBS-유발된 IL-21R -/- 마우스를 표시한다; 빗금 막대는 OVA-유발된 IL-21R -/- 마우스를 표시한다. * 는 Mann-Whitney U 검증에 의해 측정된 p<0.05 을 나타낸다.
도 26 및 27 은 OVA 로 유발된 OVA-감작된 마우스의 BALF 에서의 사이토카인의 수치를 묘사하는 그래프이다. 도 26 은 TNFα 및 IL-5 의 수치를 묘사한다. 도 27 은 IL-13 의 수치를 묘사한다. 채워지지 않은 막대는 PBS-유발된 WT 마우스를 표시한다; 채워진 막대는 OVA-유발된 WT 마우스를 표시한다; 회색 막대는 PBS-유발된 IL-21R -/- 마우스를 표시한다; 빗금 막대는 OVA-유발된 IL-21R -/- 마우스를 표시한다. * 는 Mann-Whitney U 검증에 의해 측정된 p<0.05 을 나타낸다.
도 28A-28B 는 OVA 또는 PBS 로 유발된 OVA-감작된 마우스에서의 혈청 IgE 의 수준을 묘사하는 막대 그래프이다. 도 28A 는 총 혈청 IgE 의 수치를 묘사한다. 도 28B 는 항-OVA 특이적 IgE 의 수치를 묘사한다. 채워지지 않은 막대는 PBS-유발된 WT 마우스를 표시한다; 채워진 막대는 OVA-유발된 WT 마우스를 표시한다; 회색 막대는 PBS-유발된 IL-21R -/- 마우스를 표시한다; 빗금 막대는 OVA-유발된 IL-21R -/- 마우스를 표시한다. * 는 Mann-Whitney U 검증에 의해 측정된 p<0.05 을 나타낸다.
도 29A-29D 는 MuIL-21RFc 또는 대조군으로 처리 후 MRL-Fas Ipr 마우스에서 순환하는 dsDNA 자가항체의 수치를 묘사하는 그래프이다. 도 29A 는 IgG1 의 수치를 묘사한다. 도 29B 는 IgG2a 의 수치를 묘사한다. 도 29C 는 IgG2b 의 수치를 묘사한다. 도 29D 는 IgG3 의 수치를 묘사한다. * 는 Mann-Whitney U 검증에 의해 측정된 p<0.05 을 나타낸다.
도 30A-30D 는 MuIL-21RFc 또는 대조군으로 처리 후 MRL-Fas Ipr 마우스에서 순환하는 총 IgG 를 묘사하는 그래프이다. 도 30A 는 IgG1 의 수치를 묘사한다. 도 30B 는 IgG2a 의 수치를 묘사한다. 도 30C 는 IgG2b 의 수치를 묘사한다. 도 30D 는 IgG3 의 수치를 묘사한다. * 는 Mann-Whitney U 검증에 의해 측정된 p<0.05 을 나타낸다.
도 31 은 염소 항-마우스 IgG-FITC 로 염색된 마우스 신장 조각에서의 형광 수치를 묘사하는 그래프이다.
도 32 는 면역 반응에서의 IL-21 의 예시적 효과를 묘사하는 개략적 도표이다.
도 33 은 IL-21/IL-21R 경로를 억제하기 위한 예시적 전략을 묘사하는 개략적 도표이다.
도 34 는 예시적 수용성 IL-21RFc 수용체 융합 단백질을 묘사하는 개략적 도표이다.
도 35 는 E. tenella ("Etenella") 로 자극된 마우스의 MuIL-21RFc-처리된 및 대조군-처리된 군의 평균 건선 점수를 묘사하는 선형 그래프이다.
도 36 은 대조군-처리된 마우스와 비교하여 MuIL-21RFc 로 처리된 E. tenella-자극된 마우스에서의 건선 증상의 발병의 지연 및 감소를 요약하는 표이다.
도 37 은 대조군-처리된 마우스와 비교하여 MuIL-21RFc 로 처리된 E. tenella-자극된 마우스에서의 중량 손실의 감소를 묘사하는 선형 그래프이다. 중량 지수는 초기 중량에 대해 측정된 중량 비로서 정의된다.
도 38A 는 대조군-처리된 마우스와 비교하여 MuIL-21RFc 로 처리된 E. tenella-자극된 마우스에서의 평균 변 점수의 감소를 묘사하는 선형 그래프이다.
도 38B 는 전달 후 제 77 일에 각 처리 군의 개별 E. tenella-자극된 마우스의 평균 변 점수를 묘사하는 그래프이다.
도 39 는 도 38A 에서 묘사된 데이터를 요약하는 표이다.
도 40A 는 대조군-처리된 마우스와 비교하여 MuIL-21RFc 로 처리된 E. tenella-자극된 마우스에서의 혈청 IFN-γ 수치를 묘사하는 그래프이다.
도 40B 는 대조군-처리된 마우스와 비교하여 MuIL-21RFc 로 처리된 E. tenella-자극된 마우스에 대한 변 점수를 묘사하는 그래프이다.
도 41 은 IL-21 처리 후 활성화된 CD45RBhi 및 CD45RBlo 세포 내로의 3H-티미딘 혼입을 묘사하는 그래프이다.
도 42A-B 는 IL-21 처리 후 활성화된 CD45RBhi 세포에 의한 사이토카인의 분비 증가를 묘사하는 막대 그래프이다.
도 43 은 MuIL-21RFc 처리 후 활성화된 CD45RBhi 세포에 의한 사이토카인의 분비 감소를 묘사하는 막대 그래프이다.
도 44A-B 는, SLE 의 GVHD 모델에서, B6 bm12 비장 세포를 이식받은 IL-21R 유전자결손 마우스는 항-dsDNA 자가항체 (A) 를 만들지 않고, 상기 마우스 (B) 의 신장에서 IgG 축적이 관찰되지 않는 것을 묘사하는 막대 (A) 및 산발 (B) 그래프이다.
인터루킨-21 (IL-21) 또는 IL-21 수용체 ("IL-21R" 또는 "MU-1") 의 길항제를 사용하여 인터루킨-21 (IL-21)/IL-21 수용체 (MU-1) 활성을 억제하기 위한 방법 및 조성물이 기재된다. IL-21/IL-21R 길항제를, 예를 들어, 염증성 또는 자가면역 장애 (예를 들어, 성숙 T 세포 (성숙 CD8+, 성숙 CD4+ T 세포), 성숙 NK 세포, B 세포, 대식세포 및 거핵세포 중 하나 이상의 비정상 활성과 관련된 장애, 이식/이식편 거부, 건선 및 자가면역 장애 예컨대 류머티즘성 관절염 및 IBD 을 포함) 의 치료 또는 예방을 위해 생체 내 면역 억제를 유도하기 위해 사용할 수 있다.
한 구현예에서, 본 발명자들은 Fc 면역글로불린 영역에 융합된 IL-21R 의 세포외부 도메인이 포함되는 중화 융합 단백질의 사용에 의한 IL-21R 활성의 감소가, 콜라겐-유도 관절염 (CIA) 동물 모델 (실시예 7) 뿐 아니라, IBD (실시예 9 및 11), 이식편 거부 (실시예 10), 건선 (실시예 11), 및 루푸스 (실시예 13) 에 대한 동물 모델에서의 염증성 증상을 경감한다는 것을 제시하였다. IL-21R mRNA 의 발현은 CIA 마우스의 발에서 상향조절된다 (실시예 8). IL-21R 결핍 마우스는 항원-유도 기도 염증의 감소를 나타낸다 (실시예 12). 따라서, IL-21/IL-21R 활성을 상쇄하는 IL-21R 결합제는, 예를 들어, 염증성 또는 자가면역 장애 (예를 들어, 사구체신염, 이식/이식편 거부, 건선, 아토피성 장애, 천식, 자가면역 장애 예컨대 류머티즘성 관절염 및 SLE, 및 IBD (예를 들어, 크론병, 궤양성 대장염)) 의 치료 또는 예방을 위해 생체 내 면역 억제를 유도하기 위해 사용할 수 있다.
본 발명을 더욱 쉽게 이해할 수 있게 하기 위해서, 특정 용어가 처음으로 정의된다. 부가적인 정의는 상세한 설명에 걸쳐 언급된다.
본원에 사용되는 용어 "MU-1" "MU-1 단백질" "인터루킨-21 수용체" 또는 "IL-21R" 는 또한 NILR 로 공지된 계열 I 사이토카인 족 수용체를 말한다 (WO 01/85792; Parrish-Novak et al. (2000) Nature 408:57-63; Ozaki et al. (200O) Proc. Natl . Acad . Sci U.S.A. 97:11439-444). MU-1 은 IL-2 및 IL-15 수용체, 및 IL-4α 의 공유된 β 사슬과 상동이다 (Ozaki et al. (2000) supra). 리간드 결합 시, IL-21R/MU-1 은 공통 γ 사이토카인 수용체 사슬 (γc) 과 상호작용하고 (Asao et al. (2001) J. Immunol . 167:1-5), STAT1 및 STAT3 (Asao et al. (2001)) 또는 STAT5 (Ozaki et al. (2000)) 의 인산화를 유도할 수 있다. MU-1 은 넓게 퍼진 림프 조직 분포를 보인다. 용어 "MU-1" 은 IL-21 (바람직하게는 포유동물, 예를 들어, 쥣과 또는 인간 IL-21) 과 상호작용, 예를 들어, 이에 결합하고 하기 특징 중 하나를 가질 수 있는 수용체 (바람직하게는 포유동물, 예를 들어, 쥣과 또는 인간 기원) 를 말한다: (i) 자연적으로 발생하는 포유동물 MU-1 폴리펩티드 IL-21R/MU-1 의 아미노산 서열 또는 그의 단편, 예를 들어, SEQ ID NO: 2 (인간) 또는 SEQ ID NO: 10 (쥣과) 으로서 제시되는 아미노산 서열 또는 그의 단편; (ii) SEQ ID NO: 2 (인간) 또는 SEQ ID NO: 10 (쥣과) 으로서 제시되는 아미노산 서열 또는 그의 단편과 실질적으로 상동인, 예를 들어, 적어도 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 상동인 아미노산 서열; (iii) 자연적으로 발생하는 포유동물 IL-21R/MU-1 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편 (예를 들어, SEQ ID NO: 1 (인간) 또는 SEQ ID NO: 9 (쥣과) 또는 그의 단편) 에 의해 엔코딩되는 아미노산 서열; (iv) SEQ ID NO: 1 (인간) 또는 SEQ ID NO: 9 (쥣과) 로서 제시되는 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편과 실질적으로 상동인, 예를 들어, 적어도 85%, 90%, 95%, 98%, 99% 상동인 뉴클레오티드 서열에 의해 엔코딩되는 아미노산 서열; (v) 자연적으로 발생하는 IL-21R/MU-1 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편, 예를 들어, SEQ ID NO: 1 (인간) 또는 SEQ ID NO: 9 (쥣과) 또는 그의 단편으로 감소한 뉴클레오티드 서열에 의해 엔코딩되는 아미노산 서열; 또는 (vi) 엄격한 조건, 예를 들어, 매우 엄격한 조건 하에서 상기 뉴클레오티드 서열 중 하나와 혼성화되는 뉴클레오티드 서열.
IL-21R/MU-1 은 포유동물, 바람직하게는, 인간 기원의 것이다. 인간 IL-21R/MU-1 의 뉴클레오티드 서열 및 예상되는 아미노산 서열은 각각, SEQ ID NO: 1 및 SEQ ID NO: 2 에서 제시된다. 인간 IL-21R/MU-1 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 2; 도 2B) 의 분석은 하기 구조 특징으로 밝혀졌다: 선도 서열 (SEQ ID NO: 2 의 대략 아미노산 1-19 (도 2B)); WSXWS 모티프 (SEQ ID NO: 2 의 대략 아미노산 213-217); 막통과 도메인 (SEQ ID NO: 2 의 대략 아미노산 236-252 (도 2B)); SEQ ID NO: 2 의 대략 아미노산 1-235 로부터의 세포외부 도메인; 및 SEQ ID NO: 2 의 대략 253-538 로부터의 세포내 도메인. 성숙 인간 IL-21R/MU-1 은 SEQ ID NO: 2 의 아미노산 20-538 의 서열을 갖는 것으로 여겨진다.
IL-21R/MU-1 cDNA 는 1998 년 3 월 10 일에, 접근 번호 ATCC 98687 로서 미국 미생물 보존센터 (American Type Culture Collection) 에 기탁되었다.
전장보다 짧은 IL-21R/MU-1 단백질의 임의의 형태를, IL-21 폴리펩티드에 결합하는 능력을 유지한다면, 본 발명의 방법 및 조성물에서 사용할 수 있다. 전장보다 짧은 IL-21R/MU-1 단백질, 예를 들어, 가용성 IL-21R 을, 숙주 세포에서 전장 MU-1 단백질을 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드의 해당하는 단편을 발현시켜 제조할 수 있다. 또한 상기 해당하는 폴리뉴클레오티드 단편은 본 발명의 일부이다. 상기 기재된 바와 같은 개질된 폴리뉴클레오티드는, 적합한 원하는 결손 돌연변이체의 제작, 특정부위 돌연변이화 방법을 포함하는 표준 분자생물학 기술에 의해, 또는 적합한 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용하는 폴리머라아제 연쇄 반응에 의해 제조할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같은 "가용성 IL-21R/MU-1 폴리펩티드" 는 막 내에 그 자체가 고정될 수 없는 IL-21R/MU-1 폴리펩티드이다. 이러한 가용성 폴리펩티드에는, 예를 들어, 폴리펩티드를 고정하기 위한 막-걸침 (spanning) 도메인의 충분한 부분이 결여되거나 막-걸침 도메인이 기능이 없도록 개질되는 MU-1 또는 IL-21R 폴리펩티드, 예를 들어, IL-21R 의 가용성 단편 (예를 들어, 쥣과 또는 인간 IL-21R 의 세포외부 도메인을 포함하는 IL-21R 의 단편에는 SEQ ID NO: 2 (인간) 의 대략 아미노산 1-235, 1-236, 20-235, 20-236 의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 10 (쥣과) 의 대략 아미노산 1-236, 20-236 의 아미노산 서열이 포함된다) 가 포함된다. 가용성 IL-21R/MU-1 폴리펩티드에는 예를 들어, 두 번째 부분, 예를 들어, 폴리펩티드 (예를 들어, 면역글로불린 사슬, GST, Lex-A 또는 MBP 폴리펩티드 서열) 에 융합되는 것이 부가적으로 포함될 수 있다. 예를 들어, 융합 단백질에는 IL-21 에 결합할 수 있는 IL-21R 폴리펩티드의 단편 이상, 예를 들어, IL-21R 의 가용성 단편; 예를 들어, 쥣과 또는 인간 IL-21R 의 세포외부 도메인 (예를 들어, SEQ ID NO: 2 (인간) 의 대략 아미노산 1-235, 1-236, 20-235, 20-236, 또는 SEQ ID NO: 10 (쥣과) 의 대략 아미노산 1-236, 20-236) 을 포함하는 IL-21R 의 단편이 두 번째 부분, 예를 들어, 폴리펩티드 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD 및 IgE 를 포함하는 다양한 동종형의 면역글로불린 사슬, Fc 단편, 중쇄 불변 영역) 에 융합된 것이 포함될 수 있다.
용어 "인터루킨-21" 또는 "IL-21" 은 IL-2, IL-4 및 IL-15 과 서열 상동을 나타내는 사이토카인을 말한다 (Parrish-Novak et al. (2000) Nature 408:57-63). 인터루킨 사이토카인 간의 낮은 서열 상동에도 불구하고, 사이토카인은 계열의 대표적인 "4-나선형-번들" 구조 내의 공통의 주름을 공유한다. 그것은 활성화된 CD4+ T 세포에서 일차적으로 발현되고, NK, B 및 T 세포에 영향을 갖는 것으로 보고되어 있다 (Parrish-Novak et al. (2000) supra; Kasaian et al. (2002) supra). IL-21 은 IL-21R (또한 본원에서 MU-1 및 NILR 로서 언급됨) 에 결합한다. IL-21 결합 시, IL-21R 의 활성화는 STAT5 또는 STAT3 신호를 야기한다 (Ozaki et al. (2000) supra). 용어 "IL-21" 또는 "IL-21 폴리펩티드" 는 IL-21R (바람직하게는 포유동물, 예를 들어, 쥣과 또는 인간 IL-21) 과 상호작용, 예를 들어, 이에 결합하고 하기 특징 중 하나를 가질 수 있는 단백질 (바람직하게는 포유동물, 예를 들어, 쥣과 또는 인간 기원) 을 말한다: (i) 자연적으로 발생하는 포유동물 IL-21 의 아미노산 서열 또는 그의 단편, 예를 들어, SEQ ID NO: 19 (인간) 로서 제시되는 아미노산 서열 또는 그의 단편; (ii) SEQ ID NO: 19 (인간) 로서 제시되는 아미노산 서열 또는 그의 단편과 실질적으로 상동인, 예를 들어, 적어도 85%, 90%, 95%, 98%, 99% 상동인 아미노산 서열; (iii) 자연적으로 발생하는 포유동물 IL-21 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편 (예를 들어, SEQ ID NO: 18 (인간) 또는 그의 단편) 에 의해 엔코딩되는 아미노산 서열; (iv) SEQ ID NO: 18 (인간) 로서 제시되는 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편과 실질적으로 상동인, 예를 들어, 적어도 85%, 90%, 95%, 98%, 99% 상동인 뉴클레오티드 서열에 의해 엔코딩되는 아미노산 서열; (v) 자연적으로 발생하는 IL-21 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편, 예를 들어, SEQ ID NO: 19 (인간) 또는 그의 단편으로 감소한 뉴클레오티드 서열에 의해 엔코딩되는 아미노산 서열; 또는 (vi) 엄격한 조건, 예를 들어, 매우 엄격한 조건 하에서 상기 뉴클레오티드 서열 중 하나와 혼성화되는 뉴클레오티드 서열.
MU-1 또는 IL-21R 폴리펩티드의 "생물학적 활성" 이라는 용어는 하기를 포함하나 이에 한정되지 않는, 해당하는 성숙 MU-1 단백질의 생물학적 활성 중 하나 이상을 말한다: (1) IL-21 폴리펩티드 (예를 들어, 인간 IL-21 폴리펩티드) 와 상호작용, 예를 들어, 이에 결합하고; (2) 신호 전달 분자, 예를 들어, γc, JAK1 과 결합하고; (3) stat 단백질, 예를 들어, STAT5 및/또는 STAT3 의 인산화 및/또는 활성화를 촉진하고; 및/또는 (4) 면역 세포, 예를 들어, T 세포 (CD8+, CD4+ T 세포), NK 세포, B 세포, 대식세포 및 거핵세포) 의 증식, 분화, 효과기 세포 기능, 세포용해성 활성, 사이토카인 분비, 및/또는 생존을 조정, 예를 들어 자극 또는 감소시킴.
본원에서 사용되는 바와 같은, 본 발명의 방법에서 사용되는 "IL-21/IL-21R 길항제" 는 IL-21R/MU-1 폴리펩티드의 하나 이상의 생물학적 활성을 감소, 억제 또는 그렇지 않으면 소멸시키는 작용제를 말한다. 한 바람직한 구현예에서, 길항제는 IL-21R/MU-1 폴리펩티드와 상호작용, 예를 들어, 결합한다. 또다른 바람직한 구현예에서, 길항제는 IL-21 폴리펩티드와 상호작용, 예를 들어, 이에 결합한다. IL-21/IL-21R 길항제를 사용하는 길항 작용이 반드시 IL-21R/MU-1 폴리펩티드 및/또는 IL-21 폴리펩티드의 생물학적 활성의 총체적인 제거를 나타내는 것은 아니다.
본원에서 사용되는 바와 같은, IL-21/IL-21R 길항제의 "치료적 유효량" 은 장애의 하나 이상의 증상의 치유, 경중도의 감소, 경감 또는 예방에 대상자, 예를 들어, 인간 환자에게 단일 또는 다중 투여량의 투여 시, 또는 이러한 치료 부재시 예상되는 것 이상으로 대상자의 생존을 연장시키기에 효과적인 작용제의 양을 말한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, IL-21/IL-21R 길항제의 "예방학적 유효량" 은 장애, 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 장애의 발병 또는 재발을 예방 또는 지연하기에, 대상자, 예를 들어, 인간 환자에게 단일 또는 다중 투여량의 투여 시 효과적인 IL-21/IL-21R 길항제의 양을 말한다.
예를 들어, 두 상태 사이의 양적인 차이를 표시하는 용어 "유도하다" "억제하다" "효력이 증가하다" "향상되다" "증가하다" "감소하다" 등은 두 상태 사이에 통계적으로 뚜렷한 차이 이상을 말한다.
본 문맥에서 용어 "병용으로" 는 작용제를 실질적으로 동시적으로, 동시에 또는 연속적으로 제공하는 것을 의미한다. 연속적으로 제공하는 경우, 두 번째 화합물의 투여시, 두 화합물 중 첫 번째가 바람직하게는 치료 부위 또는 대상자에서 여전히 유효한 농도로 검출이 가능하다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "융합 단백질" 은 둘 이상의 작동적으로 관련된, 예를 들어, 연결된, 부분, 예를 들어, 단백질 부분을 함유하는 단백질을 말한다. 바람직하게는, 부분은 공유적으로 관련된다. 부분은 직접 관련 또는 공간자 또는 연결자를 통해 연결될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "항체" 는 하나 이상의, 바람직하게는 2 개의, 중쇄 (H) 가변 영역 (본원에서 VH 로서 약칭됨), 및 하나 이상의, 바람직하게는 2 개의 경쇄 (L) 가변 영역 (본원에서 VL 로서 약칭됨) 을 포함하는 단백질을 말한다. VH 및 VL 영역은 더욱 보존된, "골격 영역" (FR) 이라고 불리는 영역으로 산재된, "상보성 결정 영역" ("CDR") 이라고 불리는 과가변 영역으로 추가로 세분화될 수 있다. 골격 영역 및 CDR 의 범위는 이전에 정의되어 있다 (예를 들어, 본원에 참조로서 인용되는 문헌 [Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest , Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242], 및 [Chothia et al. (1987) J. Mol. Biol. 196:901-17] 참고). 각 VH 및 VL 은 하기 순서: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4 로 아미노-말단에서 카르복시-말단으로 배열된 3 개의 CDR 및 4 개의 FR 로 구성된다.
항체는 중쇄 및 경쇄 불변 영역을 추가로 포함할 수 있어, 각각 면역글로불린 중쇄 및 경쇄를 형성한다. 한 구현예에서, 항체는 2 개의 면역글로불린 중쇄 및 2 개의 면역글로불린 경쇄의 4 량체이고, 여기서 면역글로불린 중쇄 및 경쇄는, 예를 들어, 디술피드 결합에 의해 서로 연결된다. 중쇄 불변 영역은 3 개의 도메인, CH1, CH2 및 CH3 으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인, CL 로 구성된다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 전형적으로 면역계의 다양한 세포 (예를 들어, 효과기 세포) 및 정규 보체계의 제 1 성분 (C1q) 을 포함하는 숙주 조직 또는 인자에 대한 항체의 결합을 매개한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "면역글로불린" 은 면역글로불린 유전자에 의해 실질적으로 엔코딩되는 하나 이상의 폴리펩티드로 이루어지는 단백질을 말한다. 인지되는 인간 면역글로불린 유전자에는 카파, 람다, 알파 (IgA1 및 IgA2), 감마 (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), 델타, 입실론 및 뮤 불변 영역 유전자 뿐 아니라, 무수한 면역글로불린 가변 영역 유전자가 포함된다. 전장 면역글로불린 "경쇄" (대략 25 KDa 또는 214 아미노산) 는 NH2-말단에서 가변 영역 유전자 (대략 110 아미노산) 및 COOH-말단에서 카파 또는 람다 불변 영역 유전자에 의해 엔코딩된다. 전장 면역글로불린 "중쇄" (대략 50 kDa 또는 446 아미노산) 는, 가변 영역 유전자 (대략 116 아미노산) 및 기타 상기 언급된 불변 영역 유전자 중 하나, 예를 들어, 감마 (대략 330 아미노산을 엔코딩함) 에 의해 유사하게 엔코딩된다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "동종형" 은 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 엔코딩되는 항체 계열 (예를 들어, IgM 또는 IgG1) 을 말한다.
본원에서 사용되는 바와 같은 항체의 "항원-결합 단편" (또는 단순히 "항체 부분" 또는 "단편") 이라는 용어는, 항원 (예를 들어, CD3) 에 특이적으로 결합할 수 있는 능력을 보유한 전장 항체의 하나 이상의 단편을 말한다. 항체의 "항원-결합 단편" 이라는 용어에 포함되는 결합 단편의 예에는 (i) Fab 단편, VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어지는 1 가 단편; (ii) F(ab')2 단편, 경첩 영역에서 디술피드 연결에 의해 연결된 2 개의 Fab 단편을 포함하는 2 가 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 이루어지는 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 가지의 VL 및 VH 도메인으로 이루어지는 Fv 단편, (v) dAb 단편 (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), 이것은 VH 도메인으로 이루어짐; 및 (vi) 단리된 상보성 결정 영역 (CDR). 게다가, Fv 단편의 2 개의 도메인, VL 및 VH 가 별도의 유전자에 의해 코딩되더라도, 이들을 VL 및 VH 영역 쌍이 1 가 분자를 형성하는 단일 단백질 사슬로서 만들 수 있는 합성 연결자에 의해, 재조합 방법을 사용하여 연결될 수 있다 (단일 사슬 Fv (scFv) 로 공지됨; 예를 들어, 문헌 [Bird et al. (1988) Science 242:423-26]; 및 [Huston et al. (1988) Proc . Natl . Acad . ScL U.S.A. 85:5879-83] 참고). 이러한 단일 사슬 항체는 또한 항체의 "항원-결합 단편" 이라는 용어에 포함되는 것으로 의도된다. 상기 항체 단편은 당업자에게 공지된 통상적인 기술을 사용하여 수득되고, 단편은 미손상 항체와 동일한 방식으로 사용하기 위해 스크리닝한다.
또한 본원에 기재된 서열과 유사한 또는 상동인 (예를 들어, 대략 85% 이상 서열 일치성) 서열은 본 출원의 일부이다. 일부 구현예에서, 서열 일치성은 대략 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상일 수 있다. 대안적으로는, 핵산 분절이 선택적 혼성화 조건 (예를 들어, 고도로 엄격한 혼성화 조건) 하에서 가닥의 상보체에 혼성화될 경우 실질적인 일치성이 존재한다. 핵산은 전체 세포, 세포 용해물, 또는 부분적으로 정제된 또는 실질적으로 순수한 형태로 존재할 수 있다.
2 개 서열 사이의 "상동" 또는 "서열 일치성" (본 용어는 본원에서 상호교환적으로 사용됨) 의 계산은 하기와 같이 수행한다. 서열은 최적의 비교 목적을 위해 정렬된다 (예를 들어, 최적의 정렬을 위해 첫 번째 및 두 번째 아미노산 또는 핵산 서열 중 하나 또는 둘 다에 간격을 도입할 수 있고, 비상동 서열은 비교 목적을 위해 무시할 수 있다). 바람직한 구현예에서, 비교 목적을 위해 정렬된 참조 서열의 길이는 참조 서열의 길이의 30% 이상, 바람직하게는 40% 이상, 더욱 바람직하게는 50% 이상, 더욱 더 바람직하게는 60% 이상, 더욱 더 바람직하게는 70%, 80%, 90%, 100% 이상이다. 그 다음 해당하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오티드 위치에서 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드를 비교한다. 첫 번째 서열 내의 위치가 두 번째 서열에서 해당하는 위치와 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드에 의해 점유되는 경우, 분자는 그 위치에서 일치한다 (본원에서 아미노산 또는 핵산 "일치성" 은 아미노산 또는 핵산 "상동" 과 동등하게 사용됨). 두 서열 사이의 백분율 일치성은, 두 서열의 최적의 정렬을 위해 도입하기 위해 필요한 간격의 수, 및 각 간격의 길이를 고려하여, 서열에 의해 공유된 동일한 위치의 수의 함수이다.
서열의 비교 및 두 서열 사이의 백분율 일치성의 측정은 수학적 알고리즘을 사용하여 달성할 수 있다. 바람직한 구현예에서, 두 아미노산 서열 사이의 백분율 일치성은 BLOSUM 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스를 사용하는 GCG 소프트웨어 패키지 (www.gcg.com 에서 이용가능함) 내의 GAP 프로그램에 인용되어 있는 Needleman 및 Wunsch ((1970) J. MoI . Biol . 48:444-53) 알고리즘을 사용하여 측정하고, 간격 중량은 16, 14, 12, 10, 8, 6, 또는 4 이고, 길이 중량은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6 이다. 또 다른 바람직한 구현예에서, 두 뉴클레오티드 서열 사이의 백분율 일치성은 NWSgapdna.CMP 매트릭스를 사용하는 GCG 소프트웨어 패키지 (www.gcg.com 에서 이용가능함) 를 사용하여 측정하고, 간격 중량은 40, 50, 60, 70, 또는 80 이고, 길이 중량은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6 이다. 특히 바람직한 파라미터 세트 (및 실시자에게 분자가 본 발명의 서열 일치성 또는 상동 한계 내에 있는 경우 측정하기 위해 어떤 파라미터를 적용해야만 하는지 명확하지 않은 경우 사용해야만 하는 것) 는 간격 감점이 12, 간격 범위 감점이 4 이고, 프레임시프트 (frameshift) 간격 감점이 5 인 BLOSUM 62 점수 매트릭스이다. 두 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열 사이의 백분율 일치성은 또한 PAM120 중량 잔기 표, 간격 길이 감점이 12 이고, 간격 감점이 4 인 것을 사용하는 ALIGN 프로그램 (version 2.0) 에 인용되어 있는 Meyers 및 Miller 의 알고리즘 ((1989) CABIOS, 4:11-17) 을 사용하여 측정할 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은, 용어 "고도로 엄격한 조건하에서 혼성화" 는 혼성화 및 세척에 대한 조건을 기재한다. 엄격한 조건은 당업자에게 공지되어 있고, 문헌 [Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6] 에서 발견할 수 있다. 수성 및 비수성 방법은 참조에서 기재되며, 둘 중 하나를 사용할 수 있다. 바람직한, 엄격한 혼성화 조건의 예는 약 45℃ 에서 6X 염화나트륨/나트륨 시트레이트 (SSC) 에서의 혼성화에 이어, 50℃ 에서 0.2X SSC, 0.1% SDS 에서 1 회 이상 세척하는 것이다. 엄격한 혼성화 조건의 또다른 예는 약 45℃ 에서 6X SSC 에서의 혼성화에 이어, 55℃ 에서 0.2X SSC, 0.1% SDS 에서 1 회 이상 세척하는 것이다. 엄격한 혼성화 조건의 또다른 예는 약 45℃ 에서 6X SSC 에서의 혼성화에 이어, 6O℃ 에서 0.2X SSC, 0.1% SDS 에서 1 회 이상 세척하는 것이다. 바람직하게는, 엄격한 혼성화 조건은 약 45℃ 에서 6X SSC 에서의 혼성화에 이어, 65℃ 에서 0.2X SSC, 0.1% SDS 에서 1 회 이상 세척하는 것이다. 특히 바람직한 고도로 엄격한 조건 (및 실시자에게 분자가 본 발명의 혼성화 한계 내에 있는 경우 측정하기 위해 어떤 조건을 적용해야만 하는지 명확하지 않은 경우 사용해야만 하는 조건) 은 65℃ 에서 0.5M 인산나트륨, 7% SDS 에 이어, 65℃ 에서 0.2X SSC, 1% SDS 에서 1 회 이상 세척하는 것이다. 단리된 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 기재된 폴리뉴클레오티드를 엔코딩하는 것들과 동일 또는 유사한 서열을 갖는 핵산을 확인 및 단리하기 위한 혼성화 탐침 및 프라이머로서 사용할 수 있다. 핵산의 확인 및 단리를 위한 혼성화 방법에는 폴리머라아제 연쇄 반응 (PCR), 써던 (Southern) 혼성화, 제자리 혼성화 및 노던 (Northern) 혼성화가 포함되고, 당업자에게 잘 공지되어 있다. 혼성화 조건 및 반응과 관련된 추가의 기재는 본원에 제공된다.
혼성화 반응은 상이한 엄격함의 조건하에서 수행할 수 있다. 혼성화 반응의 엄격함에는 임의의 두 핵산 분자가 서로 혼성화될 것인 어려움이 포함된다. 바람직하게는, 각 혼성화되는 폴리뉴클레오티드는 감소된 엄격함 조건하에서, 더욱 바람직하게는 엄격한 조건, 가장 바람직하게는 고도로 엄격한 조건하에서 그의 해당하는 폴리뉴클레오티드에 혼성화된다. 엄격함 조건의 예는 하기 표 1 에 제시된다: 고도로 엄격한 조건은 예를 들어, 조건 A-F 만큼 엄격한 것 이상이고; 엄격한 조건은 예를 들어, 조건 G-L 만큼 엄격한 것 이상이고; 감소된 엄격함 조건은 예를 들어, 조건 M-R 만큼 엄격한 것 이상이다.
Figure 112007010802811-PCT00001
1혼성 길이는 혼성화 폴리뉴클레오티드의 혼성화된 영역(들) 에 대해 예상되는 것이다. 미공지된 서열의 표적 폴리뉴클레오티드에 대해 폴리뉴클레오티드를 혼성화하는 경우, 혼성 길이는 혼성화 폴리뉴클레오티드의 길이로 추정된다. 공지된 서열의 폴리뉴클레오티드를 혼성화하는 경우, 혼성 길이는 폴리뉴클레오티드의 서열을 정렬하고, 최적의 서열 상보성의 영역 또는 영역들을 확인하여 측정할 수 있다.
2SSPE (1xSSPE 는 0.15M NaCl, 1OmM NaH2PO4, 및 1.25mM EDTA, pH 7.4 임) 로 혼성화 및 세척 완충제 중의 SSC (1xSSC 는 0.15M NaCl 및 15mM 나트륨 시트레이트임) 를 대신할 수 있고; 세척은 혼성화 완료 후 15 분 동안 수행한다.
TB* - TR*: 길이 50 염기 쌍 미만으로 예상되는 혼성에 대한 혼성화 온도는 혼성의 용융 온도 (Tm) 5-10℃ 미만이어여만 하며, 여기서 Tm 은 하기 방정식에 따라 측정된다. 길이 18 염기 쌍 미만의 혼성에 대해, Tm(℃) = 2(A + T 염기의 #) + 4(G + C 염기의 #). 길이 18 ∼ 49 염기 쌍의 혼성에 대해, Tm(℃) = 81.5 + 16.6 (log10Na+) + 0.41 (%G + C) - (600/N), 여기서 N 은 혼성 내의 염기의 수이고, Na+ 는 혼성화 완충제 내의 나트륨 이온의 농도이다 (1x SSC 대한 Na+ = 0.165 M).
폴리뉴클레오티드 혼성화를 위한 엄격함 조건의 추가적인 예가, 본원에 참조로서 인용된 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Chs. 9 & 11, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1989)] 및 문헌 [Ausubel et al., eds., Current Protocols in Molecular Biology, Sects. 2.10 & 6.3-6.4, John Wiley & Sons, Inc (1995)] 에 제공된다.
본 발명의 단리된 폴리뉴클레오티드는, 기재된 폴리뉴클레오티드의 대립 변이형을 엔코딩하는 서열을 갖는 DNA 의 확인 및 단리를 위한 혼성화 탐침 및 프라이머로서 사용할 수 있다. 대립 변이형은 기재된 폴리뉴클레오티드에 의해 엔코딩되는 폴리펩티드와 동일하거나 뚜렷한 유사성을 갖는 폴리펩티드를 엔코딩하는 기재된 폴리뉴클레오티드의 자연적으로 발생하는 대안형이다. 바람직하게는, 대립 변이형은 기재된 폴리뉴클레오티드와 90% 이상 서열 일치성 (더욱 바람직하게는, 95% 이상 일치성; 가장 바람직하게는, 99% 이상 일치성) 을 갖는다.
본 발명의 단리된 폴리뉴클레오티드는 또한 기재된 폴리뉴클레오티드에 상동인 폴리펩티드를 엔코딩하는 서열을 갖는 DNA 의 확인 및 단리를 위한 혼성화 탐침 및 프라이머로서 사용할 수 있다. 상기 상동은 기재된 폴리펩티드 및 폴리뉴클레오티드의 것과 상이한 종으로부터 단리된 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드, 또는 동일한 종이지만, 기재된 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드와 뚜렷한 서열 유사성을 갖는 것이다. 바람직하게는, 폴리뉴클레오티드 상동은 기재된 폴리뉴클레오티드와 50% 이상 서열 일치성 (더욱 바람직하게는, 75% 이상 일치성; 가장 바람직하게는, 90% 이상 일치성) 을 갖는 반면, 폴리펩티드 상동은 기재된 폴리펩티드와 30% 이상 서열 일치성 (더욱 바람직하게는, 45% 이상 일치성; 가장 바람직하게는, 60% 이상 일치성) 을 갖는다. 바람직하게는, 기재된 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드의 상동은 포유동물 종으로부터 단리되는 것이다.
본 발명의 단리된 폴리뉴클레오티드는 본 발명의 폴리펩티드를 발현하는 세포 및 조직 및 그들이 발현되는 조건을 확인하기 위한 혼성화 탐침 및 프라이머로서 사용할 수 있다.
본 발명의 IL-21/IL-21R 길항제가 그들의 기능에 실질적인 효과를 갖지 않는, 추가의 보존적 또는 비필수적 아미노산 치환을 가질 수 있다는 것이 이해된다. "보존적 아미노산 치환" 은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 족은 당업계에 공지되어 있다. 상기 족에는 염기성 측쇄 (예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비전하 극성 측쇄 (예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 무극성 측쇄 (예를 들어, 아닐린, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지된 측쇄 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘) 를 갖는 아미노산이 포함된다.
본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "재조합 숙주 세포" (또는 간단히 "숙주 세포") 는 재조합 발현 벡터가 도입되어 있는 세포를 말하는 것으로 의도된다. 이러한 용어는 특정 대상 세포 뿐 아니라, 이러한 세포의 자손도 말하는 것으로 의도된다는 것이 이해되어야만 한다. 돌연변이 또는 환경의 영향으로 인한 계승하는 자손에서 특정 개질이 일어날 수 있기 때문에, 그러한 자손이 사실상 모 세포와 일치할 수는 없지만, 여전히 본원에서 사용되는 용어 "숙주 세포" 의 범주 내에 포함된다.
IL-21/IL-21R 길항제
한 구현예에서, IL-21R/MU-1 폴리펩티드 또는 그의 활성 단편을 두 번째 부분, 예를 들어, 면역글로불린 또는 그의 단편 (예를 들어, 그의 Fc 결합 단편) 에 융합할 수 있다. 예를 들어, IL-21R/MU-1 의 가용성 형태를 "연결자" 서열을 통해 면역글로불린의 Fc 부분에 융합할 수 있다. 또한 기타 융합 단백질, 예컨대 GST, Lex-A 또는 MBP 를 가진 것들을 사용할 수 있다.
융합 단백질에는 두 번째 부분에 IL-21 또는 IL-21R 단편을 연결한 연결자 서열이 부가적으로 포함될 수 있다. 예를 들어, 융합 단백질에는 펩티드 연결자, 예를 들어, 아미노산 길이가 약 4 ∼ 20, 더욱 바람직하게는, 5 ∼ 10 인 펩티드 연결자; 한 구현예에서, 아미노산 길이가 8 인 펩티드 연결자가 포함될 수 있다. 펩티드 연결자 내의 각각의 아미노산은 Gly, Ser, Asn, Thr 및 Ala 로 이루어진 군으로부터 선택되고; 한 구현예에서, 펩티드 연결자에는 Gly-Ser 요소가 포함된다. 다른 구현예에서, 융합 단백질에는 펩티드 연결자가 포함되고, 펩티드 연결자에는 화학식 (Ser-Gly-Gly-Gly-Gly)y (식 중, y 는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8 임) 의 서열이 포함된다.
다른 구현예에서, 발현, 검출 및/또는 단리 또는 정제를 용이하게 하기 위해 추가의 아미노산 서열을 융합 단백질의 N- 또는 C-말단에 첨가할 수 있다. 예를 들어, IL-21/IL-21R 융합 단백질을 하나 이상의 추가의 부분, 예를 들어, GST, His6 택, FLAG 택에 연결할 수 있다. 예를 들어, 융합 단백질 서열이 GST (즉, 글루타티온 S-전이 효소) 서열의 C-말단에 융합된 GST 융합 단백질에 융합 단백질을 부가적으로 연결할 수 있다. 이러한 융합 단백질은 MU-1 융합 단백질의 정제를 용이하게 할 수 있다.
또 다른 구현예에서, 융합 단백질에는 그의 N-말단에 이종 신호 서열 (즉, MU-1 핵산에 의해 엔코딩되는 폴리펩티드 내에 존재하지 않는 폴리펩티드 서열) 이 포함된다. 예를 들어, 본래의 MU-1 신호 서열은 또다른 단백질로부터의 신호 서열을 제거 및 대체할 수 있다. 특정 숙주 세포 (예를 들어, 포유동물 숙주 세포) 에서, MU-1 의 발현 및/또는 분비는 이종 신호 서열의 사용을 통해 증가시킬 수 있다.
본 발명의 키메라성 또는 융합 단백질은 표준 재조합 DNA 기술에 의해 제조할 수 있다. 예를 들어, 상이한 폴리펩티드 서열을 코딩하는 DNA 단편을 통상적인 기술에 따라 예를 들어, 라이게이션 (ligation) 을 위해 블런트 (blunt)-종단 또는 스태거 (stagger)-종단 사용, 적합한 말단을 제공하기 위한 제한 효소 소화, 원하지 않는 연결을 피하기 위한 알칼리 포스페이트 처리로서 적합한, 결합력있는 종결의 채움 및 효소적 라이게이션에 의해, 프레임에 맞게 (in-frame) 함께 라이게이션시킨다. 또 다른 구현예에서, 융합 유전자는 자동화 DNA 합성을 포함하는 통상적인 기술에 의해 합성할 수 있다. 대안적으로는, 키메라성 유전자 서열을 생성하기 위해 연속으로 풀림 및 재증폭할 수 있는 두 개의 연속적인 유전자 단편 간에 상보성 돌출의 발생을 제공하는 고정 프라이머를 사용하여 유전자 단편의 PCR 증폭을 수행할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Ausubel et al. (eds.) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, 1992] 참고). 게다가, 융합 부분 (예를 들어, 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역) 을 엔코딩하는 많은 발현 벡터가 시판된다. 융합 부분이 프레임에 맞게 면역글로불린 단백질에 연결된 발현 벡터 내로 MU-1-엔코딩 핵산을 클로닝할 수 있다. 일부 구현예에서, MU-1 융합 폴리펩티드는 올리고머, 예컨대 이량체 또는 삼량체로서 존재한다. 첫 번째 폴리펩티드를 엔코딩하는 첫 번째 폴리펩티드, 및/또는 핵산을 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제작할 수 있다.
일부 구현예에서, MU-1 폴리펩티드 부분은 MU-1 폴리펩티드의 IL-21 에 대한 (비돌연변이화된 서열에 비해) 더 높은 친화력 결합을 야기하는 자연적으로 발생하는 MU-1 서열 (야생형) 에서 돌연변이를 갖는 변이체 MU-1 폴리펩티드로서 제공된다.
일부 구현예에서, MU-1 폴리펩티드 부분은 단백질분해에 대해 (비돌연변이화된 서열에 비해) 더욱 저항성인 MU-1 서열을 야기하는 자연적으로 발생하는 MU-1 서열 (야생형) 에서의 돌연변이를 갖는 변이형 MU-1 폴리펩티드로서 제공된다. 일부 구현예에서, 첫 번째 폴리펩티드에는 전장 MU-1 폴리펩티드가 포함된다. 대안적으로는, 첫 번째 폴리펩티드는 전장 MU-1 폴리펩티드 미만을 포함한다.
융합 단백질에 포함될 수 있는 신호 펩티드는 MPLLLLLLLLPSPLHP (SEQ ID NO: 21) 이다. 원한다면, MU-1 부분을 포함하는 첫 번째 폴리펩티드 부분과 두 번째 폴리펩티드 부분 사이에 하나 이상의 아미노산을 부가적으로 삽입할 수 있다.
두 번째 폴리펩티드는 바람직하게는 가용성이다. 일부 구현예에서, 두 번째 폴리펩티드는 연결된 폴리펩티드의 반감기 (예를 들어, 혈청 반감기) 를 향상시킨다. 일부 구현예에서, 두 번째 폴리펩티드에는 두 번째 MU-1 폴리펩티드와 융합 폴리펩티드의 회합을 용이하게 하는 서열이 포함된다. 바람직한 구현예에서, 두 번째 폴리펩티드에는 면역글로불린 폴리펩티드의 영역 이상이 포함된다. 면역글로불린 융합 폴리펩티드는 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, 미국 특허 제 5,516,964 호; 제 5,225,538 호; 제 5,428,130 호; 제 5,514,582 호; 제 5,714,147 호 및 제 5,455,165 호에 기재된다.
일부 구현예에서, 두 번째 폴리펩티드는 전장 면역글로불린 폴리펩티드를 포함한다. 대안적으로는, 두 번째 폴리펩티드는 전장 면역글로불린 폴리펩티드 미만, 예를 들어, 중쇄, 경쇄, Fab, Fab2, Fv, 또는 Fc 를 포함한다. 바람직하게는, 두 번째 폴리펩티드에는 면역글로불린 폴리펩티드의 중쇄가 포함된다. 더욱 바람직하게는, 두 번째 폴리펩티드에는 면역글로불린 폴리펩티드의 Fc 영역이 포함된다.
본 발명의 또다른 양상에서, 두 번째 폴리펩티드는 야생형 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 효과기 기능보다 덜한 효과기 기능을 갖는다. Fc 효과기 기능에는 예를 들어, Fc 수용체 결합, 보체 고정 및 T 세포 제거 활성이 포함된다 (예를 들어, 미국 특허 제 6,136,310 호 참고). T 세포-제거 활성, Fc 효과기 기능, 및 항체 안정성 어세이 (assay) 방법은 당업계에 공지되어 있다. 한 구현예에서, 두 번째 폴리펩티드는 Fc 수용체에 대한 친화력이 낮거나 없다. 대안적인 구현예에서, 두 번째 폴리펩티드는 보체 단백질 C1q 에 대한 친화력이 낮거나 없다.
바람직한 두 번째 폴리펩티드 서열에는 SEQ ID NO: 17 의 아미노산 서열이 포함된다. 상기 서열에는 Fc 영역이 포함된다. 밑줄쳐진 아미노산은 야생형 면역글로불린 서열의 해당 위치에서 발견된 아미노산과 상이한 것들이다:
Figure 112007010802811-PCT00002
본 발명의 방법에 사용할 수 있는 길항제성 융합 단백질의 예는 도 7-15 에 제시된다. 한 구현예에서, 융합 단백질에는 예를 들어, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 37, 또는 SEQ ID NO: 39 로부터 선택되는 아미노산 서열, 또는 이와 적어도 85%, 90%, 95%, 98% 이상 일치하는 서열이 포함된다. 다른 구현예에서, 융합 단백질에는 예를 들어, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, 또는 SEQ ID NO: 38 로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열에 의해 엔코딩되는 아미노산 서열, 또는 이와 적어도 85%, 90%, 95%, 98% 이상 일치하는 서열이 포함된다. 바람직한 융합 단백질은 SEQ ID NO: 25 또는 SEQ ID NO: 29 로서 제시된 아미노산 서열 (각각, 도 8A-8C 및 10A-10C), 또는 이와 적어도 85%, 90%, 95%, 98% 이상 일치하는 서열을 갖는다. 다른 구현예에서, 융합 단백질에는 예를 들어, SEQ ID NO: 24 또는 SEQ ID NO: 28 (각각, 도 8A-8C 및 10A-10C) 로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열에 의해 엔코딩되는 아미노산 서열, 이와 적어도 85%, 90%, 95%, 98% 이상 일치하는 서열이 포함된다. 가장 바람직하게는, 융합 단백질은 SEQ E) NO:29 로서 제시된 아미노산 서열을 갖거나, SEQ ID NO: 28 로서 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 엔코딩되는 아미노산 서열을 갖는다 (도 10A-10C).
다른 구현예에서, IL-21/IL-21R 길항제는 IL-21 또는 IL-21R, 바람직하게는, 포유동물 (예를 들어, 인간 또는 쥣과) IL-21 또는 IL-21R 에 결합하는 항체, 또는 그의 항원-결합 단편이다.
또한 본 발명의 MU-1 단백질은 MU-1 단백질과 특이적으로 반응하고 수용체에 대한 리간드의 결합을 억제할 수 있는 폴리클론 및 단일클론 항체를 수득하기 위해 동물을 면역화하기 위해 사용할 수 있다. 이러한 항체는 면역원으로서 전체 MU-1 을 사용하여, 또는 MU-1 의 단편을 사용하여 수득할 수 있다. 또한 더 작은 MU-1 의 단편을 동물을 면역화하기 위해 사용할 수 있다. 펩티드 면역원은 카르복시 말단에서 시스테인 잔기를 부가적으로 함유할 수 있고, 합텐 예컨대 키홀 림펫 헤모시아닌 (keyhole limpet hemocyanin: KLH) 에 컨쥬게이션된다. 부가적인 펩티드 면역원은 티로신 잔기를 황산화 티로신 잔기로 대체하여 생성될 수 있다. 이러한 펩티드의 합성 방법은 당업계에 잘 공지된다.
또한 MU-1 단백질에 대한 결합을 중화하는 또는 비중화하는 항체 (바람직하게는 단일클론 항체) 는 상기 기재한 조건의 처리에 유용할 수 있다. 상기 중화하는 단일클론 항체는 MU-1 수용체 사슬에 대한 리간드 결합을 차단할 수 있다.
본 발명은 추가로 IL-21 또는 IL-21R 과 특이적으로 반응하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
IL-21 또는 IL-21R 에 대항해 유도된 인간 단일클론 항체 (mAb) 는 마우스 시스템 외의 인간 면역글로불린 유전자를 보유하는 유전자도입 마우스를 사용하여 생성할 수 있다. 관심있는 항원으로 면역화된 상기 유전자도입 마우스로부터의 비장세포를 사용하여 인간 단백질로부터의 에피토프에 대한 특이적 친화력을 갖는 인간 mAb 를 분비하는 하이브리도마를 제조한다 (예를 들어, Wood et al., 국제 공개 번호 WO 91/00906, Kucherlapati et al., 국제 공개 번호 WO 91/10741; Lonberg et al., 국제 공개 번호 WO 92/03918; Kay et al., 국제 공개 번호 WO 92/03917; Lonberg et al. (1994) Nature 368:856-59; Green et al. (1994) Nat . Genet. 7:13-21; Morrison et al. (1994) Proc . Natl . Acad . Sci U.S.A. 81:6851-55; Bruggeman et al. (1993) Year Immunol . 7:33-40; Tuaillon et al. (1993) Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A. 90:3720-24; Bruggeman et al. (1991) Eur . J. Immunol . 21 :1323-1326 참고).
또한 단일클론 항체는 재조합 DNA 기술의 당업자에게 공지된 기타 방법에 의해 생성할 수 있다. "조합적 항체 디스플레이 (display)" 방법으로 불리는 대안적인 방법이, 특정 항원 특이성을 갖는 항체 단편을 확인 및 단리하기 위해 개발되고 있고, 단일클론 항체를 제조하기 위해 유용할 수 있으며; 본 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다. 동물을 면역원에 면역화시킨 후, 수득된 B 세포 풀 (pool) 의 항체 레파토아 (repertoire) 를 클론화한다. 방법은 일반적으로 올리고머 프라이머 및 PCR 의 혼합물을 사용하여 면역글로불린 분자의 다양한 개체단의 가변 영역의 DNA 서열을 수득하기 위해 공지되어 있다. 예를 들어, 5' 선도 (신호 펩티드) 서열 및/또는 프레임워크 1 (FR1) 서열에 해당하는 혼합된 올리고뉴클레오티드 프라이머, 뿐 아니라 보존된 3' 불변 영역 프라이머에 대한 프라이머를 쥣과 항체의 수로부터 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 PCR 증폭을 위해 사용할 수 있다 (Larrick et al. (1991) Biotechniques 11:152-56). 또한 인간 항체로부터 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 증폭시키기 위해 유사한 전략을 사용할 수 있다 (Larrick et al. (1991) Methods : Companion to Methods in Enzymology 2:106-10).
키메라성 면역글로불린 사슬을 포함하는 키메라성 항체를, 당업계에 공지된 재조합 DNA 기술에 의해 제조할 수 있다. 예를 들어, 쥣과 (또는 다른 종) 단일클론 항체 분자의 Fc 불변 영역을 엔코딩하는 유전자를 제한 효소로 소화시켜 쥣과 Fc 를 엔코딩하는 영역을 제거하고, 인간 Fc 불변 영역을 엔코딩하는 유전자의 동등 부분으로 치환한다 (예를 들어, Robinson et al., 국제 특허 공개 PCT/US86/02269; Akira et al., 유럽 특허 출원 184,187; Taniguchi, 유럽 특허 출원 171,496; Morrison et al., 유럽 특허 출원 173,494; Neuberger et al., 국제 공개 번호 WO 86/01533; Cabilly et al. 미국 특허 제 4,816,567 호; Cabilly et al., 유럽 특허 출원 125,023; Better et al. (1988) Science 240:1041-43; Liu et al. (1987) Proc . Natl . Acad . Sci U.S.A. 84:3439-43; Liu et al. (1987) J. Immunol. 139:3521-26; Sun et al. (1987) Proc . Natl . Acad . Sci U.S.A. 84:214-18; Nishimura et al. (1987) Canc . Res . 47:999-1005; Wood et al. (1985) Nature 314:446-49; Shaw et al. (1988) J Natl . Cancer Inst . 80:1553-59 참고).
항체 또는 면역글로불린 사슬은 당업계에 공지된 방법에 의해 인간화될 수 있다. 인간화된 면역글로불린 사슬을 포함하는 인간화된 항체는, 인간 Fv 가변 영역과 동등한 서열을 갖는 항원 결합에 직접 관련되지 않는 Fv 가변 영역의 서열을 대체하여 생성할 수 있다. 인간화된 항체를 생성하기 위한 일반적인 방법은 모든 내용이 참조로서 인용된 문헌 [Morrison (1985) Science 229:1202-07; Oi et al. (1986) BioTechniques 4:214]; 및 [Queen et al. 미국 특허 제 5,585,089 호, 제 5,693,761 호 및 제 5,693,762 호] 에 의해 제공된다. 상기 방법에는 중쇄 또는 경쇄 중 하나 이상으로부터의 면역글로불린 Fv 가변 영역의 전부 또는 일부를 엔코딩하는 핵산 서열의 단리, 조작 및 발현이 포함된다. 이러한 핵산의 공급원은 당업자에게 잘 공지되어 있고, 예를 들어, 미리 결정된 표적에 대항하는 항체를 제조하는 하이브리도마 (hybridoma) 로부터 수득할 수 있다. 그 다음 인간화된 항체, 또는 그의 단편을 엔코딩하는 재조합 DNA 를 적합한 발현 벡터 내에 클론화할 수 있다.
인간화된 또는 CDR-이식술된 항체 분자 또는 면역글로불린을 CDR-이식술 또는 CDR 치환에 의해 제조할 수 있고, 여기서 면역글로불린 사슬의 1 개, 2 개 또는 모든 CDR 을 대체할 수 있다 (예를 들어, 모든 내용이 참조로서 인용된 미국 특허 제 5,225,539 호; Jones et al. (1986) Nature 321:552-25; Verhoeyan et al. (1988) Science 239:1534; Beidler et al. (1988) J. Immunol . 141 :4053-60; Winter, 미국 특허 제 5,225,539 호 참고). Winter 는 본 발명의 인간화된 항체를 제조하기 위해 사용할 수 있는 CDR-이식술 방법을 기재하고 있다 (내용이 참조로서 인용된, 1987 년 3 월 26 일에 출원된 영국 특허 공보 GB 2188638A; Winter 미국 특허 제 5,225,539 호). 특정 인간 항체의 모든 CDR 을 비인간 CDR 의 일부 이상으로 대체할 수 있거나, 단지 CDR 의 일부만을 비인간 CDR 로 대체할 수 있다. 단지 미리 결정된 항원에 대한 인간화된 항체의 결합에 요구되는 CDR 의 수를 대신하는 것이 필요하다.
항체의 기타 부분, 예를 들어, 불변 영역을 삭제, 첨가 또는 치환하여 개질된 단일클론, 키메라성 및 인간화된 항체도 또한 본 발명의 범주 내에 있다. 예를 들어: (i) 불변 영역의 삭제; (ii) 불변 영역의, 또 다른 불변 영역, 예를 들어 항체의 반감기, 안정성 또는 친화성을 증가시키기 위해 의도된, 또는 또다른 종 또는 항체 계열로부터의 불변 영역으로의 대체; 또는 (iii) 예를 들어, 글리코실화 부위의 수, 효과기 세포 기능, Fc 수용체 (FcR) 결합, 보체 고정, 등을 변형하기 위한 불변 영역 내의 하나 이상의 아미노산의 개질에 의해 항체를 개질할 수 있다.
항체 불변 영역의 변형 방법은 당업계에 공지되어 있다. 변형된 기능 (예를 들어, 효과기 리간드 (예컨대 세포 상의 FcR, 또는 보체의 C1 성분) 에 대한 변형된 친화력) 을 갖는 항체를, 상이한 잔기를 갖는 항체의 불변 부분에서 하나 이상의 아미노산 잔기를 대체하여 제조할 수 있다 (예를 들어, 모든 내용이 참조로서 인용된 E.P. 388,151 A1, U.S. 5,624,821 및 U.S. 5,648,260 참고). 쥣과 또는 다른 종의 면역글로불린에 적용하는 경우, 유사한 유형의 변형이 상기 기능을 감소 또는 제거할 것이라고 기재할 수 있다.
예를 들어, 특정 잔기(들) 을 그의 측쇄 상에 적합한 작용성을 갖는 잔기(들) 로 대체하여, 또는 전하를 띤 작용기 예컨대 글루타메이트 또는 아스파테이트, 또는 아마도 방향족 무극성 잔기 예컨대 페닐알라닌, 티로신, 트립토판 또는 알라닌을 도입하여 FcR (예를 들어, Fc 감마 R1) 에 대한, 또는 C1q 결합에 대한 항체 (예를 들어, IgG, 예컨대 인간 IgG) 의 Fc 영역의 친화력을 변형하는 것이 가능하다 (참고, 예를 들어, U.S. 5,624,821).
IL-21 폴리펩티드의 아미노산 서열은 공개적으로 공지되어 있다. 예를 들어, 인간 IL-21 의 뉴클레오티드 서열 및 아미노산 서열은 GENBANK® Ace. No. X_011082 에서 입수가능하다. 기재된 인간 IL-21 뉴클레오티드 서열은 하기 제시된다:
Figure 112007010802811-PCT00003
기재된 인간 IL-21 폴리펩티드의 아미노산 서열은 하기 제시된다:
Figure 112007010802811-PCT00004
본 발명은 또한 매우 엄격한 조건하에서 (예를 들어, 65℃ 에서 0.1X SSC) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, 또는 SEQ ID NO: 38 에서 언급된 뉴클레오티드 서열에 혼성화되는 핵산을 포함한다. MU-1 단백질 또는 융합 단백질을 엔코딩하지만, 유전적 코드의 감소에 의해 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, 또는 SEQ ID NO: 38 에서 언급된 뉴클레오티드 서열과 상이한 단리된 폴리뉴클레오티드도 또한 본 발명에 의해 포함된다. 특정부위 돌연변이화에 의해 또는 유도된 개질에 의해 야기되는 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, 또는 SEQ ID NO: 38 에서 언급되는 바와 같은 뉴클레오티드 서열의 변이체도 또한 본 발명에 포함된다.
본 발명의 단리된 폴리뉴클레오티드는 재조합으로 MU-1 단백질을 제조하기 위해, 발현 조절 서열 예컨대 문헌 [Kaufman et al. (1991) Nucleic Acids Res . 19:4485-90] 에서 기재된 pMT2 또는 pED 발현 벡터에 작동가능하게 연결될 수 있다. 많은 적합한 발현 조절 서열이 당업계에 공지되어 있다. 또한 일반적인 재조합 단백질의 발현 방법이 공지되어 있고, 문헌 [Kaufman (1990) Methods in Enzymology 185:537-66] 에서 예증된다. 본원에서 정의되는 바와 같은 "작동적으로 연결된" 은, MU-1 단백질이 라이게이션된 폴리뉴클레오티드/발현 조절 서열로 형질전환된 (트랜스펙션 (transfection) 된) 숙주 세포에 의해 발현되는 방식으로, 본 발명의 단리된 폴리뉴클레오티드와 발현 조절 서열 사이에 공유 결합을 형성하기 위해 효소적으로 또는 화학적으로 라이게이션된 것을 의미한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "벡터" 는 그것에 연결된 또 다른 핵산을 이송할 수 있는 핵산 분자를 말하는 것으로 의도된다. 벡터의 한 유형은 "플라스미드" 이고, 이것은 추가의 DNA 분절이 라이게이션될 수 있는 원형 2중-가닥 DNA 루프를 말한다. 또 다른 유형의 벡터는 바이러스성 벡터로, 여기서 추가의 DNA 분절은 바이러스 게놈 내에 라이게이션될 수 있다. 특정 벡터는 그들이 도입된 숙주 세포에서 자동적으로 복제가능하다 (예를 들어, 박테리아성 복제 기원을 갖는 박테리아성 벡터 및 에피좀성 포유동물 벡터). 기타 벡터 (예를 들어, 비에피좀성 포유동물 벡터) 는 숙주 세포 내로 도입 시 숙주 세포의 게놈 내로 통합가능하여, 숙주 게놈과 함께 복제된다. 게다가, 특정 벡터는 작동적으로 연결된 유전자의 발현을 지도할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "재조합 발현 벡터" (또는 간단히, "발현 벡터") 라고 불린다. 일반적으로, 재조합 DNA 기술에서 유용한 발현 벡터는 종종 플라스미드의 형태이다. 본 명세서에서, 플라스미드가 벡터의 형태로 가장 통상적으로 사용되므로 "플라스미드" 및 "벡터" 를 상호교환적으로 사용할 수 있다. 그러나, 본 발명은 동등한 기능을 하는 이러한 발현 벡터의 기타 형태, 예컨대 바이러스성 벡터 (예를 들어, 복제 결핍된 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-연관된 바이러스) 가 포함되는 것으로 의도된다.
용어 "조절 서열" 은 항체 사슬 유전자의 전사 또는 번역을 조절하는 프로모터, 인핸서 및 기타 발현 조절 요소 (예를 들어, 폴리아데닐화 신호) 가 포함되는 것으로 의도된다. 이러한 조절 서열은 예를 들어, 문헌 [Goeddel (1990) Gene Expression Technology : Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA] 에 기재되어 있다. 조절 서열의 선별을 포함하는 발현 벡터의 고안이 형질전환될 숙주 세포의 선택, 원하는 단백질의 발현 수준 등과 같은 인자에 따라 다를 수 있다는 것은 당업자에게 명백할 것이다. 포유동물 숙주 세포 발현을 위한 바람직한 조절 서열에는 포유동물 세포에서 높은 수준의 단백질 발현을 지시하는 바이러스성 요소, 예컨대 FF-1a 프로모터 및 BGH 폴리 A 유래의 프로모터 및/또는 인핸서, 사이토메갈로바이러스 (CMV) (예컨대 CMV 프로모터/인핸서), Simian Virus 40 (SV40) (예컨대 SV40 프로모터/인핸서), 아데노바이러스, (예를 들어, 아데노바이러스 주요 후반부 프로모터 (AdMLP)) 및 폴리오마 (polyoma) 가 포함된다. 바이러스성 조절 요소, 및 그의 서열의 추가 기재를 위해 예를 들어, 미국 특허 제 5,168,062 호; 제 4,510,245 호; 제 4,968,615 호를 참고한다.
본 발명의 재조합 발현 벡터는 부가적인 서열, 예컨대 숙주 세포 내의 벡터의 복제를 조절하는 서열 (예를 들어, 복제의 기원) 및 선별가능한 마커 (marker) 유전자를 가질 수 있다. 선별가능한 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포의 선별을 용이하게 한다 (참고, 예를 들어, 미국 특허 제 4,399,216 호; 제 4,634,665 호; 제 5,179,017 호). 예를 들어, 전형적으로 선별가능한 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포 상에 약물, 예컨대 G418, 히그로마이신 또는 메토트렉세이트에 대한 저항성을 부여한다. 바람직한 선별가능한 마커 유전자에는 디히드로폴레이트 환원효소 (DHFR) 유전자 (메토트렉세이트 선별/증폭을 갖는 dhfr- 숙주 세포에서 사용하기 위함) 및 neo 유전자 (G418 선별을 위함) 이 포함된다.
수많은 유형의 세포가 MU-1 단백질 또는 그의 융합 단백질의 발현을 위한 적합한 숙주 세포로서 작용할 수 있다. 기능적 MU-1 단백질을 발현할 수 있는 임의의 세포 유형을 사용할 수 있다. 적합한 포유동물 숙주 세포에는, 예를 들어, 원숭이 COS 세포, 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포, 인간 신장 293 세포, 인간 표피 A431 세포, 인간 Colo205 세포, 3T3 세포, CV-1 세포, 기타 형질전환된 영장류 세포주, 정상 2 배체 세포, 1차 조직의 시험관 내 배양 유래의 세포주, 1차 외식편, HeLa 세포, 마우스 L 세포, BHK, HL-60, U937, HaK, Rat2, BaF3, 32D, FDCP-1, PC12, M1x 또는 C2C12 세포가 포함된다.
MU-1 단백질 또는 그의 융합 단백질은 하나 이상의 곤충 발현 벡터에서 적합한 조절 서열에 대해 본 발명의 단리된 폴리뉴클레오티드를 작동가능하게 연결시키고, 곤충 발현 시스템을 사용하여 제조할 수 있다. 배큘로바이러스/곤충 세포 발현 시스템에 대한 재료 및 방법은, 예를 들어, Invitrogen, San Diego, CA (예를 들어, MAXBAC® 키트) 로부터 키트 형태로 시판되고, 이러한 방법은 본원에 참조로서 인용되는 문헌 [Summers and Smith, Texas Agricultural Experiment Station Bulletin No. 1555 (1987)] 에서 기재되어 있는 바와 같이 당업계에 잘 공지되어 있다. MU-1 단백질의 가용성 형태는 또한 상기 기재된 바와 같이 적합한 단리된 폴리뉴클레오티드를 사용하여 곤충 세포에서 제조할 수 있다.
대안적으로는, MU-1 단백질 또는 그의 융합 단백질은 효모와 같은 하등 진핵세포 또는 박테리아와 같은 원핵세포에서 제조할 수 있다. 적합한 효모 균주에는 사카로미세스 세레비시아 (Saccharomyces cerevisiae), 스키조사카로미세스 폼베 (Schizosaccharomyces pombe), 클루이베로미세스 (Kluyveromyces) 균주, 칸디다 (Candida), 또는 이종 단백질을 발현할 수 있는 임의의 효모 균주가 포함된다. 적합한 박테리아성 균주에는 에스케리키아 콜라이 (Escherichia coli), 바실러스 서브틸리스 (Bacillus subtilis), 살모넬라 티피무리움 (Salmonella typhimurium), 또는 이종 단백질을 발현할 수 있는 임의의 박테리아성 균주가 포함된다.
박테리아 내의 발현은 재조합 단백질을 혼합하는 봉입체의 형성을 야기할 수 있다. 그러므로, 활성인 또는 더욱 활성인 재료를 제조하기 위해 재조합 단백질의 되접힘 (refolding) 이 필요할 수 있다. 박테리아성 봉입체로부터 알맞게 접힌 이종 단백질을 수득하기 위한 여러가지 방법은 당업계에 공지되어 있다. 상기 방법에는 일반적으로 봉입체로부터의 단백질을 가용화시킨 다음, 단백질 변성제 (chaotropic agent) 를 사용하여 단백질을 완전히 변성시키는 것이 포함된다. 단백질의 1 차 아미노산 서열 내에 시스테인 잔기가 존재하는 경우, 디술피드 결합의 올바른 형성을 가능하게 하는 환경 (산화환원 시스템) 내에서 되접힘을 달성하는 것이 종종 필요하다. 일반적인 되접힘 방법은 문헌 [Kohno (1990) Meth . Enzym. 185:187-95; E.P. 0433225] 에 기재되어 있고 미국 특허 제 5,399,677 호에 적합한 방법이 기재되어 있다.
MU-1 단백질 또는 그의 융합 단백질은 또한 유전자도입 동물의 생성물로서, 예를 들어, MU-1 단백질 또는 그의 융합 단백질을 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 함유하는 체세포 또는 생식세포를 특징으로 하는 유전자도입 소, 염소, 돼지 또는 양의 젖의 성분으로서 발현될 수 있다.
MU-1 단백질 또는 이의 융합 단백질은 목적 단백질을 발현하는 데 필요한 배양 조건 하에 형질전환된 숙주 세포를 배양하여 제조할 수 있다. 그 결과 발현된 단백질은 그 후 배양 배지 또는 세포 추출물로부터 정제할 수 있다. MU-1 단백질 또는 이의 융합 단백질의 가용성 형태는 조건배양액으로부터 정제할 수 있다. 본 발명의 MU-1 단백질의 막 결합 형태는 발현 세포로부터 총 막 분획을 준비하여, TRITON® X-100 과 같은 비이온성 계면활성제로 막을 추출함으로써 정제할 수 있다.
MU-1 단백질 또는 융합 단백질은 당업자에게 공지된 방법을 사용하여 정제할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 MU-1 단백질은 시판되는 단백질 농축 필터, 예를 들어 AMICON® 또는 PELLICON® 초여과 유닛 (Millipore, Billerica, MA) 을 사용하여 농축할 수 있다. 농축 단계 이후, 농축액을 겔 여과 배지와 같은 정제 매트릭스에 가할 수 있다. 대안적으로는, 음이온 교환 수지, 예를 들어, 펜던트 디에틸아미노에틸 (DEAE) 또는 폴리에틸렌이민 (PEI) 기를 갖는 매트릭스 또는 기질을 사용할 수 있다. 상기 매트릭스는 아크릴아미드, 아가로오스, 덱스트란, 셀룰로오스, 또는 단백질 정제에 통상적으로 이용되는 기타 유형일 수 있다. 대안적으로, 양이온 교환 단계를 이용할 수 있다. 적합한 양이온 교환제로서 술포프로필기 또는 카르복시메틸기를 포함하는 각종 불용성 매트릭스가 포함된다. 술포프로필기가 바람직하다 (예를 들어, S-SEPHAROSE® 칼럼). 또한, MU-1 단백질 또는 융합 단백질을 배지 상청액으로부터 정제하는 것은 친화성 수지, 예컨대, 콘카나발린 A-아가로오스, 헤파린-TOYOPEARL® 또는 Cibacron 블루 3GA SEPHAROSE® 상의 하나 이상의 칼럼 단계; 또는 페닐 에테르, 부틸 에테르, 또는 프로필 에테르와 같은 수지를 사용하는 소수성 상호작용 크로마토그래피; 또는 면역 친화성 크로마토그래피에 의한 것을 포함할 수 있다. 마지막으로, 소수성 RP-HPLC 배지 (예를 들어, 펜던트 메틸기 또는 기타 지방성기를 갖는 실리카겔) 을 이용하는 하나 이상의 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (RP-HPLC) 단계를 이용하여 MU-1 단백질의 추가 정제에 사용할 수 있다. MU-1 단백질에 대한 항체를 포함하는 친화성 칼럼도 공지된 방법에 따른 정제에 사용할 수 있다. 또한, 전술한 정제 단계의 일부 또는 전부를 다양하게 조합하거나 또는 기타 공지된 방법과 함께 이용하여 실질적으로 정제된 단리된 재조합 단백질을 제공할 수 있다. 바람직하게는, 단리된 MU-1 단백질을 정제하여 기타 포유동물 단백질이 실질적으로 없게 한다.
본 발명의 MU-1 단백질 또는 융합 단백질은 MU-1 에 결합가능한 작용제를 스크리닝하는 데도 사용할 수 있다. 고정되거나 고정되지 않은 목적 결합 단백질을 사용하는 결합 어세이는 종래 기술에서 잘 공지되어 있고, 본 발명의 MU-1 단백질을 사용하여 상기 목적에 이용할 수 있다. 정제된 세포계 또는 단백질계 (세포 미포함) 스크리닝 어세이는 상기 작용제를 확인하기 위해 사용할 수 있다. 예를 들어, MU-1 단백질은 담체 상에 정제된 형태로 고정할 수 있고, 정제된 MU-1 단백질에 대한 결합 리간드 또는 잠재적 리간드를 검출할 수 있다.
약학 조성물
IL-21/IL-21R-길항제는 약학적으로 허용가능한 담체와 배합하여 약학 조성물로서 사용할 수 있다. 상기 조성물은 IL-21/IL-21R-길항제 및 담체에 추가하여, 각종 희석제, 충전제, 염, 완충제, 안정화제, 용해제, 및 종래 기술에 잘 공지되어 있는 기타 재료를 함유할 수 있다. "약학적으로 허용가능한" 이라는 용어는 활성 성분(들) 의 생물학적 활성의 효과를 방해하지 않는 비독성 물질을 말하는 것이다. 담체의 특성은 투여 경로에 따라 다를 것이다.
본 발명의 약학 조성물은 리포좀의 형태일 수 있고, 이때 IL-21/IL-21R-길항제(들) 는 기타 약학적으로 허용가능한 담체에 추가하여 양쪽성제 (예컨대, 수용액 중 마이셀, 불용성 단층, 액정 또는 층판층과 같은 응집 형태로 존재하는 지질) 와 배합될 수 있다. 리포좀 제형에 적합한 지질의 비제한적인 예로서 모노글리세라이드, 디글리세라이드, 술파티드, 리소레시틴, 인지질, 사포닌, 담즙산 등을 들 수 있다. 상기 리포좀 제형은, 예를 들어 미국 특허 제 4,235,871 호; 제 4,501,728 호; 제 4,837,028 호; 및 제 4,737,323 호 (상기 모두는 본원에서 참고로 인용함) 에 개시되어 있는 바와 같이 당업계의 수준에서 제조할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "치료학적 유효량" 이라는 용어는 환자에게 의미있는 효과, 예를 들어 상기 상태 증상의 개선, 치유 또는 치유 속도의 증가가 나타나는 데 충분한 약학 조성물 또는 방법의 각 활성 성분의 총량을 의미하는 것이다. 개체에 활성 성분을 단독으로 투여하는 경우, 상기 용어는 그 성분만을 말한다. 병용 투여하는 경우, 상기 용어는, 순차 투여 또는 동시 투여의 여부에 관계없이 치료 효과를 나타내는 활성 성분의 배합량을 말하는 것이다.
본 발명의 치료 방법 또는 사용 방법의 실행시, 치료적 유효량의 IL-21/IL-21R-길항제를 환자, 예를 들어 포유동물 (예를 들어, 인간) 에게 투여한다. IL-21/IL-21R-길항제는 본 발명의 방법에 따라 단독으로 투여하거나 본원에 더 자세히 기재된 다른 요법과 병용하여 투여할 수 있다. 하나 이상의 작용제와 공동투여하는 경우, IL-21- 및/또는 IL-21R-길항제는 제 2 작용제와 동시 투여하거나, 또는 순차 투여할 수 있다. 순차 투여하는 경우, 수행하는 내과 의사가 IL-21/IL-21R-길항제(들) 를 기타 작용제와 함께 투여하는 적절한 순서를 결정할 것이다.
약학 조성물 또는 본 발명의 방법의 실행에 사용되는 IL-21/IL-21R-길항제의 투여는 각종 통상적 방법, 예컨대 경구 섭취, 흡입, 또는 피부, 피하, 또는 정맥내 주사로 수행할 수 있다. 환자에게 정맥내 투여하는 것이 바람직하다.
치료적 유효량의 IL-21/IL-21R-작동제 또는 길항제를 경구 투여하는 경우, 결합제는 정제, 캡슐, 분말, 용액 또는 엘릭시르의 형태일 것이다. 정제 형태로 투여하는 경우, 본 발명의 약학 조성물은 젤라틴 또는 아주반트와 같은 고형 담체를 함유할 추가로 함유할 것이다. 정제, 캡슐, 및 분말은 약 5 ∼ 95% 의 결합제, 및 바람직하게는 약 25 ∼ 90% 의 결합제를 함유한다. 액체 형태로 투여하는 경우, 물, 석유, 동물성유 또는 식물성유 (예컨대, 땅콩유, 광유, 대두유, 또는 참기름), 또는 합성유와 같은 액체 담체를 첨가할 수 있다. 액체 형태의 약학 조성물은 생리 식염수, 덱스트로스 또는 기타 당류 용액, 또는 글리콜 (예컨대, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜) 을 더 함유할 수 있다. 액체 형태로 투여하는 경우, 약학 조성물은 약 0.5 ∼ 90 중량% 의 결합제, 및 바람직하게는 약 1 ∼ 50 중량% 의 결합제를 함유한다.
치료적 유효량의 IL-21/IL-21R 길항제를 정맥내, 피부 또는 피하 주사로 투여하는 경우, 결합제는 발열 물질이 없는, 비경구적으로 허용가능한 수용액의 형태일 것이다. pH, 등삼투압, 안정성 등에 있어서 상기 비경구적으로 허용가능한 단백질 용액의 제조는 당분야 기술에 포함되는 것이다. 정맥내, 피부, 또는 피하 주사에 바람직한 약학 조성물은, 결합제에 추가하여, 등장성 매개체, 예컨대 염화나트륨 주사액, 링거 주사액, 덱스트로스 주사액, 덱스트로스 및 염화나트륨 주사액, 락트산 링거 주사액, 또는 당분야에 공지된 기타 매개체를 함유해야 한다. 본 발명의 약학 조성물은 안정화제, 방부제, 완충제, 산화방지제 또는 당업자에게 공지된 기타 첨가제도 함유할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물 중 IL-21/IL-21R 길항제의 양은 치료할 상태의 특성 및 경중도, 및 환자가 받은 이전 치료의 특성에 따라 다를 것이다. 최종적으로, 수행하는 내과 의사가 각 개별 환자를 치료할 결합제의 양을 결정할 것이다. 처음에는, 수행하는 내과 의사가 결합제를 적은 투여량으로 투여하여 환자의 반응을 살필 것이다. 환자에 대한 최적의 치료 효과가 얻어질 때까지 결합제의 양을 늘려서, 최적의 효과가 얻어지는 시점에서 투여량은 일반적으로 더 늘리지 않는다. 본 발명의 방법의 실행에 사용되는 각종 약학 조성물은 체중 ㎏ 당 약 0.1 ㎍ ∼ 약 100 ㎎ 의 IL-21/IL-21-R 길항제를 함유해야 하는 것으로 생각된다.
본 발명의 약학 조성물을 사용하는 정맥내 치료의 지속 시간은, 치료할 질환의 경중도 및 각 개별 환자의 상태 및 잠재적 특이 반응에 따라 다를 것이다. IL-21/IL-21R 길항제의 각 투여의 지속 시간은 연속적 정맥내 투여에서 12 ∼ 24 시간의 범위일 것으로 생각된다. 최종적으로, 수행하는 내과 의사가 본 발명의 약학 조성물을 사용하는 정맥내 치료의 적절한 지속 시간을 결정할 것이다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드 및 단백질은 본원에 기재된 용도 또는 생물학적 활성 (본원에 언급된 어세이와 관련된 것을 포함함) 중 하나 이상을 나타낼 것으로 기대된다. 본 발명의 단백질에 대하여 기재된 용도 또는 활성은 상기 단백질의 투여 또는 사용에 의해, 또는 상기 단백질을 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드의 투여 또는 사용에 의해 (예컨대, DNA의 도입에 적합한 유전자 치료 또는 벡터로) 제공될 것이다.
면역 세포 활성을 감소시키기 위한 IL-21/IL-21R 길항제의 용도
또다른 측면에서, 본 발명은 면역 세포 또는 개체군의 활성을 억제하기에 충분한 양의 IL-21/IL-21R-길항제와 T 세포의 개체군을 접촉시킴에 의한, 면역 세포, 예를 들어 성숙 T 세포 (성숙 CD8+ T 세포, 성숙 CD4+ 세포), 성숙 NK 세포, B 세포, 대식세포 및 거핵세포, 또는 이의 개체군의 활성을 억제하는 방법을 특징으로 한다. IL-21 및/또는 IL-21R 길항제 (예를 들어, 본원에 기재된 융합 단백질 또는 중화 항체) 는 면역 반응의 억제가 필요한 대상자에게도 투여할 수 있다. 상기 상태 또는 장애는, 예를 들어 자가면역 장애 (예를 들어, 관절염성 장애, RA, IBD), SLE, 천식, 사구체신염, 건선, 또는 이식편/장기 이식 (및 그와 관련된 거부) 을 포함한다.
본 발명자들은 Fc 면역글로불린 영역에 융합된 IL-21R 단백질의 세포외부 도메인을 포함하는 중화 융합 단백질을 사용하여 IL-21R 활성을 감소시키는 것은 콜라겐-유도 관절염 (CIA) 동물 모델 (실시예 7), 뿐만 아니라 크론병, 궤양성 대장염, 및 IBD (실시예 9 및 11), 이식편 거부 (실시예 10), 건선 (실시예 11), 및 루푸스 (실시예 13)에 대한 동물 모델의 염증 증상을 경감시킨다는 점을 보여주었다. IL-21R mRNA 의 발현은 CIA 마우스의 발에서 상향조절되었다 (실시예 8). IL-21R 결핍 마우스는 항원 유도 기도 염증의 감소를 보여주었다 (실시예 12). 따라서, IL-21/IL-21R 활성을 상쇄하는 IL-21R 결합제를 사용하여, 자가면역 장애 (예를 들어, 관절염성 장애, RA, IBD), SLE, 사구체신염, 천식, 건선 또는 이식편/장기 이식을 비롯한 면역 세포 관련 병상의 치료 또는 예방을 위한 생체내 면역 억제를 유도할 수 있다.
또한, IL-21R DNA는 크론병에 대한 염색체 유전자자리의 위치를 알아내어, 크론병 및 기타 면역성 장질환을 치료하기 위한 IL-21/IL-21R 길항제의 용도를 더 지지하여 준다.
또한, 본 발명의 방법은 면역 세포의 활성, 예를 들어, 증식, 분화, 생존을 조절 (예를 들어, 억제) 하는 데 사용되어, 이에 따라 각종 면역 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용될 수 있다. 치료되거나 예방될 수 있는 장애의 비제한적인 예로서 이식 거부, 자가면역 질환, 예를 들어, 당뇨병, 관절염 (RA, 연소자성 RA, 골관절염 (OA), 건선성 관절염), 다발성 경화증, 뇌척수염, 중증근육 무력증, SLE, 사구체신염, 자가면역 갑상샘염, 피부염 (아토피성 피부염 및 습진성 피부염 포함), 건선 및 관련 피부 상태 (예를 들어, UV 손상과 관련된 상태, 예를 들어 광노화, 아토피성 피부염, 피부 T 세포 림프종, 예컨대 균상 식육종, 알레르기성 피부염 및 자극 접촉 피부염, 편평 태선, 원형 탈모증, 백반증, 반흔성 유천포창, 및 두드러기), 쇼그렌 증후군, 크론병, 아프타 궤양, 홍채염, 궤양성 대장염, 미분화접촉관절증, 강직 척추염, 내인 천식, 알레르기성 천식, 만성 폐쇄 폐질환 (COPD), 간질성 폐 섬유화, 피부 홍반성 루푸스, 공피증, 약물 발진, 자가면역 포도막염, 알레르기성 뇌척수염, 베게너 육아종, 간염, 스티븐스-존슨 증후군, 특발성 스프루, 그레이브스병, 사코이드증, 간섬유증, 원발성 담즙성 간경변, 후부 포도막염, 이식편 대 숙주 질환, 및 알레르기, 예컨대 아토피성 알레르기를 들 수 있다. IL-21/IL-21R 길항제를 사용하여 치료할 수 있는 바람직한 장애로는 관절염성 장애 (예를 들어, RA, 연소자성 RA, OA, 건선성 관절염, 및 강직성 척추염 (바람직하게는, 류마티스 관절염)), 다발성 경화증, 제1형 당뇨병, 루푸스 (SLE), IBD (크론병, 궤양성 대장염), 천식, 맥관염, 알레르기, 공피증, 사구체신염 및 건선을 들 수 있다.
또다른 구현예에서, IL-21/IL-21R 길항제는 단독으로 또는 본원에 기재된 다른 치료제 (예를 들어, TNF 길항제) 와 함께 사용하여 다발성 골수종 및 관련 B 림프구 악성종양을 치료할 수 있다 (Brenne et al. (2002) Blood 99(10):3756-62).
IL-21/IL-21R 길항제를 사용하여, 면역 반응을 수많은 방법으로 조절하는 것이 가능하다. 하향조절은 이미 진행중인 면역 반응을 억제하거나 차단하는 형태이거나, 면역 반응의 유도를 막는 것을 포함할 수 있다. 활성화된 T 세포의 기능은 T 세포 반응을 억제하거나, T 세포 중 특이적 내성을 유도하거나, 또는 상기 모두에 의해 억제할 수 있다. T 세포 반응의 면역억제는 일반적으로 T 세포가 억제제에 지속적으로 노출될 것을 필요로 하는 활성의 비항원 특이적 과정이다. T 세포에 비반응성 또는 아네르기를 유도하는 것을 포함하는 내성은 면역억제와는 구별되는데, 이는 내성이 일반적으로 항원 특이적이며, 내성화제 (tolerizing agent) 에 대한 노출이 중단된 후에도 지속된다는 점에서 그러하다. 조작상으로, 내성은 내성화제의 부재 하에 특정 항체에 재노출시켰을 때 T 세포 반응이 결핍되는 것으로 증명할 수 있다.
예를 들어, IL-21/IL-21R 길항제을 사용하여 면역 기능을 하향조절하거나 방지하는 것은 조직, 피부 및 장기 이식의 경우 및 이식편 대 숙주 질환 (GVHD) 에 유용할 것이다. 예를 들어, T 세포 기능을 억제하는 것은 조직 이식시 조직 파괴를 감소시킬 것이다. 전형적으로, 조직 이식시, 이식 거부는 T 세포가 이를 외부의 것으로 인식함에 의해 시작되어, 그 후 면역 반응에 의해 이식이 실패하게 된다. IL-21/IL-21R 길항제의 단독 투여, 또는 이식 이전, 동안, 또는 이후에 다른 면역 효과기의 상호작용을 억제하거나 차단하는 분자와의 병용 투여는 면역 반응을 감소시키는 역할을 할 수 있다.
IL-21/IL-21R 길항제가 장기 이식 거부 또는 GVHD 를 방지하는 효능은 인간에 대한 효능 및 투여를 예측하게 하는 동물 모델을 이용하여 평가할 수 있다. 이용할 수 있는 적절한 시스템의 예로서 래트의 동종 심장 이식편 및 마우스의 이종 이자섬 세포 이식편을 들 수 있고, 이들 모두는 문헌 [Lenschow et al. (1992) Science 257:789-92] 및 [Turka et al. (1992) Proc . Natl . Acad . Sci U.S.A., 89: 11102-05] 에 기재된 바와 같이 생체내 CTLA4 Ig 융합 단백질의 면역억제 효과를 시험하는 데 사용되어 왔다. IL-21/IL-21R 길항제는 또한 기타 동물 모델, 예를 들어 쥣과 모델의 혈관화 심장 동종 이식편 및 전 두께 피부 동종 이식편에서 평가할 수 있다. 상기 모델은 전 MHC 불일치를 갖는 조직의 거부를 시험할 수 있고, IL-21 차단을 기증자 특이적 림프구 수혈과 결합시킬 수 있다. 또한, GVHD의 쥣과 모델 (예를 들어, 문헌 [Paul ed., Fundamental Immunology, Raven Press, New York (1989) pp. 846-47] 참고) 을 이용하여 생체내 IL-21/IL-21R 길항제가 GVHD 또는 SLE의 발병에 미치는 효과를 측정할 수 있다. 또한, IL-21/IL-21R 길항제가 장기 이식 거부 또는 GVHD 를 방지하는 효능은 다른 치료제, 예를 들어 면역억제제, 예컨대 라파마이신, 시클로스포린, 또는 CTLA4Ig 와 병용하여 평가할 수 있다.
IL-21/IL-21R 길항제는 자가면역 질환의 치료에도 치료적으로 유용할 것이다. 다수의 자가면역 장애는 자가 조직에 대해 반응성이고, 질환의 병상에 수반되는 자가항체 및 사이토카인의 생성을 촉진하는 T 세포의 부적절한 활성화 결과이다. 자가반응성 T 세포의 활성화를 방지하면 질환 증상이 완화되거나 없어질 것이다. IL-21/IL-21R 길항제를 단독 투여 또는 다른 작용제 (본원에 기재된 작용제) 와 병용 투여하여 T 세포 활성화를 억제하고, 질환의 과정에 수반될 수 있는 T 세포 유도 사이토카인 또는 자가항체의 생성을 방지할 수 있다. 부가적으로, IL-21/IL-21R 길항제는, 단독으로 또는 다른 작용제 (본원에 기재된 작용제) 와 함께, 자가반응성 T 세포의 항원 특이적 내성을 증가시켜 질환을 장기간 완화시킨다. 상기 작용제가 자가면역 장애를 예방하거나 완화시키는 효능은 인간 자가면역 질환에 대한 다수의 잘 특징지어진 동물 모델을 사용하여 측정할 수 있다. 예로서 쥣과의 실험적 자가면역 뇌염, MRL/lpr/lpr 마우스 또는 NZB 하이브리드 마우스의 전신 홍반성 루푸스, 쥣과의 자가면역 콜라겐 관절염, NOD 마우스 및 BB 래트의 당뇨병, 및 쥣과의 실험적 중증근육 무력증을 들 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Paul ed., Fundamental Immunology, Raven Press, New York (1989) pp. 840-56] 참고).
한 구현예에서, IL-21/IL-21R 길항제, 예를 들어 이의 약학 조성물은 병용 치료법으로 투여하며, 즉, 병리학적 상태 또는 장애 (예컨대, 면역 및 염증 장애)의 치료에 유용한 다른 작용제, 예를 들어 치료제와 병용한다. 상기 문맥에서 "병용" 이라는 용어는 작용제를, 동시이거나 또는 순차적이거나, 실질적으로는 동시에 제공함을 의미한다. 순차적으로 제공하는 경우, 제2 화합물의 투여 개시 시점에서, 두 화합물 중 제1 화합물은 치료 부위 또는 환자 중 여전히 유효 농도로 검출가능한 것이 바람직하다.
예를 들어, 병용 치료는 본원에서 더 상세히 기재되어 있는 바와 같이 하나 이상의 추가의 치료제 (예를 들어, 사이토카인 및 성장 인자 억제제, 면역 억제제, 항염증제, 대사 억제제, 효소 억제제, 및/또는 세포 독성제 또는 세포증식 억제제 중 하나 이상) 와 함께 제형화되고/되거나 함께 투여되는 하나 이상의 IL-21/IL-21R 길항제, 예를 들어 IL-21 또는 IL-21 수용체에 대한 항체 또는 이의 항원 결합 단편 (예를 들어, 키메라성, 인간화된, 인간, 또는 시험관내 생성된 항체 또는 이의 항원 결합 단편), IL-21 융합 단백질, 가용성 IL-21 수용체, 펩티드 억제제 또는 소분자 억제제를 포함할 수 있다. 더욱이, 본원에 기재된 하나 이상의 IL-21/IL-21R 길항제는 본원에 기재된 2종 이상의 치료제와 병용하여 사용할 수 있다. 상기 병용 치료는 유리하게는 투여되는 치료제를 더 적은 투여량으로 사용하여, 이에 따라 가능한 독성 또는 각종 단독치료와 관련된 문제들을 피한다. 또한, 본원에서 개시된 치료제는 IL-21/IL-21R 수용체 경로와 상이한 경로에 작용하여, 이에 따라 IL-21/IL-21R 길항제의 효과를 증진시키고/시키거나 상승시킨다.
IL-21/IL-21R 길항제와 함께 사용되는 바람직한 치료제는 자가면역 반응 및 잇따른 염증 반응을 상이한 단계에서 방해할 수 있는 작용제이다. 한 구현예에서, 본원에 기재된 하나 이상의 IL-21/IL-21R 길항제는 하나 이상의 추가의 작용제, 예컨대 기타 사이토카인 또는 성장 인자 길항제 (예를 들어, 가용성 수용체, 펩티드 억제제, 소분자, 리간드 융합); 또는 다른 표적과 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 (예를 들어, 기타 사이토카인 또는 성장 인자와 결합하는 항체, 이의 수용체, 또는 기타 세포 표면 분자); 및 항염증성 사이토카인 또는 이의 작동제와 함께 제형화되고/되거나 함께 투여할 것이다. 본원에 기재된 IL-21/IL-21R 길항제와 함께 사용할 수 있는 작용제의 비제한적인 예로서 하나 이상의 인터루킨 (IL) 또는 이의 수용체의 길항제, 예를 들어 IL-1, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-12, IL-13, IL-15, IL-16, IL-18, 및 IL-22의 길항제; 사이토카인 또는 성장 인자 또는 이의 수용체, 예컨대 종양 괴사 인자 (TNF), LT, EMAP-II, GM-CSF, FGF 및 PDGF의 길항제를 들 수 있다. IL-21/IL-21R 길항제는 또한 CD154 (gp39 또는 CD40L), 또는 LFA-1/ICAM-1 및 VLA-4/VCAM-1을 비롯하여 CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80 (B7.1), CD86 (B7.2), CD90과 같은 세포 표면 분자 또는 이의 리간드에 대한 항체의 억제제와 함께 사용할 수도 있다 (Yusuf-Makagiansar et al. (2002) Med . Res . Rev . 22(2): 146-67). 본원에 기재된 IL-21/IL-21R 길항제와 함께 사용할 수 있는 바람직한 길항제로는 IL-1, IL-6, IL-12, TNFα, IL-15, IL-17, IL-18, 및 IL-22의 길항제를 들 수 있다.
상기 작용제의 예로서 IL-12 (바람직하게는 인간 IL-12)에 결합하는 IL-12 길항제, 예컨대 키메라성, 인간화된, 인간 또는 시험관내 생성된 항체 (또는 이의 항원 결합 단편), 예를 들어 WO 00/56772, Genetics Institute/BASF에 개시된 항체; IL-12 수용체 억제제, 예를 들어 인간 IL-12 수용체에 대한 항체; 및 IL-12 수용체, 예를 들어 인간 IL-2 수용체의 가용성 단편을 들 수 있다. IL-6 길항제의 예로서 IL-6 또는 이의 수용체에 대한 항체 (또는 이의 항원 결합 단편), 예를 들어, 인간 IL-6 또는 이의 수용체에 대한 키메라성, 인간화된, 인간 또는 시험관내 생성된 항체, IL-6 수용체의 가용성 단편, 및 IL-6 결합 단백질을 들 수 있다. IL-15 길항제의 예로서 IL-15 또는 이의 수용체에 대한 항체 (또는 이의 항원 결합 단편), 예를 들어 인간 IL-15 또는 이의 수용체에 대한 키메라성, 인간화된, 인간 또는 시험관내 생성된 항체, IL-15 수용체의 가용성 단편, 및 IL-15 결합 단백질을 들 수 있다. IL-18 길항제의 예로서 인간 IL-18에 대한 항체, 예를 들어 키메라성, 인간화된, 인간 또는 시험관내 생성된 항체 (또는 이의 항원 결합 단편), IL-18 수용체의 가용성 단편, 및 IL-18 결합 단백질 (IL-18BP, Mallat et al.(2001) Circ . Res. 89:e41-45) 을 들 수 있다. IL-1 길항제의 예로서 인터루킨-1-전환 효소(ICE) 억제제, 예컨대 Vx740, IL-1 길항제, 예를 들어 IL-1RA (ANIKINRA™, Amgen), sIL 1RII (Immunex), 및 항-IL-1 수용체 항체 (또는 이의 항원 결합 단편) 을 들 수 있다.
TNF 길항제의 예로서 TNF (예를 들어, 인간 TNFα)에 대한 키메라성, 인간화된, 인간 또는 시험관내 생성된 항체 (또는 이의 항원 결합 단편), 예컨대 D2E7 (인간 TNFα 항체, U.S. 6,258,562; BASF), CDP-571/CDP-870/BAY-10-3356 (인간화된 항-TNFα 항체; Celltech/Pharmacia), cA2 (키메라성 항-TNFα 항체; REMICADE™, Centocor); 항-TNF 항체 단편 (예를 들어, CPD870); TNF 수용체, 예를 들어, p55 또는 p75 인간 TNF 수용체 또는 이의 유도체의 가용성 단편, 예를 들어, 75 kdTNFR-IgG (75 kDa TNF 수용체-IgG 융합 단백질, ENBREL™ Immunex; 예를 들어 문헌 [Arthritis & Rheumatism (1994) Vol. 37, S295; J. Invest . Med . (1996) Vol. 44, 235A] 참고), p55 kdTNFR-IgG (55 kDa TNF 수용체-IgG 융합 단백질 (Lenercept)); 효소 길항제, 예를 들어, TNFα 전환 효소 (TACE) 억제제 (예를 들어, 알파-술포닐 히드록삼산 유도체, WO 01/55112, 및 N-히드록시포름아미드 TACE 억제제 GW 3333, -005, 또는 -022); 및 TNF-bp/s-TNFR (가용성 TNF 결합 단백질; 예를 들어, 문헌 [Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S284; Amer . J. Physiol. - Heart and Circulatory Physiology (1995) Vol. 268, pp. 37-42] 참고) 를 들 수 있다. 바람직한 TNF 길항제는 TNF 수용체, 예를 들어, p55 또는 p75 인간 TNF 수용체 또는 이의 유도체의 가용성 단편, 예를 들어, 75 kdTNFR-IgG, 및 TNF-α 전환 효소 (TACE) 억제제이다.
다른 구현예에서, 본원에 기재된 IL-21-/IL-21R 길항제는 하기 중 하나 이상과 병용 투여할 수 있다: IL-13 길항제, 예를 들어 가용성 IL-13 수용체 (sIL-13) 및/또는 IL-13에 대한 항체; IL-2 길항제, 예를 들어, DAB 486-IL-2 및/또는 DAB 389-IL-2 (IL-2 융합 단백질; Seragen; 예를 들어, 문헌 [Arthritis & Rheumatism (1993) Vol. 36, 1223] 참고), 및/또는 IL-2R에 대한 항체, 예를 들어, 항-Tac (인간화된 항-IL-2R; [Protein Design Labs, Cancer Res . (1990) Mar 1; 50(5): 1495-502]). 또다른 조합으로서 IL-21 길항제와 비제거 항-CD4 항체 (IDEC-CE9.1/SB 210396 (비제거 염장류화 항-CD4 항체; IDEC/SmithKline)) 의 병용을 들 수 있다. 기타 바람직한 조합으로서 항체, 가용성 수용체 또는 길항적 리간드; 뿐만 아니라 p-셀렉틴 당단백질 리간드 (PSGL), 항염증성 사이토카인, 예를 들어, IL-4 (DNAX/Schering); IL-10 (SCH 52000; 재조합 IL-10 DNAX/Schering); IL-13 및 TGF 및, 이의 작동제 (예를 들어, 작동제 항체) 를 비롯한 보조자극 경로 CD80 (B7.1) 또는 CD86 (B7.2) 의 길항제를 들 수 있다.
다른 구현예에서, 하나 이상의 IL-21/IL-21R 길항제는 항염증제, 면역억제제, 또는 대사 또는 효소 억제제 중 하나 이상과 공동 제제화 및/또는 공동 투여할 수 있다. 본원에 기재된 IL-21 길항제와 병용가능한 약물 또는 억제제의 비제한적인 예로서 하기 중 하나 이상을 들 수 있다: 비스테로이드성 항염증제(들) (NSAID), 예를 들어, 이부프로펜, 테니댑 (tenidap) (예를 들어, 문헌 [Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S280] 참고), 나프록센 (예를 들어, 문헌 [Neuro Report (1996) Vol. 7, pp. 1209-1213] 참고), 멜록시캄, 피록시캄, 디클로페낙, 및 인도메타신; 술파살라진 (예를 들어, 문헌 [Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S281] 참고); 프레드니솔론과 같은 코르티코스테로이드; 사이토카인 억제성 항염증제 (CSAID); 뉴클레오티드 생합성 억제제, 예를 들어, 퓨린 생합성 억제제, 엽산 길항제 (예를 들어, 메토트렉세이트(N-[4-[[(2,4-디아미노-6-프테리디닐)메틸]메틸아미노]벤조일]-L-글루탐산); 및 피리미딘 생합성 억제제, 예를 들어, 디히드로오로테이트 디히드로게나제 (DHODH) 억제제 (예를 들어, 레플루노미드 (예를 들어, 문헌 [Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S131; Inflammation Research (1996) Vol. 45, pp. 103-107] 참고). IL-21/IL-21R 길항제와 병용하여 사용하기 위한 바람직한 치료제로서 NSAID, CSAID, (DHODH) 억제제 (예를 들어, 레플루노미드), 및 엽산 길항제 (예를 들어, 메토트렉세이트) 를 들 수 있다.
또다른 억제제의 예로서 하기 중 하나 이상을 들 수 있다: 코르티코스테로이드 (경구, 흡입 및 국소 주사); 면역억제제, 예를 들어, 시클로스포린, 타크로리무스 (FK-506); 및 mTOR 억제제, 예를 들어, 시로리무스 (라파마이신) 또는 라파마이신 유도체, 예를 들어, 가용성 라파마이신 유도체 (예를 들어, 에스테르 라파마이신 유도체, 예를 들어, CCI-779 (Elit (2002) Current Opinion Investig. Drugs 3(8): 1249-53; Huang et al. (2002) Current Opinion Investig. Drugs 3(2): 295-304); 전염증성 사이토카인, 예컨대 TNFα 또는 IL-1에 의한 신호를 방해하는 작용제 (예를 들어 IRAK, NIK, IKK, p38 또는 MAP 키나제 억제제); COX2 억제제, 예를 들어, 셀레콕시브 및 이의 변이체, MK-966, 예를 들어, 문헌 [Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S81] 참고); 포스포디에스테라제억제제, 예를 들어, R973401 (포스포디에스테라제 유형 IV 억제제; 예를 들어, 문헌 [Athritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S282)] 참고); 포스포리파제 억제제, 예를 들어, 세포질 포스포리파제 2 (cPLA2)의 억제제 (예를 들어, 트리플루오로메틸 케톤 유사체 (U.S. 6,350,892)); 혈관 내피세포 성장 인자 또는 성장 인자 수용체의 억제제, 예를 들어, VEGF 억제제 및/또는 VEGF-R 억제제; 및 혈관신생 억제제. IL-21/IL-21R 길항제와 병용하여 사용하기에 바람직한 치료제로서 면역억제제, 예를 들어, 시클로스포린, 타크로리무스 (FK-506); 및 mTOR 억제제, 예를 들어 시로리무스 (라파마이신) 또는 라파마이신 유도체, 예를 들어 가용성 라파마이신 유도체 (예를 들어, 에스테르 라파마이신 유도체, 예를 들어, CCI-779); COX2 억제제, 예를 들어, 셀레코시브 및 이의 변이체; 포스포리파제 억제제, 예를 들어 세포질 포스포리파제 2 (cPLA2) 의 억제제 (예를 들어, 트리플루오로메틸 케톤 유사체) 를 들 수 있다.
IL-21/IL-21R 길항제와 병용가능한 치료제의 추가의 예로서 하기 중 하나 이상을 들 수 있다: 6-메르캅토퓨린 (6-MP); 아자티오프린 술파살라진; 메살라진; 올살라진 클로로퀸/히드록시클로로퀸; 펜실라민; 오로티오날레이트 (근육내 및 경구); 아자티오프린; 콜키신; 베타-2 아드레날린수용체 작동제 (살부타몰, 터부탈린, 살메테랄 (salmeteral)); 크산틴 (테오필린, 아니노필린 (arninophylline)); 크로모글리케이트; 네도크로밀; 케토티펜; 이프라트로피움 및 옥시트로피움; 미코페놀레이트 모페틸; 아데노신 작동제; 항트롬빈제; 보체 억제제; 및 아드레날린제.
특정 면역 장애를 치료하거나 예방하기 위하여 본원에 개시된 IL-21/IL-21R 길항제를 기타 치료제와 병용하여 사용하는 것은 본원에 더 자세하게 기재되어 있다.
IL-21/IL-21R 길항제와 병용할 수 있는, 관절염성 장애 (예를 들어, RA, 염증성 관절염, 연소자성 RA, OA 및 건선성 관절염)를 치료하거나 예방하기 위한 작용제의 비제한적인 예로서 하기 중 하나 이상을 들 수 있다: 본원에 기재된 IL-12 길항제, NSAID; CSAID; TNF, 예를 들어, 본원에 기재된 길항제, TNFα; 본원에 기재된 비제거 항-CD4 항체; 본원에 기재된 IL-2 길항제; 항염증성 사이토카인, 예를 들어, IL-4, IL-1O, IL-13 및 TGFα, 또는 이의 작동제; 본원에 기재된 IL-1 또는 IL-1 수용체 길항제); 본원에 기재된 포스포디에스테라제 억제제; 본원에 기재된 COX-2 억제제; Iloprost (예를 들어, 문헌 [Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S82] 참고); 메토트렉세이트; 탈리도미드 (thalidomide) (예를 들어, 문헌 [Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S282] 참고) 및 탈리도미드-관련 약물 (예를 들어, Celgen); 레플루노미드; 플라스미노겐 활성 억제제, 예를 들어, 트라넥삼산 (예를 들어, 문헌 [Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S284] 참고); 사이토카인 억제제, 예를 들어, T-614; 예를 들어, 문헌 [Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S282] 참고); 프로스타글란딘 El (예를 들어, 문헌 [Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S282] 참고); 아자티오프린 (예를 들어, 문헌 [Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S281] 참고); 인터루킨-1 전환 효소 (ICE) 억제제; zap-70 및/또는 lck 억제제 (티로신 키나제 zap-70 또는 lck의 억제제); 본원에 기재된 혈관 내피 세포 성장 인자 또는 혈관 내피 세포 성장 인자 수용체의 억제제; 본원에 개시된 혈관신생 억제제; 코르티코스테로이드 항염증제 (예를 들어, SB203580); TNF-전환효소 억제제; 인터루킨-11 (예를 들어, 문헌 [Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S296] 참고); IL-13 (예를 들어, 문헌 [Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S308] 참고); IL-17 억제제 (예를 들어, 문헌 [Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S120] 참고); 금; 페니실라민; 클로로퀸; 히드록시클로로퀸; 클로람부실; 시클로포스파미드; 시클로스포린; 총 림프절 조사; 항-흉선 세포 글로불린; CD5-독소; 경구 투여된 펩티드 및 콜라겐; 로벤자리트 (lobenzarit) 2나트륨 ; 사이토카인 조절제 (CRA) HP228 및 HP466 (Houghten Pharmaceuticals, Inc.); ICAM-1 안티센스 포스포로티오에이트 올리고데옥시뉴클레오티드 (ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.); 가용성 보체 수용체 1 (TPlO; T Cell Sciences, Inc.); 프레드니손; 오르고테인; 글리코사미노글리칸 폴리술페이트; 미노시클린; 항-IL-2R 항체; 해양 및 식물 지질 (어류 및 식물 종자의 지방산; 예를 들어, 문헌 [DeLuca et al. (1995) Rheum. Dis . Clin . North Am . 21:759-777] 참고); 아우라노핀; 페닐부타존; 메클로페남산; 플루페남산; 정맥내 면역 글로불린; 질레우톤 (zileuton); 미코페놀산 (RS-61443); 타크로리무스 (FK-506); 시로리무스 (라파마이신); 아미프릴로스 (테라펙틴); 클라드리빈 (2-클로로데옥시아데노신); 및 아자리빈. 바람직한 조합으로서 하나 이상의 IL-21 길항제와 메토트렉세이트 또는 레플루노미드, 그리고 중간 및 심각한 관절염의 경우, 시클로스포린의 병용을 들 수 있다.
관절염성 장애를 치료하기 위하여 IL-21/IL-21R 길항제와 병용하여 사용하기 위한 억제제의 바람직한 예로서 TNF 길항제 (예를 들어, TNF에 결합하는 키메라성, 인간화된, 인간 또는 시험관내 생성된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편; TNF 수용체, 예를 들어, p55 또는 p75 인간 TNF 수용체 또는 이의 유도체의 가용성 단편, 예를 들어, 75 kdTNFR-IgG (75 kDa TNF 수용체-IgG 융합 단백질, ENBREL™), p55 kDa TNF 수용체-IgG 융합 단백질; TNF 효소 길항제, 예를 들어, TNFα 전환 효소 (TACE) 억제제); IL-6, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-22의 길항제; T 세포 및 B 세포 제거제 (예를 들어, 항-CD4 또는 항-CD22 항체); 소분자 억제제, 예를 들어, 메토트렉세이트 및 레플루노미드; 시로리무스 (라파마이신) 및 이의 유사체, 예를 들어, CCI-779; Cox-2 및 cPLA2 억제제; NSAID; p38 억제제, TPL-2, Mk-2 및 NFκb 억제제; RAGE 또는 가용성 RAGE; P-셀렉틴 또는 PSGL-1 억제제 (예를 들어, 소분자 억제제, 이에 대한 항체, 예를 들어, P-셀렉틴에 대한 항체); 에스트로겐 수용체 베타 (ERB) 작용제 또는 ERB-NFκb 길항제를 들 수 있다. 하나 이상의 IL-21/IL-21R 길항제와 함께 제형화되고/되거나 함께 투여될 수 있는 가장 바람직한 추가의 첨가제로서 하기 중 1종을 들 수 있다: TNF 수용체, 예를 들어, p55 또는 p75 인간 TNF 수용체 또는 이의 유도체의 가용성 단편, 예를 들어, 75 kdTNFR-IgG (75 kDa TNF 수용체-IgG 융합 단백질, ENBREL™); 메토트렉세이트, 레플루노미드, 또는 시로리무스 (라파마이신) 또는 이의 유사체, 예를 들어, CCI-779.
IL-21/IL-21R 길항제와 병용할 수 있는, 다발성 경화증의 치료 또는 예방을 위한 작용제의 비제한적인 예로서 하기를 들 수 있다: 인터페론, 예를 들어, 인터페론-알파 1a (예를 들어, AVONEX™; Biogen) 및 인터페론-1b (BETASERON™; Chiron/Berlex); 공중합체 1 (Cop-1; COPAXONE™; Teva Pharmaceutical Industries, Inc.); 고압성 산소; 정맥내 면역 글로불린; 클라브리빈 (clabribine); 본원에 기재된 TNF 길항제; 코르티코스테로이드; 프레드니솔론; 메틸프레드니솔론; 아자티오프린; 시클로포스파미드; 시클로스포린; 메토트렉세이트; 4-아미노프리딘; 및 티자니딘을 들 수 있다. IL-21과 병용가능한 추가의 길항제로서 기타 인간 사이토카인 또는 성장 인자, 예를 들어, TNF, LT, IL-1, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-12 IL-15, IL-16, IL-18, EMAP-11, GM-CSF, FGF, 및 PDGF의 길항제 또는 이에 대한 항체를 들 수 있다. 본원에 기재된 IL-21 길항제는 세포 표면 분자 (예컨대, CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80, CD86, CD90 또는 이의 리간드) 에 대한 항체와 병용할 수 있다. 또한, IL-21 길항제는 메토트렉세이트, 시클로스포린, FK506, 라파마이신, 미코페놀레이트 모페틸, 레플루노미드, NSAID (예를 들어, 이부프로펜), 코르티코스테로이드 (예컨대, 프레드니솔론), 포스포디에스테라제 억제제, 아데노신 작용제, 항트롬빈제, 보체 억제제, 아드레날린제, 본원에 기재된 전염증성 사이토카인에 의한 신호를 방해하는 작용제, IL-1b 전환 효소 억제제 (예를 들어, Vx740), 항-P7, PSGL, TACE 억제제, T 세포 신호 억제제 (예컨대, 키나제 억제제), 금속단백분해효소 억제제, 술파살라진, 아자틀로프린 (azathloprine), 6-메르캅토퓨린, 안지오텐신 전환 효소 억제제, 본원에 기재된 가용성 사이토카인 수용체 및 이의 유도체, 및 항염증성 사이토카인 (예를 들어, IL-4, IL-1O, IL-13 및 TGF) 와 같은 작용제와 병용할 수 있다.
IL-21 길항제와 병용가능한 다발성 경화증 치료제의 바람직한 예로서 인터페론-b, 예를 들어, IFNβ-1a 및 IFNβ-1b; 코팍손, 코르티코스테로이드, IL-1 억제제, TNF 억제제, CD40 리간드 및 CD80에 대한 항체, IL-12 길항제를 들 수 있다.
IL-21/IL-21R 길항제과 병용가능한 염증성 장질환 (크론병; 궤양성 대장염) 의 치료제 또는 예방제의 비제한적인 예로서 하기를 들 수 있다: 부테노사이드; 내피 성장 인자; 코르티코스테로이드; 시클로스포린, 술파살라진; 아미노살리실레이트; 6-메르캅토퓨린; 아자티오프린; 메트로니다졸; 리포옥시게나제 억제제; 메살라민; 올살라진; 발살라지드; 산화방지제; 트롬복산 억제제; IL-1 수용체 길항제; 항-IL-1 단일클론 항체; 항-IL-6 단일클론 항체; 성장 인자; 엘라스타제 억제제; 피리디닐-이미다졸 화합물; 본원에 기재한 TNF 길항제; IL-4, IL-1O, IL-13 및/또는 TGFb 사이토카인 또는 이의 작동제 (예를 들어, 작동제 항체); IL-11; 프레드니솔론, 덱사메타손 또는 부데소니드의 글루쿠로니드- 또는 덱스트란-컨쥬게이션된 프로드러그; ICAM-1 안티센스 포스포로티오에이트 올리고디옥시뉴클레오티드 (ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.); 가용성 보체 수용체 1 (TP10; T Cell Sciences, Inc.); 서방형 메살라진; 메토트렉세이트; 혈소판 활성 인자 (PAF)의 길항제; 시프로플록사신; 및 리그노카인.
한 구현예에서, IL-21/IL-21R 길항제는 면역 반응, 예를 들어, 이식 거부, 이식편 대 숙주 질환, 또는 기타 면역 반응 관련 장애의 조절에 수반되는 다른 표적에 대한 1 이상의 항체와 병용하여 사용할 수 있다. 본 발명의 IL-21/IL-21R 길항제와 병용가능한 면역 반응의 치료제 또는 예방제의 비제한적인 예로서 하기를 들 수 있다: 세포 표면 분자 또는 이의 리간드에 대한 항체{이의 비제한적인 예는 CD25 (IL-2 수용체-a), CDl1a (LFA-1), CD54 (ICAM-1), CD4, CD40, CD40L, CD45, CD28/CTLA4, CD80 (B7-1) 및/또는 CD86 (B7-2)임}. 또다른 구현예에서, IL-21/IL-21R 길항제는 코르티코스테로이드; 시로리무스 (라파마이신) 및 이의 유사체, 예를 들어, CCI-779; 시클로스포린 A; FK506; FTY720; 아자티오프린; 시클로포스파미드; 메토트렉세이트; 항-IL-2R 항체, 예를 들어, 바실릭시마브, 다클리주마브; cA2 (키메라성 항-TNFα 항체; REMICADE™, Centocor); 항-CD3 항체 (예를 들어, 뮤로모나브-CD3); 공중합체 1 (Cop-1; COPAXONE™; Teva Pharmaceutical Industries, Inc.); 디옥시스퍼구알린; 및 미코페놀레이트 모페틸과 병용하여 사용할 수 있다.
IL-21/IL-21R 길항제와 병용가능한, 건선 및 기타 피부 상태의 치료제 또는 예방제의 비제한적인 예로서 하기 중 하나 이상을 들 수 있다; CD2 또는 LFA-3 상호작용의 억제제 (예를 들어, 가용성 CD2- 또는 LFA-폴리펩티드, 예컨대 Fc 융합, 또는 CD2 또는 LFA-3에 대한 항체), 시클로스포린 A, 프레드니손, FK506, 메토트렉세이트, PUVA, UV 광, 스테로이드, 레티노이드, 인터페론, 또는 질소 머스타드. IL-21/IL-21R 길항제와 병용가능한 바람직한 작용제의 예로서 시클로스포린 A 및 메토트렉세이트를 들 수 있다.
IL-21/IL-21R 길항제와 병용가능한 천식 치료제 또는 예방제의 비제한적인 예로서 하기 중 하나 이상을 들 수 있다: 흡입용 기관지확장제, 예를 들어, 피르부테롤, 비톨테롤, 메타프로테레놀; 베타 2-아드레날린수용체 작동제, 예를 들어 알부테롤, 터부탈린, 살메테롤, 포르모테롤; 항무스카린제, 예를 들어 이프라트로피움, 옥시트로피움; 전신 코르티코스테로이드, 예를 들어, 프레드니손, 프레드니솔론, 덱사메타손; 흡입용 코르티코스테로이드, 예를 들어, 플루티카손, 부데소니드, 베클로메타손, 모메타손; 류코트리엔 길항제, 예를 들어, 몬테루카스트 나트륨, 자피르루카스트; 비만 세포 안정화제, 예를 들어, 크로몰린 나트륨, 네도크로밀; 오말리주마브 (XOLAIR™; Genentech/Novartis); 또는 본원에 기재된 바와 같은 COX-2 억제제.
IL-21/IL-21R 길항제와 병용가능한 루푸스 (예를 들어, SLE) 치료제 또는 예방제의 비제한적인 예로서 하기 중 하나 이상을 들 수 있다: IL-6/IL-6R 길항제, 예를 들어, 항-IL-6 또는 항-IL-6R 항체; NSAID; 코르티코스테로이드; 예를 들어, 덱사메타손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 프레드니손; 아자티오프린, 시클로포스파미드, 히드록시클로로퀸, 또는 클로로퀸을 들 수 있다.
따라서, 본 발명의 또다른 측면은 IL-21/IL-21R 길항제와 기타 치료제 화합물을 병용 투여하기 위한 키트에 관한 것이다. 한 구현예에서, 상기 키트는 약학적 담체 중 제형화된 1 이상의 결합제, 및 필요에 따라 1 이상의 별개의 약제 중 제형화된 하나 이상의 작용제를 포함한다.
대표적 장애
류마티스 관절염은 통증, 부기, 경직, 및 관절의 기능 상실을 야기하는 자가면역 염증성 질환이다. 류마티스 관절염은 종종 대칭적 양상으로 나타난다. 이 질환은 손목 관절 및 손과 가장 가까운 손가락 관절에 영향을 미칠 수 있다. 또한, 이는 관절 이외의 다른 신체 부위에도 영향을 미칠 수 있다. 또한, 류마티스 관절염에 걸린 사람은 피로, 이따금씩 열, 및 전신 권태를 느낄 수 있다. 류마티스 관절염 진단에 대한 양성 인자로서 "류마티스 인자" 혈액 항체 및 시트룰린 항체를 들 수 있다. IL-21/IL-21R 길항제는 류마티스 관절염 또는 류마티스 관절염의 한가지 이상의 증상을 치료, 예방 또는 완화시키는 데 유용할 수 있다.
전신 홍반성 루푸스 (SLE)는 각종 신체 조직에 염증 및 손상을 일으키는 자가면역 장애이다. SLE는 자기 자신의 DNA 에 대항하는 자가 항체에 의해 매개된다. 루푸스는 관절, 피부, 신장, 심장, 폐, 혈관, 및 뇌를 비롯한 신체의 많은 부위에 영향을 미칠 수 있다. 각종 증상이 있을 수 있는 반면, 가장 흔한 증상 중 몇 개를 들면 극도의 피로감, 관절 통증 및 부기 (관절염), 이유 없는 열, 피부 발진 및 신장 문제(예를 들어, 사구체신염)이다. 루푸스의 대표적 증상은 관절 통증 또는 부기, 이유 없는 열, 및 극도의 피로감을 포함한다. 특징적인 붉은 피부 발진은 코 및 뺨에 걸쳐 나타날 수 있다. 발진은 얼굴 및 귀, 상박, 어깨, 가슴 및 손에도 나타날 수 있다. 루프스의 기타 증상으로는 흉통, 탈모, 빈혈, 구강 궤양, 및 추위와 스트레스에 의한 창백하거나 자줏빛의 손가락 및 발가락을 들 수 있다. 몇몇 사람은 두통, 어지러움, 우울증, 착란, 또는 발작도 경험한다. SLE 진단에 대한 양성 인자로서 항-핵 항체, 항-DNA 항체, 및 항-Sm 항체를 들 수 있다. IL-21/IL-21R 길항제는 SLE 또는 SLE의 한가지 이상의 증상의 치료, 개선 (완화) 또는 예방에 유용할 수 있다.
강직척추염은 척추에 영향을 미칠 뿐 아니라, 뼈 및 관절 주위의 힘줄 및 인대에 염증이 생김으로 인하여 엉덩이, 어깨 및 무릎에도 영향을 미쳐 통증 및 경직을 야기하는 자가면역 장애이다. 강직척추염은 청소년기 후기 또는 성인 초기에 걸리는 경향이 있다. IL-21/IL-21R 길항제는 강직척추염 또는 이의 한가지 이상의 증상의 치료, 예방 또는 완화에 유용할 수 있다.
염증성 장질환 (IBD)은 장에 염증을 일으키는 질환의 일반명이다. 염증성 장질환의 두가지 예는 크론병 및 궤양성 대장염이다. IL-21/IL-21R 길항제는 염증성 장질환 또는 염증성 장질환의 한가지 이상의 증상의 치료, 예방 또는 완화에 유용할 수 있다.
크론병은 소장에 염증을 일으킨다. 크론병은 보통 소장 (회장)의 하부에서 발생하나, 이는 입부터 항문까지의 소화관의 임의의 부위에 침범할 수 있다. 염증은 침범된 장기의 내측 깊이까지 침투하여 고통을 야기하고 종종 장을 비워서 설사를 일으킬 수 있다. 크론병의 가장 일반적인 증상은 종종 하부 우측 부위의 복통 및 설사이다. 직장 출혈, 체중 감소 및 열도 발생할 수 있다. 출혈은 심각하고 지속적이어서 빈혈을 야기할 수 있다. 장을 직접 시각화하는 것이 염증의 크기를 측정하는 데 유용할 것이다.
궤양성 대장염은 대장의 내측에 염증 및 궤양으로 불리는 상처를 야기하는 질환이다. 염증은 보통 직장 및 결장의 하부에 발생하나, 이는 결장 전체에 침투할 수 있다. 궤양성 대장염은 회장 말단으로 불리는 말단부를 제외하면 소장에는 거의 침범하지 않는다. 염증은 종종 결장을 비워서 설사를 야기한다. 궤양은 염증이 결장 내층 세포를 사멸시킨 부위에 형성되고; 궤양에서 피가 나며 고름이 생긴다. 궤양성 대장염의 가장 일반적인 증상은 복통 및 피가 섞인 설사이다. 환자는 피로, 체중 감소, 식욕 감퇴, 직장 출혈, 및 체액 및 영양분의 손실도 겪을 수 있다. 환자 중 절반 가량은 가벼운 증상을 겪는다. 나머지는 빈번한 열, 피가 섞인 설사, 구역질, 및 심각한 복부 경련을 앓는다. 궤양성 대장염은 관절염, 눈의 염증, 간질환 (간염, 경화증 및 1차 경화성 담관염), 골다공증, 피부 발진 및 빈혈도 야기할 수 있다. 궤양성 대장염의 진단은 일반적으로 혈변의 확인 및 결장의 직접적 시각화에 의존한다.
건선은 인설 및 염증의 만성 피부 질환이다. 건선은 피부 세포가 피부 표면 아래의 기점으로부터 빠르게 자라 이들이 성숙되기도 전에 표면에 쌓이는 경우 발생한다. 보통 이러한 변화 (턴오버라고도 불림)는 1달이 걸리나, 건선의 경우 이는 단지 몇 일 만에 일어난다. 이의 전형적인 형태로, 건선은 은색 비늘로 덮인 두꺼운 염증 피부의 반 (patch) 을 형성한다. 때때로 판 (plaque) 으로 불리는 이들 반은 보통 가렵거나 쓰리다. 이는 가장 빈번하게는 종종 팔꿈치, 무릎, 다리의 다른 부위, 두피, 등 아래쪽, 얼굴, 손바닥, 및 발바닥에 발생하지만, 이는 신체 상 피부 어느 곳에서도 발생할 수 있다. 건선의 진단은 1차적으로 상기 특징적 증상에 기초한다. 피부 생검이 진단에 유용할 수 있다. IL-21/IL-21R 길항제는 건선 또는 건선의 한가지 이상의 증상의 치료, 예방, 또는 완화에 유용할 수 있다. 건선성 관절염은 건선, 인설 피부 장애를 앓는 일부 환자에게 발생한다. 건선성 관절염은 종종 손가락 및 발가락 말단의 관절에 영향을 미치고, 손톱 및 발톱의 변화를 수반한다. 척추가 포함되는 경우, 요통이 발생할 수 있다. IL-21/IL-21R 길항제는 건선 또는 건선성 관절염의 한가지 이상의 증상을 치료, 예방 또는 완화시키는 데 유용할 수 있다.
사구체 질환은 증식성 및 비증식성 장애 모두를 포함한다. 사구체신염은 사구체내 염증 및 세포 증식이 나타나는 장애이다 (예를 들어, 문헌 [Hricik et al. (1998) New Eng . J. Med. 339:888-99] 참고). 비증식성 및 경화성 사구체병증은 막성 사구체병증, 당뇨병성 신증, 국소 분절성 사구체경화증, 얇은 기저막 질환, 아밀로이드증, 경쇄 신증, HIV 신증, 알포트 증후군, 약물 유발 사구체병증, 및 미세병변을 포함한다. 사구체 질환에 수반되는 염증은 주로 자가면역으로부터 발생하는 항체 매개의 사구체 손상으로 인해 발생한다. 체액 면역의 활성화는 사구체 세포 표면 (예를 들어, 기저막) 에 대한 항체의 생성을 야기할 수 있고, 혈중 항원-항체 복합체가 사구체에 침전되며, 이것이 사구체신염 병리의 원인이 되는 것으로 보고되어 있다. 따라서, 사구체 손상 및 사구체신염은 종종 더 큰 전신 자가면역 장애, 예컨대 SLE, 간염, 및 섬유성 장애로부터 유래하는 것이다. 또한, 사구체신염은 IgA 신증, 헤노흐-쇤라인 (Henoch-Schonlein purpura) 자반증, 감염 (예를 들어, 박테리아, 바이러스, 원충에 의해 야기된 감염), 혈관염, 한랭글로불린혈증, 유전성 신장염, 육아종증 (예를 들어, 베게너 육아종증, 현미경적 다발성혈관염, 및 초그-스트라우스 증후군 (Churg-Strauss syndrome)), 사구체 기저막 질환, 굿파스쳐 증후군, 신염 증후군 (예를 들어, 당뇨병, 루푸스 (예를 들어, SLE), 아밀로이드증, 약물 사용, 암, 및 감염과 함께 발생하는 경우), 지방이상증, 겸상 적혈구 질환, 보체 결핍증, 막 증식성 사구체신염, 루푸스 신염 및 루프스 막성 신증과 관련된 것일 수 있다. IL-21/IL-21R 길항제는 사구체신염 또는 사구체신염의 한가지 이상의 증상, 및 기타 사구체 질환의 치료, 완화, 또는 예방에 유용할 수 있다.
IL-21/IL-21R 길항제는 기관, 조직, 또는 세포, 예를 들어, 심장, 폐, 간, 신장, 췌장, 또는 골수의 이식 전, 그 동안, 또는 그 후에 이식과 관련된 조직/이식편 거부 또는 거부와 관련된 증상을 예방하거나 치료하기 위하여 사용할 수 있다. 이식/이식편 거부는 수여자 유기체의 면역계가 이식된 조직, 예를 들어, 동계 조직, 동종 조직, 또는 이종 조직의 비자가 항원에 대한 면역 반응을 일으키는 경우 발생한다. 거부는, 예를 들어, 항체, 림프구, 또는 모두에 의해 매개될 수 있고, 예를 들어, 초급성 거부 (예를 들어, 초기 이식후 기간 동안), 급성 거부, 및 만성 거부 (일반적으로, 이식편 기능의 점차적인 감퇴를 야기하는 서서히 진행되는 과정) 을 비롯한 각종 상이한 방식으로 나타날 수 있다. 거부는 종종 염증을 수반하고, 이식된 조직 또는 기관의 손상 및/또는 기능부전, 예를 들어, 혈관병증, 섬유증, 또는 기관 기능의 상실을 야기할 수 있다. 거부 동안, 수여자는 이식 부위에 일반적 불편, 통증 또는 부기 및/또는 열을 겪을 수 있다. 거부 징후에 대한 생검 조사에 의해, 또는 기관의 기능을 평가함으로써 기관 및 조직 이식편의 거부를 모니터링할 수 있다. 신장 이식 이후, 예를 들어, 신세뇨관 세포 중 거부의 조직병리학적 징후는, 예를 들어, 증가된 HLA 계열 II 항원의 발현을 포함한다. 간 기능은, 예를 들어, 빌리루빈 및 간 효소, 예를 들어, 알칼리성 포스파타제의 혈청 수준을 측정함으로써 평가할 수 있고; 신장 기능은, 예를 들어 혈청 크레아틴 수준을 측정함으로써 평가할 수 있다.
골관절염 (OA) 은 관절의 연골의 손상으로 특징지어진다. 이는 연골 하부의 뼈가 서로 마찰되게 하여, 통증, 부기, 및 관절 운동의 감소를 야기한다. 시간이 지나면, 관절은 이의 정상적인 형태를 잃게 되고, 골극 또는 골증식체가 관절의 말단에서 증식할 수 있다. 또한, 뼈 또는 연골 조각이 파손되어 관절 공간 내부에 부유하여 더 큰 통증과 손상을 야기한다. OA 를 앓는 사람은 통상적으로 관절 통증을 겪고 움직임이 제한된다. 일부 다른 관절염 형태와는 달리, OA 는 오로지 관절에만 영향을 미치고 다른 내부 장기에는 영향을 미치지 않는다. OA 의 진단에 대한 양성 인자는, X-선에서 나타나는 연골 손실을 포함한다. IL-21/IL-21R 길항제는 OA 또는 OA 의 한가지 이상의 증상을 치료, 예방 또는 완화시키는 데 유용할 수 있다.
호흡기 장애
IL-21/IL-21R 길항제는 천식 (예를 들어, 알레르기성 및 비알레르기성 천식); 기관지염 (예를 들어, 만성 기관지염); 만성 폐쇄성 폐질환 (COPD) (예를 들어, 폐기종, 예를 들어, 담배 유발 폐기종); 기도 감염을 수반하는 상태, 호산구증가증, 섬유증 및 과도한 점액 생성, 예를 들어, 낭성 섬유증, 폐 섬유증, 및 알레르기성 비염을 포함하지만 이에 국한되지는 않는 호흡기 장애를 치료하는 데 사용할 수 있다.
천식의 치료 또는 예방 방법은 외인성 천식 (알레르기성 천식 또는 아토피성 천식으로도 공지되어 있음), 내인성 천식 (비알레르기성 천식 또는 비아토피성 천식으로도 공지되어 있음) 또는 혼합형 천식으로서 불리는 상기 두가지의 조합에 대한 방법을 포함한다. 외인성 또는 알레르기성 천식은, 예를 들어, 알레르겐 (예컨대, 화분, 포자, 풀 또는 잡초, 애완동물 비듬, 먼지, 좀진드기 등)에 의해 야기되거나 이와 관련된 것을 포함한다. 알레르겐 및 기타 자극물은 연 중 다양한 시점에 나타나므로, 상기 유형의 천식은 계절성 천식으로도 불린다. 또한, 기관지 천식 및 알레르기성 기관지폐 아스페르길로스증도 외인성 천식의 군에 포함된다.
본 발명의 방법에 의해 치료되거나 완화될 수 있는 천식은 감염체, 예컨대 바이러스 (예를 들어, 감기 및 인플루엔자 바이러스, 호흡기 합포체 바이러스 (RSV), 파라믹소바이러스, 리노바이러스 및 인플루엔자 바이러스)에 의해 야기되는 것을 포함한다. RSV, 리노바이러스 및 인플루엔자 바이러스 감염은 아이에게 일반적이며, 바이러스 감염은 유아 및 어린 아이의 호흡관 질환의 주요 원인이다. 바이러스성 세기관지염을 앓는 아이예게는 만성 천명 및 천식이 발생할 수 있고, 이는 본 발명의 방법을 이용하여 치료할 수 있다. 또한, 운동 및/또는 찬 공기에 의한 일부 천식에서 발생할 수 있는 천식 상태도 포함된다. 본 방법은 연기 노출 (예를 들어, 담배 연기 및 산업 연기), 뿐만 아니라 산업적 노출 및 직업적 노출, 예컨대 연기; 오존; 유해 가스; 이산화황; 일산화질소; 발연; 페인트, 플라스틱, 폴리우레탄, 바니스 등으로부터 나오는 이소시아네이트; 목재, 식물, 또는 기타 유기 먼지 등과 관련된 천식에 유용하다. 본 방법은 또한 식품 첨가물, 방부제, 또는 약제와 관련된 천식에도 유용하다. 또한, 사일런트 (silent) 천식 또는 기침 이형 천식으로 일컬어지는 천식의 유형을 치료, 억제 또는 완화시키는 방법도 포함된다.
또한, 본원에 개시된 방법은 기관지 수축을 자극할 수 있는 위식도 역류 (GERD) 와 관련된 천식의 치료 및 완화에도 유용하다. GERD, 기침 억제, 침실에서의 알레르기 및 자극물에 대한 노출은 천식 상태를 유발할 수 있고, 이는 밤 천식 또는 야간 천식으로 집합적으로 일컬어져 왔다. GERD 와 관련된 천식의 치료, 억제 또는 완화 방법에 있어서, 약학적 유효량의 IL-21/IL-21R 길항제를 GERD의 치료를 위한 약학적 유효량의 작용제와 함께 본원에 기재된 바와 같이 사용할 수 있다. 상기 작용제의 비제한적인 예로서 양성자 펌프 억제제, 예컨대 PROTONIX® 브랜드의 서방형 판토프라졸 나트륨 정제, PRILOSEC® 브랜드의 오메프라졸 서방형 캡슐, ACIPHEX® 브랜드의 레베프라졸 나트륨 서방형 정제, 또는 PREVACID® 브랜드의 서방형 란소프라졸 캡슐을 들 수 있다.
아토피성 장애 및 이의 증상
"아토피" 는 유전적 성향으로 종종 알레르기 반응을 일으키는 질환을 말한다. 아토피성 장애의 예로서 알레르기, 알레르기성 비염, 아토피성 피부염, 및 고초열을 들 수 있다. IL-21/IL-21R 경로 길항제를 투여하여 아토피 질환 또는 이의 한가지 이상의 증상을 완화시킬 수 있다.
알레르기성 비염 (고초열) 의 증상으로는 코 가려움, 콧물, 재채기 또는 코막힘, 및 눈 가려움을 들 수 있다. IL-21/IL-21R 경로 길항제를 투여하여 상기 증상 중 한가지 이상을 완화시킬 수 있다.
아토피 피부염은 피부에 영향을 미치는 만성 질환이다. 아토피 피부염에 대한 정보는 NIH 공보 제 03-4272 호로부터 이용가능하다. 아토피 피부염의 경우, 피부는 매우 가렵고, 홍반, 부종, 갈라짐, 투명 체액의 흐름, 및 결국에는 딱지 및 인설이 나타난다. 많은 경우, 질환이 악화되는 기간 (악화 또는 발적으로 불림) 과 그 후 피부가 개선되고 완전히 깨끗해지는 기간 (완화로 불림) 이 존재한다. 아토피 피부염은 종종 "습진" 으로도 불리는데, 이는 피부 염증의 여러 유형에 대한 일반적인 명칭이다. 아토피 피부염은 여러 종류의 습진 중 가장 일반적인 것이다. 아토피 피부염의 예로서 하기를 들 수 있다: 알레르기성 접촉 습진 또는 피부염 (피부가 외부 물질, 예컨대 덩굴 옻나무, 또는 크림 및 로션 중 특정 방부제와 겁촉하는 경우, 예를 들어 붉고, 가려우며, 흘러나오는 반응으로 종종 특징지어짐); 접촉 습진 (피부가 알레르겐 또는 자극물, 예컨대 산, 세척제, 또는 기타 화학물질과 접촉하는 경우, 예를 들어, 홍반, 소양증, 및 화끈거림을 포함하는 국소적 반응); 발한장애성 습진 (예를 들어, 가렵고 화끈거리는 투명하고 깊은 습진으로 특징지어지는 손바닥 및 발바닥 피부의 자극); 신경피부염 (예를 들어, 긁었을 때 매우 자극이 되는, 국소적 소양 (예컨대, 벌레 물림) 에 의해 야기되는 머리, 하퇴, 손목 또는 전완 상 피부의 인설면); 원형 습진 (예를 들어, 갈라지고, 인설이 생기며 극도로 가려울 수 있는 자극받은 피부 (가장 일반적으로 팔, 등, 엉덩이, 및 하퇴) 의 코인형 반으로 특징지어짐); 지루 습진 (두피, 얼굴, 및 때때로 신체 다른 부위 상 피부의, 예를 들어, 황색의 기름지고 비늘 모양의 반으로 특징지어짐). 추가의 특징적 증상으로는 정체 피부염, 아토피 주름 (예를 들어, 데니-모르간 주름 (Dennie-Morgan fold)), 입술염, 잔금이 많은 손바닥, 과다 색소침착된 눈꺼풀: 염증 또는 고초열에 의해 색이 짙어진 눈꺼풀, 비늘종, 모공 각화증, 태선화, 구진, 및 두드러기를 들 수 있다. IL-21/IL-21R 경로 길항제를 투여하여 상기 증상 중 한가지 이상을 완화시킬 수 있다.
섬유성 장애
콜라겐 생성은 고도로 조절되는 과정인 반면, 이의 장애는 조직 섬유증의 발병을 야기할 수 있다. 섬유질 물질의 비정상적 축적은 궁극적으로 기관의 기능상실을 야기할 수 있다 (Border et al. (1994) New Engl . J. Med . 331:1286-92). 임의의 기관에 대한 손상은 전형적인 생리적 반응: 혈소판 유도 지혈, 그 후 염증 세포 및 활성화 섬유모세포의 유입을 불러일으킨다. 상기 세포 유형으로부터 유도된 사이토카인은 새로운 세포외 기질 및 혈관 (육아 조직) 의 형성을 야기한다. 육아 조직의 생성은, 프로테아제 억제제 및 세포외 기질 단백질의 발현이 상향조절되고, 프로테아제의 발현이 감소되어 세포외 기질이 축척되게 되는 주의깊게 조절되는 프로그램이다.
섬유성 상태의 발병은 유발된 것이든 자발적이든 적어도 부분적으로는 섬유모세포 활성의 자극에 의해 야기된다. 염증 세포 및 활성화된 섬유모세포의 손상 기관으로의 유입은, 상기 세포 유형이 주로 콜라겐을 포함하는 사이질 기질과 상호작용하는 능력에 따라 다르다. 섬유 조직의 증식과 관련된 다수의 질환, 예를 들어 피부경화증과 같은 피부 질환은 보통 만성이며 종종 쇠약해지게 된다. 폐섬유증을 비롯한 일부 질환은, 상기 질환에 대해 현재 이용가능한 치료가 상당한 부작용을 일으키고 일반적으로는 섬유증을 늦추거나 중단시키는 데 효과적이지 않다는 사실에 부분적으로 기인하여 치명적일 수 있다 (Nagler et al. (1996) Am . J. Respir . Crit . Care Med. 154:1082-86).
섬유성 장애는 섬유증, 예를 들어, 내부 장기의 섬유증, 피부 섬유성 질환, 및 눈의 섬유성 상태로 특징지어지는 장애를 포함한다. 내부 장기 (예를 들어, 간, 폐, 신장, 심장 혈관, 위장관) 의 섬유증은 폐섬유증, 골수섬유증, 간경화증, 혈관사이세포 증식성 사구체신염, 반월형 사구체신염, 당뇨병성 신병증, 신장 사이질 섬유증, 시클로스포린 수용 환자의 신장 섬유증, 및 HIV 관련 신장병증과 같은 장애에서 발생한다.
피부 섬유성 장애로서, 예를 들어, 공피증, 반상경피증, 켈로이드, 비대 흉터, 가족성 피부 교원증, 및 콜라겐 유형의 연결 조직 모반을 들 수 있다. 눈의 섬유성 상태는 당뇨병성 망막병증, 외과수술후 흉터형성 (예를 들어, 녹내장 여과 수술 후 및 사시 수술 후), 및 증식 유리체망막병증과 같은 상태를 포함한다.
본 발명의 방법에 의해 치료할 수 있는 추가의 섬유성 상태로서 하기를 들 수 있다: 류마티스 관절염, 연장된 관절 통증 및 악화된 관절 관련 질환, 전신 경화증 (진행성 전신 경화증을 포함함), 다발근육염, 피부근육염, 호산구성 근막염, 반상경피증 (국소화 공피증), 레이노 증후군, 및 코 폴립증.
IL-21/IL-21R 경로 길항제를 투여하여 섬유성 장애를 치료 또는 예방하거나, 상기 장애의 증상 중 한가지 이상을 완화시킬 수 있다.
IL-21/IL-21R 길항제의 사이토카인 생성 및 세포 증식/분화의 조절제로서의 활성 측정을 위한 어세이
IL-21/IL-21R 길항제의 사이토카인 생성 및 세포 증식/분화의 조절제로서의 활성은, 32D, DA2, DA1G, T10, B9, B9/11, BaF3, MC9/G, M+ (preB M+), 2E8, RB5, DA1, 123, T1165, HT2, CTLL2, TF-1, Mo7e 및 CMK를 포함하지만 이에 국한되지는 않는 세포주에 대한 다수의 일반적 인자 의존적 세포 증식 어세이 중 임의의 것을 사용하여 시험할 수 있다.
T-세포 또는 가슴샘 세포 증식에 대한 어세이의 비제한적인 예로서 하기 문헌에 기재된 것을 들 수 있다: [Current Protocols in Immunology, Ed by J. E. Coligan, A. M. Kruisbeek, D. H. Margulies, E. M. Shevach, W Strober, Pub. Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience (Chapter 3, In vitro assays for Mouse Lymphocyte Function 3.1-3.19; Chapter 7, Immunologic studies in Humans)]; [Takai et al. (1986) J. Immunol. 137:3494-500]; [Bertagnolli et al. (1990) J. Immunol. 145:1706-12; Bertagnolli et al. (1991) Cellular Immunology 133:327-41]; [Bertagnolli et al. (1992) J. Immunol. 149:3778-83]; [Bowman et al. (1994) J. Immunol. 152:1756-61]. 비장 세포, 림프절 세포 또는 가슴샘 세포의 사이토카인 생성 및/또는 증식에 대한 어세이의 비제한적인 예로서 하기 문헌에 기재된 것을 들 수 있다: [Polyclonal T cell stimulation, Kruisbeek, A. M. and Shevach, E. M. In Current Protocols in Immunology. J. E.e.a. Coligan eds. Vol 1 pp. 3.12.1-3.12.14, John Wiley and Sons, Toronto. 1994]; 및 [Measurement of mouse and human interferon gamma, Schreiber, R. D. In Current Protocols in Immunology. J. E.e.a. Coligan eds. Vol 1 pp. 6.8.1-6.8.8, John Wiley and Sons, Toronto. 1994].
조혈 세포 및 림프구 생성 세포의 증식 및 분화에 대한 어세이의 비제한적인 예로서 하기 문헌에 기재된 것을 들 수 있다: [Measurement of Human and Murine Interleukin 2 and Interleukin 4, Bottomly, K., Davis, L. S. and Lipsky, P. E. In Current Protocols in Immunology. J. E.e.a. Coligan eds. Vol 1 pp. 6.3.1-6.3.12, John Wiley and Sons, Toronto. 1991]; [deVries et al. (1991) J. Exp . Med. 173:1205-11]; [Moreau et al. (1988) Nature 336:690-92]; [Greenberger et al. (1983) Proc . Natl . Acad . Sci U.S.A. 80:2931-38]; [Measurement of mouse and human Interleukin 6, Nordan, R. In Current Protocols in Immunology. J. E.e.a. Coligan eds. Vol 1 pp. 6.6.1-6.6.5, John Wiley and Sons, Toronto. 1991]; [Smith et al. (1986) Proc . Natl . Acad . Sci U.S.A. 83:1857-61]; [Measurement of human Interleukin 11, Bennett, F., Giannotti, J., Clark, S. C. and Turner, K. J. In Current Protocols in Immunology. J. E.e.a. Coligan eds. Vol 1 pp. 6.15.1 John Wiley and Sons, Toronto. 1991]; [Measurement of mouse and human Interleukin 9, Ciarletta, A., Giannotti, J., Clark, S. C. and Turner, K. J. In Current Protocols in Immunology. J. E.e.a. Coligan eds. Vol 1 pp. 6.13.1, John Wiley and Sons, Toronto. 1991].
항원에 대한 T 세포 클론의 반응에 대한 어세이 (증식 및 사이토카인 생성의 측정에 의해, 특히, APC-T 세포 상호작용에 영향을 미치는 단백질, 뿐만 아니라 직접적인 T 세포의 효과를 확인할 것임) 의 비제한적인 예로서 하기 문헌에 기재된 것을 들 수 있다: [Current Protocols in Immunology, Ed by J. E. Coligan, A. M. Kruisbeek, D. H. Margulies, E. M. Shevach, W Strober, Pub. Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience (Chapter 3, In vitro assays for Mouse Lymphocyte Function]; [Chapter 6, Cytokines and their cellular receptors]; [Chapter 7, Immunologic studies in Humans]; [Weinberger et al. (1980) Proc . Natl. Acad . Sci . U.S.A. 77:6091-95]; [Weinberger et al. (1981) Eur . J. Immun . 11:405-11]; [Takai et al. (1986) J. Immunol . 137:3494-500]; [Takai et al. (1988) J. Immunol . 140:508-12].
본 발명은 하기 비제한적인 실시예로 더욱 예시할 것이다.
실시예 1: 쥣과 MU-1 cDNA의 단리 및 특성화
MU-1 수용체의 쥣과 상동체의 부분적 단편을 인간 서열로부터 유도된 올리고뉴클레오티드를 사용하는 PCR 에 의해 단리하였다. 17일된 쥣과의 가슴샘 및 쥣과의 2D6 T 세포주로부터 단리된 RNA 로부터 cDNA 를 제작하였다. 대략 300 개의 뉴클레오티드의 DNA 단편을, 도 1에서 인간 cDNA 서열 (SEQ ID NO: 1 에 해당함) 중 영역 584-603 및 876-896 에 상응하는 하기 올리고뉴클레오티드를 사용하여 PCR 에 의해 cDNA 로부터 증폭하였다:
AGCATCAAGCCGGCTCCCCC (5p) (SEQ ID NO: 11)
CTCCATTCACTCCAGGTCCC (3p) (SEQ ID NO: 12)
증폭은 염화마그네슘 1.5 mM 을 함유하는 1X Taq 완충제 중 Taq 중합효소를 사용하여 94℃ 에서 1 분 동안, 50℃ 에서 1분 동안, 및 72℃ 에서 1 분 동안 30 주기로 수행하였다. 상기 단편의 DNA 서열을 측정하고, 상기 단편 내부의 일부로부터 하기 서열의 2 개의 올리고뉴클레오티드를 유도하였다.
TTGAACGTGACTGRGGCCTT (5P) (SEQ ID NO: 13)
TGAATGAAGTGCCTGGCTGA (3P) (SEQ ID NO: 14)
상기 올리고뉴클레오티드를 사용하여 본래 PCR 생성물의 내부 262 개의 뉴클레오티드 단편 (도 1 의 쥣과 cDNA 서열의 뉴클레오티드 781-1043 및 SEQ ID NO: 9에 해당함) 을 증폭하여, 2D6 T 세포주로부터 단리한 cDNA 라이브러리를 스크리닝하기 위한 혼성화 탐침으로서 사용하였다. 표준 5X SSC 혼성화 조건을 사용하여 필터를 65℃ 에서 혼성화하고 65℃ 에서 SSC 로 세척하였다. 426,000 개의 클론의 스크린에서 탐침에 혼성화된 20 개의 클론을 단리하였다. 2 개의 독립 적 클론으로부터 DNA 서열을 측정하였다. 클론 #6 의 전장 서열은 이것이 인간 MU-1 의 전장 쥣과 상동체 (SEQ ID NO: 9) 임을 확인시켰다.
쥣과 MU-1 의 전장 뉴클레오티드 서열은 도 1 에 도시되어 있다 (SEQ ID NO: 9 에 해당함). 뉴클레오티드 서열은 뉴클레오티드 407-464 에서 예측된 선도 서열, 뉴클레오티드 407-1993 에서 코딩 서열, 1994-1996 에서 종결 코돈을 갖는다. 뉴클레오티드 1-406 은 5' 비번역 부위에 해당하고, 뉴클레오티드 1997-2628 은 3' 비번역 부위에 해당한다 (SEQ ID NO: 9).
쥣과 MU-1 의 예측된 단백질 서열은 도 2 에 도시되어 있다 (SEQ ID NO: 10에 해당함). 상기 쥣과 MU-1 단백질은 SPScan (점수 = 10.1) 에 의해 측정된 예측된 선도 서열 (SEQ ID NO: 10 의 아미노산 1-19 에 해당함) 및 예측된 막투과 도메인 (SEQ ID NO: 10 의 아미노산 237-253 에 해당함) 을 포함한다. 예측된 신호 모티프는 도 2B 의 다음 영역을 포함한다: Box 1: SEQ ID NO: 10 의 아미노산 265-274; Box 2: SEQ ID NO: 10 의 아미노산 310-324, SEQ ID NO: 10 의 281, 319, 361, 368, 397, 및 510 위치의 6 개의 티로신 잔기. 잠재적 STAT 도킹 부위는 STAT5: EDDGYPA (SEQ ID NO: 20); STAT3: YLQR를 포함한다.
실시예 2: 인간 및 쥣과 MU-1 의 비교
인간 및 쥣과 MU-1 아미노산을 비교하기 위하여 GAP 알고리즘을 사용하였다. GenBank 데이타베이스 검색을 위한 인간 IL-5 수용체의 70-아미노산 부위 (SEQ ID NO: 3), 뿐만 아니라 PCR 을 위한 프라이머 (SEQ ID NO: 4 및 5), 및 혼성화 올리고뉴클레오티드 (SEQ ID NO: 6 및 7) 을 사용하여 인간 MU-1을 클로닝하였다. 쥣과 및 인간의 예측된 단백질 서열의 비교는 도 4 에 도시되어 있다. GAP 알고리즘에서 아미노산은 65.267% 일치하였다. BLOSUM62 아미노산 치환 매트릭스에 의해 정렬을 생성하였다 (Henikoff and Henikoff (1992) Proc . Natl . Acad . Sci. U.S.A. 89: 10915-19). Gap 파라미터: Gap 중량 = 8, 평균 일치 = 2.912, 길이 중량 = 2, 평균 불일치 = -2.003; 유사성 백분율 = 69.466.
인간 및 쥣과 cDNA 뉴클레오티드 서열의 비교는 도 3 에 도시되어 있다. GAP 알고리즘을 사용하여 정렬하는 경우 DNA 서열은 66.116% 동일하였다. Gap 파라미터: Gap 중량 = 50, 평균 일치 = 10.000, 길이 중량 = 3, 평균 불일치 = 0.000, 유사성 백분율 = 66.198.
인간 및 마우스 MU-1 단백질 모두는 유형 1 사이토카인 수용체 슈퍼족의 멤버이다. 쥣과 및 인간 MU-1 의 서열의 평가는 잠재적 Box-1 및 Box-2 신호 모티프의 존재를 밝혔다. 6 개의 티로신 잔기는 세포질 도메인 중 존재하고, 이는 또한 MU-1 의 신호 기능에도 중요할 수 있다. MU-1 과 족의 다른 원의 서열의 비교는 STAT 5 및 STAT 3 의 잠재적 도킹 부위의 존재를 암시하였다.
실시예 3: 인간 MU-1 에 의해 사용된 STAT 신호 경로의 측정
BAF-3 세포가 인간 EPO 수용체의 세포외부 도메인 및 MU-1 수용체의 세포내부 도메인으로 이루어진 키메라성 사이토카인 수용체를 발현하도록 조작하였다. huEPORJMU-1 (cyto) 키메라성 수용체를 발현하는 BAF-3 세포는 인간 가용성 EPO 에 반응하여 증식하였다. 상기 세포를 분석하여 어떤 STAT 분자가 EPO 신호에 반응하여 인산화되는 지를 측정하였다. 간략히, 대조군 비개질된 잠재적 BAF-3 세포 및 EPOR/MU 키메라성 BAF-3 세포를 IL-3 함유 성장 배지로부터 휴지시키고, IL-3 또는 EPO 로 0, 15, 30 및 60 분 동안 재자극하였다. 상기 세포를 펠렛화하고, 오르소바나데이트를 함유하는 빙냉 용해 완충제 중 재현탁하여 인산화 티로신을 보존하였다. 동량의 세포 용해물을 SDS-PAGE 에 의해 전기 이동시키고, 웨스턴 분석법으로부터 니트로셀룰로오스 막 상에 블롯팅하였다. STAT 분자의 각 형태에 대해 특이적인 항체를 사용하여 STAT 1, 3, 5, 및 6 의 인산화 형태 및 비인산화 형태에 대해 한 쌍의 블롯을 염색하였다. 알파 인터페론으로 비활성화되고 활성화된 HELA 세포를 양성 대조군으로서 사용하였다.
상기 결과는 상기 특정 조건 하에, MU-1 을 통한 신호가 시험된 모든 시점 (T=0, T=15', T=30', T=60') 에서 STAT 5 의 인산화를 야기한다는 것을 보여주었다. 대조군 또는 키메라성 BAF-3 세포를 IL-3 으로 처리하면 STAT 3 은 인산화되나, STAT 1 또는 5 는 인산화되지 않는다.
실시예 4: 쥣과 및 인간 MU-1 의 조직 발현
실시예 4.1: 노던 분석법
각종 조직 (Clonetech, Palo Alto, CA) 유래의 폴리A+ RNA 의 노던 블롯을 제조업자의 권고대로 수행하였다. 쥣과 블롯에 대하여, 도 1 의 뉴클레오티드 781-1043 및 SEQ ID NO: 9 에 해당하는 262 개의 뉴클레오티드 단편을 사용하여 혼성화하였다.
쥣과 MU-1 의 단일 전사체를 성체 쥣과 비장, 폐, 및 심장 조직에서 검출하였다. 인간 조직에서 관측된 더 큰 전사체는 마우스 조직에서 관측되지 않았 다.
인간 MU-1 의 2 개의 전사체를 성인 림프구 조직, PBL, 가슴샘, 비장 및 림프절에서, 및 태아 폐에서 검출하였다.
실시예 4.2: 제자리 혼성화
제자리 혼성화 연구를 문헌 [Lyons et al. (1990) J. Cell . Biol . 111:2427-36)] 에 따라 오하이오주 소재의 Phylogency Inc. of Columbus 에 의해 수행하였다. 간략히, 일련의 5 ∼ 7 마이크론 파라핀 절편을 탈파라핀화하고, 고정하며, 단백분해효소 K 로 소화시키고, 트리-에탄올아민으로 처리하며 탈수하였다. cRNA 를 선형화 cDNA 원형으로부터 제조하여 안티센스 및 센스 탐침을 생성하였다. cRNA 전사체를 제조업자의 조건 (Ambion) 에 따라 합성하고, 35S-UTP 로 표지하였다. 졀편을 밤새 혼성화하고, 엄격한 조건 하에 세척하고, RNase A 로 처리하며, 핵 추적 에멀션에 침지하여, 2 ∼ 3 주 동안 노출시켰다. 대조군 절편을 센스 탐침으로 혼성화하여 본 방법의 백그라운드 수준을 나타내었다. 쥣과 탐침은 뉴클레오티드 860-1064 (SEQ ID NO: 9) 에 해당하는 186 개 염기쌍 단편으로 이루어졌다. 인간 탐침은 인간 MU-1 DNA 로부터 생성된 23 개 염기쌍 PCR 생성물이었다.
쥣과 MU-1 발현은 성인 소장의 림프절의 배중심에서 관측하였다. 분화된 림프절 및 파이어 소절도 쥣과 MU-1 발현을 나타내었다.
인간 MU-1 발현은 피질의 림프절의 배중심에서 검출하였다. 대식 세포를 포함하는 수질은 인간 MU-1 에 대해 음성이었다. 인간 비장에서, 인간 MU-1 발현은 백색 수질 부위에서는 검출되었으나, 적색 수질에서는 검출되지 않았다.
실시예 5: 세포 및 세포주 중 인간 MU-1 의 발현:
RNase 보호 분석법을 휴지 및 활성화된 인간 T 세포 및 B 세포주, Raji 및 RPMI 8866, 및 T 세포주 Jurkat 에 수행하였다. 인간 T 세포를 항-CD3 및 항-CD28 로 활성화하였다. 세포주를 포르볼 에스테르 및 이노마이신으로 활성화하였다. MU-1 리보탐침 생성 플라스미드를 23 개 염기쌍의 PCR 생성물을 삽입하여 구축하였다 (PCR 은 5' 프라이머 CACAAAGCTTCAGTATGAGCTGCAGTACAGGAACCGGGGA (SEQ ID NO: 15) 및 3' 프라이머 CACAGGATCCCTTTAACTCCTCTGACTGGGTCTGAAAGAT (SEQ ID NO: 16) 를 pGEM3zf(-) (Promega, Madison, WI) 벡터의 BamHI 및 HindIII 로부위에 사용하여 수행하였다). 리보탐침을 만들기 위하여, 리보탐침 생성 플라스미드를 HindIII 로 선형화하였다. 생성되는 DNA를 페놀/클로로포름으로 추출하고 에탄올로 침전시켰다. 판매자 (PharMingen, San Diego, CA) 에 의해 제시된 프로토콜에 따라 T7 RNA 중합효소를 사용하여 리보탐침을 만들었다. RNase 보호 분석법은 PharMingen 의 RIBOQUANT™ 다중 탐침 리보뉴클레아제 보호 분석 시스템을 사용하여 수행하였다. 2.0 ㎍ 의 총 RNA 를 각 RPA 반응에 포함시키고, RNase 소화 이후, 보호된 리보탐침을 QUICKPOINT™ 의 신속한 핵산 분리 시스템 (Novex, San Diego, CA) 상에서 작동하였다. 판매자의 제안에 따라 겔을 건조하고 노출시켰다.
인간 MU-1 RNA 는 자극되지 않은 집단과 비교시 항-CD3+ 항-CD28-자극된 인 간 정제된 CD3+ 세포에서 상향조절되었다. 또한, MU-1 은 Th1 및 Th2 편향 T 세포 개체군에서 재자극시 상향조절되었다. B 세포주, RPMI 8866 및 Raji 는 MU-1 을 항시적으로 발현하는 반면, Jurkat T 세포주는 그렇지 않았다.
실시예 6: 인간 MU-1 의 공지된 사이토카인에 대한 결합
인간 및 쥣과 Ig 융합 단백질 모두를 구축하고, MU-1 에 대한 리간드를 확인하기 위하여 Biacore 칩 상에 고정하였다. 각종 세포 배양 조건화배지 뿐만 아니라 공지된 사이토카인 패널의 MU-1 에 대한 결합을 평가하였다. 또한, 일부 사이토카인을 족 중 다른 수용체 사슬과 함께 시험하여, MU-1 이 리간드 결합을 위해 제 2 의 수용체 사슬을 필요로 하는 지의 가능성을 고려하였다. 하기 사이토카인을 시험하였고, MU-1 결합에 대해 음성인 것으로 밝혀졌다: mIL-2, hIL-2, hIL-15, mIL-7, TSLP, TSLP + IL-7, TSLP + IL-7R, TSLP + IL-7g, TSLP + IL-2, TSLP + IL-2 + IL-2R베타, IL-2R베타, IL-2R감마, IL-7R, IL-2 + IL-2R베타, IL-2 + IL-2R감마, IL-15 + IL-2R베타, IL-15 + IL-2R감마, IL-7 + IL-2R감마, IL-2 + IL-7R, IL-15 + IL-7R, IL-7 + IL-7R. 공지된 수용체도 고정하고, MUFc 결합에 대하여 실험하였으며 그 결과 음성이었다. IL-15는 IL-2Rb에는 결합하나 IL-2Rg 또는 MUFc 에는 결합하지 않을 것이다.
실시예 7: IL-21/IL-21R 활성의 억제는 콜라겐-유도 관절염 (CIA) 마우스에서 증상의 경중도를 완화시킨다.
본 실시예는 IL-21R 길항제, 예를 들어, IL-21R-Ig 융합 단백질 (쥣과 IL-21RFc 단백질 또는 "muIL-21RFc") 또는 항-IL-21R 항체가 CIA 쥣과 모델의 증상을 완화시킨다는 것을 보여준다.
수컷 DBA/1 (Jackson Laboratories, Bar Harbor, ME) 마우스를 모든 실험에 사용하였다. 소 유형 II 콜라겐 (Chondrex, Redmond, WA) 을 사용하여 관절염을 유발하였다. 소 유형 II 콜라겐 (Chondrex) 을 0.1 M 아세트산에 용해하고, 1 ㎎/㎖ 의 마이코박테리움 투베르쿨로시스 ( Mycobacterium tuberculosis, 균주 H37RA) 를 함유하는 동일 부피의 프로인드 아쥬반트 (Sigma) 에 에멀션화하였다. 제 0 일 째, 100 ㎍ 의 소 콜라겐을 꼬리의 밑면에 피하 주사하였다. 제 21 일 째, 동일 부피의 불완전 프로인드 아쥬반트 (Sigma) 와 혼합된, 100 ㎍ 의 소 콜라겐을 함유하는 0.1 M 아세트산 용액을 꼬리 밑면에 피하 주사하였다. 비투여 동물에게는 콜라겐이 없는 동일 세트의 주사액을 제공하였다. 투여 프로토콜은 도 16 에 도식적으로 도시되어 있다. MuIL-21RFc 은 DBA 마우스에게 예방적 또는 치료적으로 투여하였다. 치료 요법에서, 치료는 마우스에 있어서 질환이 2 일 연속 관측되는 경우 개시하였다.
마우스의 질환 진행에 대하여 1 주에 3 회 이상 모니터링하였다. 하기의 지표에 기초하여 각 사지에 임상 점수를 매겼다: 0 = 정상, 부기 없음; 1 = 1-2 개의 발가락이 부어있거나, 발목이 약간 부어있은 가시적 홍반; 2 = 발이 약간 ∼ 중간 정도 부어있고/있거나 2 개의 발가락이 부어있은 현저한 홍반; 3 = 전 발이 광범위하게, 즉, 발목 또는 손목 관절까지 확장되어 부어있음; 4 = 부기 소실, 발의 강직; 사지를 사용하기 어렵거나 관절 경직. 따라서, 임의의 지정 마우스의 모든 사지에 대한 점수를 합하면 총 신체 점수가 최대 16이 된다.
질환의 여러 단계에서, 동물을 안락사시키고, 조직을 수집하며, 조직학 검사를 위해 발을 pH 7.47 의 10% 포르말린 또는 4% 포름알데히드에 고정시키고, 20% EDTA (pH 8.0) 에서 탈회하며, 제자리 혼성화를 위하여 파라핀에 함침시켰다. 광학현미경을 사용하여 발을 5-등급 점수법 (0 ∼ 4) 으로 점수를 매겨 관절염의 강도 및 정도를 특성화하였다. 염증성 침윤물을 사용하여 염증과 관련된 기타 변화, 예컨대 판누스 형성, 윤활막의 섬유증, 관절 연골 짓무름 및/또는 연골하골 파괴에 대한 점수를 매겼다. 각 발을 살펴서 조직학 검사 등급을 매겼다: NAD = 0 또는 비정상적인 점이 전혀 관측되지 않음; 1 = 경미 ∼ 중간; 2 = 가벼움 ∼ 중간; 3 = 현저함; 및 4 = 중증.
증상의 경중도의 완화는 콜라겐 접종 (boost) 1 일 전 2 일에 한번씩 muIL-21RFc (100 ㎍ 또는 200 ㎍) 를 CIA 마우스에 복강내 (IP) 투여하여 예방 치료한 후 관찰하였다 (데이타는 기재되어 있지 않음).
muIL-21RFc (200 ㎍/마우스 3x/주) 가 반-치료적 CIA 마우스에 미치는 효과는 처리후 날짜의 함수로서 도 17 에 도시되어 있다. 마우스 Ig (200 ㎍/마우스 3x/주) 를 대조군으로서 사용하였다. 처리후 제 7 일부터 시작하여 경중도 점수의 감소가 나타났다.
상기 실험은, IL-12R 길항제, 예를 들어, IL-21R-Fc 융합 단백질을 CIA 마우스에게 예방적으로 또는 반-치료적으로 투여하는 것이 관절염 증상을 유의하게 완화시킨다는 점을 증명하였다.
실시예 8: IL-21 전사체의 제자리 혼성화
CIA 를 앓는 마우스의 관절염에 걸린 발에서 IL-21R mRNA 의 발현을 측정하였다. 안티센스 쥣과 IL-21R 리보탐침을 사용하였고 (도 18A); 센스 탐침을 음성 대조군으로 사용하였다 (도 18B). 디옥시게닌 표지된 탐침을 DIG RNA 표지 믹스 (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany) 를 사용하여 제조업자가 지시한 바와 같이 제조하였다. IL-21 수용체 mRNA 의 발현이 대식세포, 호중구, 섬유모세포, 림프구 아집단, 윤활막세포 및 표피에서 관측되었다 (도 18A). 대조군 발 또는 센스 탐침에서는 염색이 감소하였다 (도 18B). mIL-21R mRNA 양성 세포는 호중구 (N), 및 대식세포 (M) 였다. 제자리 혼성화는 관절염에 걸린 마우스 발의 IL-21R 의 발현을 증가시킴을 보여주었다.
실시예 9: IL-21/IL-21R 활성의 억제는 HLA-B27 래트 모델의 IBD 유사 증상의 경중도를 개선한다
본 실시예는 IL-21 길항제, 예를 들어, IL-21-Ig 융합 단백질 (쥣과 IL-21Fc 단백질 또는 "muIL-21RFc") 또는 항-IL-21R 항체가 HLA-B27 래트 모델에서 IBD 유사 증상을 개선한다는 것을 보여준다.
쥣과 IL-21 수용체-Fc 융합 폴리펩티드 (MuIL-21RFc) 를 본원에 기재된 바와 같이 생성하고, HLA-B27 래트 모델에서의 창자의 염증을 완화시키는 능력을 평가하였다. IBD 치료를 평가하기 위하여 HLA-B27 래트 모델을 광범위하게 사용하는데, 이것은 상기 모델에서 관측되는 창자 염증이 인간의 IBD 에서의 임상적, 조직학적 및 면역적 특성과 유사하기 때문이다 (예를 들어, 문헌 [Elson et al. (1995) Gastroenterology, 109:1344-67; Blanchard et al. (2001) European Cytokine Network 12:111-18]; [Kim et al. (1999) Arch . Pharm . Res. 22:354-60] 에 검토됨). 예를 들어, HLA-227 래트는 인간 주 조직적합성 복합체 I 대립유전자 B27 및 B2-마이크로글로불린 유전자 생성물을 과잉발현한다. 상기 유전자 생성물은 만성 염증 질환, 예컨대 IBD 의 발병과 관련되어 있다.
본 연구에 사용된 래트는 지속적 설사의 임상 징후에 의해 증명되는 위장관 (GI) 의 만성적 염증을 나타내었다. 하기 지표에 따라 변에 임상 점수 (0 ∼ 3) 를 매겼다: 0 = 변 덩어리가 형성되고 정상임; 1 = 변 덩어리가 형성되고 무름; 2 = 변 덩어리가 형성되지 않고 설사가 남; 3 = 물설사 (도 19 참고). 래트를 18 일 동안 모니터링하였고, 그 동안 변으로 병의 진행을 평가하였다. 임상 점수 3 은 (IgG 대조군에서 보여지는 바와 같이) 지속적 설사를 나타낸다. 5 마리의 HLA-B27 유전자도입 래트/군에 18일의 기간 동안 MuIL-21RFc 를 투여하였다 (6 ㎎/㎏ IP, 3x 주). 또다른 군에게는 6 ㎎/㎖ 의 mEnbrel (가용성 TNF-수용체 Fc 융합) 을 투여하였고, 이는 양성 대조군이다. 동일 수의 마우스로 이루어진 세번째 군에게는 대조군으로서 IgG 를 동일한 방식 및 투여량으로 투여하였다.
IgG 대조군에 비하여, MuIL-21RFc 및 mEnbrel 을 처리한 군에게서는 임상 점수 등급이 현저하게 감소하였다 (도 19 및 20 참고). MuIL-21RFc 의 투여는 IBD 유사 증상을 완화시키는 데 있어서 mEnbrel 과 비슷한 효능을 보여주었다. 상기 연구 결과는 MuIL-21RFc 의 투여가, 대조군 IgG 가 투여된 래트에 비하여, HLA-B27 래트 모델에 있어서 mEnbrel 과 유사한 효능으로 창자 염증을 감소시킨다 는 것을 증명한다 (도 19 및 20 참고).
변 점수의 개선에 의해 표시되는 증상의 개선을 조직학 분석으로 확인하였다. MuIL-21RFc 가 처리된 래트는 궤양, 염증, 병변 깊이 및 섬유증에 있어서, 대조군인 IgG 가 처리된 래트에 비하여 병의 경중도가 유의하게 감소하였다 (도 21 참고). 조직학 분석으로 임상 점수를 지시된 바와 같이 0 ∼ 2 또는 0 ∼ 3 으로 매겼고, 이때 더 높은 점수는 래트 IBD 모델에 있어서 경중도가 더 큰 것을 나타낸다. 대조군과 비교시 창자의 염증의 유의한 감소가 MuIL-21RFc 및 mEnbrel 이 처리된 군의 검사된 모든 카테고리에서 나타났다. MuIL-21RFc 는 질환의 경중도의 조직학 징후를 완화시키는 데 있어서 mEnbrel 과 유사한 효능을 보여주었다. 상기 나타난 결과를 인간에게 연장시켜, 도 19 (우측 패널) 는 정상 인간 장기의 림프구 및 림프절에 있어서 MU-1 mRNA 의 제자리 혼성화를 보여주고, 이는 질환과 관련된 장기에서의 MU-1 mRNA 의 발현을 나타내는 것이다.
실시예 10: IL-21/IL-21R 활성의 억제는 마우스에 있어서 동종 피부 이식편 거부를 지연시킨다
본 실시예는 IL-21 길항제, 예를 들어, IL-21R-Ig 융합 단백질 (쥣과 IL-21RFc 단백질 또는 "muIL-21RFc") 또는 항-IL-21R 항체가 마우스에 있어서 동종 피부 이식편 거부를 지연시켜 이식편의 생존을 연장시킴을 보여준다.
MuIL-21RFc 의 투여는 레트로바이러스성 형질도입된 T 세포를 주사한 마우스에 있어서 동종 피부 이식편 거부를 지연시키는 것으로 나타났다. 도 22는 입양 전달 이후 날짜에 대한 이식편 생존의 백분율을 나타내는 그래프를 도시한다. 상기 모델에서, 누드 마우스는 T 세포가 검출되지 않아 동종 피부 이식편이 치유되었다는 것을 보여주었다. 대조군 GFP 또는 IL-21 을 분비하도록 레트로바이러스 조작된 활성화된 B6 T 세포를 누드 마우스에 주사하였고, 이식편은 거부되었다 (도 22 참고). T 세포가 MuIL-21RFc (이는 상기 세포에 의해 만들어진 IL-21 를 중화할 것으로 예상됨) 를 분비하도록 조작하는 경우, 이식편은 도 22 에 도시된 바와 같이 더 긴 시간 간격 동안 생존하였다 (GFP 및 IL-21 대조군과 비교시 IL-21R-Fc 에 의해 지시됨). 10 마리의 마우스를 GFP 및 MuIL-21RFc 에 각각 사용하였다; 15 마리의 마우스를 IL-21 대조군에 사용하였다. 상기 결과는, IL-21 길항제가 이식편 생존을 연장시키는 역할을 함을 증명하였다.
실시예 11: IL-21/IL-21R의 활성의 억제는 CD45RBhi 입양 전달 모델에 있어서 질환 증상을 감소시킨다
본 실시예는 IL-21R 길항제, 예를 들어, IL-21R-Ig 융합 단백질 (쥣과 IL-21RFc 단백질 또는 "muIL-21RFc") 또는 항-IL-21R 항체가 마우스 모델에서 건선 및 염증성 장질환 (IBD) 의 증상을 완화시킴을 보여준다.
CD45RBhi CD4+ 비투여 T 세포의 중증 합병성 면역결핍 (SCID) 마우스로의 전달은 우리 사육 조건에 따라 대장염 및/또는 건선과 비슷한 피부병변을 일으킨다. BALBc CD45RBhi CD4+ T 세포 (비투여군) 를, 먼저 CD4+ T 세포에 대한 칼럼 상의 음성 선별에 의해, 그 후, 고 CD45 발현을 선별하는 유세포측정에 의해 비장 세포 로부터 추가 분류하였다. 4 x 105 세포의 상기 개체단을 암컷 C.B-17 SCID 마우스로 전달하고, 상기 마우스에게 건선 및 IBD 의 임상 징후에 대하여 몇 주 동안 점수를 매겼다. 정적 우리 환경 하에 사육한 마우스는 염증성 장질환이 발병하였고; 기류 변화와 함께 일반적 환경 하에 사육한 마우스도 건선이 발병하였다. 마우스의 건선에 대하여 1 ∼ 6 의 점수를 매겼다: 1 = 신체의 2% 미만에 가벼운, 중간 홍반 (보통 눈꺼풀 및 귀); 2 = 신체의 2 ∼ 10% 에 가벼운 인설 및 중간 ∼ 심각한 홍반 (보통 귀 및 얼굴); 3 = 신체의 10 ∼ 20% 에 심각한 홍반 및 인설 (귀, 얼굴 및 몸통); 4 = 신체의 20 ∼ 40% 에 걸쳐 매우 심각한 홍반; 5 = 신체의 40 ∼ 60% 에 걸쳐 매우 심각한 홍반; 6 = 신체의 60 ∼ 100% 에 걸쳐 매우 심각한 홍반. 마우스의 IBD 에 대하여 체중 감소 및 변 점수를 매겼다: 0 = 보통; 1 = 무름; 2 = 설사; 3 = 피 및 점액을 포함하는 설사.
muIL-21RFc 를 사용하는 처리는 건선 유사 증상을 완화시키는 데 효과적이었다. 피부 염증이 발생한 마우스에 있어서, CD45RBhi 세포 전달 이후 제 8 주에 시작하여 주당 3 회 200 ㎍ 의 muIL-21RFc 를 복강내 주사하여 처리하는 경우, 항-E. tenella Ig 로 처리한 대조군 마우스와 비교시 홍반, 인설 및 탈모가 감소하였다 (도 23). CD45RBhi 수여자 마우스에게 세포 전달시 주당 3 회 200 ㎍ 의 muIL-21RFc 를 처리하는 경우, 대조군과 비교시 실험 과정에 걸쳐 건선의 발병이 늦어졌고, 임상적 질환의 경중도가 완화되었다 (도 35). 상기 실험의 결과는 도 36 에 요약되어 있다.
muIL-21RFc 를 사용한 처리도 염증성 장 징후의 완화에 효과적이었다. CD45RBhi 수여자 마우스에게 세포 전달시 주당 3 회 200 ㎍ 또는 400 ㎍ 의 muIL-21RFc 를 처리하는 경우, 체중 감소 (도 37) 및 변 점수 (도 38) 에 의해 측정한 대장염의 임상 징후가 유의하게 감소하였다. 이 결과는 도 39 에 요약되어 있다. 대조군 처리된 CD45RBhi 수여자의 결장을 현미경으로 평가한 결과, 심각한 비대 및 부기가 관측되었으나, 이는 muIL-21RFc 으로 처리한 마우스에 있어서는 거의 완전히 억제되었다. 현미경적으로, 대조군 처리된 마우스는 또한 muIL-21RFc 처리된 마우스와 비교시 고유관/점막밑층의 상피 증식 및 백혈구 침윤의 정도가 더 큰 것으로 나타났다. 또한, 혈청 사이토카인을 대조군 처리된 마우스 및 muIL-21RFc 처리된 마우스로부터 측정하였다. 측정한 여러 사이토카인 중, 오직 감마 인터페론 (IFN-γ) 만이 혈청에서 검출가능하였다. muIL-21RFc 을 200 ㎍ 또는 400 ㎍ 의 투여량으로 처리하는 경우, Ig 대조군 처리된 마우스와 비교시 IFN-γ 의 혈청 수준이 유의하게 감소하였다 (도 40). IFN-γ는 IBD 에서 IL-21R 길항제의 효능에 대한 생마커로서 사용할 수 있다.
CD45RBhi (비투여) 및 CD45RB1o (메모리) 서브세트를 IL-21 에 대한 이의 반응에 대한 증식 어세이에 의해 시험하였다. IBD 전달 모델에 있어서, 오로지 비투여 세포만 질환을 야기하였고, 메모리 개체군을 첨가함으로써 질환을 억제할 수 있었다. 상기 어세이에서, 정제된 개체군을 플레이트에 결합된 항-CD3 으로 자극하였고, IL-21 에 반응한 3H-피리미딘 도입을 시험하였다. 비투여 개체군은 메모리 개체군과 비교시 IL-21 에 대하여 유의하게 증가한 반응을 보여주었다 (도 41). 이는 IL-21 이 생체내 상기 개체군의 증식에 대한 중요한 사이토카인임을 나타내는 것이다.
IL-21 을 배양 내의 활성화된 CD4+ CD45RBhi 배양 세포에 첨가하면 복수의 사이토카인 분비가 유발된다. 항-CD3 자극된 CD45RBhi CD4+ T 세포를 100 유닛/㎖의 IL-2 또는 1 ng/㎖, 10 ng/㎖ 또는 100 ng/㎖ 의 IL-21 로 처리하였다. IL-21 에 반응하여, CD45RBhi 세포는 증가된 수준의 IL-2, IL-4, IL-10, IL-17, IL-18, IL-22, IFN-γ 및 TNFα 를 분비하였다 (도 42). 상기 배양물에 있어서, 50 ㎍/㎖ 또는 100 ㎍/㎖ 의 muIL-21RFc 를 첨가하여 내인성 IL-21 을 차단하면 Ig 대조군으로 처리한 배양물과 비교시 사이토카인의 수준이 감소하였다 (도 43).
이를 종합하면, 상기 결과는 IL-21 이 상기 모델의 염증 반응에 있어서 잠재적으로 강력한 역할을 하며, IL-21R 길항제가 크론병 및 건선과 같은 Th1-매개 질환을 치료하는 효과가 있음을 보여준다.
실시예 12: IL-21R 결여 마우스는 항원 유도 기도 염증의 감소를 나타낸다
본 실시예는 IL-21 수용체 결여 유전자도입 유전자결손 마우스 (IL-21R -/-) 가 항원 유도 기도 감염에 대한 반응 및 기도 과민성이 유의하게 감소함을 보여준다.
IL-21R -/- 및 야생형 (WT +/+) C57BL/6 마우스 (8 ∼ 12주령)를 제 0 일 및 제 14 일 째 2.25 ㎎ 의 백반 (Alum Inject; Pierce) 중 에멀션화된 20 ㎍ 의 OVA 의 복강내 주사로 면역화하였다. 제 26 일, 제 27 일 및 제 28 일 째, PBS 중 5% OVA 의 에어로졸로 기도를 30 분 동안 유발시켰다. 마지막 OVA 유발 48 시간 후, 에어로졸화 메타콜린에 대한 동물의 폐 내성 및 동적 순응성의 변화를 평가하였다. OVA 감작 및 유발은 OVA-감작 PBS-유발된 WT +/+ 마우스와 비교시 WT +/+ 마우스에 있어서 메타콜린의 에어로졸화 이후 기도 과민성을 유의하게 증가시켰다 (도 24). 그러나, OVA-감작/OVA-유발된 WT +/+ 마우스와 비교시 전 투여 범위에 걸쳐 OVA-감작/OVA-유발된 IL-21R -/- 마우스에 있어서 에어로졸화 메타콜린에 대한 기도 민감성의 변화는 없었다 (도 24).
그 후, 동물을 희생시키고, 혈액 및 기관지 폐포세척액 (BALF) 을 수집하여 폐 염증, 사이토카인 수준 및 총 항-OVA IgE 역가를 분석하였다. 3x 0.7 ㎖ 의 PBS 로 기관지 폐포세척하여 BALF 를 수집하였다. PBS 유발된 대조군과 비교시 WT +/+ 마우스에 있어서 OVA 유발 이후 총 BALF 세포수가 대략 36 배 증가한 반면, IL-21R -/- 동물에 있어서 PBS-유발된 대조군에 대하여 3 배 증가하였다 (도 25A). 더욱이, OVA-감작/OVA-유발된 IL-21R -/- 마우스의 BALF 내부의 총 세포수는 OVA-감작/OVA-유발된 WT +/+ 동물에서 관측된 것보다 유의하게 적었다. OVA-감작/PBS-유발된 IL-21R -/- 및 WT +/+ 마우스에 있어서 BALF 총 세포수에 변화가 없었다 (도 25A). OVA 유발은, 동일하게 감작되나 PBS-유발된 대조군과 비교시 WT +/+ 및 IL-21R -/- 마우스 모두에 있어서 BALF 호산구의 유의한 증가를 가져왔 다. BALF 호산구의 절대 수는 OVA-감작/OVA-유발된 WT +/+ 동물에서 관측된 수와 비교시 IL-21 -/- 동물에 있어서 유의하게 감소하였다 (도 25B). IL-21 의 결손도 OVA 유발 이후 BALF 림프구 (도 25C) 및 호중구 (도 25D) 의 수를 유의하게 감소시켰다.
BALF 내부에서의 IL-5, IL-13 및 TNFα의 수준은 PBS-유발된 대조군과 비교시 OVA-감작/유발된 WT +/+ 마우스에서 유의하게 증가하였다 (도 26 및 27). 반대로, OVA-감작 및 유발은 PBS-유발된 대조군과 비교시 IL-21R -/- 마우스의 BALF 중 사이토카인의 수준을 매우 약간 증가시켰고, 그 수준은 OVA-감작/OVA-유발된 WT 동물에서 관측된 것보다 유의하게 낮았다 (도 26 및 27). BALF 중 TNFα 및 IL-5 의 수준을 세포측정 비드 어레이 키트 (Mouse Th1/Th2 Cytokine CBA, BD Biosciences, San Diego, CA) 를 사용하여 정량하였다. BALF 중 IL-13 수준을 ELISA 에 의해 정량하였다.
도 28 A-B 에 도시된 바와 같이, IL-21R -/- 에서 OVA 감작/OVA 유발 이후 혈청 총 IgE 및 항-OVA IgE 수준은 동일하게 처리된 WT +/+ 마우스에 비하여 훨씬 낮았다. 그러나, PBS 유발 이후 총 또는 OVA-특이적 IgE 수준의 비교시 IL-21R -/- 및 WT +/+ 마우스에 있어서 유의한 차이가 없었다.
상기 결과는 IL-21 매개 반응이 알레르기 및 천식의 치료에 있어서 치료 가치를 제공할 수 있다는 점을 보여준다.
실시예 13: IL-21/IL-21R 활성의 억제는 MRL-FA5 lpr 루푸스 모델의 증상의 경 중도를 완화시킨다.
본 실시예는 IL-21R 길항제, 예를 들어, IL-21R-Ig 융합 단백질 (쥣과 IL-21RFc 단백질 또는 "muIL-21RFc") 또는 항-IL-21R 항체가 MRL-Fas lpr 마우스 모델의 전신 홍반성 루푸스 (SLE) 유사 증상을 완화시킨다는 것을 보여준다.
수컷 MRL-Fas lpr 마우스를 모든 실험에 사용하였다. 이들 마우스는, DNA 자가항체, 복수 장기의 파괴, 및 면역 복합체 사구체신염을 비롯한 인간 SLE 와 유사한 여러 증상을 나타낸다. 400 ㎍ 의 MuIL-21RFc 또는 이의 동형 대조군을 10 주령에서 시작하여 주당 3 회 복강내 주사하고, 질환 진행에 대하여 매주 분석하였다. 제 15 주 째, 추가 분석을 위하여 마우스를 희생하였다. 각 처리군은 10 마리의 마우스를 포함하였다.
MuIL-21RFc 처리는 MRL-Fas lpr 마우스에 있어서 혈중 항-dsDNA 자가항체 (도 29) 및 혈청 총 IgG (도 30) 의 수준을 유의하게 감소시켰다. 간략히, 항-dsDNA 자가항체의 측정을 위하여, dsDNA 를 역가 플레이트 상에 코팅하고, 혈청 항체를 첨가하며, 항-마우스 2 차 항체를 사용하여 항체를 검출하였다. 총 IgG 의 측정을 위하여, 혈청을 역가 플레이트에 고착시킨 후, 항-마우스 2 차 항체를 사용하여 검출하였다.
MuIL-21RFc 로 처리하는 것은 MRL-Fas lpr 마우스 신장의 IgG 침전물의 축적도 감소시켰다. 제 15 주 째, 마우스를 희생시키고, 냉동 신장 절편 (5 ㎛) 을 염 소 항-마우스 IgG-FITC 로 염색하였다. 형광 강도를 0 ∼ 3 의 범위로 점수를 매겼다. 도 31 은 처리 마우스 및 대조군 마우스의 신장 절편에서 측정한 총 형광 강도를 보여준다.
상기 결과는 IL-21R 길항제의 치료적 처리가 루프스 유사 증상을 개선시킬 수 있다는 것을 보여준다.
실시예 14: 루푸스 및 GVHD 의 동물 모델: B6 bm12 비장 세포가 이식술된 IL-21R 결핍 마우스의 신장에서 자가항체 형성 및 IgG 축적의 결여
전신 홍반성 루프스 (SLE) 의 만성 이식편 대 숙주 질환 (GVHD) 모델에서 IL-21R 유전자결손 (KO) 마우스의 반응을 조사하기 위하여 실험을 수행하였다 (Chen et al. (1998) J. Immunol . 161:5880-85). 상기 모델은 SLE 및 GVHD 모두의 대표적 측면을 포함한다.
사용한 모델은 하기와 같다: B6.C-H2<bm12>/KhEG (bm12), Jackson Labs (비장 세포); IL-21R-2 KO 마우스, Charles River Labs (CRL); C57/B6 야생형 (WT) 마우스, Charles River Labs; 및 C57/B6 야생형 마우스, Taconic (TAC) (Germantown, NY).
적절한 공여자 마우스를 CO2 노출을 통해 질환을 유발한 날에 희생하였다. 비장을 수집하고 멀칭 (mulching) 하였다. 적혈구를 비장당 1 ㎖ 의 용해액에서 0.16 M NH4Cl : 0.17 M TrisCl (9:1) 을 사용하여 총 5 분 동안 이따금씩 혼합하면서 용해하였다. 트립판 블루를 사용하여 세포 현탁액을 계수하고 멸균 인 산염 완충 식염수를 사용하여 2 x 108 세포/㎖ 의 최종 농도로 조절하였다. 그 후, 0.5 ㎖ 의 적절한 세포 현탁액을 적절한 수여자 마우스에 복강내 주사하였다 (하기 표 2에 기재된 바와 같이). 그 후, 수여자 마우스의 소변 단백질 및 체중 증가/감소에 대하여 매주 모니터링하였다. 매 2 주, 각 마우스의 후안와동을 통해 채혈하고, 추가 분석을 위해 혈청을 수집하였다. 이중 가닥 DNA 에 대한 자가항체의 검출을 위하여 (문헌 [Zouali and Stollar (1986) J. Immunol . Methods 90:105-10] 에 기재된 바와 같이) 각 시점에 수집된 모든 혈청에 대하여 ELISA 분석을 수행하였다.
질환 유발 후 제 12 주 째, 각 군으로부터 동물 절반을 안락사시키고, 비장 및 양쪽 신장을 수집하였다. 좌측 신장은 10% 의 비완충 포르말린에 (그대로) 보존하고, H&E 로 염색하였다. [Chen et al., supra] 의 방법에 따라 염색에 대해 점수를 매겼다. 점수 파라미터는 하기를 포함한다: 혈관주위 림프구 침윤, 근접 림프구 침윤, 과세포 및 기저막 비대. 우측 신장을 세로로 절단하고 그 절반을 각각 조직 블록 카세트에 절단 측을 아래로 하여 함침시켰다. 그 후, 면역조직화학 기술을 사용하여 우측 신장의 면역 침전물, 특히 IgG, IgM 및 C3 의 존재 여부를 분석하였다.
군 공여자 수여자 n
1 IL-21R KO bm12 CRL IL-21R KO 8
2 CRL-GVHD (C-GVHD) bm12 CRL B6 10
3 TAC-GVHD (T-GVHD) bm12 TAC B6 10
4 CRL-대조군(C-대조군) CRL B6 CRL B6 5
5 TAC-대조군(T-대조군) TAC B6 TAC B6 5
상기 실험의 결과는 도 44 에 도시되어 있다. 항-dsDNA 자가항체는 임의의 시점에서 어떠한 IL-21R 유전자결손 마우스에서도 관측되지 않았다 (도 44A). 또한, 도 44B 는 질환 유발 후 제 20 주 째, GVHD 마우스와 비교시 IL-21R-결핍 마우스의 신장에서 IgG 침전이 관측되지 않음을 보여준다. 따라서, IL-21R 결핍 마우스는 GVHD-SLE 모델에서 자가항체를 생성하지 않을 뿐 아니라, 신장에서 IgG 침전물도 형성하지 않는다. 따라서, IL-21/IL-21R 길항제로 개체를 치료하는 것은 SLE 및 GVHD 모두에 효과적인 치료법이다.
모든 참고 문헌, 계류 중인 특허 출원 (2004 년 8 월 5 일 출원된 60/599,086, 2004 년 12 월 23 일 출원된 60/639,176 을 포함함), 공개된 특허 출원 (2002 년 10 월 4 일 출원된 2003/0108549 를 포함함) 및 본 명세서를 통해 인용된 공개된 특허는 본원에 참고로서 인용된다.
등가물
당업자는 단지 정규적인 실험을 사용하여 본원에 기재된 특정 구현예의 많은 등가물을 이해하거나 확인할 수 있을 것이다. 그러한 등가물은 하기 청구의 범위에 포함하는 것으로 한다.
<110> Wyeth <120> Antagonizing Interleukin-21 Receptor Activity <130> 01997.043400 <150> US 60/599,086 <151> 2004-08-05 <150> US 60/639,176 <151> 2004-12-23 <160> 39 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 2665 <212> DNA <213> Human <400> 1 gtcgactgga ggcccagctg cccgtcatca gagtgacagg tcttatgaca gcctgattgg 60 tgactcgggc tgggtgtgga ttctcacccc aggcctctgc ctgctttctc agaccctcat 120 ctgtcacccc cacgctgaac ccagctgcca cccccagaag cccatcagac tgcccccagc 180 acacggaatg gatttctgag aaagaagccg aaacagaagg cccgtgggag tcagcatgcc 240 gcgtggctgg gccgccccct tgctcctgct gctgctccag ggaggctggg gctgccccga 300 cctcgtctgc tacaccgatt acctccagac ggtcatctgc atcctggaaa tgtggaacct 360 ccaccccagc acgctcaccc ttacctggca agaccagtat gaagagctga aggacgaggc 420 cacctcctgc agcctccaca ggtcggccca caatgccacg catgccacct acacctgcca 480 catggatgta ttccacttca tggccgacga cattttcagt gtcaacatca cagaccagtc 540 tggcaactac tcccaggagt gtggcagctt tctcctggct gagagcatca agccggctcc 600 ccctttcaac gtgactgtga ccttctcagg acagtataat atctcctggc 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Oligonucleotide <400> 7 actcgagcta tgagctgcag gtgcgggca 29 <210> 8 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Motif Characteristic of the Hematopoietin Receptor Family <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Wherein Xaa is any amino acid. <400> 8 Trp Ser Xaa Trp Ser 1 5 <210> 9 <211> 2628 <212> DNA <213> Mouse <400> 9 gtcgacgcgg cggtaccagc tgtctgccca cttctcctgt ggtgtgcctc acggtcactt 60 gcttgtctga ccgcaagtct gcccatccct ggggcagcca actggcctca gcccgtgccc 120 caggcgtgcc ctgtctctgt ctggctgccc cagccctact gtcttcctct gtgtaggctc 180 tgcccagatg cccggctggt cctcagcctc aggactatct cagcagtgac tcccctgatt 240 ctggacttgc acctgactga actcctgccc acctcaaacc ttcacctccc accaccacca 300 ctccgagtcc cgctgtgact cccacgccca ggagaccacc caagtgcccc agcctaaaga 360 atggctttct gagaaagacc ctgaaggagt aggtctggga cacagcatgc cccggggccc 420 actggctgcc ttactcctgc tgattctcca tggagcttgg agctgcctgg acctcacttg 480 ctacactgac tacctctgga ccatcacctg tgtcctggag acacggagcc ccaaccccag 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gttcccgggg ctgccgggtc tggaagagca actggagtgt gatggaatgt ctgagcctgg 1440 tcactggtgc ataatcccct tggcagctgg ccaagcggtc tcagcctaca gtgaggagag 1500 agaccggcca tatggtctgg tgtccattga cacagtgact gtgggagatg cagagggcct 1560 gtgtgtctgg ccctgtagct gtgaggatga tggctatcca gccatgaacc tggatgctgg 1620 ccgagagtct ggccctaatt cagaggatct gctcttggtc acagaccctg cttttctgtc 1680 ttgcggctgt gtctcaggta gtggtctcag gcttggaggc tccccaggca gcctactgga 1740 caggttgagg ctgtcatttg caaaggaagg ggactggaca gcagacccaa cctggagaac 1800 tgggtcccca ggagggggct ctgagagtga agcaggttcc ccccctggtc tggacatgga 1860 cacatttgac agtggctttg caggttcaga ctgtggcagc cccgtggaga ctgatgaagg 1920 accccctcga agctatctcc gccagtgggt ggtcaggacc cctccacctg tggacagtgg 1980 agcccagagc agctagcata taataaccag ctatagtgag aagaggcctc tgagcctggc 2040 atttacagtg tgaacatgta ggggtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg 2100 tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtcttgggt tgtgtgttag cacatccatg ttgggatttg 2160 gtctgttgct atgtattgta atgctaaatt ctctacccaa agttctaggc ctacgagtga 2220 attctcatgt ttacaaactt gctgtgtaaa ccttgttcct taatttaata ccattggtta 2280 aataaaattg gctgcaacca attactggag ggattagagg tagggggctt ttgagttacc 2340 tgtttggaga tggagaagga gagaggagag accaagagga gaaggaggaa ggagaggaga 2400 ggagaggaga ggagaggaga ggagaggaga ggagaggaga ggagaggaga ggctgccgtg 2460 aggggagagg gaccatgagc ctgtggccag gagaaacagc aagtatctgg ggtacactgg 2520 tgaggaggtg gccaggccag cagttagaag agtagattag gggtgacctc cagtatttgt 2580 caaagccaat taaaataaca aaaaaaaaaa aaaagcggcc gctctaga 2628 <210> 10 <211> 529 <212> PRT <213> Mouse <400> 10 Met Pro Arg Gly Pro Val Ala Ala Leu Leu Leu Leu Ile Leu His Gly 1 5 10 15 Ala Trp Ser Cys Leu Asp Leu Thr Cys Tyr Thr Asp Tyr Leu Trp Thr 20 25 30 Ile Thr Cys Val Leu Glu Thr Arg Ser Pro Asn Pro Ser Ile Leu Ser 35 40 45 Leu Thr Trp Gln Asp Glu Tyr Glu Glu Leu Gln Asp Gln Glu Thr Phe 50 55 60 Cys Ser Leu His Arg Ser Gly His Asn Thr Thr His Ile Trp Tyr Thr 65 70 75 80 Cys His Met Arg Leu Ser Gln Phe Leu Ser Asp Glu Val Phe Ile Val 85 90 95 Asn Val Thr Asp Gln Ser 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tctgaaagat 40 <210> 17 <211> 224 <212> PRT <213> Unknown Organism <220> <221> Unknown Organism <222> (1)..(224) <223> Description of Unknown Organism: Second polypeptide comprising an Fc region <400> 17 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Leu Gly Ala Pro Ser 1 5 10 15 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 20 25 30 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 35 40 45 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 50 55 60 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 65 70 75 80 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 85 90 95 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Val Pro Ile Glu Lys Thr 100 105 110 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 115 120 125 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 130 135 140 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 145 150 155 160 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 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gtctccctcc tccccctgga gttccgcaaa gactcgagct 600 atgagctgca ggtgcgggca gggcccatgc ctggctcctc ctaccagggg acctggagtg 660 aatggagtga cccggtcatc tttcagaccc agtcagagga gttaaaggaa ggctggaacg 720 gctccggctc tagagacaaa actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaactcctgg 780 ggggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga 840 cccctgaggt cacatgcgtg gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca 900 actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt 960 acaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg 1020 gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agtccccatc gagaaaacca 1080 tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg 1140 aggagatgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg 1200 acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc 1260 ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctatagcaa gctcaccgtg gacaagagca 1320 ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact 1380 acacgcagaa gagcctctcc ctgtccccgg gtaaatgagt gaattc 1426 <210> 25 <211> 467 <212> PRT <213> Human <400> 25 Met Pro Arg Gly Trp Ala Ala Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gln Gly 1 5 10 15 Gly Trp Gly Cys Pro Asp Leu Val Cys Tyr Thr Asp Tyr Leu Gln Thr 20 25 30 Val Ile Cys Ile Leu Glu Met Trp Asn Leu His Pro Ser Thr Leu Thr 35 40 45 Leu Thr Trp Gln Asp Gln Tyr Glu Glu Leu Lys Asp Glu Ala Thr Ser 50 55 60 Cys Ser Leu His Arg Ser Ala His Asn Ala Thr His Ala Thr Tyr Thr 65 70 75 80 Cys His Met Asp Val Phe His Phe Met Ala Asp Asp Ile Phe Ser Val 85 90 95 Asn Ile Thr Asp Gln Ser Gly Asn Tyr Ser Gln Glu Cys Gly Ser Phe 100 105 110 Leu Leu Ala Glu Ser Ile Lys Pro Ala Pro Pro Phe Asn Val Thr Val 115 120 125 Thr Phe Ser Gly Gln Tyr Asn Ile Ser Trp Arg Ser Asp Tyr Glu Asp 130 135 140 Pro Ala Phe Tyr Met Leu Lys Gly Lys Leu Gln Tyr Glu Leu Gln Tyr 145 150 155 160 Arg Asn Arg Gly Asp Pro Trp Ala Val Ser Pro Arg Arg Lys Leu Ile 165 170 175 Ser Val Asp Ser Arg Ser Val Ser Leu Leu Pro Leu Glu Phe Arg Lys 180 185 190 Asp Ser Ser Tyr Glu Leu 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gtctccctcc tccccctgga gttccgcaaa gactcgagct 600 atgagctgca ggtgcgggca gggcccatgc ctggctcctc ctaccagggg acctggagtg 660 aatggagtga cccggtcatc tttcagaccc agtcagagga gttaaaggaa ggctggaacg 720 gctccggctc tagagacaaa actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaactcctgg 780 ggggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga 840 cccctgaggt cacatgcgtg gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca 900 actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt 960 acaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg 1020 gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agtccccatc gagaaaacca 1080 tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg 1140 aggagatgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg 1200 acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc 1260 ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctatagcaa gctcaccgtg gacaagagca 1320 ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact 1380 acacgcagaa gagcctctcc ctgtccccgg gtaaatcagg aatggcatca atgacaggag 1440 gtcaacaaat gggttctgga tctcatcatc atcatcatca ttctggaggt tgagaattc 1499 <210> 27 <211> 492 <212> PRT <213> Human <400> 27 Met Pro Arg Gly Trp Ala Ala Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gln Gly 1 5 10 15 Gly Trp Gly Cys Pro Asp Leu Val Cys Tyr Thr Asp Tyr Leu Gln Thr 20 25 30 Val Ile Cys Ile Leu Glu Met Trp Asn Leu His Pro Ser Thr Leu Thr 35 40 45 Leu Thr Trp Gln Asp Gln Tyr Glu Glu Leu Lys Asp Glu Ala Thr Ser 50 55 60 Cys Ser Leu His Arg Ser Ala His Asn Ala Thr His Ala Thr Tyr Thr 65 70 75 80 Cys His Met Asp Val Phe His Phe Met Ala Asp Asp Ile Phe Ser Val 85 90 95 Asn Ile Thr Asp Gln Ser Gly Asn Tyr Ser Gln Glu Cys Gly Ser Phe 100 105 110 Leu Leu Ala Glu Ser Ile Lys Pro Ala Pro Pro Phe Asn Val Thr Val 115 120 125 Thr Phe Ser Gly Gln Tyr Asn Ile Ser Trp Arg Ser Asp Tyr Glu Asp 130 135 140 Pro Ala Phe Tyr Met Leu Lys Gly Lys Leu Gln Tyr Glu Leu Gln Tyr 145 150 155 160 Arg Asn Arg Gly Asp Pro Trp Ala Val Ser Pro Arg Arg Lys Leu Ile 165 170 175 Ser Val Asp Ser 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gacgacattt tcagtgtcaa catcacagac 300 cagtctggca actactccca ggagtgtggc agctttctcc tggctgagag catcaagccg 360 gctccccctt tcaacgtgac tgtgaccttc tcaggacagt ataatatctc ctggcgctca 420 gattacgaag accctgcctt ctacatgctg aagggcaagc ttcagtatga gctgcagtac 480 aggaaccggg gagacccctg ggctgtgagt ccgaggagaa agctgatctc agtggactca 540 agaagtgtct ccctcctccc cctggagttc cgcaaagact cgagctatga gctgcaggtg 600 cgggcagggc ccatgcctgg ctcctcctac caggggacct ggagtgaatg gagtgacccg 660 gtcatctttc agacccagtc agaggagtta aaggaaggct ggaacgatga cgatgacaag 720 ggctccggcg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaagc cctgggggca 780 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 840 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 900 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 960 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 1020 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1080 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc 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ccagcaccag gactggatga gtggcaaggc 1140 tttcgcatgc gccgtcaaca acaaagacct cccagcgccc atcgagagaa ccatctcaaa 1200 acccaaaggt gagagctgca gcctgactgc atgggggctg ggatgggcat aaggataaag 1260 gtctgtgtgg acagccttct gcttcagcca tgacctttgt gtatgtttct accctcacag 1320 ggtcagtaag agctccacag gtatatgtct tgcctccacc agaagaagag atgactaaga 1380 aacaggtcac tctgacctgc atggtcacag acttcatgcc tgaagacatt tacgtggagt 1440 ggaccaacaa cgggaaaaca gagctaaact acaagaacac tgaaccagtc ctggactctg 1500 atggttctta cttcatgtac agcaagctga gagtggaaaa gaagaactgg gtggaaagaa 1560 atagctactc ctgttcagtg gtccacgagg gtctgcacaa tcaccacacg actaagagct 1620 tctcccggac tccgggtaaa tgagctcagc acccacaaaa ctctcaggtc caaagagaca 1680 cccacactca tctccatgct tcccttgtat aaataaagca cccagcaatg cctgggacca 1740 tgtaatagga attc 1754 <210> 35 <211> 240 <212> PRT <213> Mouse <400> 35 Met Pro Arg Gly Pro Val Ala Ala Leu Leu Leu Leu Ile Leu His Gly 1 5 10 15 Ala Trp Ser Cys Leu Asp Leu Thr Cys Tyr Thr Asp Tyr Leu Trp Thr 20 25 30 Ile Thr Cys Val Leu Glu Thr Arg 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Asp Glu Pro Ser Asn Tyr Val Leu Arg 165 170 175 Gly Lys Leu Gln Tyr Glu Leu Gln Tyr Arg Asn Leu Arg Asp Pro Tyr 180 185 190 Ala Val Arg Pro Val Thr Lys Leu Ile Ser Val Asp Ser Arg Asn Val 195 200 205 Ser Leu Leu Pro Glu Glu Phe His Lys Asp Ser Ser Tyr Gln Leu Gln 210 215 220 Val Arg Ala Ala Pro Gln Pro Gly Thr Ser Phe Arg Gly Thr Trp Ser 225 230 235 240 Glu Trp Ser Asp Pro Val Ile Phe Gln Thr Gln Ala Gly Glu Pro Glu 245 250 255 Ala Gly Trp Asp 260

Claims (32)

  1. 항-IL-21R 항체, 항-IL-21 항체, 항-IL-21R 항체의 항원-결합 단편, 항-IL-21 항체의 항원-결합 단편, 및 IL-21R 가용성 단편으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 IL-21/IL-21R 길항제를, 장애를 치료, 경감 또는 예방하기에 충분한 양으로 대상자에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물 대상자에서의 자가면역 또는 염증성 장애의 치료, 경감 또는 예방 방법.
  2. 항-IL-21R 항체, 항-IL-21 항체, 항-IL-21R 항체의 항원-결합 단편, 항-IL-21 항체의 항원-결합 단편, 및 IL-21R 가용성 단편으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 IL-21/IL-21R 길항제를, 장애를 치료, 경감 또는 예방하기에 충분한 양으로 대상자에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물 대상자에서의 관절염성 장애, 아토피성 장애, 호흡기성 장애, 피부 염증성 장애, 장 염증성 장애, 섬유증성 장애, 전신 홍반 루푸스, 이식/이식편 거부, 및 이식/이식편 거부와 관련된 장애로 이루어진 군으로부터 선택되는 장애의 치료, 경감 또는 예방 방법.
  3. 제 2 항에 있어서, 항-IL-21R 항체가 SEQ ID NO: 2 에서 언급된 서열과 90% 이상 일치하는 아미노산 서열로 구성된 IL-21R 에 결합할 수 있고, IL-21R 이 IL-21 에 결합할 수 있는 방법.
  4. 제 3 항에 있어서, 관절염성 장애가 류머티즘성 관절염, 연소자성 류머티즘성 관절염, 골관절염, 건선성 관절염, 및 강직성 척추염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 방법.
  5. 제 4 항에 있어서, 관절염성 장애가 류머티즘성 관절염인 방법.
  6. 제 3 항에 있어서, 호흡기성 장애가 천식 또는 만성 폐쇄 폐 질환인 방법.
  7. 제 3 항에 있어서, 섬유증성 장애가 내부 기관의 섬유증, 피부 섬유화 장애, 눈의 섬유증성 상태, 전신경화증, 다발근육염, 피부근육염, 호산구성 근막염, 레이노 (Raynaud) 증후군, 사구체신염 및 코 폴립증으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 방법.
  8. 제 3 항에 있어서, 장 염증성 장애가 염증성 장질환, 궤양성 대장염 및 크론병 (Crohn's disease) 으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 방법.
  9. 제 3 항에 있어서, 피부 염증성 장애가 건선인 방법.
  10. 제 3 항에 있어서, 아토피성 장애가 알레르기성 천식, 아토피성 피부염, 두드러기, 습진, 알레르기성 관절염 및 알레르기성 위장염으로 이루어지는 군으로부 터 선택되는 방법.
  11. 제 10 항에 있어서, 아토피성 장애가 알레르기성 천식인 방법.
  12. 제 3 항에 있어서, 이식/이식편 거부와 관련된 장애가 이식편 대 숙주 질환인 방법.
  13. 제 3 항에 있어서, 장애가 이식/이식편 거부인 방법.
  14. 제 3 항에 있어서, 장애가 전신 홍반 루푸스인 방법.
  15. 제 2 항에 있어서, 포유동물 대상자가 인간인 방법.
  16. 제 2 항에 있어서, IL-21R 가용성 단편이 IL-21R 세포외부 도메인 및 Fc 면역글로불린 단편으로 구성되는 방법.
  17. 제 16 항에 있어서, IL-21R 세포외부 도메인이 SEQ ID NO: 2 의 대략 아미노산 1-235 를 포함하는 방법.
  18. 제 2 항에 있어서, IL-21R 가용성 단편이 SEQ ID NO: 29 에서 언급된 서열과 90% 이상 일치하는 아미노산 서열로 구성되는 방법.
  19. 제 2 항에 있어서, IL-21/IL-21R 길항제가 항-IL-21R 항체, 또는 그의 항원-결합 단편인 방법.
  20. 제 2 항에 있어서, IL-21/IL-21R 길항제가 항-IL-21 항체, 또는 그의 항원-결합 단편인 방법.
  21. IL-21R 이 SEQ ID NO: 2 에서 언급된 서열과 90% 이상 일치하는 아미노산 서열을 가지고, 융합 단백질이 IL-21 에 결합할 수 있는, IL-2IR 의 세포외부 도메인 및 Fc 면역글로불린 단편으로 구성되는 융합 단백질.
  22. 제 21 항에 있어서, SEQ ID NO: 29 에서 언급된 서열과 90% 이상 일치하는 아미노산 서열로 구성되는 융합 단백질.
  23. 제 21 항의 융합 단백질을 엔코딩하는 뉴클레오티드 서열을 갖는 벡터.
  24. 제 23 항의 벡터를 포함하는 재조합 숙주 세포.
  25. 하기를 포함하는 융합 단백질의 제조 방법:
    (a) 융합 단백질이 발현되는 조건 하에서 제 24 항에 따른 재조합 숙주 세포를 배양함; 및
    (b) 융합 단백질을 회수함.
  26. IL-21/IL-21R 길항제 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.
  27. 제 26 항에 있어서, IL-21/IL-21R 길항제가 항-IL-21R 항체, 항-IL-21 항체, 항-IL-21R 항체의 항원-결합 단편, 항-IL-21 항체의 항원-결합 단편, 및 IL-21R 가용성 단편으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 약학 조성물.
  28. 제 27 항에 있어서, IL-21R 가용성 단편이 IL-21R 의 세포외부 도메인 및 Fc 면역글로불린 단편으로 구성되는 약학 조성물.
  29. 하기 단계를 포함하는, 포유동물 대상자에게 기관, 조직, 세포 또는 세포의 군을 이식/이식술하는 방법:
    (a) 항-IL-21R 항체, 항-IL-21 항체, 항-IL-21R 항체의 항원-결합 단편, 항-IL-21 항체의 항원-결합 단편, 및 IL-21R 가용성 단편으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 IL-21/IL-21R 의 길항제를, 이식/이식편 거부의 위험을 감소시키기에 충분한 양으로 대상자에게 투여하는 단계; 및
    (b) 기관, 조직, 세포 또는 세포의 군을 대상자에게 이식/이식술하는 단계 (여기서 이식/이식술하는 단계 (b) 는 투여 단계 (a) 전, 그 동안 또는 그 후에 일어남).
  30. 제 29 항에 있어서, 이식/이식술된 기관, 조직, 세포 또는 세포의 군이 심장, 신장, 간, 폐, 췌장, 골수, 연골, 망막, 신경 조직, 및 그의 세포로 이루어지는 군으로부터 선택되는 방법.
  31. 하기를 포함하는, 포유동물 이식/이식편 수여자에서의 이식/이식편 거부의 치료, 예방 또는 경감 방법:
    (a) 이식/이식편 수여자에서의 이식/이식편 거부의 증상을 검출함; 및
    (b) 항-IL-21R 항체, 항-IL-21 항체, 항-IL-21R 항체의 항원-결합 단편, 항-IL-21 항체의 항원-결합 단편, 및 IL-21R 가용성 단편으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 IL-21/IL-21R 길항제를 이식/이식편 수여자에게 투여함.
  32. 제 31 항에 있어서, 이식/이식편 거부의 증상이 염증, 감소된 기관 기능, 생검에서의 거부의 징후, 및 섬유증으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 방법.
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Families Citing this family (77)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7654728B2 (en) * 1997-10-24 2010-02-02 Revalesio Corporation System and method for therapeutic application of dissolved oxygen
US20110075507A1 (en) * 1997-10-24 2011-03-31 Revalesio Corporation Diffuser/emulsifier
US6702949B2 (en) 1997-10-24 2004-03-09 Microdiffusion, Inc. Diffuser/emulsifier for aquaculture applications
US6057128A (en) 1998-03-17 2000-05-02 Genetics Institute, Inc. MU-1, member of the cytokine receptor family
US6307024B1 (en) 1999-03-09 2001-10-23 Zymogenetics, Inc. Cytokine zalpha11 Ligand
CA2491320A1 (en) * 2002-07-15 2004-01-22 Wyeth Methods and compositions for modulating t helper (th) cell development and function
EP2184298A1 (en) * 2003-03-14 2010-05-12 Wyeth a Corporation of the State of Delaware Antibodies against human IL-21 receptor and uses therefor
KR20060015482A (ko) * 2003-03-21 2006-02-17 와이어쓰 인터루킨-21/인터루킨-21 수용체의 작용제를 이용한면역장애의 치료
AU2006214473A1 (en) * 2005-02-14 2006-08-24 Wyeth Interleukin-17F antibodies and other IL-17F signaling antagonists and uses therefor
WO2006088925A2 (en) 2005-02-14 2006-08-24 Wyeth Use of il17-f in diagnosis and therapy of airway inflammation
GT200600148A (es) * 2005-04-14 2006-11-22 Metodos para el tratamiento y la prevencion de fibrosis
RU2412199C2 (ru) 2005-04-18 2011-02-20 Ново Нордиск А/С Варианты ил-21
CA2625773C (en) * 2005-10-14 2015-05-12 Fukuoka University Inhibition of interleukin-6 (il-6) receptor promotes pancreatic islet transplantation
BRPI0617664B8 (pt) * 2005-10-21 2021-05-25 Chugai Pharmaceutical Co Ltd uso de um anticorpo que reconhece a il-6 para a produção de uma composição farmacêutica para tratar o enfarte do miocárdio ou suprimir a remodelagem ventricular esquerda depois do enfarte do miocárdio
AR057582A1 (es) * 2005-11-15 2007-12-05 Nat Hospital Organization Agentes para suprimir la induccion de linfocitos t citotoxicos
WO2007061029A1 (ja) * 2005-11-25 2007-05-31 Keio University 前立腺癌治療剤
CA2632218A1 (en) * 2005-11-28 2007-10-11 Zymogenetics, Inc. Il-21 receptor antagonists
EP2805971A1 (en) * 2005-11-28 2014-11-26 ZymoGenetics, Inc. IL-21 antagonists
EP1990060B1 (en) * 2006-01-27 2016-09-28 Keio University Therapeutic agents for diseases associated involving choroidal neovascularization
WO2007116962A1 (ja) * 2006-04-07 2007-10-18 Osaka University 筋再生促進剤
WO2008052145A2 (en) 2006-10-25 2008-05-02 Revalesio Corporation Methods of therapeutic treatment of eyes and other human tissues using an oxygen-enriched solution
US8609148B2 (en) * 2006-10-25 2013-12-17 Revalesio Corporation Methods of therapeutic treatment of eyes
AU2007349224B2 (en) * 2006-10-25 2014-04-03 Revalesio Corporation Methods of wound care and treatment
US8445546B2 (en) 2006-10-25 2013-05-21 Revalesio Corporation Electrokinetically-altered fluids comprising charge-stabilized gas-containing nanostructures
EP3170401B1 (en) 2006-10-25 2019-06-05 Revalesio Corporation Ionic aqueous fluid composition containing oxygen microbubbles
US8784897B2 (en) 2006-10-25 2014-07-22 Revalesio Corporation Methods of therapeutic treatment of eyes
US8784898B2 (en) 2006-10-25 2014-07-22 Revalesio Corporation Methods of wound care and treatment
CN101553501A (zh) 2006-10-26 2009-10-07 诺沃-诺迪斯克有限公司 Il-21变种
EP2109620B1 (en) 2006-12-21 2012-08-22 Novo Nordisk A/S Interleukin-21 variants with altered binding to the il-21 receptor
TWI438208B (zh) * 2007-01-23 2014-05-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd 抑制慢性排斥反應之藥劑
TW200902064A (en) * 2007-03-28 2009-01-16 Wyeth Corp Methods and compositions for modulating IL-17F/IL-17A biological activity
US9523090B2 (en) 2007-10-25 2016-12-20 Revalesio Corporation Compositions and methods for treating inflammation
US20090263495A1 (en) * 2007-10-25 2009-10-22 Revalesio Corporation Bacteriostatic or bacteriocidal compositions and methods
US20100303918A1 (en) * 2007-10-25 2010-12-02 Revalesio Corporation Compositions and methods for treating asthma and other lung disorders
US10125359B2 (en) * 2007-10-25 2018-11-13 Revalesio Corporation Compositions and methods for treating inflammation
US20100303917A1 (en) * 2007-10-25 2010-12-02 Revalesio Corporation Compositions and methods for treating cystic fibrosis
AU2008316708A1 (en) * 2007-10-25 2009-04-30 Revalesio Corporation Bacteriostatic or bacteriocidal compositions and methods
US9745567B2 (en) * 2008-04-28 2017-08-29 Revalesio Corporation Compositions and methods for treating multiple sclerosis
US20100015235A1 (en) * 2008-04-28 2010-01-21 Revalesio Corporation Compositions and methods for treating multiple sclerosis
WO2010062628A1 (en) * 2008-10-27 2010-06-03 Revalesio Corporation Compositions and methods for treating asthma and other lung disorders
US20100303871A1 (en) * 2007-10-25 2010-12-02 Revalesio Corporation Compositions and methods for modulating cellular membrane-mediated intracellular signal transduction
US20100009008A1 (en) * 2007-10-25 2010-01-14 Revalesio Corporation Bacteriostatic or bacteriocidal compositions and methods
US20100029764A1 (en) * 2007-10-25 2010-02-04 Revalesio Corporation Compositions and methods for modulating cellular membrane-mediated intracellular signal transduction
US20090227018A1 (en) * 2007-10-25 2009-09-10 Revalesio Corporation Compositions and methods for modulating cellular membrane-mediated intracellular signal transduction
US7883700B2 (en) 2007-12-07 2011-02-08 Zymogenetics, Inc. Anti-human IL-21 monoclonal antibodies
WO2009114693A1 (en) * 2008-03-12 2009-09-17 Wyeth Method for identifying cells suitable for large-scale production of recombinant proteins
WO2009132821A1 (en) * 2008-04-28 2009-11-05 Giuliani International Limited Interleukin (il-21) binding proteins and methods of making and using same
WO2009134929A2 (en) * 2008-05-01 2009-11-05 Revalesio Corporation Compositions and methods for treating digestive disorders
PE20100141A1 (es) 2008-05-23 2010-02-22 Wyeth Corp Proteina de union al receptor de interleuquina 21
CA2725154A1 (en) * 2008-05-23 2009-11-26 Wyeth Llc Methods of treatment utilizing binding proteins of the interleukin-21 receptor
CA2728243C (en) * 2008-06-05 2020-03-10 National Cancer Center Il-6 inhibitor for suppressing neuroinvasion in pancreatic cancer
CA2739357A1 (en) * 2008-09-23 2010-04-08 Wyeth Llc Methods for predicting production of activating signals by cross-linked binding proteins
EP2344677B1 (en) 2008-10-08 2017-04-05 Cambridge Enterprise Limited Methods and compositions for diagnosis and treatment of autoimmune disease secondary to multiple sclerosis
US20100098659A1 (en) * 2008-10-22 2010-04-22 Revalesio Corporation Compositions and methods for treating matrix metalloproteinase 9 (mmp9)-mediated conditions
US8815292B2 (en) 2009-04-27 2014-08-26 Revalesio Corporation Compositions and methods for treating insulin resistance and diabetes mellitus
ES2616086T3 (es) * 2009-08-17 2017-06-09 A & G Pharmaceutical, Inc. Materiales y procedimientos para el desarrollo de un estado de no respuesta inmune específica de antígeno
KR101004363B1 (ko) * 2010-03-19 2010-12-28 가톨릭대학교 산학협력단 자가 면역 질환 예방 및 치료용 ＴＮＦ－α와 ＩＬ－２１ 이중 길항제
WO2011119404A1 (en) * 2010-03-26 2011-09-29 Monsanto Technology Llc Portable systems and methods for amplifying nucleotides and detecting nucleotide sequences
KR20130114581A (ko) 2010-05-07 2013-10-18 레발레시오 코퍼레이션 생리적 수행능력 및 회복 시간의 향상을 위한 조성물 및 방법
EP4115906A1 (en) 2010-05-28 2023-01-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antitumor t cell response enhancer
US20130224109A1 (en) * 2010-07-20 2013-08-29 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Compositions and methods featuring il-6 and il-21 antagonists
BR112013003110A2 (pt) 2010-08-12 2016-06-28 Revalesio Corp composições e métodos para tratamento de taupatia
ES2778053T3 (es) 2011-01-18 2020-08-07 Bioniz Llc Composiciones para modular la actividad de la citocina gamma-c
KR20130011056A (ko) * 2011-07-20 2013-01-30 주식회사에이앤알쎄라퓨틱스 염증표적 수용체 및 염증 질환 치료용 약물 운반체
EP2565881B1 (en) * 2011-08-30 2018-06-13 ABB Schweiz AG Dry-type transformer
WO2013096732A2 (en) * 2011-12-23 2013-06-27 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Methods of treating or preventing viral diseases by blocking interleukin-21
WO2014172606A1 (en) * 2013-04-19 2014-10-23 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Methods for modulating immune responses during chronic immune conditions by targeting metallothioneins
US9959384B2 (en) 2013-12-10 2018-05-01 Bioniz, Llc Methods of developing selective peptide antagonists
KR102546611B1 (ko) 2014-04-08 2023-06-22 보스턴 파마슈티칼즈, 아이엔씨. Il-21에 특이적인 결합 분자 및 이들 용도
WO2016096858A1 (en) * 2014-12-19 2016-06-23 Mabtech Ab Composition, kit and method for inhibition of il-21 mediated activation of human cells
CN108350032A (zh) 2015-10-09 2018-07-31 比奥尼斯有限责任公司 调节γC-细胞因子活性
MA45488A (fr) 2015-10-22 2018-08-29 Juno Therapeutics Gmbh Procédés, kits et appareil de culture de cellules
WO2018013585A1 (en) * 2016-07-12 2018-01-18 Flagship Pioneering, Inc. Methods and compositions for modulating thymic function
US10875828B2 (en) * 2016-08-05 2020-12-29 The Regents Of The University Of California Mithrene and methods of fabrication of mithrene
JP7185884B2 (ja) 2017-05-02 2022-12-08 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター Ｉｌ－６及び好中球の関連する疾患の治療効果の予測及び判定方法
KR20200074160A (ko) 2017-10-20 2020-06-24 가꼬우호우징 효고 이카다이가쿠 항il-6 수용체 항체를 함유하는 수술 후의 유착을 억제하기 위한 의약 조성물
CN110124029B (zh) * 2019-04-19 2023-08-11 中山大学附属第六医院 Il-6r抗体及羊水干细胞在制备用于治疗nec的药物中的应用

Family Cites Families (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US425871A (en) * 1890-04-15 Half to james l
US4235871A (en) * 1978-02-24 1980-11-25 Papahadjopoulos Demetrios P Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles
US4634665A (en) * 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US5179017A (en) * 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4399216A (en) * 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4510245A (en) * 1982-11-18 1985-04-09 Chiron Corporation Adenovirus promoter system
US4501728A (en) * 1983-01-06 1985-02-26 Technology Unlimited, Inc. Masking of liposomes from RES recognition
US4816567A (en) * 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5168062A (en) * 1985-01-30 1992-12-01 University Of Iowa Research Foundation Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence
US4968615A (en) * 1985-12-18 1990-11-06 Ciba-Geigy Corporation Deoxyribonucleic acid segment from a virus
US4737323A (en) * 1986-02-13 1988-04-12 Liposome Technology, Inc. Liposome extrusion method
US5225539A (en) * 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4837028A (en) * 1986-12-24 1989-06-06 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
EP0307434B2 (en) * 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5225538A (en) * 1989-02-23 1993-07-06 Genentech, Inc. Lymphocyte homing receptor/immunoglobulin fusion proteins
US6136310A (en) * 1991-07-25 2000-10-24 Idec Pharmaceuticals Corporation Recombinant anti-CD4 antibodies for human therapy
US5399677A (en) * 1993-12-07 1995-03-21 Genetics Institute, Inc. Mutants of bone morphogenetic proteins
RU2270030C2 (ru) * 1996-02-09 2006-02-20 Абботт Байотекнолоджи эЛтиди. СПОСОБ ИНГИБИРОВАНИЯ АКТИВНОСТИ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО TNFα (ВАРИАНТЫ), ПРИМЕНЕНИЕ ВЫДЕЛЕННОГО АНТИТЕЛА ЧЕЛОВЕКА ИЛИ ЕГО АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩЕГО ФРАГМЕНТА В КАЧЕСТВЕ КОМПОНЕНТА ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА (ВАРИАНТЫ) И ВЫДЕЛЕННОЕ ЧЕЛОВЕЧЕСКОЕ АНТИТЕЛО ИЛИ ЕГО АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЙ ФРАГМЕНТ
US6350892B1 (en) * 1997-09-23 2002-02-26 Bristol-Myers Squibb Company Trifluoromethyl ketone analogs as selective cPLA2 inhibitors
US7198789B2 (en) * 1998-03-17 2007-04-03 Genetics Institute, Llc Methods and compositions for modulating interleukin-21 receptor activity
US6057128A (en) * 1998-03-17 2000-05-02 Genetics Institute, Inc. MU-1, member of the cytokine receptor family
US7189400B2 (en) * 1998-03-17 2007-03-13 Genetics Institute, Llc Methods of treatment with antagonists of MU-1
US6307024B1 (en) * 1999-03-09 2001-10-23 Zymogenetics, Inc. Cytokine zalpha11 Ligand
WO2001077171A2 (en) * 2000-04-05 2001-10-18 Zymogenetics, Inc. Soluble zalpha11 cytokine receptors
ES2629395T3 (es) * 2001-10-04 2017-08-09 Genetics Institute, Llc Métodos y composiciones para modular la actividad de la interleucina-21
AU2003230834A1 (en) * 2002-04-09 2003-10-27 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Antagonists of il-21 and modulation of il-21-mediated t cell responses
US20040016010A1 (en) * 2002-04-17 2004-01-22 Marion Kasaian IL-21 receptor knockout animal and methods of use thereof
CA2491320A1 (en) * 2002-07-15 2004-01-22 Wyeth Methods and compositions for modulating t helper (th) cell development and function
EP2184298A1 (en) * 2003-03-14 2010-05-12 Wyeth a Corporation of the State of Delaware Antibodies against human IL-21 receptor and uses therefor
KR20060015482A (ko) * 2003-03-21 2006-02-17 와이어쓰 인터루킨-21/인터루킨-21 수용체의 작용제를 이용한면역장애의 치료
RU2006138704A (ru) * 2004-05-19 2008-06-27 Вайет (Us) Модуляция производства иммуноглобулина и атопические расстройства
GT200600148A (es) * 2005-04-14 2006-11-22 Metodos para el tratamiento y la prevencion de fibrosis

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