KR20070001932A - 작용물질 항 티알케이씨 항체 및 그의 사용 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 작용물질 항-trkC 항체, 폴리펩타이드, 및 이를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명은 또한 신경병증, 예를 들어 탁솔 유발된 감각 신경병증, 시스플라틴 유발된 감각 신경병증, 및 피리독신 유발된 감각 신경병증을 포함한 감각 신경병증의 치료 및/또는 예방에서 상기와 같은 항체, 폴리펩타이드 및/또는 폴리뉴클레오타이드의 용도에 관한 것이다.

Description

작용물질 항 티알케이씨 항체 및 그의 사용 방법{AGONIST ANTI-TRKC ANTIBODIES AND METHODS USING SAME}

본 발명은 작용물질 항-trkC 항체 및 폴리펩타이드에 관한 것이다. 본 발명은 또한 감각 신경병증과 같은 질병의 치료 및/또는 예방에서 상기와 같은 항체 및 폴리펩타이드의 용도에 관한 것이다.

관련 출원에 대한 상호참조

본 원은 2003년 12월 23일자로 출원된 미국 가 출원 제 60/532,592 호의 우선권 이점을 청구하며, 상기 출원은 본 발명에 참고로 인용된다.

발명의 배경

뉴로트로핀은 작은 동종이량체성 단백질 계열로, 신경계의 발달 및 유지에 중요한 역할을 한다. 상기 신경트로핀 계열의 구성원들로는 신경 성장 인자(NGF), 뇌 유래된 신경영양 인자(BDNF), 뉴로트로핀-3(NT-3), 뉴로트로핀-4/5(NT-4/5), 뉴로트로핀-6(NT-6), 및 뉴로트로핀-7(NT-7)이 있다. 뉴로트로핀은 다른 폴리펩타이드 성장 인자들과 유사하게 세포 표면 수용체와의 상호작용을 통해 그의 표적 세포에 영향을 미친다. 현재의 지식에 따르면, 두 종류의 막통과 당단백질이 뉴로트로핀에 대한 수용체로서 작용한다. 뉴로트로핀-반응성 신경세포는 통상적으로 낮은 분자량(65 내지 80 kDa)의 저 친화성 수용체(LNGFR)(또한 p75NTR 또는 p75라 지칭되며, NGF, BDNF, NT-3 및 NT-4/5와 2 x 10^-9 M의 KD로 결합한다); 및 큰 분자량(130 내지 150 kKa)의 고 친화성(10^-11 M 범위의 KD) 수용체를 가지며, 이들 수용체는 티로신 키나제 수용체의 trk 계열의 구성원들이다. trk 수용체 계열의 동정된 구성원들은 trkA, trkB 및 trkC이다.

TrkC는 중추 신경계 및 말초 신경계의 신경세포 서브셋 상에서 광범위하게 발현된다. TrkC는 또한 일부 부교감 신경계, 장 신경세포 및 일부 비-신경 조직 상에서 발현된다. 상기는 교감 신경세포, 및 DRG의 큰 섬유 감각 신경세포인 DRG의 1 차 감각 신경세포의 서브셋 상에서 발현된다. 큰 섬유 감각 신경세포는 말초까지 연장되는 큰 마이엘린화된 축삭을 가지며, 상기 말초에서 자기자극감수, 및 미세한 접촉 및 진동 감각에 대한 정보를 전달한다.

완전한 길이의 고유 trkA, trkB 및 trkC 수용체의 세포 외 영역은 다양한 다른 단백질들에서 확인되는 일치하거나 또는 달리 유사한 구조와 관련하여 한정된 5 개의 구조 영역들을 갖는다. 상기 영역들을 성숙한 trk 수용체의 아미노산 서열의 N-말단에서 출발하여 1) 제 1 시스테인-풍부 영역; 2) 류신-풍부 영역; 3) 제 2 시스테인-풍부 영역; 4) 제 1 면역글로불린-유사 영역; 및 5) 제 2 면역글로불린- 유사 영역으로서 지정하였다. 예를 들어 PCT 공보 WO 0198361; 문헌[Urfer et al. J. Biol. Chem. 273:5829-5840(1998)]을 참조하시오.

뉴로트로핀은 다양한 신경퇴행성 및 신경학적 질병들에 대한 잠재적인 치료제로서 중요하다. 뉴로트로핀, 예를 들어 NGF 및 NT-3을 동물 모델에서 피리독신 또는 시스플라티늄 치료와 연합된 감각 신경병증의 치료에 대해 시험하였다(미국 특허 제 5,604,202 호; PCT 공보 WO 0198361). 신경퇴행성 및 신경학적 질병의 치료에서 뉴로트로핀의 사용은 여러 가지 단점들을 갖는다. 한 가지 중요한 단점은 특이성의 결여이다. 대부분의 뉴로트로핀은 하나보다 많은 수용체와 교차 반응한다. 예를 들어 trkC 수용체 티로신 키나제의 바람직한 리간드인 NT-3은 trkA 및 trkB와도 또한 결합하여 이들을 활성화한다(Barbacid, J. Neurobiol. 25:1386-1403, 1994; Barbarcid, Ann. New York Aced. Sci. 766:442-458, 1995; Ryden and Ibanez, J. Biol. Chem. 271:5623-5627, 1996, Belliveau et al., J. Cell. Biol. 136:375-388, 1997; Farinas et al., Neuron 21:325-334, 1998). 그 결과, 특정 신경세포 집단을 표적화하는 요법을 궁리해내기가 어렵다. 뉴로트로핀 요법의 또 다른 제한은 NT-3을 포함한 뉴로트로핀들이 통각과민증을 유발하는 것으로 공지되어 있다는 것이다(Chaudhry et al., Muscle and Nerve 23:189-192, 2000). 또한, 일부 뉴로트로핀, 예를 들어 NT-3은 설치류에서 불충분한 약동학 및 생체 이용 성질을 가지며, 이는 그의 인간 임상 용도에 대해 심각한 문제를 제기한다(Haase et al., J. Neurol. Sci. 160:S97-S105, 1998, dosages used in Helgren et al., J. Neurosci. 17(1):372-82, 1997). 따라서, 뉴로트로핀의 공지된 단점이 없는 신경 퇴행성 장애 및 신경학적 질병의 치료를 위한 신규의 치료제를 개발할 필요가 있다.

설치류 작용물질 항-trkC 항체가 보고되어 있다. PCT 공보 WO 01/98361을 참조하시오. 그러나, 설치류 항체를 인간에서 치료학적으로 사용하는 경우, 인간 항-쥐 항체 반응이 상당수의 치료된 개인에서 나타난다. 또한, 마우스 항체의 효과기 작용은 인간 환경에서 덜 효율적인 것으로 나타났다. 따라서, 인간화된 작용물질 항-trkC 작용물질 항체를 포함한 개선된 작용물질 항-trkC 항체가 진정으로 필요하다.

본 발명에 개시된 모든 참고문헌, 공보 및 특허 출원들은 내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다.

발명의 요약

본 발명은 trkC 수용체에 대한 작용물질 항체에 관한 것이다. 따라서, 하나의 태양에서, 본 발명은 인간 및 설치류 trkC 수용체("trkC")에 특이적으로 결합하는 인간화된 친화성 성숙 항체 A5이다. A5의 중쇄 및 경쇄 가변 부위의 아미노산 서열을 각각 도 1A(서열식별번호: 1) 및 1B(서열식별번호: 2)에 나타낸다. 항체 A5의 상보성 결정 부위(CDR)(Chothia 및 Kabat CDR 포함)를 도 1A 및 1B에 도식적으로 나타낸다. A5 중쇄 및 경쇄, 및 개별적인 연장된 CDR의 아미노산 서열을 또한 하기에 나타낸다(하기 "항체 서열" 참조).

본 발명은 또한 (a) 식 GYTFTSYXaaXaaH(서열식별번호: 16)(여기에서 8 번 위 치의 Xaa는 R 또는 W이고, 9 번 위치의 Xaa는 I, L, R 또는 M이다)의 CDR1; (b) 식 EIYPSNXaaRTNYNEKFXaaS(서열식별번호: 17)(여기에서 7 번 위치의 Xaa는 A, T, S 또는 G이고; 16 번 위치의 Xaa는 K 또는 E이다)의 CDR2; 및 (c) 식 KYYYGNXaaXaaRSWYFDV(서열식별번호: 18)(여기에서 7 번 위치의 Xaa는 T 또는 S이고; 8 번 위치의 Xaa는 R, Q, K, S 또는 Y이다)의 CDR3을 포함하는 중쇄 CDR을 포함하는 작용물질 항-trkC 항체(일부 실시태양에서, 폴리펩타이드)를 제공하며, 이때 상기 항체는 서열식별번호: 22의 CDR1 부위, 서열식별번호: 23의 CDR2 부위, 및 서열식별번호: 24의 CDR3 부위를 포함하는 중쇄 CDR을 포함하는 항체는 아니다. 일부 실시태양에서, 상기 CDR1은 식 GYTFTSYXaaXaaH(서열식별번호: 16)(여기에서 8 번 위치의 Xaa는 R이고, 9 번 위치의 Xaa는 I, L 또는 R이다)의 서열을 갖는다. 일부 실시태양에서, 상기 CDR2는 식 EIYPSNXaaRTNYNEKFXaaS(서열식별번호: 17)(여기에서 7 번 위치의 Xaa는 A, T 또는 S이고; 16 번 위치의 Xaa는 K 또는 E이다)의 서열을 갖는다. 일부 실시태양에서, CDR3은 식 KYYYGNXaaXaaRSWYFDV(서열식별번호: 18)(여기에서 7 번 위치의 Xaa는 T이고; 8 번 위치의 Xaa는 R, Q, K 또는 S이다)의 서열을 갖는다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 경쇄 가변 부위를 포함한다.

본 발명은 또한 (a) 식 RASESXaaDXaaYGISFXaaXaa(서열식별번호: 19)(여기에서 6 번 위치의 Xaa는 I 또는 V이고, 8 번 위치의 Xaa는 N 또는 S이고, 14 번 위치의 Xaa는 L 또는 M이고; 15 번 위치의 Xaa는 A, T 또는 N이다)의 CDR1; (b) 식 AASNXaaGS(서열식별번호: 20)(여기에서 5 번 위치의 Xaa는 R, L 또는 Q이다)의 CDR2; 및 (c) 식 QQSKXaaVPRT(서열식별번호: 21)(여기에서 5 번 위치의 Xaa는 T, A, S 또는 E이다)의 CDR3을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 작용물질 항-trkC 항체(일부 실시태양에서, 폴리펩타이드)를 제공하며, 이때 상기 항체는 서열식별번호: 25의 CDR1 부위, 서열식별번호: 26의 CDR2 부위, 및 서열식별번호: 27의 CDR3 부위를 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 항체는 아니다. 일부 실시태양에서, 상기 CDR1은 식 RASESXaaDXaaYGISFXaaXaa(서열식별번호: 19)(여기에서 6 번 위치의 Xaa는 I 이고, 8 번 위치의 Xaa는 N 또는 S이고, 14 번 위치의 Xaa는 L이고; 15 번 위치의 Xaa는 A 또는 T이다)의 서열을 갖는다. 일부 실시태양에서, 상기 CDR2는 식 AASNXaaGS(서열식별번호: 20)(여기에서 5 번 위치의 Xaa는 R 또는 L이다)의 서열을 갖는다. 일부 실시태양에서, 상기 CDR3은 식 QQSKXaaVPRT(서열식별번호: 21)(여기에서 5 번 위치의 Xaa는 T, A 또는 S이다)의 서열을 갖는다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 중쇄 가변 부위를 포함한다.

본 발명은 또한 (a)(i) 식 GYTFTSYXaaXaaH(서열식별번호: 16)(여기에서 8 번 위치의 Xaa는 R 또는 W이고, 9 번 위치의 Xaa는 I, L, R 또는 M이다)의 CDR1; (ii) 식 EIYPSNXaaRTNYNEKFXaaS(서열식별번호: 17)(여기에서 7 번 위치의 Xaa는 A, T, S 또는 G이고; 16 번 위치의 Xaa는 K 또는 E이다)의 CDR2; 및 (iii) 식 KYYYGNXaaXaaRSWYFDV(서열식별번호: 18)(여기에서 7 번 위치의 Xaa는 T 또는 S이고; 8 번 위치의 Xaa는 R, Q, K, S 또는 Y이다)의 CDR3을 포함하는 중쇄 CDR; 및 (b)(i) 식 RASESXaaDXaaYGISFXaaXaa(서열식별번호: 19)(여기에서 6 번 위치의 Xaa는 I 또는 V이고, 8 번 위치의 Xaa는 N 또는 S이고, 14 번 위치의 Xaa는 L 또는 M 이고; 15 번 위치의 Xaa는 A, T 또는 N이다)의 CDR1; (ii) 식 AASNXaaGS(서열식별번호: 20)(여기에서 5 번 위치의 Xaa는 R, L 또는 Q이다)의 CDR2; 및 (iii) 식 QQSKXaaVPRT(서열식별번호: 21)(여기에서 5 번 위치의 Xaa는 T, A, S 또는 E이다)의 CDR3을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 작용물질 항-trkC 항체(일부 실시태양에서, 폴리펩타이드)를 제공하며; 이때 상기 항체는 (a) 서열식별번호: 22의 CDR1 부위, 서열식별번호: 23의 CDR2 부위, 및 서열식별번호: 24의 CDR3 부위를 포함하는 중쇄 CDR; 및 (b) 서열식별번호: 25의 CDR1 부위, 서열식별번호: 26의 CDR2 부위, 및 서열식별번호: 27의 CDR3 부위를 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 항체는 아니다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 항체 A5의 단편 또는 부위를 포함하는 항체(본 발명에서는 호환적으로 "A5"라 칭한다)이다. 하나의 실시태양에서, 상기 단편은 서열식별번호: 29에 나타낸 바와 같은 항체 A5의 경쇄이다. 또 다른 실시태양에서, 상기 단편은 서열식별번호: 28에 나타낸 바와 같은 항체 A5의 중쇄이다. 더욱 또 다른 실시태양에서, 상기 단편은 항체 A5의 경쇄 및/또는 중쇄로부터의 하나 이상의 가변 부위들을 함유한다. 더욱 또 다른 실시태양에서, 상기 단편은 도 1A 및 1B에 나타낸 바와 같은 항체 A5의 경쇄 및/또는 중쇄로부터의 하나 이상의 CDR을 함유한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 기탁 번호 ATCC PTA-5682 번의 숙주 세포에 의해 생산된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 경쇄를 포함하는 항체이다. 또 다른 태양에서, 본 발명은 기탁 번호 ATCC PTA-5683 번의 숙주 세포에 의해 생산된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 중쇄를 포함하는 항체이다. 또 다른 태양 에서, 본 발명은 (a) 기탁 번호 ATCC PTA-5682 번의 숙주 세포에 의해 생산된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 경쇄; 및 기탁 번호 ATCC PTA-5683 번의 숙주 세포에 의해 생산된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 중쇄를 포함하는 항체이다(편의상 본 발명에서 상기 기탁된 숙주 세포에 의해 생산된 폴리뉴클레타이드(들)를 ATCC PTA-5682 및 PTA-5683의 기탁 번호를 갖는 것으로서 지칭한다). 또 다른 태양에서, 본 발명은 기탁 번호 ATCC PTA-5682 번의 숙주 세포에 의해 생산된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 경쇄 가변 부위를 포함하는 항체이다. 또 다른 태양에서, 본 발명은 기탁 번호 ATCC PTA-5683 번의 숙주 세포에 의해 생산된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 중쇄 가변 부위를 포함하는 항체이다. 또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 기탁 번호 ATCC PTA-5682 번의 숙주 세포에 의해 생산된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 경쇄 가변 부위; 및 (b) 기탁 번호 ATCC PTA-5683 번의 숙주 세포에 의해 생산된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 중쇄 가변 부위를 포함하는 항체이다. 더욱 또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 기탁 번호 ATCC PTA-5682 번의 숙주 세포에 의해 생산된 폴리뉴클레오타이드; 및/또는 (b) 기탁 번호 ATCC PTA-5683 번의 숙주 세포에 의해 생산된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 중쇄에 의해 암호화된 하나 이상의 CDR(들)을 포함하는 항체이다.

일부 실시태양에서, 상기 항체는 변경된 불변 부위, 예를 들어 면역학적으로 불활성인, 예를 들어 보체 매개된 세포 용해를 촉발하지 않거나 또는 항체-의존성 세포 매개된 세포독성(ADCC)을 자극하지 않는 불변 부위를 포함한다. 다른 실시태양에서, 상기 불변 부위를 문헌[Eur. J. Immunol.(1999) 29:2613-2624; PCT 공보 PCT/GB99/01441; 및/또는 영국 특허 출원 제 9809951.8 호에 개시된 바와 같이 변경시킨다. 더욱 다른 실시태양에서, 상기 항체는 하기의 돌연변이, 즉 A330P331에서 S330S331(야생형 IgG2a 서열에 대한 아미노산 넘버링)로의 돌연변이를 포함하는 인간 중쇄 IgG2a 불변 부위를 포함한다(Eur. J. Immunol.(1999)29:2613-1624).

또 다른 태양에서, 본 발명은 하기 중 임의의 하나 이상을 포함하는 폴리펩타이드(항체일수도 항체가 아닐 수도 있다)를 제공한다: a) 도 1A 및 1B에 나타낸 항체 A5의 하나 이상의 CDR(들); b) 도 1A에 나타낸 항체 A5의 중쇄로부터의 CDR H3; c) 도 1B에 나타낸 항체 A5의 경쇄로부터의 CDR L3; d) 도 1B에 나타낸 항체 A5의 경쇄로부터의 3 개의 CDR; e) 도 1A에 나타낸 항체 A5의 중쇄로부터의 3 개의 CDR; 및 f) 도 1A 및 1B에 나타낸 항체 A5의, 경쇄로부터의 3 개의 CDR 및 중쇄로부터의 3 개의 CDR. 본 발명은 또한 a) 도 1A 및 1B에 나타낸 항체 A5로부터 유도된 하나 이상(1, 2, 3, 4, 5 또는 6 개)의 CDR(들); b) 도 1A에 나타낸 항체 A5의 중쇄로부터의 CDR H3으로부터 유도된 CDR; 및/또는 c) 도 1B에 나타낸 항체 A5의 경쇄로부터의 CDR L3으로부터 유도된 CDR 중 임의의 하나 이상을 포함하는 폴리펩타이드(항체일수도 항체가 아닐 수도 있다)를 또한 제공한다.

본 발명은 또한 (a) 식 GYTFTSYXaaXaaH(서열식별번호: 16)(여기에서 8 번 위치의 Xaa는 R 또는 W이고, 9 번 위치의 Xaa는 I, L, R 또는 M이다)의 서열(이때 상기 서열은 GYTFTSYWMH(서열식별번호: 22)가 아니다); (b) 식 GYTFTSYXaaXaaH(서열식별번호: 16)(이때 8 번 위치의 Xaa는 R이고, 9 번 위치의 Xaa는 I, L 또는 R이다)의 서열; (c) 식 EIYPSNXaaRTNYNEKFXaaS(서열식별번호: 17)(여기에서 7 번 위치 의 Xaa는 A, T, S 또는 G이고; 16 번 위치의 Xaa는 K 또는 E이다)의 서열(이때 상기 서열은 EIYPSNGRTNYNEKFKS(서열식별번호: 23)가 아니다); (d) 식 EIYPSNXaaRTNYNEKFXaaS(서열식별번호: 17)(이때 7 번 위치의 Xaa는 A, T 또는 S이고; 16 번 위치의 Xaa는 K 또는 E이다)의 서열; (e) 식 KYYYGNXaaXaaRSWYFDV(서열식별번호: 18)(여기에서 7 번 위치의 Xaa는 T 또는 S이고; 8 번 위치의 Xaa는 R, Q, K, S 또는 Y이다)의 서열(이때 상기 서열은 KYYYGNSYRSWYFDV(서열식별번호: 24)가 아니다); (f) 식 KYYYGNXaaXaaRSWYFDV(서열식별번호: 18)(이때 7 번 위치의 Xaa는 T이고; 8 번 위치의 Xaa는 R, Q, K 또는 S이다)의 서열; (g) 식 RASESXaaDXaaYGISFXaaXaa(서열식별번호: 19)(여기에서 6 번 위치의 Xaa는 I 또는 V이고, 8 번 위치의 Xaa는 N 또는 S이고, 14 번 위치의 Xaa는 L 또는 M이고; 15 번 위치의 Xaa는 A, T 또는 N이다)의 서열(이때 상기 서열은 RASESVDNYGISFMN(서열식별번호: 25)이 아니다); (h) 식 RASESXaaDXaaYGISFXaaXaa(서열식별번호: 19)(이때 6 번 위치의 Xaa는 I이고, 8 번 위치의 Xaa는 N 또는 S이고, 14 번 위치의 Xaa는 L 이고; 15 번 위치의 Xaa는 A 또는 T이다)의 서열; (i) 식 AASNXaaGS(서열식별번호: 20)(여기에서 5 번 위치의 Xaa는 R 또는 L이다)의 서열; (j) 식 QQSKXaaVPRT(서열식별번호: 21)(여기에서 5 번 위치의 Xaa는 T, A 또는 S이다)의 서열 중 임의의 하나 이상을 포함하는 폴리펩타이드(항체일 수도 항체가 아닐 수도 있다)를 제공한다.

일부 실시태양에서, 본 발명은 상기 항체들 중 임의의 항체를 제공하며, 또한 이때 상기 항체는 인간이다. 다른 실시태양에서, 본 발명은 상기 항체들 중 임의의 항체를 제공하며, 또한 상기 항체는 인간화된다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 단클론 항체이다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 인간 trkC에 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 인간 trkC에 우선적으로 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 인간 trkC에 약 5 nM 미만의 K_D로 결합한다. 일부 실시태양에서, 상기 항체는 설치류 trkC에 또한 결합한다.

마우스 단클론 항체 2256의 서열과 동일한 서열(폴리뉴클레오타이드 또는 아미노산)로 이루어진 실시태양(폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드)을 특별히 제외함은 물론이다. 2256 가변 부위(CDR 부위 포함)의 아미노산 서열을 도 2A 및 2B에 나타낸다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 항체 A5(본 발명에서는 호환적으로 "A5"라 칭한다)의 단편 또는 부위를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 단리된 폴리뉴클레오타이드를 제공한다. 하나의 실시태양에서, 상기 단편은 도 1B에 나타낸 바와 같은 항체 A5의 경쇄이다. 또 다른 실시태양에서, 상기 단편은 도 1A에 나타낸 바와 같은 항체 A5의 중쇄이다. 더욱 또 다른 실시태양에서, 상기 단편은 항체 A5의 경쇄 및/또는 중쇄로부터의 하나 이상의 가변 부위를 함유한다. 더욱 또 다른 실시태양에서, 상기 단편은 도 1A 및 1B에 나타낸 바와 같은 항체 A5의 경쇄 및/또는 중쇄로부터의 하나 이상의 상보성 결정 부위(CDR)를 함유한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 항체 A5를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 단리된 폴리뉴클레오타이드이다. 일부 실시태양에서, 상기 폴리뉴클레 오타이드는 서열식별번호: 11 및 13에 나타낸 폴리뉴클레오타이드 중 어느 하나 또는 이들 모두를 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 서열식별번호: 10 및 12에 나타낸 폴리뉴클레오타이드 중 어느 하나 또는 이들 모두를 포함한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 기탁 번호 ATCC PTA-5682 번의 A5 경쇄를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오타이드이다. 또 다른 태양에서, 본 발명은 기탁 번호 ATCC PTA-5683 번의 A5 중쇄를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오타이드이다. 더욱 또 다른 실시태양에서, 본 발명은 (a) 기탁 번호 ATCC PTA-5682 번의 폴리뉴클레오타이드로 암호화된 가변 부위 및 (b) 기탁 번호 ATCC PTA-5683 번의 폴리뉴클레오타이드로 암호화된 가변 부위를 포함하는 단리된 폴리뉴클레오타이드이다. 또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 기탁 번호 ATCC PTA-5682 번의 폴리뉴클레오타이드로 암호화된 하나 이상의 CDR 및 (b) 기탁 번호 ATCC PTA-5683 번의 폴리뉴클레오타이드로 암호화된 하나 이상의 CDR을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오타이드이다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명에 개시된 항체(항체 단편 포함) 또는 폴리펩타이드 중 임의의 것을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 제공한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명에 개시된 폴리뉴클레오타이드 중 임의의 것을 포함하는 벡터(발현 및 클로닝 벡터 포함) 및 숙주 세포를 제공한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 A5 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 및 A5 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 숙주 세포이며, 이때 상기 A5 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드(들)는 ATCC PTA-5682 번의 기탁 번호를 가지며 A5 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 ATCC PTA-5683 번의 기탁 번호를 갖는다(편의상 본 발명에서 상기 기탁된 숙주 세포에 의해 생산된 폴리뉴클레타이드(들)를 ATCC PTA-5682 및 PTA-5683의 기탁 번호를 갖는 것으로서 지칭한다). 일부 실시태양에서, 상기 숙주 세포는 (a) 기탁 번호 ATCC PTA-5682 번의 폴리뉴클레오타이드로 암호화된 가변 부위 및/또는 (b) 기탁 번호 ATCC PTA-5683 번의 폴리뉴클레오타이드로 암호화된 가변 부위를 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 숙주 세포는 (a) 기탁 번호 ATCC PTA-5682 번의 폴리뉴클레오타이드로 암호화된 하나 이상의 CDR; 및/또는 (b) 기탁 번호 ATCC PTA-5683 번의 폴리뉴클레오타이드로 암호화된 하나 이상의 CDR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 기탁 번호 ATCC PTA-5683 번으로서 ATCC에 기탁된 폴리뉴클레오타이드를 제공한다. 또 다른 태양에서, 본 발명은 기탁 번호 ATCC PTA-5682 번으로서 ATCC에 기탁된 폴리뉴클레오타이드를 제공한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 항체 A5에 의해 결합된 trkC의 복합체이다. 일부 태양에서, 상기 복합체를 단리한다. 일부 실시태양에서, 상기 trkC는 인간이다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명에 개시된 항체 또는 폴리펩타이드들 중 임의의 것에 의해 결합된 trkC의 복합체이다. 일부 태양에서, 상기 복합체를 단리한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명에 개시된 폴리펩타이드(항체, 예를 들 어 항체 A5 포함) 또는 폴리뉴클레오타이드 중 임의의 것을 포함하는 약학 조성물, 예를 들어, 항체 A5 또는 상기 항체 A5의 단편을 포함하는 항체 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물이다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 항체 A5를 암호화하는 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제조하고; 항체 A5의 생산을 허용하는 조건 하에서 상기 숙주 세포 또는 그의 자손을 배양하고; 상기 항체 A5를 정제함을 포함하는 항체 A5의 제조 방법이다. 일부 실시태양에서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 서열식별번호: 11 및 13에 나타낸 폴리뉴클레오타이드 중 어느 하나 또는 이들 모두를 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 서열식별번호: 10 및 12에 나타낸 폴리뉴클레오타이드 중 어느 하나 또는 이들 모두를 포함한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 적합한 세포에서 A5 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 및 A5 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 발현시킨 다음(이때 상기 A5 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 ATCC PTA-5682 번의 기탁 번호를 가지며, 상기 A5 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 ATCC PTA-5683 번의 기탁 번호를 갖는다); 일반적으로는 상기 항체를 회수 및/또는 단리시킴을 포함하는 항체 A5의 제조 방법이다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 적합한 세포에서 항체를 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 발현시킨 다음(이들을 단일 경쇄 또는 중쇄로서 별도로 발현시키거나 또는 경쇄 및 중쇄 모두를 하나의 벡터로부터 발현시킨다), 일반적으로는 관심 항체 또는 폴리뉴클레오타이드를 회수 및/또는 단리시킴으로써 본 발명 에 개시된 항체들 중 임의의 것을 제조하는 방법을 제공한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명에 개시된 임의의 폴리펩타이드(항체, 예를 들어 항체 A5 포함)를 사용하여 인간 trkC 또는 다른 포유동물 trkC 생물 활성을 활성화시키는 방법이다. 하나의 실시태양에서, 상기 방법은 인간 trkC를 본 발명에 개시된 임의의 폴리펩타이드(항체 A5 포함)와 접촉시킴을 포함하며, 이에 의해 인간 trkC 활성이 활성화된다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명에 개시된 임의의 폴리펩타이드(항체, 예를 들어 항체 A5 포함)를 사용하여 trkC를 검출하는 방법이다. trkC의 존재를 trkC와 본 발명에 개시된 임의의 폴리펩타이드(예를 들어 항체 A5)와의 복합체를 검출함으로써 검출한다. 본 발명에 사용된 "검출"이란 용어는 대조군을 참고로 하여 또는 상기 없이 정성적 및/또는 정량적으로 검출함(수준 측정)을 포함한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명에 개시된 항체 A5 또는 임의의 폴리펩타이드(항체 포함) 또는 폴리뉴클레오타이드 실시태양을 포함하는 유효량의 조성물을 투여함으로써, 감각 신경병증, 예를 들어 큰 섬유 감각 신경병증을 치료하는 방법이다. 일부 실시태양에서, 상기 감각 신경병증은 탁솔-유발된 감각 신경병증이다. 일부 실시태양에서, 상기 감각 신경병증은 시스플라틴-유발된 감각 신경병증이다. 일부 실시태양에서, 상기 감각 신경병증은 피리독신-유발된 감각 신경병증이다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명에 개시된 조성물들 중 임의의 하나 이상을 포함하는 키트 및 조성물을 제공한다. 일반적으로, 적합하게 포장되고 적합 한 설명서가 제공된 상기 키트는 본 발명에 개시된 임의의 방법들에 유용하다.

본 발명은 또한 본 발명에 개시된 임의의 용도를 위해 본 발명에 개시된 임의의 조성물들(예를 들어 항체, 폴리펩타이드, 폴리뉴클레오타이드)을, (예를 들어)약제로든 및/또는 약제의 제조로서든 용도에 관계없이 제공한다.

일부 실시태양에서, 본 발명의 폴리펩타이드 또는 항체는 본 발명에 개시된 예외를 포함하지 않는다. 본 발명의 식과 관련하여, 당해 분야의 숙련가에게 자명한 바와 같이, 각각의 아미노산 치환체를 독립적으로 선택할 수 있다. 본 발명은 또한 하나 이상의 아미노산 치환체가 제거된 식들을 제공한다.

도 1A는 A5 항체의 중쇄 가변 부위의 아미노산 서열(A5-H로 표시함)을 나타낸다. 연장된 CDR은 상자로 나타내고, Chothia CDR 및 Kabat CDR은 각각 이탤릭체와 고딕체로 나타낸다. 가변 영역 아미노산 잔기들에 연속 번호를 붙인다.

도 1B는 A5 항체의 중쇄 가변 부위의 아미노산 서열(A5-L로 표시함)을 나타낸다. 연장된 CDR은 상자로 나타내고, Chothia CDR 및 Kabat CDR은 각각 이탤릭체와 고딕체로 나타낸다. 가변 영역 아미노산 잔기들에 연속 번호를 붙인다.

도 2A는 마우스 단클론 작용물질 항-trkC 항체 2256의 중쇄 가변 부위의 아미노산 서열(2256H로 표시함)을 나타낸다. 연장된 CDR은 상자로 나타내고, Chothia CDR 및 Kabat CDR은 각각 이탤릭체와 고딕체로 나타낸다. 가변 영역 아미노산 잔기들에 연속 번호를 붙인다.

도 2B는 마우스 단클론 작용물질 항-trkC 항체 2256의 경쇄 가변 부위의 아미노산 서열(2256L로 표시함)을 나타낸다. 연장된 CDR은 상자로 나타내고, Chothia CDR 및 Kabat CDR은 각각 이탤릭체와 고딕체로 나타낸다. 가변 영역 아미노산 잔기들에 연속 번호를 붙인다.

도 3은 래트 E20 3차 신경세포 생존율 분석에서 마우스 단클론 작용물질 항-trkC 항체 2256 및 항체 A5의 작용물질 활성을 나타내는 그래프이다.

도 4는 KIRA를 사용하여 분석된 마우스 단클론 작용물질 항-trkC 항체 2256 및 항체 A5의 활성을 비교하는 그래프이다.

도 5A는 대조군, PDX, PDX + QL2HNT3, 및 PDX + A5 처리된 동물에서 측정된 감각 신경 진폭을 나타내는 그래프이다.

도 5B는 대조군, PDX, PDX + QL2HNT3, 및 PDX + A5 처리된 동물에서 측정된 감각 신경 전달 속도를 나타내는 그래프이다.

도 5C는 대조군, PDX, PDX + QL2HNT3, 및 PDX + A5 처리된 동물에서 측정된 H-파를 나타내는 그래프이다.

도 5D는 대조군, PDX, PDX + QL2HNT3, 및 PDX + A5 처리된 동물에서 측정된 미끄러짐 회수를 나타내는 그래프이다.

도 6은 대조군, CDDP, CDDP + 2256(2 ㎎/㎏), CDDP + 2256(10 ㎎/㎏), CDDP + A5(2 ㎎/㎏), 및 CDDP + A5(10 ㎎/㎏) 처리된 동물에서 측정된 꼬리 신경 전달 속도를 나타내는 그래프이다.

본 발명은 trkC와 결합하는 항체 및 폴리펩타이드(예를 들어 A5), 및 상기 항체의 제조 및 사용 방법을 제공한다. 일부 실시태양에서, 본 발명은 trkC 수용체("trkC")에 결합하는 인간화된 항체 A5 및 상기 항체의 제조 및 사용 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 trkC에 결합하는 A5 폴리펩타이드(항체 포함), 및 A5 항체 및/또는 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 제공한다.

본 발명은 또한 치료 유효량의 작용물질 항-trkC 항체를 투여함으로써 개인에서 감각 신경병증(예를 들어 탁솔-유발된 감각 신경병증)을 예방 및/또는 치료하는 방법을 제공한다.

일반적인 기법

본 발명의 실시는 달리 나타내지 않는 한 통상적인 분자 생물학(재조합 기법 포함), 미생물학, 세포 생물학, 생화학 및 면역학 기법들을 사용할 것이며, 이들은 당해 분야의 기술 내에 있다. 상기와 같은 기법들은 문헌, 예를 들어 [Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition(Sambrook et al., 1989) Cold Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis(M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook(J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture(R.I. Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture(J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedure(A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G.Newell, eds., 1993-1998) J. Wiley and Sons; Methods in Enzymology(Academic Press, Inc.); Handbook of Experimental Immunology(D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells(J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); Current Protocols in Molecular Biology(F.M. Ausubel et al., eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology(J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology(Wiely and Sons, 1999); Immunobiology(C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies(P. Finch, 1997); Antibodies: a practical approach(D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal antibodies: a practical approach(P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using antibodies: a laboratory manual(E. Harlow and D.Lane(Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies(M. Zanetti and J.D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995)]에 충분히 설명되어 있다.

정의

"항체"는 면역글로불린 분자의 가변 부위에 위치한 하나 이상의 항원 인식 부위를 통해 표적, 예를 들어 탄수화물, 폴리뉴클레오타이드, 지질, 폴리펩타이드 등에 특이적으로 결합할 수 있는 면역글로불린 분자이다. 본 발명에 사용된 바와 같이, 상기 용어는 완전한 다클론 또는 단클론 항체뿐만 아니라, 그의 단편(예를 들어 Fab, Fab', F(ab')₂, Fv), 단쇄(ScFv), 그의 돌연변이체, 항체 부분을 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위를 포함하는 면역글로불린 분자의 임의의 다른 변경된 형태를 포함한다. 항체는 임의의 부류의 항체, 예를 들어 IgG, IgA 또는 IgM(또는 그의 하위 부류)을 포함하며, 상기 항체는 임의의 특정한 부류일 필요는 없다. 면역글로불린은 그의 중쇄의 불변 영역의 항체 아미노산 서열에 따라 상이한 부류들로 할당될 수 있다. 면역글로불린에는 5 개의 주요 부류, 즉 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 존재하며, 이들 중 다수는 하위 부류(아이소타입), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 추가 분류될 수 있다. 면역글로불린의 상이한 부류에 상응하는 상기 중쇄 불변 영역들을 각각 알파, 델타, 입실론, 감마 및 뮤라 칭한다. 면역글로불린의 상이한 부류의 서브유닛 구조 및 3 차원 형태들은 널리 공지되어 있다.

본 발명에 사용된 "단클론 항체"는 실질적으로 동종인 항체 집단으로부터 수득된 항체를 지칭한다, 즉 상기 집단을 포함하는 개별 항체들은 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연 돌연변이를 제외하고 동일하다. 단클론 항체는 매우 특이적이며, 이는 단일 항원 부위를 지향한다. 더욱 또한, 전형적으로는 상이한 결정소(에피토프)를 지향하는 상이한 항체를 포함하는 다클론 항체 제제와 대조적으로, 각각의 단클론 항체는 항원 상에서 단일 결정소를 지향한다. "단클론" 수식어는 실질적으로 동종인 항체 집단으로부터 수득되고 상기 항체를 임의의 특정 방법에 의해 생산할 필요가 있는 것으로 해석되지 않는 항체의 특성을 가리킨다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 단클론 항체를 미국 특허 제 4,816,567 호에 개시된 바와 같은 재조합 DNA 방법에 의해 제조할 수 있다. 상기 단클론 항체를 또한 예를 들어 문헌[McCafferty et al., 1990, Nature, 348:552-554]에 개시된 기법을 사용하여 생성시킨 파지 라이브러리로부터 단리시킬 수 있다.

본 발명에 사용된 "인간 항체"는 인간에 의해 생산되고/되거나 당해 분야에 공지되거나 본 발명에 개시된 임의의 인간 항체 제조 기법을 사용하여 제조한 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 항체를 의미한다. 이러한 인간 항체의 정의는 하나 이상의 인간 중쇄 폴리펩타이드 또는 하나 이상의 인간 경쇄 폴리펩타이드를 포함하는 항체를 포함한다. 하나의 상기와 같은 예는 쥐 경쇄 및 인간 중쇄 폴리펩타이드를 포함하는 항체이다. 인간 항체를 당해 분야에 공지된 다양한 기법들을 사용하여 제조할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 인간 항체를 파지 라이브러리(이때 상기 파지 라이브러리는 인간 항체를 발현한다)로부터 선택한다(Vaughan et al., 1996, Nature Biotechnology, 14:309-314; Sheets et al., 1998, PNAS, (USA) 95:6157-6162; Hoogenboom and Winter, 1991, J. Mol. Biol., 227:381; Marks et al., 1991, J. Mol. Biol., 222:581). 인간 항체를 또한 인간 면역글로불린 좌를 트랜스제닉 동물, 예를 들어 내생 면역글로불린 유전자가 부분적으로 또는 완전히 불활성화된 마우스에 도입시켜 제조할 수 있다. 이러한 접근법은 미국 특허 제 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 및 5,661,016 호에 개시되어 있다. 한편으로, 상기 인간 항체를 표적 항원을 지향하는 항체를 생산하는 인간 B 림프구를 불멸화시켜 제조할 수 있다(상기와 같은 B 림프구를 개인으로부터 회수하거나 또는 생체 외에서 면역시킬 수도 있다). 예를 들어 문헌[Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p, 77(1985); Boerner et al., 1991, J. Immunol., 147(1):86-95] 및 미국 특허 제 5,750,373 호를 참조하시오.

본 발명에 사용된 "A5" 및 "항체 A5"란 용어는 도 1A 및 1B에 나타낸 중쇄 및 경쇄 가변 부위들의 아미노산 서열을 포함하는 항체를 지칭하는데 호환적으로 사용된다. 항체 A5의 CDR 부분(Chothia 및 Kabat CDR 포함)을 도 1A 및 1B에 도식적으로 나타낸다. 서열식별번호: 11 및 13은 각각 A5의 중쇄 및 경쇄 가변 부위들을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 나타낸다. A5의 특성화를 실시예에 개시한다. 상이한 생물학적 작용들, 예를 들어 비 제한적으로 trkC 수용체 및/또는 상기 trkC 신호전달 작용에 의해 매개되는 하부 경로들과 결합하여 이를 불활성화시키는 능력은 A5와 관련된다. 일부 실시태양에서, "A5"란 용어는 (a) ATCC PTA-5682 번의 기탁 번호를 갖는 A5 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 및 (b) ATCC PTA-5683의 기탁 번호를 갖는 A5 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 면역글로불린을 지칭한다.

"폴리펩타이드", "올리고펩타이드", "펩타이드" 및 "단백질"이란 용어는 임의의 길이의 아미노산 중합체를 지칭하기 위해 본 발명에서 호환적으로 사용된다. 상기 중합체는 선형이거나 분지될 수 있으며, 상기는 변경된 아미노산을 포함할 수 있고 비-아미노산에 의해 중단될 수도 있다. 상기 용어는 또한 자연적으로 변경되었거나 또는 개입, 예를 들어 다이설파이드 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 또는 임의의 다른 조작 또는 변경, 예를 들어 표지화 성분과의 결합에 의해 변경된 아미노산 중합체를 포함한다. 또한 상기 정의 내에는 예를 들어 하나 이상의 아미노산 동족체(예를 들어 이상 아미노산 등 포함)를 함유하는 폴리펩타이드뿐만 아니라 당해 분야에 공지된 다른 변경들도 포함된다. 본 발명의 폴리펩타이드는 항체를 기본으로 하기 때문에, 상기 폴리펩타이드가 단쇄로서 또는 회합된 쇄로서 발생할 수 있음은 물론이다.

본 발명에서 호환적으로 사용된 "폴리뉴클레오타이드" 또는 "핵산"은 임의의 길이의 뉴클레오타이드들의 중합체를 지칭하며, DNA와 RNA를 포함한다. 상기 뉴클레오타이드는 데옥시리보뉴클레오타이드, 리보뉴클레오타이드, 변경된 뉴클레오타이드 또는 염기 및/또는 그의 동족체, 또는 DNA 또는 RNA 폴리머라제에 의해 중합체에 통합될 수 있는 임의의 기질일 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 변경된 뉴클레오타이드, 예를 들어 메틸화된 뉴클레오타이드 및 그의 동족체를 포함할 수 있다. 존재하는 경우, 상기 뉴클레오타이드 구조에 대한 변경을 상기 중합체의 조립 전 또는 조립 후에 부여할 수 있다. 뉴클레오타이드의 서열을 비-뉴클레오타이드 성분들에 의해 중단시킬 수 있다. 폴리뉴클레오타이드를 중합 후에, 예를 들어 표지 성분과의 접합에 의해 추가로 변경시킬 수 있다. 다른 유형의 변경으로는 예를 들어 "캡", 천연 뉴클레오타이드들 중 하나 이상의 동족체에 의한 치환, 뉴클레오타이드간 변경, 예를 들어 하전되지 않은 결합에 의한 것(예를 들어 메틸 포스포네이트, 포스포트라이에스터, 포스포아미데이트, 카바메이트 등) 및 하전된 결합에 의한 것(예를 들어 포스포로티오에이트, 포스포로다이티오에이트 등), 펜던트 잔기, 예를 들어 단백질(예를 들어 뉴클레아제, 독소, 항체, 신호 펩타이드, 플라이-L-리신 등)을 함유하는 것, 삽입물질(예를 들어 아크리딘, 프소랄렌 등)에 의한 것, 킬레이터(예를 들어 금속, 방사성 금속, 붕소, 산화 금속 등)을 함유하는 것, 알킬레이터를 함유하는 것, 변경된 결합(예를 들어 알파 아노머 핵산 등)에 의한 것뿐만 아니라 폴리뉴클레오타이드(들)의 변경되지 않은 형태들이 있다. 더욱이, 당 중에 통상적으로 존재하는 임의의 하이드록실 그룹을 예를 들어 포스포네이트 그룹, 포스페이트 그룹에 의해 치환시키거나, 표준 보호 그룹에 의해 보호하거나, 또는 추가적인 뉴클레오타이드에 추가의 결합을 제조하기 위해 활성화시키거나, 또는 고체 지지체에 접합시킬 수 있다. 5' 및 3' 말단 OH를 탄소수 1 내지 20의 아민 또는 유기 캡핑 그룹 잔기로 치환시키거나 인산화시킬 수 있다. 다른 하이드록실들을 또한 표준 보호 그룹으로 유도체화할 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 또한 당해 분야에 일반적으로 공지된 리보스 또는 데옥시리보스 당의 유사한 형태들, 예를 들어 2'-O-메틸-, 2'-O-알릴, 2'-플루오로- 또는 2'-아지도-리보스, 카보사이클릭 당 동족체, α-아노머 당, 에피머 당, 예를 들어 아라비노스, 자일로스 또는 릭소오스, 피라노스 당, 퓨라노스 당, 세도헵튤로스, 비환상 동족체 및 비염기성 뉴클레오사이드 동족체, 예를 들어 메틸 리보사이드를 함유할 수 있다. 하나 이상의 포스포다이에스터 결합을 또 다른 결합 그룹에 의해 치환시킬 수 있다. 이러한 또 다른 결합 그룹은 비 제한적으로 포스페이트가 P(O)S("티오에이트"), P(S)S("다이티오에이트"), "(O)NR₂("아미데이트"), P(O)R, P(O)OR', CO 또는 CH₂("폼아세탈")에 의해 치환된 실시태양을 포함하며, 이때 각각의 R 또는 R'는 독립적으로 H, 또는 에테르(-O-) 결합, 아릴, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐 또는 아르알딜을 임의로 함유하는 치환되거나 비 치환된 알킬(1-20C)이다. 폴리뉴클레오타이드 중의 모든 결합들이 동일할 필요는 없다. 선행 설명을 RNA 및 DNA를 포함하여, 본 발명에서 언급한 모든 폴리뉴클레오타이드들에 적용한다.

항체의 "가변 부위"는 항체 경쇄의 가변 부위 또는 항체 중쇄의 가변 부위를 단독으로 또는 함께 지칭한다. 상기 중쇄 및 경쇄의 가변 부위들은 각각 3 개의 상보성 결정 부위(CDR)(또한 고도 가변 부위로서도 공지됨)에 의해 연결된 4 개의 기본 틀 부위(FR)로 이루어진다. 각 쇄 중의 CDR들은 상기 FR에 의해 가깝게 근접하여 함께 유지되며, 이때 다른 쇄로부터의 CDR들은 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다. CDR 결정에 2 가지 이상의 기법이 존재한다: (1) 교차-종 서열 변이성에 근거한 접근법(즉, Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda MD); 및 (2) 항원-항체 복합체의 결정학 연구에 근거한 접근법(Al-lazikani et al(1997) J. Molec. Biol. 273:927-948). 본 발명에 사용된 CDR은 상기 어느 한 접근법에 의해서 또는 상기 두 접근법 모두의 조합에 의해서 한정되는 CDR을 지칭할 수 있다.

항체의 "불변 부위"는 항체 경쇄의 불변 부위 또는 항체 중쇄의 불변 부위를 단독으로 또는 함께 지칭한다.

본 발명에 사용된 "trkC"는 티로신 키나제 상과의 일원인 trkC 수용체 폴리펩타이드를 지칭한다. trkC는 임의의 포유동물 종, 예를 들어 비 제한적으로 인간, 개, 고양이, 소, 말, 영장류 및 설치류(마우스 및 래트 포함)의 고유 trkC 수용체를 포함한다. 완전한 길이의 고유 trkC의 세포 외 영역이 다양한 다른 단백질들에서 확인된 동일하거나 또는 달리 유사한 구조와 관련하여 한정되었다. 상기 영역들을 성숙한 trkC 수용체의 N-말단에서 출발하여 1) 아미노산 1에서 아미노산 48까지 연장되는 제 1 시스테인-풍부 영역; 2) 아미노산 49에서 아미노산 120까지 연장되는 류신-풍부 영역; 3) 아미노산 121에서 아미노산 177까지 연장되는 제 2 시스테인-풍부 영역; 4) 아미노산 196에서 아미노산 257까지 연장되는 제 1 면역글로불린-유사 영역; 및 5) 아미노산 288에서 아미노산 351까지 연장되는 제 2 면역글로불린-유사 영역으로서 지정하였다. 예를 들어 PCT 공보 WO 0198361을 참조하시오. trkC 수용체의 세포 외 영역의 영역 구조를 또한 하기와 같이 결정 구조와 관련하여 지정하였다: 아미노산 1에서 아미노산 47까지 영역 1; 아미노산 48에서 아미노산 130까지 영역 2; 아미노산 131에서 아미노산 177까지 영역 3; 아미노산 178에서 아미노산 165까지 영역 4; 및 아미노산 166에서 아미노산 381까지 영역 5. 예를 들어 PCT WO 01/98361; 문헌[Urfer et al., J. Biol. Chem. 273:5829-5840(1998)]을 참조하시오. 또한 trkC의 변체가 포함되며, 이의 예로는 비 제한적으로 키나제 영역이 없는 변체(Shelton, et al., J. Neurosci. 15(1):477-491, 1995) 및 변경된 키나제 영역을 갖는 변체(Shelton, et al., J. Neurosci. 15(1):477-491, 1995)가 있다.

"작용물질 항-trkC 항체"("항-trkC 작용물질 항체" 또는 "항-trkC 항체"가 호환적으로 지칭됨)는 trkC 수용체 및/또는 상기 trkC 신호전달 작용에 의해 매개되는 하부 경로들과 결합하여 이를 불활성화할 수 있는 항체를 지칭한다. 예를 들어, 상기 작용물질 항체는 trkC 수용체의 세포 외 영역에 결합하여 상기 수용체의 이량체화를 발생시킴으로써 세포 내 촉매 키나제 영역을 활성화시킬 수 있다. 결과적으로, 상기 수용체를 발현하는 세포의 분화 및/또는 성장을 생체 외 및/또는 생체 내에서 자극할 수 있다. 일부 실시태양에서, 작용물질 항-trkC 항체는 trkC에 결합하여 trkC 생물활성을 활성화시킨다. 일부 실시태양에서, 본 발명의 방법에 유용한 작용물질 항체는 trkC의 영역 V 및/또는 영역 IV를 인식한다. 문헌[Urfer et al., J. Biol. Chem. 273:5829-5840(1998)]을 참조하시오. 작용물질 항-trkC 항체의 예는 본 발명에 제공되어 있다.

"생물 활성"은 본 발명의 작용물질 항-trkC 항체와 함께 사용 시 일반적으로는 trkC 수용체 티로신 키나제 및/또는 상기 trkC 신호전달 작용에 의해 매개되는 하부 경로들과 결합하여 이를 활성화시킬 수 있는 능력을 가짐을 지칭한다. 본 발명에 사용된 바와 같은 "생물 활성"은 trkC 발현 세포 상에서, trkC의 고유 리간드인 NT-3의 작용에 의해 유도되는 작용들과 함께 하나 이상의 효과기 작용을 포함한다. trkC의 "생물 활성"은 또한 NT-3의 작용에 의해 유도되는 작용들과 상이한 하부 신호전달 경로(들) 또는 효과기 작용을 포함할 수 있다. 비 제한적으로, 생물 활성은 하기 중 임의의 하나 이상을 포함한다: trkC에 결합하여 이를 활성화시키는 능력; trkC 수용체 이량체화를 촉진하고 trkC를 활성화시키는 능력; 세포(손상된 세포 포함), 특히 신경세포, 예를 들어 말초(교감, 감각 및 장) 신경세포, 및 중추(뇌 및 척수) 신경세포, 및 비-신경세포, 예를 들어 말초 혈액 백혈구의 생체 내 또는 생체 외에서의 발달, 생존, 작용, 유지 및/또는 조절을 촉진하는 능력. 본 내용에 의해 당해 분야의 숙련가에게 자명한 바와 같이, 이러한 원리들을 폴리펩타이드 실시태양에 적용시킨다.

항체 또는 폴리펩타이드에 "우선적으로 결합"하거나 "특이적으로 결합"(본 발명에서 호환적으로 사용됨)하는 에피토프는 당해 분야에서 널리 이해되고 있는 용어이며, 상기와 같은 특이적이거나 우선적인 결합을 측정하는 방법도 또한 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 분자는 상기가 다른 세포나 물질들보다 특정한 세포 또는 물질과 보다 빈번히, 보다 빠르게, 보다 큰 지속 기간 및/또는 보다 큰 친화성으로 반응하거나 회합하는 경우 "특이적인 결합" 또는 "우선적인 "결합"을 나타낸다고 한다. 항체가 다른 물질보다 더 큰 친화성으로, 몹시 탐내어, 보다 용이하게 및/또는 보다 큰 지속 기간으로 결합하는 경우 표적에 "특이적으로 결합하거나" 또는 "우선적으로 결합한다". 예를 들어, trkC 에피토프에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체는 다른 trkC 에피토프나 비-trkC 에피토프에 결합하는 것보다 상기 trkC 에피토프와 더 큰 친화성으로, 몹시 탐내어, 더 용이하게 및/또는 더 큰 지속 기간으로 결합하는 항체이다. 상기 정의를 읽음으로써, 예를 들어 제 1 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체(또는 잔기 또는 에피토프)는 제 2 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합할 수도 결합하지 않을 수도 있다. 그 자체로서 "특이적인 결합" 또는 "우선적인 결합"은 독점적인 결합을 (포함할 수 있지만) 반드시 요구하는 것은 아니다. 일반적으로는, 반드시 그런 것은 아니지만, 결합을 언급하는 것은 우선적인 결합을 의미한다.

본 발명에 사용된 항체의 "면역특이적" 결합은 항체의 항원-결합 부위와 상기 항체에 의해 인식된 특이 항원 사이에 일어나는 항원 특이적 결합 상호작용을 지칭한다(즉, 상기 항체는 ELISA 또는 다른 면역분석에서 단백질과 반응하며 관련되지 않은 단백질과는 검출될 정도로 반응하지 않는다).

본 발명에 사용된 "실질적으로 순수한"이란 50% 이상 순수한(즉 오염물질이 없는), 보다 바람직하게는 90% 이상 순수한, 보다 바람직하게는 95% 이상 순수한, 보다 바람직하게는 98% 이상 순수한, 보다 바람직하게는 99% 이상 순수한 물질을 지칭한다.

"숙주 세포"는 폴리뉴클레오타이드 삽입물 통합용 벡터(들)의 수용체일 수 있거나 또는 수용체인 개별적인 세포 또는 세포 배양물을 포함한다. 숙주 세포는 단일 숙주 세포의 자손을 포함하며, 상기 자손은 자연적이거나, 우연이거나 또는 의도적인 돌연변이로 인해 원래의 모 세포와 반드시 완전히 동일할 필요는 없다(형태 또는, 게놈 DNA 보체에 있어서). 숙주 세포는 본 발명의 폴리뉴클레오타이드(들)에 의해 생체 내에서 형질감염된 세포를 포함한다.

본 발명에 사용된 "Fc 수용체" 및 "FcR"은 항체의 Fc 부위에 결합하는 수용체를 개시한다. 바람직한 FcR은 고유 서열 인간 FcR이다. 더욱이, 바람직한 FcR은 IgG 항체와 결합하는 것(감마 수용체)이며 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 하위 부류의 수용체, 예를 들어 대립 유전자 변체 및 상기 수용체의 달리 이어진 형태를 포함한다. FCγRII 수용체는 FcγRIIA("활성화 수용체") 및 FcγRIIB("억제 수용체")를 포함하며, 이들은 그의 세포질 영역이 주로 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는다. FcR이 문헌[Ravetch and Kinet, 1991, Ann. Rev. Immunol., 9:457-92; Capel et al., 1994, Immunomethods, 4:25-34; 및 de Haas et al., 1995, J. Lab. Clin. Med. 126:330-41]에 고찰되어 있다. "FcR"은 또한 신생아 수용체인 FcRn을 포함하며, 이는 모체 IgG에서 태아로의 전달에 기여한다(Guyer et al., 1976, J. Immunol. 117-587; 및 Kim et al., 1994, J. Immunol., 24:249).

"보체 의존성 세포독성" 및 "CDC"는 보체의 존재 하에서 표적의 용해를 지칭한다. 상기 보체 활성화 경로는 보체 시스템(C1q)의 제 1 성분의 동족 항원과 착화된 분자(예를 들어 항체)에의 결합에 의해 개시된다. 보체 활성화를 평가하기 위해서, 예를 들어 문헌[Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods, 202:163(1996)]에 개시된 바와 같은 CDC 분석을 수행할 수 있다.

"작용성 Fc 부위"는 고유 서열 Fc 부위의 하나 이상의 효과기 작용을 갖는다. 전형적인 "효과기 작용"에는 C1q 결합; 보체 의존성 세포독성(CDC); Fc 수용체 결합; 항체 의존성 세포 매개된 세포독성(ADCC); 포식작용; 세포 표면 수용체(예를 들어 B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절 등이 포함된다. 상기와 같은 효과기 작용은 일반적으로는 상기 Fc 부위가 결합 영역(예를 들어 항체 가변 영역)에 결합하는 것을 요하며 상기와 같은 항체 효과기 작용을 평가하기 위해 당해 분야에 공지된 다양한 분석들을 사용하여 분석할 수 있다.

"고유 서열 Fc 부위"는 천연적으로 발견되는 Fc 부위의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. "변형 Fc 부위"는 하나 이상의 아미노산 변경 덕분에 고유 서열 Fc 부위의 아미노산 서열과 상이하지만, 여전히 상기 고유 서열 Fc 부위의 하나 이상의 효과기 작용을 유지하는 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 상기 변형 Fc 부위는 고유 서열 Fc 부위 또는 모 폴리펩타이드의 Fc 부위에 비해 고유 서열 Fc 부위 또는 모 폴리펩타이드의 Fc 부위에 하나 이상의 아미노산 치환, 예를 들어 약 1 내지 약 10 개의 아미노산 치환, 및 바람직하게는 약 1 내지 약 5 개의 아미노산 치환을 갖는다. 본 발명에서 상기 변형 Fc 부위는 바람직하게는 고유 서열 Fc 부위 및/또는 모 폴리펩타이드의 Fc 부위와 약 80% 이상, 가장 바람직하게는 약 90% 이상, 보다 바람직하게는 약 95% 이상의 서열 일치성을 가질 것이다.

본 발명에 사용된 "항체 의존성 세포 매개된 세포독성" 및 "ADCC"는 Fc 수용체(FcRs)를 발현하는 비특이적인 세포독성 세포(예를 들어 천연 세포독성(NK) 세포, 호중구, 및 대식세포)가 표적 세포 상에 결합된 항체를 인식하고 후속적으로 상기 표적 세포의 용해를 유발시키는 세포 매개된 반응을 지칭한다. 관심 분자의 ADCC 활성을 예를 들어 미국 특허 제 5,500,362 호 또는 제 5,821,337 호에 개시된 바와 같은 생체 외 ADCC 분석을 사용하여 평가할 수 있다. 상기와 같은 분석에 유용한 효과기 세포는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 및 NK 세포를 포함한다. 한편으로 또는 추가로, 관심 분자의 ADCC 활성을 예를 들어 문헌[Clynes et al., 1998, PNAS(USA), 95:652-656]에 개시된 바와 같은 동물 모델에서 평가할 수 있다.

본 발명에 사용된 "치료"는 이롭거나 목적하는 임상 결과의 획득을 위한 접근법이다. 본 발명의 목적을 위해서, 이롭거나 목적하는 임상 결과에는 비 제한적으로, 검출할 수 있든지 없든지 간에, 증상의 완화, 질병 정도의 감소, 질병의 안정화된(즉 악화되지 않는) 상태, 질병 진행의 지연 또는 지체, 질병 상태의 개선 또는 경감, 및 진정이 포함된다. "치료"는 또한 치료받지 않은 경우의 예상 생존율에 비해 생존율이 연장됨을 의미할 수 있다. "치료"는 장애의 병리상태의 발달을 방지하거나 변경시킬 의도로 수행되는 조정이다. 따라서, "치료"는 치료학적 치료와 예방학적 또는 방지적 수단 모두를 지칭한다. 치료가 필요한 사람들은 이미 장애가 있는 사람뿐만 아니라 상기 장애를 예방해야 하는 사람들을 포함한다. 구체적으로, 상기 치료는 손상 세포 변성의 병리상태, 예를 들어 신경 세포의 병리상태를 직접 방지, 지체 또는 달리 감소시키거나 또는 세포, 예를 들어 신경세포를 다른 치료제에 의한 치료에 보다 민감하게 만들 수 있다.

"탁솔 유발된 감각 신경병증"은 화학요법제인 탁솔 또는 다른 탁산의 치료로부터 발생하는 신경 장애이다. 본 발명에 사용된 "탁솔 유발된 감각 신경병증"은 상기 신경 장애와 관련된 임의의 하나 이상의 증상들을 지칭하며 이들을 포함한다. 탁솔 유발된 감각 신경병증은 다양한 유형의 1 차 감각 신경세포, 교감 신경세포를 포함하는 자율신경세포, 및 특수 감각, 예를 들어 미각, 후각, 청각 및 전정의 신경세포에 영향을 미칠 수 있다. 본 발명에 사용된 바와 같은 "탁솔 유발된 감각 신경병증"은 상기 요법제, 탁솔 또는 관련 탁산의 투여 도중 또는 투여에 이어서 개인과 관련하여 또는 상기 개인에게 존재하는 감각 신경세포에 영향을 미치는 신경 장애를 지칭한다. 일부 실시태양에서, "탁솔 유발된 감각 신경병증"은 말초 감각 신경세포(큰 섬유 감각 신경세포 포함)의 퇴행을 특징으로 한다. 일부 실시태양에서, "탁솔 유발된 감각 신경병증"은 하기 중 임의의 것을 특징으로 한다: 원위 대칭 감각이상, 진동각감퇴, 관절부위감각 상실, 통증 감각이상, 레르미트 징후, 통증, 진행성 원위 및/또는 근위 불완전마비, 근육통, 무력장폐쇄증, 기립 저혈압, 및 부정맥; 및 말초 감각 신경세포(큰 섬유 감각 신경세포 포함)의 퇴행. 이들을 표준 신경 검사, 환자 면담, 또는 보다 전문적인 정량적 검사에 의해 측정할 수 있다. 이러한 보다 전문화된 정량적 검사는 비 제한적으로 예를 들어 미세신경검사 또는 다른 전기생리학적 검사를 이용한 병든 신경세포의 전달 속도 측정; 피부 자극을 감지하는 능력의 정량적 및/또는 정량적 측정, 예를 들어 비 제한적으로 열, 빛 접촉, 진동 또는 두점 식별; 듣기 시험; 특수 균형 검사; 특수 고유감각 또는 운동 감각 검사; 자율 기능 검사, 예를 들어 비 제한적으로 혈압 조절 검사; 및 다양한 생리학적, 약물학적 자극에 대한 심박수 반응 검사를 포함할 수 있다. 이러한 검사들은 운동 기능 검사를 또한 포함할 수 있다.

본 발명에 사용된 바와 같은 "탁솔"은 패클리탁셀(TAXOL(등록상표), Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ), 도세탁셀(TAXOTERE(등록상표), Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France), 및 다른 탁산들을 지칭한다. 탁솔(다른 탁산 포함)을 단독으로 또는 다른 약물들과 함께 투여할 수 있다. 탁솔은 카포시 육종 및 유방, 난소 및 폐암을 포함한 각종 암의 치료에 승인되고 통상적으로 사용된다. 탁솔은 또한 다른 전립선, 두경부암뿐만 아니라 다양한 혈액암의 치료에도 사용된다. 탁솔을 또한 골수 이식 중에 투여한다.

"유효량"(예를 들어 탁솔 유발된 감각 신경병증과 관련하여)은 임상 결과를 포함한 이롭거나 목적하는 임상 결과를 달성하거나 질병의 개시를 지연시키기에 충분한 양이다. 유효량을 1 회 이상의 투여로 투여할 수 있다. 본 발명의 목적을 위해서, 본 발명에 개시된 작용물질 항-trkC 항체의 유효량은 감각 신경병증, 예를 들어 큰 섬유 감각 신경병증, 예를 들어 탁솔 유발된 감각 신경병증의 진행을 개선, 안정화, 역전, 지체 및/또는 지연시키기에 충분한 양이다. 작용물질 항-trkC 항체의 유효량은 또한 본 발명에 개시된 바와 같이 암의 탁솔 치료(치료 효과)를 향상시키기에 충분한 작용물질 항-trkC 항체의 양을 포함한다(이는 차례로 탁솔 용량의 증가 및/또는 일부 다른 이로운 효과, 예를 들어 탁솔 치료 부작용의 감소가 관찰됨을 의미할 수 있다). 당해 분야에서 이해되는 바와 같이, 작용물질 항-trkC 항체의 유효량은 특히 환자의 병력뿐만 아니라 다른 인자들, 예를 들어 사용되는 작용물질 항-trkC 항체의 유형(및/또는 용량)에 따라 변할 수 있다. 본 설명에 의해 당해 분야의 숙련가에게 자명한 바와 같이, 이러한 원리를 폴리펩타이드 실시태양에 적용시킨다.

본 발명에 사용된 "함께" 투여하는 것은 동시 투여 및/또는 상이한 시점에서의 투여를 포함한다. 함께 투여하는 것은 또한 공동 제형(예를 들어 작용물질 항-trkC 항체 및 탁솔이 동일한 조성물 중에 존재한다)으로서의 투여 또는 별도 조성물로서의 투여를 포함한다. 본 발명에 사용된 바와 같이 함께 투여하는 것은 작용물질 항-trkC 항체와 탁솔을 개인에게 동시에 및/또는 별도로 투여하는 임의의 상황을 포함함을 의미한다. 본 발명에 추가로 논의된 바와 같이, 작용물질 항-trkC 항체 및 탁솔을 상이한 투여 회수 또는 간격으로 투여할 수 있음은 물론이다. 예를 들어, 작용물질 항-trkC 항체를 매주 투여할 수 있는 반면, 탁솔을 덜 빈번히 투여할 수 있다. 상기 작용물질 항-trkC 항체와 탁솔을 동일한 투여 경로 또는 상이한 투여 경로를 사용하여 투여할 수 있음은 물론이다.

"생물학적 샘플"은 개인으로부터 수득되는 다양한 샘플 유형들을 포함하며, 진단 또는 모니터 분석에 사용될 수 있다. 상기 정의는 혈액 및 생물 기원의 다른 액체 샘플, 고체 조직 샘플, 예를 들어 생검 시편 또는 조직 배양물 또는 이로부터 유래한 세포, 및 상기의 자손을 포함한다. 또한 상기 정의는 상기 획득 후 임의의 방식으로, 예를 들어 시약에 의한 처리, 용해, 또는 몇몇 성분들, 예를 들어 단백질 또는 폴리뉴클레오타이드의 농축, 또는 절편화를 목적으로 반 고체 또는 고체 기질 중에의 매몰에 의해 조작된 샘플을 포함한다. "생물학적 샘플"이란 용어는 임상적 샘플을 포함하며, 배양물 중의 세포, 세포 상등액, 세포 용해물, 혈청, 혈장, 생물학적 유체 및 조직 샘플을 포함한다.

"개인"은 척추동물, 바람직하게는 포유동물, 보다 바람직하게는 인간이다. 포유동물은 비 제한적으로 농장 동물(예를 들어 소), 스포츠용 동물, 애완동물(예를 들어 고양이, 개 및 말), 영장류, 마우스 및 래트를 포함한다.

본 발명에 사용된 바와 같은 "벡터"는 하나 이상의 관심 유전자(들) 또는 서열(들)을 숙주 세포에 전달하고 바람직하게는 발현시킬 수 있는 구조물을 의미한다. 벡터의 예로는 비 제한적으로 바이러스 벡터, 맨 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 플라스미드, 코스미드 또는 파지 벡터, 양이온 축합제와 결합된 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 리포솜에 캡슐화된 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 및 몇몇 진핵세포, 예를 들어 생산자 세포가 있다.

본 발명에 사용된 바와 같은 "발현 조절 서열"은 핵산의 전사를 조절하는 핵산 서열을 의미한다. 발현 조절 서열은 프로모터, 예를 들어 구성 또는 유도 프로모터, 또는 증강인자일 수 있다. 상기 발현 조절 서열을 전사시킬 핵산 서열에 작동적으로 연결시킨다.

본 발명에 사용된 바와 같은 "약학적으로 허용 가능한 담체"는 유효 성분과 병용 시, 상기 성분이 생물 활성을 유지할 수 있게 하고 전달 시 환자의 면역계와 비 반응성이고 상기 환자에게 무독성인 임의의 물질을 포함한다. 예로서 비 제한적으로 임의의 표준 약학 담체, 예를 들어 포스페이트 완충 염수 용액, 물, 유화액, 예를 들어 오일/수 유화액, 및 다양한 유형의 습윤제가 있다. 에어로졸 또는 비 경구 투여용으로 바람직한 희석제는 인산염 완충 염수 또는 노르말(0.9%) 염수이다.

상기와 같은 담체를 포함하는 조성물을 널리 공지된 통상적인 방법(예를 들어 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A. Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990; 및 Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing, 2000]을 참조하시오)에 의해 제형화한다.

본 발명에 사용된 "k_off"란 용어는 항체/항원 복합체로부터의 항체의 해리에 대한 오프율 상수를 지칭하는데 사용된다.

본 발명에 사용된 "K_D"란 용어는 항체-항원 상호작용의 해리 상수를 지칭하는데 사용된다.

조성물 및 상기 조성물의 제조 방법

본 발명은 약학 조성물을 포함하여, 본 발명에 개시된 항-trkC 작용물질 항체(예를 들어 A5 항체) 또는 폴리펩타이드; 및 상기 항체(예를 들어 A5 항체) 또는 폴리펩타이드를 암호화하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 조성물을 포함한다. 본 발명에 사용된 바와 같이, 조성물은 trkC에 결합하는 하나 이상의 항체 또는 폴리펩타이드(항체일 수도 항체가 아닐 수도 있다) 및/또는 trkC에 결합하는 하나 이상의 항체 또는 폴리펩타이드를 암호화하는 서열을 포함하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 상기 조성물은 적합한 부형제, 예를 들어 당해 분야에 널리 공지된, 완충제를 포함한 약학적으로 허용 가능한 부형제를 또한 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 단리된 항체, 폴리펩타이드 및 폴리뉴클레오타이드 실시태양을 포함한다. 본 발명은 또한 실질적으로 순수한 항체, 폴리펩타이드 및 폴리뉴클레오타이드 실시태양을 포함한다.

본 발명의 항체 및 폴리펩타이드는 하기의 특성들 중 임의의(하나 이상의) 특성을 특징으로 한다: (a) trkC 수용체에 결합하고; (b) trkC 수용체의 하나 이상의 에피토프에 결합하고; (c) trkC 수용체에 결합하여 trkC 수용체 및/또는 상기 trkC 신호전달 작용에 의해 매개되는 하나 이상의 하부 경로들을 활성화시키고; (d) trkC 수용체에 결합하여 trkC 수용체를 활성화하고 감각 신경병증(예를 들어 탁솔 유발된 감각 신경병증)의 하나 이상의 증상을 치료, 예방, 역전 또는 개선시키고; (e) trkB 또는 trkA에 결합하고/하거나 이들을 활성화시키지 않고; (f) 유리한 약동학 및 생체이용성을 나타낸다.

인간 trkC와 높은 친화성 및 느린 해리 동역학으로 결합하는 항체 A5의 결합 성질을 쥐 항-trkC 항체 2256("Mab 2256")과 비교하여 하기에 요약한다. A5 중쇄 및 경쇄 가변 부위의 아미노산 서열을 도 1에 나타낸다. Mab 2256 중쇄 및 경쇄 가변 부위의 아미노산 서열을 도 2에 나타낸다.

A5 항체 및 관련 항체(본 발명에 개시됨)는 또한 문헌[Sadick et al, Exp. Cell Res.(1997) 234:354-361]에 개시된 바와 같은 키나제 수용체 활성화 분석(KIRA)에 의해 평가된 바와 같이 인간 trkC를 활성화시키고 생체 외 신경세포 생존율 분석에 의해 평가된 바와 같이 래트 trkC를 활성화시키는 강한 능력을 나타낸다. 도 3 및 4에 나타낸 바와 같이, A5는 인간과 설치류 trkC 모두에 대해 효능 있는 작용물질이다.

따라서, 일부 실시태양에서, 본 발명의 항체 및 폴리펩타이드가 추가로 동정되었으며 이는 (g) 인간 trkC에 느린 해리 동역학으로(일부 실시태양의 경우 약 10 nM 미만의 K_D 및/또는 약 0.01 s^-1 미만의 k_off로) 결합하는 높은 친화성 및/또는 (h) 래트 E12 3차 신경세포의 trkC 의존성 생존율을 약 100 pM 이하의 EC50으로 활성화시키는 능력을 특징으로 한다.

일부 실시태양에서, 본 발명은 ATCC PTA-5682 번의 기탁 번호를 갖는 숙주 세포에 의해 생산되는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 경쇄를 포함하는 항체이다. 또 다른 태양에서, 본 발명은 ATCC PTA-5683 번의 기탁 번호를 갖는 숙주 세포에 의해 생산되는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 중쇄를 포함하는 항체이다. 본 발명은 또한 A5 및 등가의 항체 단편(예를 들어 Fab, Fab', F(ab')₂, Fv, Fc 등), 단쇄(ScFv), 그의 돌연변이체, 항체 부분을 포함하는 융합 단백질, 및 필요한 특이성의 항원(trkC) 인식 부위를 포함하는 A5의 임의의 다른 변경된 형태의 다양한 제형들을 포함한다. A5의 항체 및 폴리펩타이드 단편(항체일 수도 항체가 아닐 수도 있다), 및 A5의 폴리펩타이드 단편을 포함하는 폴리펩타이드를 포함하여, 상기 A5의 등가의 항체들이 동정되었으며 이들은 상술한 기준들 중 임의의(하나 이상의) 기준을 특징으로 한다.

따라서, 본 발명은 하기 중 임의의 것 또는 하기 중 임의의 것을 포함하는 조성물(약학 조성물 포함)을 제공한다: (a) 항체 A5; (b) 항체 A5의 단편 또는 부위; (c) 서열식별번호: 29에 나타낸 바와 같은 항체 A5의 경쇄; (c) 서열식별번호: 28에 나타낸 바와 같은 항체 A5의 중쇄; (d) 항체 A5의 경쇄 및/또는 중쇄로부터의 하나 이상의 가변 부위(들); (e) 도 1A 및 1B에 나타낸 항체 A5의 하나 이상의 CDR(들)(1, 2, 3, 4, 5 또는 6 개의 CDR); (f) 도 1A에 나타낸 항체 A5의 중쇄로부터의 CDR H3; (g) 도 1B에 나타낸 항체 A5의 경쇄로부터의 CDR L3; (h) 도 1B에 나타낸 항체 A5의 경쇄로부터의 3 개의 CDR; (i) 도 1A에 나타낸 항체 A5의 중쇄로부터의 3 개의 CDR; (j) 도 1A 및 1B에 나타낸 항체 A5의, 경쇄로부터의 3 개의 CDR 및 중쇄로부터의 3 개의 CDR; 및 (k) (b) 내지 (j) 중 임의의 하나를 포함하는 항체. 본 발명은 또한 (a) 내지 (j) 중 임의의 하나 이상의 폴리펩타이드를 제공한다. 일부 실시태양에서, 항체 A5는 하기의 돌연변이들을 함유하는 인간 중쇄 IgG2a 불변 부위[A330P331에서 S330S331(야생형 IgG2a 서열에 대한 아미노산 넘버링)(Eur. J. Immunol.(1999)29:2613-1624 참조)]; 및 인간 경쇄 카파 불변 부위를 또한 포함한다.

항체 A5의 CDR 부분(Chothia 및 Kabat CDR 포함)을 도 1A 및 1B에 도식적으로 나타낸다. CDR 부위의 결정은 당해 분야의 기술 내에 있다. 일부 실시태양에서, CDR은 Kabat 및 Chothia CDR의 조합(또한 "결합된 CDR" 또는 "연장된 CDR"이라 칭한다)일 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 CDR은 Kabat CDR이다. 다른 실시태양에서, 상기 CDR은 Chothia CDR이다.

일부 실시태양에서, 본 발명은 하나 이상, 2 이상, 3 이상, 4 이상, 5 이상의 A5의 CDR과 실질적으로 일치하는(또는 일부 실시태양에서 A5의 또는 A5로부터 유래된 모든 6 개의 CDR과 실질적으로 일치하는) 하나 이상의 CDR을 포함하는 항체를 제공한다. 다른 실시태양은 A5의 또는 A5로부터 유래된 2, 3, 4, 5 또는 6 이상의 CDR과 실질적으로 일치하는 2, 3, 4, 5 또는 6 이상의 CDR(들)을 갖는 항체를 포함한다. 본 발명의 목적을 위해서, 결합 특이성 및/또는 전체 활성(감각 신경병증(예를 들어 큰 섬유 감각 신경병증, 예를 들어 탁솔 유발된 감각 신경병증)의 치료 및/또는 예방, 또는 E12 래트 3차 신경세포의 trkC 의존성 생존율을 활성화시키는 것에 관한 것일 수 있다)이, 활성 정도가 A5에 비해 변할 수 있지만(보다 크거나 보다 작을 수 있다), 일반적으로 유지됨은 물론이다. 일부 실시태양에서, A5의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6 이상의 CDR과 실질적으로 일치하는 하나 이상의 CDR은 A5의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6 이상의 CDR과 약 85% 이상, 약 86% 이상, 약 87% 이상, 약 88% 이상, 약 89% 이상, 약 90% 이상, 약 91% 이상, 약 92% 이상, 약 93% 이상, 약 94% 이상, 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 약 99% 이상 일치한다.

본 발명은 또한 하기 중 임의의 것을 갖는 A5의 아미노산 서열(도 1A 및 1B에 나타냄)을 포함하는 폴리펩타이드(항체일 수도 항체가 아닐 수도 있다)를 제공한다: A5의 서열의 5 이상의 연속적인 아미노산, 8 이상의 연속적인 아미노산, 약 10 이상의 연속적인 아미노산, 약 15 이상의 연속적인 아미노산, 약 20 이상의 연속적인 아미노산, 약 25 이상의 연속적인 아미노산, 약 30 이상의 연속적인 아미노산, 이때 상기 아미노산 중 3 개 이상은 A5의 가변 부위로부터의 것이며, 마우스 단클론 항체 2256의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열로 이루어진 실시태양을 특별히 제외함은 물론이다. 2256 가변 부위(CDR 부위 포함)의 아미노산 서열을 도 2A 및 2B에 나타낸다. 하나의 실시태양에서, 상기 가변 부위는 A5의 경쇄로부터의 것이다. 또 다른 실시태양에서, 상기 가변 부위는 A5의 중쇄로부터의 것이다. 또 다른 실시태양에서, 5 개(또는 그 이상)의 연속적인 아미노산들은 도 1A 및 1B에 나타낸 A5의 상보성 결정 영역(CDR)으로부터의 것이다.

또 다른 실시태양에서, 본 발명은 하기 중 임의의 것을 갖는 A5의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 제공한다: A5의 서열의 5 이상의 연속적인 아미노산, 8 이상의 연속적인 아미노산, 약 10 이상의 연속적인 아미노산, 약 15 이상의 연속적인 아미노산, 약 20 이상의 연속적인 아미노산, 약 25 이상의 연속적인 아미노산, 약 30 이상의 연속적인 아미노산, 이때 상기 A5 서열은 하기 중 임의의 하나 이상을 포함한다: CDR H1의 아미노산 잔기 R33 및/또는 I34; CDR H2의 A56; CDR H3의 T105 및/또는 R106; CDR L1의 I29, L37 및/또는 A38; CDR L2의 R58; 및/또는 CDR L3의 T97.

trkC(예를 들어 htrkC)에 대한 항-trkC 항체의 결합 친화성은 약 0.10 내지 약 0.80 nM, 약 0.15 내지 약 0.75 nM 및 약 0.18 내지 약 0.72 nM일 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 결합 친화성은 약 2 pM, 약 5 pM, 약 10 pM, 약 15 pM, 약 20 pM, 약 40 pM, 또는 약 40 pM 초과이다. 일부 실시태양에서, 상기 결합 친화성은 약 2 pM 내지 약 22 pM이다. 다른 실시태양에서, 상기 결합 친화성은 약 약 10 nM, 약 5 nM, 약 1 nM, 약 900 pM, 약 800 pM, 약 700 pM, 약 600 pM, 약 500 pM, 약 400 pM, 약 300 pM, 약 200 pM, 약 150 pM, 약 100 pM, 약 90 pM, 약 80 pM, 약 70 pM, 약 60 pM, 약 50 pM, 약 40 pM, 약 30 pM, 약 10 pM 미만이다. 일부 실시태양에서, 상기 결합 친화성은 약 10 nM이다. 다른 실시태양에서, 상기 결합 친화성은 약 10 nM 미만이다. 다른 실시태양에서, 상기 결합 친화성은 약 0.1 nM 또는 약 0.07 nM이다. 다른 실시태양에서, 상기 결합 친화성은 약 0.1 nM 미만 또는 약 0.07 nM 미만이다. 다른 실시태양에서, 상기 결합 친화성은 약 10 nM, 약 5 nM, 약 1 nM, 약 900 pM, 약 800 pM, 약 700 pM, 약 600 pM, 약 500 pM, 약 400 pM, 약 300 pM, 약 200 pM, 약 150 pM, 약 100 pM, 약 90 pM, 약 80 pM, 약 70 pM, 약 60 pM, 약 50 pM, 약 40 pM, 약 30 pM, 약 10 pM 중 하나 내지 약 2 pM, 약 5 pM, 약 10 pM, 약 15 pM, 약 20 pM, 및 약 40 pM 중 하나이다. 일부 실시태양에서, 상기 결합 친화성은 약 10 nM, 약 5 nM, 약 1 nM, 약 900 pM, 약 800 pM, 약 700 pM, 약 600 pM, 약 500 pM, 약 400 pM, 약 300 pM, 약 200 pM, 약 150 pM, 약 100 pM, 약 90 pM, 약 80 pM, 약 70 pM, 약 60 pM, 약 50 pM, 약 40 pM, 약 30 pM, 약 10 pM 중 하나이다. 더욱 다른 실시태양에서, 상기 결합 친화성은 약 2 pM, 약 5 pM, 약 10 pM, 약 15 pM, 약 20 pM, 약 40 pM, 또는 약 40 pM 초과이다.

trkC에 대한 항체의 결합 친화성을 당해 분야에 널리 공지된 방법을 사용하여 측정할 수 있다. trkC에 대한 항체의 결합 친화성의 한 가지 측정 방법은 실시예에 개시된 바와 같이, 상기 항체의 일작용성 Fab 단편의 친화성을 측정함에 의한 것이다. 일작용성 Fab 단편을 수득하기 위해서, 항체(예를 들어 IgG)를 파파인으로 절단시키거나 또는 재조합적으로 발현시킬 수 있다. 항체의 항-trkC Fab 단편의 친화성을 실시예에 개시된 바와 같이, 표면 플라스몬 공명(BIAcore 3000^TM 표면 플라스몬 공명(SPR) 시스템, BIAcore, INC, Piscaway JN)에 의해 측정할 수 있다. 상기 프로토콜은 임의의 종의 trkC, 예를 들어 인간 trkC, 또 다른 척추동물(일부 실시태양에서 포유동물)의 trkC(예를 들어 마우스 trkC, 래트 trkC 또는 영장류 trkC)에 대한 항체의 결합 친화성을 측정하는데 사용하기에 적합하다.

본 발명의 다른 폴리펩타이드 및 항체 실시태양을 본 발명의 요약에 포함시켜 본 발명에 제공한다. 본 발명의 폴리펩타이드를 또한 합성 중간체로서 사용할 수 있다.

본 발명은 또한 상기 항체 또는 폴리펩타이드들 중 임의의 것의 제조 방법을 제공한다. 본 발명의 항체를 당해 분야에 공지된 과정에 의해 제조할 수 있다. 상기 폴리펩타이드를 항체의 단백질 분해 또는 다른 분해에 의해, 상술한 바와 같은 재조합 방법(즉 단일 또는 융합 폴리펩타이드)에 의해, 또는 화학 합성에 의해 제조할 수 있다. 상기 항체의 폴리펩타이드, 특히 약 50 아미노산 이하의 보다 짧은 폴리펩타이드를 편의상 화학 합성에 의해 제조한다. 화학 합성 방법은 당해 분야에 공지되어 있으며 상업적으로 입수할 수 있다. 예를 들어 A5 항체를 고상 방법을 사용하는 자동화된 폴리펩타이드 합성기에 의해 제조할 수 있다. 또한 미국 특허 제 5,807,715; 4,816,567; 및 6,331,415 호를 참조하시오.

또 다른 방법에서, 상기 항체를 당해 분야에 널리 공지된 과정을 사용하여 재조합적으로 제조할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 항체 A5의 가변 및 경쇄 부위를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드(서열식별번호: 10 및 12)를 발현 또는 전파를 위해 벡터 내로 클로닝한다. 또 다른 실시태양에서, 서열식별번호: 11 및 13에 나타낸 폴리뉴클레오타이드 서열을 발현 또는 전파를 위해 하나 이상의 벡터 내로 클로닝한다. 관심 항체를 암호화하는 서열을 숙주 세포 중의 벡터에서 유지시키고 이어서 상기 숙주 세포를 확장시키고 차후의 사용을 위해 동결시킬 수 있다. 벡터(발현 벡터 포함) 및 숙주 세포를 본 발명에서 추가로 개시한다.

본 발명은 인간화된 항체를 포함하며, 이는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 특이적인 키메릭 면역글로불린, 면역글로불린 쇄 또는 이들의 단편(예를 들어 Fv, Fab, Fab', F(ab')₂, 또는 항체의 다른 항원 결합 서열)인 비-인간(예를 들어 쥐) 항체를 지칭한다. 대체로, 인간화된 항체는 수용자의 상보성 결정 부위(CDR)로부터의 잔기를 비-인간 종(공여자 항체), 예를 들어 목적하는 특이성, 친화성 및 능력을 갖는 마우스, 래트 또는 토끼의 CDR로부터의 잔기로 대체한 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다. 일부의 경우, 인간 면역글로불린의 Fv 기본 틀 부위(FR) 잔기를 상응하는 비-인간 잔기로 대체시킨다. 더욱 또한, 상기 인간화된 항체는, 수용자 항체나 함입된 CDR 또는 기본 틀 서열 중 어느 것에서도 발견되지 않지만 항체 성능을 추가로 개량하고 최적화하기 위해서 포함되는 잔기들을 포함할 수 있다. 일반적으로, 상기 인간화된 항체는 상기 CDR 부위의 전부 또는 거의 전부가 비-인간 면역글로불린의 부위에 상응하고 상기 FR 부위의 전부 또는 거의 전부가 인간 면역글로불린 일치 서열의 부위인 하나 이상, 전형적으로는 2 개의 가변 영역의 거의 전부를 포함할 것이다. 상기 인간화된 항체는 최적으로는 면역글로불린 불변 부위 또는 영역(Fc), 전형적으로는 인간 면역글로불린의 적어도 일부를 또한 포함할 것이다. WO 99/58572에 개시된 바와 같이 변경된 Fc 부위를 갖는 항체가 바람직하다. 인간화된 항체의 다른 형태들은 원래의 항체에 대해 변경된 하나 이상(1, 2, 3, 4, 5, 6)의 CDR을 가지며, 이들을 또한 원래의 항체로부터의 하나 이상의 CDR"로부터 유래된" 하나 이상의 CDR이라 칭한다.

본 발명은 또한 본 발명의 항체, 예를 들어 A5의 단쇄 가변 부위 단편("scFv")을 포함한다. 단쇄 가변 부위 단편을 짧은 결합 펩타이드를 사용하여 경쇄 및/또는 중쇄 가변 부위를 결합시킴으로써 제조한다(Bird et al.(1988) Science 242:423-426). 결합 펩타이드의 예는 (GGGGS)₃(서열식별번호: 3)이며, 이는 하나의 가변 부위의 카복시 말단과 다른 가변 부위의 아미노 말단 사이의 약 3.5 ㎚를 가교한다. 다른 서열의 링커들이 디자인되고 사용되었다(Bird et al.(1988)). 차례로 링커를 추가적인 작용, 예를 들어 약물의 결합 또는 고체 지지체에의 결합을 위해 변경시킬 수 있다. 상기 단쇄 변체를 재조합적으로 또는 합성에 의해 제조할 수 있다. scFv의 합성 제조를 위해서, 자동화된 합성기를 사용할 수 있다. scFv의 재조합 제조를 위해서는, 상기 scFv를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 적합한 플라스미드를 진핵세포, 예를 들어 효모, 식물, 해충 또는 포유동물 세포, 또는 원핵 세포, 예를 들어 이 콜라이의 적합한 숙주 세포 내로 도입시킬 수 있다. 관심 scFv를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 폴리뉴클레오타이드의 연결(ligation)과 같은 통상적인 조작에 의해 제조할 수 있다. 생성된 scFv를 당해 분야에 공지된 표준 단백질 정제 기법을 사용하여 단리시킬 수 있다.

다른 형태의 단쇄 항체, 예를 들어 다이아바디(diabody)가 또한 포함된다. 다이아바디는 VH 및 VL 영역이 단일 폴리펩타이드 쇄 상에서 발현되지만 동일한 쇄 상의 2 개 영역 간에 짝을 이루게 하기에는 너무 짧은 링커를 사용함으로써 상기 영역들이 또 다른 쇄의 상보성 영역과 강제로 짝을 이루게 하여 2 개의 항원 결합 부위를 생성시키는 2 가의 이중 특이 항체이다(예를 들어 문헌[Holliger, P., et al.(1993) Proc. Natl. Acad Sci. USA 90:6444-6448; Poljak, R.J. et al.(1994) Structure 2:1121-1123]을 참조하시오).

예를 들어, 2 개 이상의 상이한 항원에 대해 결합 특이성을 갖는 단클론 항체인 이중 특이 항체를 본 발명에 개시된 항체를 사용하여 제조할 수 있다. 이중 특이 항체의 제조 방법은 당해 분야에 공지되어 있다(예를 들어 문헌[Suresh et al., 1986, Methods in Enzymology 121:210]을 참조하시오). 전통적으로, 이중 특이 항체의 재조합 제조는 2 개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 동시 발현을 기본으로 하며, 이때 상기 2 개의 중쇄는 상이한 특이성을 갖는다(Millstein and Cuello, 1983, Nature 305, 537-539).

이중 특이 항체의 제조를 위한 하나의 접근법에 따라, 목적하는 결합 특이성을 갖는 항체 가변 영역(항체-항원 결합 부위)을 면역글로불린 불변 영역 서열에 융합시킨다. 상기 융합은 바람직하게는 CH2 및 CH3 경첩 부위의 적어도 일부를 포함하는 면역글로불린 중쇄 불변 영역과의 융합이다. 상기 융합들 중 하나 이상에, 경쇄 결합에 필요한 부위를 함유하는 제 1 중쇄 불변 부위(CH1)가 존재하는 것이 바람직하다. 상기 면역글로불린 중쇄 융합 및 경우에 따라 상기 면역글로불린 경쇄를 암호화하는 DNA를 별도의 발현 벡터에 삽입하고, 적합한 숙주 유기체에 동시 형질감염시킨다. 이는 상기 구성에 사용되는 동등하지 않은 비의 3 개의 폴리펩타이드 쇄가 최적의 수율을 제공하는 경우의 실시태양에서 상기 3 개의 폴리펩타이드 단편들의 상호 비율을 조절함에 있어서 큰 융통성을 제공한다. 그러나, 동등한 비의 2 개 이상의 폴리펩타이드 쇄의 발현이 높은 수율을 생성시키거나 또는 상기 비가 특별히 중요하지 않은 경우 하나의 발현 벡터 중에 2 또는 3 개의 폴리펩타이드 쇄 전부에 대한 암호화 서열을 삽입하는 것도 가능하다.

하나의 접근법에서, 상기 이중 특이 항체는 하나의 가지에 제 1 결합 특이성을 갖는 하이브리드 면역글로불린 중쇄 및 다른 가지에 하이브리드 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍(제 2 결합 특이성을 제공한다)으로 구성된다. 이중 특이 분자 중의 단지 한쪽 절반에만 면역글로불린 경쇄를 갖는 이러한 비대칭 구조는 불필요한 면역글로불린 쇄 조합으로부터 목적하는 이중 특이 화합물의 분리를 용이하게 한다. 이러한 접근법은 1994년 3월 3일자로 공개된 PCT 공보 WO 94/04690에 개시되어 있다.

2 개의 공유 결합된 항체를 포함하는 이종접합체가 또한 본 발명의 범위 내에 있다. 상기와 같은 항체를, 면역계 세포를 불필요한 세포에 표적화하고(미국 특허 제 4,676,980 호) HIV 감염의 치료(PCT 출원 공보 WO 91/00360 및 WO 92/200373; 및 EP 03089)에 사용하였다. 이종접합체 항체를 임의의 편리한 교차 결합 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 적합한 교차 결합제 및 기법들이 당해 분야에 널리 공지되어 있으며, 미국 특허 제 4,676,980 호에 개시되어 있다.

키메릭 또는 하이브리드 항체를 또한 합성 단백질 화학의 공지된 방법, 예를 들어 가교결합제를 포함하는 방법을 사용하여 생체 외에서 제조할 수 있다. 예를 들어, 면역독소를 다이설파이드 교환 반응을 사용하거나 티오에테르 결합의 형성에 의해 제조할 수 있다. 상기 목적에 적합한 시약의 예로는 이미노티올레이트 및 메틸-4-머캅토부티르이미데이트가 있다.

항체 A5의 하나 이상의 CDR 또는 항체 A5로부터 유래된 하나 이상의 CDR을 포함하는 인간화된 항체를 당해 분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 예를 들어, 4 개의 일반적인 단계를 사용하여 단클론 항체를 인간화할 수 있다. 이러한 단계는 하기와 같다: (1) 출발 항체 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 및 예견된 아미노산 서열의 측정 (2) 인간화된 항체의 구상, 즉 인간화 과정 동안 사용하기 위한 항체 기본 틀 부위 결정 (3) 실제 인간화 방법/기법 및 (4) 인간화된 항체의 형질감염 및 발현. 예를 들어 미국 특허 제 4,816,567; 5,807,715; 5,866,692; 6,331,415; 5,530,101; 5,693,761; 5,693,762; 5,585,089; 6,180,370; 5,225,539; 6,548,640 호를 참조하시오.

재조합 인간화된 항체에서, Fc 부분을 Fcγ 수용체 및 보체 면역 시스템과의 상호작용을 피하기 위해 변경시킬 수 있다. 이러한 유형의 변경은 마이크 클라크 박사(Dr. Mike Clark, the Department of Pathology, Cambridge University)에 의해 구상되었으며 상기와 같은 항체의 제조 기법은 1999년 11월 18일자로 공개된 PCT 공보 WO 99/58572에 개시되어 있다.

예를 들어, 상기 불변 부위를 상기 항체를 임상 시험 및 인간의 치료에 사용하는 경우 면역 반응을 피하도록 인간 불변 부위를 보다 더 닮게 처리할 수 있다. 예를 들어 미국 특허 제 5,997,867 호 및 5,866,692 호를 참조하시오.

본 발명은 본 발명에 개시된 항체(예를 들어 항체 A5) 또는 폴리펩타이드에 대한 변경, 예를 들어 그들의 성질에 현저하게 영항을 미치지 않는 작용상 동등한 항체 및 향상되거나 감소된 활성을 갖는 변체를 포함한다. 폴리펩타이드의 변경은 당해 분야에 통상적인 실시이며 본 발명에 상세히 개시할 필요는 없다. 변경된 폴리펩타이드의 예로는 아미노산 잔기의 보존 치환, 작용 활성을 현저히 해롭게 변화시키지 않는 아미노산의 하나 이상의 결실 또는 첨가, 또는 화학적 동족체가 사용된 폴리펩타이드가 있다.

아미노산 서열 삽입 또는 첨가는 길이가 하나의 잔기에서 수백 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩타이드 범위의 아미노- 및/또는 카복실-말단 융합뿐만 아니라 단일 또는 다수 아미노산 잔기의 서열 내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예로는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체 또는 에피토프 태그에 융합된 항체가 있다. 상기 항체 분자의 다른 삽입 변체는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 효소 또는 폴리펩타이드의 항체의 N- 또는 C-말단에의 융합을 포함한다.

치환 변체는 항체 분자 중에 하나 이상의 아미노산 잔기가 제거되고 대신에 상이한 잔기가 삽입된 것이다. 치환 돌연변이에 대해 가장 큰 관심 부위는 고변이 부위를 포함하지만, FR 변경도 또한 고려된다. 보존 치환을 표 1의 "보존 치환" 표제 하에 나타낸다. 상기와 같은 치환이 생물 활성을 변화시키는 경우, 표 1의 "예시적인 치환"으로 나타내거나, 또는 하기 아미노산 부류와 관련하여 추가로 개시한 바와 같은 보다 상당한 변화를 도입시킬 수 있으며 생성물을 선별할 수 있다.

상기 항체의 생물학적 성질의 실질적인 변경을 (a) 예를 들어 시트 또는 나선 형태로서 상기 치환 영역에 폴리펩타이드 주쇄의 구조, (b) 표적 부위에 상기 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 측쇄의 부피를 유지시키는 것에 대해 그 효과가 현저하게 상이한 치환들을 선택함으로써 수행한다. 천연 잔기를 공통의 측쇄 성질을 근거로 여러 그룹으로 나눈다:

(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;

(2) 중간 친수성: Cys, Ser, Thr;

(3) 산성: Asp, Glu;

(4) 염기성: Asn, Gln, His, Lys, Arg;

(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro; 및

(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.

비 보존 치환은 상기 부류들 중 하나의 구성원을 또 다른 부류와 교환함으로써 수행한다.

상기 항체의 적합한 형태를 유지하는 것에 관련되지 않은 임의의 시스테인 잔기를 또한 일반적으로는 세린으로 치환시켜 상기 분자의 산화 안정성을 개선시키고 이상 가교결합을 방지할 수 있다. 환언하면, 시스테인 결합(들)을 상기 항체에 가하여, 특히 상기 항체가 Fv 단편과 같은 항체 단편인 경우 그의 안정성을 개선시킬 수 있다.

아미노산 변경은 하나 이상의 아미노산 변화 또는 변경에서부터 상기 가변 부위와 같은 부위의 재구상을 완료하는 것까지의 범위일 수 있다. 상기 가변 부위의 변화는 결합 친화성 및/또는 특이성을 변경시킬 수 있다. 일부 실시태양에서, 1 내지 5의 보존 아미노산 치환을 CDR 영역 내에서 수행한다. 다른 실시태양에서, 1 내지 3의 보존 아미노산 치환을 CDR3 영역 내에서 수행한다. 더욱 다른 실시태양에서, 상기 CDR 영역은 CDRH3 및/또는 CDR L3이다.

변경은 또한 글리코실화 및 비글리코실화된 폴리펩타이드뿐만 아니라 다른 번역 후 변경, 예를 들어 상이한 당에 의한 글리코실화, 아세틸화 및 인산화를 갖는 폴리펩타이드를 포함한다. 항체를 그의 불변 부위의 보존된 위치에서 글리코실화한다(Jefferis and Lund, 1997, Chem. Immunol. 65:111-128; Wright and Morrison, 1997, TibTECH 15:26-32). 상기 면역글로불린의 올리고사카라이드 측쇄는 단백질의 기능(Boyd et al., 1996, Mol. Immunol. 32:1311-1318; Wittwe and Howard, 1990, Biochem. 29:4175-4180) 및 당단백질의 부분들 간의 분자 내 상호작용(상기 당단백질의 형태 및 제공된 3 차원 표면에 영향을 미칠 수 있다)(상기 Hefferis and Lund; Wyss and Wagner, 1996, Current Opin. Biotech. 7:409-416)에 영향을 미친다. 올리고사카라이드는 또한 소정의 당단백질을 특정 인식 구조를 기본으로 하는 몇몇 분자로 표적화하는 작용을 할 수 있다. 항체의 글리코실화는 또한 항체 의존성 세포 세포독성(ADCC)에 영향을 미치는 것으로 보고되었다. 특히, 양분된 GlcNac의 형성을 촉진하는 글리코실트랜스퍼라제인 β(1,4)-N-아세틸글루코스아미닐트랜스퍼라제 III(GnTIII)의 테트라사이클린-조절된 발현을 갖는 CHO 세포는 개선된 ADCC 활성을 갖는 것으로 보고되었다(Umana et al., 1999, Nature Biotech. 17:176-180).

항체의 글리코실화는 전형적으로는 N-결합되거나 O-결합된다. N-결합되는 것은 아스파라진 잔기의 측쇄에의 탄수화물 잔기의 부착을 지칭한다. 트라이펩타이드 서열 아스파라진-X-세린, 아스파라진-X-쓰레오닌, 및 아스파라진-X-시스테인(이때 X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이다)이 아스파라진 측쇄에 대한 탄수화물 잔기의 효소 부착 인식 서열이다. 따라서, 폴리펩타이드 중의 이들 트라이펩타이드 서열들 중 어느 하나의 존재는 잠재적인 글리코실화 부위를 생성시킨다. O-결합된 글리코실화는 5-하이드록시프롤린 또는 5-하이드록시리신도 또한 사용할 수 있지만, 당 N-아세틸갈락토스아민, 갈락토스 및 자일로스 중 하나의 하이드록시아미노산, 가장 흔히는 세린 또는 쓰레오닌에의 부착을 지칭한다.

상기 항체에의 글리코실화 부위의 첨가를 편의상 상기가 상술한 트라이펩타이드 서열들 중 하나 이상(N-결합된 글리코실화 부위에 대한)을 함유하도록 상기 아미노산 서열을 변경시킴으로서 수행한다. 상기 변경을 또한 원래 항체의 서열에의 하나 이상의 세린 또는 쓰레오닌 잔기의 첨가 또는 치환(O-결합된 글리코실화 부위에 대한)에 의해 수행할 수 있다.

항체의 글리코실화 패턴을 또한 근원적인 뉴클레오타이드 서열의 변경 없이 변경시킬 수 있다. 글리코실화는 주로 상기 항체의 발현에 사용되는 숙주 세포에 따라 변한다. 잠재적인 치료제로서, 재조합 당단백질, 예를 들어 항체의 발현에 사용되는 세포 유형은 고유 세포가 거의 드물기 때문에, 상기 항체의 글리코실화 패턴의 변화를 예상할 수 있다(문헌[Hse et al., 1997, J. Biol. Chem. 272:9062-9070]을 참조하시오).

숙주 세포의 선택 이외에, 항체의 재조합 생산 도중 글리코실화에 영향을 미치는 인자로는 생육 방식, 배지 제형, 배양 밀도, 산소화, pH, 정제 도식 등이 있다. 올리고사카라이드 생산에 관여하는 몇몇 효소의 도입 또는 과발현을 포함한 특정 숙주 유기체에서 성취되는 글리코실화 패턴을 변경시키는 다양한 방법들이 제안되었다(미국 특허 제 5,047,335; 5,510,261; 및 5,278,299 호). 글리코실화, 또는 몇몇 유형의 글리코실화를 예를 들어 엔도글리코시다제 H(Endo H)를 사용하여 당단백질로부터 효소에 의해 제거할 수 있다. 또한, 상기 재조합 숙주 세포를 몇몇 유형의 폴리사카라이드의 가공에 결함이 있도록 유전적으로 처리할 수 있다. 상기 및 유사한 기법들이 당해 분야에 널리 공지되어 있다.

다른 변경 방법에는 당해 분야에 공지된 커플링 기법의 사용, 예를 들어 비 제한적으로 효소 수단, 산화적 치환 및 킬레이트화가 있다. 변경을 예를 들어 면역분석을 위한 표지 부착에 사용할 수 있다. 변경된 폴리펩타이드(예를 들어 A5)를 당해 분야에 확립된 과정을 사용하여 제조하고 당해 분야에 공지된 표준 분석을 사용하여 선별할 수 있으며, 이들 중 일부는 하기 및 실시예에 개시되어 있다.

다른 항체 변경은 1999년 11월 18일자로 공개된 PCT 공보 WO 99/58572에 개시된 바와 같이 변경된 항체를 포함한다. 상기 항체는 표적 분자에 지향된 결합 영역 이외에, 인간 면역글로불린 중쇄의 불변 영역의 전부 또는 일부와 거의 일치하는 아미노산 서열을 갖는 효과기 영역을 포함한다. 상기 항체는 현저한 보체 의존성 용해 또는 표적의 세포 매개된 파괴를 촉발시키지 않고 상기 표적 분자와 결합할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 효과기 영역은 FcRn 및/또는 FcγRIIb와 특이적으로 결합할 수 있다. 이는 전형적으로는 2 개 이상의 인간 면역글로불린 중쇄 C_H2 영역으로부터 유래된 키메릭 영역을 기본으로 한다. 이러한 방식으로 변경된 항체는 염증 및 통상적인 항체 요법에 대한 다른 불리한 반응들을 피하기 위해 만성 항체 요법에 사용하기에 특히 적합하다.

본 발명은 친화성 성숙 실시태양을 포함한다. 예를 들어, 친화성 성숙 항체를 당해 분야에 공지된 과정에 의해 제조할 수 있다(Marks et al., 1992, Bio/Technology, 10:779-783; Barbas et al., 1994, Proc Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813; Schier et al., 1995, Gene, 169:147-155; Yelton et al., 1995, J. Immunol., 155:1994-2004; Jackson et al., 1995, J. Immunol., 154(7):3310-9; Hawkins et al., 1992, J. Mol. Biol., 226:889-896; 및 WO2004/058184).

하기의 방법들을 항체의 친화성을 조절하고 CDR을 특성화하는데 사용할 수 있다. 항체의 CDR 특성화 및/또는 폴리펩타이드, 예를 들어 항체의 결합 친화성을 변경(예를 들어 개선)시키는 하나의 방식을 "라이브러리 스캐닝 돌연변이"라 칭한다. 일반적으로, 라이브러리 스캐닝 돌연변이는 하기와 같이 작용한다. CDR에서의 하나 이상의 아미노산 위치를 기술 인정된 방법을 사용하여 2 개 이상(예를 들어 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 아미노산으로 대체시킨다. 이는 작은 클론 라이브러리(일부 실시태양에서, 분석되는 모든 아미노산 위치에 대한 것)를 발생시키며, 이들은 각각 둘 이상의 구성원(둘 이상의 아미노산이 매 위치에서 치환되는 경우)의 복잡성을 갖는다. 일반적으로, 상기 라이브러리는 또한 고유(치환되지 않은) 아미노산을 포함하는 클론을 포함한다. 각 라이브러리로부터의 소수의 클론, 예를 들어 약 20 내지 80 개의 클론(라이브러리의 복잡성에 따라)을 표적 폴리펩타이드(또는 다른 결합 표적)에 대한 결합 친화성을 선별하고, 결합이 증가되거나, 동일하거나, 감소되거나 또는 없는 후보를 확인한다. 결합 친화성의 측정 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 결합 친화성을 BIAcore 표면 플라스몬 공명 분석을 사용하여 측정할 수 있으며, 상기 분석은 결합 친화성에 있어서 약 2 배 이상의 차이를 검출한다. 출발 항체가 이미 비교적 높은 친화성, 예를 들어 약 10 nM 이하의 K_D로 결합한 경우, BIAcore가 특히 유용하다. BIAcore 표면 플라스몬 공명을 사용하는 선별은 본 발명의 실시예에 개시되어 있다.

결합 친화성을 키넥사 바이오센서(Kinexa Biocensor), 섬광 근접 분석, ELISA, ORIGEN 면역분석(IGEN), 형광 소거, 형광 전달, 및/또는 효모 표시를 사용하여 측정할 수 있다. 결합 친화성을 또한 적합한 생물분석을 사용하여 선별할 수 있다.

일부 실시태양에서, CDR 중의 모든 아미노산 위치를 기술 인정된 돌연변이 방법(이중 일부는 본 발명에 개시되어 있다)을 사용하여 모든 20 개 천연 아미노산으로 대체시킨다(일부 실시태양에서, 한 번에 하나). 이는 작은 클론 라이브러리(일부 실시태양에서, 분석되는 모든 아미노산 위치에 대해 하나)를 발생시키며, 이들은 각각 20 개 구성원(모든 20 개 아미노산이 모든 위치에서 치환되는 경우)의 복잡성을 갖는다.

일부 실시태양에서, 상기 선별되는 라이브러리는 2 개 이상 위치의 치환을 포함하며, 이는 동일한 CDR 또는 2 개 이상의 CDR에 있을 수 있다. 따라서, 상기 라이브러리는 하나의 CDR에서 2 개 이상 위치의 치환을 포함할 수 있다. 상기 라이브러리는 3, 4, 5 또는 그 이상의 위치의 치환을 포함할 수 있으며, 상기 위치는 2, 3, 4, 5 또는 6 개 CDR에서 발견된다. 상기 치환을 낮은 여유 코돈을 사용하여 제조할 수 있다. 예를 들어 문헌[Balint et al., (1993) Gene 137(1):109-18]의 표 2를 참조하시오.

CDR은 CDRH3 및/또는 CDRL3일 수 있다. 상기 CDR은 CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2 및/또는 CDRH3 중 하나 이상일 수 있다. 상기 CDR은 Kabat CDR, Chothia CDR, 또는 연장된 CDR일 수 있다.

개선된 결합을 갖는 후보를 서열화하고, 이에 의해 개선된 친화성을 생성시키는 CDR 치환 변이체(또한 "개선된" 치환이라고도 칭한다)를 동정할 수 있다. 결합하는 후보를 또한 서열화하고, 이에 의해 결합을 유지하는 CDR 치환을 동정할 수 있다. 비 결합제의 서열을 또한 항체가 결합을 폐지하는지를 알기 위해서 서열화할 수 있다.

수 회의 선별 라운드를 수행할 수 있다. 예를 들어, 개선된 결합을 갖는 후보(각각 하나 이상의 CDR의 하나 이상의 위치에 아미노산 치환을 포함한다)는 또한 각각의 개선된 CDR 위치(즉 치환 변이체가 개선된 결합을 보이는 CDR의 아미노산 위치)에서 적어도 원래의 아미노산 및 치환된 아미노산을 함유하는 두 번째 라이브러리의 구상에 유용하다. 상기 라이브러리의 제조, 및 선별 또는 선택을 하기에 추가로 논의한다.

라이브러리 스캐닝 돌연변이는 또한 개선된 결합, 동일한 결합, 감소된 결합 또는 결합이 없는 클론들의 빈도가 항체-항원 복합체의 안정성에 대한 각 아미노산 위치의 중요성과 관련된 정보를 제공하는 한 CDR을 특성화하는 수단을 제공한다. 예를 들어, 상기 CDR의 위치가 모든 20 개 아미노산으로 변할 때 결합을 유지하는 경우, 상기 위치를 항원 결합에 필요하지 않은 듯한 위치로서 식별한다. 환언하면, CDR의 위치가 오직 작은 치환 퍼센트로만 결합을 유지하는 경우, 상기 위치를 CDR 작용에 중요한 위치로서 식별한다. 따라서, 상기 라이브러리 스캐닝 돌연변이 방법은 다수의 상이한 아미노산(모든 20 개 아미노산 포함)으로 변할 수 있는 CDR 중의 위치 및 변할 수 없거나 또는 단지 몇 개의 아미노산으로만 변할 수 있는 CDR 중의 위치에 관한 정보를 발생시킨다.

개선된 친화성을 갖는 후보를 개선된 아미노산, 상기 위치에서의 원래 아미노산을 포함하는 두 번째 라이브러리와 결합시킬 수 있으며, 이는 목적하거나 또는 목적하는 선별 또는 선택 방법을 사용하여 허용되는 상기 라이브러리의 복잡성에 따라, 상기 위치에 추가적인 치환을 또한 포함할 수 있다. 또한, 경우에 따라, 인접한 아미노산 위치를 2 개 이상의 아미노산으로 랜덤화시킬 수 있다. 인접 아미노산의 랜덤화는 돌연변이체 CDR에서 추가적인 형태적 융통성을 허용할 수 있으며, 이는 차례로 다수의 개선된 돌연변이의 도입을 허용하거나 촉진시킬 수 있다. 상기 라이브러리는 또한 첫 번째 선별 라운드에서 개선된 친화성을 보이지 않은 위치에서 치환을 포함할 수 있다.

상기 두 번째 라이브러리는 당해 분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 BIAcore 표면 플라스몬 공명 분석, 및 선택에 대해 당해 분야에 공지된 임의의 방법을 사용하는 선택, 예를 들어 파지 표시, 효모 표시 및 리보솜 표지를 사용하여 개선 및/또는 변경된 결합 친화성을 갖는 라이브러리 구성원들에 대해 선별 또는 선택된다.

본 발명은 또한 본 발명의 항체(예를 들어 A5) 또는 폴리펩타이드로부터의 하나 이상의 단편 또는 부위를 포함하는 융합 단백질을 포함한다. 하나의 실시태양에서, 도 1B에 나타낸 가변 경쇄 부위의 10 개 이상의 연속적인 아미노산 및/또는 도 1A에나타낸 가변 중쇄 부위의 10 개 이상의 아미노산을 포함하는 융합 폴리펩타이드를 제공한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 융합 폴리펩타이드는 도 1A 및 1B에 나타낸 바와 같은, A5의 경쇄 가변 부위 및/또는 중쇄 가변 부위를 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 융합 폴리펩타이드는 A5의 하나 이상의 CDR(들)을 포함한다. 더욱 다른 실시태양에서, 상기 융합 폴리펩타이드는 항체 A5의 CDR H3 및/또는 CDR L3을 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 융합 폴리펩타이드는 하기 중 임의의 하나 이상을 포함한다: CDR H1의 아미노산 잔기 R33 및/또는 I34; CDR H2의 A56; CDR H3의 T105 및/또는 R106; CDR L1의 I29, L37 및/또는 A38; CDR L2의 R58; 및/또는 CDR L3의 T97. 본 발명의 목적을 위해서, A5 융합 단백질은 하나 이상의 A5 항체 및 고유 분자 중에 부착되지 않은 또 다른 아미노산 서열, 예를 들어 또 다른 부위와의 이종 서열 또는 동종 서열을 함유한다. 예시적인 이종 서열은 비 제한적으로 "태그", 예를 들어 FLAG 태그 또는 6His 태그를 포함한다. 태그는 당해 분야에 널리 공지되어 있다.

융합 폴리펩타이드를 당해 분야에 공지된 방법에 의해, 예를 들어 합성적으로 또는 재조합적으로 제조할 수 있다. 전형적으로는, 본 발명의 A5 융합 단백질을 본 발명에 개시된 재조합 방법을 사용하여 상기를 암호화하는 발현 폴리뉴클레오타이드를 제조함으로써 제조할 수 있지만, 상기를 또한 당해 분야에 공지된 다른 수단들, 예를 들어 화학 합성에 의해 제조할 수 있다.

본 발명은 또한 고체 지지체(예를 들어 비오틴 또는 아비딘)에 대한 커플링을 촉진시키는 작용제에 접합된(예를 들어 결합된) 항체(예를 들어 A5) 또는 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 제공한다. 간략히 나타내기 위해서 일반적으로 A5 또는 항체를 참고로 할 것이며, 이들 방법을 본 발명에 개시된 trkC 결합 실시태양들 중 임의의 것에 적용시킴을 물론이다. 접합은 일반적으로는 본 발명에 개시된 바와 같은 상기 성분들을 결합시키는 것을 지칭한다. 상기 결합(일반적으로는 투여를 위해 상기 성분들을 최소한 가장 가까운 회합으로 고정시킨다)을 다수의 방식으로 성취할 수 있다. 예를 들어, 항원과 항체 간의 직접 반응이, 상기가 각각 다른 것과 반응할 수 있는 치환체를 갖는 경우 가능하다. 예를 들어, 하나 상의 친핵성 그룹, 예를 들어 아미노 또는 설프하이드릴 그룹이 카보닐 함유 그룹, 예를 들어 안하이드라이드 또는 산 할라이드와 반응하거나, 또는 다른 하나 상의 양호한 이탈 그룹(예를 들어 할라이드)을 함유하는 알킬 그룹과 반응할 수 있다.

본 발명의 항체 또는 폴리펩타이드를 표지화제(한편으로 "표지"라 칭한다), 예를 들어 형광 분자, 방사성 분자 또는 당해 분야에 공지된 임의의 다른 표지에 결합시킬 수 있다. 일반적으로 신호를 제공하는(직접 또는 간접적으로) 표지는 당해 분야에 공지되어 있다. 따라서, 본 발명은 표지된 항체 및 폴리펩타이드를 포함한다.

본 발명의 항체 및 폴리펩타이드의, 예를 들어 trkC와 결합하는 능력, trkC 생물 활성을 활성화시키는 능력; 및/또는 E12 래트 3차 신경세포의 trkC-유도된 생존율을 향상시키는 능력을 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 검사할 수 있으며, 이들 중 일부는 실시예에 개시되어 있다.

본 발명은 또한 항체 A5를 포함하는 조성물(약학 조성물 포함) 및 키트를 제공하며, 본 설명에서와 같이 본 발명에 개시된 임의의 또는 모든 항체 및/또는 폴리펩타이드를 명확하게 한다.

폴리뉴클레오타이드 , 벡터 및 숙주 세포

본 발명은 또한 본 발명의 항체 및 폴리펩타이드(도 1A 및 1B에 나타낸 경쇄 및 중쇄 가변 부위의 폴리펩타이드 서열을 포함하는 항체 포함)를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터 및 숙주 세포를 제공한다.

따라서, 본 발명은 하기 중 임의의 것을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 폴리뉴클레오타이드(또는 조성물, 약학 조성물 포함)를 제공한다: (a) 항체 A5; (b) 항체 A5의 단편 또는 부위; (c) 도 1B에 나타낸 바와 같은 항체 A5의 경쇄; (d) 도 1A에 나타낸 바와 같은 항체 A5의 중쇄; (e) 항체 A5의 경쇄 및/또는 중쇄로부터의 하나 이상의 가변 부위(들); (f) 도 1A 및 1B에 나타낸 항체 A5의 하나 이상의 CDR(들)(1, 2, 3, 4, 5 또는 6 개의 CDR); (g) 도 1A에 나타낸 항체 A5의 중쇄로부터의 CDR H3; (h) 도 1B에 나타낸 항체 A5의 경쇄로부터의 CDR L3; (i) 도 1B에 나타낸 항체 A5의 경쇄로부터의 3 개의 CDR; (j) 도 1A에 나타낸 항체 A5의 중쇄로부터의 3 개의 CDR; (k) 도 1A 및 1B에 나타낸 항체 A5의, 경쇄로부터의 3 개의 CDR 및 중쇄로부터의 3 개의 CDR; 또는 (l) (b) 내지 (k) 중 임의의 하나를 포함하는 항체. 일부 실시태양에서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 서열식별번호: 10 및 12에 나타낸 폴리뉴클레오타이드(들) 중 어느 하나 또는 둘 모두를 포함한다. 다른 실시태양에서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 서열식별번호: 11 및 13에 나타낸 폴리뉴클레오타이드(들) 중 어느 하나 또는 둘 모두를 포함한다. 다른 실시태양에서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 서열식별번호: 10 및 13에 나타낸 폴리뉴클레오타이드(들) 중 어느 하나 또는 둘 모두를 포함한다. 다른 실시태양에서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 서열식별번호: 11 및 12에 나타낸 폴리뉴클레오타이드(들) 중 어느 하나 또는 둘 모두를 포함한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 ATCC PTA-5682 번의 기탁 번호를 갖는 A5 경쇄를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오타이드이다. 또 다른 태양에서, 본 발명은 ATCC PTA-5683 번의 기탁 번호를 갖는 A5 중쇄를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오타이드이다. 더욱 또 다른 실시태양에서, 본 발명은 (a) 기탁 번호 ATCC PTA-5682 번의 폴리뉴클레오타이드로 암호화된 가변 부위 및 (b) 기탁 번호 ATCC PTA-5683 번의 폴리뉴클레오타이드로 암호화된 가변 부위를 포함하는 단리된 폴리뉴클레오타이드이다. 또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 기탁 번호 ATCC PTA-5682 번의 폴리뉴클레오타이드로 암호화된 하나 이상의 CDR 및 (b) 기탁 번호 ATCC PTA-5683 번의 폴리뉴클레오타이드로 암호화된 하나 이상의 CDR을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오타이드이다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명에 개시된 항체(항체 단편 포함) 또는 폴리펩타이드 중 임의의 것을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 제공한다. 폴리뉴클레오타이드는 당해 분야에 공지된 과정에 의해 제조될 수 있다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명의 폴리뉴클레오타이드들 중 임의의 것을 포함하는 조성물(예를 들어 약학 조성물)을 제공한다. 일부 실시태양에서, 상기 조성물은 본 발명에 개시된 바와 같은 A5 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터를 포함한다. 다른 실시태양에서, 상기 조성물은 본 발명에 개시된 항체 또는 폴리펩타이드들 중 임의의 것을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터를 포함한다. 더욱 다른 실시태양에서, 상기 조성물은 서열식별번호: 10 및 12에 나타낸 폴리뉴클레오타이드(들) 중 어느 하나 또는 둘 모두를 포함한다. 다른 실시태양에서, 상기 조성물은 서열식별번호: 11 및 13에 나타낸 폴리뉴클레오타이드(들) 중 어느 하나 또는 둘 모두를 포함한다. 다른 실시태양에서, 상기 조성물은 서열식별번호: 10 및 13에 나타낸 폴리뉴클레오타이드(들) 중 어느 하나 또는 둘 모두를 포함한다. 다른 실시태양에서, 상기 조성물은 서열식별번호: 11 및 12에 나타낸 폴리뉴클레오타이드(들) 중 어느 하나 또는 둘 모두를 포함한다. 발현 벡터, 및 폴리뉴클레오타이드 조성물의 투여를 본 발명에 추가로 개시한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명에 개시된 폴리뉴클레오타이드들 중 임의의 것의 제조 방법을 제공한다.

임의의 상기와 같은 서열에 상보적인 폴리뉴클레오타이드가 또한 본 발명에 포함된다. 폴리뉴클레오타이드는 단일 가닥(암호화 또는 안티센스) 또는 이중 가닥일 수 있으며, DNA(게놈, cDNA 또는 합성) 또는 RNA 분자일 수 있다. RNA 분자는 HnRNA 분자(인트론을 함유하고 1 대 1 방식으로 DNA 분자에 대응한다), 및 mRNA 분자(인트론을 함유하지 않는다)를 포함한다. 추가적인 암호화 또는 비 암호화 서열이, 필요하지는 않지만, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드 내에 존재할 수 있으며, 폴리뉴클레오타이드를, 필요하지는 않지만, 다른 분자 및/또는 지지체 분자에 결합시킬 수 있다.

폴리뉴클레오타이드는 고유 서열(즉 항체 또는 그의 일부를 암호화하는 내생 서열)을 포함하거나, 또는 상기와 같은 서열의 변형을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오타이드 변형은 암호화된 폴리펩타이드의 면역반응성 또는 효능을 고유 면역반응성 분자에 비해 감소시키지 않도록 하나 이상의 치환, 부가, 결실 및/또는 삽입을 함유한다. 상기 암호화된 폴리펩타이드의 면역반응성에 대한 효과를 일반적으로는 본 발명에 개시된 바와 같이 평가할 수 있다. 변형은 바람직하게는 고유 항체 또는 그의 일부를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 대해 약 70% 이상, 보다 바람직하게는 약 80% 이상, 가장 바람직하게는 약 90% 이상의 일치율을 나타낸다.

2 개의 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 서열을 이들이 하기 개시하는 바와 같이 최대 대응으로 정렬될 때 상기 두 서열 중의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열이 동일한 경우 "동일하다"라고 한다. 2 개 서열 간의 비교를 전형적으로는 서열 유사성을 갖는 국소 부위들을 확인 및 식별하기 위해 상기 서열들을 비교 창에 대해 비교함으로써 수행한다. 본 발명에 사용된 "비교 창"은 약 20 개 이상, 대개는 30 내지 약 75, 40 내지 약 50 개의 연속적인 위치들의 분절을 지칭하며, 여기에서 서열을 상기 2 개의 서열을 최적으로 정렬시킨 후에 동일한 수의 연속적인 위치의 기준 서열과 비교할 수 있다.

비교를 위한 최적의 서열 정렬을 디폴트 변수를 사용하는 생물정보과학 소프트웨어의 레이저진(Lasergene)을 수행하는 메갈린(Megalign) 프로그램을 사용하여 수행할 수 있다(DNASTAR, Inc., Madison, WI). 상기 프로그램은 하기의 참고문헌들에 개시된 다수의 정렬 도해를 포함한다: Dayhoff, M.O.(1978) A model of evolutionary change in proteins-Matrices for detecting distance relationships. In Dayhoff, M.O.(ed.) Atlas of Protein Sequence and Structure, National Biomedical Research Foundation, Washington DC Vol. 5, Suppl. 3, pp. 345-358; Hein J., 1990, Unified Approach to Alignment and Phylogenes pp. 626-645 Methods in Enzymology vol. 183, Academic Press, Inc., San Diego, CA; Higgins, D.G. and Sharp, P.M., 1989, CABIOS 5:151-153; Myers, E.W. and Muller W., 1988, CABIOS 4:11-17; Robinson, E.D., 1971, Comb. Theor. 11:`105; Santou, N., Nes, M., 1987, Mol. Biol. Evol. 4:406-425; Sneath, P.H.A. and Sokal, R.R., 1973, Numerical Taxonomy the Principles and Practice of Numerical Taxonomy, Freeman Press, San Francisco, CA; Wilbur, W.J. and Lipman, D.J., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:726-730.

바람직하게는, "서열 일치율"을 20 개 이상 위치의 비교 창에 대해 2 개의 최적으로 정렬된 서열을 비교함으로써 측정하며, 이때 상기 비교 창에서 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 서열의 일부는 상기 두 서열의 최적 정렬을 위해 기준 서열(첨가 또는 결실을 포함하지 않는다)에 비해, 20% 이하, 대개는 5 내지 15%, 또는 10 내지 12%의 첨가 또는 결실(즉 틈)을 포함할 수 있다. 상기 퍼센트는 동일한 핵산 염기 또는 아미노산 잔기가 상기 두 서열 모두에서 발생하여 일치하는 위치들의 수를 산출하는 위치들의 수를 측정하고, 상기 일치하는 위치의 수를 비교 서열 중의 전체 위치의 수(즉 상기 창 크기)로 나누고 그 결과에 100을 곱하여 서열 일치율을 산출함으로써 계산한다.

변체는 또한 또는 한편으로 고유 유전자 또는 그의 일부 또는 보체와 거의 일치할 수 있다. 상기와 같은 폴리뉴클레오타이드 변체는 보통으로 엄격한 조건 하에서 고유 항체를 암호화하는 천연 DNA 서열(또는 상보적인 서열)과 하이브리드화할 수 있다.

적합한 "보통으로 엄격한 조건"은 5X SSC, 0.5% SDS, 1.0 mM EDTA(pH 8.0) 용액에서의 예비세척; 50 내지 65 ℃, 5X SSC에서 밤새 하이브리드화; 이어서 65 ℃ 또는 42 ℃에서 20 분간 각각 0.1% SDS를 함유하는 2X, 0.5X 및 0.2X SSC로 2 회 세척함을 포함한다.

본 발명에 사용된 "매우 엄격한 조건" 또는 "고도의 엄격성 조건"은 (1) 세척을 위해 낮은 이온 강도 및 고온을 사용하거나, 예를 들어 50 ℃에서 0.015 M 염화 나트륨/0.0015 M 시트르산 나트륨/0.1% 나트륨 도데실 설페이트를 사용하거나; (2) 42 ℃에서, 하이브리드화 동안 변성제, 예를 들어 폼알데하이드, 예를 들어 0.1% 소 혈청 알부민/0.1% 피콜(Ficoll)/0.1% 폴리비닐피롤리돈/750 mM 염화 나트륨, 75 mM 시트르산 나트륨을 갖는 50 mM 인산 나트륨 완충액(pH 6.5)과 함께 50%(v/v) 폼알데하이드를 사용하거나; 또는 (3) 42 ℃에서 50% 폼아미드, 5X SSC(0.75 M NaCl, 0.075 M 시트르산 나트륨), 50 mM 인산 나트륨(pH 6.8), 0.1% 피로인산 나트륨, 5X 덴하르트 용액, 초음파 처리된 연어 정액 DNA(50 ㎍/㎖), 0.1% SDS, 및 10% 덱스트란 설페이트를, 42 ℃에서 0.2X SSC(염화 나트륨/시트르산 나트륨) 및 55 ℃에서 50% 폼아미드 중의 세척에 이어서, 55 ℃ 또는 68 ℃에서 EDTA를 함유하는 0.1X SSC로 이루어진 고도로 엄격한 세척과 함께 사용하는 것들이다. 숙련가는 탐침 길이 등과 같은 인자들을 조정하는데 필요한 상기 온도, 이온 강도 등의 조절 방법을 인식할 것이다.

당해 분야의 숙련가들은 상기 유전자 코드의 변성 결과로서, 본 발명에 개시된 바와 같은 폴리펩타이드를 암호화하는 다수의 뉴클레오타이드 서열이 존재함을 알 것이다. 이러한 폴리뉴클레오타이드들 중 일부는 임의의 고유 유전자의 뉴클레오타이드 서열과 최소의 상동성을 갖는다. 그럼에도 불구하고, 코돈 사용의 차이로 인해 변화하는 폴리뉴클레오타이드는 본 발명에 의해 특별히 고려된다. 또한, 본 발명에 제공된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 유전자의 대립유전자는 본 발명의 범위 내에 있다. 대립유전자는 뉴클레오타이드의 하나 이상의 돌연변이, 예를 들어 결실, 부가 및/또는 치환의 결과로서 변경되는 내생 유전자이다. 생성되는 mRNA 및 단백질은, 필요한 것은 아니지만, 변경된 구조 또는 작용을 가질 수 있다. 대립유전자는 표준 기법(예를 들어 하이브리드화, 증폭 및/또는 데이터베이스 서열 비교)을 사용하여 식별할 수 있다.

본 발명의 폴리뉴클레오타이드를 화학 합성, 재조합 방법 또는 PCR을 사용하여 수득할 수 있다. 화학적인 폴리뉴클레오타이드 합성 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있으며 본 발명에 상세히 개시할 필요는 없다. 당해 분야의 기술 중 하나는 본 발명에 제공된 서열 및 상업적인 DNA 합성기를 사용하여 목적하는 DNA 서열을 제조할 수 있다.

재조합 방법을 사용하여 폴리뉴클레오타이드를 제조하기 위해서, 본 발명에 추가로 논의되는 바와 같이, 목적하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 적합한 벡터 내에 삽입시키고, 차례로 상기 벡터를 복제 및 증폭을 위해 적합한 숙주 세포 내로 도입시킬 수 있다. 폴리뉴클레오타이드를 당해 분야에 공지된 임의의 수단에 의해 숙주 세포 내에 삽입시킬 수 있다. 외래 폴리뉴클레오타이드를 직접적인 흡수, 세포내이입, 형질감염, F-교배 또는 일렉트로포레이션에 의해 도입시킴으로써 세포를 형질전환시킨다. 상기 외래 폴리뉴클레오타이드는 일단 도입되었으면, 통합되지 않은 벡터(예를 들어 플라스미드) 또는 숙주 세포 게놈 내로 통합된 세포 내에서 유지될 수 있다. 상기와 같이 증폭된 폴리뉴클레오타이드를 당해 분야에 널리 공지된 방법들에 의해 상기 숙주 세포로부터 단리시킬 수 있다. 예를 들어 문헌[Sambrook et al.(1989)]을 참조하시오.

한편으로, PCR은 DNA 서열의 재생을 허용한다. PCR 기술은 당해 분야에 널리 공지되어 있으며 미국 특허 제 4,683,195, 4,800,159, 4,754,065 및 4,683,202 호뿐만 아니라 문헌[PCR: The Polymerase Chain Reaction, Mullis et al., eds., Birkauswer Press, Boston(1994)]에 개시되어 있다.

RNA를, 단리된 DNA를 적합한 벡터에 사용하고 상기를 적합한 숙주 세포 내로 삽입시킴으로써 수득할 수 있다. 상기 세포가 복제하고 DNA를 RNA 내로 전사하는 경우, 상기 RNA를 당해 분야의 숙련가들에게 널리 공지된 방법, 예를 들어 문헌[Sambrook et al., (1989)]에 개시된 바와 같은 방법을 사용하여 단리시킬 수 있다.

적합한 클로닝 벡터를 표준 기법에 따라 제작하거나, 또는 당해 분야에서 입수할 수 있는 다수의 클로닝 벡터 중에서 선택할 수 있다. 선택된 클로닝 벡터는 사용하고자 하는 숙주 세포에 따라 변할 수 있지만, 유용한 클로닝 벡터는 일반적으로는 자기 복제 능력을 가질 것이며, 특정한 제한 엔도뉴클레아제에 대해 단일 표적을 갖고/갖거나 상기 벡터를 함유하는 클론을 선택하는데 사용될 수 있는 마커에 대한 유전자를 지닐 수 있다. 적합한 예로는 플라스미드 및 세균 바이러스, 예를 들어 pUC18, pUC19, Bluescript(예를 들어 pBS SK+) 및 그의 유도체들, mp18, mp19, pBR322, pMB9, ColE1, pCR1, RP4, 파지 DNA, 및 셔틀 벡터, 예를 들어 pSA3 및 pAT28이 있다. 상기 및 다수의 다른 클로닝 벡터들을 상업적인 판매상, 예를 들어 바이오래드(BioRad), 스트라타진(Stratagene) 및 인비트로젠(Invitrogen)으로부터 입수할 수 있다.

발현 벡터는 일반적으로는 본 발명에 따른 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 복제성 폴리뉴클레오타이드 구조물이다. 이는 발현 벡터가 숙주 세포에서 에피솜으로서 또는 염색체 DNA의 통합 부분으로서 복제될 수 있어야 함을 의미한다. 적합한 발현 벡터에는 비 제한적으로 플라스미드, 바이러스 벡터, 예를 들어 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스, 레트로바이러스, 코스미드, 및 PCT 공보 WO 87/04462에 개시된 발현 벡터(들)가 포함된다. 벡터 성분들은 일반적으로는 비 제한적으로 하기 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 신호 서열; 복제 기원; 하나 이상의 마커 유전자; 적합한 전사 조절 요소(예를 들어 프로모터, 증강인자 및 종결자). 발현(즉 번역)을 위해서, 하나 이상의 번역 조절 인자, 예를 들어 리보솜 결합 부위, 번역 개시 부위 및 정지 코돈이 또한 대개 필요하다.

관심 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 벡터들을 다수의 적합한 수단, 예를 들어 일렉트로포레이션, 염화 칼슘, 염화 루비듐, 인산 칼슘, DEAE-덱스트란, 또는 다른 물질을 사용하는 형질감염; 미세투사물 충격; 리포펙션; 및 감염(예를 들어 상기 벡터가 우두 바이러스와 같은 감염제인 경우)에 의해 숙주 세포 내로 도입시킬 수 있다. 상기 도입 벡터 또는 폴리뉴클레오타이드의 선택은 종종 상기 숙주 세포의 성질에 따라 변할 것이다.

본 발명은 또한 본 발명에 개시된 폴리뉴클레오타이드 및 폴리펩타이드 중 임의의 것을 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 이종 DNA를 발현(과 발현 포함)할 수 있는 임의의 숙주 세포를 상기 관심 항체, 폴리펩타이드 또는 단백질을 암호화하는 유전자를 단리시키기 위해서 사용할 수 있다. 포유동물 숙주 세포의 비 제한적인 예로는 비 제한적으로 COS, HeLa 및 CHO 세포가 있다. 또한 PCT 공보 WO 87/04462를 참조하시오. 적합한 비 포유동물 숙주 세포는 원핵생물(예를 들어 이 콜라이 또는 비 서브틸리스) 및 효모(예를 들어 에스 세레비지아에, 에스 폼베 또는 케이 락티스)를 포함한다. 바람직하게는, 상기 숙주 세포는 cDNA를 상기 숙주 세포 중의 상응하는 관심 내생 항체 또는 단백질(존재하는 경우)의 수준보다 약 5 배 이상, 보다 바람직하게는 10 배 이상, 훨씬 더 바람직하게는 20 배 이상의 수준으로 발현한다. trkC에 특이적으로 결합하는 폴리펩타이드의 생산에 대한 상기 숙주 세포의 선별을 면역분석 또는 FACS에 의해 수행한다. 관심 항체 또는 단백질을 과 발현하는 세포를 동정할 수 있다.

항체 또는 폴리펩타이드를 사용하는 방법

trkC와 결합하는 항체 A5를 사용하여 trkC 또는 trkC의 단편의 존재 또는 부재를 확인 또는 검출할 수 있다. 간략히 나타내기 위해서, 일반적으로 A5 또는 항체를 참고로 할 것이며, 이들 방법을 본 발명에 개시된 trkC 결합 실시태양들(예를 들어 폴리펩타이드) 중 임의의 것에 적용시킴을 물론이다. 검출은 일반적으로는 생물학적 샘플을 trkC에 결합하는 본 발명에 개시된 항체와 접촉시킴 및 trkC와 trkC에 특이적으로 결합하는 항체(예를 들어 A5) 간의 복합체의 형성을 포함한다. 상기와 같은 복합체의 형성은 생체 외 또는 생체 내에서 있을 수 있다. 본 발명에 사용된 "검출"이라는 용어는 대조군을 참고로 하거나 참고로 하지 않는 정성적 및/또는 정량적 검출(수준 측정)을 포함한다.

다양한 공지된 방법들 중 임의의 방법, 예를 들어 비 제한적으로 예를 들어 효소 결합된 면역흡수 분석(ELISA), 방사능면역분석(RIA) 등에 의한, 폴리펩타이드에 결합하는 항체를 사용하는 면역 분석; 및 암호화된 폴리펩타이드에 대한 작용 분석, 예를 들어 결합 활성 또는 효소 분석을 검출에 사용할 수 있다.

항체의 진단적 용도

본 발명의 항체 및 폴리펩타이드를 변경되거나 이상한 trkC 발현(일부 실시태양에서 증가되거나 감소된 trkC 발현(정상 샘플에 비해) 및/또는 부적합한 발현, 예를 들어 통상적으로 trkC 발현이 결여된 조직(들) 및/또는 세포(들)에서의 발현의 존재, 또는 통상적으로 trkC 발현을 갖는 조직(들) 또는 세포(들)에서의 trkC 발현의 부재)과 관련된 질병, 상태 또는 장애의 검출, 진단 및 모니터링에 사용할 수 있다. 예를 들어, trkC 발현 종양은 당해 분야에 공지되어 있으며, 원시신경외배엽종양(PNET), 유잉 육종, 췌장암 및 속질 갑상선암을 포함한다. 본 발명의 항체 및 폴리펩타이드는 예를 들어 변경되거나 이상한 trkC에 대한 감도 또는 반응성과 관련된 질병에서 trkC 발현의 검출에 더욱 유용하다. 따라서, 일부 실시태양에서, 본 발명은 변경되거나 이상한 trkC 발현을 갖는 것으로 의심이 가는 개인의 시편(샘플)을 본 발명의 항체 또는 폴리펩타이드와 접촉시키고 상기 trkC의 수준이 대조군 또는 비교 시편의 수준과 상이한 지의 여부를 결정함을 포함한다.

다른 실시태양에서, 본 발명은 개인의 시편(샘플)을 접촉시키고 trkC 발현의 수준을 측정함을 포함하는 방법을 제공한다. 일부 실시태양에서, 상기 개인은 trkC 발현에 대한 변경되거나 이상한 감도 또는 반응성을 특징으로 하거나 또는 이와 관련된 질병을 갖는 것으로 의심이 간다.

진단용으로, 상기 항체를 검출 가능한 잔기, 예를 들어 비 제한적으로 방사성 동위원소, 형광 표지 및 다양한 효소 기질 표지로 표지할 수 있다. 항체에 대한 표지의 접합 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 본 발명의 다른 실시태양에서, 본 발명의 항체를 표지할 필요는 없으며, 그의 존재를 본 발명의 항체에 결합하는 표지된 항체를 사용하여 검출할 수 있다.

본 발명의 항체를 임의의 공지된 분석 방법, 예를 들어 경쟁 결합 분석, 직접 및 간접 샌드위치 분석, 및 면역침전 분석에 사용할 수 있다(Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158(CRC Press, Inc. 1987)).

상기 항체를 또한 생체 내 진단 분석, 예를 들어 생체 내 영상화에 사용할 수 있다. 일반적으로는, 상기 항체를 관심 세포 또는 조직을 면역신티오그래피를 사용하여 국소화시킬 수도 있도록 방사성핵종(예를 들어 ¹¹¹In, ⁹⁹Tc, ¹⁴C, ¹³¹I, ¹²⁵I 또는 ³H)으로 표지한다.

상기 항체를 또한 당해 분야에 널리 공지된 기법에 따라 병리학에서 염색 시약으로서 사용할 수 있다.

치료를 위해 항체 또는 폴리펩타이드(예를 들어 A5)를 사용하는 방법

항체 A5는 trkC의 생물 활성을 활성화하는데 유용하다. 상기 작용물질 활성은 감각 신경병증 또는 신경퇴행성 질병과 관련된 병리상태의 치료 또는 손상된 신경세포의 보수에 유용한 것으로 여겨진다. 상기 신경병증은 예를 들어 말초 신경병증, 예를 들어 비 제한적으로 큰 섬유 감각 신경병증일 수 있다. 일부 실시태양에서, 감각 신경병증, 예를 들어 큰 섬유 감각 신경병증, 예를 들어 탁솔 유발된 감각 신경병증, 시스플라틴 유발된 감각 신경병증 또는 피리독신 유발된 신경병증이 있는 개인에게 본 발명에 개시된 A5 또는 다른 항체 또는 폴리펩타이드 치료를 제공한다. 일반적으로는, 상기 실시태양에서, 유효량을 개인에게 투여한다.

간략히 나타내기 위해서, 일반적으로 A5 또는 항체를 참고로 할 것이며, 이들 방법을 본 발명에 개시된 trkC 결합 실시태양들 중 임의의 것에 적용시킴을 물론이다.

A5 또는 A5의 단편(예를 들어 Fab, Fab', F(ab')₂, Fv, Fc 등)의 다양한 제형들, 예를 들어 필요한 특이성의 항원 trkC 인식 부위를 포함하는 A5의 항체 부분 및 임의의 다른 변경된 형태를 포함하는 단쇄(ScFv), 그의 돌연변이, 융합 단백질을 투여에 사용할 수 있다. 일부 실시태양에서, A5 항체 또는 그의 A5의 다양한 제형들을 순수하게 투여할 수 있다. 다른 실시태양에서, A5 또는 그의 A5의 다양한 제형(본 발명에 개시된 임의의 조성물 실시태양 포함) 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 투여하며, 다양한 제형들로 존재할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 부형제는 당해 분야에 공지되어 있으며, 약물학적으로 유효한 물질의 투여를 촉진시키는 비교적 불활성인 물질이다. 예를 들어 부형제는 형태 또는 점조도를 제공하거나 또는 희석제로서 작용할 수 있다. 적합한 부형제로는 비 제한적으로 안정화제, 습윤 및 유화제, 오스몰 농도 변화용 염, 캡슐화제, 완충제 및 피부 침투 증진제가 있다. 부형제뿐만 아니라 비 경구 및 경구 약물 전달용 제형이 문헌[Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing(2000)]에 나타나 있다.

일부 실시태양에서, 이러한 작용제들을 주입(예를 들어 복강 내, 경막 내, 정맥 내, 피하, 근육 내 등)에 의해 투여하기 위해 제형화하지만, 다른 형태의 투여(예를 들어 경구, 점막, 흡입을 통해, 설하 등)도 또한 사용될 수 있다. 따라서, A5 항체 및 그의 등가물을 바람직하게는 약학적으로 허용 가능한 비히클, 예를 들어 염수, 링거 용액, 덱스트로즈 용액 등과 배합시킬 수 있다. 특정 투여 섭생, 즉 용량, 타이밍 및 반복은 특정 개인 및 상기 개인의 의료 병력에 따라 변할 것이다. 일반적으로는 체중 ㎏ 당 약 1 ug 미만, 약 1 ug 이상; 약 2 ug 이상, 약 5 ug 이상, 약 10 ug 이상, 약 20 ug 이상, 약 50 ug 이상, 약 100 ug 이상, 약 200 ug 이상, 약 500 ug 이상, 약 1 ㎎ 이상, 약 2 ㎎ 이상, 약 5 ㎎ 이상, 약 10 ㎎ 이상, 약 30 ㎎ 이상(예를 들어 약 50 ㎎, 약 100 ㎎, 약 200 ㎎, 또는 약 500 ㎎)의 용량을 투여한다. 수일 이상에 걸친 반복적인 투여의 경우, 상태에 따라, 상기 치료를 목적하는 질병 증상의 억제가 발생할 때가지 지속시킨다. 예시적인 투여 섭생은 약 2 ㎎/㎏의 초기 용량의 투여에 이어서 매주 약 1 ㎎/㎏의 항-trkC 항체의 지속적인 용량, 또는 2 주마다 약 1 ㎎/㎏의 지속적인 용량의 투여를 포함한다. 그러나, 다른 투여 섭생도 의료인이 성취하고자 하는 약동학적 붕괴 패턴에 따라 유용할 수 있다. 경험적 고려사항, 예를 들어 반감기가 일반적으로는 상기 용량의 측정에 기여할 것이다. 상기 요법의 진행을 통상적인 기법 및 분석에 의해 쉽게 모니터한다.

일부 개인에서, 1 회 초과의 용량이 필요할 수 있다. 투여 회수를 상기 요법의 과정에 걸쳐 측정 및 조절할 수 있다. 예를 들어, 투여 회수를 치료하려는 증상의 유형 및 중증도, 상기 작용제를 예방용으로 또는 치료용으로 투여하는 지의 여부, 선행 요법, 환자의 임상 병력 및 상기 작용제에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 근거하여 측정 또는 조절할 수 있다. 전형적으로, 임상의는 목적하는 결과를 성취하는 투여량에 도달할 때까지 작용물질 항-TrkC 항체(예를 들어 A5)를 투여할 것이다. 일부의 경우, A5 항체의 연속적인 서방성 제형이 적합할 수 있다. 서방성을 성취하기 위한 다양한 제형 및 장치들은 당해 분야에 공지되어 있다.

하나의 실시태양에서, A5 항체(또는 폴리펩타이드)의 투여량을 1 회 이상의 투여(들)가 제공된 개인에서 경험적으로 측정할 수 있다. 개인에게 증분 투여량의 A5를 제공한다. A5 또는 다른 등가 항체의 효능을 평가하기 위해서, 상기 질병 증상(예를 들어 통증)의 마커를 모니터할 수 있다.

본 발명의 방법에 따른 항체(예를 들어 A5) 또는 폴리펩타이드의 투여는 예를 들어 수용자의 생리학적 조건, 투여의 목적이 치료학적인지 예방학적인 지의 여부, 및 숙련된 의료인에게 공지된 다른 인자들에 따라 연속적이거나 간헐적일 수 있다. 항체의 투여는 소정의 기간에 걸쳐 필수적으로 연속적이거나 또는 일련의 이격된 투여, 예를 들어 증상 발생 전, 도중 또는 후, 증상 발생 전, 도중, 전 및 후, 도중 및 후, 또는 전, 도중 및 후일 수 있다. 투여를 상처, 절개, 외상, 수술 및 증상을 발생시킬 것 같은 임의의 다른 사건(예를 들어 감각 신경병증, 예를 들어 탁솔 유발된 감각 신경병증) 전, 도중 및/또는 후에 수행할 수 있다.

다른 제형에는 당해 분야에 공지된 적합한 전달 형태, 예를 들어 비 제한적으로 리포솜과 같은 담체가 포함된다. 예를 들어 문헌[Mahato et al.(1997) Pharm. Res. 14:853-859]을 참조하시오. 리포솜 제제는 비 제한적으로 사이토펙틴, 다중 라멜라 소낭 및 단일 라멜라 소낭을 포함한다.

일부 실시태양에서, 하나보다 많은 항체 또는 폴리펩타이드가 존재할 수 있다. 상기 항체는 단클론 또는 다클론일 수 있다. 상기와 같은 조성물은 하나 이상, 둘 이상, 셋 이상, 넷 이상, 다섯 이상의 상이한 항체들을 함유할 수 있다. 항체들의 혼합물(당해 분야에서는 이들을 종종 나타냄)이 광범위한 집단 또는 개인의 치료에 특히 유용할 수 있다.

본 발명의 항체 및 폴리펩타이드(예를 들어 항체 A5) 중 임의의 것을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 또한 목적하는 세포에서 본 발명의 항체 및 폴리펩타이드(예를 들어 항체 A5) 중 임의의 것을 전달 및 발현하기 위해 사용할 수 있다. 발현 벡터가 A5 항체 또는 폴리펩타이드의 발현을 지시하는데 사용될 수 있음은 명백하다. 상기 발현 벡터를 당해 분야에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어 복강 내, 정맥 내, 근육 내, 피하, 경막 내, 심실 내, 경구, 장, 비 경구, 비 내, 피부, 설하, 또는 흡입에 의해 투여할 수 있다. 예를 들어 발현 벡터의 투여는 국소 또는 전신 투여, 예를 들어 주사, 경구 투여, 입자 건 또는 카테터를 꽂은 투여, 및 국소 투여를 포함한다. 당해 분야의 숙련가는 생체 내에서 외래 단백질의 발현을 획득하기 위해 발현 벡터를 투여하는 것에 친숙하다. 예를 들어 미국 특허 제 6,436,908; 6,413,942; 및 6,376,471 호를 참조하시오.

본 발명의 항체 및 폴리펩타이드(예를 들어 A5) 중 임의의 것을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 치료 조성물의 표적화된 전달을 또한 사용할 수 있다. 수용체-매개된 DNA 전달 기법이 예를 들어 문헌[Findeis et al., Trends Biotechnol.(1993) 11:202; Chiou et al., Gene Therapeutics: Methods And Application Of Direct Gene Transfer(J.A. Wolff, ed.)(1994); Wu et al., J. Biol. Chem.(1988) 263:621; Wu et al., J. Biol. Chem.(1994) 269:542; Zenke et al., Proc. Natl. Acad. Sci.(USA)(1990)87:3655; Wu et al., J. Biol. Chem.(1991) 266:338]에 개시되어 있다. 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 치료 조성물을 유전자 요법 프로토콜에서 국소 투여의 경우 약 100 ng 내지 약 200 ㎎ 범위의 DNA 를 투여한다. 유전자 요법 프로토콜을 사용하는 동안 또한 약 500 ng 내지 약 50 ㎎, 약 1 ㎍ 내지 약 2 ㎎, 약 5 ㎍ 내지 약 500 ㎍, 약 20 ㎍ 내지 약 100 ㎍ 농도 범위의 DNA를 사용할 수 있다. 본 발명의 치료학적 폴리뉴클레오타이드 및 폴리펩타이드를 유전자 전달 비히클을 사용하여 전달할 수 있다. 상기 유전자 전달 비히클은 바이러스 또는 비 바이러스 기원일 수 있다(일반적으로 문헌[Jolly, Cancer Gene Therapy(1994) 1:51; Kimura, Human Gene Therapy(1994) 5:845; Connelly, Human Gene Therapy(1995) 1:185; 및 Kaplitt, Nature Genetics(1994) 6:148]을 참조하시오). 상기와 같은 암호화 서열의 발현을 내생 포유동물 또는 이종 프로모터를 사용하여 유도할 수 있다. 상기 암호화 서열의 발현은 구성적이거나 조절될 수 있다.

목적하는 세포에서 목적하는 폴리뉴클레오타이드의 전달 및 발현을 위한 바이러스 기재 벡터는 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 예시적인 바이러스 기재 비히클로는 비 제한적으로 재조합 레트로바이러스(예를 들어 PTC 공보 WO 90/07936; WO 94/03622; WO 93/25698; WO 93/25234; WO 93/11230; WO 93/10218; WO 91/02805; 미국 특허 제 5,219,740; 4,777,127 호; 영국 특허 제 2,200,651 호; 및 유럽 특허 제 0 345 242 호 참조), 알파바이러스 기재 벡터(예를 들어 신드비스 바이러스 벡터, 셈리키 포레스트 바이러스(ATCC VR-67; ATCC VR-1247), 로스 리버 바이러스(ATCC VR-373; ATCC VR-1246) 및 베네수엘라 말 뇌염 바이러스(ATCC VR-923; ATCC VR-1250; ATCC VR 1249; ATCC VR-532)), 및 아데노 관련 바이러스(AAV) 벡터(예를 들어 PCT 공보 WO 94/12649, WO 93/03769; WO 93/19191; WO 94/28938; WO 95/11984; 및 WO 95/00655 참조)가 있다. 문헌[Curiel, Hum. Gene Ther. (1992) 3:147]에 개시된 바와 같은 죽은 아데노바이러스에 결합된 DNA의 투여를 또한 사용할 수 있다.

비 바이러스성 전달 비히클 및 방법, 예를 들어 비 제한적으로 죽은 아데노바이러스에만 결합되거나 결합되지 않은 폴리양이온 축합된 DNA(예를 들어 Curiel, Hum, Gene Ther. (1992) 3:147 참조); 리간드-결합된 DNA(예를 들어 Wu, J. Biol. Chem.(1989) 264:16985 참조); 진핵 세포 전달 비히클 세포(예를 들어 미국 특허 제 5,814,482 호; PCT 공보 WO 95/07994; WO 96/17072; WO 95/30763; 및 WO 97/42338 참조) 및 핵 전하 중화 또는 세포막과의 융합을 또한 사용할 수 있다. 맨 DNA를 또한 사용할 수 있다. 예시적인 맨 DNA 도입 방법이 PCT 공보 WO 90/11092 및 미국 특허 제 5,580,859 호에 개시되어 있다. 유전자 전달 비히클로서 작용할 수 있는 리포솜이 미국 특허 제 5,422,120 호; PCT 공보 WO 95/13796; WO 94/23697; WO 91/14445; 및 유럽 특허 제 0 524 968 호에 개시되어 있다. 추가적인 접근법들이 문헌[Philip, Mol. Cell Biol. (1994) 14:2411 및 Woffendin, Proc. Natl. Acad. Sci.(1994) 91:1581]에 개시되어 있다.

본 발명에 개시된 모든 방법들에 대해서, 작용물질 항-trkC 항체(또는 폴리펩타이드)에 대한 언급은 상기 작용제들 중 하나 이상을 포함하는 조성물을 포함한다. 상기 조성물은 당해 분야에 널리 공지된 적합한 부형제, 예를 들어 완충제를 포함한 약학적으로 허용 가능한 부형제를 또한 포함할 수 있다. 본 발명은 단독으로 또는 다른 통상적인 치료 방법과 함께 사용될 수 있다.

작용물질 항-trkC 항체(또는 폴리펩타이드)를 임의의 적합한 경로를 통해 개인에게 투여할 수 있다. 상이한 투여 경로의 예를 본 발명에 개시한다.

작용물질 항- trkC 항체의 투여

작용물질 항-trkC 항체(또는 폴리펩타이드)를 임의의 적합한 경로를 통해 개인에게 투여할 수 있다. 본 발명에 개시된 실시예들은 제한하고자 하는 것이 아니라 이용 가능한 기법들을 예시하고자 하는 것임은 당해 분야의 숙련가에게 자명할 것이다. 간략히 나타내기 위해서, 일반적으로 A5 또는 항체를 참고로 할 것이며, 이들 방법을 본 발명에 개시된 trkC 결합 실시태양들 중 임의의 것에 적용시킴을 물론이다. 따라서, 일부 실시태양에서, 작용물질 항-trkC 항체를 공지된 방법, 예를 들어 정맥 내 투여, 예를 들어 일시 주사 또는 일정 기간에 걸친 연속 주입, 근육 내, 복강 내, 뇌척수 내, 피하, 관절 내, 설하, 활액 내, 취입을 통해, 경막 내, 경구, 흡입 또는 국소 경로에 의해 개인에게 투여한다. 투여는 전신적, 예를 들어 정맥 내 투여이거나 국소적일 수 있다. 액체 제형용의 상업적으로 입수할 수 있는 분무기, 예를 들어 제트 분무기 및 초음파 분무기가 투여에 유용하다. 액체 제형을 직접 분무할 수 있으며 동결건조된 분말을 재조성 후 분무할 수 있다. 한편으로, 작용물질 항-trkC 항체를 플루오로카본 제형 및 계량식 용량 흡입기를 사용하여 분무하거나 또는 동결건조되고 분쇄된 분말로서 흡입시킬 수 있다.

하나의 실시태양에서, 작용물질 항-trkC 항체를 부위 특이적 또는 표적화된 국소 전달 기법을 통해 투여한다. 부위 특이적 또는 표적화된 국소 전달 기법의 예로는 상기 작용물질 항-trkC 항체의 다양한 이식 가능한 데포 소스 또는 국소 전달 카테터, 예를 들어 주입 카테터, 유치 카테터, 또는 바늘 카테터, 합성 이식편, 외막 랩, 문합 및 스텐트 또는 다른 이식성 장치, 부위 특이적 담체, 직접 주사, 또는 직접 적용이 있다. 예를 들어 PCT 공보 WO 00/53211 및 미국 특허 제 5,981,568 호를 참조하시오.

작용물질 항-trkC 항체의 다양한 제형들을 투여에 사용할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 작용물질 항-trkC 항체를 순수하게 투여할 수 있다. 일부 실시태양에서, 작용물질 항-trkC 항체 및 약학적으로 허용 가능한 부형제는 다양한 제형 중에 있을 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 부형제는 당해 분야에 공지되어 있으며 이는 약물학적으로 유효한 물질의 투여를 용이하게 하는 비교적 불활성인 물질이다. 예를 들어, 부형제는 형태 또는 점조도를 제공하거나 희석제로서 작용할 수 있다. 적합한 부형제로는 비 제한적으로, 안정제, 습윤 및 유화제, 오스몰 농도 변화용 염, 캡슐화제, 완충제 및 피부 침투 증진제가 있다. 부형제뿐만 아니라 비 경구 및 경구 약물 전달용 제형이 문헌[Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing, 2000]에 나타나 있다.

일부 실시태양에서, 상기 작용제를 주입(예를 들어 복강 내, 경막 내, 정맥 내, 피하, 근육 내 등)에 의해 투여하기 위해 제형화한다. 따라서, 상기 작용제들을 약학적으로 허용 가능한 비히클, 예를 들어 염수, 링거 용액, 덱스트로즈 용액 등과 배합시킬 수 있다. 특정 투여 섭생, 즉 용량, 타이밍 및 반복은 특정 개인 및 상기 개인의 의료 병력에 따라 변할 것이다.

항-trkC 항체를 임의의 적합한 방법을 사용하여, 예를 들어 주입(예를 들어 복강 내, 경막 내, 정맥 내, 피하, 근육 내 등)에 의해 투여할 수 있다. 항-trkC 항체를 또한 본 발명에 개시된 바와 같이 흡입에 의해 투여할 수 있다. 일반적으로는 체중 ㎏ 당 약 1 ug 미만, 약 1 ug 이상; 약 2 ug 이상, 약 5 ug 이상, 약 10 ug 이상, 약 20 ug 이상, 약 50 ug 이상, 약 100 ug 이상, 약 200 ug 이상, 약 500 ug 이상, 약 1 ㎎ 이상, 약 2 ㎎ 이상, 약 5 ㎎ 이상, 약 10 ㎎ 이상, 약 30 ㎎ 이상(예를 들어 약 50 ㎎, 약 100 ㎎, 약 200 ㎎, 또는 약 500 ㎎)의 용량을 투여한다. 수일 이상에 걸친 반복적인 투여의 경우, 상태에 따라, 상기 치료를 목적하는 질병 증상의 억제가 발생하거나 또는 증상, 예를 들어 신경병증의 감소에 충분한 치료 수준이 달성될 때까지 지속시킨다. 예시적인 투여 섭생은 약 2 ㎎/㎏의 초기 용량의 투여에 이어서 매주 약 1 ㎎/㎏의 항-trkC 항체의 지속적인 용량, 또는 2 주마다 약 1 ㎎/㎏의 지속적인 용량의 투여를 포함한다. 그러나, 다른 투여 섭생도 의료인이 성취하고자 하는 약동학적 붕괴 패턴에 따라 유용할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시태양에서, 1 주일에 1 내지 4 회의 투여가 고려된다. 상기 요법의 진행은 통상적인 기법 및 분석에 의해 쉽게 모니터된다. 투여 섭생(trkC 작용물질(들) 사용 포함)은 시간에 따라 변할 수 있다.

본 발명의 목적을 위해서, 작용물질 항-trkC 항체의 적합한 투여량은 사용되는 작용물질 항-trkC 항체(또는 그의 조성물), 치료하려는 증상의 유형 및 중증도, 상기 작용제를 예방용으로 또는 치료용으로 투여하는 지의 여부, 선행 요법, 환자의 임상 병력 및 상기 작용제에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 따라 변할 것이다. 전형적으로, 임상의는 목적하는 결과를 성취하는 투여량에 도달할 때까지 작용물질 항-TrkC 항체를 투여할 것이다. 용량 및/또는 회수는 시간의 경과에 따라 변할 수 있다.

경험적 고려사항, 예를 들어 반감기가 일반적으로는 상기 용량의 측정에 기여할 것이다. 예를 들어, 인간 면역계와 양립성인 항체, 예를 들어 인간화된 항체 또는 완전 인간 항체를 사용하여 상기 항체의 반감기를 연장시키고 항체가 숙주의 면역계에 의해 공격받는 것을 방지할 수 있다. 투여 회수를 치료 과정에 걸쳐 측정하고 조절할 수 있으며, 이는 일반적으로는, 필요한 것은 아니지만, 증상(예를 들어 신경병증)의 치료 및/또는 억제 및/또는 개선 및/또는 지연을 근거로 한다. 한편으로, 작용물질 항-trkC 항체의 연속적인 서방성 제형이 적합할 수 있다. 서방성을 성취하기 위한 다양한 제형 및 장치들이 당해 분야에 공지되어 있다.

하나의 실시태양에서, 작용물질 항-trkC 항체의 투여량을 1 회 이상의 투여(들)가 제공된 개인에서 경험적으로 측정할 수 있다. 개인에게 증분 투여량의 작용물질 항-trkC 항체를 제공한다. 작용물질 항-trkC 항체의 효능을 평가하기 위해서, 신경병증(예를 들어 탁솔 유발된 감각 신경병증을 포함한 감각 신경병증)의 지표를 추적할 수 있다.

본 발명의 방법에 따른 작용물질 항-trkC 항체의 투여는 예를 들어 수용자의 생리학적 조건, 투여의 목적이 치료학적인지 예방학적인 지의 여부, 및 숙련된 의료인에게 공지된 다른 인자들에 따라 연속적이거나 간헐적일 수 있다. 작용물질 항-trkC 항체의 투여는 소정의 기간에 걸쳐 필수적으로 연속적이거나 또는 일련의 이격된 투여, 예를 들어 감각 신경병증 발생 전, 도중 또는 후; 전; 도중; 전과 후; 도중과 후; 전과 도중; 또는 전, 도중 및 후일 수 있다.

일부 실시태양에서, 하나보다 많은 작용물질 항-trkC 항체가 존재할 수 있다. 1, 2, 3, 4, 5 이상의 상이한 작용물질 항-trkC 항체가 존재할 수 있다. 일반적으로는, 상기 작용물질 항-trkC 항체는 서로에게 불리한 영향을 미치지 않는 상보적인 활성을 갖는다. 작용물질 항-trkC 항체를 또한 상기 작용제의 유효성을 향상 및/또는 보완하는 작용을 하는 다른 작용제와 함께 사용할 수 있다.

본 발명에 따라 사용되는 작용물질 항-trkC 항체의 치료 제형을 목적하는 정도의 순도를 갖는 항체와 임의의 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 안정제(Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20 th Ed. Mack Publishing(2000)를 혼합하여, 동결건조된 제형 또는 수용액의 형태로 보관용으로 제조한다. 허용 가능한 담체, 부형제 또는 안정제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 무독성이며 완충제, 예를 들어 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기산; 염, 예를 들어 염화 나트륨; 산화방지제, 예를 들어 아스코르브산 및 메티오닌; 보존제(예를 들어 옥타데실다이메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예를 들어 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레소르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저 분자량(약 10 개 미만의 잔기) 폴리펩타이드; 단백질, 예를 들어 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예를 들어 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예를 들어 글리신, 글루타민, 아스파라진, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신; 모노사카라이드, 다이사카라이드, 및 다른 탄수화물, 예를 들어 글루코스, 만노스, 또는 덱스트린; 킬레이트제, 예를 들어 EDTA; 당, 예를 들어 슈크로스, 만니톨, 트레할로스, 또는 솔비톨; 염 형성 대이온, 예를 들어 나트륨; 금속 착체(예를 들어 Zn-단백질 착체); 및/또는 비 이온성 계면활성제, 예를 들어 TWEEN^TM, PLURONIC^TM 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함할 수 있다.

작용물질 항-trkC 항체를 함유하는 리포솜을 당해 분야에 공지된 방법, 예를 들어 문헌[Epstein, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688(1985); Hwang et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA 77:4030(1980)]; 및 미국 특허 제 4,485,045 및 4,544,545 호에 개시된 바와 같이 제조한다. 향상된 순환 시간을 갖는 리포솜이 미국 특허 제 5,013,556 호에 개시되어 있다. 특히 유용한 리포솜을 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 PEG-유도체화된 포스파티딜에탄올아민(PEG-PE)을 포함하는 지질 조성물과 함께 역상 증발 방법에 의해 제조할 수 있다. 리포솜을 한정된 기공 크기의 필터를 통해 압출시켜 목적하는 직경을 갖는 리포솜을 수득한다.

상기 유효 성분들을 또한 예를 들어 코아세르베이션 기법에 의해 또는 계면 중합에 의해 제조한 미세캡슐, 예를 들어 콜로이드 약물 전달 시스템(예를 들어 리포솜, 알부민 미소구, 미세유화액, 나노입자 및 나노캡슐) 또는 거시유화액 중의 하이드록시메틸셀룰로즈 또는 젤라틴 미세캡슐 및 폴리-(메틸메트아크릴레이트) 미세캡슐 각각에 포집할 수 있다. 상기와 같은 기법들은 문헌[Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing(2000)]에 개시되어 있다.

서방성 제제를 제조할 수 있다. 서방성 제제의 적합한 예는 상기 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 기질을 포함하며, 이때 상기 기질은 성형된 제품, 예를 들어 필름 또는 미세캡슐의 형태이다. 서방성 기질의 예로는 폴리에스터, 하이드로젤(예를 들어 폴리(2-하이드록시에틸-메트아크릴레이트), 또는 폴리(비닐알콜)), 폴리락타이드(미국 특허 제 3,773,919 호), L-글루탐산과 7 에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비 붕해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 붕해성 락트산-글리콜산 공중합체, 예를 들어 LUPRON DEPOT^TM(락트산-글리콜산 공중합체와 류프로라이드 아세테이트로 구성된 주입성 미소구), 슈크로즈 아세테이트 아이소부티레이트, 및 폴리-D-(-)-3-하이드록시부티르산이 있다.

생체 내 투여에 사용되는 제형들은 멸균되어야 한다. 이는 예를 들어 멸균 여과 멤브레인을 통한 여과에 의해 용이하게 수행된다. 치료학적 작용물질 항-trkC 항체 조성물을 일반적으로는 멸균 출입구를 갖는 용기, 예를 들어 피하 주사기 또는 미리 충전시킨 주사기로 뚫을 수 있는 마개를 갖는 정맥 내 용액 주머니 또는 바이알에 넣는다.

본 발명에 따른 조성물은 경구, 비 경구 또는 직장 투여, 또는 흡입 또는 취입에 의한 투여를 위해 단위 투여 형태, 예를 들어 정제, 환제, 캡슐, 분말, 미립, 용액 또는 현탁액, 또는 좌약 중에 있을 수 있다.

고체 조성물, 예를 들어 정제를 제조하기 위해서, 주요 유효 성분을 약학 담체, 예를 들어 통상적인 타정 성분, 예를 들어 옥수수 전분, 락토오스, 슈크로스, 솔비톨, 활석, 스테아르산, 스테아르산 마그네슘, 인산 이칼슘 또는 검 및 다른 약학 희석제, 예를 들어 물과 혼합하여 본 발명의 화합물 또는 그의 무독성의 약학적으로 허용 가능한 염의 균질한 혼합물을 함유하는 고체 예비제형 조성물을 제조한다. 상기 예비제형 조성물을 균질한 것으로서 언급하는 경우, 이는 상기 조성물을 정제, 환제 및 캡슐과 같은 동등하게 유효한 단위 투여형으로 용이하게 세분할 수 있도록 상기 유효 성분이 상기 조성물 전체를 통해 균일하게 분산됨을 의미한다. 이어서 이러한 고체 예비제형 조성물을 0.1 내지 약 500 ㎎의 본 발명의 유효 성분을 함유하는 상술한 유형의 단위 투여형으로 세분한다. 상기 신규 조성물의 정제 또는 환제를 코팅시키거나 또는 달리 배합시켜 연장된 작용의 이점을 제공하는 투여형을 제공할 수 있다. 예를 들어, 상기 정제 또는 환제는 내부 투여 및 외부 투여 성분을 포함할 수 있으며, 상기 외부 투여 성분은 상기 내부 투여 성분에 대해 외피의 형태이다. 상기 두 성분들을 위에서의 붕해를 저지하고 상기 내부 성분이 십이지장 내에서 손상되지 않게 통과하거나 또는 방출이 지연되게 하는 작용을 하는 장(enteric) 층으로 분리시킬 수 있다. 다양한 물질을 상기와 같은 장 층 또는 코팅층에 사용할 수 있으며, 상기와 같은 물질은 다수의 중합체 산 및 중합체 산과 셸랙, 세틸 알콜 및 셀룰로즈 아세테이트와 같은 물질과의 혼합물을 포함한다.

적합한 표면 활성제는 특히 비 이온성 작용제, 예를 들어 폴리옥시에틸렌솔비탄(예를 들어 Tween^TM 20, 40, 60, 80 또는 85) 및 다른 솔비탄(예를 들어 Span^TM 20, 40, 60, 80 또는 85)을 포함한다. 표면 활성제를 갖는 조성물은 편의상 0.01 내지 5%의 표면 활성제를 포함할 것이며 0.1 내지 2.5%일 수 있다. 필요한 경우 다른 성분들, 예를 들어 만니톨 또는 다른 약학적으로 허용 가능한 비히클을 첨가할 수 있음을 알 것이다.

적합한 유화액을 상업적으로 입수할 수 있는 지방 유화액, 예를 들어 Intralipid^TM, Liposyn^TM, Infonutrol^TM, Lipofundin^TM, 및 Lipiphysan^TM을 사용하여 제조할 수 있다. 상기 유효 성분을 예비 혼합된 유화액 조성물에 용해시키거나 또는 한편으로 상기를 오일(예를 들어 대두유, 홍화유, 면실유, 호마유, 옥수수유 또는 아몬드유)에 용해시킬 수 있으며 인지질(예를 들어 계란 인지질, 대두 인지질 또는 대두 레시틴) 및 물과 혼합 시 유화액이 형성된다. 다른 성분들, 예를 들어 글리세롤 또는 글루코스를 첨가하여 상기 유화액의 강성을 조절할 수 있음을 알 것이다. 적합한 유화액은 전형적으로는 20% 이하, 예를 들어 5 내지 20%의 오일을 함유할 것이다. 상기 지방 유화액은 0.1 내지 1.0 ㎛, 특히 0.1 내지 0.5 ㎛의 지방 소적을 포함할 수 있으며 5.5 내지 8.0 범위의 pH를 갖는다.

상기 유화액 조성물은 trkC 작용물질 항체를 Intralipid^TM 또는 그의 성분들(대두유, 계란 인지질, 글리세롤 및 물)과 혼합하여 제조된 것일 수 있다.

흡입 또는 취입용 조성물은 약학적으로 허용 가능한 수성 또는 유기 용매 또는 이들의 혼합물 중의 용액 및 현탁액, 및 분말을 포함한다. 상기 액체 또는 고체 조성물은 상기 나타낸 바와 같은 적합한 약학적으로 허용 가능한 부형제를 함유할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 조성물을 국소 또는 전신 효과를 위해 경구 또는 코 호흡기 경로에 의해 투여한다. 바람직하게는 약학적으로 허용 가능한 멸균 용매 중의 조성물을 기체를 사용하여 분무시킬 수 있다. 분무된 용액은 분무 장치로부터 직접 호흡되거나 또는 상기 분무 장치를 안면 마스크, 텐트 또는 간헐적인 양압 호흡기에 부착시킬 수 있다. 용액, 현탁액 또는 분말 조성물을 바람직하게는 경구 또는 코로 투여할 수 있으며, 상기 장치로부터 상기 제형이 적합한 방식으로 전달된다.

치료 효능을 당해 분야에 널리 공지된 방법에 의해 평가할 수 있다.

본 발명의 항체, 폴리펩타이드 및 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 키트

본 발명은 또한 검출 및/또는 요법에 사용하기 위한 항체 또는 폴리펩타이드를 포함하는 키트를 제공한다. 따라서, 일부 실시태양에서, 상기 키트는 항체 A5를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 키트는 본 발명에 개시된 임의의 항체 또는 폴리펩타이드를 포함한다.

다른 태양에서, 상기 키트를 본 발명에 개시된 방법들 중 임의의 방법을 위해, 예를 들어 감각 신경병증(일부 실시태양에서 큰 섬유 감각 신경병증), 예를 들어 탁솔 유발된 감각 신경병증, 피리독신 유발된 신경병증, 시스플라틴 유발된 신경병증이 있는 개인의 치료를 위해 사용할 수 있다. 본 발명의 키트는 적합한 포장 중에 존재하며, 추가의 성분들, 예를 들어 본 발명에 개시된 방법들 중 임의의 방법에 상기 항체를 사용하기 위한 설명서 및 완충제를 임의로 제공할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 키트는 본 발명에 개시된 작용물질 항-trkC 항체 및 개인에서의 감각 신경병증(예를 들어 탁솔 유발된 감각 신경병증, 피리독신 유발된 신경병증, 또는 시스플라틴 유발된 신경병증)의 치료 및/또는 예방 설명서를 포함한다. 상기 실시태양들 중 일부에서, 상기 작용물질 항-trkC 항체는 항체 A5이다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명에 개시된 바와 같은 A5 폴리뉴클레오타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 키트를 제공한다. 일부 실시태양에서, 상기 키트는 본 발명에 개시된 방법들 중 임의의 방법에서 상기 폴리뉴클레오타이드의 사용 설명서를 포함한다.

하기의 실시예들은 본 발명의 예시를 위해 제공되며, 본 발명을 제한하는 것은 아니다.

실시예 1: 마우스 단클론 항체 2256의 인간화 및 친화성 성숙

A. 일반적인 방법

하기의 일반적인 방법을 본 실시예에 사용하였다.

클론 특성화에 사용되는 발현 벡터

항체의 발현은 문헌[Barbas(2001) Phage display: a laboratory manual, Cold Spring Harbor, NY, Cold Spring Harbor Laboratory Press pg 2.10. Vector pComb3X]에 개시된 바와 유사한 IPTG 유도성 lacZ 프로모터의 조절하에 있으나, 변경은 하기의 추가적인 영역들의 첨가 및 발현을 포함하였다: IgG2a 인간 면역글로불린의 인간 카파 경쇄 불변 영역 및 CH1 불변 영역. Ig 감마-2 쇄 C 부위, 단백질 수탁 번호 P01859; 면역글로불린 카파 경쇄(호모사피엔스), 단백질 수탁 번호 CAA09181.

소규모 Fab 제조

96 웰 플레이트 중의 Fab의 소규모 발현을 하기와 같이 수행하였다. Fab 라이브러리로 형질전환된 이 콜라이로부터 출발하여 콜로니를 찍어서 주 플레이트(아가 LB + 암피실린(50 ㎍/㎖) + 2% 글루코스)와 실험 플레이트(2 ㎖/웰, LB + 암피실린(50 ㎍/㎖) + 2% 글루코스 1.5 ㎖을 함유하는 96 웰/플레이트) 모두를 접종하였다. 상기 두 플레이트를 모두 30 ℃에서 8 내지 12 시간 동안 배양시켰다. 상기 주 플레이트를 4 ℃에서 보관하고 상기 실험 플레이트로부터의 세포를 5000 rpm에서 펠릿화하고 1 ㎖의 LB + 암피실린(50 ㎍/㎖) + 1 mM IPTG와 함께 재현탁시켜 Fab의 발현을 유도하였다. 세포를 30 ℃에서 5 시간의 발현 후에 원심분리에 의해 수확하고, 이어서 500 ㎕의 완충제 HBS-P(100 mM HEPES 완충제 pH 7.4, 150 mM NaCl, 0.005% P20)에 재현탁시켰다. HBS-P 재현탁된 세포의 용해를 한 주기의 동결(-80 ℃)에 이어서 37 ℃에서의 해동에 의해 획득하였다. 세포 용해물을 5000 rpm에서 30 분 동안 원심분리시켜 Fab를 함유하는 상등액으로부터 세포 찌꺼기를 분리시켰다. 이어서 상기 상등액을 BIAcore 플라스몬 공명 장치에 주입하여 각각의 Fab에 대한 친화성 정보를 획득하였다. Fab를 발현하는 클론들을 상기 주 플레이트로부터 구하여 DNA를 서열화하였으며 대규모 Fab 생산 및 상세한 특성화는 하기에 개시되어 있다.

대규모 Fab 제조

상세한 동역학적 매개변수들을 획득하기 위해서, Fab를 큰 배양물로부터 발현 및 정제하였다. 200 ㎖의 LB + 암피실린(50 ㎍/㎖) + 2% 글루코스를 함유하는 삼각 플라스크를 소정의 Fab-발현 이 콜라이 클론으로부터의 밤새 배양물 5 ㎖로 접종하였다. 클론들을 1.0의 OD_550nm가 획득될 때까지 30 ℃에서 배양하고 이어서 배지를 200 ㎖의 LB + 암피실린(50 ㎍/㎖) + 1 mM IPTG로 대체시켜 유도하였다. 30 ℃에서 5 시간의 발현 후에, 세포를 원심분리에 의해 펠릿화하고, 이어서 10 ㎖ PBS(pH 8)에 재현탁시켰다. 상기 세포의 용해를 2 주기의 동결/해동(각각 -80 ℃ 및 37 ℃)에 의해 획득하였다. 상기 세포 용해물의 상등액을 PBS(pH 8)로 평형화시킨 Ni-NTA 고 유동 세파로스(Qiagen, Valencia, CA) 컬럼 상에 로딩하고, 이어서 5 컬럼 부피의 PBS(pH 8)로 세척하였다. 개별적인 Fab가 PBS(pH 8) + 300 mM 이미다졸에 의해 상이한 분획들로 용출되었다. Fab를 함유하는 단편들을 모으고 PBS에 투석시키고, 이어서 친화성 특성화 전에 ELISA에 의해 정량화하였다.

완전 항체 제조

완전 항체의 발현을 위해서, 중쇄 및 경쇄 가변 부위들을 포유동물 발현 벡터에 클로닝하고 일시적인 발현을 위해 리포펙타민을 사용하여 HEK 293 세포 내로 형질감염시켰다. 항체를 표준 방법으로 단백질 A를 사용하여 정제하였다.

바이아코어 분석

항-trkC Fab 및 단클론 항체에 대한 친화성을 BIAcore 3000^TM 표면 플라스몬 공명(SPR) 시스템(BIAcore, INC, Piscaway NJ)을 사용하여 측정하였다. CM5 칩을 공급자의 설명에 따라 N-에틸-N'-(3-다이메틸아미노프로필)-카보다이이미드 하이드로클로라이드(EDC) 및 N-하이드록시숙신이미드(NHS)로 활성화시켰다. 인간 또는 래트 trkC-Fc 융합 단백질을 10 mM 나트륨 아세테이트(pH 5.0)로 희석하고 활성화된 칩 상에서 0.005 ㎎/㎖의 농도로 주입하였다. 개별적인 칩 채널을 통한 가변 유동 시간을 사용하여, 두 범위의 항원 밀도를 달성하였다: 상세한 동역학 연구의 경우 200 내지 400 반응 단위(RU) 및 선별 분석의 경우 500 내지 1000 RU. 상기 칩을 에탄올아민으로 차단시켰다. 재생 연구는 피어스(Pierce) 용출 완충액(제품 번호 21004, Pierce Biotechnology, Rockford, IL) 및 4M NaCl(2:1)의 혼합물이 200 회 초과의 주입 동안 상기 칩 상의 htrkC의 활성을 유지하면서 상기 결합된 Fab를 유효하게 제거함을 보였다. HBS-EP 완충액(0.01 M HEPES, pH 7.4, 0.15 NaCl, 3 mM EDTA, 0.005% 계면활성제 P20)을 모든 BIAcore 분석에 대한 실험 완충액으로서 사용하였다. 정제된 Fab 샘플의 일련의 희석물(0.1 내지 10x 평가된 으을 1 분간 100 ㎕/분으로 주입하고 2 시간 이하의 해리 시간을 허용하였다. 상기 Fab 단백질의 농도를 표준물로서 기지 농도(아미노산 분석에 의해 측정됨)의 Fab를 사용하여 ELISA 및/또는 SDS-PAGE 전기 영동에 의해 측정한다. 동역학적 회합 속도(k_on) 및 해리 속도(k_off)를 상기 데이터를 BIA평가 프로그램을 사용하여 1:1 랭뮤어 결합 모델(Karlsson, R. Ross, H. Fagerstam, L. Petersson, B.(1994). Methods Enzymology 6.99-110)에 대입시켜 동시에 획득하였다. 평형 해리 상수(K_D) 값을 k_off/k_on로서 계산한다.

선별 분석

선별 BIAcore 분석을 라이브러리로부터 Fab 클론들의 친화성을 측정하기 위해 최적화하였다. 작은 배양 용해물의 상등액을 2 분 동안 50 ㎕/분으로 주입하였다. 5 분의 해리 시간을 BIA평가 소프트웨어를 사용하여 단일 지수 해리 속도(k_off)를 측정하는데 사용하였다. 샘플들을 확인을 위해 주입하였으며 45 분 이하의 해리 시간은 보다 양호한 k_off 값을 획득할 수 있게 하였다. 개선된(보다 느린) k_off 값을 나타내는 클론들을 대규모로 발현시켰으며, 전체 동역학 매개변수 k_on 및 k_off를 정제된 단백질 상에서 측정하였다. 상기 분석은 대략 2 배 이상인 친화성 차이를 검출할 수 있었다.

B. 마우스 단클론 항체 2256의 인간화 및 친화성 성숙

마우스 단클론 trkC 작용물질 항체 2256을 인간화 및 친화성 성숙을 위해 선택하였다. PCT/US01/20153(WO 01/98361 A2)을 참조하시오. Mab 2256은 BIAcore 표면 플라스몬 공명을 사용하여 측정 시, 약 62 nM의 인간 trkC에 대한 결합 친화성을 갖는다. Mab 2256은 인간 trkC를 사용하여 KIRA 분석으로 분석 시 대략 40 nM의 EC50, 및 본 발명에 개시된 바와 같은 래트 3 차 신경세포 생존 분석을 사용하여 분석 시 대략 5 nM의 EC50을 갖는다.

마우스 단클론 작용물질 항-trkC 항체 2256(또한 "Mab 2256" 또는 "2256"이라 칭함)의 연장된 CDR을 도 2에 나타낸다(CDR H2, H3, L1, L2, L3은 상기 CDR과 100% 일치하는 Kabat 및 Chothia에 해당한다). H1은 Kabat와 Chothia간의 절충물이며 상기 두 정의 모두로부터의 잔기들을 모두 포함한다. 도 2는 또한 Chothia와 Kabat CDR을 나타낸다.

하기의 인간 생식세포 수용체 서열을 인간화 및 항체 2256의 친화성 성숙에 사용하였다: 인간 경쇄 수용체 생식세포 서열 O8(GenBank 수탁 번호 M64855; 및 인간 중쇄 수용체 생식세포 서열 VH1-46(GenBank 수탁 번호 AB019438). VH1-46 및 O8의 기본 틀 부위의 서열을 도 1에 나타낸다(항체 A5 아미노산 서열과 관련하여). 아미노산 넘버링은 연속적이다. 하기의 인간 J 서열을 인간화된 항체에 포함시킨다: (a) 중쇄: 인간 JH4(WQGTLVTVSS(서열식별번호: 14)); 및 경쇄: TFGQGTKLEIK(서열식별번호: 15).

표 1에 나타낸 CDR 및/또는 기본 틀 부위 치환을 갖는 항체 클론들을 제조하였으며 본 발명에 개시된 바와 같은 BIAcore 분석을 사용하여 K_D 및 다른 동역학적 매개변수들을 측정한다. 표 1에 나타낸 치환 돌연변이들은 하기와 같이 나타낸 다: (a) 기본 틀 부위의 경우: 치환 돌연변이(들)를 경쇄 수용체 생식세포 서열 O8, 또는 인간 중쇄 수용체 생식세포 서열 VH1-46에 대해 개시하고; (b) CDR 부위의 경우: 치환 돌연변이(들)를 Mab 2256의 상응하는 CDR 서열에 대해 개시한다. 표 2에서, 돌연변이체 Fab의 결합 친화성(K_D 포함)을 인간 trkC에 대해 측정하였다.

표 3은 BIAcore 분석을 사용하여 측정된 바와 같은, Fab A5, Fab 2256(모), 및 래트 및 인간trkC에 대해 선택된 돌연변이체의 다른 클론들의 동역학적 분석 결과를 요약한다.

항체 A5(또한 클론 129(T8)(H8xE10)(10B)(A5)라 칭함)를 추가의 특성화를 위해 선택하였다. A5 중쇄 및 경쇄 가변 부위의 서열을 서열식별번호: 1 및 2로 나타낸다. 인간 trkC에 대한 A5의 친화성은 200 배 개선되고(모 항체 2256의 친화성에 대해) 래트 TrkC에 대한 A5의 친화성은 19 nM로 증가하였으며, 이값은 동물 연구에 적합하다(모 항체 2256에 대한 uM 범위의 친화성에 비해).

C. 인간화되고 친화성 성숙한 항체 A5의 특성화

항체 A5를 전체 IgG로서 발현시키고 그의 인간 TrkC에 대한 작용물질 활성을 문헌[Sadick et al, Exp. Cell Res.(1997) 234:354-361]에 개시된 바와 같이 KIRA에 의해 측정하고 그의 래트 TrkC에 대한 작용물질 활성을 하기의 프로토콜에 개시된 바와 같이 수행되는 신경세포 생존율 분석에 의해 측정하였다. 도 3 및 4는 항체 A5가 인간 및 설치류 TrkC에 대한 효능 있는 작용물질임을 보인다. 설치류 TrkC 상에서의 신경세포 생존율에 대한 A5의 EC50은 0.001 nM인 반면, 2256의 경우는 5 nM이었고, 이는 이들 항체들간의 친화성 차이와 양호하게 일치한다.

또 다른 실험에서, trkC에 대한 항체 A5의 특이성을 필수적으로 trkC 결합 친화성에 대해 상술한 바와 같은 BIAcore 분석을 사용하여 인간 및 래트 trkA 및 trkB에 대한 A5 항체의 결합 친화성을 측정함으로써 시험하였다. 양성 대조군(인간 trkA의 경우 항-인간 trkA 항체가 사용되었고; 래트 trkA의 경우, 인간 NGF가 사용되었으며; 인간 trkB의 경우 항-인간 trkB 항체가 사용되었고; 래트 trkB의 경우 인간 NT-4/5가 사용되었다)과 대조적으로, 인간 trkA, 래트 trkA, 인간 trkB, 또는 래트 trkB에 대한 A5의 결합은 검출되지 않았다.

E12 3 차 래트 신경세포 생존율 분석

3 차 신경절은 안면 부위를 지배하는 피부 감각 신경세포로 구성된다. 이러한 신경세포들은 신경절생성 초기 단계에서는 BDNF 및 NT3에 의해 지지되고 나중의 단계에서는 NGF에 의해 지지된다. E12 태아로부터 수득한 3 차 신경절 신경세포는 NT3에 의해 지지되며, 따라서 상기 신경영양 인자의 포화 농도에서 상기 생존율은 배양 시 48 시간까지 100%에 가깝다. NT3의 부재 하에서, 상기 신경 세포의 5% 미만이 48 시간까지 생존한다. 따라서, E12 3 차 신경세포의 생존율은 trkC 작용물질 항체의 작용물질 활성을 평가하기에 민감한 분석이다.

시간-교배된 임신한 스프래그 다우리 암컷 래트를 CO2 흡입에 의해 안락사시켰다. 자궁 각을 제거하고 E12 태아 단계의 태아를 적출하고 태아머리를 제거하였다. 상기 3 차 신경절을 전기 분해적으로 깎은 텅스텐 바늘을 사용하여 절개하였다. 이어서 상기 신경절을 트립신처리하고, 기계적으로 분리시키고, 폴리-L-오르니틴 및 라미닌으로 코팅된 96-웰 플레이트 중의 한정된 혈청 비 함유 매질에 웰당 200 내지 300 세포의 밀도로 도말하였다. 항 TrkC 항체의 작용물질 활성을 용량 반응 방식으로 3 중으로 평가하였다. 48 시간 배양 후에, 상기 세포들에 대해 Biomek FX 액체 처리 워크 스테이션(Beckman Coulter) 상에서 수행된 자동화된 면역세포화학 프로토콜을 수행하였다. 상기 프로토콜은 고정(4% 폼알데하이드, 5% 슈크로스, PBS), 투과(PBS 중의 0.3% 트리톤 X-100), 비특이적인 결합 부위의 차단(5% 통상적인 염소 혈청, 0.1% BSA, PBS) 및 신경세포의 검출을 위한 1 차 및 2 차 항체와의 연속적인 배양을 포함하였다. 확립된 신경세포 표현형 마커인 단백질 유전자 산물 9.5(PGP9.5, Chemicon)에 대한 토끼 다클론 항체를 1 차 항체로 사용하였다. 알렉사 플루오르(Alexa Fluor) 488 염소 항-토끼(Molecular Probes)를 배양액 중에 존재하는 모든 세포의 핵을 표지하기 위해서 핵 염료 훽스트 33342(Molecular Probes)와 함께 2 차 시약으로서 사용하였다. 영상 포착 및 영상 분석을 디스커버리-1/GenII 이미저(Universal Imaging Corporation) 상에서 수행하였다. 영상을 알렉사 플루오르 488 및 훽스트 33342에 대한 2 개 파장에서 자동적으로 포착하였으며, 핵 염색을, 상기가 모든 웰 중에 존재하므로, 상기 이미저의 영상 기준 자동 초점 시스템에 대한 기준점으로서 사용하였다. 웰 당 적합한 대상 및 영상화된 부위의 수를 각 웰의 전체 면을 덮도록 선택하였다. 자동화된 영상 분석을 설정하여 항-PGP9.5 항체에 의한 특정 염색을 기본으로 48 시간 배양 후에 각 웰 중에 존재하는 신경세포의 수를 카운트하였다. 상기 영상의 조심스러운 역치선택, 및 형태 및 형광 강도 기준 선택성 필터의 적용으로 웰 당 신경세포의 수가 정확히 카운트되었다.

실시예 2: 피리독신 유발된 신경병증에 대한 항체 A5의 효과

처리 프로토콜.

실험을 실험 시작 시 150 내지 200 g 중량의 다자란 수컷 스프래그 다우리 래트 상에서, 승인된 제도상 동물 보호 사용 프로토콜에 따라 수행하였다. 6 내지 8 마리의 동물을 각 처리 그룹에 대해 사용하였다. 피리독신(PDX, Sigma, St. Louis, MO)을 주입 직전에 증류 수 중에서 100 ㎎/㎖로 주입하여 신경병증을 유발시켰으며, 투여를 8일 동안 하루에 2 회 400 ㎎/㎏로 복강 내로 수행하였다. 5A-처리된 동물에게 PDX 처리 개시 3일 전에 복강 내 주입에 의해 A5(5 ㎎/㎏)를 제공하였으며 다시 A5 처음 투여 후 1 주일째에 제공하였다. 벡터 처리된 동물에게 중독 개시 3 일 전에 양쪽 뒷발의 발바닥 표면에 벡터 QL2HNT3(1 x 10⁹ pfu/㎖) 25 ul을 1 회 피하 접종하였다. 벡터 QL2HNT3은 복제-불능의, NT-3에 대한 암호화 서열을 함유하는 게놈 단순 헤르페스 바이러스 기재 벡터이며 생체 내에서 래트 척추 근 신경절의 감각 신경세포를 형질 도입시키고 상기 신경세포에서 NT-3을 발현시킬 수 있다(Chattopadhyay et al., Ann. Neurol. 51:19-27(200)). 대조군은 처리되지 않은 동물(대조군) 및 PDX로 중독되었지만(PDX) 다른 처리는 받지 않은 동물을 포함하였다.

전기생리학적 측정.

모든 기록을 초기 피리독신 투여 후 15일째에 표준 임상 근전도검사 장치(Viking II, Nicolet Biomedical, Madison, WI) 및 그래스 바늘 전극을 사용하여 수행하였다. 래트를 클로랄 하이드레이트(400 ㎎/㎏ IP)로 마취시키고, 뒷다리를 몸통의 장축에 대해 30 내지 45 도 기울여 고정시키고, 피하 온도를 36 내지 37 도에서 유지시켰으며, 접지 전극을 꼬리에 삽입하였다. 좌골 신경의 운동 신경 전달 속도 및 진폭을 장딴지 근에 삽입한 기록 전극을 사용하여 측정하였다. 상기 자극 전극 쌍을 좌골 패임 또는 무릎에 가깝게 놓고 기준 기록 전극을 상기 뒷다리의 다섯 번째 가락에 피하 삽입하였다. 잠복기 및 진폭을 모두 측정하고 전달 속도를 계산하였다. H 파를 상기 좌골 패임에서의 자극 후 및 상기 다섯 번째 가락에 가깝게 놓은 클립 전극으로부터 기록 후에 기록하였다. 8 개 이상의 반응이 획득되었으며 최대 H 파 진폭을 측정하였다. 감각 신경 기록을 위해서, 상기 좌골 패임에 놓인 전극을 기록 전극으로서 사용하였으며, 자극 전극을 발목에 놓고 기준 전극을 첫 번째 가락에 놓았다. 그룹들간의 차이의 통계학적 차이를, 따라서 이후에(post hoc) 수행된 수 회 분석에 대한 본페로니의 보정을 사용하여 평방편차(ANOVA)(Systat9)의 분석에 의해 측정하였다.

신경병증의 행동 평가

자기자극감수 기능을 평가하기 위해서, 래트를 중독 전에 길이 185 ㎝의 3 ㎝ 직경 은못을 횡단하도록 훈련시켰다. 폭이 0.6 ㎝인 한 쌍의 검은 선을 상기 은못의 길이를 따라, 양쪽의 중심선에서 1.05 ㎝ 옆으로 도색하였다. PDX 중독 종결 후 8일째에, 각각의 래트에게 들보를 횡단하도록 5 회 시도를 수행하였다. 눈금을 새긴 선에 대한 앞발(발허리발가락 관절)의 배치, 및 상기 은선으로부터의 미끄러짐 회수를 느린 속도로 상영되는 비디오테이프 기록으로부터 카운트하였다. 상기 그룹들간의 차이에 대한 통계학적 유의수준을, 따라서 이후에 수행된 수 회 분석에 대한 본페로니의 보정을 사용하여 ANOVA(Systat 9)에 의해 측정하였다.

전기생리학에 의해 측정된 항체 A5에 의한 신경병증에 대한 보호

도 5A 및 5B에 나타낸 바와 같이, 환기된 감각 신경 작용 능력의 측정은 대조군과 비교된 PDX 중독된 래트에서 현저한 진폭의 감소 및 발 감각 신경 전달 속도의 지체를 밝혀냈다. 감각 신경 진폭은 대조용 동물의 16.2±1 μM에서 PDX 중독된 동물의 6.8±0.6 μM로 감소하였으며(P<0.001, ANOVA), 상기 전달 속도는 23.6 m/초에서 19.3 m/초로 감소하였다(P<0.001, ANOVA). PDX 중독 3 일전에 QL2HNT3을 형질도입시킨 동물에서, 상기 감각 신경 진폭은 16.1±2.4 μM이었다(PDX 단독에 비해 P<0.001, ANOVA). A5 처리된 동물은 PDX 그룹에 비해 감각 신경 진폭의 현저한 보존을 나타내었다(11.9±3 μM, P<0.005, ANOVA). 유사하게는, PDX-중독된 QL2HNT3-처리된 동물은 대조군(PDX 단독에 대해 P<0.001, ANOVA)과 동일한 감각 신경 전달 속도(23 m/초)를 가졌다. A5로 처리된 PDX 중독된 동물은 상기 PDX-처리 그룹과 그다지 상이하지 않은 감각 신경 전달 속도(21.1 m/초)를 가졌다. 도 5C에 나타낸 바와 같이, 상기 H 반사는 대조군에 비해 PDX를 제공받은 래트에서 심하게 약화된 반면, 직접적인 M 반응은 앞서 보고한 바와 같이 약화되지 않았다. PDX 중독된 동물은 필수적으로 검출 가능하지 않은 H 반사를 가졌다. PDX 중독되고 QL2HNT3 처리된 동물들은 H 파의 보존이 상당하지만 불완전함을 보인다(1.84±0.8 mV, PDX 단독에 비해 P<0.001 PDX + QL2HNT3, ANOVA). A5로 처리되고 PDX로 중독된 동물들은 H-파의 약간의 보존(0.6±0.5 mV)을 나타내지만 그 차이는 PDX-중독된 그룹에 비해 현저하지 않았다.

행동 수행성능에 의해 측정된 항체 A5에 의한 신경병증에 대한 보호

자기자극감수 감각 기능을 평가하기 위해서, 래트를 PDX 중독 전에 3.0 ㎝ 직경의 들보 상에서 걷도록 훈련시키고, 동일한 들보 상에서 PDX 처리의 완료 후 7 일째에(처리 시작 후 15 일째 및 벡터 또는 초기 항체 주입 후 18 일째) 시험하였다. 도 5D에 나타낸 바와 같이, 대조용 동물은 상기 들보를 횡단하는데 어려움이 없었으며, 이는 상기 눈금을 새긴 선 아래로 미끌어지지 않았음을 가리킨다. PDX로 중독된 동물들은 상당한 어려움을 경험하였으며, 이는 시험기간 동안 상기 들보로부터 평균 16 회의 미끄러짐을 기록하였다. PDX 중독 전 3 일째에 QL2HNT3을 형질도입시킨 래트는 PDX만으로 처리된 동물보다 정량적 및 정성적인 면 모두에서 실질적으로 양호하게 수행하였다. QL2HNT3으로 처리한 동물들은 평균 3 회의 미끄러짐을 기록하였다(PDX 단독에 비해 P<0.001, ANOVA). A5가 제공된 동물들은 상기 시험기간 동안 상기 막대기로부터 평균 6.5 회의 미끄러짐을 기록하였으며, 이 차이는 통계학적으로는 유의수준이나 벡터 처리된 PDX 중독된 동물보다는 크기가 작았다(PDX 단독에 비해 P<0.001).

실시예 3: 시스플라틴 -유발된 신경병증에 대한 항체 A5의 효과

처리 프로토콜.

실험을 실험 시작 시 180 내지 200 g 중량의 암컷 위스타 래트(Harlan, Correzzana, Italy)에 대해서 수행하였다. 동물들을 컴퓨터 발생된 랜덤 선택에 의해 상이한 그룹들로 나누고 8 마리의 동물을 각 처리 그룹에 사용하였다. 신경병증을 4 주간 매주 2 회 2 ㎎/㎏의 시스플라틴(CDDP)(Bristol Meyer Squibbs, 멸균 염수 중의 0.5 ㎎/㎖)을 복강 내(ip) 주입에 의해 유발시켰다. 그룹 1의 동물(대조군)은 처리하지 않았다. 그룹 2 동물에게는 4 주간 매주 2 회 CDDP 2 ㎎/㎏을 ip 주입하였다. 그룹 3 동물에게는 4 주간 매주 2 회 CDDP 2 ㎎/㎏을 ip 주입하고 매 7일에 한 번 항체 2256 2 ㎎/㎏을 피하(sc) 주입하였다. 그룹 4 동물에게는 4 주간 매주 2 회 CDDP 2 ㎎/㎏을 ip 주입하고 매 7일에 한 번 항체 2256 10 ㎎/㎏을 피하 주입하였다. 그룹 5 동물에게는 4 주간 매주 2 회 CDDP 2 ㎎/㎏을 ip 주입하고 매 7일에 한 번 항체 A5 2 ㎎/㎏을 피하 주입하였다. 그룹 6 동물에게는 4 주간 매주 2 회 CDDP 2 ㎎/㎏을 ip 주입하고 매 7일에 한 번 항체 A5 10 ㎎/㎏을 피하 주입하였다.

신경생리학 측정

상기 실험의 출발 전 및 상기 처리 기간(4 주)의 끝에서, 각 동물들에 대해 꼬리에서의 감각 신경 전달 속도를 측정하였다. 상기 방법은 문헌[Pisano et al., Clin. Cancer Res. 9:5756-67(2003); 및 Tredici et al., Exp. Neurol. 159:551-8(1999)]에 상세히 개시되어 있다. 간단히, 상기 꼬리 신경에서 역방향 신경 전달을 상기 꼬리에서 멀리 기록 고리 전극을 놓아 평가한 반면, 자극 고리 전극은 상기 기록 지점에 대해 5 및 10 ㎝ 가깝게 놓았다. 신격 자극 후 2 개 부위에서 기록된 전위의 잠복기를 측정하고(피크 대 피크) 신경 전달 속도를 상응하게 계산하였다. 모든 신경생리학적 측정을 동물 수용실에 인접한 온도 조절실에서 표준 조건 하에서 수행하였다. 상기 실험 중에 상이한 그룹들에서 획득한 신경 전달 속도의 차이를 평방 편차 분석(ANOVA) 및 터키-크라머(Tukey-Kramer) 후-시험(유의 수준을 p<0.05로 정함)을 사용하여 통계학적으로 평가하였다.

병리학적 측정

좌골 신경 및 척추 근 신경절 시편을 처리 기간(4 주)의 끝에서 각 그룹으로부터의 4 마리 래트로부터 연구 부위에서 수득하였으며 병리학적 검사를 문헌[Tredici et al., Exp. Neurol. 159:551-8(1999)]에 개시된 바와 같이 수행하였다.

시스플라틴-유발된 신경병증에 대한 A5의 효과

도 6 및 하기 표 4에 나타낸 바와 같이, CDDP 주입은 대조군에 비해 꼬리 신경 전달 속도를 약 30%까지 현저하게(P<0.001) 감소시켰다. 항체 A5는 2 ㎎/㎏ 및 10 ㎎/㎏ 모두에서 꼬리 신경 전달 속도를 현저하게 개선시켰다. CDDP 투여는 앞서 개시한 바와 같이 대조군에 비해 DRG 신경세포의 체세포 크기, 핵 크기 및 핵소체 면적에 대한 현저한 형태학적 변화를 유발시켰다(Pisano et al., Clin. Cancer Res. 9:5756-67(2003); 및 Tredici et al., Exp. Neurol. 159:551-8(1999)). 그러나, 상기 2256 또는 A5 처리된 CDDP-주입된 래트에서는 CDDP-주입된 래트에 비해 DRG 신경세포의 체세포 크기, 핵 크기 및 핵소체 면적에 대한 현저한 변화가 관찰되지 않았다.

생물학적 물질의 기탁

하기의 물질들은 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(10801 University Boulevard, Manassas, Virginia, USA(ATCC))에 기탁되었다.

벡터 Eb.pur.2256.A5는 A5 경쇄 가변 부위 및 인간 경쇄 카파 불변 부위를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드이고; 벡터 Db.2256.A5는 A5 중쇄 가변 부위 및 하기의 돌연변이를 함유하는 인간 중쇄 IgG2a 불변 부위를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드이다: A330P331에서 S330S331(야생형 IgG2a 서열에 대한 아미노산 넘버링)(Eur. J. Immunol.(1999)29:2613-1624 참조).

상기 기탁은 특허 절차 및 그 하부의 법규(부다페스트 조약)를 위한 미생물 기탁에 대한 국제적 승인에 대한 부다페스트 조약 하에서 수행되었다. 이는 기탁일로부터 30 년 동안 상기 기탁물의 생육 가능한 배양물의 유지를 책임진다. 상기 기탁은 부다페스트 조약의 기간 하에서 ATCC에 의해, 리냇 뉴로사이언스 코포레이션과 ATCC 간의 동의를 조건으로 이루어질 것이며, 이는 관련된 미국 특허의 허여 시 또는 임의의 미국 또는 외국 특허 출원의 공개 시(어느 것이 먼저든) 상기 기탁물의 배양물의 자손을 공중에게 영구적이고 비 제한적으로 이용할 수 있게 하고, 미국 특허 및 상표청장에 의해 35 USC 섹션 122 및 상기에 따른 청장의 규정(특히 886 OG 638을 참고로 37 CFR 섹션 1.14를 포함한다)에 따라 상기에 대해 권리가 부여된 것으로 판단된 자에 대해 상기 자손을 이용할 수 있게 한다.

본 출원의 양수인은 기탁 시 상기 물질의 배양물이 적합한 조건 하에서 배양 시 죽거나 상실되거나 파괴된다면 상기 물질을 고지 하에 또 다른 상기 물질로 즉각 대체할 것임에 동의하였다. 상기 기탁된 물질의 입수 가능성을 특허법에 따라 임의의 정부의 권한 하에서 허여된 권리를 위반하여 본 발명을 실행할 수 있는 면허로서 해석해서는 안 된다.

항체 서열

A5 중쇄 가변 부위 아미노산 서열

A5 중쇄 아미노산 서열

A5 경쇄 가변 부위 아미노산 서열

A5 경쇄 아미노산 서열

A5 경쇄 가변 영역 뉴클레오타이드 서열

A5 경쇄 완전 뉴클레오타이드 서열

A5 중쇄 가변 영역 뉴클레오타이드 서열

A5 중쇄 완전 항체(본 발명에 개시된 바와 같은 변경된 IgG2 포함)

본 발명에 개시된 실시예 및 실시태양들은 단지 예시를 목적으로 하는 것이며 이에 비추어 다양한 변경 및 변화들을 당해 분야의 숙련가들에게 제시할 것이고 이들은 본 출원의 진의 및 범위 내에 포함됨은 물론이다.

SEQUENCE LISTING <110> Rinat Neuroscience Corporation Pons, Jaume <120> AGONIST ANTI-TRKC ANTIBODIES AND METHODS USING SAME <130> 514712001940 <140> PTC/US2004/043435 <141> 2004-12-23 <150> US 60/532,592 <151> 2003-12-23 <160> 31 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Arg Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile Tyr Pro Ser Asn Ala Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Lys Tyr Tyr Tyr Gly Asn Thr Arg Arg Ser Trp Tyr Phe Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 <210> 2 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 2 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Ile Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Arg Gly Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95 Thr Val Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr <210> 3 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 3 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 4 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Arg Ile His 1 5 10 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 5 Glu Ile Tyr Pro Ser Asn Ala Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Ser <210> 6 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 6 Lys Tyr Tyr Tyr Gly Asn Thr Arg Arg Ser Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 15 <210> 7 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 7 Arg Ala Ser Glu Ser Ile Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Leu Ala 1 5 10 15 <210> 8 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 8 Ala Ala Ser Asn Arg Gly Ser 1 5 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 9 Gln Gln Ser Lys Thr Val Pro Arg Thr 1 5 <210> 10 <211> 338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 10 gatatccaga tgacacagtc cccatcctcc ctgtctgcct ctgtgggtga ccgcgtcacc 60 atcacctgcc gcgcaagtga gagcatcgac aactatggca tttccttcct ggcctggtat 120 cagcagaagc cgggcaaagc accaaaactc ctgatctatg ctgcatccaa tcggggttca 180 ggtgtcccat cacgcttcag tggcagtggc tctggtacag atttcacctt caccattagc 240 agcctgcaac cagaagatat tgccacttat tactgccaac agagtaagac tgtgccacgc 300 actttcggtc aaggcaccaa gctggagatc aaacgcac 338 <210> 11 <211> 654 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 11 gatatccaga tgacacagtc cccatcctcc ctgtctgcct ctgtgggtga ccgcgtcacc 60 atcacctgcc gcgcaagtga gagcatcgac aactatggca tttccttcct ggcctggtat 120 cagcagaagc cgggcaaagc accaaaactc ctgatctatg ctgcatccaa tcggggttca 180 ggtgtcccat cacgcttcag tggcagtggc tctggtacag atttcacctt caccattagc 240 agcctgcaac cagaagatat tgccacttat tactgccaac agagtaagac tgtgccacgc 300 actttcggtc aaggcaccaa gctggagatc aaacgcactg tggctgcacc atctgtcttc 360 atcttccctc catctgatga gcagttgaaa tccggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420 aataacttct atccacgcga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcc 480 ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540 agcaccctga ccctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagcc 600 acccatcagg gcctgagttc tccagtcaca aagagcttca accgcggtga gtgc 654 <210> 12 <211> 369 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 12 caggtgcagc tggtgcagtc tggtgctgag gtgaagaagc ctggcgcttc cgtgaaggtt 60 tcctgcaaag catctggtta cacctttacc agctatcgga tccactgggt gcgccaagcc 120 cctggtcaag gcctggagtg gatgggcgaa atctacccaa gcaacgcgcg cactaactac 180 aacgagaagt tcaaatcccg ggtgaccatg actcgcgata cctccaccag cactgtctac 240 atggaactga gctctctgcg ctctgaggac actgctgtgt attactgtgc ccgcaagtac 300 tattacggca atacgcgtcg ctcctggtac ttcgatgtgt ggggccaggg taccactgtt 360 accgtgtcc 369 <210> 13 <211> 1348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 13 ggtgcagctg gtgcagtctg gtgctgaggt gaagaagcct ggcgcttccg tgaaggtttc 60 ctgcaaagca tctggttaca cctttaccag ctatcggatc cactgggtgc gccaagcccc 120 tggtcaaggc ctggagtgga tgggcgaaat ctacccaagc aacgcgcgca ctaactacaa 180 cgagaagttc aaatcccggg tgaccatgac tcgcgatacc tccaccagca ctgtctacat 240 ggaactgagc tctctgcgct ctgaggacac tgctgtgtat tactgtgccc gcaagtacta 300 ttacggcaat acgcgtcgct cctggtactt cgatgtgtgg ggccagggta ccactgttac 360 cgtgtcctct gcctccacca agggcccatc tgtcttccca ctggccccat gctcccgcag 420 cacctccgag agcacagccg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc cagaacctgt 480 gaccgtgtcc tggaactctg gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc cagctgtcct 540 gcagtcctca ggtctctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccatcca gcaacttcgg 600 cacccagacc tacacctgca acgtagatca caagccaagc aacaccaagg tcgacaagac 660 cgtggagaga aagtgttgtg tggagtgtcc accttgtcca gcccctccag tggccggacc 720 atccgtgttc ctgttccctc caaagccaaa ggacaccctg atgatctcca gaaccccaga 780 ggtgacctgt gtggtggtgg acgtgtccca cgaggaccca gaggtgcagt tcaactggta 840 tgtggacgga gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagcca agagaggagc agttcaactc 900 caccttcaga gtggtgagcg tgctgaccgt ggtgcaccag gactggctga acggaaagga 960 gtataagtgt aaggtgtcca acaagggact gccatccagc atcgagaaga ccatctccaa 1020 gaccaaggga cagccaagag agccacaggt gtataccctg ccaccatcca gagaggagat 1080 gaccaagaac caggtgtccc tgacctgtct ggtgaaggga ttctatccat ccgacatcgc 1140 cgtggagtgg gagtccaacg gacagccaga gaacaactat aagaccaccc ctccaatgct 1200 ggactccgac ggatccttct tcctgtattc caagctgacc gtggacaagt ccagatggca 1260 gcagggaaac gtgttctctt gttccgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actataccca 1320 gaagagcctg tccctgtctc caggaaag 1348 <210> 14 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Trp Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 15 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 16 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <221> VARIANT <222> 8 <223> x = R or W <221> VARIANT <222> 9 <223> x = I, L, R, or M <400> 16 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Xaa Xaa His 1 5 10 <210> 17 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <221> VARIANT <222> 7 <223> x = A, T, S, or G <221> VARIANT <222> 16 <223> x = K or E <400> 17 Glu Ile Tyr Pro Ser Asn Xaa Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Xaa 1 5 10 15 Ser <210> 18 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <221> VARIANT <222> 7 <223> x = T or S <221> VARIANT <222> 8 <223> x = R, Q, K, S or Y <400> 18 Lys Tyr Tyr Tyr Gly Asn Xaa Xaa Arg Ser Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 15 <210> 19 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <221> VARIANT <222> 6 <223> x = I or V <221> VARIANT <222> 8 <223> x = N or S <221> VARIANT <222> 14 <223> x = L or M <221> VARIANT <222> 15 <223> x = A, T, or N <400> 19 Arg Ala Ser Glu Ser Xaa Asp Xaa Tyr Gly Ile Ser Phe Xaa Xaa 1 5 10 15 <210> 20 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <221> VARIANT <222> 5 <223> x = R, L, or Q <400> 20 Ala Ala Ser Asn Xaa Gly Ser 1 5 <210> 21 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <221> VARIANT <222> 21 <223> x = T, A, S or E <400> 21 Gln Gln Ser Lys Xaa Val Pro Arg Thr 1 5 <210> 22 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 22 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Met His 1 5 10 <210> 23 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 23 Glu Ile Tyr Pro Ser Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Ser <210> 24 <211> 15 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 24 Lys Tyr Tyr Tyr Gly Asn Ser Tyr Arg Ser Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 15 <210> 25 <211> 15 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 25 Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn 1 5 10 15 <210> 26 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 26 Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser 1 5 <210> 27 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 27 Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Arg Thr 1 5 <210> 28 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 28 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Arg Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile Tyr Pro Ser Asn Ala Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Lys Tyr Tyr Tyr Gly Asn Thr Arg Arg Ser Trp Tyr Phe Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125 Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu 130 135 140 Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 145 150 155 160 Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 165 170 175 Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 180 185 190 Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn 195 200 205 Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg 210 215 220 Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 29 <211> 165 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 29 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Ile Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Arg Gly Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95 Thr Val Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu 165 <210> 30 <211> 123 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 30 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Tyr Pro Ser Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Lys Tyr Tyr Tyr Gly Asn Ser Tyr Arg Ser Trp Tyr Phe Asp 100 105 110 Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser 115 120 <210> 31 <211> 113 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 31 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His 65 70 75 80 Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95 Glu Val Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys Arg 100 105 110 Thr

Claims (27)

1. (a) 식 GYTFTSYXaaXaaH(서열식별번호: 16)(여기에서 8 번 위치의 Xaa는 R 또는 W이고, 9 번 위치의 Xaa는 I, L, R 또는 M이다)의 CDR1;

   (b) 식 EIYPSNXaaRTNYNEKFXaaS(서열식별번호: 17)(여기에서 7 번 위치의 Xaa는 A, T, S 또는 G이고; 16 번 위치의 Xaa는 K 또는 E이다)의 CDR2; 및

   (c) 식 KYYYGNXaaXaaRSWYFDV(서열식별번호: 18)(여기에서 7 번 위치의 Xaa는 T 또는 S이고; 8 번 위치의 Xaa는 R, Q, K, S 또는 Y이다)의 CDR3

   을 포함하는 중쇄 CDR을 포함하는 작용물질 항-trkC 항체로,

   서열식별번호: 22의 CDR1 부위, 서열식별번호: 23의 CDR2 부위, 및 서열식별번호: 24의 CDR3 부위를 포함하는 중쇄 CDR을 포함하는 항체는 아닌 작용물질 항-trkC 항체.
2. 제 1 항에 있어서,

   경쇄 가변 부위를 또한 포함하는 작용물질 항-trkC 항체.
3. (a) 식 RASESXaaDXaaYGISFXaaXaa(서열식별번호: 19)(여기에서 6 번 위치의 Xaa는 I 또는 V이고, 8 번 위치의 Xaa는 N 또는 S이고, 14 번 위치의 Xaa는 L 또는 M이고; 15 번 위치의 Xaa는 A, T 또는 N이다)의 CDR1;

   (b) 식 AASNXaaGS(서열식별번호: 20)(여기에서 5 번 위치의 Xaa는 R, L 또는 Q이 다)의 CDR2; 및

   (c) 식 QQSKXaaVPRT(서열식별번호: 21)(여기에서 5 번 위치의 Xaa는 T, A, S 또는 E이다)의 CDR3

   을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 작용물질 항-trkC 항체로,

   서열식별번호: 25의 CDR1 부위, 서열식별번호: 26의 CDR2 부위, 및 서열식별번호: 27의 CDR3 부위를 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 항체는 아닌 작용물질 항-trkC 항체.
4. 제 1 항에 있어서,

   중쇄 가변 부위를 또한 포함하는 작용물질 항-trkC 항체.
5. (a)(i) 식 GYTFTSYXaaXaaH(서열식별번호: 16)(여기에서 8 번 위치의 Xaa는 R 또는 W이고, 9 번 위치의 Xaa는 I, L, R 또는 M이다)의 CDR1;

   (ii) 식 EIYPSNXaaRTNYNEKFXaaS(서열식별번호: 17)(여기에서 7 번 위치의 Xaa는 A, T, S 또는 G이고; 16 번 위치의 Xaa는 K 또는 E이다)의 CDR2; 및

   (iii) 식 KYYYGNXaaXaaRSWYFDV(서열식별번호: 18)(여기에서 7 번 위치의 Xaa는 T 또는 S이고; 8 번 위치의 Xaa는 R, Q, K, S 또는 Y이다)의 CDR3

   을 포함하는 중쇄 CDR; 및

   (b)(i) 식 RASESXaaDXaaYGISFXaaXaa(서열식별번호: 19)(여기에서 6 번 위치의 Xaa는 I 또는 V이고, 8 번 위치의 Xaa는 N 또는 S이고, 14 번 위치의 Xaa는 L 또는 M 이고; 15 번 위치의 Xaa는 A, T 또는 N이다)의 CDR1;

   (ii) 식 AASNXaaGS(서열식별번호: 20)(여기에서 5 번 위치의 Xaa는 R, L 또는 Q이다)의 CDR2; 및

   (iii) 식 QQSKXaaVPRT(서열식별번호: 21)(여기에서 5 번 위치의 Xaa는 T, A, S 또는 E이다)의 CDR3

   을 포함하는 경쇄 CDR

   을 포함하는 작용물질 항-trkC 항체로,

   (a) 서열식별번호: 22의 CDR1 부위, 서열식별번호: 23의 CDR2 부위, 및 서열식별번호: 24의 CDR3 부위를 포함하는 중쇄 CDR; 및 (b) 서열식별번호: 25의 CDR1 부위, 서열식별번호: 26의 CDR2 부위, 및 서열식별번호: 27의 CDR3 부위를 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 항체는 아닌 작용물질 항-trkC 항체.
6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,

   인간 trkC에 결합하는 작용물질 항-trkC 항체.
7. 제 6 항에 있어서,

   약 5 nM 미만의 K_D로 인간 trkC에 결합하는 작용물질 항-trkC 항체.
8. 제 6 항에 있어서,

   설치류 trkC에 또한 결합하는 작용물질 항-trkC 항체.
9. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,

   단클론 항체인 작용물질 항-trkC 항체.
10. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,

    인간화된 항체인 작용물질 항-trkC 항체.
11. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,

    (a) 서열식별번호: 4의 CDR1 부위;

    (b) 서열식별번호: 5의 CDR2 부위; 및

    (c) 서열식별번호: 6의 CDR3 부위

    를 포함하는 중쇄 가변 부위를 포함하는 작용물질 항-trkC 항체.
12. 제 11 항에 있어서,

    중쇄 가변 부위가 서열식별번호: 1의 서열로 이루어진 작용물질 항-trkC 항체.
13. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,

    (a) 서열식별번호: 7의 CDR1 부위;

    (b) 서열식별번호: 8의 CDR2 부위; 및

    (c) 서열식별번호: 9의 CDR3 부위

    를 포함하는 경쇄 가변 부위를 포함하는 작용물질 항-trkC 항체.
14. 제 13 항에 있어서,

    경쇄 가변 부위가 서열식별번호: 2의 서열로 이루어진 작용물질 항-trkC 항체.
15. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,

    (a) (i) 서열식별번호: 4의 CDR1 부위;

    (ii) 서열식별번호: 5의 CDR2 부위; 및

    (iii) 서열식별번호: 6의 CDR3 부위

    를 포함하는 중쇄 가변 부위; 및

    (b) (i) 서열식별번호: 7의 CDR1 부위;

    (ii) 서열식별번호: 8의 CDR2 부위; 및

    (iii) 서열식별번호: 9의 CDR3 부위

    를 포함하는 경쇄 가변 부위

    를 포함하는 작용물질 항-trkC 항체.
16. 제 15 항에 있어서,

    중쇄 가변 부위가 서열식별번호: 1로 이루어지고, 경쇄 가변 부위가 서열식별번호: 2의 서열로 이루어진 작용물질 항-trkC 항체.
17. 제 15 항에 있어서,

    중쇄가 서열식별번호: 28의 서열로 이루어지고, 경쇄 가변 부위가 서열식별번호: 29의 서열로 이루어진 작용물질 항-trkC 항체.
18. 제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항의 작용물질 항-trkC 항체를 암호화하는 핵산.
19. 제 18 항에 있어서,

    작용물질 항-trkC 항체의 중쇄 가변 부위를 암호화하는 서열식별번호: 12의 서열 및 작용물질 항-trkC 항체의 경쇄 가변 부위를 암호화하는 서열식별번호: 10의 서열을 포함하는 핵산.
20. 제 19 항에 있어서,

    작용물질 항-trkC 항체의 중쇄를 암호화하는 서열식별번호: 13의 서열 및 작용물질 항-trkC 항체의 경쇄 가변 부위를 암호화하는 서열식별번호: 11의 서열을 포함하는 핵산.
21. 제 18 항의 핵산을 포함하는 벡터.
22. 제 18 항의 핵산을 포함하는 숙주 세포.
23. (a) 유효량의 제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항의 작용물질 항-trkC 항체 및 (b) 약학적으로 허용 가능한 부형제

    를 포함하는 약학 조성물.
24. 제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항의 작용물질 항-trkC 항체를 포함하는 키트.
25. 숙주 세포에서 제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항의 작용물질 항-trkC 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 발현시킴을 포함하는, 작용물질 항-trkC 항체의 제조 방법.
26. (a) 식 GYTFTSYXaaXaaH(서열식별번호: 16)(여기에서 8 번 위치의 Xaa는 R 또는 W이고, 9 번 위치의 Xaa는 I, L, R 또는 M이다)의 CDR1;

    (b) 식 EIYPSNXaaRTNYNEKFXaaS(서열식별번호: 17)(여기에서 7 번 위치의 Xaa는 A, T, S 또는 G이고; 16 번 위치의 Xaa는 K 또는 E이다)의 CDR2; 및

    (c) 식 KYYYGNXaaXaaRSWYFDV(서열식별번호: 18)(여기에서 7 번 위치의 Xaa는 T 또는 S이고; 8 번 위치의 Xaa는 R, Q, K, S 또는 Y이다)의 CDR3

    을 포함하는, trkC에 결합하는 폴리펩타이드로,

    서열식별번호: 22의 CDR1 부위, 서열식별번호: 23의 CDR2 부위, 및 서열식별번호: 24의 CDR3 부위를 포함하는 CDR을 포함하는 폴리펩타이드는 아닌 폴리펩타이드.
27. (a) 식 RASESXaaDXaaYGISFXaaXaa(서열식별번호: 19)(여기에서 6 번 위치의 Xaa는 I 또는 V이고, 8 번 위치의 Xaa는 N 또는 S이고, 14 번 위치의 Xaa는 L 또는 M이고; 15 번 위치의 Xaa는 A, T 또는 N이다)의 CDR1;

    (b) 식 AASNXaaGS(서열식별번호: 20)(여기에서 5 번 위치의 Xaa는 R, L 또는 Q이다)의 CDR2; 및

    (c) 식 QQSKXaaVPRT(서열식별번호: 21)(여기에서 5 번 위치의 Xaa는 T, A, S 또는 E이다)의 CDR3

    을 포함하는, trkC에 결합하는 폴리펩타이드로,

    서열식별번호: 25의 CDR1 부위, 서열식별번호: 26의 CDR2 부위, 및 서열식별번호: 27의 CDR3 부위를 포함하는 CDR을 포함하는 폴리펩타이드는 아닌 폴리펩타이드.

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