KR20040028732A

KR20040028732A - 인돌로카바졸 글리코시드의 제조 및 분리

Info

Publication number: KR20040028732A
Application number: KR10-2003-7012619A
Authority: KR
Inventors: 웨이쓰만스티븐; 츠카엔데이비드; 이이다다케히코; 가와사키마사시; 히라가쇼우이치; 가마타니아사유키
Original assignee: 머크 앤드 캄파니 인코포레이티드; 반유 세이야꾸 가부시끼가이샤
Priority date: 2001-03-29
Filing date: 2002-03-25
Publication date: 2004-04-03
Also published as: US20020193324A1; EP1390376A1; WO2002079214A1; IL157823A0; AR035449A1; PL363865A1; UA74249C2; JP2004519518A; TWI245045B; EA005126B1; BR0208470A; SK11972003A3; CN1578784A; NZ529168A; US6559299B2; US20040116688A1; HRP20030777A2; CA2441214A1; EA200301068A1; JP3439470B1

Abstract

본 발명은 종양 세포의 성장을 억제하기 때문에 포유동물 등의 암 치료에서 유용한 고순도의 인돌로카바졸 글리코시드를 제조하는 신규한 방법에 관한 것이다.

Description

인돌로카바졸 글리코시드의 제조 및 분리{Preparation and isolation of indolocarbazole glycosides}

암 화학요법 분야에서는, 이미 다수의 화합물이 항종양제로서 실질적으로 사용되어 왔다. 그러나, 각종 종양에 대해 작용하는 보다 효과적인 화합물을 개발해야 하는 필요성이 지속되어 왔다[참조: Proceedings of the 47th General Meeting of the Japan Cancer Society, pp. 12-15(1988)]. 이러한 필요성은 인돌로카바졸 유도체의 개발을 촉구하였다[참조: 미국 특허 제4,487,925호; 제4,552,842호; 제4,785,085호; 제5,591,842호 및 제5,922,860호; 일본 특허 제20277/91호; Journal of Antibiotics, Vol. 44, pp. 723-728(1991); W091/18003; WO 98/07433; 및 EP0545195 A1]. 이들 화합물은 토포이소머라제 억제제로서 작용하기 때문에 암 치료에서 유용한 것으로 제시되어 왔다[참조: Cancer Chemother. Pharmacol.34(suppl): S41-S45(1994)].

수많은 암 치료에 있어 이들 화합물의 성공은 이들 화합물의 개선된 합성 방법의 개발을 요하였다[참조: Bioorg. & Med. Chem. Letters 2000, 10, 419; Tetrahedron 1997, 53, 5937; Tetrahedron 1997, 53, 585; 및 Synthesis 1976, 414]. 그러나, 이미 공지된 방법에는 바람직하지 않은 용매, 수은 또는 은 염의 사용, 낮은 수율 및 지루하거나 연장된 정제 단계를 요하는 원치않는 부산물의 형성을 포함하여 다수의 문제점이 있다.

예를 들어, 하기 화학식 III의 인돌로카바졸 글리코시드를 고순도로 제조하기 위한 이미 공지된 방법은 지루하며 시간 소모적이고, 특히 상업적 규모로 수행할 경우에 생성물의 고도의 세포독성 성질로 인해 위험한, 조 물질의 탄소 처리, 크로마토그래피 및/또는 재결정화의 병용과 같은 정제 과정을 요한다[참조: Bioorg & Med Chem Letters 1999, 3307; 및 Tetrahedron 1997, 585(구조적으로 유사한 화합물의 합성을 기술하고 있으며, 순수한 물질을 수득하기 위해 조 생성물의 재용해를 요함)].

본 발명의 목적은 이미 공지된 합성법의 고유한 문제점을 해결하면서 상기 인돌로피롤로로카바졸-유도된 항종양 물질에 대한 신규한 경로, 구체적으로는 생성물을 충분한 순도로 제조하여 후속적 제형화에서 "그 자체로"로서 사용하도록 하는 경로를 제공하는 것이다.

발명의 요약

본 발명은 종양 세포의 성장을 억제하기 때문에 포유동물 등의 암 치료에서 유용한 고순도의 화학식 I의 인돌로카바졸 글리코시드를 제조하는 신규한 방법에 관한 것이다.

본 발명은 종양 세포의 성장을 억제하기 때문에 포유동물 등의 치료에서 유용한 인돌로카바졸 글리코시드를 고순도로 제조하기 위한 신규한 방법에 관한 것이다.

본 발명의 양태는

(a) 필수적으로 알콜, 산, 물 및 화학물(I)로 이루어진 산성 혼합물의 pH를 염기를 첨가하여 조정함으로써 pH가 약 1.5 내지 약 6.5의 범위인 용액을 생성시키는 단계,

(b) 단계(a)의 용액의 온도를 약 50℃ 내지 약 100℃의 범위에서 유지시키는 단계 및

(c) 화합물(I)의 결정을 분리하는 단계를 포함하는, 고순도의 하기 화학식 I의 화합물의 제조방법으로 설명된다.

화학식 I

본 발명의 제2 양태에서, 당해 방법은

(a) 필수적으로 알콜, 산, 물 및 화학식 I의 화학물로 이루어진 산성 혼합물의 pH를 염기를 첨가하여 조정함으로써 pH가 약 1.5 내지 약 6.5의 범위인 용액을 생성시키는 단계,

(b) 단계(a)의 용액을 알콜로 조정하여, 당해 용액이 약 10% w/v 내지 30% w/v 알콜중 물이 되고 화합물(I)의 농도가 약 10㎖/g 내지 20㎖/g이 되도록 하는 단계,

(c) 단계(b)의 용액의 온도를 약 50℃ 내지 약 100℃ 범위의 온도로 조정하는 단계,

(d) 단계(c)의 용액에 알콜을 첨가하여 당해 용액이 약 3:2(용액:알콜)로 희석되도록 하는 단계,

(e) 단계(d)의 용액을, 화학식 I의 화합물의 결정이 형성되어 슬러리가 생성될 때까지 약 50℃ 내지 100℃ 범위의 온도에서 숙성시키는 단계 및

(f) 화학식 I의 화합물의 결정을 분리하는 단계를 포함한다.

제2 양태의 추가의 양태에서, 당해 방법은 하기 화학식 II의 중간체를 촉매의 존재하에 수소화를 통해 탈보호시켜 반응 혼합물을 생성시킨 다음, 반응 혼합물을 여과하여 단계(a)의 혼합물을 수득함을 추가로 포함한다.

상기 화학식에서,

R은 독립적으로 수소 또는 치환되거나 비치환된 벤질 보호 그룹이며, 단 하나 이상의 R은 치환되거나 비치환된 벤질 보호 그룹이다.

대안적 양태에서, 상기한 방법에서는 R이 벤질이다.

본 발명의 제3 양태에서, 고순도의 화학식 III의 화합물의 제조방법은

(a) 필수적으로 산, 알콜, 물 및 화학식 III의 화합물으로 이루어진 산성 혼합물의 pH를 염기를 첨가하여 조정함으로써 pH가 약 1.5 내지 약 6.5 범위인 용액을 제조하는 단계,

(b) 단계(a)의 용액을 알콜로 조정하여 당해 용액이 약 10% w/v 내지 약 30%w/v 알콜중 물이 되고 화학식 III의 화합물의 농도가 약 10㎖/g 내지 20㎖/g이 되도록 하는 단계,

(d) 단계(c)의 용액을 씨딩시키는 단계,

(e) 단계(d)의 용액에 알콜을 첨가하여 당해 용액이 약 3:2(용액: 알콜)로 희석되도록 하는 단계,

(f) 단계(e)의 용액을 화학식 III의 화합물의 결정이 형성되어 슬러리가 생성될 때까지 약 50℃ 내지 약 100℃의 온도에서 숙성시키는 단계 및

(g) 화학식 III의 화합물의 결정을 분리하는 단계를 포함한다.

화학식 III

제3 양태의 추가의 양태에서, 당해 방법은 화학식 II의 중간체를 촉매의 존재하에 수소화를 통해 탈보호시켜 반응 혼합물을 생성시킨 다음, 반응 혼합물을 여과하여 단계(a)의 혼합물을 수득함을 추가로 포함한다.

화학식 II

상기 화학식에서,

R은 독립적으로 수소 또는 치환되거나 비치환된 벤질 보호 그룹이고, 단 하나 이상의 R은 치환되거나 비치환된 벤질 보호 그룹이다.

또 다른 양태는 단계(a)에서의 pH를 약 1.5 내지 약 3.5 범위의 pH로 조정하고, (b)에서의 용액을 조정하여 당해 용액이 약 15% w/v 내지 약 25% w/v 알콜중 물이 되고 화합물(III)의 농도가 약 12㎖/g 내지 약 18㎖/g이 되도록 하고, 단계(c)에서의 온도를 약 70℃으로 조정하는 바로 앞에서 기술한 방법이다.

추가의 양태는 단계(a)에서의 pH를 약 2.5의 pH로 조정하고, 단계(b)에서의 용액을 조정하여 당해 용액이 약 20% w/v 알콜중 물이 되고 화합물(III)의 농도가 약 15㎖/g이 되도록 하고, 단계(c)에서의 온도를 약 70℃로 조정하는 상기 방법이다.

본 발명에 또한 포함되는 것은 단계(f) 후에 슬러리를 조정하여, 단계(g)에서 화합물(III)의 결정을 분리하기 전에 함수량이 약 1% w/v 내지 약 10% w/v의 범위로 저하되도록 하는 단계를 추가로 포함하는 상기한 방법이다.

바람직한 양태는

(a) 필수적으로 산, 알콜, 물 및 화합물(III)으로 이루어진 산성 혼합물의 pH를 저급 알킬 아민 염기로 조정하여 pH가 약 2.5인 용액을 생성시키는 단계,

(b) 단계(a)의 용액을 이소프로필 알콜로 조정하여 당해 용액이 약 20% w/v 이소프로필 알콜중 물이 되고 화합물(I)의 농도가 약 15㎖/g이 되도록 하는 단계,

(c) 단계(b)의 용액의 온도를 약 70℃의 온도로 조정하는 단계,

(d) 단계(c)의 용액을 씨딩하는 단계,

(e) 단계(d)의 용액에 이소프로필 알콜을 첨가하여 당해 용액이 약 3.2(용액; 이소프로필 알콜)로 희석되도록 하는 단계,

(f) 단계(e)의 용액을 화합물(I)의 결정이 형성되어 슬러리가 생성될 때까지 약 70℃에서 숙성시키는 단계,

(g) 슬러리를 함수량이 약 3% w/v가 되도록 조정하는 단계,

(h) 슬러리를 약 70℃에서 숙성시킨 다음, 약 22℃로 냉각시키는 단계 및

(i) 화합물(III)의 결정을 분리하는 단계를 포함하는, 고순도의 화합물(III)의 제조방법이다.

화학식 III

바람직한 양태의 추가의 양태에서, 당해 방법은 중간체(II)를 촉매의 존재하에 수소화를 통해 탈보호시켜 반응 혼합물을 생성시킨 다음, 반응 혼합물을 여과하여 단계(a)의 혼합물을 수득함을 추가로 포함한다.

화학식 II

상기 화학식에서,

또한, 본 발명의 범주내에는 단계(c)에서의 저급 알킬 아민이 트리에틸아민인 상기한 방법이 포함된다.

본 발명으로 추가의 정제 단계 없이 반응 매질로부터 직접적으로 재결정화될 수 있는 생성물이 제조된다. 또한, 용해도 반응속도론으로 제시되는 바와 같이, 본 발명에서 청구된 방법으로 이미 공지된 방법의 2-D 바늘형보다 안정한 결정 기하이성체인 3-D 사다리꼴형을 갖는 결정이 수득된다.

화합물(I) 및 화합물(III)은 본원에서 참조로 인용되는 1997년 1월 7일자로 허여된 미국 특허 제5,591,842호에 기재된 과정에 따라서 합성할 수 있다. WO 95/30682 및 미국 특허 제5,591,842호에 기재된 방법으로 수득되는 화합물(III)의 분말은 본 발명의 방법을 사용하여 결정화시킨다.

본 출원서에서 사용되는 바와 같이, "고순도"는 BPLC에 의해 측정되는 바와 같이 1% 이하의 불순물을 함유하는 생성물이 수득됨을 의미한다.

"산성 혼합물"은 약 7.0 미만의 pH를 갖는 혼합물을 의미한다. 가장 바람직하게는, 산성 혼합물의 pH는 약 2.5 미만이다.

본 적용 목적상, 사용할 수 있는 산의 유형으로는 무수 또는 수성 HF, HCl, HBr, HI, HNO₃, HClO₄, 황산, 인산, 프로피온산, MsOH, TsOH, 일인산 염, 이인산 염, 혼합된 인산 염, 카복실산 또는 할로겐화암모늄이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 혼합된 인산 염은 M₁M₂HPO₄(여기서, M₁및 M₂는 독립적으로 H, Na, K, NH₄OH 및 나트륨 칼륨 등으로부터 선택된다)으로 기술될 수 있다. 보다 바람직하게는,산은 HCl로부터 선택된다.

본원에서 기술하는 수소첨가분해 반응시의 촉매의 선택은 당해 숙련가에게 명백할 것이다. 적합한 촉매로는 탄소상 팔라듐, Pd(OH)₂, 라니(Raney) 니켈, 텅스턴 촉매 및 Rh/Al₂O₃등이 포함된다. 탄소상 팔라듐과 같은 팔라듐 촉매가 바람직하다.

"씨딩"은 용매로부터 결정의 침전을 촉매하기 위해 용액을 결정(씨드 결정)에 노출시키는 것을 의미한다. 고체 무수 형태인 씨드 결정을 첨가함으로써 씨딩시킬 수 있거나, 씨드 결정을 액체 중 슬러리 형태로 첨가할 수 있다. "씨드 결정"은 침전을 유도하고자 하는 동일 화합물의 결정일 수 있거나 상이한 화합물의 결정일 수 있다. 본 발명의 경우, 동일 화합몰의 슬러리에 의한 씨딩이 바람직하다.

"숙성"이란 용액을 특정한 기간 동안 일정한 온도 및 용적에서 숙성되는 상태로 유지시키는 것을 의미한다. 본 발명에서 반응물이 숙성되는 시간의 양은 구체적으로 주지되지 않는 한 중요한 것이 아니며, 달리는 당해 분야의 숙련가에 의해 용이하게 식별될 수 있다.

"여과"는 용액을 일부 매질을 통해 통과시켜 미립자 물질이 제거되는 것을 의미한다. 매질의 선택은 중요한 것이 아니며 통상의 전문가에 의해 쉽게 선택될 수 있다. 여과는 셀라이트, 솔카 플록(solka floc), 모래, 소결 유리 및 규조토 등을 통해 통과시킴으로써 달성할 수 있다.

"알콜"은 중요한 활성 그룹으로서 하나 이상의 하이드록실 그룹을 갖는 직쇄 또는 측쇄인, 탄소수 1 내지 5의 유기 분자를 의미하고자 한다. 알콜로는 메탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올, 2급-부탄올 등이 포함된다. 이소프로필 알콜이 바람직한 알콜이다.

"치환된 벤질 보호 그룹"이란 용어에는 p-MeO-벤질, o-니트로벤질, p-니트로벤질, p-할로벤질(여기서, 할로에는 클로로, 브로모 및 요오도가 포함된다), 2,6-디클로로벤질, 디페닐메틸 및 트리페닐메틸 등이 포함된다. 추가의 적합한 보호 그룹은 문헌[참조Protective Groups in Organic Chemistry by Peter G. Wuts 및 Theodora W. Greene, John Wiley & Sons, 3^rd.(1999)]에서 찾아 볼 수 있다.

본 발명은 여액의 pH를 특정 범위로 조정하는 단계를 포함한다. pH는 임의의 적합한 염기, 예를 들어, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 트리부틸아민, 피리딘, 2,6-루티딘, 2,4,6-콜리딘, DBU, DBN, 디이소프로필아민, N,N-디메틸아닐린, DABCO 및 N-알킬모르폴린 등을 사용하여 조정할 수 있다. 저급 알킬 아민 염기가 바람직하다. 트리에틸아민이 가장 바람직하다.

"슬러리"는 액체 중의 고체 또는 결정의 현탁액을 의미한다. 고체는 액체중에 부분적으로, 불완전하게 또는 완전하게 용해되지 않을 수 있다.

반응식의 개요

하기 반응식 A는 생물할적 활성 인돌로카바졸 글리코시드를 탈보호/결정화 프로토콜을 통해 제조하여 생성물을 고수율 및 고순도로 수득함으로써 제형화 전에추가의 정제 단계에 대한 필요성을 제거하고자 하는 일반화된 접근법을 기술한 것이다.

제공된 실시예는 본 발명의 추가의 이해를 돕고자 하는 것이다. 사용되는 특정 물질, 화학종 및 조건은 본 발명을 추가로 설명하기 위한 것이며 이의 적당한 범주로 제한하고자 하는 것은 아니다.

실시예 1

화합물(1-1)의 제조방법은 본원에서 참조로 인용되는 WO95/30682(등가물: 미국 특허 제5,804,564호)에 기재되어 있다.

에탄올(14.0ℓ)을 내부 온도를 30℃ 이하로 유지하면서 실온에서 0.5시간에 걸쳐서 50ℓ들이 유리 용기내의 화합물(1-1)(1.55kg, 1.44mol), 톨루엔(5.6ℓ)과 48% 수성 KOH(4.15kg)의 2상 혼합물에 적가한다. 수득되는 암적색 혼합물을 12시간 동안 20 내지 30℃에서 교반하면, 이 시간 동안 당해 혼합물은 균질한 적색 혼합물이 된다. 이어서 혼합물을 -5℃에서 1시간 동안 추가로 숙성시키고, 이때 내부 온도를 5℃로 유지하면서 10% 시트르산(23.5kg)을 천천히 첨가하여 pH 7.7 내지 8.0의 혼합물을 형성시킨다. 수득되는 혼합물을 가온시키고 25 내지 30℃에서 7시간 동안 교반하고, 이 시간 동안 추가의 10% 수성 시트르산(1.77kg)을 정기적으로 첨가하여 pH를 7.5 내지 8.0로 유지시킨다. 이어서 혼합물을 MTBE(15.5ℓ)로 추출하고, 분리된 유기 상을 3% 수성 NaCl(2×3.1ℓ) 및 25% 수성 NaCl(3.1ℓ)로 세척하고 건조시키고(Na₂SO₄) 탄소(Darco G-60, 155g, 실온, 1시간)로 처리한다. 여과된 용액을 진공하에 6ℓ수준으로 농축시키고, MeCN(2×15ℓ)로 플러싱하고, 이때 매회 진공하에 6ℓ뱃치 용적으로 농축시킨다(잔류 톨루엔: 9%). 이어서 혼합물을MeCN로 희석하여 23.3ℓ용액을 제조하고, MeOH(3.0ℓ)를 22 내지 25℃에서 0.5시간에 걸쳐서 천천히 첨가한 다음, 생성물(1-2)를 씨딩시켜 결정화를 개시한다. 수득되는 혼합물을 상기 온도 범위에서 1시간 동안 추가로 숙성시킨 다음, MeOH(17.6ℓ)를 1시간에 걸쳐서 천천히 첨가한다. 수득되는 황색 현탁액을 22 내지 25℃에서 1시간 동안 숙성시킨 다음, 0 내지 5℃에서 3시간 동안 추가로 숙성시킨다. 결정을 여과시켜 분리하고 MeCN/MeOH(15.5ℓ)의 9:1(v/v) 혼합물을 세척하고 진공하에 건조시켜 화합물(1-2)를 수득한다.

실시예 2

12.1% 수성 NaClO(사용전에 수성 Na₂S₂O₃를 사용하여 적정함; 4.06kg, 6.61mol)을 내부 온도를 0 내지 5℃로 유지하면서 0℃에서 1.5시간에 걸쳐서 50ℓ들이 유리 용기내의 1,3-디벤질옥시-2-프로판올(화합물(2-1), 1.50kg, 5.51mol),2,2,6,6-테트라메틸-1-피페리디닐옥시 유리 라디칼(TEMPO, 86.0g, 0.550mol), MeCN(20.6ℓ)와 3% 수성 NaHCO₃(15.5kg, 5.51mol)의 교반된 혼합물에 적가한다. 수득되는 혼합물을 0 내지 5℃에서 추가로 1시간 동안 교반하고, 10℃ 이하에서 MTBE(메틸 t-부틸 에테르, 41ℓ)로 추출한다. 분리된 유기 상을 10℃ 이하에서 10% 수성 Na₂SO₃(5.0kg)로 세척한 다음, 실온에서 5% 수성 NaCl(3.0kg) 및 1% 수성 NaCl(3.0kg)으로 세척한다. 이어서 담적색 유기 상을 HPLC로 분석하고 계산하여 목적하는 케톤(화합물(2-2)) 1.48kg(5.49mol)을 함유하도록 한다. 이어서 용액을 50ℓ들이 용기내에 놓고, n-헵탄(2×7.5ℓ)으로 플러싱하면서 진공(40℃ 욕조)하에서 약 8ℓ로 농축시켜 헵탄 혼합물(잔류 MTBE 및 MeCN는 각각 0.005% 및 0.90%이다)을 제조한 다음, n-헵탄으로 희석하여 37.5ℓ 뱃치 용적을 형성시킨다. 이어서 혼합물을 70℃로 가온시키고 Boc-NHNH₂(801g, 6.06mol) 및 톨루엔(1.5ℓ)의 용액을 첨가한다. 수득되는 혼합물을 70℃ 이상에서 3시간 동안 교반한 다음, 60℃로 냉각시킨다. 생성물(화합물(2-3))의 씨드를 첨가하고, 수득되는 혼합물을 59 내지 61℃에서 1시간 동안 숙성시켜 결정화를 개시한다. 이어서 혼합물을 실온으로 냉각시키고 밤새 숙성시킨다. 결정을 20℃에서 여과하여 분리하고, n-헵탄(7.5ℓ)에 이어서 n-헵탄/i-PrOH(4.5ℓ)의 7:3v/v 혼합물 및 n-헵탄(4.5ℓ)으로 세척하고 진공하에 건조시켜 화합물(2-3)을 무색 바늘형으로서 수득한다.

이어서, 화합물(2-3)(1.64kg, 4.27mol) 및 THF(5.9ℓ)를 내부 온도를 5℃ 이하로 유지시키면서 0℃에서 50ℓ들이 유리 용기내의 NaBH₄(364g, 9.62mol)과THF(7.2ℓ)의 교반된 현탁액에 적가한다. 이어서 내부 온도를 10℃ 이하로 유지시키면서 BF_3·OEt₂(920g, 6.48mol)를 수득되는 혼합물에 첨가한다. 수득되는 무색 현탁액을 0 내지 5℃에서 1시간 동안 교반하고, 이때 내부 온도를 20℃ 이하로 유지시키면서 6N 수성 HCl(4.29kg, 23.5mol)을 1시간에 걸쳐서 적가한다(주의: 활발한 가스 증발). 수득되는 무색 현탁액을 가온시키고, 가스 증발이 중단될 때까지 60 내지 65℃에서 2시간 동안 교반한다. 이어서 탈기된 2N 수성 NaOH(12.9ℓ, 25.8mol)를 내부 온도를 20℃ 이하로 유지시키면서 3℃에서 혼합물에 천천히 첨가한 다음, 수득되는 혼합물을 실온으로 가온시키고 탈기된 MTBE(40ℓ)를 사용하여 추출한다. 분리된 유기 상을 탈기된 물(6.6ℓ)에 이어서 탈기된 염수(6.5ℓ) 및 탈기된 물(3.3ℓ)로 세척한다. 이어서 유기 상을 탈기된 MTBE로 희석하여 57ℓ 용액을 형성시키고, 생성물(화합물(2-4))의 씨드를 첨가한 다음, 옥살산(177g, 1.97mol) 및 탈기된 MTBE(1.97ℓ)의 용액을 15분에 걸쳐서 적가하고, 생성물을 결정화시킨다. 수득되는 무색 슬러리를 실온에서 밤새 숙성시키고, 결정을 여과하여 분리하고 MTBE(12.3ℓ)로 세척하고 진공하에 건조시켜 화합물(2-4)(1.25kg, 88%, HPLC에 의해 99.9면적%)를 무색 판형태로서 수득한다.

실시예 3

22ℓ 질소-퍼징된 용기를 22℃에서 DMA(8.3ℓ), 화합물(1-2)(1.00kg; 0.94mole) 및 화합물(2-4)(350g; 1.06mole)로 충전시킨다. 수득되는 슬러리를, 교반하면서 상기 용기에 진공(40 내지 80torr)을 5분/사이클 동안 적용시키고 질소로 충전시켜(3회 사이클) 탈기시킨다. 내용물을 30분에 걸쳐서 65℃로 가열하면 이 시간 동안에 용액은 균질해진다. 트리에틸아민(146㎖; 1.05mole)을 신속하게 첨가하고 용액을 65℃에서 3시간 동안 숙성시킨다. 내용물을 45℃로 냉각시키고, 10℃로 유지된 질소-살포된 MTBE(17.0ℓ)를 함유하는 50ℓ들이 실린더형 용기로 옮긴다. 상기 용기의 내용물을 다시 10℃로 냉각시키고, 질소-살포된 물(4.7ℓ)을 10분에 걸쳐서 첨가하여 내부 온도를 30℃ 이하로 유지시킨다. 2M 염산(440㎖)을 22℃에서 2상 혼합물에 첨가한다. 22℃에서 10분 동안 교반한 후, 상을 분리하고 유기 상을 물(3×3.8ℓ)로 세척한다. 유기 상을 진공하에서 5ℓ수준으로 농축시키고(20 내지 25℃ ), 여러번 THF로 플러싱하여 MTBE를 제거한다. 용매를진공하에 제거하여 목적하는 화합물(3-1)을 수득한다.

실시예 4

주의: 당해 반응의 생성물인 화합물(4-1)은 세포독성 화합물이다.

10% 탄소상 Pd(50% 습식; 112g)를 5갤런들이 오토클레이브에 충전시킨 다음,12-β-D-(2,3,4,6-테트라-O-벤질글루코피라노실)-12,13-디하이드로-2,10-디벤질옥시-6-[[-(2-벤질옥시-1-(벤질옥시메틸)에틸]아미노]-5H-인돌로[2,3-a]피롤로[3,4-c]카바졸-5,7(6H)-디온(3-1)(175g/용액 ℓ; 6.4ℓ; 1.12 검정 kg, 이소프로필 알콜, IPA(7.9ℓ) 및 3N HCl(224mL)의 THF(테트라하이드로푸란) 용액으로 충전시킨다. 내용물을 빠르게 교반하면서 40℃/40psi에서 4 내지 14시간 동안 수소화시키면, 이 시간 동안 이론량의 110%의 수소가 흡착된다. 내용물을 25℃로 냉각시키고, 반응 혼합물을 3/2 IPA/THF(1×3ℓ)로 세정한 솔카 플록 베드 위에서 여과한다. 여액을 IPA(약 600㎖) 중의 1M 트리에틸 아민을 사용하여 pH 2.5(범위: 1.5 내지 6.5)로 조정한 다음, 물(4.0ℓ)을 첨가한다. 뱃치를 대기압에서 7.5ℓ 수준으로 농축시킨다. 4/1 IPA/물(6.5ℓ)을 공급하면서 일정한 뱃치 용적에서 지속적으로 증류시킨다. 뱃치 용적을 7.5ℓ로 유지하면서 IPA(약 9ℓ)를 용기에 공급하여 함수량을 20%(w/v)(범위 10 내지 30% 물)로 저하시킨다. 내용물을 70℃로 냉각시키고, 씨드(5.0g)를 IPA 슬러리(50㎖)로서 첨가한다. 뱃치를 70℃에서 1시간 동안 유지시킨 다음, IPA(5.0ℓ)를 90분에 걸쳐서 첨가한다. 뱃치를 70℃에서 9 내지 24시간 동안 숙성시키고, 이 시간 동안 다량의 생성물을 결정화시킨다. IPA(17ℓ)를 공급하면서 일정한 용적으로 증류시켜 함수량을 3%(w/v)(범위 1 내지 10% 물)로 저하시킨다. 슬러리를 70℃에서 3 내지 6시간 동안 숙성시킨 다음, 22℃로 냉각시키고 1시간 동안 숙성시킨다. 슬러리를 여과하고, 케이크를 IPA(2.5ℓ) 및 메탄올(1.5ℓ) 순서로 세척한 다음, 진공하에 38℃에서 6시간 동안 건조시켜 생성물(4-1)을 순도가 99 A% 이상이고 수율이 80% 이상인 오렌지색 고체로서 수득한다. NMR 데이터(결합 상수( J )는 헤르쯔 단위로 제시함):

¹H NMR(400.13 MHz, DMSO-d₆)-주 회전이성체에 대한 데이터 δ11.23(s, 1H), 9.80(s, 1H), 9.77(s, 1H), 8.90(d, J=8.4, 1H), 8.82(d, J=8.4, 1H), 7.21(br s, 1H), 7.01(br s, 1H), 6.84(중복 m, 2H), 6.00(d, J=8.0, 1H), 5.88(t, J=3.6, 1H), 5.57(d, J=2.4, 1H), 5.34(d, J=4.4, 1H), 5.13(d, J=4.4, 1H), 4.94(d, J=4.4, 1H), 4.56(t, J=5.6, 2H), 4.04(dd, J=11.2, 3.2, 1H), 3.95(중복 m, 2H), 3.81(dd, J=10.4,4.0, 1H), 3.53(중복 m, 6H);

¹³C NMR(100.64 MHz, DMSO-d₆)-주 회전이성체에 대한 데이터 δ169.03, 168.94, 157.79, 157.63, 144.38, 143.12, 129.46, 127.92, 125.19(2C), 118.91, 117.57, 115.94, 114.32, 114.23, 113.92, 110.30, 110.24, 97.54, 97.49, 84.49, 78.39, 76.77, 72.88, 67.53, 62.59, 60.47(2C), 58.33.21

HPLC 분석

HPLC 매개변수:

컬럼: YMC ODS-AQ(250×4.6 mm)

유속: 1.5㎖/분

검출: 228nm

이동상: A = 0.1% H₃PO₄수성

B = 아세토니트릴

구배:

분	A(%)	B(%)
040606165	8574308585	1526701515

주입 용량: 10㎕

온도: 25℃

Claims

(a) 필수적으로 산, 알콜, 물 및 화학식 I의 화합물로 이루어진 산성 혼합물의 pH를 염기를 첨가하여 조정함으로써 pH가 약 1.5 내지 약 6.5 범위인 용액을 제조하는 단계,

(b) 단계(a)로부터의 용액의 온도를 약 50℃ 내지 약 100℃ 범위에서 유지시키는 단계 및

(c) 화학식 I의 화합물의 결정을 분리하는 단계를 포함하여, 고순도의 화학식 I의 화합물의 결정을 제조하는 방법.

화학식 I
제1항에 있어서,

(a) 필수적으로 산, 알콜, 물 및 화학식 I의 화합물로 이루어진 산성 혼합물의 pH를 염기를 첨가하여 조정함으로써 pH가 약 1.5 내지 약 6.5 범위인 용액을 제조하는 단계,

(b) 단계(a)의 용액을 알콜로 조정하여 당해 용액이 약 10%w/v 내지 30%w/v 알콜중 물이 되고 화학식 I의 화합물의 농도가 약 10㎖/g 내지 20㎖/g이 되도록 하는 단계,

(c) 단계(b)의 용액의 온도를 약 50℃ 내지 약 100℃ 범위의 온도로 조정하는 단계,

(d) 단계(c)의 용액에 알콜을 첨가하여 당해 용액이 약 3:2(용액:알콜)로 희석되도록 하는 단계,

(e) 단계(d)의 용액을 화학식 I의 화합물의 결정이 형성되어 슬러리가 생성될 때까지 약 50℃ 내지 100℃ 범위의 온도에서 숙성시키는 단계 및

(f) 화학식 I의 화합물의 결정을 분리하는 단계를 포함하는 방법.
제2항에 있어서, 화학식 II의 중간체를 촉매의 존재하에 수소화를 통해 탈보호시켜 반응 혼합물을 생성시킨 다음, 반응 혼합물을 여과시켜 단계(a)의 혼합물을 수득함을 포함하는 방법.

화학식 II

상기 화학식에서,

R은 독립적으로 수소 또는 치환되거나 비치환된 벤질 보호 그룹이며, 단 하나 이상의 R은 치환되거나 비치환된 벤질 보호 그룹이다.
제3항에 있어서, R이 벤질인 방법.
(a) 필수적으로 산, 알콜, 물 및 화학식 III의 화합물로 이루어진 산성 혼합물의 pH를 염기를 첨가하여 조정함으로써 pH가 약 1.5 내지 약 6.5 범위인 용액을 제조하는 단계,

(b) 단계(a)의 용액을 알콜로 조정하여 당해 용액이 약 10%w/v 내지 약 30%w/v 알콜중 물이 되고 화학식 III의 화합물의 농도가 약 10㎖/g 내지 20㎖/g이 되도록 하는 단계,

(c) 단계(b)의 용액의 온도를 약 50℃ 내지 약 100℃ 범위의 온도로 조정하는 단계,

(d) 단계(c)의 용액을 씨딩시키는 단계,

(e) 단계(d)의 용액에 알콜을 첨가하여 당해 용액이 약 3:2(용액: 알콜)로 희석되도록 하는 단계,

(f) 단계(e)의 용액을 화학식 III의 화합물의 결정이 형성되어 슬러리가 생성될 때까지 약 50℃ 내지 약 100℃의 온도에서 숙성시키는 단계 및

(g) 화학식 III의 화합물의 결정을 분리하는 단계를 포함하여, 고순도의 화학식 III의 화합물을 제조하는 방법.

화학식 III
제5항에 있어서, 화학식 II의 중간체를 촉매의 존재하에 수소화를 통해 탈보호시켜 반응 혼합물을 제조한 다음, 반응 혼합물을 여과하여 단계(a)의 혼합물을 수득함을 추가로 포함하는 방법.

화학식 II

상기 화학식에서,

R은 독립적으로 수소 또는 치환되거나 비치환된 벤질 보호 그룹이며, 단 하나 이상의 R은 치환되거나 비치환된 벤질 보호 그룹이다.
제5항 또는 제6항에 있어서, 단계(a)에서의 pH를 약 1.5 내지 약 3.5 범위의 pH로 조정하고, 단계(b)에서의 용액을 당해 용액이 약 15%w/v 내지 약 25%w/v 알콜중 물이 되고 화학식 III의 화합물의 농도가 약 12㎖/g 내지 약 18㎖/g이 되도록 하고, 단계(c)에서의 온도를 약 70℃로 조정하는 방법.
제7항에 있어서, 단계(a)에서의 pH를 약 2.5의 pH로 조정하고, 단계(b)에서의 용액을 당해 용액이 약 20%w/v 알콜중 물이 되고 화학식 III의 화합물의 농도가 약 15㎖/g이 되도록 조정하고, 단계(c)에서의 온도를 약 70℃로 조정하는 방법.
제8항에 있어서, 단계(f) 후에 슬러리를 조정하여, 단계(g)에서 화학식 III의 화합물의 결정을 분리하기 전에 함수량이 약 1% w/v 내지 약 10% w/v의 범위로 저하되도록 하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
제5항에 있어서,

(a) 필수적으로 산, 알콜, 물 및 화학식 III의 화합물로 이루어진 산성 혼합물의 pH를 저급 알킬 아민 염기를 첨가하여 조정함으로써 pH가 약 2.5인 용액을 제조하는 단계,

(b) 단계(a)의 용액을 이소프로필 알콜로 조정하여 당해 용액이 약 20%w/v 이소프로필 알콜중 물이 되고 화학식 I의 화합물의 농도가 약 15㎖/g이 되도록 하는 단계,

(c) 단계(b)의 용액의 온도를 약 70℃의 온도로 조정하는 단계,

(d) 단계(c)의 용액을 씨딩시키는 단계,

(e) 단계(d)의 용액에 이소프로필 알콜을 첨가하여 당해 용액이 약 3:2(용액: 이소프로필 알콜)로 희석되도록 하는 단계,

(f) 단계(e)의 용액을 화학식 I의 화합물의 결정이 형성되어 슬러리가 생성될 때까지 약 70℃의 온도에서 숙성시키는 단계 및

(g) 슬러리를 함수량이 약 3% w/v가 되도록 조정하는 단계,

(h) 슬러리를 약 70℃에서 숙성시킨 후 약 22℃로 냉각시키는 단계 및

(i) 화학식 III의 화합물의 결정을 분리하는 단계를 포함하여, 고순도의 화학식 III의 화합물을 제조하는 방법.
제10항에 있어서, 화학식 II의 중간체를 촉매의 존재하에 수소화를 통해 탈보호시켜 반응 혼합물을 제조한 다음, 반응 혼합물을 여과하여 단계(a)의 혼합물을 수득함을 추가로 포함하는 방법.

화학식 II

상기 화학식에서,

R은 독립적으로 수소 또는 치환되거나 비치환된 벤질 보호 그룹이며, 단 하나 이상의 R은 치환되거나 비치환된 벤질 보호 그룹이다.
제11항에 있어서, 단계(a)에서의 저급 알킬 아민이 트리에틸아민인 방법.