KR102251640B1

KR102251640B1 - 지방세포 분화 촉진용 펩타이드 및 이를 포함하는 지방세포 분화 촉진용 조성물

Info

Publication number: KR102251640B1
Application number: KR1020190154129A
Authority: KR
Inventors: 허찬영; 심정희; 양혜정
Original assignee: 서울대학교산학협력단
Priority date: 2019-11-27
Filing date: 2019-11-27
Publication date: 2021-05-17

Abstract

본 발명은 지방세포 분화 촉진용 펩타이드 및 이를 유효성분으로 포함하는 지방세포 분화 촉진용 조성물에 이용한 관한 것으로, 지방세포 또는 지방 유래 줄기 세로의 이식수술 또는 충전제의 투여 등을 대체하면서 제조 및 투여가 기술적으로 용이하고 최소한의 외과 처치를 요하며 안전하고 비용 효과적인 지방 조직 결손 치료 및 미용 지방 조직을 충분히 증가시킬 수 있는 효과를 발휘한다.

Description

지방세포 분화 촉진용 펩타이드 및 이를 포함하는 지방세포 분화 촉진용 조성물{Peptides for promoting adipocyte differentiation and composition for promoting adipocyte differentiation comprising the same}

본 발명은 지방세포 분화 촉진용 펩타이드 및 이를 포함하는 지방세포 분화 촉진용 조성물에 관한 것이다.

지방 조직은 에너지를 저장하고, 절연을 제공하고, 또한 예컨대, 얼굴, 흉부, 둔부 또는 기타 포유 동물의 신체 부위를 정의하는 임의의 형태와 같은 외관의 구조적 특성을 정의한다. 미용상의 욕구 이외에도, 예컨대 유방절제술 이후의 유방의 복원, HIV-유도된 지질 이영양증(HIV-induced lipid dystrophy) 및 외상 이후의 복안(facial reconstruction after trauma)과 같은, 지방 조직 공학 및 복원을 위한 치료상의 응용 또한 있다. 지방 조직 결손의 치료 및 미용 조직 보강을 위한 종래의 방법은 표적 신체 부위에 볼륨을 가하거나, 표적 신체 부위를 대체하는 충전제를 이용한다. 상기 충전제는 자가 조직(autologous) 충전제 및 비-자가 조직 충전제로 분류된다.

이러한 지방 조직 결손을 개선하고자 현재 널리 사용되고 있는 방법으로 지방이식수술이 있다. 자가 지방 전이술, 즉, 신체의 한 부분으로부터 외과적으로 지방 세포를 분리하여 다른 부분으로 재주입하는 것은 19세기 후반부터 수행되어 왔다. 얼굴로 자가 지방 세포를 전이하는 것은 그것이 영속적이라는 이점이 있으며, 자가 지방에 기반을 둔 주입은 보다 부드럽고 빛나는 재생된 얼굴을 초래한다. 반면에, 큰 문제점은 대부분 주입 후 지방 세포의 생존률의 다양성에 기인하는 결과의 비예측성이다. 예컨대, 지방이식수술 이후에 이식 부피의 40~60%가 다시 인체 내에 흡수된다는 것이 보고되었고, 지방 조직 영역(예를 들어, 얼굴 또는 가슴)에 주입된 지방 세포는 30~70%가 주로 혈관신생 이전 상태(pre-angiogenic state)에서 영양소 및 산소의 부재로 인하여 사멸하여 결국 지방줄기세포의 생착률은 20~30%에 불과하다. 또 다른 문제점은 분리하는 동안 지방 세포의 생존이다. 이 쟁점은 흡입된 바늘의 사용과 분리된 지방 세포의 전문화된 처리와 같은 다수의 기술에 의해 개선되었다. 이 기술의 추가적인 문제점은 이것이 많은 사람들에 있어서 가능하지 않은 충분한 양의 자가 지방 세포 물질 및 외과 수술을 요구한다는 것이다.

지방 조직 공학에서 보다 현대적인 방침은 새로운 지방세포의 증식을 야기하는 지방 유래 줄기세포(adipose derived stem cells; ADSC)의 주입이다. 그러나, 상기 공정은 지방 흡입, 전문화된 초원심분리법에 의한 지방세포로부터 ADSC의 분리, 선택적으로 분화 인자(differentiating factors)를 사용한 분리된 ADSC의 처리, 및 분화된 세포의 원하는 표적 조직 내 재주입을 포함하여, 장황하고 복잡하며 고가인 절차를 수반한다.

지방 세포의 세포 생존 문제로 인해 다양한 비세포(non-cellular) 충전제 물질이 구상되었다. 콜라겐은 2003년에 히알루론산이 출현하기 전까지 시장에서 가장 널리 사용되는 물질이었다. 콜라겐은 그것이 가진 소의 근원으로 인해 약한 면역 반응을 유도하며, 이 기술은 최근 생겨난 광우병 위험에 대한 인식과 함께 종결되었다. 히알루론산(Hyaluronic acid; HA)은 한참 후인 2003년에 FDA에 의해 승인되었음에도 불구하고 수년 동안 처방 외의(off prescription) 지방 조직 충전제로서 사용되어 왔다. 이것은 시장에서 가장 지배적인 충전제가 되었다. 현대의 상업적 HA는 증가된 반감기를 위해 디비닐 술폰계 화합물로 고도로 가교되고, 면역 감소를 위해 동물성 근원 대신 재조합형이다. HA의 근본적 문제점은 주입 이후 제한된 수명이다. 대부분의 HA계 충전제는 고작 3 내지 12개월 동안 지속된다. 실리콘계 보형물을 사용할 때와 마찬가지로, 유방 확대를 위한 HA의 사용은 유방촬영술에 기반한 암 검출을 방해한다. HA와 관련된 다른 잠재적인 쟁점은 보다 높은 빈도 및 위험의 육아종 발달, 소결절, 유방통, 보형물의 만져짐, 캡슐 수축, 가벼운 감염 및 농양 발생이다.

에스트로겐의 국지적이고 체계적인 투여 또한 에스트라디올 수용체의 지방 조직 생성 유도에 의해 여성의 유방 사이즈를 증가시키는 것으로 알려져 왔다. 스피로놀락톤은 그것의 항-안드로겐 특성으로 인해 유방 발달 및 여성화를 유도하는 것으로 알려져 있다.

새로운 지방 조직 생성에 대한 다른 접근법은 PLGA/PEG 마이크로스피어에 의한 인슐린 및 인슐린 유사 성장 인자-1 (IGF-1), 및 염기성 섬유아세포성장인자(bFGF)의 장기적인 국소 전달이며, 이것은 생체 내 랫트 모델에서 테스트되었다 (Yuksel et al., Plastic & Reconstructive surgery, vol. 105(5), April 2000, 1712 - 1720). 상기 테스트에서 비-지방세포 집단으로부터 지방 형성 분화(adipogenic differentiation)를 통한 새로운 지방조직 생성 가능성을 평가하기 위해 인슐린- 및 IGF-1- 함유 마이크로스피어가 랫트 복벽의 근육 근막 깊이 직접 투여되었다. 상기 마이크로스피어는 투여 부위에서 새로운 지방 조직의 생성을 유도하는 단백질의 장기적인 국소 전달을 제공하는 제어 방출(CR) 화합물로 작용한다.

따라서, 이러한 지방세포 또는 지방 유래 줄기 세로의 이식수술 또는 충전제의 투여 등을 대체하면서 제조 및 투여가 기술적으로 용이하고 최소한의 외과 처치를 요하며 안전하고 비용 효과적인 지방 조직 결손 치료 및 미용 지방 조직을 충분히 증가시킬 수 있는 방안이 요망된다.

1. 한국공개특허 제 10-2019-0079228호 (2019년07월05일 공개) 2. 한국등록특허 제 10-1940888호 (2019년01월15일 등록) 3. 한국등록특허 제 10-1236450호 (2013년02월18일 등록)

본 발명은 지방세포 또는 지방 유래 줄기 세로의 이식수술 또는 충전제의 투여 등을 대체하면서 제조 및 투여가 기술적으로 용이하고 최소한의 외과 처치를 요하며 안전하고 비용 효과적인 지방 조직 결손 치료 및 미용 지방 조직을 충분히 증가시킬 수 있는 펩타이드 및 이를 포함하는 지방세포 분화 촉진용 조성물을 제공하고자 한다.

상기 상술한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 플라즈미노겐 또는 그의 보존성 변이체 유래 연속적 아미노산으로 이루어진 하나 이상의 폴리펩타이드를 포함하는 지방세포 분화 촉진용 펩타이드를 제공한다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 폴리펩타이드는 플라즈미노겐 단백질의 전-활성화 영역(Pre-activation domain) 또는 플라즈미노겐 단백질의 C-말단 80개의 영역에서 유래한, 5 내지 50 개의 연속적 아미노산으로 이루어진다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 폴리펩타이드는 서열번호 4 내지 서열번호 7로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명은 서열번호 4 내지 서열번호 7로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어진 지방세포 분화 촉진용 펩타이드를 제공한다.

본 발명은 서열번호 4 내지 서열번호 7로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드를 제공한다.

본 발명은 또한 상기 상술한 본 발명에 따른 펩타이드를 유효성분을 포함하는 지방세포 분화 촉진용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 약학 조성물은 신체 기형, 외상후 흉터, 연부조직 함몰, 선천적 기형, 오목 가슴 기형, 가슴 비대칭, 폴란드 증후군, 헤미 신드롬(hemi syndrome), 클로브 증후군(CLOVE syndrome), 롬버그 증후군(Romberg syndrome), 인공 기관 근처 기형(deformities near prostheses), 지방 흡입 기형(liposuction deformities), 넓적다리 결손의 외형 재건, HIV의 지방이형성증, 가벼운 연인두 폐쇄부전(mild velopharyngeal insufficiency), 유방절제술 이후의 유방 복원, 외상 또는 기형 후 안면 복원 및 여드름 흉터로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 치료를 위한 것일 수 있다.

본 발명은 또한 상기 상술한 본 발명에 따른 펩타이드를 유효성분을 포함하는 지방세포 분화 촉진용 미용적 처치 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 미용적 처치 조성물은 미용적 지방 조직 확장, 미용적 지방 조직 보강 및 미용적 안면 보강으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 위한 것일 수 있다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 미용적 지방 조직 확장은 지방 조직 부피 확장, 또는 안면, 둔부 또는 유방의 조직에 대한 미용적 지방 조직 확장이다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 미용적 지방 조직 보강은 유방, 둔부, 안면, 생식기, 손, 다리, 의원성 기형, 인공 기관 근처 기형(deformities near prostheses), 지방 흡입 기형(liposuction deformities) 또는 임플란트 기형의 지방 조직 보강이다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 미용적 안면 보강은 볼, 눈썹, 이마, 미간, 입술, 입가 주름, 팔자 주름, 코, 눈가 주름 또는 눈꺼풀 꺼짐 기형에 대한 미용적 안면 보강이다.

본 발명은 또한 상기 상술한 본 발명에 따른 펩타이드를 유효성분을 포함하는 피부주름 개선 또는 피부탄력 증가용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 피부는 코, 광대, 볼, 이마, 팔자부위, 눈밑, 가슴 또는 엉덩이 부위의 피부일 수 있다.

본 발명은 또한 상기 상술한 본 발명에 따른 펩타이드로 코팅된 조직 수복 또는 지방세포 분화 촉진용 물질을 제공한다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 조직 수복 또는 지방세포 분화 촉진용 물질은 붕대, 스테리-스트립(steri-strip), 봉합사(sature), 스테이플(staple), 이식 조직(graft), 의료용 이식 조직편(medical implant), 생체-공학적 물질, 조직-공학처리된 스캐폴드, 및 미소섬유로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상일 수 있다.

본 발명에 따른 지방세포 분화 촉진용 펩타이드 및 이를 포함하는 조성물은 지방세포 또는 지방 유래 줄기 세로의 이식수술 또는 충전제의 투여 등을 대체하면서 제조 및 투여가 기술적으로 용이하고 최소한의 외과 처치를 요하며 안전하고 비용 효과적인 지방 조직 결손 치료 및 미용 지방 조직을 충분히 증가시킬 수 있는 효과를 발휘한다.

특히 본 발명은 유방 보형물 필러 뿐 아니라 실리콘 보형물 및 더말 필러 등 최근 자가지방줄기세포 적용 범위가 가능한 모든 제품에 활용가능하고, 나아가 기존 제품에 추가만 하여 가능하여 이용의 편의성과 적용 범위가 매우 넓다.

도 1은 플라즈미노겐 단백질의 입체 구조이다.
도 2는 줄기세포와 지방 전구세포의 공배양을 통하여 줄기세포의 paracrine 효능 검증한 결과이다(실시예 1).
도 3은 본 발명의 지방세포 분화 촉진 효능을 확인하는 구체적인 실험 과정을 나타낸 도면이다.
도 4a 내지 4c는 플라스미노겐의 지방세포 분화 효능을 확인한 실험 결과이다(실시예 2).
도 5는 본 발명에 따른 펩타이드의 지방세포 분화 효능을 확인한 결과이다(실시예 3).
도 6은 본 발명에 따른 펩타이드의 지방세포 분화 관련 유전자의 발현에 대한 영향을 확인한 결과이다(실시예 3).

상기 상술한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 플라즈미노겐 또는 그의 보존성 변이체 유래 연속적 아미노산으로 이루어진 하나 이상의 폴리펩타이드를 포함하는 지방세포 분화 촉진용 펩타이드 및 이를 유효성분으로 포함하는 조성물을 제공하는 것을 특징으로 한다. 이하 도면을 참조하여 본 발명을 구체적으로 설명한다.

본 발명은 플라즈미노겐 또는 그의 보존성 변이체 유래 연속적 아미노산으로 이루어진 하나 이상의 폴리펩타이드를 포함하는 지방세포 분화 촉진용 펩타이드를 제공한다.

용어 "펩타이드"는, 특별히 그 길이가 제한되지 않지만 그 길이가 전형적으로 약 5 내지 약 50 개 범위, 구체적으로는 10 내지 30개 범위, 더 구체적으로는 14 내지 20개 범위의 아미노산인 아미노산 잔기의 폴리머를 의미한다.

펩타이드의 아미노산 잔기는 "L-형" 아미노산 잔기, "D" 아미노산 잔기, 또는 이들의 조합일 수 있다. 펩타이드 서열의 L-, D-, 또는 β-아미노산 버전 뿐만 아니라 레트로, 인버소, 및 레트로-인버소 동형체가 포함된다. "β-펩타이드"는 "β 아미노산"을 포함하고, 이것은 20 개의 표준 생물학적 아미노산에서와 같이 α-탄소보다는 β 탄소에 결합된 그것의 아미노 그룹이다.

특정 단백질 또는 펩타이드가 본 발명에서 언급될 때, 그것의 변이체, 유도체, 및 단편도 포함된다. 상기 변이체 및 유도체는 당업자들에게 잘 알려져 있으며, 아미노산 서열 변형을 포함할 수 있다. 예를 들어 아미노산 서열 변형은 전형적으로 하나 또는 그 이상의 다음 세 부류에 속한다: 치환, 삽입 또는 결실 변이체. 삽입은 아미노 및/또는 카르복실 말단 융합뿐 아니라 서열내에 하나 또는 다수의 아미노산 잔기가 삽입되는 것을 포함한다. 삽입은 통상 아미노 또는 카르복실 말단 융합의 삽입보다 작을 것인데, 예를 들면 하나 내지 4개의 잔기 정도이다. 결실은 단백질 서열로부터 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기가 제거되는 것이 특징이다. 이들 변이체는 통상 단백질을 코드화하는 DNA에 있는 뉴클레오티드가 부위 특정 돌연변이생성됨으로써, 변이체를 코드화하는 DNA가 생성되고, 그런 다음 재조합 세포 배양물 중에 DNA를 발현함으로써 제조된다. 공지된 서열을 가지는 DNA에서 예정된 부위에 치환 돌연변이를 생성하는 기법들은 잘 알려져 있으며, 예를 들면 M13 프라이머 돌연변이생성 및 PCR 돌연변이 생성이 있다. 아미노산 치환은 전형적으로 하나의 잔기에서 일어나지만, 상이한 많은 위치에서 한 번에 일어날 수 있으며; 삽입은 보통 약 1 내지 10개의 아미노산 잔기 정도에서 일어날 것이다. 결실 또는 삽입은 바람직하게는 인접한 쌍에서 일어난다. 즉 2개의 잔기가 결실되거나 2개의 잔기가 삽입된다. 치환, 결실, 삽입 또는 그것들의 어떠한 조합이든지 최종 구성물을 얻기 위해 조합될 수 있다. 돌연변이는 리딩 프레임 밖의 서열에서 일어나서는 안 되며, 바람직하게는 mRNA의 이차 구조에서 그러한 변화가 바람직하지 않은 한 이차 mRNA 구조를 생성할 수 있는 상보 영역을 생성하지 않을 것이다. 치환 변이체는 최소한 하나의 잔기가 제거되었거나 상이한 잔기가 그 자리에 삽입된 것들이다. 그러한 치환은 후술의 보존적 치환으로 언급된다.

용어 "보존적 치환"은 펩타이드의 활성(예를 들면, 지방세포 분화 촉진 활성)을 실질적으로 변화시키지 않는 아미노산 치환을 지칭하기 위해 사용된다. 종래 보존적 아미노산 치환은 하나의 아미노산을 유사한 구조 및 화학적 특성(예를 들면, 전하 또는 소수성)을 갖는 또 다른 아미노산으로 치환하는 것을 포함한다. 그러한 종래의 치환은, 비제한적으로, 하기를 포함한다:

1) 글리신 (G)/알라닌 (A),

2) 아르기닌 (R)/라이신 (K),

3) 세린 (S)/트레오닌 (T)/티로신 (Y),

4) 류신 (L)/이소류신 (I)/발린 (V),

5) 아스파르트산 (D)/글루탐산 (E),

6) 글루타민 (Q)/아스파라긴 (N), 및

7) 페닐알라닌 (F)/티로신 (Y)/트립토판 (W).

다른 기능적 보존적 치환은, 비제한적으로

8) 글리신 (G)/알라닌 (A)/프롤린 (P),

9) 티로신 (Y)/히스티딘 (H),

10) 아르기닌 (R)/라이신 (K)/히스티딘 (H),

11) 세린 (S)/트레오닌 (T)/시스테인 (C),

12) 류신 (L)/이소류신 (I)/발린 (V)/메티오닌 (M),

13) 알라닌 (A)/세린 (S)/트레오닌 (T)/ 메티오닌 (M)/글리신 (G), 및

14) 메티오닌 (M)/라이신 (K) (소수성 조건 하에)를 포함한다.

보존적 치환은 또한 표준 아미노산이 표준 아미노산과 최소한도로 상이한 비-표준(예를 들면, 드문, 합성, 등) 아미노산으로 대체된 "유사 치환"을 포함한다. 그러한 유사 치환은 표준 아미노산으로부터 합성적으로 유래될 수 있거나, 이성질체이거나, 또는 대사물 전구체이다.

그러한 "유사 치환"의 예는, 비제한적으로,

1) Lys→오르니틴 (Orn),

2) Leu→노르류신,

3) Lys→Lys[TFA],

4) Phe→페닐글리신, 및

5) δ-아미노 부틸글리신→ξ-아미노 헥실글리신(여기서 [TFA]는 트리플루오로아세틸을 지칭함)을 포함한다.

보존적 치환은 또한 하나의 아미노산을 공통의 특성을 갖는 또 다른 아미노산으로 대체하는 것을 포함한다. 그러한 치환은 하기 하나의 그룹 중 하나의 아미노산을 동일한 그룹 내의 또 다른 아미노산으로 치환하는 것을 포함한다:

1) 방향족 아미노산: 페닐알라닌 (F)/티로신 (Y)/히스티딘 (H)/ 트립토판 (W);

2) 지방족 아미노산: 이소류신 (I)/발린 (V)/류신(L)/알라닌 (A)/글리신 (G);

3) 양전하를 띠는 아미노산: 히스티딘 (H)/라이신 (K)/아르기닌 (R);

4) 음전하를 띠는 아미노산: 아스파르테이트 (D)/글루타메이트 (E); 및

5) 매우 작은 아미노산: 시스테인 (C)/알라닌 (A)/글리신 (G)/세린 (S).

보존적 치환은 또한 전하를 띠지 않는 극성 측쇄를 갖는 아미노산, 즉, 세린 (S)/트레오닌 (T)/아스파라긴 (N)/글루타민 (Q)/티로신 (Y)/시스테인(S)의 치환을 포함한다. 아미노산 서열이 본 발명에 개시되어 있는 경우, 상기 확인된 하나 이상의 보존적 치환을 포함하는 아미노산 서열들이 또한 고려된다.

용어 "보존성 변이체"는 본 발명의 펩타이드와 대비하여 그의 서열 내 하나 이상의 아미노산이 상이하지만, 이의 필수적인 특성(예를 들면, 지방세포 분화 능력)을 유지하는 펩타이드를 지칭한다.

일반적으로, 변이체는 전체적으로 아주 유사하고, 본 발명의 펩타이드 서열과 많은 영역에서 동일할 수 있다. 보존적 아미노산 치환 외에도, 변이체 펩타이드는 (i) 하나 이상의 비-보존된 아미노산 잔기를 이용한 치환(상기 치환된 아미노산 잔기는 표준 아미노산이거나 표준 아미노산이 아닐 수 있고 천연 발생 아미노산이거나 천연 발생 아미노산이 아닐 수 있음) 및/또는 (ii) 하나 이상의 비-표준 또는 비-천연 발생 아미노산 잔기를 이용한 보존적 치환, 및/또는 (iii) 펩타이드의 안정성 및/또는 용해도를 증가시키는 화합물(예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜)과 같은, 또 다른 화합물과의 펩타이드의 융합, 및/또는 (iv) 예를 들면, IgG Fc 융합 영역 펩타이드, 또는 리더 또는 분비성 서열, 또는 정제를 촉진하는 서열과 같은, 부가적인 아미노산과의 펩타이드의 융합을 포함할 수 있다. 그러한 변이체 펩타이드를 만드는 방법은 당해 분야의 숙련가의 기술 내에 속한다. 예를 들면, 전하를 띠는 아미노산을 다른 전하를 띠거나 중성인 아미노산과 아미노산으로 치환한 것을 함유하는 펩타이드 변이체는 개선된 특성, 예컨대 낮은 응집을 갖는 펩타이드를 생산할 수 있다. 약제학적 제형의 응집은 응집물의 면역원성 활성으로 인해 활성을 낮추고 소거능을 증가시킨다(예를 들면, Pinckard 등 (1967) Clin. Exp. Immunol. 2: 331-340; Robbins 등 (1987) Diabetes 36: 838-845; Cleland 등 (1993) Crit. Rev. Therapeutic Drug Carrier Systems, 10: 307-377 참고). 보존적 치환에 대한 추가의 정보는 다른 것들 중에서도 아래의 문헌들에서 찾아볼 수 있다: Ben-Bassat et al., (J. Bacteriol. 169:751-7, 1987), O'Regan et al., (Gene 77:237-51, 1989), Sahin-Toth et al., (Protein Sci. 3:240-7, 1994), Hochuli et al., (Bio/Technology 6:1321-5, 1988) 및 유전학과 분자 생물학의 표준 텍스트북.

본 발명의 플라즈미노겐은 다양한 종으로부터 유래할 수 있고, 예를 들면, 쥐 플라즈미노겐, 인간 플라즈미노겐, 붉은 털 플라즈미노겐, 돼지 플라즈미노겐, 개 플라즈미노겐 및 소 플라즈미노겐일 수 있고, 바람직하게는 인간 플라즈미노겐일 수 있다.

인간 플라즈미노겐 단백질의 아미노산 서열은 서열목록 1에 기재되어 있고, 그의 입체 구조는 도 1과 같다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 폴리펩타이드는 플라즈미노겐 단백질의 전-활성화 도메인(Pre-activation domain, PAD, activation peptide) 또는 플라즈미노겐 단백질의 C-말단 80개의 영역에서 유래한, 5 내지 50 개의 연속적 아미노산으로 이루어진 것일 수 있다.

상기 플라즈미노겐 단백질의 전-활성화 도메인(Pre-activation domain, PAD)은 활성화 펩타이드(activation peptide)로도 지칭되며, 플라즈미노겐의 안정성과 매우 연관되어 있는 것으로 알려져 있다. 상기 서열목록 1에 기재된 플라즈미노겐 단백질에서 전-활성화 도메인은 아미노산 서열 중 20번째 부터 97번째 아미노산(크기 - 78 mer.)까지 해당하고, 구체적으로 다음의 서열을 갖는다.

EPLDDYVNTQ GASLFSVTKK QLGAGSIEEC AAKCEEDEEF TCRAFQYHSK EQQCVIMAEN RKSSIIIRMR DVVLFEK (서열목록 2)

상기 플라즈미노겐 단백질의 C-말단 80개 영역은 C-말단에서부터 80개에 해당하는 연속적 아미노산 서열이 위치하는 영역으로, 구체적으로 다음의 서열을 갖는다.

RYEFLNGRVQ STELCAGHLA GGTDSCQGDS GGPLVCFEKD KYILQGVTSW GLGCARPNKP GVYVRVSRFV TWIEGVMRNN (서열목록 3)

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 폴리펩타이드는 서열번호 4 내지 서열번호 7로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있다.

서열번호	서열	크기(mer.)
4	LGAGSIEECAAKCEE	15
5	IEECAAKCEEDEEFT	15
6	LGAGSIEECAAKCEEDEEFT	20
7	VSRFVTWIEGVMRN	14

용어 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.

본 발명에 따른 약학 조성물은 상기 조성물 이외에 약학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약학 조성물에 포함되는 약학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약학 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed.,1995)에 상세히 기재되어 있다.

본 발명의 약학 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며 바람직하게는 비경구 투여, 보다 바람직하게는 도포 또는 주입에 의한 국부 투여 방식으로 적용될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물의 투여량은 성인 기준으로 0.001-100 ㎎/kg 범위 내이다. 또한 외용제인 경우에는 성인 기준으로 1.0 내지 3.0 ml의 양으로 1일 1회 내지 5회 도포하여 1개월 이상 계속 하는 것이 좋다. 다만, 상기 투여량은 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다.

본 발명의 약학 조성물은 당분야의 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이 때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나 엑시르제, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물은 지방유래줄기세포의 증식 및 지방세포로의 분화를 촉진함으로써 피하지방층을 구성하거나 지방세포를 제공하여 피부부피를 수복 및 확대할 수 있으며, 피부에 대하여 볼륨과 탄력을 부여하고 주름을 개선시키는 효능을 제공한다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 미용적 지방 조직 확장, 미용적 지방 조직 보강 및 미용적 안면 보강으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 미용적 처치를 위해 사용하기 위한 것이다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 지방 조직 부피 확장, 또는 안면, 둔부 또는 유방의 조직에 대한 미용적 지방 조직 확장을 위해 사용하기 위한 것이다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 둔부, 안면, 생식기, 손, 다리, 의원성 기형, 인공 기관 근처 기형(deformities near prostheses), 지방 흡입 기형(liposuction deformities) 또는 임플란트 기형의 지방 조직 보강의 미용적 지방 조직 보강을 위해 사용하기 위한 것이다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 볼, 눈썹, 이마, 미간, 입술, 입가 주름, 팔자 주름, 코, 눈가 주름 또는 눈꺼풀 꺼짐 기형에 대한 미용적 안면 보강을 위해 사용하기 위한 것이다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 영양 크림, 수렴 화장수, 유연 화장수, 로션, 에센스, 영양젤 또는 마사지 크림의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전 분, 트라칸트 검, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 토스, 탈크, 실리카, 알루미늄히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 가용화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 검등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 예를 들면 조성물은 체외로, 연부 조직 내로, 두개골 내로, 질 내로, 항문 내로, 피하로, 피부 안으로, 심장 내로, 위 내로, 정맥 내로, 근육 내로, 복강내 주사에 의해, 경피적으로, 비강 안으로, 또는 흡입에 의하여 투여될 수 있다. 바람직하게는 도포 또는 주입에 의한 국부 투여 방식으로 적용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 투여시 단독 또는 혼합하여 투여할 수 있다. 예를 들면 본 발명의 조성물을 단독으로 주사할 수 있다. 또는 본 발명의 조성물을 다른 의료 물질, 예를 들면 실리콘 보형물 및 더말 필러 같은 조직 대체물과 혼합하여 주사하거나, 또는 본 발명의 조성물을 다른 의료 물질 위에 코팅하여 체 내 도포하거나 삽입하여 투여할 수 있다.

본 발명의 조성물은 지방 조직 결손 치료 및 미용 지방 조직 보강을 위해, 예컨대 주사에 의해, 바람직하게는 다수의 고르게 분산되는 주사에 의해 조직 내로 국소 투여될 수 있다.

상술한 본 발명에 따른 펩타이드 및 이를 포함하는 조성물은 지방유래줄기세포의 증식 및 지방세포로의 분화를 촉진함으로써 피하지방층을 구성하거나 지방세포를 제공하여 지방조직이 증가됨으로써 함몰되거나 확대가 필요한 대상의 연부 조직 및/또는 피부 조직의 부피를 수복 및 확대시킬 수 있다. 예를 들어, 선천적으로 함몰되거나 또는 사고 또는 수술 등에 의해 함몰되거나 상처가 난 피부의 부피를 수복시키거나 확대시킬 수 있다. 또한, 미용적인 이유로 지방조직의 증가가 요구되는 부위, 예를 들어 코, 광대, 볼, 이마, 팔자부위, 눈밑 등과 같은 얼굴뿐만 아니라 가슴, 엉덩이 부위 등과 같은 신체부위의 피부부피를 수복 및 확대시킬 수 있다.

이에 본 발명의 조성물은 표적 조직의 성장을 보다 촉진하기 위해, 추가의 활성 화합물, 바람직하게는 지방 세포의 크기 및 수를 증가시키는, 즉 지방 전구세포(pre-adipocytes)의 지방세포로의 세포분화 및 지방세포 부피 성장과 같은 지방세포 성장 및 지질생성을 촉진하는, 지방 세포 성장 인자 화합물(fat cell growth effector compounds)을 추가로 포함할 수 있다.

용어 "대상," "개인," 및 "환자"는 상호교환적으로 사용될 수 있고 포유동물, 바람직하게는 인간 또는 비-인간 영장류, 뿐만 아니라 가축(예를 들면, 갯과 또는 고양이), 실험실 포유동물(예를 들면, 마우스, 랫트, 토끼, 햄스터, 기니아 피그), 및 농업 포유동물(예를 들면, 말, 소, 돼지, 양, 카프라, 등)을 지칭한다. 대상은 의사, 간호사, 또는 병원 내의 다른 의료계 종사자의 보호 하에, 외래 환자로서, 또는 임상 문맥 내에서, 인간(예를 들면, 성인 남성, 성인 여성, 청소년 남성, 청소년 여성, 남성 어린이, 여성 어린이)일 수 있다. 대안적으로, 상기 대상은 의사, 간호사, 또는 다른 의료계 종사자의 보호 또는 처방 하에 없을 수 있다.

또한 본 발명은 상기 상술한 본 발명에 따른 펩타이드로 코팅된 조직 수복 또는 지방세포 분화 촉진용 물질을 제공한다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 상술한 본 발명에 따른 펩타이드로 코팅된 붕대, 스테리-스트립(steri-strip), 봉합사(sature), 스테이플(staple), 이식 조직(graft), 의료용 이식 조직편(medical implant), 생체-공학적 물질, 조직-공학처리된 스캐폴드, 및 미소섬유로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상일 수 있다.

예를 들어, 물질 (예컨대 붕대, 스테리-스트립, 봉합사, 스테이플, 이식편)은 본 발명의 펩타이드에 10-200μM의 농도 범위로 침지될 수 있다. 그런 다음 물질은 건조되고 멸균 용기 안에 밀봉된다. 물질은 또한 10-200μM 농도의 펩타이드를 함유하는 4℃의 액체 10-30% 플루로닉 겔에 침지될 수 있다. 그런 다음 물질은 대략 실온의 온도가 되어 겔이 중합되어, 결과적으로 펩타이드-침지된 겔 코팅이 물질을 둘러싸게 되고, 그것은 멸균 용기 안에 밀봉될 수 있다펩타이드는 또한 교차-결합할 수 있는 하이드로겔 시스템, 예컨대 폴리(락틱-코-글리콜산)(PLGA) 또는 폴리우레탄안에 통합된 후, 상처를 치료하기 위한 물질 (예컨대 붕대, 스테리-스트립, 봉합사, 스테이플, 이식편)로 형성된다.

또한 본 발명의 일 구현예에 따르면, 환자에게 이식하기 전에 본 발명의 펩타이드로 코팅된 의료용 이식 조직 조각을 제공한다. 예를 들어 그런 이식 조직 조각의 수술에서 공통적인 문제는 관심 조직의 원하지 않는 경화, 수축 및 궁극적으로는 기형을 유도하는 반흔 조직 형성으로부터 이식 조직 조각 주변의 수축 캡슐이 형성된다는 것이다. 본 발명의 펩타이드를 이식 조직 조각에 또는 그 위에 사용하는 것은 이런 기형을 감소 또는 방지할 수 있다. 의료용 이식 조직 조각의 구현예로 사지의 인공 보철물, 가슴 이식 조직 조각, 음경의 이식 조직 조각, 고환의 이식 조직 조각, 의안, 안면 이식 조직 조각, 인공 관절, 심장 판 인공보철물, 혈관 인공보철물, 의치, 안면인공보철물, 명칭이 붙은 디스크 판, 케이지에 들어있는 거환 밸브 (caged ball valve), 귀 인공보철물, 코 인공보철물, 심장 박동 조절 장치, 인공귀, 및 피부 대체물 (예컨대 돼지의 이종성 이식편/돼지 피부, BIOBRANE, 배양된 케라틴 생성세포)이 있으나, 이에 제한되지 않는다. 예를 들면, 본 발명의 펩타이드를 적절한 희석제 및 경화제와 혼합한 조성물을 실리콘 보형물 및 더말 필러 위에 코팅하여 체내 삽입하여 투여할 수 있다.

이하, 실시 예를 통해서 본 발명을 보다 상세히 설명하기로 한다. 하지만, 이들은 본 발명을 보다 상세하게 설명하기 위한 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 이에 한정되는 것은 아니다.

[실시예 1] 지방세포 분화 촉진의 확인

줄기세포(MSC)와 지방 전구세포(Preadipocyte)를 후술된 방법으로 공배양하여 지방세포 분화 진행하여 지방세포 분화 촉진에 대한 효과를 확인하였다. 구체적으로 공배양은 다음의 배양 조건에서 수행하였다.

구분	하층		상층
구분	세포	배지	세포	배지
실험예1	지방분화세포	분화배지	-	성장배지
실험예2	지방분화세포	분화배지	-	분화배지
실험예3	지방분화세포	분화배지	줄기세포	성장배지
실험예4	지방분화세포	분화배지	줄기세포	분화배지

지방세포 분화에 효과가 있었던 방식인 분화배지+성장배지(Preadipocyte+MSC)에서 지방세포 분화를 진행한 후, 하단 웰의 배지 회수하여 분비 인자를 확인하였다. 구체적으로 다음의 과정으로 수행하였다.

1) 세포배양 Cell culture

지방 전구세포(Lonza, PT-5020)의 체외배양은 10% FBS, 1% 페니실린-스트립토마이신, 4mM L-글루타민이 첨가된 DMEM/hign glucose(Gibco) 배양액을 기본배양으로 하여 5% CO₂, 37℃의 조건으로 배양기에서 배양한다. 배양액은 3-4일에 한번 씩 교체한다.

2) 지방세포 분화

배양된 세포는 Oil Red O 염색 실험을 위해서 12 well 배양 접시에 1X10⁵ cells/well이 되도록 준비한다. 세포 안정화를 위하여 48시간 동안 부착하고, 이후 지방 전구세포가 지방세포로 분화되도록 지방분화제(Gibco, A10070-01)를 처리한다. 지방분화제는 2일 마다 교체한다. 이후 2-3주 동안 지방세포로의 분화를 확인한다.

실시간 중합효소연쇄반응 실험을 위하여 100mm 배양접시에 지방 전구세포가 90-100% 밀도가 되도록 준비한다. 지방 전구세포가 지방세포로 분화되도록 지방분화제를 처리한다. 지방분화제는 2일 마다 교체한다. 이후 1-2주 동안 지방세포로의 분화를 확인한다.

3) Oil Red O 염색

2-3주 동안 지방세포로 분화가 된 세포는 배지를 제거하고, PBS로 1회 세척한다. 4% 파라포름알데하이드를 넣고, 5분 동안 반응 후 용액을 제거한다. 새로운 4% 파라포름알데하이드를 넣고 1시간 동안 반응하여 세포를 고정시킨다 용액을 제거하고 60% 이소프로판올로 1회 세척한다. 용액 제거 후 이소프로판올을 완전히 건조시킨다. 60% 이소프로판올에 Oil Red O 파우더를 밤새 녹인 용액을 처리하여 지방에 염색을 한다. 1시간 동안 염색 후 염색액을 제거하고 멸균증류수로 3~4회 세척한다. 염색된 세포는 광학전자현미경을 이용하여 육안상으로 결과를 확인한다. 정량을 위해 멸균증류수를 제거하고 100% 이소프로판올을 가하여 염색 시약을 추출한 후 ELISA를 사용하여 500nm에서 흡광도를 측정한다.

4) RNA 추출

100mm 배양 접시를 PBS로 2회 세척하고, 배양 접시에 PBS를 넣고 스크레이퍼를 이용하여 세포를 긁어 모은다. 세포는 1.5ml 튜브에 1300rpm으로 3분 동안 원심 분리하여 세포를 모은다. PBS를 제거하고 트라이졸을 처리하고 파이펫팅을 하여 반응시킨다. 클로로포름을 추가하여 충분히 섞고, 15분 동안 얼음에 넣고 반응 시킨다. 반응 시킨 튜브는 12000g에서 15분 동안 원심분리를 통하여 층을 분리한다. 분리된 층에서 상층액만을 조심스럽게 회수하여 새로운 튜브에 옮긴다. 이소프로판올을 추가하여 섞고, 10분 동안 얼음에 넣고 반응 후 4℃에서 10분 동안 12000g로 원심 분리한다. 침전물만 나두고 상층액은 최대한 제거한다. 이물질을 제거하기 위하여 70% 에탄올을 1ml 넣고 4~5차례 뒤집어 준다. 에탄올을 최대한 제거하고, DEPC를 넣어 RNA를 녹여낸다. RNA 추출 농도와 질은 나도-드롭을 이용하여 확인한다.

5) cDNA 합성

추출된 RNA를 총 2ug 농도로 맞춰 넣고, Oligo dT 프라이머, nuclease-free를 넣어 총 12ul 양으로 만든다. 용액이 충분히 섞일 수 있게 볼텍스 후, 65℃에서 5분 동안 반응한다. 반응 완료된 샘플은 얼음에 박아서 식힌다. 반응시약, RNase Inhibitor, dNTP mix, RevertAid M-MuLV RT 시약을 넣고 조심스럽게 섞어준다. 42℃에서 60분 동안 반응하여, cDNA를 합성 시킨다. 반응을 끝내기 위하여 70℃에서 5분 동안 반응한다.

6) 실시간 중합효소연쇄반응

Taq, Forward/Reverse Primer, ROX dye (Takara, RR820A), cDNA, 멸균증류수를 넣고 잘 섞어 준다. 이때 primer 인자는 ADIPOQ, FABPA, CEBPA, PPARγ를 확인한다. 중합효소연쇄반응을 위하여 유전자증폭기(AB, ViiA7)를 이용하여 denaturation, annealing, elongation 반응을 시킨다. 이때 실시간으로 증폭되는 값을 측정 하고, ΔΔCT 값을 기준으로 결과 값을 평가한다.

실험 결과, 도 2에 나타난 것처럼, 지방 전구세포를 줄기세포(MSC)와 공배양하지 않은 실험예 1(도 2A) 및 실험예 2(도 2B)는 물론 줄기세포를 분화배지에서 공배양한 실험예 4(도 2D) 보다 줄기세포를 성장배지에서 공배양한 경우 가장 우수한 분비인자 증가를 확인할 수 있었다(도 2 참조). 이를 통해 지방 전구세포 분화에 대한 줄기세포의 파라크린 효능을 확인할 수 있었다.

[실시예 2] 각 단백질별 지방세포 분화 효능 확인

액티빈 A(Activin A), 그렐린(Ghrelin), 갈렉틴-3(Galectin-3), DAN, 데코린(Decorin), 피브로넥틴(Fibronectin), SERPINA1, 합토글로빈(Haptoglobin), 플라즈미노겐(Plasminogen), ACVR2A에 대하여 지방 전구세포를 지방세포 분화 유도하여 지방세포 분화 효능을 확인하였다.

기본적으로 실시예 1에서의 지방세포 분화능 평가와 동일한 실험방법에 의하되, 지방분화제와 함께 상기 단백질을 함께 처리하였다. 구체적으로, 지방 전구세포를 2일 동안 배양한 후, 분화배지 및 상기 단백질 각각을 처리하여 1~2일마다 배지 교체하며 2~3주 동안 배양하였다. 배지를 제거한 후 포르말린으로 고정하고, 증류수로 세척을 3회 수행하였다. 이후 Oil Red O solution을 15분 동안 처리한 후 이소프로판올로 분리한 후 500nm에서 흡광도를 측정하여 지방세포 분화 정도를 평가하였다(도 3 참조).

실험 결과, 플라즈미노겐을 처리한 경우 우수한 지방세포 분화 효과를 보였으며(도 4a 참조), 이러한 플라즈미노겐의 지방세포 분화 효과는 대조군은 물론 피브로넥틴과 대비하여 매우 우수한 것을 알 수 있다(도 4b 참조). 구체적으로 플라즈미노겐에서 약 20% 증가하였다.

또한, 플라즈미노겐을 세포에 처리시 50, 100, 200 ng/ml의 농도별로 처리한 결과, 플라즈미노겐을 처리한 모든 군에서 지방세포 분화 효과가 증가하였고 그 중에서 특히 50ng/ml를 처리한 경우가 가장 우수하였다(도 4c 참조)

[실시예 3] 플라즈미노겐 유래 펩타이드의 지방세포 분화 효능 확인

플라즈미노겐 단백질로부터 유래한 다음의 서열로 이루어진 펩타이드를 제작하여 이의 지방세포 분화 효능을 확인하였다.

펩타이드	서열	서열번호	크기(mer.)
1	LGAGSIEECAAKCEE	4	15
2	IEECAAKCEEDEEFT	5	15
3	LGAGSIEECAAKCEEDEEFT	6	20
4	VSRFVTWIEGVMRN	7	14

상기에서 제작한 펩타이드 1 내지 4에 대하여 실시예 2에서 수행한 지방세포 분화 효능 평가와 동일하되 단백질 대신 상기 펩타이드를 각각 처리하여 지방세포 분화 효능을 확인하였다.

실험 결과, 펩타이드 1 내지 4 모두에서 지방세포 분화 촉진 효능을 확인할 수 있었고, 그 중에서 대조군 대비 분화 초반(2주)에는 펩타이드 3는 약 60%, 분화 후반(3주)에는 펩타이드 1은 약 40%의 지방세포 분화 촉진 효능이 가장 우수하였다(도 5 참조).

한편, 지방세포 분화 관련 유전자 발현 정도를 확인할 결과, 대조군 대비하여 펩타이드 1을 처리한 경우 대조군 대비하여 ADIPQQ는 약 16%, CEPBA는 약 29% 유전자 발현이 증가하여 유의적으로 높은 것을 확인할 수 있었다(도 6 참조).

이상에서, 출원인은 본 발명의 바람직한 실시 예들을 설명하였지만, 이와 같은 실시예들은 본 발명의 기술적 사상을 구현하는 일 실시예일 뿐이며 본 발명의 기술적 사상을 구현하는 한 어떠한 변경예 또는 수정예도 본 발명의 범위에 속하는 것으로 해석되어야 한다.

<110> Seoul National University R&DB Foundation <120> Peptides for promoting adipocyte differentiation and composition for promoting adipocyte differentiation comprising the same <130> 19P0461 <160> 7 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 810 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> SIGNAL <222> (1)..(19) <220> <221> CHAIN <222> (20)..(810) <223> Plasminogen <220> <221> PEPTIDE <222> (20)..(97) <223> Activation peptide <220> <221> CHAIN <222> (20)..(580) <223> Plasmin heavy chain A <220> <221> CHAIN <222> (580)..(810) <223> Plasmin light chain B <220> <221> HELIX <222> (46)..(55) <223> Helix <220> <221> HELIX <222> (800)..(809) <223> Helix <400> 1 Met Glu His Lys Glu Val Val Leu Leu Leu Leu Leu Phe Leu Lys Ser 1 5 10 15 Gly Gln Gly Glu Pro Leu Asp Asp Tyr Val Asn Thr Gln Gly Ala Ser 20 25 30 Leu Phe Ser Val Thr Lys Lys Gln Leu Gly Ala Gly Ser Ile Glu Glu 35 40 45 Cys Ala Ala Lys Cys Glu Glu Asp Glu Glu Phe Thr Cys Arg Ala Phe 50 55 60 Gln Tyr His Ser Lys Glu Gln Gln Cys Val Ile Met Ala Glu Asn Arg 65 70 75 80 Lys Ser Ser Ile Ile Ile Arg Met Arg Asp Val Val Leu Phe Glu Lys 85 90 95 Lys Val Tyr Leu Ser Glu Cys Lys Thr Gly Asn Gly Lys Asn Tyr Arg 100 105 110 Gly Thr Met Ser Lys Thr Lys Asn Gly Ile Thr Cys Gln Lys Trp Ser 115 120 125 Ser Thr Ser Pro His Arg Pro Arg Phe Ser Pro Ala Thr His Pro Ser 130 135 140 Glu Gly Leu Glu Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Asp Pro Gln 145 150 155 160 Gly Pro Trp Cys Tyr Thr Thr Asp Pro Glu Lys Arg Tyr Asp Tyr Cys 165 170 175 Asp Ile Leu Glu Cys Glu Glu Glu Cys Met His Cys Ser Gly Glu Asn 180 185 190 Tyr Asp Gly Lys Ile Ser Lys Thr Met Ser Gly Leu Glu Cys Gln Ala 195 200 205 Trp Asp Ser Gln Ser Pro His Ala His Gly Tyr Ile Pro Ser Lys Phe 210 215 220 Pro Asn Lys Asn Leu Lys Lys Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Arg Glu 225 230 235 240 Leu Arg Pro Trp Cys Phe Thr Thr Asp Pro Asn Lys Arg Trp Glu Leu 245 250 255 Cys Asp Ile Pro Arg Cys Thr Thr Pro Pro Pro Ser Ser Gly Pro Thr 260 265 270 Tyr Gln Cys Leu Lys Gly Thr Gly Glu Asn Tyr Arg Gly Asn Val Ala 275 280 285 Val Thr Val Ser Gly His Thr Cys Gln His Trp Ser Ala Gln Thr Pro 290 295 300 His Thr His Asn Arg Thr Pro Glu Asn Phe Pro Cys Lys Asn Leu Asp 305 310 315 320 Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Gly Lys Arg Ala Pro Trp Cys His 325 330 335 Thr Thr Asn Ser Gln Val Arg Trp Glu Tyr Cys Lys Ile Pro Ser Cys 340 345 350 Asp Ser Ser Pro Val Ser Thr Glu Gln Leu Ala Pro Thr Ala Pro Pro 355 360 365 Glu Leu Thr Pro Val Val Gln Asp Cys Tyr His Gly Asp Gly Gln Ser 370 375 380 Tyr Arg Gly Thr Ser Ser Thr Thr Thr Thr Gly Lys Lys Cys Gln Ser 385 390 395 400 Trp Ser Ser Met Thr Pro His Arg His Gln Lys Thr Pro Glu Asn Tyr 405 410 415 Pro Asn Ala Gly Leu Thr Met Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Ala Asp 420 425 430 Lys Gly Pro Trp Cys Phe Thr Thr Asp Pro Ser Val Arg Trp Glu Tyr 435 440 445 Cys Asn Leu Lys Lys Cys Ser Gly Thr Glu Ala Ser Val Val Ala Pro 450 455 460 Pro Pro Val Val Leu Leu Pro Asp Val Glu Thr Pro Ser Glu Glu Asp 465 470 475 480 Cys Met Phe Gly Asn Gly Lys Gly Tyr Arg Gly Lys Arg Ala Thr Thr 485 490 495 Val Thr Gly Thr Pro Cys Gln Asp Trp Ala Ala Gln Glu Pro His Arg 500 505 510 His Ser Ile Phe Thr Pro Glu Thr Asn Pro Arg Ala Gly Leu Glu Lys 515 520 525 Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Gly Asp Val Gly Gly Pro Trp Cys Tyr 530 535 540 Thr Thr Asn Pro Arg Lys Leu Tyr Asp Tyr Cys Asp Val Pro Gln Cys 545 550 555 560 Ala Ala Pro Ser Phe Asp Cys Gly Lys Pro Gln Val Glu Pro Lys Lys 565 570 575 Cys Pro Gly Arg Val Val Gly Gly Cys Val Ala His Pro His Ser Trp 580 585 590 Pro Trp Gln Val Ser Leu Arg Thr Arg Phe Gly Met His Phe Cys Gly 595 600 605 Gly Thr Leu Ile Ser Pro Glu Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Leu 610 615 620 Glu Lys Ser Pro Arg Pro Ser Ser Tyr Lys Val Ile Leu Gly Ala His 625 630 635 640 Gln Glu Val Asn Leu Glu Pro His Val Gln Glu Ile Glu Val Ser Arg 645 650 655 Leu Phe Leu Glu Pro Thr Arg Lys Asp Ile Ala Leu Leu Lys Leu Ser 660 665 670 Ser Pro Ala Val Ile Thr Asp Lys Val Ile Pro Ala Cys Leu Pro Ser 675 680 685 Pro Asn Tyr Val Val Ala Asp Arg Thr Glu Cys Phe Ile Thr Gly Trp 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Arg Lys Ser Ser 50 55 60 Ile Ile Ile Arg Met Arg Asp Val Val Leu Phe Glu Lys Lys 65 70 75 <210> 3 <211> 80 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(80) <223> the last C-terminal 80 amino acids of human plasminogen <220> <221> HELIX <222> (70)..(79) <223> Helix <400> 3 Arg Tyr Glu Phe Leu Asn Gly Arg Val Gln Ser Thr Glu Leu Cys Ala 1 5 10 15 Gly His Leu Ala Gly Gly Thr Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly 20 25 30 Pro Leu Val Cys Phe Glu Lys Asp Lys Tyr Ile Leu Gln Gly Val Thr 35 40 45 Ser Trp Gly Leu Gly Cys Ala Arg Pro Asn Lys Pro Gly Val Tyr Val 50 55 60 Arg Val Ser Arg Phe Val Thr Trp Ile Glu Gly Val Met Arg Asn Asn 65 70 75 80 <210> 4 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide for stimulating adipocyte differentiation <400> 4 Leu Gly Ala Gly Ser Ile Glu Glu Cys Ala Ala Lys Cys Glu Glu 1 5 10 15 <210> 5 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide for stimulating adipocyte differentiation <400> 5 Ile Glu Glu Cys Ala Ala Lys Cys Glu Glu Asp Glu Glu Phe Thr 1 5 10 15 <210> 6 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide for stimulating adipocyte differentiation <400> 6 Leu Gly Ala Gly Ser Ile Glu Glu Cys Ala Ala Lys Cys Glu Glu Asp 1 5 10 15 Glu Glu Phe Thr 20 <210> 7 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide for stimulating adipocyte differentiation <400> 7 Val Ser Arg Phe Val Thr Trp Ile Glu Gly Val Met Arg Asn 1 5 10

Claims

삭제
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서열번호 4 내지 서열번호 7로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어진 지방세포 분화 촉진용 펩타이드.
서열번호 4 내지 서열번호 7로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드.
제4항 내지 제5항 중 어느 하나에 따른 펩타이드를 유효성분을 포함하는
신체 기형, 외상후 흉터, 연부조직 함몰, 선천적 기형, 오목 가슴 기형, 가슴 비대칭, 폴란드 증후군, 헤미 신드롬(hemi syndrome), 클로브 증후군(CLOVE syndrome), 롬버그 증후군(Romberg syndrome), 인공 기관 근처 기형(deformities near prostheses), 지방 흡입 기형(liposuction deformities), 넓적다리 결손의 외형 재건, HIV의 지방이형성증, 가벼운 연인두 폐쇄부전(mild velopharyngeal insufficiency), 유방절제술 이후의 유방 복원, 외상 또는 기형 후 안면 복원 및 여드름 흉터로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 치료를 위한 것을 특징으로 하는 지방세포 분화 촉진용 약학 조성물.
삭제
제4항 내지 제5항 중 어느 하나에 따른 펩타이드를 유효성분을 포함하는 지방세포 분화 촉진용 미용적 처치 조성물.
제8항에 있어서, 상기 미용적 처치 조성물은 미용적 지방 조직 확장, 미용적 지방 조직 보강 및 미용적 안면 보강으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 위한 것을 특징으로 하는 미용적 처치 조성물.
제9항에 있어서, 상기 미용적 지방 조직 확장은 지방 조직 부피 확장, 또는 안면, 둔부 또는 유방의 조직에 대한 미용적 지방 조직 확장인 것인 미용적 처치 조성물.
제9항에 있어서, 상기 미용적 지방 조직 보강은 유방, 둔부, 안면, 생식기, 손, 다리, 의원성 기형, 인공 기관 근처 기형(deformities near prostheses), 지방 흡입 기형(liposuction deformities) 또는 임플란트 기형의 지방 조직 보강인 것인 미용적 처치 조성물.
제9항에 있어서, 상기 미용적 안면 보강은 볼, 눈썹, 이마, 미간, 입술, 입가 주름, 팔자 주름, 코, 눈가 주름 또는 눈꺼풀 꺼짐 기형에 대한 미용적 안면 보강인 것인 미용적 처치 조성물.
제4항 내지 제5항 중 어느 하나에 따른 펩타이드를 유효성분을 포함하는 피부주름 개선 또는 피부탄력 증가용 화장료 조성물.
제13항에 있어서, 상기 피부가 코, 광대, 볼, 이마, 팔자부위, 눈밑, 가슴 또는 엉덩이 부위의 피부인 것을 특징으로 하는 피부주름 개선 또는 피부탄력 증가용 화장료 조성물.
제4항 내지 제5항 중 어느 하나에 따른 펩타이드로 코팅된 조직 수복 또는 지방세포 분화 촉진용 물질.
제15항에 있어서, 상기 물질은 붕대, 스테리-스트립(steri-strip), 봉합사(sature), 스테이플(staple), 이식 조직(graft), 의료용 이식 조직편(medical implant), 생체-공학적 물질, 조직-공학처리된 스캐폴드, 및 미소섬유로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 조직 수복 또는 지방세포 분화 촉진용 물질.