KR102232572B1 - Manufacturing method for cosmetic pomposition comprising centella asiatica extract - Google Patents

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Abstract

본 발명은 병풀 추출물을 이용한 화장료 조성물 제조 방법에 관한 것으로서, 더욱 상세히는 병풀을 건조 및 분쇄하여 얻어진 분쇄물에 용매를 투입하여 초음파 추출한 후 원심분리하고 그 상층액을 여과 및 농축하여 제조되는 병풀 추출물을 이용한 화장료 조성물 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물을 이용한 화장료 조성물 제조 방법은 병풀을 건조 및 분쇄하여 얻어진 병풀 분말을 포함하는 분쇄물로부터 용매를 투입하여 추출액을 추출한 후 여과 및 농축하여 병풀 추출물을 제조하도록 구성됨으로써 병풀에 포함된 항산화, 항염증, 미백 등에 효과가 있는 트리터페노이드 성분을 집중적으로 추출하여 극대화할 수 있으며, 이와 같은 병풀의 가공을 통해 얻어진 트리터페노이드 성분이 풍부한 병풀 추출물을 통해 항산화, 항염증 및 미백 등에 대한 가시적인 개선 효과를 제공할 수 있다.The present invention relates to a method for preparing a cosmetic composition using centella asiatica extract, and more particularly, centrifugation after ultrasonic extraction by adding a solvent to the pulverized product obtained by drying and pulverizing centella asiatica, and filtering and concentrating the supernatant. It relates to a method for producing a cosmetic composition using. The method for preparing a cosmetic composition using Centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention is configured to extract the extract by adding a solvent from the pulverized product including Centella asiatica powder obtained by drying and pulverizing Centella asiatica, followed by filtration and concentration to prepare Centella asiatica extract. Centella asiatica can be maximized by intensive extraction of triterpenoids, which are effective in antioxidant, anti-inflammatory, and whitening, contained in Centella asiatica, and antioxidant and anti-inflammatory through Centella asiatica extract rich in triterpenoids obtained through processing such as Centella asiatica. And it is possible to provide a visible improvement effect on whitening and the like.

Description

병풀 추출물을 이용한 화장료 조성물 제조 방법{Manufacturing method for cosmetic pomposition comprising centella asiatica extract}Manufacturing method for cosmetic pomposition comprising centella asiatica extract}

본 발명은 병풀 추출물을 이용한 화장료 조성물 제조 방법에 관한 것으로서, 더욱 상세히는 병풀을 건조 및 분쇄하여 얻어진 분쇄물에 용매를 투입하여 초음파 추출한 후 원심분리하고 그 상층액을 여과 및 농축하여 제조되는 병풀 추출물을 이용한 화장료 조성물 제조 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for preparing a cosmetic composition using centella asiatica extract, and more particularly, centrifugation after ultrasonic extraction by adding a solvent to the pulverized product obtained by drying and pulverizing centella asiatica, and filtering and concentrating the supernatant. It relates to a method for producing a cosmetic composition using.

병풀(Centella asiatica (L.), 고투콜라)은 미나리과의 다년생 덩굴식물로서 인도양의 열대지방에서 기원하였으며 우리나라에서는 제주도 및 일부 남부지방에서 자생하고 있다.Centella asiatica (L.), gotucola) is a perennial vine plant in the family Parsley family, originated in the tropical regions of the Indian Ocean, and grows naturally in Jeju Island and some southern regions in Korea.

병풀은 수천년간 동양에서 약용작물로 널리 사용되어 왔는데 특히 항염증기능과 콜라겐합성 촉진 및 피부재생효과가 뛰어나 피부손상 및 상처, 화상, 비대흉터, 지루성피부염 등의 피부질환에 대한 효능이 밝혀져 의약품 원료뿐만 아니라 화장품 원료로도 이용되고 있다.Centella asiatica has been widely used as a medicinal crop in the East for thousands of years. In particular, it has anti-inflammatory properties, promotes collagen synthesis, and has excellent skin regeneration effects, and has been shown to be effective in skin diseases such as skin damage and wounds, burns, hypertrophic scars, and seborrheic dermatitis. It is also used as a cosmetic ingredient.

최근 서양에서는 병풀이 긴장완화와 기억력 향상을 위한 신경강장제로 인기를 끌고 있는데 연구에 따르면 병풀의 주성분인 트리터페노이드(triterpenoids)의 항불안 및 항스트레스 효과가 집중력강화, 정신기능 향상에 영향을 주는 것으로 확인되고 있으며, 이에 따라 치매치료제의 후보물질로 주목받고 있다.In recent years, centella asiatica is gaining popularity as a nerve tonic for relaxation and memory enhancement. According to research, the anti-anxiety and anti-stress effects of triterpenoids, the main component of centella asiatica, affect concentration and mental function. It has been confirmed, and accordingly, it is attracting attention as a candidate material for dementia treatment.

이러하듯 병풀의 유효성분에 대한 효능은 인식하고 있지만, 병풀 자체를 가공하여 효능을 증대시키기 위한 연구는 미흡한 실정이다.As such, the effectiveness of centella asiatica is recognized for the active ingredient, but research to increase the efficacy by processing centella asiatica itself is insufficient.

한국등록특허 제10-0444330호Korean Patent Registration No. 10-0444330

본 발명은 병풀을 분말화하여 얻어진 분쇄물로부터 추출한 추출물을 원심분리하여 상층액을 회수한 후 여과 및 농축 과정을 통해 항산화 및 항염증 효과와 더불어 미백 및 주름 개선 효능을 제공할 수 있는 병풀 추출물을 이용한 화장료 조성물 제조 방법을 제공하는데 그 목적이 있다.The present invention provides a centrifugal extract extracted from the pulverized centrifugal centrifugal centrifugal centrifugal centrifugal centrifugal extract, which can provide anti-oxidative and anti-inflammatory effects as well as whitening and wrinkle-improving effects through filtration and concentration processes. It is an object to provide a method for manufacturing a cosmetic composition using.

본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 제조 방법은, 병풀을 건조 및 분쇄한 병풀 분말을 포함하는 분쇄물을 준비하는 분말화 단계와, 상기 분쇄물과 용매를 1:10의 중량 비율로 혼합한 후 초음파 추출하여 추출액을 제조하는 추출 단계와, 상기 추출액을 원심분리하여 상층액을 회수하는 원심분리 단계 및 상기 상층액을 여과 후 농축하여 병풀 추출물을 제조하는 제조 단계를 포함할 수 있다.The method for producing centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention includes a pulverization step of preparing a pulverized product including centella asiatica powder obtained by drying and pulverizing centella asiatica, and mixing the pulverized product and a solvent in a weight ratio of 1:10. After ultrasonic extraction to prepare an extract, a centrifugation step of recovering the supernatant by centrifuging the extract, and a manufacturing step of producing a centrifugal extract by concentrating the supernatant after filtering.

본 발명과 관련된 일 예로서, 상기 분말화 단계는 오미자를 건조 및 분쇄하여 얻어진 오미자 분말과 상기 병풀 분말을 1:4의 중량 비율로 혼합하여 상기 분쇄물을 얻는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.As an example related to the present invention, the powdering step further comprises the step of obtaining the pulverized product by mixing the Schisandra chinensis powder obtained by drying and pulverizing Schisandra chinensis and the centella asiatica powder at a weight ratio of 1:4. I can.

본 발명과 관련된 일 예로서, 상기 용매는 메탄올인 것을 특징으로 할 수 있다.As an example related to the present invention, the solvent may be methanol.

본 발명과 관련된 일 예로서, 상기 원심분리 단계는 상기 추출액을 3000rpm에서 8분 ~ 12분 동안 원심분리하는 것을 특징으로 할 수 있다.As an example related to the present invention, the centrifugation step may be characterized in that the extract is centrifuged at 3000 rpm for 8 to 12 minutes.

본 발명과 관련된 일 예로서, 상기 병풀은 병풀의 잎인 것을 특징으로 할 수 있다.As an example related to the present invention, the centella asiatica may be characterized in that it is a leaf of centella asiatica.

본 발명과 관련된 일 예로서, 상기 병풀은 여름에 채취된 병풀인 것을 특징으로 할 수 있다.As an example related to the present invention, the centella may be characterized in that the centella is collected in summer.

본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물을 이용한 화장료 조성물 제조 방법은 병풀을 건조 및 분쇄하여 얻어진 병풀 분말을 포함하는 분쇄물로부터 용매를 투입하여 추출액을 추출한 후 여과 및 농축하여 병풀 추출물을 제조하도록 구성됨으로써 병풀에 포함된 항산화, 항염증, 미백 등에 효과가 있는 트리터페노이드 성분을 집중적으로 추출하여 극대화할 수 있으며, 이와 같은 병풀의 가공을 통해 얻어진 트리터페노이드 성분이 풍부한 병풀 추출물을 통해 항산화, 항염증 및 미백 등에 대한 가시적인 개선 효과를 제공할 수 있다.The method for preparing a cosmetic composition using Centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention is configured to extract the extract by adding a solvent from the pulverized product including Centella asiatica powder obtained by drying and pulverizing Centella asiatica, followed by filtration and concentration to prepare Centella asiatica extract. Centella asiatica can be maximized by intensive extraction of triterpenoids, which are effective in antioxidant, anti-inflammatory, and whitening, contained in Centella asiatica, and antioxidant and anti-inflammatory through Centella asiatica extract rich in triterpenoids obtained through processing such as Centella asiatica. And it is possible to provide a visible improvement effect on whitening and the like.

또한, 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물을 이용한 화장료 조성물 제조 방법은 병풀을 구성하는 구성 요소 중에서 트리터페노이드 성분이 풍부한 병풀의 잎을 선별 채취하여 병풀 추출물의 주재료로 이용하며 이러한 트리터페노이드 성분이 4계절 중에 높게 나타나는 여름에 채취된 병풀을 이용하여 병풀 추출물을 제조함으로써, 병풀 추출물의 트리터페노이드 성분의 함량을 크게 높일 수 있으며 이를 통해 항상화, 항염증 및 미백 등의 효과를 극대화시킬 수 있다.In addition, the method of manufacturing a cosmetic composition using centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention selects and collects leaves of centella asiatica rich in triterpenoids among the constituents constituting centella asiatica and uses them as the main material of centella asiatica extract. Centella asiatica extract is prepared using centella asiatica extract collected in summer, which is high during these four seasons, and the content of triterpenoids in centella asiatica extract can be greatly increased, and through this, effects such as anti-oxidation, anti-inflammatory and whitening can be maximized. have.

더하여, 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물을 이용한 화장료 조성물 제조 방법을 통해 얻어진 병풀 추출물은 병풀 분말의 항산화, 항염증 및 미백 효과와 더불어 상기 오미자를 통해 주름 개선 효과를 제공할 수 있다.In addition, Centella asiatica extract obtained through the method of manufacturing a cosmetic composition using Centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention can provide anti-oxidation, anti-inflammatory and whitening effects of Centella asiatica powder, as well as anti-wrinkle effects through the Schisandra chinensis.

도 1은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 제조 방법에 대한 순서도.
도 2는 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 제조 방법에 따라 제조된 병풀 추출물의 유효성분 분석에 대한 HPLC 분석 조건을 나타낸 도면.
도 3은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 추출 용매에 따른 병풀추출물의 성분분석 크로마토그램에 대한 도면.
도 4는 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 추출 용매별 HPLC 분석결과를 나타낸 도면.
도 5는 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 생육 부위별 HPLC 분석결과를 나타낸 도면.
도 6은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 수확 시기별 HPLC 분석결과를 나타낸 도면.
도 7은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 ABTs 래디컬(radical) 소거활성에 대한 결과를 나타낸 도면.
도 8은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 DPPH 래디컬(radical) 소거활성에 대한 결과를 나타낸 도면.
도 9는 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 총 폴리페놀 함량에 대한 분석 결과를 나타낸 도면.
도 10은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 총 플라보노이드 함량에 대한 분석 결과를 나타낸 도면.
도 11은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 항균활성 시험에 대한 분석 조건을 나타낸 도면.
도 12 및 도 13은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 항균활성 시험에 대한 분석 결과를 나타낸 도면.
도 14는 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 항염증효과 시험 관련 Raw 264.7 세포독성 시험에 대한 분석 결과를 나타낸 도면.
도 15는 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 항염증효과 시험 관련 NO 분석 결과를 나타낸 도면.
도 16은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 미백효과 시험 관련 B16F10 세포독성에 대한 분석 결과를 나타낸 도면.
도 17은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 미백효과 시험 관련 멜라닌 생합성율 측정에 대한 분석 결과를 나타낸 도면.
도 18은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 주름개선효과 시험 관련 세포생존율 측정에 대한 분석 결과를 나타낸 도면.
도 19는 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 콜라게네이즈 활성저해 분석 결과를 나타낸 도면.1 is a flow chart for a method of manufacturing centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.
Figure 2 is a view showing the HPLC analysis conditions for the analysis of active ingredients of centella asiatica extract prepared according to the method for producing centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.
3 is a view for a component analysis chromatogram of centella asiatica extract according to the extraction solvent of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.
Figure 4 is a view showing the HPLC analysis results of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention for each extraction solvent.
Figure 5 is a view showing the results of HPLC analysis of each growing region of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.
6 is a view showing the results of HPLC analysis by harvest time of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.
7 is a view showing the results of ABTs radical scavenging activity of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.
8 is a view showing the results of DPPH radical scavenging activity of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.
9 is a view showing the analysis result of the total polyphenol content of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.
10 is a view showing the analysis result of the total flavonoid content of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.
11 is a view showing the analysis conditions for the antibacterial activity test of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.
12 and 13 are views showing the analysis results for the antibacterial activity test of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.
14 is a view showing the analysis results of the Raw 264.7 cytotoxicity test related to the anti-inflammatory effect test of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.
15 is a view showing the results of NO analysis related to the anti-inflammatory effect test of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.
Figure 16 is a view showing the analysis results of B16F10 cytotoxicity related to the whitening effect test of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.
17 is a view showing the analysis results for the measurement of melanin biosynthesis rate related to the whitening effect test of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.
18 is a view showing the analysis results for the cell viability test related to the wrinkle improvement effect test of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.
Figure 19 is a view showing the analysis results of collagenase activity inhibition of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.

본 발명에서 사용되는 기술적 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아님을 유의해야 한다. 또한, 본 발명에서 사용되는 기술적 용어는 본 발명에서 특별히 다른 의미로 정의되지 않는 한, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 의미로 해석되어야 하며, 과도하게 포괄적인 의미로 해석되거나, 과도하게 축소된 의미로 해석되지 않아야 한다. 또한, 본 발명에서 사용되는 기술적인 용어가 본 발명의 사상을 정확하게 표현하지 못하는 잘못된 기술적 용어일 때에는 당업자가 올바르게 이해할 수 있는 기술적 용어로 대체되어 이해되어야 할 것이다. 또한, 본 발명에서 사용되는 일반적인 용어는 사전에 정의되어 있는 바에 따라, 또는 전후 문맥상에 따라 해석되어야 하며, 과도하게 축소된 의미로 해석되지 않아야 한다.It should be noted that the technical terms used in the present invention are only used to describe specific embodiments, and are not intended to limit the present invention. In addition, the technical terms used in the present invention should be interpreted as generally understood by those of ordinary skill in the technical field to which the present invention belongs, unless otherwise defined in the present invention, and is excessively comprehensive. It should not be construed as a human meaning or an excessively reduced meaning. In addition, when a technical term used in the present invention is an incorrect technical term that does not accurately express the spirit of the present invention, it should be understood by being replaced with a technical term that can be correctly understood by those skilled in the art. In addition, general terms used in the present invention should be interpreted as defined in the dictionary or according to the context before and after, and should not be interpreted as an excessively reduced meaning.

또한, 본 발명에서 사용되는 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한 복수의 표현을 포함한다. 본 발명에서 "구성된다" 또는 "포함한다" 등의 용어는 발명에 기재된 여러 구성 요소들 또는 여러 단계를 반드시 모두 포함하는 것으로 해석되지 않아야 하며, 그 중 일부 구성 요소들 또는 일부 단계들은 포함되지 않을 수도 있고, 또는 추가적인 구성 요소 또는 단계들을 더 포함할 수 있는 것으로 해석되어야 한다.In addition, the singular expression used in the present invention includes a plurality of expressions unless the context clearly indicates otherwise. In the present invention, terms such as “consisting of” or “comprising” should not be construed as necessarily including all of the various components or steps described in the invention, and some components or some steps may not be included. It is to be construed that it may or may further include additional components or steps.

또한, 본 발명에서 사용되는 제 1, 제 2 등과 같이 서수를 포함하는 용어는 구성 요소들을 설명하는데 사용될 수 있지만, 구성 요소들은 용어들에 의해 한정되어서는 안 된다. 용어들은 하나의 구성 요소를 다른 구성 요소로부터 구별하는 목적으로만 사용된다. 예를 들어, 본 발명의 권리 범위를 벗어나지 않으면서 제 1 구성 요소는 제 2 구성 요소로 명명될 수 있고, 유사하게 제 2 구성 요소도 제 1 구성 요소로 명명될 수 있다.In addition, terms including ordinal numbers such as first and second used in the present invention may be used to describe the elements, but the elements should not be limited by the terms. The terms are used only to distinguish one component from another. For example, without departing from the scope of the present invention, a first element may be referred to as a second element, and similarly, a second element may be referred to as a first element.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명에 따른 바람직한 실시예를 상세히 설명하되, 도면 부호에 관계없이 동일하거나 유사한 구성 요소는 동일한 참조 번호를 부여하고 이에 대한 중복되는 설명은 생략하기로 한다.Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings, but the same or similar components are assigned the same reference numerals regardless of the reference numerals, and redundant descriptions thereof will be omitted.

또한, 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다. 또한, 첨부된 도면은 본 발명의 사상을 쉽게 이해할 수 있도록 하기 위한 것일 뿐, 첨부된 도면에 의해 본 발명의 사상이 제한되는 것으로 해석되어서는 아니 됨을 유의해야 한다.In addition, in describing the present invention, when it is determined that a detailed description of a related known technology may obscure the subject matter of the present invention, a detailed description thereof will be omitted. In addition, it should be noted that the accompanying drawings are only for easily understanding the spirit of the present invention and should not be construed as limiting the spirit of the present invention by the accompanying drawings.

이하에서는, 본 발명에 따른 병풀 추출물의 제조 방법을 도면을 참고하여 상세히 설명한다.Hereinafter, a method for preparing centella asiatica extract according to the present invention will be described in detail with reference to the drawings.

도 1은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 제조 방법에 대한 순서도이다.1 is a flow chart for a method of manufacturing centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.

우선, 병풀을 건조 및 분쇄하여 병풀 분말을 포함하는 분쇄물을 준비한다(S1).First, centella asiatica is dried and pulverized to prepare a pulverized product including centella asiatica powder (S1).

이때, 상기 병풀은 기후여건상 수확이 어려운 겨울을 제외한 여름에 채취(수확)하여 세척 후 40℃에서 열풍 건조시킨 것으로 구성될 수 있다.At this time, the centella may be collected (harvested) in summer except winter where harvesting is difficult due to climatic conditions, washed, and then dried with hot air at 40°C.

또한, 상기 병풀의 잎과 자루를 분리하여 병풀의 잎을 상기 분쇄물을 얻기 위한 병풀로서 사용할 수 있으며, 상기 병풀 분말은 건조된 병풀을 믹서기에 갈아 분쇄하여 제조될 수 있다.In addition, by separating the leaf and sack of centella asiatica, the leaf of centella asiatica can be used as centella as a centella for obtaining the pulverized product, and the centella asiatic powder can be prepared by grinding and pulverizing the dried centella asiatica in a blender.

한편, 상기 분쇄물을 칭량하여 상기 분쇄물로부터 추출액을 얻기 위해, 상기 분쇄물과 용매를 1:10의 중량 비율로 혼합한 후 초음파 추출하여 추출액을 제조할 수 있다(S2).Meanwhile, in order to obtain an extract from the pulverized product by weighing the pulverized product, the pulverized product and the solvent are mixed in a weight ratio of 1:10 and then ultrasonically extracted to prepare an extract (S2).

이때, 상기 용매는 메탄올, 발효주정, 증류수가 사용될 수 있으나, 메탄올이 상기 용매로서 사용되는 것이 바람직하다.In this case, the solvent may be methanol, fermented alcohol, or distilled water, but it is preferable that methanol is used as the solvent.

또한, 상기 추출액을 원심분리하여 상층액을 회수한다(S3).In addition, the extract is centrifuged to recover the supernatant (S3).

이때, 상기 추출액에 대한 원심분리시 3000rpm에서 8분 ~ 12분간 원심분리하는 것이 바람직하며, 10분간 원심분리하는 것이 가장 바람직하다.At this time, when centrifuging the extract, it is preferable to perform centrifugation at 3000 rpm for 8 to 12 minutes, and most preferably, centrifugation for 10 minutes.

이후, 상기 상층액을 0.45㎛ 주사기 필터로 여과한 후 농축시켜 병풀 추출물을 제조할 수 있다(S4).Thereafter, the supernatant may be filtered through a 0.45 μm syringe filter and then concentrated to prepare centella asiatica extract (S4).

상술한 바와 같은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 제조 방법은 병풀을 건조 및 분쇄하여 얻어진 병풀 분말을 포함하는 분쇄물로부터 용매를 투입하여 추출액을 추출한 후 여과 및 농축하여 병풀 추출물을 제조하도록 구성됨으로써 병풀에 포함된 항산화, 항염증, 미백 등에 효과가 있는 트리터페노이드(triterpenoids, 또는 트리터펜(triterpene)) 성분을 집중적으로 추출하여 극대화할 수 있으며, 이와 같은 병풀의 가공을 통해 얻어진 트리터페노이드 성분이 풍부한 병풀 추출물을 통해 항산화, 항염증 및 미백 등에 대한 가시적인 개선 효과를 제공할 수 있다.The method for preparing centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention as described above is configured to extract the extract by adding a solvent from the pulverized product including centella asiatica powder obtained by drying and pulverizing centella asiatica, then filtering and concentrating to prepare centella asiatica extract. As a result, triterpenoids (triterpenoids, or triterpene), which are effective in anti-oxidation, anti-inflammatory, and whitening, contained in centella can be intensively extracted and maximized. Through the extract of centella asiatica, which is rich in ingredients, it can provide visible improvement effects on antioxidant, anti-inflammatory, and whitening.

또한, 본 발명은 병풀 추출물을 이용한 제품을 제조할 수 있도록 지원할 수 있으며, 상기 병풀 추출물을 이용하여 제조된 제품의 일례로서 비누가 상기 제품으로 제조될 수 있다.In addition, the present invention may support to manufacture a product using centella asiatica extract, and as an example of a product manufactured using the centella asiatica extract, soap may be manufactured as the product.

또한, 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 제조 방법은 병풀을 구성하는 구성 요소 중에서 트리터페노이드 성분이 풍부한 병풀의 잎을 선별 채취하여 병풀 추출물의 주재료로 이용하며 이러한 트리터페노이드 성분이 4계절 중에 높게 나타나는 여름에 채취된 병풀을 이용하여 병풀 추출물을 제조함으로써, 병풀 추출물의 트리터페노이드 성분의 함량을 크게 높일 수 있으며 이를 통해 항상화, 항염증 및 미백 등의 효과를 극대화시킬 수 있다.In addition, the method of manufacturing Centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention selects leaves of Centella asiatica extract rich in triterpenoids among the constituents of Centella asiatica and uses them as the main material of Centella asiatica extract. By preparing centella asiatica extract using centella asiatica extract collected in summer, which is high in the middle, the content of triterpenoid component of centella asiatica extract can be greatly increased, and through this, effects such as anti-inflammatory, anti-inflammatory, and whitening can be maximized.

한편, 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 제조 방법 중 상기 분쇄물을 준비하는 과정에서 오미자를 건조 및 분쇄하여 얻어진 오미자 분말과 상기 병풀 분말을 1:4의 중량 비율로 혼합하여 상기 분쇄물을 구성할 수 있다.On the other hand, in the manufacturing method of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention, in the process of preparing the pulverized product, the Schisandra chinensis powder and the centella asiatica powder obtained by drying and pulverizing the Schisandra chinensis are mixed in a weight ratio of 1:4 to prepare the pulverized product. Configurable.

이를 통해, 상기 오미자 분말과 병풍 분말이 혼합 구성된 분쇄물을 상기 병풀 추출물의 제조 방법에 적용하여 상기 병풀 추출물을 얻을 수 있다.Through this, the centella asiatica extract may be obtained by applying a pulverized product composed of a mixture of the Schisandra chinensis powder and the folding screen powder to the method of preparing the centella asiatica extract.

이렇게 얻어진 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물은 병풀 분말의 항산화, 항염증 및 미백 효과와 더불어 상기 오미자를 통해 주름 개선 효과를 제공할 수 있다.Centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention thus obtained may provide anti-oxidation, anti-inflammatory and whitening effects of Centella asiatica powder, as well as anti-wrinkle effects through the Schisandra chinensis.

상술한 바와 같은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 제조 방법을 통해 얻어진 병풀 추출물에 대한 효과를 증명하기 위한 병풀 추출물로부터 얻어진 시료를 이용하여 다양한 실험을 진행하였으며, 이를 이하에서 도면을 참고하여 상세히 설명한다.Various experiments were conducted using samples obtained from Centella asiatica extract to prove the effect on Centella asiatica extract obtained through the method for producing Centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention as described above, and this is in detail with reference to the drawings below. Explain.

설명에 앞서, 병풀 추출물로부터 시료의 추출 및 분석에 사용한 모든 용매는 HPLC(high-performance liquid chromatography)급 이상의 시약(J.T. Baker, USA)을 사용하였으며 성분분석에 사용한 표준품은 Madecassic acid(ChemFaces, China), Madecassoside(ChemFaces, China), Asiatic acid(ChemFaces, China), Asiaticoside(ChemFaces, China)를 사용하였다.Prior to the description, all solvents used for sample extraction and analysis from Centella asiatica extract were high-performance liquid chromatography (HPLC) or higher reagents (JT Baker, USA), and the standard product used for component analysis was Madecassic acid (ChemFaces, China). , Madecassoside (ChemFaces, China), Asiatic acid (ChemFaces, China), and Asiaticoside (ChemFaces, China) were used.

또한, 병풀 추출물의 항산화활성과 항산화물질의 함량을 확인하기 위해 BHA(wako, Japan)를 제외한 2.2-azino-bis(3-rthylbenzthiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt(ABTs), potassium persulfate, ascorbic acid, 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH), Folin-Ciocalteu, sodium carbonate, gallic acid 등의 대부분 시약은 sigma aldrich사의 제품을 구입하여 사용하였고 미생물균주를 키우기 위한 배지는 YMB(BD difco, USA)와 TSB(BD difco, USA)를 사용하였다.In addition, 2.2-azino-bis (3-rthylbenzthiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt (ABTs), potassium persulfate, ascorbic acid, excluding BHA (wako, Japan), to determine the antioxidant activity and antioxidant content of Centella asiatica extract. Most reagents such as, 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), Folin-Ciocalteu, sodium carbonate, and gallic acid were purchased from sigma aldrich, and the medium for growing microbial strains was YMB (BD difco, USA). ) And TSB (BD difco, USA) were used.

또한, 병풀 추출물의 항염증효과 및 미백효과시험 등을 위한 세포실험에 사용한 시약은 fetal bovine serum(FBS)(Gibco, USA), DMEM(Gibco, USA), penicillin/streptomycin(Gibco, USA), PBS(Gibco, USA)와 α-melanocyte stimulating hormone(α-MSH)(sigma aldrich, USA)를 사용했고 세포생존율을 확인하기 위한 MTT assay 시약은 CellTiter 96 aqueous non radioactive cell proliferation assay reagent(Promega, USA)를 사용하였다.In addition, reagents used in cell experiments for anti-inflammatory and whitening effect tests of centella asiatica extract were fetal bovine serum (FBS) (Gibco, USA), DMEM (Gibco, USA), penicillin/streptomycin (Gibco, USA), PBS. (Gibco, USA) and α-melanocyte stimulating hormone (α-MSH) (sigma aldrich, USA) were used, and CellTiter 96 aqueous non radioactive cell proliferation assay reagent (Promega, USA) was used as the MTT assay reagent to check the cell viability. Was used.

또한, 병풀 추출물의 성분분석을 위한 고성능액체크로마토그래피 장비는 e2695 Alliance System(Waters, USA)을 이용하였고 칼럼은 Phenomenox Luna C18(4.6 mm × 150 mm, 3㎛)을 사용하였다.In addition, a high-performance liquid chromatography equipment for component analysis of Centella asiatica extract was used as an e2695 Alliance System (Waters, USA), and a Phenomenox Luna C18 (4.6 mm × 150 mm, 3 μm) column was used.

또한, 항산화시험과 세포실험 후 흡광도 측정을 위한 다채널 분광광도계는 SpectraMax M5(Molecular devices, USA)를 사용하였다.In addition, SpectraMax M5 (Molecular devices, USA) was used as a multi-channel spectrophotometer for measuring absorbance after antioxidant and cell tests.

또한, 생리활성 확인을 위한 세포배양은 CO2 incubator(nu-4750G, NUAIRE)를 이용하였다.In addition, cell culture for confirming physiological activity was performed using a CO 2 incubator (nu-4750G, NUAIRE).

우선, 도 2는 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 제조 방법에 따라 제조된 병풀 추출물의 유효성분 분석에 대한 HPLC 분석 조건을 나타낸 도면이다.First, FIG. 2 is a view showing HPLC analysis conditions for the analysis of active ingredients of Centella asiatica extract prepared according to the method for producing Centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.

또한, 도 3은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 추출 용매에 따른 병풀 추출물의 성분분석 크로마토그램에 대한 도면이며, 도 4는 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 추출 용매별 HPLC 분석결과를 나타낸 도면이고, 도 5는 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 생육 부위별 HPLC 분석결과를 나타낸 도면이며, 도 6은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 수확 시기별 HPLC 분석결과를 나타낸 도면이다.In addition, Figure 3 is a view for a component analysis chromatogram of Centella asiatica extract according to the extraction solvent of Centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention, and Fig. 4 is an HPLC analysis result of Centella asiatica extract by extraction solvent according to an embodiment of the present invention 5 is a view showing the results of HPLC analysis of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention, and Fig. 6 shows the HPLC analysis results of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention by harvest time It is a drawing.

도 2에 도시된 바와 같이, 병풀에 함유된 유효성분은 HPLC 장비를 이용하여 기존 논문에 알려진 방법들을 참고하여 다양한 조건으로 예비실험을 진행 후 최적의 분석조건을 적립하여 적용하였다.As shown in FIG. 2, the active ingredient contained in Centella asiatica was applied by accumulating and accumulating optimal analysis conditions after conducting preliminary experiments under various conditions by referring to methods known in existing papers using HPLC equipment.

또한, 병풀 추출물의 제조 과정에서 추출액 제조시 사용되는 서로 다른 용매(추출 용매)별 유효성분의 수율차이를 보기위해 메탄올, 20% 발효주정, 물을 이용해서 각각 추출했으며 시료의 생육부위별 분석을 위해 자루, 잎, 전체(자루 + 잎)로 구분하여 진행하였고 시기별 성분함량의 차이를 확인하기 위해 4월, 7월, 10월의 총 3회에 걸쳐 수확한 시료를 추출하여 분석하였고 모든 실험은 3반복으로 진행하여 평균값으로 나타내었다.In addition, in the manufacturing process of Centella asiatica extract, each extraction was performed using methanol, 20% fermented alcohol, and water in order to see the difference in the yield of active ingredients by different solvents (extracted solvents) used in preparing the extract. For this purpose, it was divided into sack, leaf, and whole (sack + leaf), and in order to check the difference in component content by period, samples harvested in a total of 3 times in April, July, and October were extracted and analyzed. All experiments Was carried out in 3 iterations and expressed as an average value.

또한, 병풀 추출물의 HPLC분석은 트리터페노이드(triterpene)계열의 화합물로 알려진 asiatic acid(AA), asiaticoside(AS), madecasic acid(MA), madecassoside(MS)를 분석하였고, 각 표준물질을 메탄올에 녹여 표준액으로 하고 검량곡선을 이용하여 정량하였다.In addition, HPLC analysis of centella asiatica extract was performed by analyzing asiatic acid (AA), asiaticoside (AS), madecasic acid (MA), and madecassoside (MS), which are known as triterpene compounds. It was dissolved as a standard solution and quantified using a calibration curve.

도 3에 도시된 바와 같이, 용매에 따른 추출효율을 확인하기 위해 메탄올과 에탄올, 물을 이용하여 시료 1g에 10㎖의 용매를 넣어 동일한 조건으로 추출한 결과 잎과 자루 부위에 상관없이 메탄올에서 추출효율이 높게 나오는 것을 확인할 수 있다.As shown in FIG. 3, in order to check the extraction efficiency according to the solvent, 10 ml of solvent was added to 1 g of a sample and extracted under the same conditions using methanol, ethanol, and water. You can see that it comes out high.

또한, 도 4에 도시된 바와 같이, 세 가지 용매 모두 madecassoside(MS)와 asiaticoside(AS)가 madecassic acid(MA)와 asiatic acid(AA)에 비해 상당히 높게 함유되어 있어 표준품의 농도를 MS와 AS는 10∼1000 ppm으로, MA와 AA는 1∼500 ppm으로 검정곡선을 작성하여 시료 1g 당 함량을 계산하였다.In addition, as shown in Figure 4, all three solvents madecassoside (MS) and asiaticoside (AS) are contained significantly higher than madecassic acid (MA) and asiatic acid (AA), so that the concentration of the standard product is The content per 1 g of sample was calculated by preparing a calibration curve with 10 to 1000 ppm and 1 to 500 ppm for MA and AA.

이후의 생육부위별 및 수확시기별 HPLC 분석을 위한 시료는 추출효율이 가장 높게 나온 메탄올을 사용하여 추출하였다.Subsequently, samples for HPLC analysis by growth area and harvest time were extracted using methanol, which had the highest extraction efficiency.

또한, 도 5에 도시된 바와 같이, 병풀의 생육부위별 유효성분의 함량차이를 확인하기 위해 잎과 자루를 분리하여 전잎(잎+자루) 시료를 각각 추출하여 분석한 결과 유효성분은 AA를 제외한 세 가지 성분은 자루와 비교할 때 잎 부위에 10배 가까이 높은 함량을 나타내는 것을 확인하였다.In addition, as shown in FIG. 5, in order to check the difference in the content of active ingredients by growing regions of centella asiatica, leaves and sack were separated, and whole leaf (leaf + sack) samples were extracted and analyzed. As a result, the active ingredients were excluding AA. It was confirmed that the three components showed a content that was nearly 10 times higher in the leaf area when compared to the sack.

또한, AA 역시 자루보다 잎의 함량이 다소 높게 나왔지만 다른 성분들에 비해 자루부위에 높게 함유된 것을 확인하였다.In addition, AA also had a slightly higher leaf content than the sack, but it was confirmed that it was contained higher in the sack area than other ingredients.

또한, 도 6에 도시된 바와 같이, 서식환경에 따라 생육에 영향을 받는 식물의 특성상 계절적 변화에 어느 정도 유효성분의 함량이 달라지는지 알아보기 위해 시기별로 수확하여 분석하였다.In addition, as shown in Fig. 6, in order to find out how much the content of the active ingredient varies with seasonal changes due to the characteristics of plants affected by growth according to the habitat environment, harvesting and analysis were performed for each period.

병풀은 기후가 따뜻하고 습한 지역에서 자라는 식물로 하우스 시설재배를 하더라도 추운 겨울에는 생육이 어려워 따뜻해지는 봄철부터 가을까지 4, 7, 10월에 수확하되 성장정도에 따른 차이를 줄이기 위해 일정구획을 정하여 1차 수확 후에 2차 수확까지 자라는 기간을 고려하여 3개월씩 키워서 동일한 구간에서 자란 병풀을 수확하여 건조시켜 실험에 사용하였다.Centella asiatica is a plant that grows in a warm and humid climate. Even if house facilities are cultivated, it is difficult to grow in cold winter and is harvested in April, July and October from warm spring to autumn. After harvesting the tea, the centella grown in the same section was grown for 3 months, taking into account the growing period until the second harvest, and then dried and used in the experiment.

위의 실험결과를 토대로 생육부위를 구분하지 않고 수확한 전잎(잎+자루)을 메탄올 추출하여 HPLC로 분석한 결과, asiaticoside와 madecassoside는 점점 증가하여 10월에 가장 높게 나타났고 asiatic acid와 madecassic acid는 7월에 가장 높게 나타났다.Based on the above experimental results, the harvested whole leaves (leaves + sack) were extracted with methanol and analyzed by HPLC. As a result, asiaticoside and madecassoside gradually increased and were highest in October, and asiatic acid and madecassic acid were It was highest in July.

이에 따라, 여름에 수확하여 채취한 병풀을 이용하여 병풀 추출물을 제조하는 경우에 트리터페노이드 성분에 따른 높은 효과를 기대할 수 있다.Accordingly, in the case of manufacturing centella asiatica extract using centella asiatica harvested and collected in summer, a high effect according to the triterpenoid component can be expected.

도 7은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 ABTs 래디컬(radical) 소거활성에 대한 결과를 나타낸 도면이다.7 is a view showing the results of ABTs radical scavenging activity of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.

ABTs 라디칼 양이온 탈색화법에 의한 항산화 효능을 시험하기 위하여 Re et al.,(1999)의 방법을 변형하여 7 mM의 ABTs와 2.4 mM potassium persulfate용액을 혼합하여 4시간 동안 방치하여 ABTs+·를 형성시킨 후 이 용액을 734 nm에서의 흡광값이 0.7∼0.8이 되도록 몰 흡광계수(ε=3.6×104M-1㎝-1)를 이용하여 에탄올로 희석하였다.In order to test the antioxidant efficacy by ABTs radical cationic decolorization method, the method of Re et al., (1999) was modified to form ABTs + · by mixing 7 mM ABTs and 2.4 mM potassium persulfate solution and standing for 4 hours. Thereafter, this solution was diluted with ethanol using a molar extinction coefficient (ε=3.6×10 4 M −1 cm −1 ) so that the absorbance value at 734 nm was 0.7 to 0.8.

또한, 희석된 ABTs용액 225 ㎕에 시료 25 ㎕를 넣어 Multimicroplate reader를 사용하여 734 nm에서 흡광도를 측정하였고 BHA와 ascorbic acid를 positive control로 하고 흡광도가 50% 감소할 때 나타나는 시료의 radical 소거능(IC50)으로 표시하였다.In addition, 25 µl of the sample was added to 225 µl of the diluted ABTs solution, and the absorbance was measured at 734 nm using a Multimicroplate reader, and the radical scavenging activity of the sample when the absorbance was reduced by 50% with BHA and ascorbic acid as positive controls (IC50). Denoted as.

ABTs 래디컬 소거활성은 [1-(시료첨가군의 흡광도 / 무첨가군의 흡광도)]×100으로 계산하여 백분율로 표시하였다.ABTs radical scavenging activity was calculated as [1-(absorbance of the sample added group / absorbance of the non-added group)]×100 and expressed as a percentage.

ABTs와 potassium persulfate를 암소에 방치하면 화학 반응을 일으키며 형성된 청록색의 ABTS radical 이온이 항산화물질에 의해 소거되어 탈색되는 원리를 이용한 방법으로 탈색정도에 대한 흡광도를 측정하여 항산화능을 확인하였다.When ABTs and potassium persulfate were left in the dark, a chemical reaction occurred, and the blue-green ABTS radical ions formed were eliminated by antioxidants and decolorized. The absorbance for the degree of decolorization was measured to confirm the antioxidant activity.

ABTs는 비교적 안정한 자유 래디컬로 친유성, 친수성 항산화물질의 측정에 모두 적용이 가능하고 탈색반응이 1분여 안에 종료되므로 단시간에 측정이 가능하다.ABTs are relatively stable free radicals that can be applied to both lipophilic and hydrophilic antioxidants, and can be measured in a short time since the decolorization reaction ends within 1 minute.

따라서, 각 추출물을 1,000 ppm의 농도로 처리했을 때 IC50 값의 분석결과, 메탄올과 에탄올, 물 추출물 모두 유사한 결과를 보였는데 잎의 추출물이 자루추출물에 비해 높은 소거능을 나타내는 것을 알 수 있다.Therefore, when each extract was treated at a concentration of 1,000 ppm, analysis of the IC50 value showed similar results for both methanol, ethanol, and water extracts, but it can be seen that the leaf extract exhibits higher scavenging ability than the sack extract.

도 8은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 DPPH 래디컬(radical) 소거활성에 대한 결과를 나타낸 도면이다.8 is a diagram showing the results of DPPH radical scavenging activity of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.

시료의 전자공여능을 확인하기 위하여 Blois MS.(1958)을 변형하여 에탄올에 녹인 1.5×10-4M 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) 용액 90 ㎕와 시료 10㎕를 96-well plate에 첨가한 후 10분간 반응시킨 다음 Multimicroplate reader로 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. To check the electron donating ability of the sample, 90 µl of a 1.5×10 -4 M 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) solution dissolved in ethanol by modifying Blois MS. (1958) and 10 µl of the sample were added to a 96-well plate. After addition to the reaction for 10 minutes, the absorbance was measured at 517 nm with a Multimicroplate reader.

농도에 따른 DPPH 라디칼 소거활성은 1~10분후 측정한 시료의 흡광도 변화×100/대조구의 흡광도로 계산하여 백분율로 나타내었다.The DPPH radical scavenging activity according to the concentration was calculated as the absorbance change of the sample measured after 1 to 10 minutes × 100/the absorbance of the control and expressed as a percentage.

DPPH 용액 대신 에탄올을 첨가한 시료의 흡광도를 기준값(blank)으로 하고 시료의 용매를 넣은 것을 대조구로 측정하였다.The absorbance of the sample to which ethanol was added instead of the DPPH solution was used as the reference value (blank), and the solvent of the sample was added and measured as a control.

DPPH는 짙은 자주색을 나타내며 그 자체가 질소 중심의 래디컬로서, 비교적 안정한 화합물로 vitamin C, 폴리페놀류 등의 항산화활성을 갖는 물질의 환원력에 의해 황색으로 변화하는 점을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다.DPPH has a dark purple color and is itself a nitrogen-centered radical, and is a relatively stable compound. Antioxidant activity was measured by using the point that changed to yellow due to the reducing power of substances having antioxidant activity such as vitamin C and polyphenols.

DPPH에 의한 항산화 활성은 대부분의 식물 추출물에서 페놀성 화합물의 증가와 함께 활성도 증가하는 경향을 보이는데 비교적 온도, pH, 색 등에 영향을 많이 받는 것으로 알려져 있다.Antioxidant activity by DPPH tends to increase with the increase of phenolic compounds in most plant extracts, but it is known that it is relatively affected by temperature, pH, and color.

실험 결과, ABTs assay와는 다른 경향의 결과를 보였는데, 물 추출물은 ABTs 래디컬 소거능과 같게 잎 부위가 가장 낮게 확인되었으나 메탄올과 에탄올 추출물의 경우에는 잎에 비해 자루부위에서 IC50 값이 오히려 낮게 나타나는 것을 확인하였다.As a result of the experiment, the results showed a tendency different from that of the ABTs assay.The water extract showed the lowest leaf area as in the ABTs radical scavenging ability, but the methanol and ethanol extract showed a rather low IC50 value in the stalk area compared to the leaf. I did.

도 9는 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 총 폴리페놀 함량에 대한 분석 결과를 나타낸 도면이다.9 is a view showing the analysis result of the total polyphenol content of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.

총 폴리페놀 함량의 측정은 20 ㎕의 추출물 96-well plate에 분주한 후 1 N Folin-Ciocalteu 시약을 넣고 실온에서 3분간 반응시킨 다음 10% sodium carbonate 용액을 80㎕ 가하여 1시간 반응시키고 나서 765 nm에서 흡광도를 측정하였다.To measure the total polyphenol content, 20 µl of the extract was dispensed into a 96-well plate, 1 N Folin-Ciocalteu reagent was added, reacted for 3 minutes at room temperature, and 80 µl of 10% sodium carbonate solution was added and reacted for 1 hour, followed by 765 nm. The absorbance was measured at.

총 폴리페놀의 함량은 0∼200 ppm의 gallic acid를 이용하여 검량곡선을 작성하고 시료 1g당 gallic acid의 함량(GA)으로 나타내었다.For the total polyphenol content, a calibration curve was prepared using 0-200 ppm gallic acid and expressed as the gallic acid content (GA) per 1 g of sample.

페놀성 화합물은 천연물에 함유되어 있는 성분으로 플라보노이드나 페놀산 및 안토시아닌 등의 총량인 총 폴리페놀은 DPPH 라디칼 소거활성과 같은 항산화 활성에 매우 중요한 인자로 작용하며 폴리페놀 함량은 Folin-Ciocalteu 시약이 페놀성 화합물에 의해 환원된 결과 몰리브덴 청색으로 발색하는 것을 원리로 분석하였다.Phenolic compounds are components contained in natural products. Total polyphenols, which are the total amount of flavonoids, phenolic acids, and anthocyanins, act as a very important factor for antioxidant activities such as DPPH radical scavenging activity, and the content of polyphenols is the Folin-Ciocalteu reagent is phenol. As a result of reduction by the sex compound, it was analyzed on the basis of the principle that molybdenum was colored blue.

4월에 수확한 병풀시료를 각 용매별, 부위별로 추출하여 폴리페놀 함량을 분석한 결과 추출용매에는 차이를 보이지 않았고 생육부위별로 비교했을 때 잎에 함량이 높게 나타나는 것을 확인하였다.As a result of analyzing the polyphenol content by extracting centella asiatica samples harvested in April by each solvent and site, there was no difference in the extraction solvent, and it was confirmed that the content was higher in the leaves when compared by growth site.

도 10은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 총 플라보노이드 함량에 대한 분석 결과를 나타낸 도면이다.10 is a view showing the analysis result of the total flavonoid content of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention.

플라보노이드 함량의 측정은 추출물 100㎕와 ethanol 400㎕를 섞은 후, 500㎕ 2% aluminum chloride용액을 첨가하여 1시간 반응시킨 후, Multimicroplate reader로 430nm에서 흡광도를 측정하였다.To measure the flavonoid content, 100 µl of the extract and 400 µl of ethanol were mixed, 500 µl 2% aluminum chloride solution was added and reacted for 1 hour, and the absorbance was measured at 430 nm with a Multimicroplate reader.

총 플라보노이드 함량은 0~250 ppm의 농도의 quercetin용액을 이용하여 검량곡선을 작성하고 시료 1g 당 quercetin의 함량을 계산하여 catechin equivalents(CAE)로 환산한 값으로 나타내었다.The total flavonoid content was expressed as a value converted to catechin equivalents (CAE) by preparing a calibration curve using a quercetin solution having a concentration of 0 to 250 ppm, and calculating the content of quercetin per 1 g of sample.

플라보노이드는 식물에 의해 합성된 폴리페놀의 가장 큰 부류로 quercetin, kaempferol, luteolin 등의 화합물을 총칭하는 것으로 그 식물체가 가지는 항산화능과 상관관계가 높으며 세 용매에서 동일하게 잎 추출물의 총 플라보노이드 함량이 높게 나타나는 것을 확인하였다.Flavonoids are the largest class of polyphenols synthesized by plants and collectively refer to compounds such as quercetin, kaempferol, and luteolin, and have a high correlation with the antioxidant activity of the plant, and the total flavonoid content of leaf extracts is the same in the three solvents. I confirmed that it appeared.

도 11은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 항균활성 시험에 대한 분석 조건을 나타낸 도면이며, 도 12 및 도 13은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 항균활성 시험에 대한 분석 결과를 나타낸 도면이다.11 is a view showing the analysis conditions for the antimicrobial activity test of Centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention, and FIGS. 12 and 13 show the analysis results for the antibacterial activity test of Centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention It is a drawing.

항균실험을 위한 균주는 한국미생물보존센터에서 분양받아 연구소에 보관중인 균주 중에서 선별하였고 병풀 추출물외에 항균활성이 많이 알려진 오미자를 선택하여 병풀과 오미자의 혼합물을 메탄올로 추출하여 비교 실험을 진행하였다.The strains for the antibacterial test were selected from the strains sold in the Korea Microbiology Conservation Center and stored in the laboratory. In addition to the centella asiatica extract, Schisandra chinensis with high antibacterial activity was selected and a mixture of centella asiatica and Schisandra chinensis was extracted with methanol to conduct comparative experiments.

각 시료의 추출은 100%, 70%, 50% 메탄올과 에탄올을 이용하여 시료양의 10배의 용매를 넣어 초음파 추출하였고 본 발명의 실시예에 따른 병풀 분말과 오미자 분말을 혼합한 상기 분쇄물로부터 제조된 병풀 추출물인 병풀와 오미자의 혼합추출물은 병풀 : 오미자 = 4 : 1 과 3 : 2 의 비율로 하여 예비실험을 한 후 최종 실험은 50% 메탄올에 4 : 1 비율로 진행하였다.Extraction of each sample was performed using 100%, 70%, 50% methanol and ethanol, and ultrasonically extracted by adding a solvent 10 times the amount of the sample, and prepared from the pulverized product obtained by mixing centella asiatica powder and Schisandra chinensis powder according to an embodiment of the present invention. The mixed extract of Centella asiatica extract, Centella asiatica and Schisandra chinensis, was preliminarily tested in the ratio of Centella asiatica: Schisandra chinensis = 4: 1 and 3: 2, and the final experiment was carried out in a ratio of 4: 1 in 50% methanol.

선별한 균주는 액체배지에 37℃, 24시간 배양한 후 2회 계대배양을 한 후 600nm에서 흡광도를 측정하여 O.D. 값이 0.3∼0.5 가 되도록 희석하여 각각의 고체배지에 200㎕씩 도말한 다음 paper disc를 올려 추출물을 농도별(105, 5×104, 104, 5×103)로 30㎕씩 점적한 후 건조하였다.Selected strains are cultured in a liquid medium at 37°C for 24 hours, then passaged twice, measured absorbance at 600 nm, diluted to an OD value of 0.3 to 0.5, and plated 200 µl on each solid medium. The disc was put up and the extracts were dripped at each concentration (10 5 , 5×10 4 , 10 4 , 5×10 3) and dried.

건조된 고체배지는 37℃에서 12∼36시간 배양하여 디스크 주위에 생기는 clear zone의 직경크기(mm)로 활성을 측정하였고 대조군은 추출한 용매를 점적하여 비교하였다.The dried solid medium was incubated for 12 to 36 hours at 37°C, and the activity was measured by the diameter size (mm) of the clear zone around the disk, and the control group was compared by dropping the extracted solvent.

메탄올을 이용한 병풀과 오미자의 상기 혼합 추출물을 농도별로 30㎕/disc씩 점적하여 실험한 결과 병풀 추출물은 Propioni-bacterium acnes, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis에서 항균활성을 확인했고 Str. pyogenes는 병풀 추출물만 항균활성이 확인되었다.As a result of experiment by dropping the above mixed extract of Centella asiatica and Schisandra chinensis using methanol at 30µl/disc for each concentration, Centella asiatica extract was confirmed to have antibacterial activity in Propioni-bacterium acnes, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, and Str. The antibacterial activity of pyogenes was confirmed only in Centella asiatica extract.

P. acnes는 병풀 분말만으로 구성된 분쇄물로부터 제조된 병풀 추출물로 처리했을때 보다 병풀 분말과 오미자 분말을 혼합한 분쇄물로부터 제조된 병풀 추출물인 혼합 추출물에서 상승효과를 보였다.P. acnes showed a synergistic effect in the mixed extract, a centella asiatica extract, prepared from centella asiatica powder and the pulverized product of Schisandra chinensis, than when treated with centella asiatica extract prepared from the pulverized product consisting of centella asiatica powder only.

도 14는 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 항염증효과 시험 관련 Raw 264.7 세포독성 시험에 대한 분석 결과를 나타낸 도면이며, 도 15는 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 항염증효과 시험 관련 NO 분석 결과를 나타낸 도면이다.FIG. 14 is a view showing the analysis results of the Raw 264.7 cytotoxicity test related to the anti-inflammatory effect test of Centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention, and FIG. 15 is related to the anti-inflammatory effect test of Centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention. It is a figure showing the result of NO analysis.

Raw 264.7 세포를 Penicillin/Streptomycin 100 unit/㎖와 10% FBS가 함유된 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO2 조건으로 2일 간격으로 계대 배양하였다.A Raw 264.7 cells were sub-cultured every two days with Penicillin / Streptomycin 100 unit / ㎖ with 10% FBS 37 ℃ in a DMEM medium containing, 5% CO 2 condition.

Raw 264.7 세포를 2x105 cells/㎖의 농도로 96 well plate에 분주하고 추출물을 농도별(312.5, 625, 1250, 2500 ppm)로 처리하여 24시간을 배양시킨 후에 MTT 시약을 첨가하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 4시간 반응시키고 난 후 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.Raw 264.7 cells were dispensed into a 96 well plate at a concentration of 2x10 5 cells/ml, and the extract was treated at different concentrations (312.5, 625, 1250, 2500 ppm), incubated for 24 hours, and then MTT reagent was added to 37℃, 5 After reacting for 4 hours in a% CO 2 incubator, absorbance was measured at 450 nm.

병풀추출물은 메탄올, 에탄올, 물을 이용하여 각각 추출하였고 오미자와 병풀의 혼합 추출물은 메탄올로 추출한 시료를 실험에 사용하였다.Centella asiatica extract was extracted using methanol, ethanol, and water, respectively, and mixed extracts of Schisandra chinensis and Centella asiatica were extracted with methanol and used in the experiment.

시료의 nitric oxide(NO) 및 전염증성 사이토카인 생성량에 대한 억제효과를 알아보기 위해 Nitrite 농도를 Griess 반응법을 기반으로 분석하여 NO 생성 지표로 사용하였다.In order to investigate the inhibitory effect on the production of nitric oxide (NO) and pro-inflammatory cytokines of the sample, the concentration of Nitrite was analyzed based on the Griess reaction method and used as an index of NO production.

배양세포의 상등액 100 ㎕와 sodium nitrite 표준액 (0-10 μM)을 동일한 용량의 Griess 용액 0.1% (w/v) N-(1-naphythyl) ethylene diamine dihydrochloride와 5% HCl용액으로 1% (w/v) sulfanilamide을 제조한 용액과 1:1로 혼합한 후 20분간 실온에 방치 후 Multimicroplate reader로 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.100 µl of the supernatant of cultured cells and sodium nitrite standard solution (0-10 μM) were mixed with 0.1% (w/v) N-(1-naphythyl) ethylene diamine dihydrochloride and 5% HCl solution in the same volume of Griess solution 1% (w/v). v) After mixing sulfanilamide 1:1 with the prepared solution, it was allowed to stand at room temperature for 20 minutes, and the absorbance was measured at 540 nm with a Multimicroplate reader.

세포생존율을 측정한 결과 용매별 추출물과 혼합 추출물의 경우 1250 ppm 이하로는 독성이 없음을 확인하였다.As a result of measuring the cell viability, it was confirmed that the extract for each solvent and the mixed extract had no toxicity at 1250 ppm or less.

Raw 264.7 세포는 세균감염에 의한 숙주의 비특이적 면역반응에 중요한 역할을 하는 세포로서 LPS와 같은 자극물질에 노출되면 산화질소(NO)를 유발하고 여기에 추출물을 처리하여 NO의 생성억제를 측정하였다.Raw 264.7 cells are cells that play an important role in the non-specific immune response of the host due to bacterial infection, and when exposed to stimulants such as LPS, they induce nitric oxide (NO), and the extracts were treated to measure the inhibition of NO production.

시험 결과, 다른 용매의 추출물은 눈에 띄는 감소효과를 보이지 않았으나 LPS 처리 후의 NO 수치를 비교했을 때 메탄올추출물에서 처리농도 1250 ppm은 15.1 uM, 625 ppm이 13.2 uM 으로 NO 발현을 50% 가까이 감소시키는 것을 확인하였다.As a result of the test, extracts of other solvents did not show any remarkable reduction effect, but when comparing the NO level after LPS treatment, the treatment concentration of 1250 ppm in methanol extract was 15.1 uM and 625 ppm was 13.2 uM, reducing NO expression by 50%. Confirmed.

도 16은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 미백효과 시험 관련 B16F10 세포독성에 대한 분석 결과를 나타낸 도면이며, 도 17은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 미백효과 시험 관련 멜라닌 생합성율 측정에 대한 분석 결과를 나타낸 도면이다.16 is a view showing the analysis result of the B16F10 cytotoxicity related to the whitening effect test of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention, and FIG. 17 is a measurement of melanin biosynthesis rate related to the whitening effect test of centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention It is a diagram showing the analysis result of.

우선, 세포생존율 측정을 위해 B16F10 cell을 Penicillin/Streptomycin 100 unit/㎖과 10% FBS가 함유된 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO2 조건으로 배양하였다.First, to measure the cell viability, B16F10 cells were cultured in DMEM medium containing 100 units/ml of Penicillin/Streptomycin and 10% FBS at 37° C. and 5% CO 2 .

B16F10 세포를 2x105 cells/㎖의 농도로 micro plate에 분주하고 추출물을 농도별(125, 250, 500, 1000 ppm)로 처리하여 24시간을 배양시킨 후에 MTT 시약을 첨가하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 4시간 반응시키고 난 후 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.Dispense the B16F10 cells at a concentration of 2x10 5 cells/ml into a micro plate, treat the extract by concentration (125, 250, 500, 1000 ppm), incubate for 24 hours, and add MTT reagent to 37℃, 5% CO. 2 After reacting for 4 hours in an incubator, absorbance was measured at 450 nm.

또한, 멜라닌생합성율 분석을 위해, B16F10 세포주를 배양하여 well당 4x104 cells/well의 농도로 분주하고 24시간을 배양 후 추출물을 각 농도별(125, 250, 500, 1000 ppm)로 처리한 다음 1시간 배양하여 α-MSH 100 nM를 처리하였다.In addition, for melanin biosynthesis analysis, the B16F10 cell line was cultured and dispensed at a concentration of 4x10 4 cells/well per well, and the extract was treated at each concentration (125, 250, 500, 1000 ppm) after culturing for 24 hours. Incubated for 1 hour and treated with α-MSH 100 nM.

이후 48시간을 배양하여 well plate를 PBS로 세척한 후 각 well에 1 N NaOH 용액 400 ㎕을 첨가하고 60℃에서 1시간 동안 용해한 후 Microplate Reader로 405 nm에서 흡광도를 측정하였다.After incubation for 48 hours, the well plate was washed with PBS, 400 μl of 1 N NaOH solution was added to each well, dissolved at 60° C. for 1 hour, and absorbance was measured at 405 nm with a Microplate Reader.

대조군시료는 α-MSH 처리과정을 제외하고 동일하게 진행하였다.The control sample was carried out in the same manner except for the α-MSH treatment process.

실험군시료는 염증실험과 동일하게 병풀의 용매별 추출물과 오미자와 혼합추출물로 진행하였다.In the same manner as in the inflammatory test, the experimental group samples were performed with extracts of centella asiatica by solvent and mixed extracts of Schisandra chinensis.

MTT assay를 통해 세포생존율을 측정한 결과, 병풀과 오미자의 혼합추출물을 1000 ppm으로 처리했을 때 생존율이 약 85 % 로 나온 것을 제외하고 나머지 모든 농도와 추출물에서 세포 독성이 없음을 확인하였다.As a result of measuring the cell viability through the MTT assay, it was confirmed that there was no cytotoxicity in all the remaining concentrations and extracts except that the viability was about 85% when the mixed extract of Centella asiatica and Schisandra chinensis was treated with 1000 ppm.

α-MSH(α-melanocyte stimulating hormone)는 멜라닌 세포의 증식을 유도하고 tyrosinase를 비롯한 멜라닌 합성 관련 효소들의 발현을 촉진하여 멜라닌의 생성을 증가시키는 호르몬으로 악성 흑색종 세포주인 B16F10에 과색소 침착을 유도하여 병풀 추출물로 처리 후 감소율을 분석하여 미백효과를 확인하였다.α-MSH (α-melanocyte stimulating hormone) is a hormone that increases melanin production by inducing the proliferation of melanocytes and promoting the expression of enzymes related to melanin synthesis, including tyrosinase. It induces hyperpigmentation in B16F10, a malignant melanoma cell line. Then, after treatment with Centella asiatica extract, the reduction rate was analyzed to confirm the whitening effect.

시험 결과, 추출물 250 ppm 처리군의 경우 전체적으로 멜라닌 합성율이 감소했고 특히 병풀의 물추출물이 20% 가까이 줄어드는 결과를 나타내었다.As a result of the test, in the case of the extract treated with 250 ppm, the overall melanin synthesis rate decreased, and in particular, the water extract of Centella asiatica was reduced by nearly 20%.

도 18은 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 주름개선효과 시험 관련 세포생존율 측정에 대한 분석 결과를 나타낸 도면이며, 도 19는 본 발명의 실시예에 따른 병풀 추출물의 콜라게네이즈 활성저해 분석 결과를 나타낸 도면이다.18 is a view showing the analysis result of the cell viability measurement related to the wrinkle improvement effect test of Centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention, and FIG. 19 is a result of analysis on the inhibition of collagenase activity of Centella asiatica extract according to an embodiment of the present invention It is a diagram showing.

병풀추출물의 주름개선효과를 보기위한 세포는 Human dermal fibroblast(NHDF)를 사용하였고 EZ-Cytox 용액을 반응시켰을 때 생성되는 formazan과 살아있는 세포 수의 상관관계를 가지고 생존율을 측정하였다.Human dermal fibroblast (NHDF) was used as cells for the wrinkle improvement effect of Centella asiatica extract, and the survival rate was measured with the correlation between the number of living cells and formazan produced when reacting with EZ-Cytox solution.

콜라게네이즈중 하나인 MMP-1을 활성화시키는 물질로는 Phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA)를 사용하였고 콜라겐을 분해하는 효소인 콜라게네이즈의 활성 정도를 분석하였다.Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) was used as a substance that activates MMP-1, one of the collagenases, and the degree of activity of collagenase, an enzyme that decomposes collagen, was analyzed.

EZ-CyTox 시약을 통해 NHDF의 세포생존율을 측정한 결과, 250 ppm 농도까지 세포 독성이 없고 500 ppm부터 독성을 보여서 주름개선효과를 보기위한 콜라게네이즈 활성저해시험은 추출물의 농도를 100, 200, 400 ppm으로 처리하여 진행하였다.As a result of measuring the cell viability of NHDF through the EZ-CyTox reagent, the concentration of the extract was 100, 200, and the concentration of the extract was 100, 200, and the concentration of the extract was 100, 200, and it showed toxicity from 500 ppm. It proceeded by treatment with 400 ppm.

시험 결과, Phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA)를 처리한 그룹은 MMP-1 함량이 약 29.0 ng/㎖ 로 증가하였고, 병풀추출물 100, 200 ppm 으로 전처리 후 PMA를 처리한 그룹의 각 MMP-1 함량은 약 29.9, 29.6 ng/㎖ 로 PMA 만 처리한 그룹과 유사한 결과를 나타내었다.As a result of the test, in the group treated with Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA), the MMP-1 content increased to about 29.0 ng/ml, and each MMP- of the group treated with PMA after pretreatment with 100 and 200 ppm centella extract. The 1 content was about 29.9 and 29.6 ng/ml, showing similar results to the group treated with only PMA.

병풀추출물 400 ppm 처리군의 경우, 대조군에 비해 MMP-1 함량이 감소하였다.In the case of the 400 ppm centella extract treated group, the MMP-1 content was decreased compared to the control group.

상술한 바와 같이, 국내에서 재배중인 병풀을 수확하여 유효성분에 대한 HPLC 분석을 한 결과, 용매에 따른 추출효율은 메탄올 추출 시에 가장 높게 나왔고 생육부위별로 비교해보면 트리터펜(트리터페노이드) 성분은 주로 잎 부분에 축적되는 것으로 확인되었으며 시기별로 보면 수확간격이 3개월로 다소 길어 정확한 비교는 어렵지만 기온이 높아지는 여름철에 수확했을 때 성분이 높은 것으로 나타났다.As described above, as a result of HPLC analysis of the active ingredient by harvesting Centella asiatica cultivated in Korea, the extraction efficiency according to the solvent was the highest when methanol was extracted, and when compared by growth site, the triterpene (triterpenoid) component was It was confirmed that it mainly accumulates in the leaves, and it is difficult to accurately compare because the harvesting interval is a little longer than 3 months, but it was found that the ingredients were high when harvested in the summer when the temperature was high.

병풀 추출물의 생리활성검증을 위하여 항산화 활성을 시험하였는데 항산화효과와 밀접한 관련이 있는 총 폴리페놀, 총 플라보노이드 함량은 자루부위보다 잎에 많이 함유되었음을 확인하였고, ABTs assay 결과, 트리터펜 성분함량이 높았던 잎의 추출물이 자루보다 래디컬 소거능이 높게 확인되었다.In order to verify the physiological activity of Centella asiatica extract, antioxidant activity was tested. It was confirmed that the total polyphenol and total flavonoid content, which are closely related to the antioxidant effect, were contained in the leaves more than in the stalk. As a result of ABTs assay, leaves with higher triterpene content The extract of was confirmed to have a higher radical scavenging ability than the sack.

반면 DPPH assay 에서 물 추출물을 제외한 메탄올과 에탄올 추출은 오히려 자루부분의 래디컬 소거능이 더 높게 나왔는데, 이는 유기용매 추출 시 엽록소가 빠져나와 색이 진한 초록색을 띄는데 이런 점도 결과에 영향을 미쳤을 것으로 판단된다.On the other hand, in the DPPH assay, methanol and ethanol extraction, excluding water extract, showed higher radical scavenging ability in the bag part, which is a dark green color due to chlorophyll escaping when extracting organic solvents. .

또한 세포실험을 통하여 항염증효과와 미백 및 주름개선효능에 대한 시험도 진행하였는데 메탄올추출물의 경우 NO 수치를 50% 가량 감소시키는 것으로 확인되었고 병품과 오미자의 혼합추출물에서도 감소되는 등 항염증효과를 확인하였다.In addition, tests for anti-inflammatory effects, whitening and wrinkle improvement effects were also conducted through cell experiments, and it was confirmed that the methanol extract reduced the NO level by 50%, and the anti-inflammatory effect was also reduced in the mixed extract of Byeongpum and Schisandra chinensis. I did.

추출물의 미백효과 확인을 위한 멜라닌합성감소율은 물추출물에서 가장 많이 감소하였다.The reduction rate of melanin synthesis to confirm the whitening effect of the extract was the most decreased in the water extract.

전술된 내용은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 수정 및 변형이 가능할 것이다. 따라서, 본 발명에 개시된 실시예들은 본 발명의 기술 사상을 한정하기 위한 것이 아니라 설명하기 위한 것이고, 이러한 실시예에 의하여 본 발명의 기술 사상의 범위가 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 보호 범위는 아래의 청구범위에 의하여 해석되어야 하며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 기술 사상은 본 발명의 권리범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다.The above-described contents may be modified and modified without departing from the essential characteristics of the present invention by those of ordinary skill in the technical field to which the present invention pertains. Accordingly, the embodiments disclosed in the present invention are not intended to limit the technical idea of the present invention, but to explain the technical idea, and the scope of the technical idea of the present invention is not limited by these embodiments. The scope of protection of the present invention should be interpreted by the following claims, and all technical ideas within the scope equivalent thereto should be construed as being included in the scope of the present invention.

Claims (6)

병풀의 잎을 건조 및 분쇄한 병풀 분말을 포함하는 분쇄물을 준비하는 분말화 단계;
상기 분쇄물과 용매를 1:10의 중량 비율로 혼합한 후 초음파 추출하여 추출액을 제조하는 추출 단계;
상기 추출액을 원심분리하여 상층액을 회수하는 원심분리 단계; 및
상기 상층액을 여과 후 농축하여 병풀 추출물을 제조하는 제조 단계를 포함하되,
상기 분말화 단계는 오미자를 건조 및 분쇄하여 얻어진 오미자 분말과 상기 병풀 분말을 1:4의 중량 비율로 혼합하여 상기 분쇄물을 얻는 단계를 포함하며,
상기 병출 추출물을 500ppm 미만으로 혼합하여 화장료 조성물을 마련하는 단계를 포함하는 병풀 추출물을 이용한 화장료 조성물 제조 방법.
A powdering step of preparing a pulverized product comprising centella asiatica powder obtained by drying and pulverizing centella asiatica leaves;
An extraction step of preparing an extract by mixing the pulverized product and the solvent in a weight ratio of 1:10 and then ultrasonically extracting;
A centrifugation step of centrifuging the extract to recover the supernatant; And
Comprising a manufacturing step of preparing centella asiatica extract by concentrating after filtering the supernatant,
The powdering step includes the step of obtaining the pulverized product by mixing the Schisandra chinensis powder obtained by drying and pulverizing Schisandra chinensis and the centella asiatica powder in a weight ratio of 1:4,
A method for producing a cosmetic composition using centella asiatica extract comprising the step of preparing a cosmetic composition by mixing the bottle extract in less than 500ppm.
 삭제delete 청구항 1에 있어서,
상기 용매는 메탄올인 것을 특징으로 하는 병풀 추출물을 이용한 화장료 조성물 제조 방법.
The method according to claim 1,
The method for producing a cosmetic composition using centella asiatica extract, characterized in that the solvent is methanol.
 청구항 1에 있어서,
상기 원심분리 단계는 상기 추출액을 3000rpm에서 8분 ~ 12분 동안 원심분리하는 것을 특징으로 하는 병풀 추출물을 이용한 화장료 조성물 제조 방법.
The method according to claim 1,
The centrifugation step is a method for producing a cosmetic composition using centrifugal centrifugation at 3000rpm for 8 to 12 minutes.
 삭제delete 청구항 1에 있어서,
상기 병풀은 여름에 채취된 병풀인 것을 특징으로 하는 병풀 추출물을 이용한 화장료 조성물 제조 방법.The method according to claim 1,
The centella asiatica is a method for producing a cosmetic composition using centella asiatica extract, characterized in that the centella asiatica is collected in summer.
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