KR101293418B1 - Fermented extract of Oriental medicine plant complex, method for manufacturing the same and cosmetic compositions comprising the oriental medicine plant complex - Google Patents

Fermented extract of Oriental medicine plant complex, method for manufacturing the same and cosmetic compositions comprising the oriental medicine plant complex Download PDF

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Abstract

당귀, 지황, 천궁 및 작약을 물 또는 유기용매로 추출하고 효모균을 이용하여 발효시킨 한방 약재 복합 추출발효물, 그 제조방법 및 그 한방 약재 복합 추출발효물을 포함하는 화장료 조성물이 제공된다.
상기 한방 약재 복합 추출발효물은 피부 내 유해 활성산소를 제거하여 피부세포를 보호하며 우수한 항산화 효과를 나타낸다.Provided is a herbal composition extract extract fermented with Angelica gigas, Chihwang, Cheongung and Peony extracted with water or an organic solvent and fermented using yeast, a preparation method thereof, and a cosmetic composition comprising the herbal extract complex fermentation.
The herbal medicinal extract extract fermentation protects skin cells by removing harmful free radicals in the skin and shows an excellent antioxidant effect.

Description

한방 약재 복합 추출발효물, 그 제조방법 및 그 한방 약재 복합 추출발효물을 포함하는 화장료 조성물 {Fermented extract of Oriental medicine plant complex, method for manufacturing the same and cosmetic compositions comprising the oriental medicine plant complex}Fermented extract of Oriental medicine plant complex, method for manufacturing the same and cosmetic compositions comprising the oriental medicine plant complex}

본 발명은 당귀, 지황, 천궁 및 작약의 한방 약재 복합 추출발효물, 그 제조방법 및 그 한방 약재 복합 추출발효물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 물 및 유기용매 중에서 선택된 하나 이상으로 추출한 상기 한방 약재에 발효기술이 적용된 한방 약재 복합 추출발효물, 그 제조방법 및 그 한방 약재 복합 추출발효물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition comprising an extract of fermented Oriental medicine, Angelica, Cheongung, and Peony, as an active ingredient, a method of manufacturing the same, and a method of producing the same as an active ingredient, and more particularly in water and organic solvents. It relates to a herbal medicinal herb composite extract fermentation applied fermentation technology to the selected herbal medicines extracted with one or more selected, the preparation method and the herbal medicinal herb composite extract fermentation.

노화란 노령화에 따라서 나타나는 생체의 퇴화적(退化的) 변화를 말한다. 최근 가장 두드러지게 밝혀지고 있는 노화의 원인으로는 스트레스, 오염된 공기와 물, 인스턴트 식품, 자외선 등이 있다.Aging refers to the degenerative changes in living organisms that occur with aging. The most prominent causes of aging in recent years are stress, polluted air and water, convenience foods, and ultraviolet light.

특히, 대두되고 있는 피부 노화론 가설은 내분비설 (Endocrine theory), 유리기설 (Free radical theory), 독소물질론 (Toxic waste theory) 등 세 가지이다.In particular, three emerging skin aging theories are endocrine (Endocrine theory), free radical theory (Toxic waste theory), free radical theory (Toxic waste theory).

최근 가장 주목 받는 이론 유리기설 (Free radical theory)로 유리기(활성산소)에 의해 DNA, 단백질 및 지질 등이 손상되어 노화가 일어난다고 한다. In recent years, the most popular theory of free radical (Free radical theory) is that free radicals (active oxygen) damage DNA, proteins, and lipids, causing aging.

일반적으로 노화방지용 기능성 화장료는 화장품 유연제 원료로 사용되는 유지, 오일 등이 공기나 물중에 용해된 용존 산소 및 자외선 등으로부터 유발되는 유리기에 의해 산화되고 분해되는 것을 방지 내지 지연시킬 목적으로 항산화제를 포함시키고 있다.In general, anti-aging functional cosmetics include antioxidants for the purpose of preventing or delaying the oxidation and decomposition of fats and oils used as cosmetic softener raw materials by free radicals caused by dissolved oxygen and ultraviolet rays dissolved in air or water. I'm making it.

지금까지 개발되어 사용되고 있는 항산화제 중 합성 항산화제는 tert-뷰틸하이드록시톨루엔(tert-butyl hydroxyltoluene,BHT), tert-부틸히드록시아니솔(tert-butylhydroxyanisol, BHA)등이 있고 천연 항산화제는 α-토코페롤(α-tocopherol), 비타민 C, 비타민 E, 카로티노이드(carotenoids), 플라보노이드(flavonoids), 탄닌 등이 있다. 또한, 항산화 효소로는 수퍼옥사이드 디스뮤타아제(Superoxide dismutase, SOD)가 있다.Among the antioxidants developed and used so far, synthetic antioxidants include tert-butyl hydroxyltoluene (BHT) and tert-butylhydroxyanisol (BHA). Tocopherol (α-tocopherol), vitamin C, vitamin E, carotenoids (carotenoids), flavonoids (flavonoids), tannins and the like. In addition, antioxidant enzymes include Superoxide dismutase (SOD).

최근 산화적 스트레스가 노화를 비롯하여 각종 질환을 일으키는 중요한 원인으로 입증됨으로써 유리기(free radical) 소거활성을 갖는 항산화제의 노화억제 및 질환의 치료제로서 가능성이 크게 부각되고 있다. 그러나 지금까지 천연 및 합성 항산화제가 개발되어 의약품 또는 연구시약으로 사용되고 있으나, 독성 및 인비보(in vivo)에서의 여러 가지 문제점으로 인하여 산화적 스트레스에 의한 노화 및 각종 질병의 치료용 의약품으로서의 사용에 한계를 지니고 있다. 따라서 기존의 항산화제가 갖는 문제점을 해결할 수 있는 새로운 항산화제의 개발이 요구되고 있다.Recently, as oxidative stress has been proved to be an important cause of various diseases including aging, the possibility of anti-aging of antioxidants having free radical scavenging activity and treatment of diseases has been greatly highlighted. However, until now, natural and synthetic antioxidants have been developed and used as medicines or research reagents, but due to various problems in toxicity and in vivo, they are limited in use as medicines for the treatment of aging due to oxidative stress and various diseases. It has Therefore, the development of new antioxidants that can solve the problems of the existing antioxidants is required.

상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여, 본 발명은 천연 유래의 유효물질 중에서 피부에 안전하면서도 항산화 효과가 우수한 한방 약재 복합 추출발효물과 그 제조방법을 제공한다.In order to solve the problems as described above, the present invention provides a herbal extract extract fermentation and a method for producing the same, which is safe for the skin and excellent in the antioxidant effect among natural effective substances.

본 발명은 상기 한방 약재 복합 추출발효물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.The present invention provides a cosmetic composition comprising the herbal medicine complex extract fermentation.

본 발명의 실시예들에 따른 한방 약재 복합 추출발효물은, 당귀, 지황, 천궁 및 작약을 물 및 유기용매 중에서 선택된 하나 이상으로 추출하고 효모균(Sacchromyces cerevisiae)을 이용하여 발효시킬 수 있다.Herbal medicine complex extract fermentation according to the embodiments of the present invention, extracts Angelica, gihwang, cheongung and peony with one or more selected from water and organic solvents and yeast ( Sacchromyces cerevisiae ) can be used for fermentation.

상기 당귀, 지황, 천궁 및 작약은 각각 1:1:1:1 중량비(w/w/w/w)로 혼합될 수 있다.The Angelica, Chihwang, Cheongung and Peony may be mixed in a 1: 1: 1: 1 weight ratio (w / w / w / w), respectively.

본 발명의 실시예들에 따른 한방 약재 복합 추출발효물 제조방법은 당귀, 지황, 천궁 및 작약을 혼합하고 물, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출하여 추출물을 얻는 단계, 상기 추출물을 여과포, 여과지 및 감압여과장치 중에서 선택된 하나 이상으로 여과하고, 동결 건조하는 단계, 상기 농축한 결과물에 효모균(Sacchromyces cerevisiae)을 첨가하여 발효시키는 단계를 포함할 수 있다.Herbal medicine composite extract fermentation method according to the embodiments of the present invention is a mixture of Angelica, Chihwang, Cheongung and Peony mixed with water, methanol, ethanol, glycerin, ethyl acetate, butylene glycol, propylene glycol, dichloromethane and hexane Obtaining an extract by extracting with one or more solvents selected from the group consisting of, filtering the extract with one or more selected from filter cloth, filter paper, and a vacuum filter, and freeze drying the yeast ( Sacchromyces) in the concentrated product. cerevisiae ) may comprise the step of fermentation.

상기 당귀, 지황, 천궁 및 작약은 각각 1:1:1:1 중량비(w/w/w/w)로 혼합될 수 있다.The Angelica, Chihwang, Cheongung and Peony may be mixed in a 1: 1: 1: 1 weight ratio (w / w / w / w), respectively.

상기 추출은 10 ~ 80℃에서 6시간 내지 24시간 동안 진탕 추출하는 것일 수 있다. The extraction may be to extract shaking for 6 to 24 hours at 10 ~ 80 ℃.

상기 발효는 4 ~ 40℃에서 30일 ~ 12개월 동안 수행할 수 있다.The fermentation may be carried out for 30 days to 12 months at 4 ~ 40 ℃.

상기 동결 건조는 -20℃부터 단계적으로 30℃까지 36~48 시간 동안 동결 건조하여 건조분말을 수득하는 단계를 포함할 수 있다. The freeze drying may include a step of freeze drying for 36 to 48 hours from -20 ℃ to 30 ℃ step by step to obtain a dry powder.

본 발명의 실시예들에 따른 화장료 조성물은 상기 한방 약재 복합 추출발효물을 포함할 수 있다.Cosmetic composition according to the embodiments of the present invention may include the herbal medicine complex extract fermentation.

상기 한방 약재 복합 추출발효물은 상기 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.00002~30 중량%로 포함될 수 있다.The herbal herbal extract extract fermentation may be included in 0.00002 ~ 30% by weight based on the total weight of the cosmetic composition.

상기 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 에센스, 영양크림, 바디크림, 베이비로션 또는 베이비크림으로 제형화될 수 있다.The cosmetic composition may be formulated as a flexible cosmetics, nourishing cosmetics, essence, nutrition cream, body cream, baby lotion or baby cream.

본 발명의 실시예들에 따르면, 당귀, 지황, 천궁 및 작약을 포함하는 한방 약재 복합 추출물에 발효기술을 적용함으로써 항산화 효과를 나타내는 유효성분의 함량을 증대시킬 수 있다. 따라서 본 발명의 실시예들에 따른 한방 약재 복합 추출발효물을 이용하면 피부 내 유해 활성산소 제거 효과가 개선되어 피부세포를 효과적으로 보호할 수 있다.According to embodiments of the present invention, by applying the fermentation technique to the herbal medicine complex extract containing Angelica, Chihwang, Cheongung and Peony can increase the content of the active ingredient exhibiting an antioxidant effect. Therefore, by using the herbal herbal extract extract fermentation according to the embodiments of the present invention it is possible to effectively protect the skin cells by removing the harmful free radicals in the skin.

도 1은 DPPH 소거능을 통해 항산화 효과를 나타내는 그래프이다.
도 2는 SOD 유사활성능 통해 항산화 효과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 하이드로젠 퍼옥사이드(Hydrogen peroxide) 소거능을 통해 항산화 효과를 나타내는 그래프이다.
도 4는 실시예 1의 세포독성에 관한 그래프이다.
도 5는 UV 스펙트럼 측정을 통해 항산화 효과를 확인하는 그래프이다.
도 6은 당귀, 지황, 천궁 및 작약의 지표물질을 HPLC로 분석한 그래프이다.
도 7은 한방 약재 복합 추출물의 지표물질을 HPLC로 1차 분석한 그래프이다.
도 8은 실시예 1의 지표물질을 HPLC로 1차 분석한 그래프이다.
도 9는 한방 약재 복합 추출물의 지표물질을 HPLC로 2차 분석한 그래프이다.
도 10은 실시예 1의 지표물질을 HPLC로 2차 분석한 그래프이다.1 is a graph showing the antioxidant effect through DPPH scavenging ability.
2 is a graph showing the antioxidant effect through the SOD-like activity.
Figure 3 is a graph showing the antioxidant effect through the hydrogen peroxide (Hydrogen peroxide) scavenging ability.
Figure 4 is a graph of the cytotoxicity of Example 1.
5 is a graph confirming the antioxidant effect through the UV spectrum measurement.
Figure 6 is a graph of HPLC analysis of the indicators of Angelica, Chihwang, Cheongung and Peony.
Figure 7 is a graph of the primary analysis of the indicator material of the herbal medicine complex extract by HPLC.
8 is a graph of the first analysis of the indicator of Example 1 by HPLC.
9 is a graph of secondary analysis of the indicator material of the herbal medicine complex extract by HPLC.
10 is a graph obtained by analyzing the indicator material of Example 1 by HPLC.

이하, 실시예 및 실험예를 통하여 본 발명을 상세히 설명한다. 본 발명의 목적, 특징은 이하의 실시예 및 실험예를 통하여 쉽게 이해될 수 있다. 본 발명은 하기에서 설명되는 실시예 및 실험예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화 될 수있다. 하기에서 소개되는 실시예 및 실험예는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 본 발명의 기술적 사상이 충분히 전달될 수 있도록 하기 위하여 제공되는 것이다. 따라서 이하의 실시예 및 실험예에 의하여 본 발명이 제한되어서는 안 된다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to Examples and Experimental Examples. The objects and features of the present invention can be easily understood through the following examples and experimental examples. The present invention is not limited to the examples and experimental examples described below, but may be embodied in other forms. Examples and experimental examples introduced below are provided to sufficiently convey the technical spirit of the present invention to those skilled in the art. Therefore, the present invention should not be limited by the following examples and experimental examples.

본 발명에서는 당귀, 지황, 천궁 및 작약을 분쇄한 후 물 및 유기용매 중에서 선택된 하나 이상으로 추출하는 단계; 및 상기 추출된 당귀, 지황, 천궁 및 작약의 한방 약재를 효모균으로 발효시키는 단계;를 통하여 한방 약재 복합 추출발효물을 제조한 다음, 3)DPPH를 이용한 전자공여능 실험, 수퍼옥사이드 디스뮤타아제(Superoxide dismutase, SOD) 유사활성 실험 및 하이드로젠 퍼옥사이드(Hydrogen peroxide) 소거능 실험을 통하여 항산화 효과를 확인하였다.In the present invention, the step of extracting at least one selected from water and an organic solvent after grinding the Angelica, Chihwang, Cheongung and Peony; And fermenting the herbal medicines of Angelica vulgaris, Chihwang, Cheongung and Peony extracted into yeasts; and then, preparing herbal extracts of fermented medicinal herbs through the yeast, 3) electron donating ability experiment using DPPH, superoxide dismutase dismutase (SOD) -like activity test and hydrogen peroxide (Hydrogen peroxide) scavenging test was confirmed the antioxidant effect.

본 발명에서 사용하는 당귀 (當歸, 학명: Gigantic Angelica)는 산형과(傘形科, Apiaceae)에 속하는 한약재인 당귀의 뿌리이다. 비타민 B12, 엽산(Folic acid), 철분(鐵分)을 포함하고 있어서 조혈작용을 하여 혈허를 개선하고 혈액의 헤마토크리트(Hematocrit, 적혈구 용적율)를 높인다. 또한 비타민 E가 함유되어 있어 비타민 E 결핍증에 작용한다. 당귀의 정유(精油)는 혈관을 확장하여 혈압을 저하시키고 뇌 혈류를 증진시켜 말초혈관을 확장하여 혈액순환을 원활히 함으로써 말초순환장애를 개선한다. Angelica used in the present invention (當歸, Scientific name: Gigantic Angelica ) is the root of Angelica gigas, an herb belonging to the Apiaceae family. Vitamin B12, folic acid (Folic acid), and iron (鐵 分) contains hematopoietic action to improve blood flow and hematocrit (hematocrit) of the blood (hematocrit) increases. It also contains vitamin E, which acts on vitamin E deficiency. Angelica essential oil (精油) to expand blood vessels to lower blood pressure and promote blood flow to the peripheral blood vessels by expanding blood circulation to improve peripheral circulation disorders.

본 발명에서 사용하는 지황(地黃, 학명: Rehmannia glutinosa)은 파리풀과의 여러해살이풀의 뿌리이다. 철분이 함유되어 있어 조혈작용을 하며 비타민 A가 함유되어 있어 피부각화를 예방하고 피부를 부드럽게 하며 각질 세포를 연화한다. 함유성분 중 카탈폴(Catalpol)이 고혈당(高血糖)에 대해 현저하게 혈당강하작용을 하고 이뇨 작용을 한다. Chihwang (地 黄, scientific name: Rehmannia used in the present invention) glutinosa ) is the root of perennial herbaceous plants. It contains iron to help hematopoietic, and vitamin A to prevent skin keratinization, soften skin and soften keratinocytes. Among the components, catalpol (Catalpol) has a significant hypoglycemic effect on hyperglycemia (高 血糖) and diuretic effect.

본 발명에서 사용하는 천궁 (川芎, 학명: Cnidium officinale)은 산형과의 여러해살이 풀이고 뿌리나 줄기를 사용한다. 함유 성분인 페룰산(Ferulic acid)이 진통, 진경작용과 평활근 이완작용이 있다. Cheongung used in the present invention (川芎, scientific name: Cnidium officinale ) is a perennial herb from erectus and uses roots or stems. Ferullic acid, which is a component, has analgesic, cough and smooth muscle relaxation.

본 발명에서 사용하는 작약 (芍藥, 학명: Paeonia lactiflora Pall . var . hortensis Makino) 은 작약과의 여러해살이풀로 함박꽃이라고 하는 원예종이며 뿌리를 사용한다. 여러 종류의 당(糖), 점액질, 유기산과 미량 미네랄이 많이 함유되어 있어서, 영양부족으로 인한 도한(盜汗)을 완화하는 수렴작용을 한다. 특히 이질간균, 황색포도상구균, 녹농균, 대장간균에 대한 항균작용이 강하고 면역능력 조절작용이 있고 항염 작용을 한다.Peony used in the present invention (芍藥, scientific name: Paeonia lactiflora Pall . there is . hortensis Makino ) is a perennial herb from the peony and is a horticultural species called hawthorn and uses its roots. Many kinds of sugars, mucus, organic acids and trace minerals are contained a lot, the malnutrition of the limit (盜汗) to reduce the convergence effect. In particular, antibacterial activity against dysentery bacillus, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, E. coli bacterium, strong immune function and anti-inflammatory action.

본 발명의 실시예들에 따른 상기 한방 약재 복합 추출발효물에서 당귀, 지황, 천궁 및 작약은 다양한 중량비로 혼합될 수 있으며, 상기 당귀, 지황, 천궁 및 작약은 각각 1:1:1:1 중량비(w/w/w/w)인 것이 바람직할 수 있다.In the herbal medicinal herb extract extract fermentation according to the embodiments of the present invention can be mixed in a variety of weight ratios, Angelica, jihwang, cheongung and peony, the angelica, jihwang, cheongung and peony are 1: 1: 1: 1 weight ratio, respectively It may be desirable to be (w / w / w / w).

상기 당귀, 지황, 천궁 및 작약을 추출하는 단계에서 사용하는 추출 용매로는 물, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산으로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상을 사용할 수 있다. 이때 추출온도는 10 내지 80℃가 바람직하며, 6시간 내지 24시간 동안 추출할 수 있다. 상기 추출온도 및 추출시간을 벗어나면 추출 효율이 떨어지거나 성분의 변화가 생길 수 있다.As the extraction solvent used in the step of extracting the Angelica, gihwang, cheongung and peony, one or more selected from the group consisting of water, methanol, ethanol, glycerin, ethyl acetate, butylene glycol, propylene glycol, dichloromethane and hexane can be used. Can be. At this time, the extraction temperature is preferably 10 to 80 ℃, it can be extracted for 6 hours to 24 hours. If the extraction temperature and extraction time is out of the extraction efficiency may decrease or change of components may occur.

본 발명의 실시예들에 따른 한방 약재는 통상의 한방 약재 추출물의 제조방법에 따라 제조될 수 있다. 구체적으로 냉침추출법, 온침추출법 또는 열 추출법 등으로 제조될 수 있으며, 통상의 추출기기 또는 초음파분쇄 추출기 등을 이용할 수 있다. Herbal medicine according to the embodiments of the present invention can be prepared according to the conventional method of manufacturing herbal medicine extract. Specifically, it may be prepared by a cold extraction method, a hot extraction method or a heat extraction method, it may be used a conventional extraction device or ultrasonic grinding extractor.

상기 제조된 추출물은 이후 여과하거나 농축 또는 건조과정을 수행하여 용매를 제거할 수 있으며, 여과, 농축 및 건조를 모두 수행할 수 있다. 구체적으로 상기 여과는 여과포나 여과지를 이용하거나 감압여과기를 이용할 수 있으며, 상기 농축은 일 예로 회전 증발기를 이용하여 감압농축할 수 있으며, 상기 건조는 일 예로 동결건조법으로 수행할 수 있다.The prepared extract can then be filtered or concentrated or dried to remove the solvent, it can be carried out both filtration, concentration and drying. Specifically, the filtration may be performed using a filter cloth or filter paper or a reduced pressure filter. The concentration may be concentrated under reduced pressure using, for example, a rotary evaporator, and the drying may be performed by, for example, a lyophilization method.

또한, 상기 한방 약재 복합 추출물은 상기 수득되는 추출물의 농축 및 동결건조를 통하여 수분을 완전히 제거시킬 수 있으며, 상기 수분을 완전히 제거시킨 한방 약재 복합 추출물은 분말형태로 사용할 수 있다.In addition, the herbal medicinal herb complex extract can completely remove the moisture through the concentration and lyophilization of the extract obtained, the herbal medicinal herb complex extract completely removed the moisture can be used in powder form.

상기 발효단계에 있어서, 발효(醱酵)란 넓은 의미로는 미생물이나 균류 등을 이용해 인간에게 유용한 물질을 얻어내는 과정을 말하고 좁은 의미로는 산소를 사용하지 않고 에너지를 얻는 당 분해 과정을 말한다. 대부분의 생물은 호흡을 위해 산소를 필요로 하고 산소 호흡을 통해 활동에 필요한 에너지를 얻는다. 반면 땅속 깊은 곳이나 호수의 밑바닥과 같이 산소가 부족한 환경에 사는 생물들은 그러한 환경에 적응하여 산소가 없어도 에너지를 얻을 수 있는데 이러한 호흡을 무산소호흡이라고 한다. 발효는 이러한 무산소호흡의 하나이다. 발효과정에서 유기물이 분해되어 또 다른 유기물이 만들어진다. In the fermentation step, fermentation (醱 酵) in a broad sense refers to the process of obtaining a substance useful to humans using microorganisms or fungi, and in a narrow sense refers to a sugar decomposition process to obtain energy without using oxygen. Most organisms need oxygen for breathing, and oxygen breathing gives them the energy they need to work. On the other hand, creatures living in an oxygen-deficient environment, such as deep below the ground or at the bottom of a lake, can adapt to the environment and get energy without oxygen. This breathing is called anoxic breathing. Fermentation is one such oxygen-free breath. During fermentation, organic matter is decomposed to form another organic matter.

본 발명의 실시예에 따른 발효공정은 4 ~ 40℃ 사이에서 충분한 발효가 일어날 수 있도록 30일에서 1년 정도, 바람직하게는 6개월 내지 1년 정도 발효시키는 것이 좋다. 4℃ 미만에서는 유용 미생물의 성장이 잘 되지 않고 40℃를 초과할 경우 미생물의 성장이 너무 과하게 일어나 복합 한방 약재의 성능에 영향을 미칠 수 있다.Fermentation process according to an embodiment of the present invention is preferably fermented 30 days to 1 year, preferably 6 months to 1 year so that sufficient fermentation can occur between 4 ~ 40 ℃. If it is less than 4 ℃, the growth of useful microorganisms is not well, and if it exceeds 40 ℃ can grow too much of the microorganisms may affect the performance of the combined herbal medicine.

본 발명에 의한 한방 복합 추출발효물은 그 사용에 특별히 제한되지 않으며, 예를 들면, 건강 식품의 첨가물, 화장료 조성물 및 약제 조성물 등에 사용될 수 있다. 특히, 항산화 효과가 우수한 화장료 조성물로 사용될 수 있으며, 이때 그 함량은 조성물 총 중량에 대하여 0.00002 ~ 30중량%, 바람직하게는 0.005~0.02중량%가 적당하다. 0.00002 중량% 미만인 경우에는 기대하는 항산화 효과를 얻기 어렵고, 30중량% 초과인 경우에는 추가적인 효능의 증가를 기대하기 어렵다.Herbal composite extract fermentation product according to the present invention is not particularly limited to its use, and may be used, for example, additives of health foods, cosmetic compositions and pharmaceutical compositions. In particular, it can be used as a cosmetic composition with excellent antioxidant effect, the content of which is 0.00002 to 30% by weight, preferably 0.005 to 0.02% by weight relative to the total weight of the composition. If it is less than 0.00002% by weight it is difficult to obtain the expected antioxidant effect, if it is more than 30% by weight it is difficult to expect additional increase in efficacy.

<< 실시예Example >>

1. 한방 약재 복합 추출물 제조1. Herbal Medicine Complex Extract Preparation

본 발명에서 사용한 당귀, 지황, 천궁 및 작약은 GAP인증을 받은 국내 한방 약재를 사용하였다. GAP(Good Agricultural Practices)은 소비자에게 안전하고 위생적인 농축산물을 공급할 수 있도록 생산자 및 관리자가 지켜야 하는 생산 및 취급과정에서의 위해 요소 차단규범을 의미한다. 환경에 대한 위해 요인을 최소화하고, 소비자에게 안전한 식품을 제공하기 위하여 농축산물의 재배, 수확, 수확 후 처리, 저장과정중의 화학제, 중금속, 미생물에 대한 관리 및 그 관리사항을 소비자가 알 수 있게 하는 체계이다.Angelica, jihwang, cheongung and peony used in the present invention used a domestic herbal medicine certified GAP. Good Agricultural Practices (GAP) refers to hazard prevention rules in the production and handling processes that producers and managers must follow to ensure safe and hygienic livestock products to consumers. To minimize the risks to the environment and to provide consumers with safe food, the management and management of chemicals, heavy metals and microorganisms during the cultivation, harvesting, post-harvesting, storage, and storage of agricultural and livestock products. It is a system.

GAP인증 받은 국내 한방 약재인 건조된 당귀 50g, 지황50g, 천궁 50g 및 작약 50g을 혼합한 혼합물 200g에 증류수 2000g를 넣고, 냉각 콘덴서가 달린 열수 추출기에서 10시간 끓여서 추출한 후 상온으로 냉각한 다음, 380메시(mesh) 여과포로 약재를 거르고, 11㎛ 페이퍼 필터(Paper filter)로 여과하였다. 일부를 취하여 0.45㎛ 멤브레인 필터(membrane filter)를 이용하여 감압여과장치에서 여과한 후 동결 건조시켜 최종 추출물을 획득하였다.
200 g of distilled water was added to 200 g of a mixture of dried Angelica 50g, Ghwang 50g, Cheongung 50g, and Peony 50g, which are GAP certified Korean herbal medicines, boiled for 10 hours in a hot water extractor with a cooling condenser, and cooled to room temperature. The medicine was filtered through a mesh filter cloth and filtered using an 11 μm paper filter. A portion was taken and filtered using a 0.45 μm membrane filter in a reduced pressure filter and then lyophilized to obtain a final extract.

2. 한방 약재 복합 추출발효물 제조2. Medicinal Herb Extract Complex Fermentation

상기 열수 추출한 한방 약재 복합 추출물을 200ml씩 총 6개 균주로 발효를 진행하였다. 6개의 균주는 효모균(Sacchromyces cerevisiae, 실시예 1), 유산균 (Latobacillus bulgaricus, 실시예 2), 상황버섯균 (Phellinus baumii, 실시예 3), 고초균(Bacillus subtilis, 실시예 4), 동충하초균 (Paecilomyces japonica, 실시예 5), 영지버섯균 (Ganoderma lucidum, 실시예 6)이다. 균주의 접종양은 평균 5% 이고 37℃에서 배양하였다. 발효가 끝난 추출물을 11㎛ 페이퍼 필터(Paper filter)로 여과하고 0.45㎛ 멤브레인 필터(membrane filter)를 이용하여 감압여과장치에서 여과한 후 동결 건조시켜 최종 추출발효물을 획득하였다.
Fermentation was carried out with six strains of 200 ml each of the herbal extracts extracted by hot water. Six strains are known as Sacchromyces cerevisiae , Example 1), Lactobacillus ( Latobacillus bulgaricus , Example 2), Phellinus fungus baumii , Example 3), Bacillus subtilis , Example 4), Paecilomyces japonica , Example 5), Ganoderma lucidum ( Ganoderma) lucidum , example 6). The inoculation amount of the strain was 5% on average and incubated at 37 ° C. The fermented extract was filtered with an 11 μm paper filter, filtered using a 0.45 μm membrane filter in a reduced pressure filter, and lyophilized to obtain a final extract fermentation product.

실험예Experimental Example 1. 항산화 효과 실험 1. Antioxidant Effect Experiment

1) DPPH를 이용한 전자공여능 실험 1) Electron donating ability experiment using DPPH

본 발명에 따른 상기 조성물들에 대한 항산화 활성 유무를 측정하기 위해, 각 추출물 (한방 약재 복합 추출물, 실시예 1~6)의 농도별 용액 100㎕에 5×10-4M의 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl) 100㎕를 넣고, 1분간 교반한 후, 25℃ 인큐베이터에서 30분간 반응시켰다. 마이크로플레이트 계수기를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 실험 대조구로는 엘-아스코르빈산(100㎍/㎖)을 사용하였으며, 전자공여능은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다. 추출물의 DPPH 전자공여능을 측정한 결과는 표 1 및 도 1과 같다.In order to determine the presence or absence of antioxidant activity for the compositions according to the present invention, 5 × 10-4M of DPPH (1,1-to 100 μl of solution of each extract (Herbal medicinal herb complex extracts, Examples 1 to 6) 100 µl of diphenyl-2-picryl-hydrazyl) was added thereto, stirred for 1 minute, and then reacted in a 25 ° C. incubator for 30 minutes. Absorbance was measured at 540 nm using a microplate counter. L-ascorbic acid (100µg / ml) was used as the experimental control, and the electron donating ability was expressed as the absorbance decrease rate of the addition and no addition of the sample solution. The results of measuring the DPPH electron donating ability of the extract are shown in Table 1 and FIG.

시료sample 농도(㎍/㎖)Concentration (/ / ml) DPPH 소거능(%)DPPH Clearance (%) 엘-아스코르빈산L-ascorbic acid 100100 7979 한방 약재 복합 추출물Herbal Medicine Complex Extract 10001000 1414 100100 66 1010 33 실시예 1Example 1 10001000 3838 100100 88 1010 00 실시예 2Example 2 10001000 1313 100100 -1-One 1010 55 실시예 3Example 3 10001000 1313 100100 99 1010 55 실시예 4Example 4 10001000 1414 100100 00 1010 -2-2 실시예 5Example 5 10001000 1515 100100 33 1010 -6-6 실시예 6Example 6 10001000 1818 100100 -3-3 1010 1One

상기 표 1 및 도 1 에서 나타난 바와 같이 발효시키지 않은 한방 약재 복합 추출물과 발효시킨 한방 약재 복합 추출발효물(실시예 1~6)을 비교할 때, 효모로 발효시킨 실시예 1에서 DPPH 소거능이 약 40%로 가장 높아 우수한 항산화 효과를 나타내었다.
Compared with the herbal medicinal herb complex extract not fermented as shown in Table 1 and Figure 1 and the fermented herbal medicinal herb extract fermentation (Examples 1 to 6), DPPH scavenging ability is about 40 in Example 1 fermented with yeast It was the highest as% and showed excellent antioxidant effect.

2) 수퍼옥사이드 디스뮤타아제(Superoxide dismutase, SOD) 유사활성 실험 2) Superoxide dismutase (SOD) -like activity test

SOD는 사람과 동물의 장기와 혈액 내에 존재하는 생리활성 효소로 유해 산소를 제거하는 역할을 한다. SOD유사활성물질은 피토케미컬(phytochemical)에 속하는 물질이 SOD와 유사한 역할을 하여 수퍼옥사이드 라디컬의 반응성을 억제하여 생체를 보호한다고 보고되어 있다(Murakami et al., 2003).SOD is a bioactive enzyme present in the organs and blood of humans and animals that removes harmful oxygen. It is reported that SOD-like active substances protect phytochemicals by inhibiting the reactivity of superoxide radicals by playing a similar role to SOD (Murakami et al., 2003).

한방 약재 복합 추출물의 시료에 대한 SOD 유사활성능 측정은 다음과 같이 실시하였다. 각 추출물당 100ppm의 농도별 시료용액 20㎕에 SOD 분석 키트(SOD assay kit-WST) 내 더블류에스티 작업용액(WST working solution) 200㎕을 넣어 교반한 후, 다시 효소작업용액(enzyme working solution) 20㎕를 넣어 혼합하였다. 이 혼합물을 37℃ 인큐베이터에서 20분간 반응시키고, 마이크로플레이트 계수기를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 실험 대조구로는 수퍼옥사이드 디스뮤타아제(Superoxide dismutase, 100 units, Sigma)를 사용하였으며, 수퍼옥사이드 디스뮤타아제 유사활성은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다. SOD 유사활성을 측정한 결과는 표 2 및 도 2와 같다.SOD-like activity was measured for the samples of the herbal medicine complex extract as follows. 200 μl of WST working solution in the SOD assay kit (SST assay kit-WST) was added to 20 μl of the sample solution for each concentration of 100 ppm of each extract, followed by the enzyme working solution. 20 μl was added and mixed. The mixture was reacted for 20 minutes in a 37 ° C. incubator, and the absorbance was measured at 450 nm using a microplate counter. Superoxide dismutase (100 units, Sigma) was used as an experimental control, and superoxide dismutase-like activity was indicated by the absorbance reduction rate of the sample solution added and the non-added sample. The results of measuring SOD-like activity are shown in Table 2 and FIG.

시료(100㎍/㎖)Sample (100 µg / ml) SOD
(100units)SOD
(100units) 한방약재
복합추출물Herbal Medicine
Complex extract 실시예1Example 1 실시예2Example 2 실시예3Example 3 실시예4Example 4 실시예5Example 5 실시예6Example 6 SOD유사활성(%)SOD-like activity (%) 9898 1919 6464 2828 88 2727 3434 3636

상기 표 2 및 도 2에서 나타난 바와 같이 SOD 유사활성은 한방 약재 복합 추출발효물 중에서 실시예 1이 가장 높았다. 따라서 실시예 1에서 우수한 항산화 효과가 있음을 알 수 있다.
As shown in Table 2 and Figure 2, the SOD-like activity of Example 1 was the highest among the herbal herbal extract extract fermentation. Therefore, it can be seen that there is an excellent antioxidant effect in Example 1.

3) 하이드로젠 퍼옥사이드(Hydrogen peroxide) 소거능 실험3) Hydrogen peroxide scavenging ability test

한방 약재 복합 추출물과 실시예 1~6에 대한 하이드로젠 퍼옥사이드(Hydrogen peroxide) 소거능 측정은 다음과 같이 실시하였다. 각 시료당 100ppm의 농도별 시료용액 20㎕에 10mM 하이드로젠 퍼옥사이드(Hydrogen peroxide) 20㎕, 0.1M 인산완충액(phosphate buffer, pH 5) 100㎕를 각각 넣고 37℃ 인큐베이터에서 5분간 반응시켰다. 1.25mM ABTS 30㎕, 1U/ml 페록시다아제(peroxidase, 과산화효소) 30㎕를 넣고, 37℃ 인큐베이터에서 10분간 반응시키고, 마이크로플레이트 계수기를 이용하여 405nm에서 흡광도를 측정하였다. 실험 대조구로는 아스코르브산(ascorbic acid, 100ppm, Sigma)를 사용하였다. 하이드로젠 퍼옥사이드(Hydrogen peroxide) 소거능 측정 결과는 표 3 및 도 3과 같다.Herbal medicine complex extract and hydrogen peroxide (Hydrogen peroxide) scavenging ability measurement for Examples 1 to 6 was carried out as follows. 20 μl of 10 mM Hydrogen peroxide and 100 μl of 0.1 M phosphate buffer (pH 5) were added to 20 μl of the sample solution for each concentration of 100 ppm, respectively, and reacted for 5 minutes in a 37 ° C. incubator. 30 μl of 1.25 mM ABTS and 30 μl of 1 U / ml peroxidase were added, and reacted for 10 minutes in a 37 ° C. incubator, and the absorbance was measured at 405 nm using a microplate counter. Ascorbic acid (100 ppm, Sigma) was used as an experimental control. Hydrogen peroxide scavenging activity measurement results are shown in Table 3 and FIG. 3.

시료(100㎍/㎖)Sample (100 µg / ml) 아스코르브산Ascorbic acid 한방약재
복합추출물Herbal Medicine
Complex extract 실시예1Example 1 실시예2Example 2 실시예3Example 3 실시예4Example 4 실시예5Example 5 실시예6Example 6 H2O2소거능(%)H 2 O 2 scavenging capacity (%) 44 2121 4444 1717 2323 1616 3030 1818

상기 표 3 및 도 3 에서 나타난 바와 같이 상기 한방 약재 복합 추출물을 효모로 발효 시켰을 때 (실시예 1), 하이드로젠 퍼옥사이드(Hydrogen peroxide) 소거능이 가장 높았다. 따라서 실시예 1에서 가장 우수한 항산화 효과가 있음을 알 수 있다.As shown in Table 3 and Figure 3 when the herbal herbal extracts were fermented with yeast (Example 1), hydrogen peroxide (Hydrogen peroxide) scavenging ability was the highest. Therefore, it can be seen that the best antioxidant effect in Example 1.

상기 항산화 효과 실험 결과를 토대로 상기 한방 약재 복합 추출물을 효모로 발효시켰을 때(실시예 1) 항산화 효과가 가장 우수함을 확인할 수 있었다. 따라서 실시예 1의 피부 상피세포에 대한 독성 실험을 하기와 같이 진행하였다.
On the basis of the results of the antioxidant effect test, it was confirmed that the herbal extracts were the most effective when the herbal extracts fermented with yeast (Example 1). Therefore, the toxicity experiment on the skin epithelial cells of Example 1 was carried out as follows.

실험예Experimental Example 2. 세포독성실험 2. Cytotoxicity Test

상기 한방 약재 복합 추출발효물(실시예 1)에 대한 세포독성을 알아보기 위하여, 사람 섬유아세포 (Human fibroblast cell)을 5x104 cells/ml 농도로 하여 96well plate에 200㎕씩 분주하여 37℃, CO2 인큐베이터에서 1일 동안 배양하였다. 이때 배지는 소혈청 10%와 항생제 1%가 포함된 IMDM(lscove's Modified Eagle Medium, Gibco)를 이용하였다. 배양 한 후 소혈청과 항생제가 배제된 IMDM 배지로 교체한 후, 실시예 1을 농도 별로 첨가한 후, 상기와 같은 배양조건에서 45시간 배양하였다. 배양이 끝난 후 5㎎/㎖ MTT(Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide) 시약을 첨가하여 상기와 동일 조건에서 3시간 배양하였다. 그 후 배양액을 제거하고 DMSO(Dimetyl sulfoxide)을 150㎕씩 넣은 후 10분 동안 쉐이킹한 다음 마이크로 플레이트 계수기(Micro plate reader) 570nm 에서 결과값을 측정하였다. DMSO를 블랭크(blank)로 잡아주며, 그 결과는 표 4 및 도 4와 같다. In order to examine the cytotoxicity of the herbal extract extract fermentation (Example 1), human fibroblast cells (Human fibroblast cells) at a concentration of 5x104 cells / ml 200μl in 96well plate and 37 ℃, CO2 incubator Incubated for 1 day at. At this time, the medium was used as IMDM (lscove's Modified Eagle Medium, Gibco) containing 10% bovine serum and 1% antibiotics. After incubation was replaced with IMDM medium without bovine serum and antibiotics, Example 1 was added for each concentration, and then incubated for 45 hours under the same culture conditions. After incubation, 5 mg / ml MTT (Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide) reagent was added and incubated for 3 hours under the same conditions. Thereafter, the culture medium was removed, 150 μl of DMSO (Dimetyl sulfoxide) was added thereto, and then shaken for 10 minutes. The result was measured at 570 nm of a micro plate reader. DMSO is held blank, and the results are shown in Table 4 and FIG. 4.

농도(㎍/㎖)Concentration (/ / ml) blankblank 10001000 750750 500500 250250 100100 5050 1010 55 1One 세포 증식(%)Cell proliferation (%) 100100 6060 3737 7474 8585 9595 109109 111111 103103 109109

상기 표 4 및 도 4에서 나타난 바와 같이 실시예 1은 250㎍/㎖ 이하의 농도에서 독성을 나타내지 않음을 확인하였다.
As shown in Table 4 and Figure 4 it was confirmed that Example 1 does not exhibit toxicity at a concentration of 250 μg / ml or less.

실험예3Experimental Example 3 . 한방 약재 복합 추출물 . Herbal Medicine Complex Extract 발효물Fermentation product UVUV SpectrumSpectrum 측정 Measure

상기의 항산화 실험에서 6종의 추출발효물 중 실시예 1이 가장 좋은 효과를 나타냄을 알 수 있었다. 이 결과를 뒷받침 하기 위해 한방 약재 복합 추출물과 한방 약재 복합 추출발효물 6종 (실시예 1~6)의 파장을 UV Spectrum 측정을 측정하였다. 측정 시 사용한 UV Spectrum 기기는 Shimazdu UV-1650PC, UV-Visible spectrophotometer이고 시료농도는 0.25% (용매는 초순수)이다. UV Spectrum 측정 결과는 도 5에서 나타난 바와 같이 각각의 실시예들을 비교하였을 때, 실시예 1의 흡광도가 가장 강하다는 것을 확인할 수 있다.
In the antioxidant experiments, it can be seen that Example 1 shows the best effect among the six extract fermentations. In order to support these results, the wavelengths of the six herbal medicine complex extracts and six herbal medicine complex extract fermentations (Examples 1 to 6) were measured by UV spectrum measurement. The UV Spectrum instrument used for the measurement was a Shimazdu UV-1650PC, a UV-Visible spectrophotometer with a sample concentration of 0.25% (solvent is ultrapure water). UV Spectrum measurement results, as shown in Figure 5, when comparing the respective examples, it can be seen that the absorbance of Example 1 is the strongest.

실험예Experimental Example 4. 분석 실험 4. Assay

1) 한약 약재의 지표물질1) Indicator substance of herbal medicine

본 연구에 사용된 한약 약재의 지표물질은 다음과 같다. 당귀는 노다케닌 (Nodakenin, Wako, 148-08331, 5mg), 지황은 5-HM(5-Hydroxymethyl-2-furaldehyde, Aldrich, H40807, 1g), 천궁은 클로로겐산(Chlorogenic acid, Sigma, C3878, 250mg), 작약은 페오니플로린(Paeoniflorin, Wako, 164-21731, 10mg)을 구입하여 분석 실험에 사용하였다.
The following are the indicators of herbal medicine used in this study. Angelica is nodakenin (Nodakenin, Wako, 148-08331, 5mg), Sulfur is 5 -HM (5-Hydroxymethyl-2-furaldehyde, Aldrich, H40807, 1g), Cheongung is chlorogenic acid (Chlorogenic acid, Sigma, C3878, 250mg) , Peony was purchased for analysis experiments (Peoniflorin, Wako, 164-21731, 10mg).

2) 분석용 지표물질 제조2) Preparation of Analytical Indicators

분석용 지표물질은 노다케닌 5mg, 5-HMF 10mg, 클로로겐산 10mg, 페오니플로린 10mg을 취하여 80% 메탄올 100ml에 균일하게 녹였다. 그 후 노다케닌 2.2ml, 5-HMF 2.0ml, 클로로겐산 0.35ml, 페오니플로린 3.0ml씩 각각 취하여 10ml 메스플라스크(Volumetric Flask)에 넣고, 나머지를 80% 메탄올로 매스-업(mass-up)시켜 균일화하였다. 완성된 지표물질 용액은 일부만 취하여 0.45㎛ 멤브레인 시린지 필터(membrane syringe filter)로 여과한 후 분석용 바이알(vial)에 넣어서 분석을 진행하였다.
Analytical indicators were 5 mg nodakenin, 10 mg 5- HMF, 10 mg chlorogenic acid, and 10 mg peoniflorin and dissolved uniformly in 100 ml of 80% methanol. Thereafter, 2.2 ml of nodakenin, 2.0 ml of 5-HMF, 0.35 ml of chlorogenic acid, and 3.0 ml of peoniflorin were each added to a 10 ml volumetric flask, and the remainder mass-up with 80% methanol. Homogenized. Part of the complete indicator solution was taken and filtered with a 0.45 μm membrane syringe filter and then placed in an assay vial for analysis.

3) 분석용 추출물과 추출발효물 제조3) Preparation of analytical extract and extract fermentation

동결건조시킨 상기 한방 약재 복합 추출물과 실시예 1에서 각각 0.33g씩 계량하여 100ml 메스플라스크(Volumetric Flask)에 넣고 80% 메탄올로 매스-업(mass-up)하였다. 추출물과 용매 간에 균일화를 시켜준 후 완성된 용액은 일부만 취하여 0.45㎛ 멤브레인 시린지 필터(membrane syringe filter)로 여과한 후 분석용 바이알(vial)에 넣어서 분석을 진행하였다.
The herbal extracts lyophilized and 0.33 g each in Example 1 were weighed into a 100 ml volumetric flask and mass-up with 80% methanol. After homogenizing between the extract and the solvent, only a part of the completed solution was taken and filtered with a 0.45 μm membrane syringe filter, and then put into an assay vial.

4) HPLC 분석 실험4) HPLC Assay

추출물 분석 시 사용한 고속액체그로마토그래피 컬럼은 Capcell pak C18, 5㎛ 4.6 × 250㎜ (Shiseido)을 사용하였다. 컬럼 온도는 상온, 유속은 1.0ml/분, 검출기는 230nm이다. 이동상A는 0.1% 포스포릭에시드 인 워터(Phosphoric acid in Water), 이동상B는 0.1% 포스포릭에시드 인 아세토니트릴(Phosphoric acid in Acetonitrile)를 사용하였고, 용매 조건은 다음과 같다. 30분 동안 이동상B를 0-25%로 점차 증가시켰고 33분까지 25%를 유지시켰다. 33분에서 35분까지 25-100%로 이동상B를 변화시킨 후 35분에서 50분까지 100%로 일정하게 이동상B를 흘려주었다.
The high-performance liquid chromatographic column used for extract analysis was Capcell pak C18, 5㎛ 4.6 × 250㎜ (Shiseido). The column temperature is room temperature, the flow rate is 1.0 ml / min, and the detector is 230 nm. Mobile phase A was used as 0.1% Phosphoric acid in Water, mobile phase B was used as 0.1% Phosphoric acid in Acetonitrile, and solvent conditions were as follows. Mobile phase B gradually increased to 0-25% for 30 minutes and maintained 25% by 33 minutes. After changing the mobile phase B from 25 minutes to 25-100% from 33 minutes to 35 minutes, the mobile phase B was continuously flowed from 100 minutes to 35 minutes to 50 minutes.

5) HPLC 분석 실험 결과5) HPLC analysis result

상기 지표물질, 추출물 및 발효추출물을 HPLC분석한 결과는 다음과 같다. HPLC analysis of the indicator, extract and fermented extract are as follows.

도 6은 4가지 한방 약재의 지표물질을 조건에 맞춰서 측정한 결과이다. 당귀의 지표물질인 노다케닌(Nodakenin)은 30.5분에서, 지황의 지표물질인 5-HMF (5-Hydroxymethyl-2-furaldehyde)는 12.16분에서, 천궁의 지표물질인 클로로겐산(Chlorogenic acid)은 19.83분에서, 작약의 지표물질인 페오니플로린(Paeoniflorin)은 25.69분에서 각각 검출 되었다. 이 결과를 바탕으로 하여 상기 한방 약재 복합 추출물과 실시예 1의 지표물질 변화를 비교하였고 HPLC분석은 총 2번 실시 하였다.Figure 6 is the result of measuring the indicator substances of the four herbal medicines according to the conditions. Nodakenin, an indicator of donkey, was found in 30.5 minutes, 5- HMF (5-Hydroxymethyl-2-furaldehyde) in 12.16 minutes, and Chlorogenic acid, a marker of hormonal, 19.83 minutes. In Peony, Paeoniflorin was detected at 25.69 minutes, respectively. On the basis of this result, the herbal extracts were compared with the changes in the indicator substance of Example 1 and HPLC analysis was performed twice.

1차로 실시한 분석 결과는 도 7, 도 8 및 표 5와 같다. The results of the first analysis are shown in FIGS. 7, 8, and 5.

구분division 한방약재복합추출물
(mg/0.33g)Herbal Medicine Complex Extract
(mg / 0.33g) 실시예 1
(mg/0.33g)Example 1
(mg / 0.33g) 함량비교
(한방약재복합추출물기준)Comparison of contents
(Based on herbal medicine complex extract) 클로로겐산(천궁)Chlorogenic acid (bow) 4343 6060 39.5% ↑39.5% ↑ 페오니플로린(작약)Peonyflorin (Pea Blossom) 403403 659659 63.5% ↑63.5% ↑

상기 표 5와 도 7, 도 8에 나타난 바와 같이 천궁과 작약의 경우, 실시예 1의 지표물질의 함량은 39.5%, 63.5%씩 증가하는 결과를 나타내었다.
As shown in Table 5 and FIGS. 7 and 8, the content of the indicator material of Example 1 was increased by 39.5% and 63.5% in case of Cheongung and Peony.

2차로 실시한 분석 결과는 도 9, 도 10 및 표 6과 같다.The secondary analysis results are shown in FIGS. 9, 10, and 6.

구분division 한방약재복합추출물
(mg/0.33g)Herbal Medicine Complex Extract
(mg / 0.33g) 실시예 1
(mg/0.33g)Example 1
(mg / 0.33g) 함량비교
(한방약재복합추출물기준)Comparison of contents
(Based on herbal medicine complex extract) 클로로겐산(천궁)Chlorogenic acid (bow) 4141 5959 43.9% ↑43.9% ↑ 페오니플로린(작약)Peonyflorin (Pea Blossom) 448448 663663 48.0% ↑48.0% ↑

상기의 표 6 및 도 9, 도 10에 나타난 바와 같이 천궁과 작약의 경우, 실시예 1의 지표물질의 함량은 43.9%, 48.0%씩 증가하는 결과를 나타내었다.
As shown in Table 6 and FIG. 9 and FIG. 10, the content of the indicator material of Example 1 was increased by 43.9% and 48.0%, respectively.

하기는 상기 한방 복합 혼합 추출발효물 중 항산화 효과가 가장 우수한 실시예 1 포함하는 각 화장품 제형이다. 피부 내 유해 활성산소를 제거하고 피부세포를 보호하며 보다 우수한 노화 예방 및 항산화 효과를 갖는 있는 화장료 예를 보여주며 처방예는 다음과 같다.
The following is each cosmetic formulation containing Example 1 having the best antioxidant effect among the herbal complex mixed extract fermentation. Removes harmful free radicals in the skin, protects skin cells, shows an example of a cosmetic having a superior anti-aging and antioxidant effect.

처방예Prescription example 1. 유연화장수 1. Flexible Cosmetics

성분ingredient 함량(중량%)Content (% by weight) 실시예 1Example 1 0.010.01 폴리옥시에칠렌경화피마자유Polyoxyethylene hardened castor oil 0.50.5 글리신Glycine 3.03.0 디포타슘글리시리제이트Dipotassium glycyrrhizate 0.10.1 1,3-부틸렌 글리콜1,3-butylene glycol 3.03.0 소듐히아루로네이트Sodium hyaluronate 0.10.1 에탄올ethanol 5.05.0 항산화제Antioxidant 0.10.1 트리에탄올아민Triethanolamine 0.10.1 EDTAEDTA 0.10.1 방부제antiseptic 적량Suitable amount 정제수Purified water 잔량Balance

처방예Prescription example 2. 영양화장수 2. Nutritional Cosmetics

성분ingredient 함량(중량%)Content (% by weight) 실시예 1Example 1 0.010.01 글리세린glycerin 7.07.0 소르비탄스테아레이트 슈크로오즈코코에이트Sorbitan stearate sucrose cocoate 2.02.0 미네랄 오일Mineral oil 4.04.0 트리옥타노인Trioctanoin 1.01.0 스테아릭에씨드Stearic Acid 1.01.0 글리세릴 스테아레이트Glyceryl stearate 0.50.5 소르비탄모노스테아레이트Sorbitan monostearate 1.01.0 디메치콘Dimethicone 0.50.5 항산화제Antioxidant 0.30.3 트리에탄올아민Triethanolamine 0.10.1 카보머Carbomer 0.20.2 EDTAEDTA 0.10.1 방부제antiseptic 적량Suitable amount 정제수Purified water 잔량Balance

처방예Prescription example 3. 에센스 3. Essence

성분ingredient 함량(중량%)Content (% by weight) 실시예 1Example 1 0.010.01 글리세린glycerin 5.05.0 1,3-부틸렌 글리콜1,3-butylene glycol 2.02.0 폴리에칠렌 글리콜Polyethylene glycol 2.02.0 카보머Carbomer 1.01.0 소듐히아루로네이트Sodium hyaluronate 0.10.1 글리신Glycine 3.03.0 폴리아크릴아마이드Polyacrylamide 2.02.0 히드록시에칠셀룰로이즈Hydroxyethyl cellulose 0.20.2 에탄올ethanol 3.03.0 항산화제Antioxidant 0.30.3 트리에탄올아민Triethanolamine 0.10.1 폴리옥시에칠렌경화피마자유Polyoxyethylene hardened castor oil 1.01.0 EDTAEDTA 0.10.1 방부제antiseptic 적량Suitable amount 정제수Purified water 잔량Balance

처방예Prescription example 4. 영양크림 4. Nutrition Cream

성분ingredient 함량(중량%)Content (% by weight) 실시예 1Example 1 0.010.01 1,3-부틸렌글리콜1,3-butylene glycol 3.03.0 글리세린glycerin 3.03.0 하이드로제네이티드 레시친Hydrogenated lecithin 1.01.0 옥틸도데카놀Octyldodecanol 3.03.0 트리옥타노인Trioctanoin 2.02.0 스테아릭에씨드Stearic Acid 1.51.5 세토스테아릴알콜Cetostearyl alcohol 2.02.0 폴리솔베이트60Polysorbate 60 1.51.5 소르비탄세스퀴올레이트Sorbitan sesquioleate 2.02.0 디메치콘Dimethicone 3.03.0 항산화제Antioxidant 0.30.3 산탄검Xanthan gum 0.20.2 트리에탄올아민Triethanolamine 0.10.1 EDTAEDTA 0.10.1 방부제antiseptic 적량Suitable amount 정제수Purified water 잔량Balance

처방예Prescription example 5.  5. 바디크림Body cream

성분ingredient 함량(중량%)Content (% by weight) 실시예 1Example 1 0.010.01 글리세린glycerin 7.07.0 1,3-부틸렌 글리콜1,3-butylene glycol 3.03.0 스쿠알렌Squalene 3.03.0 디메치콘Dimethicone 3.03.0 소듐히아루로네이트Sodium hyaluronate 0.10.1 글리신Glycine 2.02.0 폴리아크릴아마이드Polyacrylamide 5.05.0 항산화제Antioxidant 0.30.3 트리에탄올아민Triethanolamine 0.10.1 EDTAEDTA 0.10.1 방부제antiseptic 적량Suitable amount 정제수Purified water 잔량Balance

처방예Prescription example 6.  6. 베이비로션Baby Lotion

성분ingredient 함량(중량%)Content (% by weight) 실시예 1Example 1 0.010.01 글리세린glycerin 5.05.0 판테놀Panthenol 4.04.0 세라마이드Ceramide 0.10.1 피토스팅고신Phytosing 0.10.1 세테아릴알코올Cetearyl alcohol 0.50.5 인지질Phospholipids 1.01.0 스테아릭산Stearic acid 0.50.5 동백유Camellia oil 7.07.0 쉐어버터Sheer butter 1.01.0 소듐콜리아크릴레이트(5% 분산액)Sodium Copolyacrylate (5% dispersion) 10.010.0 복합 방부제Compound preservative 0.50.5 정제수Purified water 잔량Balance

처방예Prescription example 7.  7. 베이비크림Baby Cream

성분ingredient 함량(중량%)Content (% by weight) 실시예 1Example 1 0.010.01 글리세린glycerin 5.05.0 판테놀Panthenol 4.04.0 세라마이드Ceramide 0.50.5 피토스팅고신Phytosing 0.50.5 세테아릴알코올Cetearyl alcohol 1.01.0 인지질Phospholipids 3.03.0 스테아릭산Stearic acid 1.51.5 동백유Camellia oil 16.016.0 쉐어버터Sheer butter 2.02.0 소듐콜리아크릴레이트(5% 분산액)Sodium Copolyacrylate (5% dispersion) 15.015.0 복합 방부제Compound preservative 0.50.5 정제수Purified water 잔량Balance

지금까지 본 발명에 대한 구체적인 실시예 및 실험예를 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 본질적 특성에 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 상기 개시된 실시예 및 실험예는 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점으로 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.
So far we looked at the specific examples and experimental examples for the present invention. Those skilled in the art will understand that the present invention may be implemented in a modified form without departing from the essential characteristics of the present invention. Therefore, the disclosed embodiments and experimental examples should be considered in descriptive sense only and not for purposes of limitation. The scope of the present invention is shown in the claims, and all differences within the scope equivalent thereto should be construed as being included in the present invention.

Claims (10)

당귀, 지황, 천궁 및 작약을 물 및 유기용매 중에서 선택된 하나 이상으로 추출하고 효모균의 하나인 사카로마이세스 세르비지에(Sacchromyces cerevisiae)을 이용하여 발효시킨 한방 약재 복합 추출발효물.Chinese herbal medicine complex fermentation extract fermented with Sacchromyces cerevisiae ( Sacchromyces cerevisiae ), which extracts Angelica gigas, Chihwang, Cheongung and Peony with at least one selected from water and an organic solvent. 제 1항에 있어서,
상기 당귀, 지황, 천궁 및 작약은 각각 1:1:1:1 중량비(w/w/w/w)로 혼합된 것을 특징으로 하는 한방 약재 복합 추출발효물.The method of claim 1,
Herbal medicine, Chihwang, Cheonggung and Peony are herbal medicine complex extract fermentation, characterized in that mixed in a 1: 1: 1: 1 weight ratio (w / w / w / w). 당귀, 지황, 천궁 및 작약을 혼합하고 물, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출하여 추출물을 얻는 단계;
상기 추출물을 여과포, 여과지 및 감압여과장치 중에서 선택된 하나 이상으로 여과하고, 동결 건조하는 단계; 및
상기 농축한 결과물에 효모균의 하나인 사카로마이세스 세르비지에(Sacchromyces cerevisiae)을 첨가하여 발효시키는 단계를 포함하는 한방 약재 복합 추출발효물의 제조방법.Mixing Angelica gigas, Chihwang, Cheongung and Peony and extracting with water, methanol, ethanol, glycerin, ethyl acetate, butylene glycol, propylene glycol, dichloromethane and hexane with one or more solvents selected from the group consisting of extracts;
Filtering the extract with at least one selected from a filter cloth, a filter paper, and a vacuum filter, and lyophilizing the extract; And
Method of producing a herbal medicinal extract extract fermentation comprising the step of adding the fermented Sacchromyces cerevisiae ( Sacchromyces cerevisiae ) which is one of the yeast to the concentrated product. 제 3항에 있어서,
상기 당귀, 지황, 천궁 및 작약은 각각 1:1:1:1 중량비(w/w/w/w)로 혼합된 것을 특징으로 하는 한방 약재 복합 추출물의 제조방법.The method of claim 3,
The Angelica, gihwang, cheongung, and peony are 1: 1: 1: 1 weight ratio (w / w / w / w) manufacturing method of the herbal medicine complex extract, characterized in that mixed. 제 3항에 있어서,
상기 추출은 10 ~ 80℃에서 6시간 내지 24시간 동안 진탕 추출하는 것임을 특징으로 하는 한방 약재 복합 추출물의 제조방법.The method of claim 3,
The extraction is a method for producing a herbal medicine complex extract, characterized in that the extract for shaking for 6 to 24 hours at 10 ~ 80 ℃. 제 3항에 있어서,
상기 발효는 4 ~ 40℃에서 30일 ~ 12개월 동안 수행하는 것을 특징으로 하는 한방 약재 복합 추출물의 제조방법.The method of claim 3,
The fermentation is a method of producing a herbal medicine complex extract, characterized in that carried out for 30 days to 12 months at 4 ~ 40 ℃. 제 3항에 있어서,
상기 동결 건조는 -20℃부터 단계적으로 30℃까지 36~48 시간 동안 동결 건조하여 건조분말을 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 한방 약재 복합 추출발효물의 제조방법.The method of claim 3,
The freeze-drying is a method for producing herbal medicine complex extract fermentation comprising the step of obtaining a dry powder by freeze drying for 36 to 48 hours from -20 ℃ to 30 ℃ step by step. 제 1 항 또는 제 2 항에 기재된 한방 약재 복합 추출발효물을 포함하는 화장료 조성물.Cosmetic composition containing the herbal medicine complex extract fermentation of Claim 1 or 2. 제 8항에 있어서,
상기 한방 약재 복합 추출발효물은 상기 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.1 ~ 30 중량%로 포함된 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.The method of claim 8,
The herbal medicine complex extract fermentation cosmetic composition, characterized in that contained in 0.1 to 30% by weight based on the total weight of the cosmetic composition. 제 8항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 에센스, 영양크림, 바디크림, 베이비로션 또는 베이비크림으로 제형화된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.




The method of claim 8,
The cosmetic composition is a cosmetic composition, characterized in that formulated as a flexible cosmetics, nourishing cosmetics, essence, nutrition cream, body cream, baby lotion or baby cream.




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