KR101531304B1 - A Method of increasing flavonoid compounds in safflower buds and a cosmetic composition containing the safflower buds obtained from the methods - Google Patents

Abstract

본 발명은 홍화새싹 재배시 LED 광원, 특히 청색 광원을 이용하여 식물 공정에서 홍화새싹을 재배함으로써 안정적인 광합성을 유도하여 플라보노이드계 화합물 함량을 증가시키고, 발효/bioconversion 방법에 의해 배당체 형태의 플라보노이드에서 당을 유리시켜 아글리콘 형태의 플라보노이드를 얻음으로써 홍화새싹 자체는 높은 미백 기능성 화장료 소재로서 사용할 수 있게 된다.The present invention relates to a method of growing safflower buds in a plant process using an LED light source, particularly a blue light source, to induce stable photosynthesis, thereby increasing the content of the flavonoid compound, and allowing the sugar in the glycoside-type flavonoid By obtaining free acidic flavonoid by freeing it, safflower sprout itself can be used as a high whitening functional cosmetic material.

Description

홍화새싹의 플라보노이드계 화합물 함량을 증가시키는 방법 및 상기 방법에 의해 수득된 홍화새싹을 포함하는 화장료 조성물{A Method of increasing flavonoid compounds in safflower buds and a cosmetic composition containing the safflower buds obtained from the methods}[0001] The present invention relates to a method for increasing the content of flavonoid compounds in safflower buds and a cosmetic composition comprising safflower sprouts obtained by the above method.

본 발명은 홍화새싹의 플라보노이드계 화합물 함량을 증가시키는 방법 및 상기 방법에 의해 수득된 홍화새싹을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로는 IT(Information Technology)와 BT(Bio Technology)의 융합 방법에 의해 식물 공장에서 청색광 LED를 홍화새싹에 조사함으로써 홍화새싹의 플라보노이드계 화합물 함량을 증가시키는 방법 및 상기 방법에 의해 수득된 홍화새싹을 포함하는 미백 화장료 조성물에 관한 것이다.
The present invention relates to a method for increasing the content of flavonoid compounds in safflower sprouts and a cosmetic composition comprising the safflower sprouts obtained by the above method. More particularly, the present invention relates to a cosmetic composition comprising IT (Information Technology) and BT (Bio Technology) To a method for increasing the flavonoid compound content of safflower sprouts by irradiating a blue light LED to a safflower sprout at a plant plant and a whitening cosmetic composition comprising the safflower sprout obtained by the above method.

화장품 산업은 경기 침체 속에서도 성장을 계속하고 있는 경기 방어적인 성격이 매우 강하다. 기능성 화장품은 기초 화장품 다음으로 높은 점유율을 나타내고 있으며, 기능성 화장품 중에서도 미백 화장품이 2001년부터 2006년 사이에 가장 높은 성장률을 나타내었다.The cosmetics industry has a strong defensive nature, which continues to grow despite the economic downturn. Among functional cosmetics, whitening cosmetics showed the highest growth rate between 2001 and 2006, while functional cosmetics showed the highest share after basic cosmetics.

최근의 소비자 추세는 화학 합성된 기능성 화장품보다 천연물 소재의 기능성 화장품을 선호하고 있다. 이는 천연물이라는 이미지가 소비자에게 매우 친환경적이고 친근할 뿐만 아니라 그 효능, 효과 역시 오랜 시간 사람들이 직접 사용하여 어느 정도 검증되어 구전되어 왔고, 다양한 천연물 소재가 존재하므로 선택의 폭이 넓기 때문으로 보인다. Recent consumer trends favor functional cosmetics of natural materials rather than chemically synthesized functional cosmetics. This is because the image of natural products is not only environmentally friendly and friendly to consumers, but also their effectiveness and effects have been verified by people for a long time, and they are widely used because of their wide variety of natural materials.

그러나, 천연물 소재는 재배, 보관에 따라 성분 및 품질의 동질성 확보가 어렵고, 그 결과 유효성분의 함량이 균일하지 않을 수 있으며, 유효성분 또는 약리작용 성분이 불분명하며, 저장이 곤란하고, 대량 생산에 적합하지 않은 단점이 있다.However, it is difficult to obtain the homogeneity of the components and quality according to the cultivation and storage of the natural material, and as a result, the content of the active ingredient may not be uniform, the active ingredient or the pharmacologically active ingredient is unclear, There are disadvantages that are not suitable.

이에 공산품처럼 일정 품질의 식물 생산이 가능한 시스템적인 농업 형태로서 식물 공장이 제안되었는데, 이는 최신 기술인 LED, 환경제어시스템, 로봇 자동화 공정 등을 도입한 첨단 IT 기술이 융합된 농업 형태이다.Therefore, a plant plant has been proposed as a systematic agricultural form that can produce plants of a certain quality like industrial products. It is a form of agriculture that combines cutting edge IT technology that adopts the latest technology such as LED, environmental control system and robot automation process.

홍화는 국화과에 속하는 한해살이풀로, 우리나라, 중국, 인도 등에 서식하고, 우리나라에서는 붉은 색의 염료재와 약용식물로 많이 재배한다. 한의학에서는 홍화씨가 골질환, 예컨대 골절, 골다공증에 약효를 갖는다고 알려져 있고, 홍화꽃은 생리통에 약효를 갖는다고 알려져 있다.Safflower is an annual plant belonging to the Asteraceae family. It lives in Korea, China, India, etc., and is cultivated much as red dye and medicinal plants in Korea. In Oriental medicine, it is known that safflower seed has a medicinal effect on bone diseases such as fracture and osteoporosis. It is known that safflower flower has a medicinal effect on menstrual pain.

홍화와 관련하여, 대한민국 특허출원 제10-2003-0047056호 ‘홍화씨 발아 방법과 동 새싹을 이용한 건강식품 제조방법’에서는 홍화씨를 발아시켜 이를 건강식품에 이용하는 발명에 대하여 기재하고 있고, 대한민국 등록특허 제10-0670237호 ‘홍화씨 추출물을 함유하는 화장료 조성물 및 홍화씨 내 화장료 유효성분의 추출방법’에서는 열탕 추출 등에 의해 홍화씨에서 화장료 유효 성분을 추출하여 이를 화장료 조성물에 이용하는 발명에 대하여 기재하고 있다.In connection with safflower, Korean Patent Application No. 10-2003-0047056, entitled "Method of germination of safflower seed and method of manufacturing healthy food using same sprout", discloses an invention using ginseng safflower seed for health food, 10-0670237 'Cosmetic composition containing safflower seed extract and method for extracting cosmetic active ingredient in safflower seed' describes an invention of extracting an effective ingredient of cosmetic ingredient from safflower seed by extraction of hot water and using it as a cosmetic composition.

그러나, 선행 기술중 어떠한 것에서도 홍화새싹 자체를 화장료 조성물에 사용하는 것에 대하여는 기재한 바가 없고, 더욱이 홍화새싹 재배시 LED 청색광을 사용하여 홍화새싹의 플라보노이드계 화합물 함량을 증가시키는 방법에 대하여는 더욱 기재한 바가 없다. 또한, 미백 활성 증가를 위한 방안으로 홍화새싹을 발효시킨 선행 기술의 예도 찾을 수 없다.
However, none of the prior art discloses the use of the safflower sprout itself in a cosmetic composition, and further describes a method of increasing the content of the flavonoid-based compound of safflower sprout by using LED blue light during the cultivation of safflower sprout There is no bar. In addition, there is no example of prior art fermenting safflower sprout as a means to increase whitening activity.

본 발명에서는 종래 천연물을 화장료 조성물에 이용하는 경우에 있어서 해마다 재배 조건이 달라짐에 따라 천연물에 함유된 활성 성분 함량이 일정하지 않아 기능성 화장료 조성물의 원료 물질로서 사용하기에 부적합하였던 문제점을 해결하고자 한다.In the present invention, when the natural product is used in the cosmetic composition, the content of the active ingredient contained in the natural product is not constant due to the change in cultivation conditions year after year, and thus it is unsuitable for use as a raw material for the functional cosmetic composition.

또한, 본 발명에서는 일정 시기에만 소량 채취가 가능하였던 홍화새싹을 경제적으로 대량생산할 수 있는 방법을 밝힌다.In addition, the present invention discloses a method for economically mass-producing safflower sprouts which can be harvested only in a small amount at a certain time.

또한, 본 발명에서는 홍화새싹의 최적화 재배 조건을 밝힌다.In the present invention, optimization cultivation conditions of safflower sprouts are revealed.

또한, 본 발명에서는 미백 및 주름개선 활성 화합물의 함량을 증가시킴으로써 미백 및 주름개선 화장료 조성물의 기능을 향상시키고자 한다.
Further, in the present invention, it is intended to improve the function of the whitening and wrinkle improving cosmetic composition by increasing the content of the whitening and wrinkle improving active compound.

본 발명에 따르면, 홍화새싹을 포함하는 미백 화장료 조성물을 제공한다.According to the present invention, there is provided a whitening cosmetic composition comprising a safflower bud.

또한, 본 발명에 따르면, 식물 공장에서 안정적으로 광합성 과정을 거친 홍화새싹을 포함하는 미백 화장료 조성물을 제공한다.Also, according to the present invention, there is provided a whitening cosmetic composition comprising safflower sprouts stably subjected to a photosynthesis process in a plant.

또한, 본 발명에 따르면, 식물 공장에서 430nm 내지 460nm 파장 범위의 LED 청색광을 조사시켜서 플라보노이드 함량이 증가된 홍화새싹을 포함하는 미백 화장료 조성물을 제공한다. Also, according to the present invention, there is provided a whitening cosmetic composition comprising a safflower bud with increased flavonoid content by irradiating LED blue light in a wavelength range of 430 nm to 460 nm in a plant plant.

또한, 본 발명에 따르면, 식물 공장에서 430nm 내지 460nm 파장 범위의 LED 청색 광원을 7일동안 하루에 10시간씩 조사시켜서 홍화새싹의 플라보노이드 함량을 증가시키고, 이어서 발효 과정에 의해 플라보노이드가 아글리콘 형태로 변환된 홍화새싹을 포함하는 미백 화장료 조성물을 제공한다.In addition, according to the present invention, it is possible to increase the flavonoid content of safflower sprouts by irradiating the LED blue light source in the wavelength range of 430 nm to 460 nm in the plant plant for 10 days for 7 days, and then the flavonoid is converted into the aglycone form The present invention provides a whitening cosmetic composition comprising converted safflower sprouts.

또한, 본 발명에 따르면, 주름개선 효능을 함께 갖는 화장료 조성물을 제공한다. According to the present invention, there is also provided a cosmetic composition having a wrinkle-reducing effect.

또한, 본 발명에 따르면 식물 공장에서 홍화새싹을 재배하는데 있어 홍화새싹 재배의 최적화 조건을 제공한다.
In addition, the present invention provides optimization conditions for the cultivation of safflower sprouts in the cultivation of safflower sprouts in plant factories.

본 발명에 따라, 식물 공장에서 조사량, 온도 및 습도 등을 최적화시켜 홍화새싹을 대량 재배할 수 있게 되었으므로 친환경 화장품 원료 생산 기술을 제공할 수 있다.According to the present invention, it is possible to mass-cultivate safflower sprouts by optimizing irradiation dose, temperature, humidity and the like in a plant factory, and thus it is possible to provide an environmentally friendly cosmetic raw material production technology.

또한, 식물 공장에서 재배된 홍화새싹은 일정한 함량의 화장료 유효 성분을 포함하므로, 기능성 화장품 소재의 안정적인 품질 유지 및 공급이 가능하게 되었다. In addition, safflower sprouts cultivated in plant factories contain a certain amount of cosmetic active ingredient, so that it is possible to maintain and supply stable quality of functional cosmetic material.

또한, 특정 파장 범위의 LED 광원의 조사 및 재배조건의 최적화를 통해 플라보노이드계 화합물 함량을 증가시킬 수 있게 되었다. In addition, it is possible to increase the content of the flavonoid compound by optimizing irradiation and cultivation conditions of the LED light source in a specific wavelength range.

특히, 홍화새싹이 50ug/ml 농도에서 50 내지 70%의 멜라닌 저해 활성을 갖게 되고 20% 증가한 콜라겐 합성능을 나타내는데, 이는 다른 천연물 소재에 비해서 뿐만 아니라 홍화씨나 홍화박에 비해서도 월등히 우수한 미백효과 및 주름개선 효과에 해당한다. Especially, safflower sprout has 50 to 70% of melanin inhibitory activity at a concentration of 50 ug / ml and exhibits a collagen aggregation performance of 20%, which is superior to that of other natural materials, as well as superior whitening effect and wrinkle Improvement effect.

뿐만 아니라, 본 발명에 따르면, 이산화탄소 배출없는 친환경 화장품(green cosmetic)의 모델을 제시한 의의도 갖는다.
In addition, according to the present invention, a model of green cosmetic without carbon dioxide emission is presented.

도 1은 건조방법을 달리한 홍화새싹 추출물의 폴리페놀 함량을 나타낸 그래프이다.
도 2는 건조방법을 달리한 홍화새싹 추출물의 플라보노이드 함량을 나타낸 그래프이다.
도 3은 건조방법을 달리한 홍화새싹 추출물의 SOD 유사 활성을 나타낸 그래프이다.
도 4는 건조방법을 달리한 홍화새싹 추출물의 전자 공여능을 나타낸 그래프이다.
도 5는 건조방법을 달리한 홍화새싹 추출물의 하이드록시 라디칼 소거능 시험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 홍화 재배 조건에 따른 멜라닌 합성 저해능 시험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 7은 홍화 재배 조건에 따른 콜라겐 합성능 시험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 8은 홍화 재배 조건에 따른 Nitrite 합성 저해능 시험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 9는 홍화 재배 조건에 따른 세포 내 스트레스 억제능 시험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 10은 홍화 재배 조건에 따른 ß-hexosaminidase 분비 억제능 시험 결과를 나타낸 그래프이다.FIG. 1 is a graph showing polyphenol content of a safflower extract obtained by different drying methods.
FIG. 2 is a graph showing the content of flavonoids in the safflower bud extract with different drying methods. FIG.
FIG. 3 is a graph showing the SOD-like activity of the safflower bud extract with different drying methods.
FIG. 4 is a graph showing the electron donating ability of the safflower bud extract with different drying methods.
FIG. 5 is a graph showing the results of the hydroxy radical scavenging ability test of the safflower bud extract with different drying methods.
6 is a graph showing the results of melanin synthesis inhibition test according to souring culture conditions.
FIG. 7 is a graph showing the results of collagen synthesis performance test according to safflower growing conditions.
FIG. 8 is a graph showing the results of the test for the inhibition of nitrite synthesis according to the safflower growing conditions.
FIG. 9 is a graph showing the results of the test for inhibiting intracellular stress according to the conditions for cultivation of safflower.
FIG. 10 is a graph showing the results of the test for inhibiting the secretion of ß-hexosaminidase according to the conditions of cultivation of safflower.

본 발명에서 ‘홍화새싹’이라 함은 홍화씨를 3일동안 발아시킨 후에 식물공장에 파종시키고 7일째 수확한 새싹을 의미한다. 본 발명에서 홍화씨의 원산지는 특별히 제한되지는 않으나, 바람직하게는 국내산 홍화씨를 사용한다.In the present invention, the term 'safflower sprout' refers to a bud that has been germinated for 3 days after sowing of safflower seed, then sown on a plant, and harvested on the 7th day. In the present invention, the country of origin of safflower seed is not particularly limited, but domestic safflower seed is preferably used.

본 발명에서 ‘식물공장’이라 함은 작물 생육에 적당한 환경을 제공하여 더 많은 수량과 좋은 품질의 농산물을 얻을 수 있도록 인공적으로 재배환경을 제어하는 폐쇄작물 재배시스템을 말하는 것으로, 온실형태의 식물공장과 폐쇄된 완전제어 식물생장공장의 2종류가 있다[한국농업기계학회지 제26권 제3호 2001년 6월호 참고].In the present invention, the term "plant plant" refers to a closed crop growing system that artificially controls the cultivation environment so as to provide a suitable environment for growing crops to obtain more yields and good quality agricultural products. And a closed complete control plant growth plant [Korean Journal of Agricultural Machinery Vol. 26, No. 3, June 2001].

현재, 식물이 재배되는 재배면적이 동일한 구조를 갖는 다수의 트레이(tray)를 동축상에 적층하여 한정된 공간에서 수경재배 면적을 최대한 확보하여 생산성을 향상시킬 수 있도록 한 식물 공장 시스템(대한민국 등록특허 제10-0512378호)이나, LED 광원을 이용함으로써 식물에 필요한 파장의 광을 집중적으로 균형있게 조사하도록 한 식물공장(대한민국 공개특허 제10-2004-0010426호)이 알려져 있다.Currently, there is a plant plant system (hereinafter referred to as " plant plant system ") in which a plurality of trays having a structure having the same planting area where plants are grown are stacked on a coaxial plane to maximize hydroponic cultivation area in a limited space, 10-0512378), and a plant plant (Korean Patent Laid-Open Publication No. 10-2004-0010426) in which light of a wavelength necessary for a plant is irradiated intensively and balancedly by using an LED light source is known.

본 발명에서는 홍화새싹이 안정적으로 광합성할 수 있도록 하는 식물공장이라면 그 구조 및 제어시스템에 있어 특별히 제한되지 않는다.In the present invention, there is no particular limitation on the structure and the control system of a plant plant so that safflower sprouts can stably perform photosynthesis.

본 발명에서 사용되는 광원은 LED 광원이다. 보다 구체적으로, 본 발명에서는 430nm 내지 460nm 파장 범위의 LED 광원을 사용한다. 상기 파장 범위는 엥겔만의 실험(Engelmann's experiment)에 의해 광합성에 적합한 것으로 밝혀진 파장 범위이다. 본 발명에서 LED 광원은 당업계에서 통상적인 방법으로 식물공장에 설치된다. The light source used in the present invention is an LED light source. More specifically, an LED light source in the wavelength range of 430 nm to 460 nm is used in the present invention. The wavelength range is the wavelength range found to be suitable for photosynthesis by Engelmann's experiment. In the present invention, the LED light source is installed in a plant factory in a manner customary in the art.

플라보노이드(flavonoid)는 비타민 P로도 총칭되는 식물 2차 대사물질로서, 시험관내에서 항산화 활성을 갖는 것으로 알려져 있고, 그의 암 및 심혈관 질환 예방 효능에 대하여 최근 주목받고 있다. Flavonoid is a plant secondary metabolite commonly referred to as vitamin P, which is known to have antioxidant activity in vitro and has recently received attention for its preventive effect on cancer and cardiovascular diseases.

청색광이 플로보노이드 함량을 증가시키는 메카니즘에 대하여는 아직 명확히 규명되지 않았으나, 엥겔만의 실험에서 청색광이 광합성에 주로 쓰인다는 것이 확인되었으며, 특히 엽록소 합성의 마지막 단계에서 높은 수준의 청색광이 요구되는 것으로 알려져 있다 [2008년 생물 환경조절학회지/ v. 17, no.2, 2008년, pp.116-123].The mechanism by which blue light increases the content of fluroboron has not yet been clarified. However, it has been confirmed that blue light is mainly used for photosynthesis in Engelmann experiments, and it is known that a high level of blue light is required at the final stage of chlorophyll synthesis [2008] Journal of Biological Environment Control / v. 17, no. 2, 2008, pp. 116-123].

발효/bioconversion은 바실러스, 아스퍼질러스, 버섯균 등의 다양한 효소 활성, 특히 당가수분해활성, 대표적으로는 글루코시다아제 등의 활성이 높은 균을 선정하여 플라보노이드 배당체에서 당이 유리화된 형태인 아글리콘으로 만들어, 즉, 고분자를 저분자화함으로써 피부 침투 활성이 높게 만드는 과정을 의미한다. Fermentation / bioconversion was carried out by selecting a variety of enzymatic activities such as bacillus, aspergillus, and mushroom bacteria, especially those with high water activity, such as glucosidase activity, , That is, a process of making the penetration activity of the skin high by making the polymer low-molecular-weight.

본 발명에서 발효방법으로는 당업계에 통상적으로 사용되는 발효 방법, 예컨대 알코올 발효법을 적용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. As the fermentation method in the present invention, a fermentation method commonly used in the art, for example, an alcohol fermentation method, may be applied, but is not limited thereto.

본 발명에서 홍화새싹을 알코올 발효시키면, 알코올 발효시키지 않은 대조군에 비해 피부 침투 활성이 크게 증가하였다.
In the present invention, alcoholic fermentation of safflower sprouts significantly increased skin penetration activity compared to the control without alcohol fermentation.

본 발명의 홍화새싹은 화장료 조성물 100중량부을 기준으로 0.01 내지 5중량%로 화장료 조성물에 포함될 수 있다.The safflower bud of the present invention may be contained in the cosmetic composition in an amount of 0.01 to 5% by weight based on 100 parts by weight of the cosmetic composition.

본 발명의 홍화새싹을 포함하는 화장료 조성물은 통상적으로 화장료 조성물에 이용되는 성분, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.The cosmetic composition comprising the safflower bud of the present invention may contain conventional auxiliary agents such as antioxidants, stabilizers, solubilizing agents, vitamins, pigments and flavoring agents, and carriers, which are conventionally used in cosmetic compositions.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 수렴 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포움, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.The cosmetic composition of the present invention can be prepared into any of the formulations conventionally produced in the art and can be used in the form of solutions, suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, lotions, powders, soaps, , Oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation and spray, but is not limited thereto. More specifically, it can be manufactured in the form of a flexible lotion, a convergent lotion, a nutritional lotion, a nutritional cream, a massage cream, an essence, an eye cream, a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing water, a pack, a spray or a powder.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오즈 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, an animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tragacanth, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide may be used as the carrier component .

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 스프레이인 경우에는 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 다이메틸 에테르와 같은 추진제를 추가로 함유할 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component. In the case of spraying, chlorofluorohydrocarbons, propane / Or a propellant such as dimethyl ether.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용된다.When the formulation of the present invention is a solution or an emulsion, a solvent, a dissolving agent or an emulsifying agent is used as a carrier component.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정질 셀룰로오즈 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a suspension, a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as polyoxyethylene sorbitol ester, microcrystalline cellulose or the like may be used as a carrier component.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a surfactant-containing cleansing, aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate and the like may be used as a carrier component.

본 발명의 화장료 조성물은 1일에 1회 내지 수회에 걸쳐 얼굴 등에 도포하여 사용할 수 있다.
The cosmetic composition of the present invention can be applied to face or the like once or several times per day.

이하, 본 발명을 하기 실시예를 들어 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐이므로, 본 발명을 이에 한정하는 것으로 해석해서는 안 된다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the following examples. However, the examples are for illustrative purposes only and should not be construed as limiting the invention thereto.

실시예Example

1. 실험 재료 및 준비1. Materials and Preparation

본 연구에 사용된 홍화는 시중에 유통되는 중국산 홍화 및 대한민국 경상북도 의성군에서 수확한 홍화를 3일 동안 발아시킨후 식물공장에 파종후 7일후에 수확하여 실험에 사용하였다. The safflower used in this study was germinated for 3 days and then harvested 7 days after sowing in a plant.

홍화새싹은 2가지 방법으로 건조하여 이화학적 특성을 분석비교하였는데, 첫 번째 건조 방법은 60℃ 건조기에서 24시간 동안 말리는 방법이고, 두 번째 건조 방법은 시료(RM: raw material)를 -20℃에서 냉동 후 진공 동결건조기(FD5508, Ilshin Lab Co., Ltd., Korea)를 이용하여 -70℃에서 12시간 건조한 진공 동결건조 방법이었다. 전 처리된 홍화새싹을 분쇄하여 분석시료로 사용하였다. 분석용매 등은 99.8% 이상의 순도를 갖는 HPLC Grade 용매(J.T.baker)를 사용하였고, 그 이외의 사용시약은 1급 이상의 시약을 사용하였다.
The first drying method is drying for 24 hours in a 60 ° C dryer and the second drying method is for drying the raw material (RM) at -20 ° C Followed by freeze-drying and vacuum drying at -70 ° C for 12 hours using a vacuum freeze dryer (FD5508, Ilshin Lab Co., Ltd., Korea). The pretreated safflower sprouts were pulverized and used as analytical samples. Analytical solvents and the like were HPLC grade solvents (JTbaker) having a purity of 99.8% or more, and reagents of grade 1 or higher were used for the other reagents.

2. 홍화새싹의 일반성분 및 이화학적 특성의 분석 및 그 결과2. Analysis of general components and physicochemical properties of safflower sprouts and results

시료의 일반성분은 AOAC의 방법에 준하여 측정하였다. 즉, 수분은 상압가열건조법, 조단백질은 micro-Kjeldahl법, 조지방은 Soxhlet법, 회분은 직접회화법으로 측정하였다.The general components of the samples were measured according to the AOAC method. That is, moisture was measured by atmospheric pressure heating drying, crude protein was measured by micro-Kjeldahl method, crude fat was measured by Soxhlet method, and ash was measured by direct filtration method.

이하, 본 명세서에서 WRM(white lighting raw materials)은 백색광을 조사한 시료를, BRM(blue lighting raw materials)은 청색광을 조사한 시료를, RRM(red lighting raw materials)은 적색광을 조사한 시료를, CRM(control raw materials)은 대조군 시료를 의미한다. 또한, WHD(white lighting hot air drying)은 백색광 조사후 고온 공기에서 건조시킨 홍화새싹을, BHD(blue lighting hot air drying)은 청색광 조사후 고온 공기에서 건조시킨 홍화새싹을, RHD(red lighting hot air drying)은 적색광 조사후 고온 공기에서 건조시킨 홍화새싹을, CHD(control hot air drying)은 대조군으로서 고온 공기 건조시킨 홍화새싹을 의미한다. 또한, WFD(white lighting freeze drying)은 백색광 조사후 동결건조시킨 홍화새싹을, BFD(blue lighting freeze drying)은 청색광 조사후 동결건조시킨 홍화새싹을, RFD(red lighting freeze drying)은 적색광 조사후 동결건조시킨 홍화새싹을, CFD(control freeze drying)은 대조군 동결건조시킨 홍화새싹을 의미한다.
Hereinafter, in the present specification, white light raw materials (WRM) refers to samples irradiated with white light, BRM (blue lighting raw materials) refers to samples irradiated with blue light, RRM (red lighting raw materials) refers to samples irradiated with red light, raw materials) refers to control samples. In addition, WHD (white lighting hot air drying) is a safflower sprout dried in high temperature air after irradiation with white light. BHD (blue lighting hot air drying) is safflower sprout dried in hot air after blue light irradiation, drying refers to safflower buds dried in hot air after red light irradiation, and control hot air drying (CHD) controls safflower buds dried in hot air. In addition, white lighting freeze drying (WFD) is a lyophilized sprout that is lyophilized after being exposed to white light. BFD (blue lighting freeze drying) is a lyophilized sprout that is lyophilized after blue light irradiation. Red lighting freeze drying Controlled freeze drying (CFD) refers to a control lyophilized safflower bud.

(1) 일반성분의 분석 및 그 결과(1) Analysis of general components and results thereof

홍화새싹의 일반성분으로서 수분, 조 회분, 조 지방, 조 단백을 분석한 결과를 하기 표 1에 나타내었다. The results of analyzing moisture, crude ash, crude fat and crude protein as general components of safflower sprouts are shown in Table 1 below.

수분함량은 적색광을 조사한 홍화새싹에서 건조조건에 따라서도 다소 높게 측정되었으며, 조 회분 함량은 홍화새싹 시료에서 회분 함량이 낮게 측정된 반면, 청색광을 조사한 홍화새싹에서 다소 높게 나타났다. 조 지방 함량은 적색광 조사후 진공동결 건조시킨 홍화새싹에서다소 높게 나타났다. 조 단백질 함량은 60℃ 건조시킨 홍화새싹에서는 흡광에 따라 유의적인 차이를 나타내지 않았으나, 진공동결 건조시킨 홍화새싹의 경우에는 적색광을 조사한 홍화새싹에서 높게 측정되었다.Moisture content was slightly higher in the safflower sprout irradiated with red light depending on the drying conditions. The crude ash content was slightly higher in the safflower buds of blue light than in the safflower bud samples. The crude fat content was somewhat higher in the safflower buds lyophilized after the red light irradiation. The crude protein content of the safflower buds dried at 60 ℃ did not show any significant difference according to the absorption, but that of vacuum freeze dried safflower buds was higher in the safflower buds exposed to red light.

(2) 클로로필 함량(2) Chlorophyll content

클로로필 a는 청록색, 클로로필 b는 황록색을 나타내며 그 비율은 3:1로 존재한다. 클로로필의 핵 중심은 Mg이고 혈색소의 핵 중심은 Fe이란 점 외에 상기 2개 물질은 같은 포르피린(phorphyrin) 구조이며, 이는 동물이 엽록소를 섭취하여 소화될 때 소장 융모에 존재하는 Fe과 Mg이 치환되어 혈색소를 생성하는 조혈작용에 관여하는 것으로 보고되고 있다. Chlorophyll a stands for cyan, and chlorophyll b stands for yellowish green. The ratio is 3: 1. In addition to the core of chlorophyll is Mg and the center of hemoglobin is Fe, the two substances have the same phorphyrin structure, which means that when the animal is digested by ingesting chlorophyll, the Fe and Mg present in the small villus are replaced Has been reported to be involved in hematopoiesis-producing hemoglobin.

홍화새싹 3g에 85% 아세톤 100㎖를 가하여 분쇄 후 3,000rpm에서 5분간 원심 분리하여 얻은 잔사에 다시 85% 아세테이트를 넣어 추출하는 과정을 3회 반복 실시한 후에 상등액만 모아 500㎖로 정용하였다. 이 중 25㎖를 취하여 에테르 50㎖와 증류수 25㎖를 가하여 1분간 진탕 한 후 에테르층을 취하는 조작을 3회 실시하고 황산나트륨을 소량 가하여 수분을 제거한 다음 에테르로 100㎖ 정용하여 660nm, 642nm에서 흡광도를 측정하여 총 클로로필, 클로로필 a, 클로로필 b 함량을 측정하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다. To 3 g of safflower sprouts, 100 ml of 85% acetone was added, and the mixture was pulverized. The mixture was centrifuged at 3,000 rpm for 5 minutes, and then 85% acetate was added to the residue to extract three times. The supernatant was collected and 500 ml was added. Take 25 ml of this solution, add 50 ml of ether and distilled water 25 ml, shake for 1 minute, and take up the ether layer three times. Add a small amount of sodium sulfate to remove water, then use 100 ml of ether to dissolve the absorbance at 660 nm and 642 nm The total chlorophyll, chlorophyll-a and chlorophyll-b contents were measured. The results are shown in Table 2 below.

본 실험결과 대조군과 비교해 볼 때, 청록색을 나타내는 클로로필 a 의 함량이 클로로필 b에 비해 높은 경향을 보였으며, 청색광이나 적색광을 조사한 홍화새싹에서 클로로필 함량이 높게 나타났다.     Compared with the control group, the content of chlorophyll a showed a higher tendency than that of chlorophyll b, and the chlorophyll content was higher in the safflower sprout with blue light or red light.

(3) 색도 (3) Chromaticity

색도는 외관상 품질을 판정하는데 중요한 요인 중의 하나이며, 홍화새싹의 색도는 색차계(Model CR-200, Minolita Co., Japan)를 사용하여 측정하였으며, Hunter scale에 의해 L(Lightness:밝기정도), a(redness: 적색도), b(yellowness: 황색도) 값으로 표시하였고, 각각 3회 측정하여 평균값으로 나타내었다. 표준색판으로 백판(Y=94.2, x=-0.3131, y=0.3201)을 사용하였다.The chromaticity of the safflower buds was measured using a colorimeter (Model CR-200, Minolta Co., Japan). The Hunter scale was used to measure L (Lightness) a (redness), and b (yellowness: yellowness), respectively. A white plate (Y = 94.2, x = -0.3131, y = 0.3201) was used as a standard color plate.

홍화새싹의 색도를 측정한 결과를 하기 표 3에 나타내었다.The results of measuring the color of the safflower buds are shown in Table 3 below.

밝기정도를 나타내는 L 값은 적색광을 쬐인 홍화에서 높게 측정되었다. 이는 온도의 영향을 크게 받지 않는 진공 동결건조시킨 홍화새싹에서 다른 건조방법으로 건조시킨 홍화새싹 보다 갈변현상이 적게 일어났기 때문으로 분석된다.The L value indicating the degree of brightness was measured high in red lighted sunflower safflower. This is attributed to the fact that the freeze - dried safflower sprout, which is free from the influence of temperature, has less browning than the safflower sprout dried by other drying methods.

적색도를 나타내는 a값은 홍화새싹 시료에서 가장 높게 측정되었고, 60℃에서 건조한 홍화에서 가장 낮게 나타났다. 황색도를 나타내는 b값은 진공동결 건조한 홍화에서 높게 측정되었으며, 흡광에 따른 유의적인 차이는 나타나지 않았다. The a value of redness was the highest in safflower bud samples and lowest in dried safflower at 60 ℃. The value of b indicating yellowness was high in vacuum freeze - dried safflower and there was no significant difference according to absorbance.

(4) 비타민 C 함량(4) Vitamin C content

건조된 홍화새싹을 sonificator(JAC 4020, Jinwoo, Korea) 기기를 사용하여 추출하였다. 건조한 홍화새싹 2-3 g을 25% EtOH 40-60 ㎖를 가하고, sonificator의 온도를 40℃로 고정하여 추출하였다. 모든 과정은 1시간씩 3반복에 걸쳐 수행하였다. Dried safflower sprouts were extracted using a sonificator (JAC 4020, Jinwoo, Korea). 2-3 g of dried safflower sprouts were extracted with 40-60 ml of 25% EtOH and the temperature of the sonificator was fixed at 40 ° C. The whole process was carried out over 3 repetitions for 1 hour.

각 추출물을 0.2 ㎛ membrane filter로 여과하여 HPLC로 분석하였으며, 분석조건은 표 4에 나타내었다. 표준곡선은 L(+)-아스코르브산을 표준시약으로 사용하여 표준곡선을 작성하여 계산하였다.Each extract was filtered with 0.2 ㎛ membrane filter and analyzed by HPLC. The analysis conditions are shown in Table 4. The standard curve was calculated by preparing a standard curve using L (+) - ascorbic acid as a standard reagent.

비타민 C함량을 측정한 결과를 하기 표 5에 나타내었다. 대조군 시료와 청색광을 쬐인 홍화에서 비타민 C 함량이 높게 측정되었으며, 건조 방법을 달리한 홍화에서는 비타민 C가 검출되지 않았다. The results of measuring the vitamin C content are shown in Table 5 below. Vitamin C content was higher in the control group and sunlighted safflower than in the blue light. No vitamin C was detected in the safflower with different drying methods.

(5) 페놀성 화합물 함량(5) Phenolic compound content

건조방법을 달리한 홍화새싹을 25% 에탄올로 추출한 후에 1 mg/mL의 농도로 제조하여 총 페놀함량을 측정한 값을 도 1에 나타내었다. 총 페놀함량은 적색광을 쬐인 진공 동결건조시킨 홍화새싹에서 총 페놀함량이 유의적으로 높게 측정되었다.
The extracts of the safflower sprouts which differed in drying method were extracted with 25% ethanol, and the concentration of 1 mg / mL was measured and the total phenol content was measured. The total phenol content of the safflower sprout was significantly higher than that of the freeze - dried safflower.

(6) 총 플라보노이드 함량(6) Total flavonoid content

건조방법을 달리한 홍화새싹의 총 플라보노이드 함량을 분석한 결과를 도 2에 나타내었다. 청색광을 쬔 홍화새싹에서 가장 높은 플로보노이드 함량을 나타내었다.
The results of analysis of the total flavonoid content of safflower buds with different drying methods are shown in FIG. Blue light showed the highest fluoronoid content in the safflower bud.

2. 건조 방법을 달리한 경우에 홍화새싹의 항산화 효과2. Antioxidant effect of safflower sprouts in different drying methods

(1) SOD(superoxide dismutase) 유사활성(1) superoxide dismutase (SOD) -like activity

호기성 생물체는 호흡대사 중 산소를 이용하는 과정에서 superoxide radical이 생성되며, 이는 생물체의 유기물과 결합하여 산화되고 산화물은 생명체에서 oxidative damage로 작용하여 생 체내 여러 가지 질병을 야기하므로 체내는 SOD에 의한 효소적 기작 및 비효소적 기작에 의한 복합적 항산화 체제를 갖고 있다. 식물체 잎의 엽록소에서 일어나는 광합성 대사시 카테킨 등의 폴리페놀 성분이 생성되고, 이 물질들은 항산화능과 밀접한 상관관계가 있다고 보고된 바 있고, 페놀성 화합물이 SOD 유사활성을 갖는다고 보고된 바 있다. Aerobic organisms produce superoxide radicals through the use of oxygen in the respiratory metabolism, which is oxidized in association with organisms in the organism, and oxidants cause oxidative damage in living organisms, leading to various diseases in living organisms. It has a complex antioxidant system by mechanism and non-enzymatic mechanism. It has been reported that polyphenol components such as catechins in photosynthetic metabolism occurring in chlorophyll of plant leaves are closely related to antioxidant ability and phenolic compounds have been reported to have SOD-like activity.

SOD 유사활성 측정은 각 추출물 시료 0.2 ㎖에 tris-HCl buffer(pH 8.5) 3 ㎖와 0.2 mM pyrogallol을 가하여 25℃에서 10분간 방치한 후 1N-HCl로 반응을 정지시킨 후 420 nm에서 UV-가시광선 분광광도계를 이용하여 측정하였다.SOD-like activity was measured by adding 3 ml of tris-HCl buffer (pH 8.5) and 0.2 ml of pyrogallol to 0.2 ml of each extract, incubating at 25 ° C for 10 minutes, stopping the reaction with 1N HCl, Ray spectrophotometer.

A : 시료 첨가군의 흡광도 A: Absorbance of the sample added group

B : 시료 무 첨가군의 흡광도 B: Absorbance of the sample-free group

건조방법을 달리한 홍화새싹의 SOD 유사활성능을 도 3에 나타내었다. 본 발명에 따르면, 60℃로 건조한 홍화새싹보다는 진공 동결건조한 홍화새싹에서 SOD 유사활성이 높게 측정되었다.
The SOD-like activity of safflower sprouts with different drying methods is shown in Fig. According to the present invention, the SOD-like activity of the safflower buds freeze-dried in vacuo was higher than that of the safflower buds dried at 60 ° C.

(2) 전자 공여능 측정(Electron donating ability : EDA)(2) Electron donating ability (EDA)

DPPH free radical 소거법에 의한 전자공여능(EDA)을 측정하여 각 시료의 항산화 활성을 알아보았다. The antioxidative activity of each sample was measured by measuring the electron donating ability (EDA) by the DPPH free radical scavenging method.

각 추출방법에 의하여 추출된 시료는 0.5 mL DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl hydazyl) 시약 3 mL를 가하고, 실온에서 30분간 방치 후 UV-가시광선 분광광도계(Phanrmaca biotech Ultraspec 3000 Engalnad)를 이용하여 517 nm에서 측정하였다.3 mL of 0.5 mL DPPH (1,1-diphenyl-2-picryl hydazyl) reagent was added to each sample, and the mixture was allowed to stand at room temperature for 30 minutes. A UV-visible light spectrophotometer (Phanrmaca biotech Ultraspec 3000 Engalnad) Lt; / RTI > at 517 nm.

A: 시료 첨가군의 흡광도A: Absorbance of the sample added group

B: 시료 무첨가군의 흡광도B: Absorbance of the sample without added sample

건조방법에 따른 홍화새싹의 전자 공여능을 측정한 결과를 도 4에 나타내었다. 한국 약용 및 식물자원의 항산화성 식물탐색에 대한 결과에서 포도씨와 음양곽을 제외한 식물자원이 20% 미만의 활성을 보고한 것과 유사한 결과를 보여주고 있다. The results of measuring electron donating ability of safflower sprouts according to the drying method are shown in FIG. The results of the search for antioxidant plants in Korean medicinal and plant resources show similar results to that of plant resources with less than 20% of plant resources except for grape seeds.

도 4에 따르면, 적색광을 쬐인 진공 동결건조시킨 홍화새싹에서 유의적으로 높은 전자공여능을 보였다.
According to FIG. 4, the red light showed significantly higher electron donating ability in the safflower-dried safflower buds.

(3) 하이드록시 라디칼 소거활성(3) Hydroxy radical scavenging activity

FeSO₄/EDTA 용액, 2-deoxyribose, 각 추출물, 포스페이트-완충액 및 H₂O₂를 혼합하여 2시간동안 반응시킨 후 TCA(trichloro acetic acid) 용액과 TBA(thiobarbituric acid) 용액을 넣고 15분 가열한 후 급속히 냉각시켜 532 nm에서 흡광도를 측정하여 항산화 활성을 비교하였다. The reaction mixture was mixed with FeSO ₄ / EDTA solution, 2-deoxyribose, each extract, phosphate-buffer solution and H ₂ O ₂ for 2 hours. TCA (trichloro acetic acid) solution and TBA (thiobarbituric acid) After rapid cooling, the absorbance at 532 nm was measured to compare the antioxidant activity.

A : 시료 첨가군의 흡광도A: Absorbance of the sample added group

B : 시료 무 첨가군의 흡광도 B: Absorbance of the sample-free group

건조방법에 따른 홍화새싹의 하이드록시 라디칼 소거능을 측정한 결과를 도 5에 나타내었다. 이 실험결과 흡광에 의한 영향은 없는 것으로 해석되었고, 건조방법에 따라서도 큰 차이를 나타내지 않았다.
The results of measuring the hydroxy radical scavenging ability of safflower sprouts according to the drying method are shown in FIG. As a result of this experiment, it was interpreted that there was no influence by the absorption, and there was no significant difference according to the drying method.

3. 홍화새싹의 세포기반 효능효과의 평가3. Assessment of cell-based efficacy of safflower bud

식물공장에서 홍화 재배시에 있어서 물, 물 흡수제, 빛 조건 등이 홍화새싹 미용 효능효과에 끼치는 영향에 대하여 연구하였다. 이에 대하여는 콜라겐 합성능, 항염, 미백, 항산화능, 항알러지를 중심으로 연구하였다.Effects of water, water absorber, and light condition on the cosmetic effect of safflower sprouts were studied in the plant. This study focused on collagen synthesis performance, anti - inflammation, whitening, antioxidant ability and anti - allergy.

콜라겐 합성능 효과는 프로콜라겐 1형 펩타이드(proCollagen type1 peptide) 방법으로 측정하였고, 항염 효과는 Nitrite assay를 이용하였으며, 미백 효과는 멜라닌 함량에 의해 측정하였으며, 항산화능 효과는 Intracellular ROS 검출법에 의해 측정하였고, 항알러지 효과는 β-hexosaminidase release 방법에 의해 측정하였다.Collagen aggregation performance was measured by proCollagen type 1 peptide method, anti - inflammatory effect was measured by Nitrite assay, whitening effect was measured by melanin content, antioxidant effect was measured by Intracellular ROS detection method , Antiallergic effect was measured by β-hexosaminidase release method.

사용시료는 1차~4차로 나누어 재배하였는데, 그 변화 조건을 하기 표 6에 나타내었다.The used samples were divided into primary to tertiary cultivars. The conditions for the changes are shown in Table 6 below.

홍화 재배 조건Conditions for cultivation of safflower 빛 조건Light condition 물 조건Water condition 1차Primary 1. Control(국내산)
2. China(중국산) - 원형 삼파장 전구
3. China White - 삼파장 전구 + LED(주광색)
4. China Yellow - 삼파장 전구 + 백열등1. Control (Domestic)
2. China (Made in China) - Round three-wave bulb
3. China White - Three-wavelength light bulb + LED (daylight color)
4. China Yellow - Three-wavelength bulb + incandescent lamp 1. 황토볼 배지
2. 일반적인 물 사용1. Yellow soil ball badge
2. Use common water 2차Secondary 1. White - 삼파장 전구
2. Red - 삼파장 전구 + LED(적색)
3. Blue - 삼파장 전구 + LED(청색)
4. Red + Blue - 삼파장 전구 + LED(적색 + 청색)1. White - Three-wavelength light bulb
2. Red - Three-wavelength light bulb + LED (red)
3. Blue - Three-wavelength light bulb + LED (blue)
4. Red + Blue - Three-wavelength bulb + LED (red + blue) 1. 물흡수볼 배지(하이드로젤)
2. 이온수 사용
3. 모두 국산 홍화씨 사용1. Water absorption ball medium (hydrogel)
2. Using ionized water
3. Use Korean domestic safflower seeds 3차Third 1. White - 삼파장 전구
2. Red - 삼파장 전구 + LED(적색)
3. Blue - 삼파장 전구 + LED(청색)1. White - Three-wavelength light bulb
2. Red - Three-wavelength light bulb + LED (red)
3. Blue - Three-wavelength light bulb + LED (blue) 1. 물흡수볼 배지(하이드로젤)
2. 일반적인 물 사용
3. 모두 국산 홍화씨 사용1. Water absorption ball medium (hydrogel)
2. Use common water
3. Use Korean domestic safflower seeds 4차Fourth 1. White - 삼파장 전구1. White - Three-wavelength light bulb 1. 국산 홍화씨 사용
2. 물위에 바구니를 띄움 (뿌리가 잘리지 않고 길게 자람)
3. 일반적인 물 사용1. Domestic use of safflower seed
2. Spreading baskets on water (long roots without cutting off roots)
3. Use common water

(1) 멜라닌 합성 저해능(1) melanin synthesis inhibitory ability

멜라닌 세포는 피부 상피 조직의 기저층에 있는 분화된 세포인데, 이 세포는 멜라닌 소체라는 특수한 기관이 있어 멜라닌을 합성한다. 멜라닌은 자외선으로부터 피부를 보호하는 기능 및 cytotoxic radical의 소거제로서의 역할 뿐만 아니라, 기미, 주근깨와 같은 색소 침착에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 현재, 미백 원료의 효능을 평가하기 위해 가장 일반적으로 in vitro tyrosinase 활성 억제 시험과 더불어 세포내 멜라닌 생성 저해 시험을 가장 많이 사용되고 있다. Melanocytes are the differentiated cells in the basal layer of the skin epithelium, which have a special organs called melanocytes that synthesize melanin. Melanin is known to play an important role not only in protecting skin from ultraviolet rays, but also as a scavenger for cytotoxic radicals, as well as pigmentation such as stains and freckles. At present, in order to evaluate the efficacy of whitening raw materials, in vitro tyrosinase activity inhibition test is most commonly used, and intracellular melanin formation inhibition test is most commonly used.

본 실험에서는 B16-F1 세포에서 멜라닌 합성 저해실험을 통해 추출물의 미백 원료로서의 효능을 평가하였다. In this experiment, the efficacy of the extract as a whitening ingredient was evaluated by inhibiting melanin synthesis in B16-F1 cells.

murine melanoma(B-16 F1) 세포를 적량의 FBS(fetal bovine serum)가 함유된 DMEM 배지로 6-well plate에 well당 1× 10⁵개로 접종한 후 5 % CO₂, 37℃ 하에서 세포가 well 바닥에 약 80 % 이상 부착될 때까지 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 시료가 적당 농도로 희석된 배지로 교체한 후 5% CO₂, 37℃하에서 일정시간 배양하였다. 배지를 제거한 세포를 PBS(phosphated buffer saline)로 세척하고, 이것을 트립신으로 처리하여 세포를 회수하였다. 회수된 세포는 hematocytometer를 이용하여 세포수를 측정한 후 5,000 내지 10,000 rpm으로 10분간 원심분리한 다음 상등액을 제거하여 펠릿(pellet)을 얻었다. 이 세포 펠릿은 60℃에서 건조한 후 10% DMSO가 함유된 1M 수산화나트륨액 100 ㎕ 또는 적량의 cell lysis buffer를 넣어 60℃ 항온조에서 세포내 멜라닌을 얻었다. 이 액을 가지고 microplate reader로 405 nm에서 흡광도를 측정하여 세포 일정 갯수 당 멜라닌 양 또는 일정 단백질 당 멜라닌 양을 구하였다.murine melanoma (B-16 F1) cells a suitable amount of FBS (fetal bovine serum) containing a after a 6-well plate in DMEM medium inoculated with 1 × 10 ⁵ pieces per well 5% CO _2, the cells are well under 37 ℃ And cultured until it was attached to the bottom of about 80% or more. After removing the culture medium, and samples were incubated under the concentration time constant 5% CO _2, 37 ℃ was replaced with the diluted medium to a suitable. Cells from which the medium was removed were washed with PBS (phosphatized buffer saline), and treated with trypsin to recover the cells. The recovered cells were counted using a hematocytometer, centrifuged at 5,000 to 10,000 rpm for 10 minutes, and the supernatant was removed to obtain a pellet. The cell pellet was dried at 60 ° C, and 100 μl of 1 M sodium hydroxide solution containing 10% DMSO or an appropriate amount of cell lysis buffer was added to obtain intracellular melanin in a 60 ° C thermostat. The absorbance at 405 nm was measured with a microplate reader to determine the amount of melanin per cell number or the amount of melanin per constant protein.

그 결과를 도 6에 나타내었으며, 이에 의해 50ug/ml의 농도에서 50~70%의 저해활성을 나타내는 것을 확인할 수 있다.
The results are shown in FIG. 6, which shows that the inhibitory activity is 50 to 70% at a concentration of 50 ug / ml.

(2) 콜라겐 합성능(2) Collagen aggregation performance

피부주름의 발생원인 중 하나로 피부교원질(콜라겐)의 결핍을 들고 있다. 콜라겐은 피부 진피를 구성하는 주요 단백질로서 피부구조와 탄력을 유지하는 역할을 하고 있다. 콜라겐은 나이가 들면서 생성의 감소를 보이며 분해도 증가되어 피부 진피층의 함몰을 유도하여 피부의 주름을 생성하는 것으로 알려져 있다. 진피층에 존재하는 섬유아세포는 피부 구성 주요 단백질인 콜라겐의 합성을 담당하고 있다. 따라서 섬유아세포를 이용하여 콜라겐의 생성 증가 정도를 측정함으로써 추출물의 collagen 합성능 향상 및 주름개선 효력을 평가 할 수 있다. One of the causes of skin wrinkles is the lack of collagen in the skin. Collagen is the main protein that constitutes the skin dermis and plays a role in keeping skin structure and elasticity. It is known that collagen shows a decrease in production with age and is increased in degradation to induce depression of the dermal layer of the skin to produce wrinkles of the skin. Fibroblasts present in the dermis are responsible for the synthesis of collagen, a major protein in the skin. Therefore, by measuring the degree of increase of collagen production using fibroblasts, the collagen synthesis performance of the extract can be improved and the wrinkle improvement effect can be evaluated.

피부 섬유아세포(HDFn)를 48 well plate에 5 x 10⁴cells/well의 농도로 배양 배지 0.3 ml로 접종하여 37℃, 5% CO₂에서 배양하였다. 24시간 지난 이후 추출물을 농도별로 포함한 새로운 배지로 24시간 동안 배양하였다. 24시간 배양 이후 배양액을 모아서 enzymes-linked immunoassay kit (Takara사)를 이용하여 콜라겐 전구체의 C-말단의 양을 측정하였다. 또한, 콜라겐 용액 (640 ng/ml)을 이용하여 콜라겐 농도 0 ng-640 ng 사이의 standard curve를 얻어 배지에 있는 콜라겐 양을 계산하였다.Dermal fibroblasts (HDFn) were inoculated into 48-well plates at a concentration of 5 × 10 ⁴ cells / well in 0.3 ml of culture medium and cultured at 37 ° C and 5% CO ₂ . After 24 hours, the extracts were cultured for 24 hours in a fresh medium containing the concentrations of the extracts. After culturing for 24 hours, the culture broth was collected and the amount of C-terminus of the collagen precursor was measured using an enzymes-linked immunoassay kit (Takara). In addition, a collagen solution (640 ng / ml) was used to obtain a standard curve between 0 ng and 640 ng of collagen concentration, and the amount of collagen in the medium was calculated.

그 결과를 도 7에 나타내었으며, 이에 따르면, 청색광을 함께 준 시료에서 콜라겐 합성능이 약 20% 정도 증가하였다.
The results are shown in FIG. 7. According to the results, the ability to synthesize collagen increased by about 20% in the samples with blue light.

(3) Nitric Oxide 저해능(3) Nitric Oxide

염증의 발현 기전에는 다양한 매개체가 관여하고 있으며, 그 병의 원인도 다양하다. 대식세포에 endotoxin으로 알려져 있는 LPS(lipopolysachride)를 처리하면, iNOS(inducible NOS)발현에 의해 NO 생합성이 증가하며 염증반응이 유도된다. NO는 많은 세포들이 분비하는 병리적인 2차 신호전달 물질이며, COX의 활성을 조절하고 염증반응에 상승적으로 작용한다. Raw 264.7 세포에서 LPS에 의해 유도되는 NOS에 의해 생성되는 NO를 측정함으로서 추출물의 염증반응 억제 효과를 판정할 수 있다. Various inflammatory mediators are involved in the pathogenesis of inflammation, and the causes of the disease vary. Treatment of macrophages with LPS (lipopolysachride), known as endotoxin, increases NO biosynthesis by inducible NOS (iNOS) expression and induces an inflammatory response. NO is a pathological secondary signaling substance secreted by many cells, regulates the activity of COX and acts synergistically to the inflammatory response. By measuring NO produced by LPS induced by NOS in Raw 264.7 cells, the inhibitory effect of the extract on inflammation can be determined.

Mouse macrophage cell인 RAW 264.7 세포에 염증 유발 물질인 LPS를 인위적으로 처리한 후 염증 억제 효과가 있는지를 평가하였다. 96 well plate에 well 당 2 x 10⁵cell이 되도록 분주한 다음, 24시간 동안 37℃, 5% CO₂ incubator에서 배양하였다. Overnight 한 다음, 새로운 배지로 교환해주고, LPS(1ug/ml)와 추출물을 1ug/ml ~ 100ug/ml 범위의 농도별로 투여하여 24시간동안 배양하였다. 배양 후, 배지 상층액을 취해 13,000 rpm에서 3분 동안 원심 분리하여 상등액만 모은 후, Griess reagent 시약과 1:1로 반응시키고, 570nm에서 흡광도를 측정하였다. Mouse macrophage cell RAW 264.7 cells were treated with LPS, an inflammation inducing substance, to evaluate whether they inhibited inflammation. Cells were seeded at 2 × 10 ⁵ cells per well in a 96-well plate and cultured in a 5% CO ₂ incubator at 37 ° C for 24 hours. Overnight and then replaced with fresh medium. LPS (1 ug / ml) and extracts were added at a concentration ranging from 1 ug / ml to 100 ug / ml and cultured for 24 hours. After incubation, the supernatant was taken and centrifuged at 13,000 rpm for 3 minutes to collect supernatant, reacted with Griess reagent reagent 1: 1, and absorbance was measured at 570 nm.

그 결과를 도 8에 나타내었다.
The results are shown in Fig.

(4) 항산화 활성 시험(4) Antioxidant activity test

세포에서의 에너지 생산에서는 미토콘드리아 호흡에 의한 부산물인 반응성 산소기 (ROS, reactive oxygen species)의 생성이 수반되며 이것은 단백질, 지방 및 핵산에 손상을 가져온다. Energy production in cells involves the production of reactive oxygen species (ROS), a byproduct of mitochondrial respiration, which causes damage to proteins, fats and nucleic acids.

이러한 손상으로부터 세포 자체를 보호하기 위해 세포 내의 방어체계가 작동을 하지만 유리 라디칼의 생성과 항산화 체계의 균형이 깨어지면 산화스트레스가 세포에 작용하게 되어 신체노화를 비롯한 각종 성인병과 암의 주요 원인으로 작용한다. In order to protect the cell itself from such damage, the defense system works in the cell. However, when the balance between the production of free radicals and the antioxidant system is broken, oxidative stress acts on the cell, which is a major cause of various diseases and cancers of the body including aging. do.

따라서, 피부친화적이고 안정적인 식물을 원료로 항산화제 개발을 위해, 세포 내에 형성된 활성산소의 양을 측정하여 추출물에 대한 항산화능을 평가한다. DCFH-DA(2`,7`-dichlorofluorescin-diacetate)를 이용한 fluorimetric assay가 대표적인 평가법으로 DCFH-DA는 비극성분자로 용이하게 세포 내로 들어갈 수 있으며 세포 내의 esterase에 의해 비형광성 극성분자인 DCFH으로 분리된 후 세포 내의 활성산소에 의해 산화되면 형광성 DCF(2`,7`-dichlorofluorescin)로 전환되게 되고 이를 fluorometer로 측정하는 방법이다. Therefore, the antioxidant ability of the extract is evaluated by measuring the amount of active oxygen formed in the cells for developing an antioxidant using a skin-friendly and stable plant as a raw material. DCFH-DA is a nonpolar molecule that can easily enter the cell and is separated by the intracellular esterase into DCFH, which is a nonpolar polar molecule. The DCFH-DA is a typical evaluation method using a fluorimetric assay using 2 ', 7`-dichlorofluorescin-diacetate. After oxidation by reactive oxygen species in the cells, they are converted to fluorescent DCF (2`, 7`-dichlorofluorescin), which is measured by a fluorometer.

피부 섬유아세포(HDFn)를 DMEM (10 % 혈청 첨가, 1 % 항생제 포함) 배지에 현탁하여 37 ℃, 5 % CO₂ 배양기에서 배양하고 대수기에서 성장하는 세포를 주로 실험에 사용하였다. Well당 약 1 x 10⁵ 세포 수가 되도록 96 well에 각각 접종한 후에 시료 추출물을 여러 dose로 처리한 후 37 ℃, 5 % CO₂배양기에서 20 분간 배양하였다. 그 다음, 산화스트레스 유발 물질인 H₂O₂ 1mM을 첨가하고, DCFH-DA (stock 20 mM) 20 μM를 가한 후 spectrofluorophotometer (excitation 485 nm, emission 535 nm)로 측정한다. 37 ℃에서 90분 동안 반응을 관찰하였다. 시료를 넣지 않고 활성 산소종 (Reactive oxygen species)의 형성만을 측정한 것을 대조군으로 정하고, 시료를 넣어 활성 산소종을 소거시키는 시료 처치군과 비교하여 활성 산소종 저해율을 구하고 모든 실험은 3번 반복하였다. The dermal fibroblasts (HDFn) were suspended in DMEM (containing 10% serum, 1% antibiotic), cultured at 37 ° C in a 5% CO ₂ incubator, and cells growing in the larval stage were mainly used for the experiment. Wells were inoculated in 96 wells at a rate of about 1 x 10 ⁵ cells per well. The sample extracts were then treated with various doses and incubated at 37 ° C in a 5% CO ₂ incubator for 20 minutes. Then, 1 mM of H ₂ O _{2 as an} oxidative stress inducer is added, and 20 μM of DCFH-DA (stock 20 mM) is added thereto, followed by measurement with a spectrofluorophotometer (excitation 485 nm, emission 535 nm). The reaction was observed at 37 DEG C for 90 minutes. The inhibition rate of reactive oxygen species was determined by comparing the number of active oxygen species to the number of active oxygen species in the control group. .

그 결과를 도 9에 나타내었다.The results are shown in Fig.

활성 산소종 저해율 (%) = (대조군 OD - 시료 처치군 OD) / 대조군 OD x 100
Active oxygen species inhibition rate (%) = (control OD-sample treatment group OD) / control OD x 100

(5) 항알러지 시험 (5) Anti-allergy test

아토피성 피부염에서 혈중 호산구수와 혈청 IgE 양의 증가가 나타나며, 이는 아토피성 피부염의 대표적인 지표로써 아토피성 피부염의 초기반응은 항원의 자극에 의해 항체 IgE가 생산된 후 항체가 비만세포 표면의 high affinity receptor에 결합하였을 때 항원이 재침입하면 수용체와 결합하고 있는 항체와 결합하여 비만세포 내로 신호를 빠르게 전달하여 알레르기를 일으키는 화학적 매개물질 (cytokine, histamine, leukotrienes)을 분비한다. Histamine 등의 매개물질에 의해서 혈관 투과성을 증가시키고, 혈관을 확장시키고, 평활근을 수축시키며, 분비선의 기능을 항진시키는 특징적인 반응을 일으키게 되며, 동반되는 염증반응에는 비만세포, 호산구, T세포에서 분비되는 인터루킨 등 여러가지 사이토카인에 의해 호산구가 염증 부위로 이동하는 것이 중요하다. Histamine과 함께 중요한 매개체로 작용하는 것으로 ß-hexosaminidase가 있으며, 세포로부터 ß-hexosaminidase 의 방출 또한 면역세포 탈과립의 지표로 사용된다. Atopic dermatitis is characterized by elevated levels of serum eosinophils and serum IgE, which is a typical indicator of atopic dermatitis. The initial response of atopic dermatitis is due to antigenic stimulation of antibody IgE, When it binds to the receptor, it re-enters the antigen and binds to the antibody that binds to the receptor, which rapidly transfers the signal into the mast cell to secrete chemical mediators (cytokines, histamine, leukotrienes) that cause allergies. Histamine and other mediators increase the vascular permeability, dilate the blood vessels, constrict smooth muscles, stimulate the gland function, and the associated inflammatory responses are secreted by mast cells, eosinophils, and T cells It is important that eosinophils migrate to inflammatory sites by various cytokines such as interleukins. It acts as an important mediator with histamine, which has β-hexosaminidase, and the release of β-hexosaminidase from cells is also used as an indicator of immune cell degranulation.

비만세포의 탈과립 억제 시험(항알러지 시험) : RBL-2H3 cell을 10% FBS를 함유한 DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium)에 현탁시킨 후 24 well plate에 각 well당 2 x 10⁵cell이 들어가도록 처리한 다음 각 well당 100ng/ml의 mouse monoclonal IgE로 감작시킨 후 5% CO₂ incubator에서 24 시간동안 배양하였다. 세포를 well당 Tyrode buffer 500ul를 사용하여 헹구어내고, 농도별로 혼합 추출물을 처리한 후 37℃, 5% CO₂ incubator에서 15분간 배양하고, 한 시간 동안 DNP-BSA 100ng/ml을 처리하였다. 상층액에 substrate (1mM p-nitrophenyl-N-acetyl-ß-D-glucosaminide) 50ul 처리 후 37℃, 5% CO₂ incubator에서 한 시간 동안 incubation 한 후 ELISA reader를 사용하여 405nm에서 흡광도를 측정하였다.RAB-2H3 cells were suspended in DMEM (Dulbecco's modified Eagle's medium) containing 10% FBS, and then treated with 2 × 10 ⁵ cells per well in a 24-well plate The cells were sensitized with 100 ng / ml mouse monoclonal IgE per well and cultured in a 5% CO ₂ incubator for 24 hours. Cells were rinsed with 500 μl of Tyrode buffer, treated with mixed extracts at various concentrations, incubated at 37 ° C in a 5% CO ₂ incubator for 15 min, and treated with DNP-BSA 100 ng / ml for one hour. The supernatant was treated with 50 μl of substrate (1 mM p-nitrophenyl-N-acetyl-ß-D-glucosaminide), incubated at 37 ° C in a 5% CO ₂ incubator for one hour and absorbance was measured at 405 nm using an ELISA reader.

그 결과를 도 10에 나타내었으며, 이로부터 확인할 수 있는 바와 같이, 항알러지 효능은 실험 최고 농도인 100ug/ml의 농도에서 40~50%의 저해 활성을 나타내었다.
The results are shown in FIG. 10 and it can be seen that anti-allergic activity showed 40-50% inhibition activity at a concentration of 100 ug / ml, which is the highest concentration of the experiment.

4. 발효/bioconversion 효과 실험4. Fermentation / bioconversion effect experiment

홍화새싹을 발효/bioconversion시킴으로써 홍화새싹에 함유된 배당체 형태의 플라보노이드는 아글리콘 형태의 플라보노이드로 되었다. 그 결과, 미백 활성이 50% 이상 향상되었다.
By fermenting / bioconversion the safflower buds, the glycosylated flavonoids contained in the safflower buds became aglycone-type flavonoids. As a result, the whitening activity was improved by 50% or more.

5. 기타 광원과의 비교5. Comparison with other light sources

홍화새싹에 청색광을 조사한 경우, 백색광을 사용한 경우에 비해 멜라닌 저해 활성이 50 내지 70% 증가된 것으로 확인되었고, 적색광에 비해서도 우수한 미백 활성을 갖는 것으로 나타났다(도 6 참고).
When blue light was irradiated with safflower sprouts, it was confirmed that the melanin inhibitory activity was increased by 50 to 70% as compared with the case of using white light, and the whitening activity was superior to that of red light (see FIG. 6).

6. 다른 천연물과의 비교6. Comparison with other natural products

다른 천연물의 멜라닌 저해 활성 및 콜라겐 합성능을 측정하여 그 미백 효능 및 주름개선 효과를 확인해 본 결과, 본 발명에 따른 홍화새싹이 이들보다 월등히 우수한 미백 효능 및 주름 개선 효과를 갖는 것으로 판명되었다.
The melanin inhibitory activity and the collagen synthesis performance of other natural products were measured to confirm the whitening effect and the wrinkle improving effect. As a result, it was found that the safflower sprout according to the present invention had remarkably excellent whitening efficacy and wrinkle improving effect.

Claims (6)

삭제delete 삭제delete 식물 공장에서 430nm 내지 460nm 파장 범위의 LED 청색 광원을 7일동안 하루에 10시간씩 조사시켜 수득된 플라보노이드 함량이 증가된 것이 특징인 홍화새싹.
A safflower bud characterized by increased flavonoid content obtained by irradiating the LED blue light source in the plant plant in the wavelength range of 430 nm to 460 nm for 10 days per day for 7 days.
제 3항의 홍화새싹을 유효성분으로 함유하는 미백 및 주름개선 기능성 화장료 조성물.
A cosmetic composition for functional whitening and wrinkle reduction comprising the safflower bud of claim 3 as an active ingredient.
제 3항의 조성물이 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 크렌징 오일, 파운데이션, 스프레이 중에서 선택된 어느 하나의 제형인미백 및 주름개선 기능성 화장료 조성물.
The cosmetic composition of claim 3, wherein the composition is any one of a solution, a suspension, an emulsion, a paste, a gel, a cream, a lotion, a powder, a soap, a cleansing oil, a foundation and a spray.
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