KR101634668B1 - Cosmetic composition comprising fermented extract of mistletoe for anti-oxidation or whitening - Google Patents

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Abstract

Provided is an antioxidative or whitening cosmetic composition containing a fermented extract of mistletoe. The composition containing the fermented extract of mistletoe exhibits increased antioxidant efficacy and superoxide dismutase (SOD)-like activity than an unfermented extract of mistletoe. In addition, the total flavonoid content increases in the composition, and an increase in the tyrosinase inhibiting activity in an enzymatic level (the evaluation index for whitening effects) has been detected in a cellular level. Thus, the composition of the present invention can be useful as the antioxidative or whitening cosmetic composition.

Description

겨우살이의 발효된 추출물을 포함하는 항산화 또는 미백용 화장료 조성물{Cosmetic composition comprising fermented extract of mistletoe for anti-oxidation or whitening}The present invention relates to an antioxidant or whitening cosmetic composition containing fermented extract of mistletoe,

본 발명은 항산화 또는 미백용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 겨우살이의 발효된 추출물을 포함하는 항산화 또는 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to an antioxidant or whitening cosmetic composition, and more particularly to an antioxidant or whitening cosmetic composition containing fermented extract of mistletoe.

겨우살이(Mistletoe, Viscum album)는 다양한 나무를 숙주로 하여 생장하는 반기생 식물이며, 우리나라를 비롯한 동아시아 및 유럽에서 약용식물로 사용되어 왔다. 특히, 유럽지역에 서식하는 겨우살이는 항암 활성이 우수한 것으로 알려져 있어 항암치료제/보조제로서 상업적 시판되고 있으며, 우리나라에서는 한방에서 치통, 고혈압, 유산방지 및 요통 등에 대한 약재로 사용되고 있다. Mistletoe ( Viscum album ) is an antiparasitic plant that grows as a host of various trees and has been used as a medicinal plant in East Asia and Europe, including Korea. Especially, the mistletoe living in Europe is known to have excellent anticancer activity and is commercially available as a chemotherapeutic agent / adjuvant. In Korea, it is used as a medicament for preventing toothache, hypertension, abortion and back pain in Korea.

겨우살이의 생리활성과 관련하여서는, 대한민국 공개특허 제2002-0053430호는 겨우살이 추출물의 항염증 및 항산화 활성을 보고한 바 있으며, 대한민국 공개특허 제2002-0080658호는 상기생 추출물의 미백 효과를 개시한 바 있으며, 선행논문지(임산에너지 19(1), 49-60(2000))는 겨우살이 메탄올 추출물의 항균 활성을 개시한 바 있으며, 또다른 선행논문지(한국식품과학회지 41(5), 560-565(2009))는 겨우살이 유산균 발효 추출물의 면역증강 효과를 개시한 바 있다.With respect to the physiological activity of mistletoe, Korea Patent Publication No. 2002-0053430 has reported anti-inflammatory and antioxidant activity of mistletoe extract, Korean Patent Publication No. 2002-0080658 discloses a whitening effect of the above extract (1), 49-60 (2000)) have initiated the antimicrobial activity of the methanol extract of mistletoe, and other prior arts (Korean Food Science 41 (5), 560-565 ) Disclosed immunization enhancement effects of fermented extract of Mulberry Lactobacillus.

한편, 유산균은 탄수화물의 최소 단위인 포도당(C6H12O6)을 에너지원으로 하여 다량의 유기산(Lactic acid)과 천연 항생물질(Bacteriocin), 효소(Enzyme) 등을 생성하는 유익한 장내세균을 말한다. 유산균은 동물성 유산균과 식물성 유산균으로 분류되며, 우유 발효나 사람의 분변에서 동정 분리한 동물 유래의 유산균을 동물성 유산균이라고 통칭하며, 된장, 청국장 및 김치 등 식물 유래의 발효 과정에서 동정 분리된 유산균을 식물성 유산균으로 통칭한다. 식물성 유산균은 동물성 유산균에 비하여 온도나 pH에 대하여 안정하다는 특징이 있다. On the other hand, lactic acid bacteria are beneficial intestinal bacteria that produce a large amount of lactic acid, natural antibiotic (Bacteriocin), enzyme, etc. using glucose (C 6 H 12 O 6 ) which is the minimum unit of carbohydrate as an energy source. It says. Lactic acid bacteria are classified into animal lactic acid bacteria and vegetable lactic acid bacteria. Lactic acid bacteria derived from animals isolated from milk fermentation or human feces are collectively referred to as animal lactic acid bacteria. Lactic acid bacteria isolated and identified in plant fermentation processes such as doenjang, It is called lactic acid bacteria. Vegetable lactic acid bacteria are characterized by their stability against temperature and pH compared to animal lactic acid bacteria.

유산균의 대사 산물인 유기산은 장내의 환경을 산성화하여 부패를 유발하는 유해균의 증식을 억제하고, 천연 항생물질인 박테리오신은 병원성 미생물을 사멸시키는 효능이 있는 것으로 알려져 있다. 또한, 소장 기관의 상피세포를 자극하여 면역물질인 IgA의 분비를 촉진하여 병원성 바이러스와 결합하여 몸 밖으로 배출하며, 숙변을 제거하여 장내에 쌓여 있는 각종 독성 물질을 제거한다.Organic acid, which is a metabolic product of lactic acid bacteria, is known to inhibit the growth of harmful bacteria causing acidosis by intoxicating the environment of the intestines, and bacteriocin, a natural antibiotic, has an effect of killing pathogenic microorganisms. In addition, it stimulates the epithelial cells of the small intestine to promote the secretion of IgA, which is an immunological substance, and binds to pathogenic viruses and excretes them to the outside of the body, and removes various toxic substances accumulated in the intestines by removing succumbing.

생약이나 한방에서 사용하는 약재 등의 천연물에는 다양한 유효성분들이 포함되어 있으며, 대부분 플라보놀(flavonol) 골격에 당 구조가 결합되어 있는 형태로 존재한다. 천연물을 유산균이나 효모 등으로 발효시킨 경우에, 가수분해에 의하여 배당체의 당 구조가 분리되어 비배당체로 전환되며, 이러한 비배당체는 혈액 내로 보다 쉽게 흡수될 수 있다는 보고가 있다(동의생리병리학회지 22(3), 569~574(2008)).Natural products such as herbal medicines and herbal medicines contain a variety of active ingredients, most of which are present in a flavonol skeleton with a sugar structure attached to it. When the natural product is fermented with lactic acid bacteria or yeast, the sugar structure of the glycoside is separated by hydrolysis and converted into a non-glycoside, and such non-glycosides can be easily absorbed into the blood (see Journal of Physiology & Pathology 22 (3), 569-574 (2008)).

그러나, 현재까지 충분한 수준의 항산화 효과 및 미백 효과를 가지는 천연물 유래 물질이 보고된 바 없다. 따라서, 기존의 항산화/미백 효과를 가지는 천연물의 항산화 효과 및 미백 효과 등의 생리적 효능을 증가시켜 우수한 항산화/미백 효과를 가지는 천연물 소재의 개발이 요구된다.However, no substances derived from natural materials having a sufficient level of antioxidative and whitening effects to date have been reported. Therefore, it is required to develop a natural material having excellent antioxidative / whitening effect by increasing physiological effects such as antioxidative and whitening effects of natural products having existing antioxidative / whitening effect.

대한민국 특허공개공보 제2002-0053430호Korean Patent Publication No. 2002-0053430 대한민국 특허공개공보 제2002-0080658호Korean Patent Publication No. 2002-0080658 대한민국 특허등록공보 제10-1404309호Korean Patent Registration No. 10-1404309 대한민국 특허공개공보 제2014-0098708호Korean Patent Laid-Open Publication No. 2014-0098708 대한민국 특허등록공보 제10-0642526호Korean Patent Registration No. 10-0642526 대한민국 특허등록공보 제10-1041403호Korean Patent Registration No. 10-1041403

임산에너지 19(1), 49-60(2000)Limsan Energy 19 (1), 49-60 (2000) 한국식품과학회지 41(5), 560-565(2009)Korean Journal of Food Science and Technology 41 (5), 560-565 (2009)

본 발명자들은 피부 미백 활성이 우수한 천연소재에 대하여 연구하던 중, 겨우살이 추출물, 특히, 한국산 겨우살이 추출물을 유산균, 특히, 특허받은 식물성 유산균인 페디오코쿠스 아시딜락티시 J9으로 발효시키는 경우에, 발효되지 않은 겨우살이 추출물보다 항산화 효과 및 미백 효과가 현저히 증가된다는 것을 확인함으로써, 겨우살이의 발효된 추출물이 항산화 또는 미백용 화장료 조성물에 유용하게 사용될 수 있다는 것을 발견하였다.The inventors of the present invention have conducted research on natural materials having excellent skin whitening activity and found that when fermenting mistletoe extract, especially Korean mistletoe extract, with lactic acid bacteria, especially patented vegetable lactic acid bacterium Pediococcus acydyllactitis J9, It has been found that the fermented extract of mistletoe can be usefully used in antioxidative or whitening cosmetic compositions by confirming that the antioxidative effect and the whitening effect are significantly increased as compared with the mistletoe extract.

따라서, 본 발명은 겨우살이의 발효된 추출물을 포함하는 항산화 또는 미백용 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide an antioxidant or whitening cosmetic composition containing fermented extract of mistletoe.

본 발명에서는 겨우살이의 발효된 추출물을 포함하는 항산화 또는 미백용 화장료 조성물이 제공된다. 일 구현예에서, 상기 겨우살이는 한국산 겨우살이(Viscum album L. var. coloratum)일 수 있다.The present invention provides an antioxidant or whitening cosmetic composition comprising fermented extract of mistletoe. In one embodiment, the mistletoe may be a Korean mistletoe ( Viscum album L. var. Coloratum).

일 구현예에서, 상기 발효는 식물성 유산균에 의한 발효일 수 있으며, 페디오코쿠스 아시딜락티시 J9 균주에 의한 발효일 수 있으며, 12 ∼ 22 시간 및 25 ∼ 40 ℃ 온도 조건에서 수행될 수 있다.In one embodiment, the fermentation may be fermentation by vegetable lactic acid bacteria, fermentation by strain Pediococcus asidyl lactylase J9, and may be carried out at a temperature of 12 to 22 hours and at a temperature of 25 to 40 ° C.

본 발명의 일 태양에 따라, 상기 항산화 또는 미백용 화장료 조성물을 포함하는 화장품이 제공된다. 일 구현예에서, 상기 화장품은 스킨, 미스트, 마스크팩 또는 영양크림일 수 있다.According to one aspect of the present invention, there is provided a cosmetic comprising the cosmetic composition for antioxidant or whitening. In one embodiment, the cosmetic may be a skin, mist, mask pack, or nutritional cream.

본 발명에 의해, 겨우살이 추출물, 특히, 한국산 겨우살이 추출물을 유산균, 특히, 식물성 유산균으로 발효시키는 경우에, 발효되지 않은 겨우살이 추출물보다 증가된 항산화 효능 및 SOD 유사 활성을 나타냈으며, 총 플라보노이드 함량이 증가된다는 것이 밝혀졌다. 또한, 겨우살이 발효 추출물의 티로시나제 억제 활성(미백 효능 평가 지표)이 효소 수준에서 증가되었으며, 세포 수준에서도 티로시나제 억제 활성이 발효 추출물의 농도에 비례하여 나타남으로써, 겨우살이 발효 추출물의 티로시나제 억제 활성이 세포 수준에서도 작동되는 우수한 효과임이 밝혀졌다.According to the present invention, when the mistletoe extract, especially the Korean mistletoe extract, is fermented with lactic acid bacteria, especially vegetable lactic acid bacteria, the antioxidative effect and the SOD-like activity are increased as compared with the unfermented mistletoe extract and the total flavonoid content is increased It turned out. In addition, the tyrosinase inhibitory activity (whitening efficacy index) of the mistletoe fermented extract was increased at the enzyme level, and the tyrosinase inhibitory activity at the cellular level was proportional to the concentration of the fermented extract, so that the tyrosinase inhibitory activity of the mistletoe extract It was found to be a good working effect.

따라서, 본 발명의 겨우살이의 발효된 추출물을 포함하는 조성물은 항산화 또는 미백용 화장료 조성물로서 유용하게 사용될 수 있다.Accordingly, the composition containing the fermented extract of mistletoe of the present invention can be usefully used as a cosmetic composition for antioxidant or whitening.

도 1은 페디오코쿠스 아시딜락티시 J9 균주의 배양 시간에 따른 성장 곡선이다.
도 2는 페디오코쿠스 아시딜락티시 J9 균주의 배양 온도에 따른 배양액의 O.D660nm 값을 나타내는 그래프이다.
도 3은 발효 시간에 따른 겨우살이 추출물의 이화학적 변화를 나타낸 그래프이다.
도 4는 겨우살이의 미발효 추출물과 발효 추출물의 DPPH 라디칼 소거능 측정 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 겨우살이의 미발효 추출물과 발효 추출물의 SOD 유사 활성 측정 결과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 총 폴리페놀 함량 측정 시험에서 표준물질로 사용된 갈산의 검량선이다.
도 7은 총 플라보노이드 함량 측정 시험에서 표준물질로 사용된 퀘르세틴의 검량선이다.
도 8은 겨우살이의 미발효 추출물과 발효 추출물의 티로시나제 효소 활성 억제능을 나타낸 그래프이다.
도 9는 겨우살이의 미발효 추출물과 발효 추출물의 세포를 이용한 티로시나제 효소 활성 억제능을 나타낸 그래프이다. Fig. 1 is a growth curve of the strain Pediococcus acidilactii J9 according to the incubation time.
FIG. 2 is a graph showing the OD 660 nm value of the culture solution according to the culture temperature of Pediococcus acyldactylase J9 strain. FIG.
FIG. 3 is a graph showing physicochemical changes of mistletoe extract according to fermentation time. FIG.
4 is a graph showing the measurement results of DPPH radical scavenging ability of the fermented extract and the non-fermented extract of mistletoe.
5 is a graph showing the results of measurement of SOD-like activity of the non-fermented extract and fermented extract of mistletoe.
6 is a calibration curve of gallic acid used as a standard substance in the total polyphenol content measurement test.
Figure 7 is a calibration curve of quercetin used as a standard in the total flavonoid content determination test.
8 is a graph showing inhibitory activity of tyrosinase enzyme activity of the fermented extract and the non-fermented extract of mistletoe.
9 is a graph showing inhibitory activity of tyrosinase enzyme activity using cells of non-fermented extract and fermented extract of mistletoe.

본 발명은 겨우살이의 발효된 추출물을 포함하는 항산화 또는 미백용 화장료 조성물을 제공한다.The present invention provides an antioxidant or whitening cosmetic composition comprising fermented extract of mistletoe.

본 발명의 일 구현예에서, 상기 겨우살이는 한국산 겨우살이(Viscum album L. var. coloratum)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 한국산 겨우살이에는 다양한 종류의 아미노산으로 구성된 염기성 단백 복합 물질들이 존재하며, 이 중 항암활성의 주된 성분인 렉틴이나, 올레아놀릭산(Oleanolic acid), 비스코톡신(Viscotoxin), 호모플라보야도리닌 B(Homoflavoyadorinin B), 비스쿰네오시드 Ⅲ(Viscumneoside Ⅲ) 등의 활성물질들이 함유되어 있는 것으로 알려져 있다.In one embodiment of the present invention, the mistletoe may be, but is not limited to, Korean mistletoe ( Viscum album L. var. Coloratum). There are basic protein complexes composed of various kinds of amino acids in Korean mistletoe. Among them, lectin, oleanolic acid, viscotoxin, homoflavoyadorinin B ), And Viscumneoside III (Viscumneoside III).

일 구현예에서, 상기 발효는 식물성 유산균에 의한 발효일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, 본 발명에서 수행되는 발효는 식물성 유산균인 페디오코쿠스 아시딜락티시 J9(Pediococcus acidilactici J9) 균주에 의해 수행될 수 있다. 페디오코쿠스 아시딜락티시 J9 균주는 대한민국 등록특허공보 제10-1296067호에 개시된 식물성 유산균 균주로서, 전통 청국장으로부터 내열성이 우수한 유산균으로 선발된 균주이다(한국미생물보존센터 수탁번호 KCCM-11320P).In one embodiment, the fermentation may be fermentation by plant lactic acid bacteria, but is not limited thereto. For example, the fermentation carried out in the present invention can be carried out using the plant lactic acid bacteria Pediococcus J9 ( Pediococcus acidilactici J9) strain. Pediococcus Acidyllacticus J9 strain is a plant lactic acid bacterium strain disclosed in Korean Patent Registration No. 10-1296067, which is selected as a lactic acid bacterium having excellent heat resistance from a conventional chungkukjang (Korean Microorganism Conservation Center Accession No. KCCM-11320P).

일 구현예에서, 상기 발효는 12 ∼ 22 시간, 바람직하게는 15 ∼ 20시간, 더욱 바람직하게는 17 시간 동안 수행될 수 있다. 상기 페디오코쿠스 아시딜락티시 J9 균주를 상기 시간 범위내에서 배양하는 경우에 높은 O.D660nm 값을 나타내므로, 발효에 의하여 항산화 또는 미백 효과를 바람직하게 상승시킬 수 있다(도 1 참조).In one embodiment, the fermentation may be carried out for 12 to 22 hours, preferably 15 to 20 hours, more preferably 17 hours. Since the Pediococcus acidyl lactylase J9 strain shows a high OD 660 nm value when cultured within the time range described above, the antioxidative or whitening effect can be preferably elevated by fermentation (see FIG. 1).

일 구현예에서, 상기 발효는 25 ∼ 40 ℃ 온도, 바람직하게는 30 ∼ 40 ℃, 더욱 바람직하게는 37 ℃ 온도 조건에서 수행될 수 있다. 상기 페디오코쿠스 아시딜락티시 J9 균주를 상기 온도 범위내에서 배양하는 경우에 높은 O.D660nm 값을 나타내므로, 발효에 의하여 항산화 또는 미백 효과를 바람직하게 상승시킬 수 있다(도 2 참조).In one embodiment, the fermentation may be carried out at a temperature of 25 to 40 DEG C, preferably 30 to 40 DEG C, more preferably 37 DEG C. Since the Pediococcus acidyl lactylase J9 strain exhibits a high OD 660 nm value when cultivated in the temperature range described above, the antioxidative or whitening effect can be preferably elevated by fermentation (see FIG. 2).

본 발명의 겨우살이의 발효된 추출물에 대하여 항산화 효능 측정 시험인 DPPH 라디칼 소거능, SOD 유사 활성, 총 폴리페놀 함량 및 총 플라보노이드 함량을 측정한 결과, 겨우살이의 발효 추출물이 미발효 추출물에 비하여 10% 이상의 항산화 효능 상승 효과를 나타냈으며(도 4 참조), 6%의 SOD 유사 활성 상승 효과를 나타냈으며(도 5 참조), 발효된 겨우살이 추출물에서 플라보노이드가 45% 증가된 함량(0.73 μg vs. 1.06 μg)으로 존재하는 것이 확인되었다(표 7 참조). 또한, 미백 효능 평가 지표인 티로시나제 억제 활성 측정 결과, 겨우살이 발효 추출물이 미발효 추출물보다 현저히 증가된 효능을 보였고(도 8 참조), 마우스 B16BL6 멜라노마 세포에서도 티로시나제 억제 활성이 발효 추출물의 농도에 비례하여 나타남으로써 티로시나제 억제 활성이 세포 수준에서도 작동되는 우수한 효과임이 확인되었다(도 9 참조).In the fermented extract of the present invention, the DPPH radical scavenging activity, the SOD-like activity, the total polyphenol content and the total flavonoid content of the fermented extract of the mistletoe were 10% or more of the antioxidant activity (See FIG. 5), and the content of flavonoid increased by 45% (0.73 μg vs. 1.06 μg) in the fermented mistletoe extract (see FIG. 5) (See Table 7). In addition, as a result of measuring the inhibitory activity of tyrosinase as an indicator of whitening efficacy, the efficacy of the fermented extract of Mistletoe was significantly higher than that of the nonfermented extract (see FIG. 8), and the inhibitory activity of tyrosinase in the mouse B16BL6 melanoma cells was proportional to the concentration of the fermented extract It was confirmed that the tyrosinase inhibitory activity was excellent at the cellular level (see FIG. 9).

또한, 본 발명은 상기 항산화 또는 미백용 화장료 조성물을 포함하는 화장품을 제공한다.The present invention also provides a cosmetic comprising the cosmetic composition for antioxidant or whitening.

본 발명의 항산화 또는 미백용 화장료 조성물은 기초 화장품, 메이크업 화장품 및 바디케어 화장품에 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The antioxidant or whitening cosmetic composition of the present invention can be used in basic cosmetics, makeup cosmetics, and body care cosmetics, but is not limited thereto.

기초 화장품이란, 세안료·메이크업 리무버·화장수·유액·미용액·페이스 크림·팩·아이케어 및 그 외 얼굴 스킨 케어용 화장품을 가리킨다. 예를 들면, 고형 비누, 세안 폼, 및 세안 파우더 등의 세안료; 클렌징 폼, 클렌징 크림, 클렌징 밀크, 클렌징 로션, 클렌징 젤, 클렌징 오일 및 클렌징 마스크 등의 메이크업 리무버; 리포솜 화장수, 유연 화장수, 수렴 화장수, 세정용 화장수 및 다층식 화장수 등의 화장수; 에몰리언트 로션, 모이스처 로션, 밀키 로션, 너리싱 로션, 너리싱 밀크, 스킨 모이스처, 모이스처 에멀젼, 마사지 로션 및 얼굴용 각질 스무저 등의 유액; 리포솜 화장수, 보습 미용액, 미백 미용액, 및 자외선 방지 미용액 등의 미용액; 에몰리언트 크림, 영양 크림, 모이스처 크림, 나이트 크림, 마사지 크림, 클렌징 크림, 메이크업 크림, 베이스 크림, 셰이빙 크림, 및 얼굴용 각질연화 크림 등의 크림; 필오프팩, 분말팩, 워싱팩, 오일팩, 및 클렌징 마스크 등의 팩; 아이세럼, 아이젤, 아이크림 등의 아이케어; 얼굴용 UV 프로텍트 에멀전, 선프로텍트, 선프로텍터, UV케어밀크, 선스크린, 선스크린 크림 및 선탠 크림 등의 UV 케어, 모이스처 젤 등의 젤, 페이스 필링, 페이스 슬리밍제 등의 그 외의 기초 화장품을 들 수 있다.Basic cosmetics refers to cosmetics for three pigments, makeup remover, lotion, lotion, serum, face cream, pack, eye care, and other facial skin care products. For example, three pigments such as solid soap, cleansing foam, and cleansing powder; Make-up removers such as cleansing foams, cleansing creams, cleansing milks, cleansing lotions, cleansing gels, cleansing oils and cleansing masks; Liposome lotion, flexible lotion, convergent lotion, lotion such as washing lotion and multi-layer lotion; Emulsions such as emollient lotion, moisturizing lotion, milky lotion, nourishing lotion, nourishing milk, skin moisturizer, moisturizing emulsion, massage lotion and facial scrubbers; Liposome lotion, moisturizing serum, whitening serum, and ultraviolet rays; Creams such as emollient creams, nutritional creams, moisturizing creams, night creams, massage creams, cleansing creams, makeup creams, bass creams, shaving creams and facial exfoliating creams; Packs such as peel off packs, powder packs, wash packs, oil packs, and cleansing masks; Eye care such as eye serum, eye gel, eye cream; Other basic cosmetics such as UV care for face, UV protection emulsion for sun protection, sun protection, UV care milk, sunscreen, sunscreen cream, sunscreen cream and sunscreen, gel for face gel, face peeling, face slimming agent .

메이크업 화장품으로서는, 메이크업 베이스, 베이스 크림, 컬러 컨트롤 베이스, UV 차단 베이스 등의 화장 기초; 파우더 컨실러 및 크림·리퀴드 컨실러 등의 컨실러; 파우더 파운데이션, UV 차단 파운데이션, 크림 파운데이션, UV 차단 크림 파운데이션 등의 파운데이션; 루스파우더, 프레스토파우더, 페이스컬러, 백분 등의 페이스파우더 등을 들 수 있다.Make-up cosmetics include makeup base such as makeup base, base cream, color control base, UV cut base; Concealers such as powder concealer and cream / liquid concealer; Foundations such as Powder Foundation, UV Block Foundation, Cream Foundation, UV Block Cream Foundation; Loose powder, presto powder, face color, face powder such as white powder, and the like.

바디케어 화장품으로서는, 예를 들면, 바디로션, 바디오일 및 바디미스트 등의 바디로션; 바디크림, 바디밀크, 바디젤 및 바디무스 등의 바디크림; 보습용 립 크림, UV케어용 립 크림 및 컬러 립크림 등의 립크림; 핸드크림 및 핸드젤 등의 핸드크림; 바디용의 UV프로텍트에멀전, 선프로텍트, 선프로텍터, UV케어밀크, 선스크린, 선스크린 크림 및 선탠크림 등의 UV케어; 제모크림, 제모무스, 탈모왁스, 잔털 탈색제 및 체모용 셰이빙크림 등의 잔털처리; 풋마사지제, 풋슬리밍제, 풋필링제, 발뒤꿈치 등의 얼굴 이외의 각질제거제, 및 에몰리언트제 등의 풋케어; 데오도란트 로션, 데오도란트 파우더, 데오도란트 스프레이, 데오도란트 스틱 등의 제한방취제; 제충 스프레이 등의 인섹트 리펠러를 들 수 있다.Body care cosmetics include, for example, body lotions such as body lotions, body oils and body mists; Body creams such as body creams, body milks, bar diesels and body mousses; Lip creams such as moisturizing lip creams, UV care lip creams and color lip creams; Hand cream such as hand cream and hand gel; UV care for body UV protection emulsion, sun protection, sun protection, UV care milk, sunscreen, sunscreen cream and suntan cream; Hair follicles such as hair removal cream, hair removal mousse, hair loss wax, flea bleaching agent and hair shaving cream; Foot massagers, foot slimming agents, foot peeling agents, exfoliants other than facials such as heels, and foot care such as emollients; Deodorant lotion, deodorant powder, deodorant spray, deodorant stick, etc .; An insect repeller such as an insect spray, and the like.

일 구현예에서, 상기 화장품은 바람직하게는 스킨, 미스트, 마스크팩 또는 영양크림일 수 있다.In one embodiment, the cosmetic product is preferably a skin, mist, mask pack or nutritional cream.

이하, 본 발명을 실시예 및 시험예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나, 하기 실시예 및 시험예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이에 제한되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples and test examples. However, the following examples and test examples are provided for illustrating the present invention, and the scope of the present invention is not limited thereto.

실시예Example . 겨우살이 발효 추출물의 제조. Production of fermented extract of mistletoe

(1) 식물성 유산균의 최적 배양 시간 결정 시험(1) Determination of optimal culture time of plant lactic acid bacteria

겨우살이 추출물의 발효를 위한 종균(Seed)을 배양하기 위하여, 페디오코쿠스 아시딜락티시 J9(Pediococcus acidilactici J9) 균주를 배양하면서 정해진 시간에 탁도를 측정하여 성장곡선(growth curve)을 얻었다. 분광광도계(Spectrometer, BioTek instruments Inc, USA)를 이용하여 시간대별로 O.D660nm(Optical Density) 값을 측정하여 그 결과를 하기 표 1 및 도 1에 나타내었다.In order to cultivate Seed for the fermentation of mistletoe extract, Pediococcus J9 ( Pediococcus acidilactici J9) was cultured and turbidity was measured at a predetermined time to obtain a growth curve. The OD 660 nm (Optical Density) value was measured by a spectrophotometer (Spectrometer, BioTek instruments Inc, USA) for each time period. The results are shown in Table 1 and FIG.

시간 (hour)Hour (hour) O.DO.D. ( ( 660 nm660 nm )) 00 0.10.1 22 0.20.2 44 0.30.3 66 0.50.5 88 0.60.6 1010 1.31.3 1414 2.42.4 1616 3.03.0 1818 2.82.8 2020 2.52.5 2222 2.42.4 2424 2.22.2

표 1 및 도 1에 나타난 바와 같이, 0 ∼ 6시간은 유도기(Lag Phase), 6 ∼ 12시간은 대수기(Exponential Phase), 12 ∼ 16시간은 사멸기(ine Phase), 12 ∼ 20시간은 정지기(Stationary Phase), 20 ∼ 48시간은 용해기(Lysis Phase)로 나타났다. 상기 성장곡선으로부터 배양 조건으로서 17시간이 최적임을 결정하였다.As shown in Table 1 and FIG. 1, the lag phase is 0 to 6 hours, the exponential phase is 6 to 12 hours, the ine phase is 12 to 16 hours, the ine phase is 12 to 20 hours, Stationary phase, and 20 to 48 hours was a lysis phase. From the growth curve, it was determined that 17 hours as the culture condition was optimal.

(2) 식물성 유산균의 최적 (2) Optimization of vegetable lactic acid bacteria 배양 온도 결정Culture temperature determination 시험 exam

페디오코쿠스 아시딜락티시 J9 균주를 다양한 온도 조건에서 배양하면서 17시간 배양한 후 O.D660nm 값을 측정하여 그 결과를 하기 표 2 및 도 2에 나타내었다.The Pediococcus asidyl lactylcysteine J9 strain was cultured at various temperature conditions for 17 hours, and OD 660 nm was measured. The results are shown in Table 2 and FIG. 2, respectively.

온도 ( ℃ )Temperature (℃) 2020 2525 3737 4545 O.DO.D. ( ( 660 nm660 nm )) 0.10.1 2.62.6 3.43.4 2.12.1

표 2 및 도 2에 나타난 바와 같이, 37 ℃가 최적의 배양 온도임을 확인하였다.As shown in Table 2 and FIG. 2, it was confirmed that the optimal incubation temperature was 37 ° C.

(3) 겨우살이 추출물의 유산균 접종에 의한 이화학적 변화 평가(3) Evaluation of physicochemical changes of mistletoe extract by inoculation with lactic acid bacteria

유산균의 접종 농도를 1%와 2%로 달리하여 접종한 결과 유의성있는 차이가 없음을 확인하여 1%를 접종농도로 정하였다.The inoculation concentration of 1% and 2% of the lactic acid bacteria inoculated was determined to be no significant difference and the inoculum concentration was 1%.

(4) 겨우살이 추출물의 발효 조건 결정(4) Determination of Fermentation Conditions of Mistletoe Extract

겨우살이 추출물에 유산균을 접종하여 발효시키면서 정해진 시간(0, 1, 2 및 3일)에 발효액 일정량을 채취하였다. 채취한 시료를 생리식염수에 10진 희석법으로 희석하여 BCP 첨가 평판측정용 배지(BCP PLATE COUNT AGAR, Japan)에서 37 ℃, 24시간 배양하였으며, 이 때 생성된 콜로니(colony)를 계수하여 시료 g당 콜로니 형성 단위(lony forming unit. CFU/g)로 나타내었다. 또한, 발효 시간에 따른 pH 변화를 pH 미터(pH meter, Eutech pH 510 Instruments, Singapore)를 사용하여 측정하였다. 발효 시간에 따른 콜로니 형성 단위 및 pH 변화를 하기 표 3 및 도 3에 나타내었다.A certain amount of fermentation broth was collected at predetermined times (0, 1, 2 and 3 days) while inoculating the mistletoe extract with lactic acid bacteria. The collected samples were diluted in physiological saline by decanteration and cultured at 37 ° C for 24 hours in a BCP-supplemented plate assay medium (BCP PLATE COUNT AGAR, Japan). The colony produced was counted and the ratio Expressed in terms of colony forming units (lony forming unit. CFU / g). In addition, the pH change with the fermentation time was measured using a pH meter (Eutech pH 510 Instruments, Singapore). The changes in colony forming units and pH with fermentation time are shown in Table 3 and FIG.

발효 시간 (일)Fermentation time (days) 00 1One 22 33 콜로니Colony 형성 단위 Forming unit
(Log (Log CFUCFU /g)/ g) 8.178.17 7.567.56 6.546.54 6.236.23 pHpH 6.56.5 3.93.9 3.93.9 3.93.9 BrixBrix 0.80.8 0.80.8 0.80.8 0.80.8

표 3 및 도 3에 나타난 바와 같이, 겨우살이 추출물의 발효는 37 ℃에서 2일간 배양하여 사용하는 것이 가장 효과적임을 알 수 있다.As shown in Table 3 and FIG. 3, it can be seen that fermentation of mistletoe extract is most effective when cultured at 37 DEG C for 2 days.

(5) 발효된 겨우살이 추출물의 제조(5) Preparation of Fermented Mistletoe Extract

최적화된 조건인 37 ℃에서 2일 동안 발효시킨 겨우살이 발효 추출물을 효능 시험에 사용하기 위하여 동결 건조하여 보관하였다.Fermented extracts of Mistletoe were fermented at 37 ℃ for 2 days.

시험예Test Example 1. 겨우살이 발효 추출물의 항산화 효과 평가 1. Evaluation of Antioxidant Effect of Fermented Extracts of Mistletoe

제조된 겨우살이 발효 추출물의, 유산균 발효에 의한 항산화 효능의 증가 여부를 확인하기 위해서 DPPH 라디칼 소거능, SOD 유사 활성, 총 폴리페놀 함량 및 총 플라보노이드 함량 등을 측정하였다. DPPH radical scavenging activity, SOD - like activity, total polyphenol content and total flavonoid content were measured in order to confirm the increase of antioxidant activity of the fermented extract of Mistletoe by lactic acid bacteria fermentation.

(1) (One) DPPHDPPH 라디칼  Radical 소거능Scatters 측정 Measure

겨우살이 발효 추출물의 유산균 발효를 통한 생리활성 효능 증대를 확인하기 위하여, 겨우살이의 미발효 추출물과 발효 추출물에 대하여 항산화능 측정의 대표적 방법인 DPPH 라디칼 소거능 측정을 하기와 같이 수행하였다.The DPPH radical scavenging ability, which is a representative method for measuring the antioxidant ability, was performed as follows in order to confirm the increase of the physiological activity of fermented extract of Mistletoe by lactic acid bacteria fermentation.

DPPH(2,2-Diphenyl-1-picryl-hydrazyl) 시약을 에탄올에 용해시킨 후, 2시간동안 교반하여 0.15 mM DPPH 용액을 제조하였다. 겨우살이의 미발효 추출물과 발효 추출물을 5000, 2500, 1000, 500, 250, 100 ppm 농도로 각각 제조하였다. 그 후, 0.15 mM DPPH 용액 2 mL와 겨우살이 미발효 추출물 시료, 겨우살이 발효 추출물 시료 1 mL를 각각 시험관에 넣고 암실에서 30분 동안 교반시켰다. UV 분광광도계를 이용하여 532 nm에서 흡광도를 측정하였다. DPPH 라디칼 소거능은 아스코르브산을 대조물질로 하여 하기 수학식 1에 의해 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 4 및 도 4에 나타내었다.DPPH (2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl) reagent was dissolved in ethanol and stirred for 2 hours to prepare a 0.15 mM DPPH solution. Fermented and fermented extracts of mistletoe were prepared at concentrations of 5000, 2500, 1000, 500, 250 and 100 ppm, respectively. Then, 2 mL of 0.15 mM DPPH solution, 1 mL of non-fermented extract and 1 mL of fermented extract of mistletoe were put into a test tube and stirred in a dark room for 30 minutes. Absorbance was measured at 532 nm using a UV spectrophotometer. The DPPH radical scavenging activity was calculated by the following equation 1 using ascorbic acid as a control substance, and the results are shown in Table 4 and FIG.

[수학식 1][Equation 1]

라디칼 소거 활성(%) = [1-시료 흡광도(532nm)/대조물질 흡광도(532nm)]×100Radical scavenging activity (%) = [1-sample absorbance (532 nm) / control substance absorbance (532 nm)] × 100

농도 (ppm)Concentration (ppm)
DPPHDPPH 라디칼 소거 활성 ( Radical scavenging activity %% )) 미발효 추출물Non-fermented extract 발효 추출물Fermented extract 100100 5.515.51 8.448.44 250250 11.5711.57 11.9711.97 500500 22.6322.63 24.4924.49 10001000 45.1345.13 42.0042.00 25002500 82.9882.98 86.3186.31 50005000 81.9081.90 92.3792.37

표 4 및 도 4에 나타난 바와 같이, 5000 ppm을 기준으로 81.9%의 DPPH 라디칼 소거능을 나타내는 미발효 추출물에 비하여, 겨우살이 발효 추출물은 92.4%의 DPPH 라디칼 소거능을 나타내어 10% 이상의 상승 효과를 나타냈다.As shown in Table 4 and FIG. 4, the fermented extract of Mistletoe showed 92.4% DPPH radical scavenging ability, showing a synergistic effect of 10% or more, compared with the nonfermented extract showing 81.9% of DPPH radical scavenging ability based on 5000 ppm.

(2) SOD 유사 활성 측정(2) Measurement of SOD-like activity

항산화 효과를 측정하는 방법으로 SOD(Superoxide dismutase) 유사 활성 측정 시험을 하기와 같이 수행하였다.SOD (Superoxide dismutase) -like activity measurement test was performed as follows to measure the antioxidant effect.

삼각 플라스크에 50 mM 트리즈마 베이스(trizma base)와 10 mM EDTA를 혼합한 후 교반하여 pH 8.5의 트리스-HCl(Tris-HCl) 완충용액을 제조하였다. 7.2 mM 피로갈롤(pyrogallol) 용액을 제조하였다. 그 후, 겨우살이의 미발효 추출물과 발효 추출물을 5000, 2500, 1000, 500, 250, 100 ppm 농도로 각각 제조한 다음, 시험관에 미발효 추출물과 발효 추출물 시료를 각각 1 mL씩 첨가하고, 트리스-HCl 완충용액 1.5 mL 및 7.2 mM 피로갈롤 용액 0.1 mL를 각각 혼합하여 암실에서 10분 동안 교반시킨 후, 1N HCl을 넣어 반응을 정지시켰다. UV 분광광도계를 이용하여 420 nm에서 흡광도를 측정하였다. SOD 유사 활성은 아스코르브산을 대조물질로 하여 하기 수학식 2에 의해 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 5 및 도 5에 나타내었다.A 50 mM trizma base and 10 mM EDTA were mixed in an Erlenmeyer flask and stirred to prepare a Tris-HCl buffer solution (pH 8.5). 7.2 mM pyrogallol solution was prepared. Thereafter, the non-fermented extract and the fermented extract of the mistletoe were respectively prepared at the concentrations of 5000, 2500, 1000, 500, 250 and 100 ppm. Then, 1 mL of each of the unfermented extract and the fermented extract was added to the test tube, 1.5 mL of HCl buffer and 0.1 mL of 7.2 mM pyrogallol solution were mixed, stirred in a dark room for 10 minutes, and then 1N HCl was added to stop the reaction. Absorbance was measured at 420 nm using a UV spectrophotometer. The SOD-like activity was calculated by the following equation (2) using ascorbic acid as a control substance, and the results are shown in Table 5 and FIG.

[수학식 2]&Quot; (2) "

SOD 유사 활성(%) = [1-시료 흡광도(420nm)/대조물질 흡광도(420nm)] × 100SOD-like activity (%) = [1-sample absorbance (420 nm) / control substance absorbance (420 nm)] × 100

농도 (ppm)Concentration (ppm)
SOD 유사 활성 (SOD-like activity ( %% )) 미발효 추출물Non-fermented extract 발효 추출물Fermented extract 100100 -0.21-0.21 -7.63-7.63 250250 -2.04-2.04 -2.01-2.01 500500 0.710.71 2.522.52 10001000 8.498.49 10.3510.35 25002500 15.5615.56 21.2721.27 50005000 25.2525.25 30.9630.96

표 5 및 도 5에 나타난 바와 같이, 겨우살이의 미발효 추출물과 유산균 발효 추출물을 비교하였을 때, 5000 ppm 농도에서 25%의 SOD 유사 활성을 나타내는 미발효 추출물에 비하여, 겨우살이 발효 추출물은 31%의 SOD 유사 활성을 나타내어 6%의 상승 효과를 나타냈다.As shown in Table 5 and FIG. 5, when compared with the non-fermented extract showing 25% SOD-like activity at a concentration of 5000 ppm, the fermented extract of mistletoe showed 31% SOD Showed similar activity and exhibited a synergistic effect of 6%.

(3) 총 폴리페놀 함량 측정(3) Total polyphenol content measurement

겨우살이 추출물의 유산균 발효를 통한 유효성분의 함량 증가를 확인하기 위하여 겨우살이의 미발효 추출물과 유산균 발효 추출물의 총 폴리페놀 함량을 하기와 같이 측정하였다. The total polyphenol contents of non - fermented extract and lactic acid fermentation extract of mistletoe were measured as follows in order to confirm the increase of active ingredient content of mistletoe extract through fermentation with lactic acid bacteria.

50% 폴린-시오칼토 페놀 시약(Folin ciocalteu's phenol reagent)과 10% Na2CO3용액을 각각 제조한 후, 표준물질로 사용된 갈산(gallic acid)을 500, 250, 100, 50, 25, 10 ppm 농도로 각각 제조하였다. 그 후, 미발효 추출물과 유산균 발효 추출물 시료를 1000 ppm 농도로 각각 제조하였다.Folin-ciocalteu's phenol reagent and 10% Na 2 CO 3 solution were prepared, and the gallic acid used as the reference material was dissolved in 500, 250, 100, 50, 25, 10 respectively. Thereafter, samples of non-fermented extract and fermented lactic acid bacteria were each prepared at a concentration of 1000 ppm.

시험관에 겨우살이의 미발효 추출물과 유산균 발효 추출물 시료 0.8 mL를 각각 첨가한 후, 증류수 1.92 mL 와 50% 폴린 용액 0.2 mL를 각각 혼합하여 3분간 교반하였다. 그 후, 10% Na2CO3 용액 0.4 mL를 첨가하고 암실에서 1시간 동안 교반한 다음, UV 분광광도계를 이용하여 700 nm에서 흡광도를 측정하였다. 얻어진 검량선을 도 6에 나타냈으며, 이로부터 총 폴리페놀 함량을 계산하여 하기 표 6에 나타내었다.0.8 mL of distilled water and 0.2 mL of 50% folin solution were added to each test tube, and the mixture was stirred for 3 minutes. Thereafter, 10% Na 2 CO 3 0.4 mL of the solution was added and stirred for 1 hour in a dark room, and the absorbance at 700 nm was measured using a UV spectrophotometer. The obtained calibration curve is shown in FIG. 6, and the total polyphenol content thereof is calculated and shown in Table 6 below.

흡광도Absorbance 평균값medium 계산식 대입Assigning a calculation formula 함량(content( μgμg /mg)/ mg) 일반Normal 0.6990.699 0.750.75 0.7050.705 0.7180.718 38.69938.699 38.69938.699 발효물Fermentation product 0.720.72 0.7250.725 0.7140.714 0.7190.719 38.79038.790 38.79038.790

표 6에 나타난 바와 같이, 1000 ppm 농도에서 겨우살이의 미발효 추출물은 38.69 μg, 유산균 발효 추출물은 38.79 μg으로 총 폴리페놀의 함량에는 변화가 없음을 확인하였다.As shown in Table 6, at the concentration of 1000 ppm, the total amount of polyphenols was not changed, with 38.69 μg of non-fermented extract and 38.79 μg of lactic acid fermented extract of mistletoe.

(4) 총 플라보노이드 함량 측정(4) Total flavonoid content measurement

겨우살이의 유산균 발효를 통한 유효성분의 함량 증가를 확인하기 위하여 겨우살이의 미발효 추출물과 유산균 발효 추출물의 총 플라보노이드 함량을 측정하였다.The total flavonoid contents of the non - fermented extract and fermented extract of lactic acid bacteria were measured in order to confirm the increase of the content of active ingredient through the fermentation of lactic acid bacteria of mistletoe.

10% 질산알루미늄(Aluminum nitrate)과 1 M 아세트산칼륨(potassium acetate) 수용액을 각각 제조하였다. 검량선 작성을 위한 표준 물질로 퀘르세틴(quercetin)을 500, 250, 100, 50, 25, 10 ppm 농도로 각각 제조하였다. 그리고 겨우살이의 미발효 추출물과 유산균 발효 추출물 시료를 1000 ppm 농도로 제조하였다.10% aluminum nitrate and 1 M aqueous potassium acetate solution were prepared. Quercetin was prepared at 500, 250, 100, 50, 25, and 10 ppm concentrations as a reference material for the calibration curve. The extracts of non - fermented and fermented lactic acid bacteria were prepared at concentrations of 1000 ppm.

시험관에 10% 질산알루미늄 50 ㎕와 1 M 아세트산칼륨 수용액 50 ㎕, 80% 에탄올 2.15 mL를 각각 첨가하고 겨우살이 미발효 추출물과 유산균 발효 추출물 시료 250 ㎕ 각각 혼합하여 암실에서 40분간 교반하였다. UV 분광광도계를 이용하여 415 nm에서 흡광도를 측정하였다. 얻어진 검량선을 도 7에 나타냈으며, 이로부터 총 플라보노이드 함량을 계산하여 하기 표 7에 나타내었다.50 μl of 10% aluminum nitrate, 50 μl of 1 M potassium acetate aqueous solution and 2.15 ml of 80% ethanol were added to the test tube, and 250 μl of each of the samples of the non-fermented extract and the lactic acid fermented extract was mixed and stirred in the dark for 40 minutes. Absorbance was measured at 415 nm using a UV spectrophotometer. The obtained calibration curve is shown in FIG. 7, and the total flavonoid content thereof is calculated and shown in Table 7 below.

흡광도Absorbance 평균값medium 계산식 대입Assigning a calculation formula 함량(content( μgμg /mg)/ mg) 미발효Non fermentation 0.0220.022 0.0230.023 0.0250.025 0.0230.023 0.730.73 0.730.73 발효Fermentation 0.0290.029 0.0280.028 0.0310.031 0.0290.029 1.061.06 1.061.06

표 7에 나타난 바와 같이, 겨우살이의 미발효 추출물은 총 플라보노이드 함량이 0.73 μg, 유산균 발효 추출물은 총 플라보노이드 함량이 1.06 μg으로, 발효된 겨우살이 추출물에서 플라보노이드가 45% 증가된 함량(0.73 μg vs. 1.06 μg)으로 존재하는 것을 확인하였다.As shown in Table 7, the total flavonoid content of the fermented extract of Mistletoe was 0.73 μg, the total flavonoid content of the lactic acid fermented extract was 1.06 μg, and the content of flavonoid increased by 45% in fermented Mistletoe extract (0.73 μg vs. 1.06 mu g).

시험예Test Example 2. 겨우살이 발효 추출물의 효소를 이용한 미백 효과 평가 2. Evaluation of whitening effect of fermented extract of Mistletoe with enzyme

겨우살이 추출물을 식물성 유산균인 페디오코쿠스 아시딜락티시 J9로 발효시키면 추출물의 미백 효능이 증가되는지 확인하기 위하여, 대표적인 미백효능 평가 시험인 티로시나제(tyrosinase) 효소 활성 억제능을 하기와 같은 방법으로 측정하였다.In order to confirm that the extract of Mulberry is fermented with Pediococcus acydyl lactylase J9, which is a vegetable lactic acid bacterium, the inhibitory activity of tyrosinase enzyme activity, which is a representative whitening efficacy evaluation test, was measured by the following method.

0.1 M 인산염 완충액(pH 6.8) 0.2 mL와 5 mM L-DOPA(L-3,4-dihydroxy-L-phenylalanine) 용액 0.2 mL를 혼합한 후, 겨우살이 미발효 추출물과 유산균 발효 추출물 시료 0.5 mL를 각각 첨가하였다. 그 후, 티로시나제(250 U/mL) 0.1 mL를 첨가하여 35 ℃에서 2분간 반응시킨 다음, 475 nm에서 ELISA 리더(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA reader)로 흡광도를 측정하였다. 티로시나제 억제능은 하기 수학식 3에 의해 계산하였으며, 그 결과를 표 8 및 도 8에 나타내었다.0.2 mL of 0.1M phosphate buffer solution (pH 6.8) and 0.2 mL of 5 mM L-DOPA (L-3,4-dihydroxy-L-phenylalanine) solution were mixed and then 0.5 mL of the fermented extract of Lactobacillus fermentosa and the non- . Subsequently, 0.1 mL of tyrosinase (250 U / mL) was added, reacted at 35 ° C for 2 minutes, and the absorbance was measured at 475 nm by an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA reader). The inhibition of tyrosinase was calculated by the following equation (3), and the results are shown in Table 8 and FIG.

[수학식 3]&Quot; (3) "

티로시나제 억제능(%) = {1-(시료 흡광도/대조물질 흡광도)} × 100Tyrosinase inhibition (%) = {1- (sample absorbance / control substance absorbance)} x 100

반응시간 (분)Reaction time (min) 22 농도 (mg/mL)Concentration (mg / mL) 1One 2.52.5 55 1010 억제능Inhibition ( ( %% )) 미발효 추출물 Non-fermented extract -- -- -- 12.212.2 발효 추출물Fermented extract 43.843.8 100100 100100 100100

표 8 및 도 8에 나타난 바와 같이, 겨우살이의 발효 추출물이 미발효 추출물보다 미백 효과 지표인 티로시나제 억제 활성이 현저히 증가된 것을 확인하였다.As shown in Table 8 and FIG. 8, it was confirmed that the ferulic extract of mistletoe significantly increased the inhibitory activity of tyrosinase, which is an indicator of whitening effect, compared to the non-fermented extract.

시험예Test Example 3. 겨우살이 발효 추출물의 마우스 세포를 이용한 미백 효과 평가 3. Evaluation of whitening effect of mouse fermented extract of mouse with mouse cells

겨우살이 추출물을 식물성 유산균인 페디오코쿠스 아시딜락티시 J9로 발효시키면 추출물의 미백 효능이 증가되는지 확인하기 위하여, 하기와 같이 세포 시험을 통해 티로시나제 억제능을 측정하였다.In order to confirm that the extract of Mulberry is fermented with Pediococcus acedilactactii J9, which is a vegetable lactic acid bacterium, the whitening effect of the extract is increased, the tyrosinase inhibitory activity was measured by the cell test as described below.

(1) 세포 배양(1) Cell culture

마우스 B16BL6 멜라노마(mouse B16BL6 melanoma) 세포주는 한국 세포주은행에서 분양받아 사용하였다. B16BL6 세포를 10% 우태아혈청(fetal bovine serum, FBS)과 1% 항생제가 첨가된 배양 배지(Dulbecco’s modified Eagle’s medium, DMEM)에서 37 ℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다.Mouse B16BL6 melanoma (mouse B16BL6 melanoma) cell line was purchased from Korean cell line bank. B16BL6 cells were cultured in Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) and 1% antibiotic at 37 ° C and 5% CO 2 .

(2) 세포에서의 (2) 티로시나제Tyrosinase 억제 활성 측정 Measure inhibitory activity

세포를 6 웰 플레이트에 1 x 105 cells/mL로 분주한 뒤 24시간 동안 배양하였고, FBS와 항생제가 첨가되지 않은 배지에 겨우살이의 발효 추출물을 각 농도별로 처리하여 24시간 동안 더 배양하였다. 시료를 처리한 배지를 제거한 후, 인산염-완충액 생리식염수(PBS, pH 6.8)로 세척하였고, 1% 트리톤 X-100(Triton X-100)이 함유된 PBS를 웰에 첨가한 다음, 셀 스크래퍼(cell scraper)로 웰에 부착되어 있는 세포를 부유시켜 1.5 mL 튜브에 수집하였다. 수집된 세포를 -70 ℃에서 급속 냉동시킨 후 해동시키는 과정을 3회 반복하여 세포막을 파괴하였다. 세포막이 파괴된 시료를 10,000 × g에서 10분간 원심분리한 후, 상층액을 티로시나제 활성 측정을 위한 효소원과 단백질 측정을 위한 시료로 사용하였다. 단백질 정량 키트(Bio-Rad protein kit)로 단백질을 정량하였으며, 티로시나제 활성 측정은 10 mM L-DOPA 200 ㎕ 와 0.1 M PBS(pH 6.8) 500 ㎕, 티로시나제 효소원(세포로부터 얻은 상층액) 300 ㎕를 첨가한 후, 35 ℃에서 1시간 동안 배양한 다음 475 nm에서 흡광도를 측정하였다. 티로시나제 억제능은 하기 수학식 4에 의해 계산하였으며, 그 결과를 표 9 및 도 9에 나타내었다.Cells were seeded at 6 × 10 5 cells / mL in a 6-well plate and cultured for 24 hours. Fermented extracts of Mistletoe were further treated with FBS and antibiotics for 24 hours. After the sample-treated medium was removed, the cells were washed with phosphate-buffered saline (PBS, pH 6.8) and PBS containing 1% Triton X-100 (Triton X-100) was added to the wells. Cell scraper cell scraper) were suspended in 1.5 mL tubes. The collected cells were rapidly frozen at -70 ° C and thawed three times to destroy the cell membrane. After destruction of the cell membrane, the supernatant was centrifuged at 10,000 × g for 10 minutes, and the supernatant was used as an enzyme source for measuring tyrosinase activity and as a sample for protein measurement. Protein quantification was performed using a Bio-Rad protein kit. To determine the activity of tyrosinase, 200 μl of 10 mM L-DOPA, 500 μl of 0.1 M PBS (pH 6.8), 300 μl of tyrosinase enzyme source (supernatant from cells) , Incubated at 35 ° C for 1 hour, and absorbance was measured at 475 nm. The inhibition of tyrosinase was calculated by the following equation (4), and the results are shown in Table 9 and FIG.

[수학식 4]&Quot; (4) "

티로시나제 억제능(%) = {1-(시료 흡광도/대조물질 흡광도)} × 100Tyrosinase inhibition (%) = {1- (sample absorbance / control substance absorbance)} x 100

발효 추출물Fermented extract 1 mg1 mg /mL/ mL 2.5 mg/mL2.5 mg / mL 5 mg5 mg /mL/ mL 10 mg10 mg /mL/ mL 평균Average 5.655.65 24.8524.85 58.7758.77 77.0877.08

표 9 및 도 9에 나타난 바와 같이, 겨우살이 발효 추출물의 티로시나제 억제 활성은 마우스 B16BL6 멜라노마 세포에서도 추출물의 농도에 비례하여 나타났으며, 이로써 본 발명의 겨우살이 발효 추출물의 티로시나제 억제 활성이 세포 수준에서도 작동되는 우수한 효과임을 확인하였다.As shown in Table 9 and FIG. 9, the tyrosinase inhibitory activity of the fermented extract of Mistletoe was also proportional to the concentration of the extract in the mouse B16BL6 melanoma cell. Thus, the tyrosinase inhibitory activity of the present invention fermented Mistletoe extract .

Claims (7)

페디오코쿠스 아시딜락티시 J9 균주에 의해 발효된 겨우살이의 추출물을 포함하는 항산화 또는 미백용 화장료 조성물.A cosmetic composition for antioxidant or whitening comprising an extract of mistletoe fermented by Pediococcus acydilactacty J9 strain. 제1항에 있어서, 상기 겨우살이가 한국산 겨우살이(Viscum album L. var. coloratum)인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.The cosmetic composition according to claim 1, wherein the mistletoe is Korean mistletoe ( Viscum album L. var. Coloratum). 삭제delete 삭제delete 제1항에 있어서, 상기 발효가 12 ∼ 22 시간 및 25 ∼ 40 ℃ 온도 조건에서 수행되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.The cosmetic composition according to claim 1, wherein the fermentation is carried out at a temperature of 12 to 22 hours and a temperature of 25 to 40 占 폚. 제1항, 제2항 및 제5항 중 어느 한 항의 화장료 조성물을 포함하는 화장품.A cosmetic comprising the cosmetic composition of any one of claims 1, 2 and 5. 제6항에 있어서, 스킨, 미스트, 마스크팩 및 영양크림으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화장품.The cosmetic product according to claim 6, wherein the product is any one selected from the group consisting of a skin, a mist, a mask pack and a nutritional cream.
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