KR100642526B1 - Viscum album extract having anti-inflammatory and anti-oxidative activities, and cosmetic composition comprising the same - Google Patents
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Abstract
본 발명은 한국산 겨우살이(Viscum album L. var. coloratum)에서 추출한 항염증 및 항산화 활성을 갖는 겨우살이 추출물, 이를 함유하는 항염증 및 항산화 효과를 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a mistletoe extract having anti-inflammatory and antioxidant activity extracted from Korean mistletoe (Viscum album L. var. Coloratum), and a cosmetic composition having an anti-inflammatory and antioxidant effect containing the same.
본 발명에 따르면, 한국산 겨우살이에서 얻은 추출물의 우수한 항염증 및 항산화 활성으로 인하여, 이를 함유한 다양한 화장료 조성물에서 뚜렷한 항염증효과, 항산화효과, 피부보호효과, 피부개선효과 및 피부노화방지 등을 발휘하면서도 피부자극이나 독성이 거의 없다.According to the present invention, due to the excellent anti-inflammatory and antioxidant activity of the extract obtained from Korean mistletoe, while exhibiting a distinct anti-inflammatory effect, antioxidant effect, skin protection effect, skin improvement effect and skin aging prevention in various cosmetic compositions containing it There is little skin irritation or toxicity.
Description
도 1은 본 발명의 일 실시예로서 초임계 추출법에 의한 겨우살이 오일 추출물의 제조공정도를 나타내고,Figure 1 shows a manufacturing process diagram of mistletoe oil extract by supercritical extraction method as an embodiment of the present invention,
도 2는 본 발명의 일 실시예로서 초임계 추출법에 의한 수용성 겨우살이 추출물의 제조공정도를 나타내고,Figure 2 shows a manufacturing process of the water-soluble mistletoe extract by the supercritical extraction method as an embodiment of the present invention,
도 3은 본 발명의 겨우살이 오일 추출물의 항염 효과로서 IL-8 생성 억제 효과를 나타낸 그래프이고, 3 is a graph showing the inhibitory effect of IL-8 production as an anti-inflammatory effect of the mistletoe oil extract of the present invention,
도 4는 본 발명의 겨우살이 오일 추출물의 항산화 효과로서 SOD의 활성을 측정한 결과를 나타낸 그래프이고,4 is a graph showing the results of measuring the activity of SOD as an antioxidant effect of the mistletoe oil extract of the present invention,
도 5는 본 발명의 수용성 겨우살이 추출물의 항염 효과로서 IL-8 생성 억제 효과를 나타낸 그래프이고, 5 is a graph showing the inhibitory effect of IL-8 production as an anti-inflammatory effect of the water-soluble mistletoe extract of the present invention,
도 6은 본 발명의 수용성 겨우살이 추출물의 항산화 효과로서 SOD의 활성을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.Figure 6 is a graph showing the results of measuring the activity of SOD as an antioxidant effect of the water-soluble mistletoe extract of the present invention.
본 발명은 화장료 조성물에 관한 것으로 더욱 구체적으로 한국산 겨우살이에서 추출한 항염증 및 항산화 활성을 갖는 겨우살이 추출물, 그리고 이를 함유하는 항염증효과, 항산화효과, 피부보호효과 및 노화방지효과를 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition and more particularly to a mistletoe extract having anti-inflammatory and antioxidant activity extracted from Korean mistletoe, and a cosmetic composition having an anti-inflammatory effect, antioxidant effect, skin protection effect and anti-aging effect containing the same. .
우리 인체는 외부 환경과 밀접하게 접하고 있고 자외선이나 환경 오염,화학 물질, 세제, 꽃가루 등의 노출로 인해 쉽게 민감화 되는 것은 기지의 사실이다. 이러한 외부 환경에 의해 노출된 피부는 활성 산소 종에 쉽게 노출되고, 발생된 활성 산소 종은 정상적인 세포 조직이나 세포막을 공격하게 되어 피부는 결국 염증 (inflammation)을 일으키게 된다. 염증화된 (inflammated) 조직은 피부에 단백질이나 유전자 물질 등을 파괴하여 주름 등을 형성하는 등 피부 노화가 일어난다.It is a known fact that our human bodies are in close contact with the external environment and are easily sensitized due to exposure to ultraviolet rays, environmental pollution, chemicals, detergents and pollen. Skin exposed by such an external environment is easily exposed to reactive oxygen species, and the generated reactive oxygen species attack normal cellular tissues or cell membranes, and the skin eventually causes inflammation. Inflammated tissues cause skin aging, such as breaking down proteins and genetic material on the skin to form wrinkles and the like.
피부노화의 가장 큰 원인은 프리 라디칼, 즉 활성 산소이다. 프리 라디칼의 생성 원인을 보면 외적으로는 자외선, 공해, 합성세제 등이며, 내부적 요인으로는 염증, 세포 파괴, 심리적 스트레스 등이다. 최근 자외선(UV-B 및 UV-A) 에 의한 피부 세포 손상의 주 원인은 역시 활성 산소이며, 이는 태양광선 노출시 피부에서 생성되어 피부 단백질의 변성 및 지질의 과산화를 통하며, 피부염 및 광발암 등을 일으킬 수 있다고 보고 되어 있다. 생체 피부 세포가 노령화 되면서 피부 세포중의 과산화물의 수치가 급격히 증가한다. 활성산소에 의해 세포(또는 세포막)의 구성성분이 과산화물질로 되고 단백질 손상이 일어난다면 세포 또는 세포막은 기능을 원활히 수행할 수 없게 된다. 따라서 이들의 기능적, 구조적 손상으로 인해 주름이 생기게 되며 이들로 인해 노화가 촉진된다고 알려져 있다. 또한, 프리라디칼에 의해 손상된 세포나 조직을 치유하기 위해 염증이 유발된다. 염증은 해로운 주위 환경 즉, 세균과 같은 외부 이물질의 침입과 기계적 손상으로부터 생체를 보호하는 생리적인 반응이다. 그러나 이들의 작용은 때로는 인접해 있는 조직 세포와 비세포 성분들에게도 해로운 손상을 일으키기도 한다. 따라서 적절한 조건하에서는 염증은 초기 상태가 지난 후에는 정상기능을 되찾게 되지만, 염증을 자극하는 자극제가 없어지지 않거나 계속해서 만들어지면, 결과적으로 만성염증이 일어나게 되어서 더욱더 심각한 조직의 손상을 가져온다. 이처럼, 과다 염증에 의해 유발되는 단백질 분해 효소들에 의해 세포 및 결합조직이 손상을 입고 결합조직의 손상은 피부의 탄력을 감소시켜 주름의 원인이 될 뿐 아니라 나아가 빠른 피부 노화를 초래하게 된다. 그러므로 활성산소를 억제하는 것은 피부노화 화장료에 중요한 요소이다.The main cause of skin aging is free radicals, ie free radicals. The causes of the production of free radicals are ultraviolet rays, pollution, synthetic detergents, etc. External factors include inflammation, cell destruction, and psychological stress. The main cause of skin cell damage caused by ultraviolet rays (UV-B and UV-A) in recent years is also active oxygen, which is produced in the skin upon exposure to sunlight, through degeneration of skin proteins and peroxidation of lipids, dermatitis and photocarcinogenesis It is reported to cause back. As living skin cells age, the levels of peroxides in the skin cells increase rapidly. If the constituents of the cell (or cell membrane) are made of peroxides and protein damage occurs due to free radicals, the cell or cell membrane cannot function smoothly. Therefore, it is known that wrinkles are caused by their functional and structural damages, thereby promoting aging. In addition, inflammation is caused to heal cells or tissues damaged by free radicals. Inflammation is a physiological response that protects the living body from invasion and mechanical damage of harmful surroundings, such as foreign particles such as bacteria. However, their actions sometimes cause detrimental damage to adjacent tissue cells and noncellular components. Thus, under appropriate conditions, inflammation will resume normal function after the initial phase, but if the irritant that stimulates inflammation is not lost or continues to build up, chronic inflammation will result, resulting in more serious tissue damage. As described above, proteolytic enzymes caused by excessive inflammation damage cells and connective tissues, and damage to connective tissues reduces skin elasticity, which causes wrinkles and further causes rapid skin aging. Therefore, inhibition of free radicals is an important factor in skin aging cosmetics.
이러한 활성 산소종의 중화를 목적으로 토코페롤, 폴리페놀류, Coenzyme Q 10, BHT, BHA 등 항 산화제가 폭 넓게 이용되고 있으나 이들은 대부분 합성품으로서 장기간 인간의 피부에 적용할 경우 안전성이 문제화되므로 사용이 제한된다. 따라서, 사람의 피부에 대한 안정성이 보증되는 천연물로서 항산화제를 찾으려는 노력이 진행되었는 바, 많은 식물 종에는 식물 보호효과가 우수한 폴리페놀류가 다양하게 함유되어 있으므로, 녹차, 상백피, 황금 등 수많은 식물 추출물이 항산화제로서 화장품에 폭 넓게 사용되고 있다.Antioxidants such as tocopherol, polyphenols, Coenzyme Q 10, BHT, and BHA are widely used for the purpose of neutralizing these active oxygen species, but most of them are synthetic products, and their use is limited due to safety issues when applied to human skin for a long time. . As a result, efforts have been made to find antioxidants as natural products that guarantee human skin stability. Since many plant species contain various polyphenols having excellent plant protection effects, many plants such as green tea, lettuce, and gold Extracts are widely used in cosmetics as antioxidants.
겨우살이(Mistletoe, Viscum album)는 참나무, 밤나무를 숙주로 하여 생장하는 상록관목 반기생 식물로서 그 숙주식물에 따라 여러 과와 종으로 나뉘어지며 세계적으로 30속 1,500여 종의 식물이 있는 것으로 알려져 있다. 겨우살이는 숙주 나무 둥치에 뿌리를 박아 물관에서 물을, 체관에서는 숙주식물이 만든 양분을 빨아먹고 살며 꽃을 피우고 열매까지 맺는다. 반면 광합성을 하여 스스로 양분을 만들기도 하며, 그 엽록체는 겨울에도 파괴되지 않아 푸르름 유지하여 동청(凍靑) 이라고도 불리운다. Mistletoe (Viscum album) is an evergreen semi-parasitic plant that grows as a host of oak and chestnut trees. Mistletoe rooted in the trunk of a host tree, drinking water from the water pipe, and in the phloem, it sucks on nutrients made by the host plant, blooms, blooms, and even bears fruit. On the other hand, photosynthesis is used to make nutrients on its own. The chloroplasts are not destroyed even in winter, so they remain green and are called dongcheong.
유럽의 겨우살이는 오래 전부터 민간요법에서 고혈압, 동맥경화증, 암등에 효과가 있는 것으로 널리 사용 되었고 한국산 겨우살이도 민간 및 한방에서 암, 동맥경화, 심장병, 고혈압, 치통, 생리통 등 각종 질병의 약재로 널리 이용되어져 왔다. 겨우살이 관련 국내 특허로는 출원번호 2000-0083383의 한국산 겨우살이의 신규한 항암성 렉틴 및 그 유전자와 렉틴의 분리방법이 있고, 출원번호 2000-0083067의 열충격 단백질의 발현촉진을 강조한 화장료 조성물이 있고, 출원번호 2001-0020355의 상기생 추출물을 포함하는 미백제가 있고, 출원번호 1996-0005732의 한국산 겨우살이 추출물을 함유하는 면역증강제 조성물이 있고, 출원번호 1999-7002487의 열대새삼(겨우살이) 추출물이 있고, 한국식품영양과학회지27(2),359-365(1998)의 겨우살이 추출물의 항돌연변이 효과등 많은 연구개발이 이루어지고 있으나, 아직까지 항염증 및 항산화 활성에 관한 연구결과는 발표되고 있지 않다.Mistletoe in Europe has long been widely used in folk medicine for high blood pressure, arteriosclerosis, and cancer, and Korean mistletoe is widely used in folk medicine and medicine for various diseases such as cancer, arteriosclerosis, heart disease, high blood pressure, toothache, and menstrual pain. It has been. Mistletoe-related domestic patents include a novel anticancer lectin of Korean mistletoe and a method for separating genes and lectins from Korean mistletoe, and a cosmetic composition that emphasizes the expression of heat shock proteins of application number 2000-0083067. There is a whitening agent comprising the above extract of No. 2001-0020355, there is an immunoadjuvant composition containing the Korean mistletoe extract of the application No. 1996-0005732, there is a tropical ginseng (mistletoe) extract of Application No. 1999-7002487, Korea Food and Nutrition Although much research and development has been carried out such as the antimutagenic effect of mistletoe extract of Korean Journal of Science 27 (2), 359-365 (1998), the results of anti-inflammatory and antioxidant activity have not been published.
이에 본 발명자들은 피부보호 효과를 갖는 식물 종을 찾기 위한 연구를 진행 하던 중에, 한국산 겨우살이가 피부에 매우 유익한 렉틴을 포함한 다양한 성분을 함유하고 있다는 점에 착안하여, 한국산 겨우살이의 피부보호 효과를 연구한 결과, 한국산 겨우살이에서 추출한 겨우살이 추출물이 우수한 항염증 및 항산화 활성을 가진다는 사실을 발견하여 본 발명을 완성하였다.Therefore, the present inventors focused on the fact that the Korean mistletoe contains various components including lectins, which are very beneficial to the skin, while studying the plant species having the skin protection effect, and studied the skin protection effect of the Korean mistletoe. As a result, the present invention was completed by discovering that the mistletoe extract extracted from Korean mistletoe has excellent anti-inflammatory and antioxidant activity.
또한 본 발명자들은 겨우살이에 함유되어 있는 항산화 성분 등 피부에 유용한 성분들이 파괴되지 않고 추출할 수 있는 방법을 모색하게 되었다. 연구 끝에 본 발명자들이 연구 발명하여 기 출원한 출원번호 03-67437에 적용한 초임계 추출법을 이용하여 성공적으로 겨우살이 추출물을 개발할 수 있게 되었고 이을 함유한 화장료가 항염증효과, 항산화효과, 피부보호효과 및 노화방지효과를 나타내면서도 피부에 매우 안전하다는 사실을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다.In addition, the present inventors have sought a method of extracting the components useful for the skin without destroying them, such as antioxidant components contained in mistletoe. After the research, the inventors can successfully develop mistletoe extract using the supercritical extraction method applied to the previously filed application No. 03-67437, and the cosmetics containing the anti-inflammatory effect, antioxidant effect, skin protection effect and aging The present invention was completed by discovering that it is very safe for the skin while exhibiting a protective effect.
따라서, 본 발명의 목적은 항염증 및 항산화 활성을 갖는 겨우살이 추출물을 제공하는 것이다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide a mistletoe extract having anti-inflammatory and antioxidant activity.
본 발명의 다른 목적은 이러한 효능을 갖는 겨우살이에 함유된 지용성 또는 수용성 성분을 온전하게 추출하는 방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for the complete extraction of fat-soluble or water-soluble components contained in mistletoe having such efficacy.
본 발명의 다른 목적은 이러한 효능을 갖는 추출물을 함유하는 항염증효과, 항산화효과, 피부보호효과 및 노화방지효과를 갖는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a cosmetic composition having an anti-inflammatory effect, an antioxidant effect, a skin protective effect and an anti-aging effect, containing an extract having such an effect.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 겨우살이(Viscum album)로부터 추출한 것을 특징으로 하는 항염증 및 항산화 활성을 갖는 겨우살이 추출물을 제공한다.In order to achieve the object of the present invention, the present invention provides a mistletoe extract having anti-inflammatory and antioxidant activity, characterized in that extracted from the mistletoe (Viscum album).
겨우살이는 옛 선조들이 초자연적인 힘이 있는 것으로 믿어 온 식물이다. 동 서양을 막론하고 옛 사람들은 겨우살이를 귀신을 쫓고 온갖 병을 고치며, 아이를 낳게 하고, 벼락과 화재를 피할 수 있을 뿐 아니라 장생불사의 능력이 있는 신선한 식물로 여겨왔다. 특히 유럽 사람들은 참나무에 기생하는 겨우살이를 불사신의 상징으로 믿었고 하늘이 내린 영초라고 신성시하여 절대적인 경외의 대상으로 여겼다. 겨우살이는 몸을 따뜻하게 하는 효능이 있다. 독성이 없으므로 누구든지 안심하고 사용할 수 있다.Mistletoe is a plant that ancient ancestors believed to have supernatural powers. Regardless of the East and West, the old people regarded mistletoe as a fresh plant capable of chasing ghosts, healing all kinds of illnesses, giving birth to children, avoiding thunderbolts and fires, as well as the ability to prolong immortality. In particular, Europeans believed that mistletoes parasitic on oak trees were symbolic of immortality and regarded as an object of absolute awe, sacred as heavenly grounds. Mistletoe has the effect of warming the body. No toxicity, anyone can use it with confidence.
바람직하게는, 상기 겨우살이는 한국산 겨우살이(Viscum album L. var . coloratum)인 것을 특징으로 한다. 우리나라에서 자생한 겨우살이가 우리나라 사람의 체질에 가장 잘 맞고 약효가 뛰어나기 때문이다.Preferably, the mistletoe is characterized in that the Korean mistletoe (Viscum album L. var. Coloratum). This is because mistletoes native to Korea are best suited to the constitution of Korean people and have excellent efficacy.
한국산 겨우살이에는 여러종류의 아미노산으로 구성된 염기성 단백 복합물질 들이 존재하며, 이 중 분자량이 60,000정도의 렉틴이라는 물질이 다량 함유되어 있다. 그 밖에 tyramine, inositol, 베타 아미린(β-amyrin), 루페롤(Luperol), 빅신(Bixin), 올레아놀릭산(Oleanolic acid), 미리스틱산, 아라키닉산, 베타아미린과 루페롤의 팔미틱산에스테르 등이 함유되어 있는 것으로 알려져 있어 피부에 매우 유익한 효과를 줄 것으로 기대가 된다.There are many basic amino acid complexes composed of various amino acids in Korean mistletoe, which contains a large amount of lectin with a molecular weight of about 60,000. Tyramine, inositol, beta-amirin, β-amyrin, luperol, bixin, oleanolic acid, myristic acid, arachonic acid, betamirin, and palmitic acid esters of luperol It is known to contain the back and is expected to have a very beneficial effect on the skin.
본 발명에서, 겨우살이 추출물의 추출방법은 종래에 알려진 각종 식물의 용매추출법으로 추출할 수 있다. 예컨대, 추출용매로서 물, 에탄올, 메탄올, 아세톤과 같은 친수성 용매와 에테르, 초산에틸, 클로로폼, 사염화탄소, 벤젠, 핵산과 같은 친유성 용매 중에서 선택된 한가지 이상의 용매를 겨우살이의 10 ~ 20 배 부피량을 가한후 50 ~ 95℃, 2 ~ 20 시간 가열하여 추출할 수 도 있다.In the present invention, the extract of mistletoe extract can be extracted by the solvent extraction method of various plants known in the art. For example, as an extractant, 10 to 20 times the volume of mistletoe in a hydrophilic solvent such as water, ethanol, methanol, acetone, and one or more solvents selected from lipophilic solvents such as ether, ethyl acetate, chloroform, carbon tetrachloride, benzene, and nucleic acid. After addition, it may be extracted by heating at 50 to 95 ° C. for 2 to 20 hours.
바람직하게는, 본 발명의 겨우살이 추출물은 지용성 오일 또는 수용성 추출물인 것을 특징으로 한다. 본 발명에서, 지용성 오일이란 친유성 용매로 추출하거나 후술하는 초임계 추출법에서 수용성 공용매를 사용하지 않고 추출한 추출물을 의미하며, 수용성 추출물이란 친수성 용매로 추출하거나 후술하는 초임계 추출법에서 수용성 공용매를 사용하여 추출물을 의미한다. 본 발명의 실시예에서는, 상기 지용성 오일뿐만 아니라 수용성 추출물의 항염즘 및 항산화 효과를 증명하였다. Preferably, the mistletoe extract of the present invention is characterized in that the fat-soluble oil or water-soluble extract. In the present invention, a fat-soluble oil means an extract extracted with a lipophilic solvent or extracted without using a water-soluble cosolvent in the supercritical extraction method described later, and a water-soluble extract is a water-soluble cosolvent extracted in a supercritical extraction method described later or with a hydrophilic solvent. Means extract. In the embodiment of the present invention, the anti-inflammatory and antioxidant effects of the water-soluble extracts as well as the oil-soluble oils were demonstrated.
바람직하게는, 겨우살이 추출물의 추출방법은 캐리어 가스로 이산화탄소를 사용하고 초임계(초고압) 추출법을 이용하여 추출한 것을 특징으로 한다. 이러한 초임계 추출법은 기존 열 추출이나 용매 추출과는 달리 저온에서 초고압으로 식물의 필요한 성분만을 고농도로 추출하는 방법으로 겨우살이가 가지는 항산화 성분등 피부에 유용한 성분들을 파괴하지 않고 추출할 수 있으며, 유기 용매 대신 인체에 무해한 이산화탄소를 이용하기 때문에 피부에 독성도 없습니다.Preferably, the extract of mistletoe extract is characterized in that the extraction using carbon dioxide as a carrier gas and using a supercritical (ultra high pressure) extraction method. Unlike conventional heat extraction or solvent extraction, this supercritical extraction method extracts only the necessary components of plants at high temperature at high pressure at low temperature, and can extract the components useful for skin such as the antioxidant component of mistletoe without destroying organic solvents. Instead, it uses carbon dioxide, which is harmless to the human body, so it is not toxic to the skin.
바람직하게는, 겨우살이 추출물의 추출방법은 상기 초임계 추출법의 캐리어 개스로 이산화탄소를 이용하고 동시에 수용성(water soluble) 공용매(Co-Solvent)을 사용한 것을 특징으로 한다. Preferably, the extract of mistletoe extract is characterized in that using the carbon dioxide as a carrier gas of the supercritical extraction method and at the same time using a water-soluble co-solvent (Co-Solvent).
수용성 공용매를 사용하는 이유는 초임계 이산화탄소로 추출이 어려운 친수성이나 극성의 겨우살이 유효 성분을 효과적으로 추출하기 위함이다. 이러한 수용성 공용매를 이산화탄소의 0-20 mole% 정도 첨가하면 초임계 이산화탄소의 용해력을 10배 이상 증가시킬 수 있다. The reason for using the water-soluble cosolvent is to effectively extract the active ingredient of hydrophilic or polar mistletoe which is difficult to extract with supercritical carbon dioxide. Adding 0-20 mole% of such a water-soluble cosolvent can increase the solubility of supercritical carbon dioxide by more than 10 times.
본 발명에서, 수용성 공용매는 종래에 초임계 추출법에 사용된 어떠한 수용 성 공용매도 될 수 있으나, 바람직하게는 Glycerin, Propylene glycol 또는 1,3-butylene glycol과 95% ethanol의 혼합용액인 것을 특징으로 한다.In the present invention, the water-soluble co-solvent may be any water-soluble co-solvent conventionally used in supercritical extraction, but is preferably characterized in that it is a mixture of Glycerin, Propylene glycol or 1,3-butylene glycol and 95% ethanol. .
본 발명자들은 일반적으로 이용되고 있는 유기용매(solvent)를 이용한 용매추출법은 겨우살이에 함유되어 있는 항 노화 및 미용성분들을 안전하게 추출하기 어렵다고 판단하여 다른 방법을 모색하게 되었다. 연구 끝에 본 발명자들이 연구 발명하여 기 출원한 출원번호 03-67437에 적용한 초임계추출법을 이용하여 성공적으로 지용성 겨우살이 오일과 수용성 겨우살이 추출물을 추출할 수 있었으며 겨우살이에 함유된 수용성분과 지용성 성분 모두를 안전하게 추출할 수 있게 되었다. 따라서, 그 동안 많은 연구자들이 연구된 연구발명 보다 진일보된 겨우살이 오일을 분리 정제할 수 있었으며 수용성추출물도 분리 정제하는데 성공하여 피부학적인 유효성을 검토하게 되었고 이를 이용하여 다양한 화장품을 개발할 수 있게 되었다.The present inventors have determined that it is difficult to safely extract the anti-aging and beauty components contained in mistletoe using a solvent extraction method using a conventional organic solvent (solvent) to find another method. After the research, the present inventors were able to successfully extract the oil-soluble mistletoe oil and the water-soluble mistletoe extract using the supercritical extraction method applied to the previously applied application No. 03-67437, and safely extracted both the water-soluble component and the fat-soluble component contained in the mistletoe. I can do it. Therefore, many researchers have been able to isolate and purify mistletoe oil, which is more advanced than the research invention studied, and succeeded in separating and refining water-soluble extracts to examine the dermatological effectiveness and to develop various cosmetic products.
본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 본 발명에 따른 겨우살이 추출물을 유효성분으로 함유하는 항 염증효과, 항 산화효과, 피부보호효과 및 노화방지효과를 갖는 화장료 조성물을 제공한다.In order to achieve another object of the present invention, the present invention provides a cosmetic composition having an anti-inflammatory effect, an antioxidant effect, a skin protection effect and an anti-aging effect containing the mistletoe extract according to the present invention as an active ingredient.
바람직하게는, 본 발명의 화장료 조성물은 상기 겨우살이 추출물을 조성물전체에 대해서 0.001~50 %(w/v) 의 양으로 함유하는 것을 특징으로 한다. 함량이 0.001% 보다 낮으면 본 발명의 실질적인 항염증효과, 항산화효과, 피부보호효과 및 노화방지효과를 기대하기 어렵고, 50%보다 높으면 화장료 조성물의 성상을 유지하기 힘들고 제품의 안정성에 영향을 미친다.Preferably, the cosmetic composition of the present invention is characterized by containing the mistletoe extract in an amount of 0.001 to 50% (w / v) based on the whole composition. If the content is less than 0.001%, it is difficult to expect the substantial anti-inflammatory effect, antioxidant effect, skin protection effect and anti-aging effect of the present invention, higher than 50% it is difficult to maintain the appearance of the cosmetic composition and affect the stability of the product.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 겨우살이 추 출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 용매, 안정화제, 용해화제, 유화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.The components included in the cosmetic composition of the present invention include components commonly used in cosmetic compositions in addition to mistletoe extract as an active ingredient, and include conventional auxiliaries such as solvents, stabilizers, solubilizers, emulsifiers, vitamins, pigments and flavorings. And a carrier.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으나, 바람직하게는, 화장수, 영양로션, 영양크림, 맛사지크림, 영양에센스, 팩, 메이컵베이스, 파운데이션, 바디오일, 헤어오일, 샴프, 린스로 구성된 군에서 선택된 제형으로 제조되는 것을 특징으로 한다. 이러한 화장료 조성물의 제형예에 상관없이 본 발명의 겨우살이 추출물을 함유하는 한 본 발명의 항염증효과, 항산화효과 및 피부보호효과를 가지며, 피부에 발생한 자유라디칼을 소거하고 세포내 항산화계 보호효과가 있어 자유라디칼 등의 작용에 의한 산화에 의하여 발생하는 피부 노화의 예방 및 지연 효과를 발휘할 수 있다.The cosmetic composition of the present invention may be prepared in any formulation commonly prepared in the art, but preferably, lotion, nutrition lotion, nutrition cream, massage cream, nutrition essence, pack, makeup base, foundation, body oil , Hair oil, shampoo, rinse is characterized in that it is prepared in a formulation selected from the group consisting of. Irrespective of the formulation of the cosmetic composition, as long as it contains the mistletoe extract of the present invention, it has the anti-inflammatory effect, antioxidant effect and skin protection effect of the present invention, eliminates free radicals generated in the skin and has an intracellular antioxidant protection effect. It is possible to exhibit the effect of preventing and delaying skin aging caused by oxidation by the action of free radicals and the like.
이하, 제조예 및 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 예들은 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 제조예 및 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Preparation Examples and Examples. These examples are only intended to illustrate the invention, and the scope of the invention is not to be construed as limited by these preparations and examples.
겨우살이 오일의 제조 예 1 :Preparation Example 1 of Mistletoe Oil:
잘 건조된 겨우살이(Viscum album L. var . coloratum) 5,102Kg을 분쇄하여 내부용적 10 L의 초임계 추출조에 투입하고 추출조를 밀봉하고, 고압용 기체 펌프를 이용하여 추출조에 이산화탄소를 공급하여 압력을 높였다. 압력이 300기압에 달하면 이산화탄소의 공급을 중단하고, PID 온도제어기를 이용하여 추출조에 외부를 감싸고 있는 열선을 이용하여 추출조 내부의 온도를 0.5℃/min 속도로 40℃까지 승 온 시켰다. 승온 으로 인한 추출조의 압력은 추출조의 출구에 부착된 압력조절기를 이용하여 이산화탄소를 일부 배출하여 압력을 300 기압으로 조절하고, 추출조의 온도와 압력을 40℃, 300 기압으로 50분간 유지시켰다.5,102 kg of well-dried mistletoe (Viscum album L. var. Coloratum) is pulverized and placed in a supercritical extraction tank of 10 L of internal volume and sealed. The pressure is supplied by supplying carbon dioxide to the extraction tank using a high pressure gas pump. Raised. When the pressure reached 300 atm, the supply of carbon dioxide was stopped, and the temperature inside the extraction tank was raised to 40 ° C. at a rate of 0.5 ° C./min using a heating wire wrapped around the outside using a PID temperature controller. The pressure of the extraction tank due to the elevated temperature was controlled by adjusting the pressure to 300 atm by discharging part of carbon dioxide using a pressure regulator attached to the outlet of the extraction tank, and maintaining the temperature and pressure of the extraction tank at 40 ° C. and 300 atm for 50 minutes.
고압용 기체펌프를 재가동하여 20 L/min의 유량으로 이산화탄소를 추출조에 연속적으로 공급하는 동시에 출구쪽에 부착된 압력조절기를 이용하여 추출물을 방출시키며추출조의 온도와 압력을 일정하게 유지시켰다. 압력조절기를 통하여 방출된 압력 및 온도강하로 인하여 이산화탄소가 고체 드라이아이스로 전이되어 최종 출구쪽의 튜브가 막히는 현상이 발생하므로, 이를 방지하기 위하여 압력조절기의 온도를 70℃로 유지 하였다. 방출된 추출물은 상압으로 감압 되어 이산화탄소는 대기로 방출되고, 겨우살이의 추출물을 포집기 내로 회수하였다. 상기 과정을 96시간 동안 수행한 후 이산화탄소의 투입을 중단하고 추출조업을종료하였다. 추출을 종료한 후 추출물을 3000rpm에서 40분간 원심 분리하여 최종적으로 오일을 회수할 수 있었으며 회수된 오일의 무게는 790g 이었다.The gas pump for high pressure was restarted to continuously supply carbon dioxide to the extraction tank at a flow rate of 20 L / min, while simultaneously discharging the extract using a pressure regulator attached to the outlet and maintaining a constant temperature and pressure of the extraction tank. Due to the pressure and temperature drop released through the pressure regulator, carbon dioxide is transferred to solid dry ice, which causes clogging of the tube on the final outlet side. Thus, the temperature of the pressure regulator was maintained at 70 ° C. The released extract was decompressed to atmospheric pressure to release carbon dioxide into the atmosphere, and the extract of mistletoe was recovered into the collector. After the process was carried out for 96 hours, the input of carbon dioxide was stopped and the extraction operation was terminated. After the extraction was completed, the extract was centrifuged at 3000 rpm for 40 minutes to recover the oil, and the weight of the recovered oil was 790 g.
겨우살이 오일의 제조 예 2 :Preparation example 2 of mistletoe oil:
잘 건조된 겨우살이 6.020 Kg을 분쇄하여 내부 용적 10 L의 초임계 추출조에 투입하고 겨우살이 오일의 제조 예 1과 동일한 방법으로 오일 845g을 회수할 수 있었다. 6.020 Kg of well-dried mistletoe was pulverized and put into a supercritical extraction tank having an internal volume of 10 L, and 845 g of oil was recovered in the same manner as in Preparation Example 1 of mistletoe oil.
겨우살이 오일의 제조 예 3 :Preparation Example 3 of Mistletoe Oil:
잘 건조된 겨우살이 5.960Kg을 분쇄하여 내부 용적 10 L의 초임계 추출조에 투입하고 겨우살이 오일의 제조 예 1과 동일한 방법으로 오일 837g을 회수할 수 있 었다.5.960Kg of well-dried mistletoe was crushed and put into a supercritical extraction tank of 10 L of internal volume, and 837 g of oil could be recovered in the same manner as in Preparation Example 1 of mistletoe oil.
겨우살이 추출물의 제조 예 4 :Preparation Example 4 of Mistletoe Extract:
잘 건조된 겨우살이 556g을 분쇄하여 내부용적 1.2 L의 초임계 추출조에 투입,밀봉하고 고압용 기체펌프를 이용하여 초임계 추출조에 투입하고 추출조에 이산화탄소를 공급하여 압력을 높였다. 동시에 고압용 액체펌프를 이용하여water soluble 공용매인1,3-butylene glycol 과 95% ethanol의 혼합용액 (1,3-butylene glycol : 95% Ethanol = 100:5)을 1.1g/min 속도로 이산화탄소와 동시에 추출조에 투입하였다. 압력이300기압에 달하면 이산화탄소와 공용매의 공급을 중단하고, PID 온도제어기를 이용하여 추출조에 외부를 감싸고 있는 열선을 이용하여 추출조 내부의 온도를 0.5℃/min 속도로 40℃까지 승온 시켰다. 승온으로 인한 추출조의 압력은 추출조의 출구에 부착된 압력조절기를 이용하여 이산화탄소를 일부 배출하여 압력을 300 기압으로 조절하고, 추출조의 온도와 압력을 40℃, 300 기압으로 50분간 유지시켰다. 556 g of well-dried mistletoe was crushed and put into a supercritical extraction tank of 1.2 L of internal volume, sealed and put into a supercritical extraction tank using a high-pressure gas pump, and carbon dioxide was supplied to the extraction tank to increase the pressure. At the same time, a mixture of 1,3-butylene glycol and 95% ethanol (1,3-butylene glycol: 95% ethanol = 100: 5), a water soluble cosolvent, was prepared using a high pressure liquid pump at a rate of 1.1 g / min. At the same time it was put into the extraction tank. When the pressure reached 300 atm, the supply of carbon dioxide and cosolvent was stopped, and the temperature inside the extraction tank was raised to 40 ° C. at a rate of 0.5 ° C./min using a heating wire wrapped around the outside using a PID temperature controller. The pressure of the extraction tank due to the elevated temperature was partially discharged by using a pressure regulator attached to the outlet of the extraction tank to adjust the pressure to 300 atm, and the temperature and pressure of the extraction tank were maintained at 40 ° C. and 300 atm for 50 minutes.
고압용 기체펌프를 재가동하여 20 L/min의 유량으로 이산화탄소를 추출조에 연속적으로 공급하는 동시에 고압용 액체펌프를 재가동하여 water soluble 공용매를 1.1g/min 속도로 공급하였다. 동시에 출구쪽에 부착된 압력조절기를 이용하여 추출물을 방출시키며 추출조의 온도와 압력을 일정하게 유지시켰다. 압력조절기를 통하여 방출된 압력 및 온도강하로인하여 이산화탄소가 고체 드라이아이스로 전이되어 최종 출구쪽의 튜브가 막히는 현상이 발생하므로, 이를 방지하기 위하여 압력조절기의 온도를 70℃로 유지하였다. 방출된 추출물은 상압 으로 감압 되어 이산화 탄소는 대기로 방출되고, 겨우살이의 water soluble 유효성분과 공용매를 함께 포집기 내로 회수하였다. 상기 과정을 6시간 동안 수행한 후 water soluble 공용매 투입을 중단하고 추출조업을 종료하였다. 추출종료 후 3000rpm에서 30분간 원심분리 하여 상층의 oil 층을 제거한 최종 제품 137g을 얻었다.The high pressure gas pump was restarted to continuously supply carbon dioxide to the extraction tank at a flow rate of 20 L / min, and the high pressure liquid pump was restarted to supply a water soluble cosolvent at a rate of 1.1 g / min. At the same time, the extract was discharged using a pressure regulator attached to the outlet and the temperature and pressure of the extraction tank were kept constant. Due to the pressure and temperature drop released through the pressure regulator, carbon dioxide is transferred to the solid dry ice, which causes clogging of the tube on the final outlet side. Thus, the temperature of the pressure regulator was maintained at 70 ° C. The extracted extract was decompressed to atmospheric pressure, carbon dioxide was released into the atmosphere, and the water soluble active ingredient of mistletoe and cosolvent were recovered together into the collector. After the process was carried out for 6 hours, the water soluble cosolvent was stopped and the extraction was terminated. After completion of the extraction, the final product was removed by centrifugation at 3000 rpm for 30 minutes to obtain 137 g of the final product from which the oil layer was removed.
겨우살이 추출물의 제조 예 5 :Preparation Example 5 of Mistletoe Extract:
잘 건조된 겨우살이 601g을 분쇄하여 내부 용적 1.2L 의 초임계 추출조에 투입하고 겨우살이 워터의 제조 예 3과 동일한 방법으로 식물 추출물을 제조하여 133g을 얻었다. 601 g of well dried mistletoe was pulverized and put into a supercritical extraction tank having an internal volume of 1.2 L, and plant extracts were prepared in the same manner as in Preparation Example 3 of Mistletoe Water to obtain 133 g.
실험 1. 겨우살이오일의 호염증성 싸이토카인 Interleukin-8 생산 억제능 시험Experiment 1. Inhibitory Activity of the Anti-inflammatory Cytokine Interleukin-8 Production of Mistletoe Oil
겨우살이 오일의 제조예 2에 대해 항 염증 효과를 측정하였다. 일반적으로 human monocyte인 THP-1 세포는 외부자극물질인 LPS (Lipopolysaccharide) 에 의해 호염증성 싸이토카인인 Interleukin-8을 세포 밖으로 분비한다. IL-8은 염증을 유발하는 싸이토카인으로 알려져 있어 THP-1 세포에 의한 IL-8 생산 증감 여부를 통해 항 염증 효과 여부를 판단할 수 있다.The anti-inflammatory effect was measured for Preparation 2 of mistletoe oil. In general, THP-1 cells, which are human monocytes, secrete out the cell by interleukin-8, a pro-inflammatory cytokine, by LPS (Lipopolysaccharide). IL-8 is known to be an inflammation-inducing cytokine, and thus anti-inflammatory effects can be determined by increasing or decreasing IL-8 production by THP-1 cells.
- 시험방법 :- Test Methods :
(1) P35 dish에 배양된 세포를 24시간 후 시험시료(적정농도)와 혼합된 배지로 교환한다.(1) After 24 hours, the cells cultured in a P35 dish are replaced with a medium mixed with a test sample (titration).
(2) 24시간 동안 배양 후 사용된 배지를 시료로 사용한다.(2) The medium used after incubation for 24 hours is used as a sample.
(3) 시료를 적정농도로 희석 후 IL-8 microplate 각 well에 넣은 후 반응 시킨다.(3) After diluting the sample to proper concentration, put it into each well of IL-8 microplate and react.
(4) Conjugate을 넣고 일정시간 후 substrate로 반응 시킨다.(4) Add Conjugate and react with substrate after a certain time.
(5) 흡광도(A550nm)를 측정하고 표준곡선에따른 IL-8의 농도를 계산한다.(5) Measure the absorbance (A550nm) and calculate the concentration of IL-8 according to the standard curve.
- 평가방법 :- Assessment Methods :
(1) 염증반응인자인 IL-8의 생성량을 측정하여 시험물질의 자극성을 평가한다.(1) Evaluate the irritation of the test substance by measuring the amount of IL-8 that is an inflammatory response factor.
(2) IL-8의 농도가 적을수록 항염증 효과가 있는 것으로 판단한다.(2) The lower the concentration of IL-8 is judged to have an anti-inflammatory effect.
- 시험결과 :- Test result :
표 1은 시험물질이 함유되지 않은 control과 비교하여 최고 5% 농도를 사용한 시험샘플 A에서 IL-8의 생성이 약 50-60% 감소함으로 시험물질이 탁월한 항 염증효과를 갖고 있는 것으로 확인 되었다.총 시험물질을 3회로 시험을 하여 표 1로 나타내었고 시험물질-A인 겨우살이 오일의 IL-8생성 억제효과를 도 3에 그래프로 나타내었다.Table 1 shows that the test substance has an excellent anti-inflammatory effect by reducing the production of IL-8 by about 50-60% in test sample A using the highest concentration of 5% compared to the control containing no test substance. The total test substance was tested three times, and is shown in Table 1, and the inhibitory effect of IL-8 production of mistletoe oil, test substance-A, is graphically shown in FIG. 3.
시험물질-A의 결과를 보다 상세히 살펴보면 시험물질이0.5%인 경우 IL-8 생성이 19% 감소 되었고 시험물질이 1.0%인 경우 IL-8생성이 51%로 크게 감소되어 탁월한 항 염증 개선효과가 있는 것으로 확인 할 수 있었다. (참고로 시험에 사용한 샘플은 지용성 성분 임으로 세포에 영향을 주지 않는 범위인 1.0% 이하의 계면활성제를 첨가하여 사용 하였다)Examining the results of test substance-A in more detail showed that 0.5% of test substance reduced IL-8 production by 19% and that of 1.0% of test substance greatly reduced IL-8 production by 51%. I could confirm that there is. (For reference, the sample used in the test was a fat-soluble component, and was added with a surfactant of 1.0% or less, which does not affect the cells.)
[표 1]TABLE 1
겨우살이 오일의 IL-8생성 억제효과Inhibitory Effect of Mistletoe Oil on IL-8 Production
실험 2. 겨우살이오일의 항 산화 효과 테스트Experiment 2. Antioxidant Effect of Mistletoe Oil
상기 겨우살이오일의 제조예-2에 대해 항 산화 효과 여부를 테스트 하였다.The antioxidant effect of the mistletoe oil Preparation Example-2 was tested.
- 시험원리 및 시험방법 :-Test principle and test method:
활성산소를 제거해 주는 효소인 SOD(Superoxide dismutase)의 활성을 측정하여 시험물질이 활성산소에 의한 피부노화 방지에 효과가 있는지 평가한다. % inhibition이 높을수록 항 산화 효과가 큰 것으로 판단한다.The activity of superoxide dismutase (SOD), an enzyme that removes free radicals, is measured to evaluate whether the test substance is effective in preventing skin aging by free radicals. The higher the% inhibition, the greater the antioxidant effect.
- 시험방법 : - Test Methods :
(1) P35 dish에 배양된 세포를 24시간 후 시험물질(적정농도)와 혼합된 배지로 교환한다.(1) After 24 hours, the cells cultured in a P35 dish are replaced with a medium mixed with the test substance (titration).
(2) 24시간 동안 배양 후 cell lysis solution으로 cell lysate을 준비한다.(2) After culturing for 24 hours, prepare cell lysate with cell lysis solution.
(3) cell lysate에 적정농도의reaction buffer,Xanthine solution,NBT solution을 넣어준다.(3) Put the appropriate concentration of reaction buffer, Xanthine solution, and NBT solution into the cell lysate.
(4) 첫 측정시간 30초와 마지막 측정시간 5분30초의 흡광도(A500nm)를 측정한다.(4) Measure the absorbance (A500nm) at 30 seconds of the first measurement time and 5 minutes and 30 seconds of the last measurement time.
(5) % inhibition을 계산한다.(5) Calculate% inhibition.
- 시험결과 :- Test result :
시험물질에 대해 0.5%,1.0%,5.0%를 각각 3회씩 샘플을 준비하여 시험한 결과, control에 비해 5.0% 농도로 함유된 시험물질이 20 25%의 우수한 항 산화 억제능 효과를 나타내었다. (참고로 시험에 사용한 샘플은 지용성 성분임으로 세포에 영향을 주지 않는 범위인 1.0% 이하의 계면활성제를 첨가하여 사용하였다)Three samples of 0.5%, 1.0%, and 5.0% of the test material were prepared and tested. The test material containing 5.0% of the test compound showed an excellent antioxidant inhibitory effect of 20% to 25%. (For reference, the sample used in the test was a fat-soluble component and was used by adding a surfactant of 1.0% or less, which does not affect cells.)
표 2는 항 산화능 실험 결과를 수치로 나타낸 것이다. 도 4는 샘플-A인 겨우살이 오일에 대한 항산화 효과를 그래프로 나타낸 것이다. Table 2 shows the results of the antioxidant activity numerically. Figure 4 graphically shows the antioxidant effect on sample-A mistletoe oil.
[표 2]TABLE 2
겨우살이 오일의 항산화 효과Antioxidant Effect of Mistletoe Oil
실험 3. 수용성 겨우살이추출물의 호염증성 싸이토카인 Interleukin-8 생산 억제능 시험Experiment 3. Anti-inflammatory Cytokine Interleukin-8 Production Inhibition Test of Water-soluble Mistletoe Extract
수용성 겨우살이추출물 제조 예 5에 대해 항 염증 효과를 측정하였다. 일반적으로 human monocyte인 THP-1 세포는 외부자극물질인 LPS (Lipopolysaccharide) 에 의해 호염증성 싸이토카인인 Interleukin-8을 세포 밖으로 분비한다. IL-8은 염증을 유발하는 싸이토카인으로 알려져 있어 THP-1 세포에 의한 IL-8 생산 증감 여부를 통해 항 염증 효과 여부를 판단할 수 있다. The anti-inflammatory effect of the water-soluble mistletoe extract preparation 5 was measured. In general, THP-1 cells, which are human monocytes, secrete out the cell by interleukin-8, a pro-inflammatory cytokine, by LPS (Lipopolysaccharide). IL-8 is known to be an inflammation-inducing cytokine, and thus anti-inflammatory effects can be determined by increasing or decreasing IL-8 production by THP-1 cells.
- 시험방법 :- Test Methods :
(1) P35 dish에 배양된 세포를 24시간 후 시험시료(적정농도)와 혼합된 배지로 교환한다.(1) After 24 hours, the cells cultured in a P35 dish are replaced with a medium mixed with a test sample (titration).
(2) 24시간 동안 배양 후 사용된 배지를 시료로 사용한다.(2) The medium used after incubation for 24 hours is used as a sample.
(3) 시료를 적정농도로 희석 후 IL-8 microplate 각 well에 넣은 후 반응 시킨다.(3) After diluting the sample to proper concentration, put it into each well of IL-8 microplate and react.
(4) Conjugate을 넣고 일정시간 후 substrate로 반응 시킨다.(4) Add Conjugate and react with substrate after a certain time.
(5) 흡광도(A550nm)를 측정하고 표준곡선에따른 IL-8의 농도를 계산한다.(5) Measure the absorbance (A550nm) and calculate the concentration of IL-8 according to the standard curve.
- 평가방법 :- Assessment Methods :
(1) 염증반응인자인 IL-8의 생성량을 측정하여 시험물질의 자극성을 평가한다.(1) Evaluate the irritation of the test substance by measuring the amount of IL-8 that is an inflammatory response factor.
(2) IL-8의 농도가 적을수록 항염증 효과가 있는 것으로 판단한다.(2) The lower the concentration of IL-8 is judged to have an anti-inflammatory effect.
- 시험결과 :- Test result :
표 3은 시험물질이 함유되지 않은 control과 비교하여 최고 5% 농도를 사용한 시험샘플 1에서 IL-8의 생성이 약 60-70% 감소함으로 시험물질이 탁월한 항 염 증효과를 갖고 있는 것으로 확인 되었다. 총 시험물질을 3회로 시험을 하여 표 3으로 나타내었고 시험물질-1인 겨우살이 추출물의 IL-8생성 억제효과를 그래프로 도 5에 나타내었다.Table 3 shows that the test substance has an excellent anti-inflammatory effect by reducing the production of IL-8 by about 60-70% in Test Sample 1 using the highest concentration of 5% compared to the control without the test substance. . The total test substance was tested three times and is shown in Table 3, and the inhibitory effect of IL-8 production of the mistletoe extract of test substance-1 is shown in FIG.
시험물질-1의 결과를 보다 상세히 살펴보면 시험물질이 0.5%인 경우 IL-8 생성이 27% 감소 되었고 시험물질이 1.0%인 경우 Il-8생성이 59%로 크게 감소되어 탁월한 항 염증 개선효과가 있는 것으로 확인 할 수 있었다. (참고로 시험에 사용한 샘플은 지용성 성분임으로 세포에 영향을 주지 않는 범위인 1.0% 이하의 계면활성제를 첨가하여 사용하였다) Examining the results of Test Substance-1 in detail shows that 0.5% of the test substance reduced IL-8 production by 27%, and 1.0% of the test substance greatly reduced Il-8 production by 59%, resulting in an excellent anti-inflammatory effect. I could confirm that there is. (For reference, the sample used in the test was a fat-soluble component and was used by adding a surfactant of 1.0% or less, which does not affect cells.)
[표 3]TABLE 3
겨우살이추출물의 IL-8생성 억제효과Inhibitory Effect of Mistletoe Extract on IL-8 Production
실험 4. 수용성 겨우살이추출물의 항 산화 효과 테스트Experiment 4. Antioxidant Effect Test of Water-soluble Mistletoe Extract
상기 수용성 겨우살이추출물의 제조예 5에 대해 항 산화 효과 여부를 테스트 하였다. The preparation of Example 5 of the water-soluble mistletoe extract was tested for its antioxidant effect.
- 시험원리 및 시험방법 :-Test principle and test method:
활성산소를 제거해 주는 효소인 SOD(Superoxide dismutase)의 활성을 측정하여 시험물질이 활성산소에 의한 피부노화 방지에 효과가 있는지 평가한다. % inhibition이 높을수록 항 산화 효과가 큰 것으로 판단한다.The activity of superoxide dismutase (SOD), an enzyme that removes free radicals, is measured to evaluate whether the test substance is effective in preventing skin aging by free radicals. The higher the% inhibition, the greater the antioxidant effect.
- 시험방법 :- Test Methods :
(1) P35 dish에 배양된 세포를 24시간 후 시험물질(적정농도)와 혼합된 배지로 교환한다.(1) After 24 hours, the cells cultured in a P35 dish are replaced with a medium mixed with the test substance (titration).
(2) 24시간 동안 배양 후 cell lysis solution으로 cell lysate을 준비한다.(2) After culturing for 24 hours, prepare cell lysate with cell lysis solution.
(3) cell lysate에 적정농도의reaction buffer,Xanthine solution,NBT solution을 넣어준다.(3) Put the appropriate concentration of reaction buffer, Xanthine solution, and NBT solution into the cell lysate.
(4) 첫 측정시간 30초와 마지막 측정시간 5분30초의 흡광도(A500nm)를 측정한다.(4) Measure the absorbance (A500nm) at 30 seconds of the first measurement time and 5 minutes and 30 seconds of the last measurement time.
(5) % inhibition을 계산한다.(5) Calculate% inhibition.
- 시험결과 :- Test result :
시험물질에 대해 0.5%,1.0%,5.0%를 각각 3회씩 샘플을 준비하여 시험한 결과, control에 비해 5.0% 농도로 함유된 시험물질이 12-16%의 우수한 항 산화 억제능 효과를 나타내었다. 표 4는 항 산화능 실험 결과를 수치로 나타낸 것이다. 도 6은 샘플-A인 겨우살이 추출물에 대한 항 산화 효과를 그래프로 나타낸 것이다. Three samples of 0.5%, 1.0%, and 5.0% of the test material were prepared and tested. The test material containing 5.0% of the concentration of the test material showed an excellent antioxidant inhibitory effect of 12-16%. Table 4 shows the results of the antioxidant activity test. Figure 6 graphically shows the antioxidant effect on sample-A mistletoe extract.
[표 4]TABLE 4
겨우살이추출물의 항산화 효과Antioxidant Effect of Mistletoe Extract
상기 초임계 추출법으로 개발된 겨우살이오일 및 겨우살이추출물을 이용하여 실시한 처방예는 다음과 같다. 그러나, 이들 처방예는 예시일뿐, 본 발명의 화장료 조성물의 제형이 이에 제한되는 것은 아니다.Prescription examples performed using mistletoe oil and mistletoe extract developed by the supercritical extraction method are as follows. However, these prescription examples are only examples, and the cosmetic composition of the present invention Formulation Therefore Restricted Is no.
처방예 1: 영양로숀Prescription example 1: nutrition lotion
겨우살이 오일, 겨우살이 추출물을 함유한 화장료 중 영양로숀의 처방예는 다음 표 5와 같다.Prescription examples of nutritional lotion among the cosmetics containing mistletoe oil and mistletoe extract are shown in Table 5 below.
[표 5]TABLE 5
〈제조방법〉<Manufacturing method>
실시예 1 : 11, 12, 13, 14, 15를 혼합 교반 하면서 70∼75℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후, 유화기를 작용시키고 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10를 70∼75℃ 사이로 가열하여 투입한 뒤 혼합 유화한다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 50℃까지 냉각한 뒤 16,17,18번을 투입하고 재 유화한 후, 탈포 하여 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시킨다.Example 1 After heating 11, 12, 13, 14, and 15 to 70-75 ° C. with mixing and stirring, the product was put into the manufacturing unit, and then, an emulsifier was activated and 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9 and 10 are heated to 70 to 75 ° C., and then mixed and emulsified. After emulsification, the mixture is cooled to 50 ° C while stirring using a stirrer, and 16, 17, and 18 times are added thereto, re-emulsified, degassed, cooled to 25 ° C, and aged.
비교예 1 : 11, 12, 13, 14, 15를 혼합 교반 하면서 70∼75℃ 사이로 가열하 여 제조부에 투입한 후, 유화기를 작용시키고 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10를 70∼75℃ 사이로 가열하여 투입한 뒤 혼합 유화한다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 50℃까지 냉각한 뒤 17,18번을 투입하고 재 유화한 후, 탈포 하여 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시킨다.Comparative example 1: 11, 12, 13, 14, 15 was heated to 70-75 degreeC, mixing and stirring, and it put into a manufacturing part, and an emulsifier is made to work, and 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 is heated to 70-75 degreeC, and then mixed and emulsified. After emulsification, the mixture was cooled to 50 ° C. while stirring using a stirrer, and 17, 18 times were added thereto, re-emulsified, degassed, cooled to 25 ° C., and aged.
처방예 2: 영양크림Prescription 2: Nutritional Cream
겨우살이오일, 겨우살이추출물을 함유한 화장료 중 영양크림의 처방예는 다음 표 6과 같다.Prescription example of nutrition cream among the cosmetics containing mistletoe oil and mistletoe extract is shown in Table 6 below.
[표 6]TABLE 6
〈제조방법〉<Manufacturing method>
실시예 2 : 11, 12, 13,14를 혼합 교반 하면서 70∼75℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후, 유화기를 작용시키고 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10을 70∼75 ℃ 사이로 가열하여 투입한 뒤 유화한다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 50℃까지냉각한 뒤 15,16,17번을 투입하고 재 유화 시킨 후, 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시킨다.Example 2 After heating 11, 12, 13, 14 to 70-75 degreeC, mixing and stirring, and putting into an manufacturing part, an emulsifier is made to act, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 , 10 is heated to 70 to 75 ° C., and then emulsified. After emulsification, the mixture is cooled to 50 ° C. while stirring using a stirrer, 15, 16, and 17 times added, re-emulsified, cooled to 25 ° C., and aged.
비교예 2 : 11, 12, 13, 14를 혼합 교반 하면서 70∼75℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후, 유화기를 작용시키고 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10을 70∼75℃ 사이로 가열하여 투입한 뒤 유화한다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 50℃까지 냉각한 뒤 16,17번을 투입하고 재 유화 시킨 후, 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시킨다. Comparative example 2: 11, 12, 13, 14, mixed and stirred, heated to 70 ~ 75 ℃ and put into the manufacturing unit, then the emulsifier is activated and 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 After heating to 70 ~ 75 ℃ to emulsify. After emulsification, the mixture is cooled to 50 ° C. while stirring using a stirrer, and 16,17 times are added and re-emulsified, and then cooled to 25 ° C. and aged.
처방예 3: 마사지 크림Prescription 3: massage cream
겨우살이오일, 겨우살이추출물을 함유한 화장료 중 마사지 크림의 처방예는 다음 표 7과 같다.Prescription example of massage cream among the cosmetics containing mistletoe oil and mistletoe extract is shown in Table 7 below.
[표 7]TABLE 7
<제조방법><Production method>
실시예 3 : 8, 9, 10, 11, 12, 13을 혼합 교반 하면서 70∼75℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7을 70∼75℃ 사이로 가열하여 투입한 뒤 유화한다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반 하면서 50℃까지 냉각한 뒤 14,15,16번을 투입하고 재 유화 시킨 후, 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시킨다.Example 3 8, 9, 10, 11, 12, 13 while mixing and stirring to heat between 70 ~ 75 ℃ put into the manufacturing unit and then actuated emulsifier and 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 It is emulsified after heating to 70-75 degreeC. After emulsification, the mixture is cooled to 50 ° C. while stirring using a stirrer, and 14, 15, and 16 times are added thereto, re-emulsified, and then cooled to 25 ° C. and aged.
비교예 3 : 8, 9, 10, 11, 12, 13을 혼합 교반 하면서 70∼75℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 2, 3, 4, 5, 6, 7을 70∼75℃ 사이로 가열하여 투입한 뒤 유화한다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반 하면서 50℃까지 냉각한 뒤 15,16번을 투입하고 재 유화 시킨 후, 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시킨다.Comparative Example 3: 8, 9, 10, 11, 12, 13 while mixing and stirring to heat between 70 ~ 75 ℃ put into the manufacturing unit and then actuated emulsifier and 2, 3, 4, 5, 6, 7 70 ~ Heat to 75 ° C and add and emulsify. After emulsification, the mixture is cooled to 50 ° C while stirring using a stirrer, 15,16 times, re-emulsified, cooled to 25 ° C, and aged.
처방예 4: 영양 에센스Prescription 4: Nutritional essence
겨우살이오일, 겨우살이추출물을 함유한 화장료 중 영양 에센스의 처방예는 다음 표 8과 같다Prescription examples of nutritional essences of cosmetics containing mistletoe oil and mistletoe extract are shown in Table 8 below.
[표 8]TABLE 8
〈제조방법〉<Manufacturing method>
실시예 4 : 원료물질1, 2, 3, 4, 5 및 6을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질이라 칭한다. 상기 비이온계 양친매성 지질과 원료물질 7, 8 및 14를 혼합하고 일정한 온도에서 균질화하여 마이크로 플루다이져를 통과하고, 이어 원료물질 9를 일정한 온도에서 서서히 첨가하여 균질화한 후 다시 마이크로 플루다이져에 재차 통과시킨다. 그리고 10, 11, 12, 13을 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시킨다.Example 4 Raw materials 1, 2, 3, 4, 5 and 6 are homogenized at a constant temperature to be referred to as nonionic amphiphilic lipids. The nonionic amphiphilic lipid and
비교예 4 : 원료물질 2, 3, 4, 5 및 6을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질이라 칭한다. 상기 비이온계 양친매성 지질과 원료물질 7, 8 및 14를 혼합하고 일정한 온도에서 균질화하여 마이크로 플루다이져를 통과하고 이어 원료물질 9를 일정한 온도에서 서서히 첨가하여 균질화한 후 다시 마이크로 플루다 이져에 재차 통과시킨다. 그리고 10, 11, 12, 13을 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시킨다.Comparative Example 4: The raw materials 2, 3, 4, 5, and 6 were homogenized at a constant temperature to be referred to as nonionic amphiphilic lipids. The nonionic amphiphilic lipid and the
실험예 1. 피부 상태 개선효과 확인 실험Experimental Example 1. Experiment to confirm the effect of improving skin condition
실시예 1와 비교예 1의 영양로션에 대한 피부도포 시, 피부상태 개선효과를 확인하기 위하여 다음과 같은 임상 확인 실험을 하였다. 20∼55세의 여성층으로서 정상, 지성, 건성, 복합성 피부의 소유자 50명을 각각 25%씩으로 구성하여 피부상태 개선과 피부의 유수분 상태를 조사하였다. 동일인에게 안면 윗쪽 부분에는 실시예 1의 영양로션을, 안면 오른쪽 부분에는 비교예 1의 영양로션을 매일 아침 세안 후 피부에 1일 1회 20일간 도포한 후 피부상태 개선을 확인하기 위하여 피부상태 개선 정도를 측정하였다. 개선 정도는 설문조사를 토대로 실시 하였으며 시험결과를 표 9에 나타낸다.When applying the skin to the nutrition lotion of Example 1 and Comparative Example 1, the following clinical confirmation experiment was carried out to confirm the skin condition improvement effect. Fifty-five owners of normal, oily, dry, and complex skin were composed of 25% of women aged 20-55 years old to investigate the improvement of skin condition and the skin's oil and moisture status. To the same person, the nutrition lotion of Example 1 was applied to the upper part of the face and the nutrition lotion of Comparative Example 1 to the right part of the face. The degree was measured. The degree of improvement was based on a survey and the test results are shown in Table 9.
[표 9]TABLE 9
피부 상태 개선효과 확인 실험 결과Confirmation of skin condition improvement effect
상기 조사결과와 같이 겨우살이추출물을 첨가하여 제조한 실시예 1의 화장료가 첨가되지 않고 제조한 비교예 1보다 피부 개선효과가 우수하다는 것을 알 수 있다. It can be seen that the skin improvement effect is superior to that of Comparative Example 1 prepared without the addition of the cosmetic composition of Example 1 prepared by adding mistletoe extract as described above.
실험예 2.피부노화 개선효과 확인시험Experimental Example 2 Confirmation test for skin aging improvement effect
실시예 2와 비교예 2의 영양크림에 대한 피부도포 시, 피부노화 개선효과를 확인하기 위하여 20명의 왼쪽눈 가장자리에 하루에 두번 실시예 2를 적용하였다. 오른쪽 눈 가장자리는 비교예 2를 적용 하였다. 각각 처리하고 난 14일 후 피부표면의 주름깊이 감소를 Cutometer SEM 474에 의해 측정 하였다. Cutometer SEM 474는 주름의 깊이를 측정 하는 것으로서 값이 적을수록 피부노화 개선효과가 높고 피부 탄력성이 좋은 것이다. 피부노화개선도 값은 대조군에 비해 감소한 값을 %로 나 타내었으며 피검자 20명의 평균값을 결과에 나타내었다. 대조군은 시료를 처리하기 전의 측정값이다.Example 2 and Example 2 was applied twice a day to the edge of the left eye of 20 people to confirm the skin aging improvement effect during the skin coating on the nourishing cream of Example 2. Right eye edge was applied to Comparative Example 2. After 14 days of treatment, the decrease in the wrinkle depth of the skin surface was measured by Cutometer SEM 474. The cutometer SEM 474 measures the depth of wrinkles. The smaller the value, the higher the skin aging effect and the better skin elasticity. The skin aging improvement value was expressed as a percentage decrease compared to the control, and the average of 20 subjects was shown in the results. The control is the measurement before processing the sample.
[표 10]TABLE 10
피부탄력성 증가 시험결과Skin elasticity increase test result
이상 설명한 바와 같이, 본 발명에 따르면 겨우살이로부터 초임계추출법으로 얻은 지용성 겨우살이 오일과 수용성 겨우살이 추출물을 개발 완성할 수 있었고 이들 추출물들이 우수한 항염증효과, 항산화 효과를 갖는 것을 확인할 수 있었으며 또한 이들 추출물들은 피부독성이 없는 안전한 원료임을 확인할 수 있었다. 이들 원료를 함유한 화장료 조성물은 피부에 매우 안전하면서 외부자극으로부터 피부를 보호하고, 피부개선효과 및 노화개선효과 등을 발휘할 수 있다.As described above, according to the present invention, the fat-soluble mistletoe oil and the water-soluble mistletoe extract obtained by supercritical extraction from mistletoe were able to be developed and completed, and these extracts were confirmed to have excellent anti-inflammatory and antioxidant effects. It was confirmed that it is a safe raw material without toxicity. The cosmetic composition containing these raw materials is very safe for the skin and protects the skin from external stimuli, and can exert skin improvement effect and aging improvement effect.
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