KR101433823B1 - External Composition for Skin Using an Extract or a Fraction of Padina arborescens - Google Patents
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Abstract
본 발명은 스타필로코쿠스 아우레우스, 스타필로코쿠스 에피더미디스 및/또는 프로피오니박테리움 아크네스에 대해 항균 활성 또는 여드름 개선 활성을 나타내는 부챗말(Padina arborescens) 추출물 및/또는 그 분획물을 이용한 피부 외용제 조성물을 개시한다.The present invention is Staphylococcus aureus, Staphylococcus epi pile section showing the discharge and / or propionic sludge tumefaciens arc Ness antimicrobial activity or improved activity against acne chaetmal (Padina arborescens ) extract and / or fractions thereof.
Description
본 발명은 부챗말 추출물 또는 분획물을 이용한 피부 외용제 조성물에 관한 것이다. 구체적으로 본 발명은 부챗말 추출물 또는 분획물을 이용한 항균 활성 또는 여드름 개선 활성을 갖는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.
The present invention relates to a composition for external application to skin using a parturient extract or fraction. More particularly, the present invention relates to a composition for external application for skin having antibacterial activity or acne-improving activity using a satechokal extract or a fraction.
인간의 피부는 주위환경과 직접 접촉하는 기관으로서 각종 피부 질환에 관여하는 세균, 곰팡이 등의 감염이 쉽게 일어난다.Human skin is an organ that makes direct contact with the surrounding environment, and infections such as bacteria and fungi that are involved in various skin diseases are easily caused.
예컨대 피부에 화농을 일으키는 황색포도상구균인 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus)을 비롯하여 피부 상재균인 스타필로코쿠스 에피더미디스(Staphyococcus epidermidis), 여드름균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) 등이 피부에 존재하며, 이 균들은 피부상에 분비된 피지나 땀을 분해시켜 냄새를 발생시키며, 이와 더불어 그 분해 산물들은 피부에 자극을 주고 염증을 발생시킨다.For example, Staphylococcus aureus causing a star maturation skin Philo nose kusu aureus (Staphylococcus aureus), including the skin flora is Staphylococcus epidermidis (Staphyococcus epidermidis ), acne bacterium Propionibacterium acnes ) are present in the skin. These fungi decompose the sebum and sweat secreted on the skin to generate an odor. In addition, the degradation products stimulate the skin and cause inflammation.
특히 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)는 지방산 분해효소인 리파아제(lipase)를 이용하여 피지를 분해시켜서 유리지방산을 생성시킨다. 이들 유리지방산은 피부에 자극을 줄 뿐만 아니라 여드름에서 볼 수 있는 붉은 발진인 구진, 농포, 결절 등의 염증성 병변을 유발시킨다.Particularly Propionibacterium < RTI ID = 0.0 > acnes ) uses lipase, a fatty acid decomposing enzyme, to decompose sebum to produce free fatty acids. These free fatty acids not only stimulate the skin but also cause inflammatory lesions such as papules, pustules, and nodules, which are red rashes found in acne.
이러한 세균들에 대한 항균성 물질로서 트리클로카반(triclocarban), 트리클로산(triclosan) 등 항균성 화합물이 사용되어 왔으나 장기간 사용시 피부 작열감, 화끈거림, 피부 발적 등의 피부 부작용을 유발하는 것으로 알려져 있다.Antimicrobial compounds such as triclocarban and triclosan have been used as antimicrobial agents against such bacteria, but they are known to cause side effects such as skin burning, burning, and skin redness during long-term use.
따라서 최근 피부 부작용이 적은 천연 추출물에 대한 연구가 진행되어 왔으며, 예컨대 녹차 카테킨, 유칼립투스 잎 오일, 레몬 껍질 오일, 조릿대 엑기스, 알로에 베라 껍질 추출물 등이 보고되어 있다(국내 공개특허 제2010-0088878호, 국내 공개특허 제2005-0010914호, 국내 공개특허 제2010-0088296호) Recently, research has been conducted on natural extracts having less side effects of skin. For example, green tea catechin, eucalyptus leaf oil, lemon peel oil, sage extract, and aloe vera skin extract have been reported (Korean Patent Publication No. 2010-0088878, Korean Patent Publication No. 2005-0010914, Korean Patent Publication No. 2010-0088296)
그물바탕말과 부챗말속은 부산에서 Okamura`s (1982)에 의해 Padina durvillaeI가 처음 보고되었으며, 우리나라에서는 P. arborescens Holmes, P. australis Hauck, P. boryana Thivy in Taylor, P. crassa Yamada, P. japonica Yamada, and P. minor Yamada 등 6종이 생육하고 있는 것으로 보고되어 있다(Lee , Y.P. and S. Kang. 2001. A catlogue of the seaweeds in Korea. Cheju National University Press. pp. 662). The genus was based on the net wealth horse chaetmal the Padina durvillaeI by Okamura`s (1982) first reported in Busan, Korea in P. arborescens Holmes, P. australis Hauck, P. boryana Thivy in Taylor, P. crassa Yamada, P. , and P. japonica Yamada, and P. minor Yamada (Lee, YP and S. Kang, 2001. A catlogue of the seaweeds in Korea, Cheju National University Press, pp. 662).
부챗말(Padina arborescens)은 일본과 우리나라에 분포하고 있는데, 우리나라는 함경도, 부산, 비진도, 거제도, 남해도, 추자도, 제주도 등지에 분포한다고 알려져 있다. 몸은 편평하고 중륵이 없고 부채꼴이다. 단조이거나 또는 노성하면 방사상으로 째어진다. 크기는 6∼7cm, 때로는 25∼30cm이다. 하부는 갈색의 모용이 있다. 생식세포의 군은 대체로 몸의 이면, 즉 성장연이 말려 들어간 쪽의 면에 생기고 몸의 모선대와 교호로 환상으로 배열된다. 질은 두꺼운 혁질이고 건조하면 특히 하부는 나무처럼 단단하고 대지에 붙지 않는다(환경부 국립생물자원관. 대한민국 생물지 한국의 조류(Algae). 2010. 제2권 2호. pp 46-48). Padina arborescens is distributed in Japan and Korea. It is known that Korea is distributed in Hamkido, Busan, Bijin Do, Geoje Island, Namhae Island, Chuza Island and Jeju Island. The body is flat, with no midrib and flat. If it is forged or aged, it becomes radial. The size is 6 to 7 cm, sometimes 25 to 30 cm. The lower part is brown. The groups of germ cells are generally arranged on the back of the body, that is, on the side of the growth side where the growth kites are curled, and alternately with the body's forehead. The vagina is thicker and swollen, especially when it is dry, the lower part is harder like a tree and does not stick to the earth (Ministry of Environment, National Biological Resource Center, Korea Biogas Korea Algae 2010. 2 Vol.2 No.2 pp. 46-48).
부챗말의 생리활성으로는 H2O2에 의한 혈관내피세포주인 ECV304 세포의 산화적 스트레스를 억제한다는 항산화 활성이 보고되어 있다(Korean J. Oriental Physiology & Pathology 22(6):1431~1438, 2008).The antioxidant activity of ECV304 cells, a vascular endothelial cell line induced by H 2 O 2 , has been reported to be the antioxidative activity of Bucholt (Korean J. Oriental Physiology & Pathology 22 (6): 1431 ~ 1438, 2008 ).
본 발명은 부챗말 추출물 또는 그 분획물의 피부 세균들에 대한 항균 활성 등을 이용한 피부 외용제 조성물을 개시한다.
The present invention discloses a composition for external application for skin using antibacterial activity against the bacterium of the extract of Bacchae or a fraction thereof.
본 발명의 목적은 부챗말 추출물 또는 그 분획물을 이용한 항균성 피부 외용제 조성물을 제공하는 데 있다.It is an object of the present invention to provide an antimicrobial skin topical composition using a submerged extract or a fraction thereof.
본 발명의 다른 목적은 부챗말 추출물 또는 그 분획물을 이용한 여드름 개선용 피부 외용제 조성물을 제공하는 데 있다.It is another object of the present invention to provide a composition for external application for skin for improving acne using a parturfacial extract or a fraction thereof.
본 발명의 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.
Specific objects of the present invention will be described below.
일 측면에 있어서, 본 발명은 부챗말 추출물 또는 그 분획물을 이용한 항균성 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.In one aspect, the invention relates to an antimicrobial skin topical composition using a parturfacial extract or a fraction thereof.
본 발명자들은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 부챗말 추출물 또는 그 분획물의 항균 활성을 확인하기 위하여 부챗말의 에탄올 수용액 추출물(에탄올과 물의 혼합 용매로서 80%(v/v) 에탄올임)을 제조함과 함께 그것의 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트 및 부탄올의 순차적 분획물을 제조하고, 그 추출물과 순차적 분획물의 피부 미생물들 즉 황색포도상구균인 스타필로코쿠스 아우레우스(S. aureus KCTC 1927), 스타필로코커스 에피더미디스(S. epidermidis SK4와, 항생제 내성균인 S. epidermidis SK9 및 S. epidermidis SK19 포함), 및 프로피오니박테리움 아크네스(P. acnes ATCC 3314와 항생제 내성균인 P. acnes SKA7 포함)에 대한 항균 활성을 원판 확산법(Disc diffusion assay), 최소저해농도(Minimum inhibitory concentration, MIC) 및 최소세균사멸농도(Minimal bactericidal concentration, MBC)로 평가하였다.As shown in the following Examples and Experimental Examples, the inventors of the present invention used an aqueous solution of ethanolic aqueous solution of Bucholt (80% (v / v) ethanol as a mixed solvent of ethanol and water) And a sequential fraction of its hexane, dichloromethane, ethylacetate and butanol is prepared, and the skin of the extract and sequential fractions Microorganisms such as S. aureus KCTC 1927, Staphylococcus epidermidis (including S. epidermidis SK4, S. epidermidis SK9 and S. epidermidis SK19, which are antibiotic resistant bacteria), Staphylococcus aureus And Propionibacterium acnes ( P. acnes) ATCC 3314 and P. acnes SKA7) were evaluated by Disc diffusion assay, Minimum inhibitory concentration (MIC) and Minimal bactericidal concentration (MBC) .
그 결과, 처리 농도가 1 mg/ml인 원판 확산법에 의한 항균 활성 평가 결과에 있어서는, 에탄올 수용액 추출물은 스타필로코쿠스 아우레우스와 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK4에 대해서 활성을 보였고, 헥산 분획물, 디클로로메탄 분획물 및 에틸아세테이트 분획물은 항생제 내성균을 포함하여 실험에 사용한 모든 균에 대해서 활성을 보였다. 나머지 분획물인 부탄올 분획물과 잔여 물층은 모든 피부 미생물들에 대해서 항균 활성을 나타내지 않았다.As a result, in the results of the antimicrobial activity evaluation by the disk diffusion method with the treatment concentration of 1 mg / ml, the ethanol aqueous solution extract showed activity against Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis SK4, , Dichloromethane fraction and ethyl acetate fraction showed activity against all bacteria used in the experiment including antibiotic resistant bacteria. The remaining fractions, the butanol fraction and the residual layer, did not show antimicrobial activity against all skin microorganisms.
또한 최소억제농도에 의한 항균 활성 평가 결과에 있어서는, 에탄올 수용액 추출물은 모든 균에 대해서 1 내지 2 ㎎/㎖ 범위의 최소저해농도를 나타내었고, 헥산 분획물, 디클로로메탄 분획물 및 에틸아세테이트 분획물은 0.25 내지 2 ㎎/㎖ 범위의 최소 저해 농도를 나타내었다. 여기서도 나머지 분획물인 부탄올 분획물과 잔여 물층은 모든 피부 미생물들에 대해서 항균 활성을 나타내지 않았다.As a result of the evaluation of the antimicrobial activity by the minimum inhibitory concentration, the ethanol aqueous solution extract showed a minimum inhibitory concentration in the range of 1 to 2 mg / ml for all bacteria, and the hexane fraction, the dichloromethane fraction and the ethyl acetate fraction were 0.25 to 2 Lt; RTI ID = 0.0 > mg / ml. ≪ / RTI > Here, the remaining fractions, butanol fraction and residue layer, did not exhibit antimicrobial activity against all skin microorganisms.
마지막으로 최소사멸농도에 의한 항균 활성 평가 결과에 있어서는, 헥산 분획물이 스타필로코쿠스 아우레우스 및 항생제 내성균인 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK9에 대해서만 3 ㎎/㎖의 최소세균사멸농도를 보였고, 에틸아세테이트 분획물은 항생제 내성균인 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK9 및 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK19에 대해서 각각 3 ㎎/㎖ 및 2 ㎎/㎖의 최소세균사멸농도를 보였다.Finally, as a result of evaluation of antimicrobial activity by the minimum killing concentration, the hexane fraction showed a minimum bacteriostatic concentration of 3 mg / ml only for Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis SK9 which is an antibiotic resistant bacterium, Ethyl acetate fractions were found to contain antibiotic-resistant bacteria Staphylococcus epidermidis SK9 and Staphylococcus epidermidis SK19 showed the minimum bactericidal concentration of 3 ㎎ / ㎖ and 2 ㎎ / ㎖, respectively.
상기 실험 결과는 부챗말의 에탄올 수용액 추출물과, 그것의 순차적 분획물 중에서 헥산 분획물, 디클로메탄 분획물 및 에틸아세테이트 분획물이 피부 미생물에 대해서 항균 용도로 사용될 수 있음을 보여주는 것이라 할 수 있으며, 특히 헥산 분획물과 에틸아세테이트 분획물이 피부 미생물에 대한 항균 용도로 유용하게 사용될 수 있음을 보여주는 것이라 할 수 있다.The experimental results show that the ethanol aqueous solution of Bucholt and its sequential fractions, hexane fraction, dichloromethane fraction and ethyl acetate fraction, can be used for antibacterial use against skin microorganisms. Especially, Ethyl acetate fraction can be usefully used for antibacterial use against skin microorganisms.
전술한 바를 고려할 때, 본 발명의 항균성 피부 외용제 조성물은 부챗말의 에탄올 수용액 추출물, 그 에탄올 수용액 추출물의 헥산 분획물, 그 에탄올 수용액 추출물의 디클로메탄 분획물 및/또는 그 에탄올 수용액 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다.In view of the foregoing, the composition for external application for an antibacterial dermatological composition of the present invention is characterized in that an aqueous solution of ethanol aqueous solution of Bucholt, a hexane fraction of the aqueous ethanol extract of the extract, a dichloromethane fraction of the aqueous ethanol extract and / or an ethyl acetate fraction of the aqueous ethanol extract As an active ingredient.
본 명세서에서, "부챗말 에탄올 수용액 추출물"은 부챗말을 에탄올 수용액에 침지시켜 얻어진 추출물을 의미한다. 부챗말을 에탄올 수용액에 침지시겨 얻는 한, 추출 방법은 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사 등 임의의 방식이 모두 적용될 수 있다.In the present specification, "extract of aqueous solution of microcapsule ethanol" means an extract obtained by immersing microcapsule in aqueous ethanol solution. As long as the subchromates are immersed in an aqueous solution of ethanol, the extraction method can be applied to any method such as cold-rolling, refluxing, heating, and ultrasonic irradiation.
또 본 명세서에서, "부챗말 에탄올 수용액 추출물의 헥산 분획물"은 상기 부챗말 에탄올 수용액 추출물을 헥산과 혼합하고 정치시켜 얻어진 분획물 또는 추출 용매가 제거된 고형상의 부챗말 에탄올 수용액 추출물을 물에 현탁하고 이를 헥산과 혼합하고 정치시켜 얻어진 분획물을 의미한다.In the present specification, the "hexane fraction of the aqueous extract of bacutecoat aqueous ethanol solution" is obtained by mixing the extract of aqueous solution of bacchanal ethanol with the hexane and suspending the fractions obtained by standing or extracting the aqueous aqueous solution of bacchanal ethanol from which the extraction solvent has been removed, Which is then mixed with hexane and allowed to stand.
또 본 명세서에서, "부챗말 에탄올 수용액 추출물의 디클로메탄 분획물"은 상기 부챗말 에탄올 수용액 추출물을 디클로메탄과 혼합하고 정치시켜 얻어진 분획물, 상기 부챗말 에탄올 수용액 추출물에서 추출 용매를 제거하여 얻은 고형상의 부챗말 에탄올 수용액 추출물을 물에 현탁한 후 이를 디클로메탄과 혼합하고 정치시켜 얻어진 분획물, 또는 상기 고형상의 부챗말 에탄올 수용액 추출물을 물에 현탁하고 이를 헥산 및 디클로메탄으로 순차적으로 분획하여 얻은 디클로메탄층의 분획물을 의미한다. 여기서 "헥산과 디클로메탄으로 순차적으로 분획한다"는 의미는 고형상의 부챗말 에탄올 수용액 추출물을 물에 현탁하고 이를 헥산과 혼합하고 정치시킨 후 헥산층의 분획물을 제외한 잔여층인 물층을 디클로메탄과 혼합·정치시켜 분획한다는 의미이다.In the present specification, the "dichloromethane fraction of the aqueous extract of bacoulous ethanol aqueous solution" is a fraction obtained by mixing the aqueous extract of bacchanal ethanol with the dichloromethane and standing, the extract obtained by removing the extraction solvent from the aqueous extract of bacchanal ethanol, A fraction obtained by suspending an aqueous solution of aqueous ethanolic aqueous solution of baclocat in water and admixing it with dichloromethane or an aqueous solution of aqueous solution of baclocat ethanol in the form of a suspension is suspended in water and then fractionated successively with hexane and dichloromethane ≪ / RTI > Here, "sequential fractionation with hexane and dichloromethane" means that a solid aqueous solution of aqueous ethanol solution of pectin is suspended in water, mixed with hexane and allowed to stand, and then the water layer, which is the remaining layer excluding the fraction of hexane layer, It means that it is separated and mixed with methane.
또 본 명세서에서, "부챗말 에탄올 수용액 추출물의 에틸아세테이트 분획물"은 상기 부챗말 에탄올 수용액 추출물을 에틸아세테이트와 혼합하고 정치시켜 얻어진 분획물, 상기 부챗말 에탄올 수용액 추출물에서 추출 용매를 제거하여 얻은 고형상의 부챗말 에탄올 수용액 추출물을 물에 현탁한 후 이를 에틸아세테이트와 혼합·정치시켜 얻어진 분획물, 또는 상기 고형상의 부챗말 에탄올 수용액 추출물을 물에 현탁하고 이를 헥산, 디클로메탄 및 에틸아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 에틸아세테이트층의 분획물을 의미한다. 여기서 "헥산, 디클로메탄 및 에틸아세테이트로 순차적으로 분획한다"는 의미는 고형상의 부챗말 에탄올 수용액 추출물을 물에 현탁하고 이로부터 헥산 분획물과 디클로메탄 분획물을 얻은 후 잔여층인 물층을 에틸아세테이트와 혼합·정치시켜 분획한다는 의미이다.In the present specification, the "fraction of ethyl acetate in the aqueous extract of bacoulocate ethanol" is a fraction obtained by mixing the aqueous extract of bacchanal ethanol with the ethyl acetate and leaving the extract solvent in the aqueous extract of bacchanal ethanol. The fractions obtained by suspending the aqueous solution of aqueous ethanolic solution of bacoulombs in water and admixing them with ethyl acetate or the aqueous solution of aqueous solution of baclocat ethanol in the form of solid are suspended in water and then fractionated with hexane, dichloromethane and ethyl acetate Ethyl acetate < / RTI > Here, "sequential fractionation with hexane, dichloromethane and ethyl acetate" means that a solid aqueous solution of aqueous ethanol solution of bocohcohol is suspended in water, from which a hexane fraction and a dichloromethane fraction are obtained, It means that it is mixed with acetate and left to stand.
또 본 명세서에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.In the present specification, the term " active ingredient "alone means an ingredient which exhibits the desired activity or which can exhibit activity together with a carrier which is not itself active.
또 본 명세서에서, "항균성"이란 피부 미생물인 스타필로코쿠스 아우레우스, 스타필로코쿠스 에피더미디스 및 프로피오니박테리움 아크네스로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 미생물을 사멸시키거나 그 증식을 억제하는 성질 또는 용도를 의미한다.As used herein, the term "antimicrobial activity" refers to killing or inhibiting the proliferation of at least one microorganism selected from the group consisting of Staphylococcus aureus , Staphylococcus epidermidis and Propionibacterium acnes, To the nature or use of
본 명세서에서 특별히 정의되지 아니한 기타의 용어는 국어사전적 의미나 당업계에서 일반적으로 받아들여지고 있는 의미를 따른다.Other terms not specifically defined in this specification are intended to refer to either a national language meaning or a commonly accepted meaning in the art.
본 발명의 항균성 피부 외용제 조성물에 있어서, 바람직한 유효성분은 부챗말 에탄올 수용액 추출물의 헥산 분획물, 디클로메탄 분획물 또는 에틸아세테이트 분획물이다. 더 바람직하게는 부챗말 에탄올 수용액 추출물의 헥산 분획물 또는 에틸아세테이트 분획물이다. 또한 최소사멸농도에 대한 아래의 실험예가 보여주듯이, 유효성분이 헥산 분획물일 경우 항균성은 스타필로코쿠스 아우레우스 및 항생제 내성균인 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK9에 대한 항균성으로, 또 유효성분이 에틸아세테이트 분획물일 경우 항균성은 항생제 내성균인 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK9 및 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK19에 대한 항균성으로 이해되는 것이 바람직하다. In the antimicrobial dermatological composition of the present invention, the preferred active ingredient is a hexane fraction, a dichloromethane fraction or an ethyl acetate fraction of an aqueous solution of bacutecoat aqueous ethanol. More preferably the hexane fraction or the ethyl acetate fraction of the aqueous solution of bovine cellular ethanol. Also, as shown in the following experimental example for the minimum dead concentration, when the active ingredient is the hexane fraction, the antimicrobial activity is antifungal property against Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis SK9, which is an antibiotic resistant strain, and the active ingredient is ethyl acetate In the case of fractions, the antimicrobial activity is determined by the antibiotic resistant bacteria Staphylococcus epidermidis SK9 and Staphylococcus epidermidis It is preferable that the antimicrobial activity against SK19 is understood.
다른 측면에 있어서, 본 발명은 여드름 개선용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.In another aspect, the present invention relates to a composition for external application for skin for improving acne.
아래의 실험예는 부챗말 에탄올 수용액 추출물, 그것의 헥산 분획물, 디클로로메탄 분획물, 및 에틸아세테이트 분획물이 여드름균인 프로피오니박테리움 아크네스에 대해서 항균 활성을 보임을 보여주며, 특히 에틸아세테이트 분획물이 포함된 로션을 제조하여 관능평가를 실시한 경우 2/3 이상의 사용자가 여드름이 개선되었다고 응답하였음을 보여준다.The following experimental examples show that the aqueous extract of bacoulomb ethanol, its hexane fraction, the dichloromethane fraction and the ethyl acetate fraction exhibit antimicrobial activity against the bacterium Propionibacterium acnes, especially the ethyl acetate fraction 2% < / RTI > < RTI ID = 0.0 > 3% < / RTI >
따라서 본 발명의 여드름 개선용 피부 외용제 조성물은 유효성분으로서 부챗말 에탄올 수용액 추출물, 그것의 헥산 분획물, 디클로로메탄 분획물 및/또는 에틸아세테이트 분획물을 포함함을 특징으로 한다.Accordingly, the composition for external application for skin improvement of acne of the present invention is characterized by containing, as an active ingredient, an aqueous solution of bacutecoat ethanol, a hexane fraction thereof, a dichloromethane fraction and / or an ethyl acetate fraction.
본 발명의 여드름 개선용 피부 외용제 조성물은 유효성분으로서 바람직하게는 항균 활성이 가장 뛰어나고 관능평가에서도 여드름 개선 활성이 확인된 에틸아세테이트 분획물을 포함하는 경우이다. The composition for external application for skin for improving acne according to the present invention is preferably an active ingredient containing an ethyl acetate fraction having the best antimicrobial activity and having an acne-improving activity in sensory evaluation.
본 발명의 여드름 개선용 피부 외용제 조성물에 있어서, 상기 부챗말 에탄올 수용액 추출물의 의미, 상기 헥산 분획물의 의미, 상기 디클로로메탄 분획물의 의미, 상기 에틸아세테이트 분획물의 의미, 상기 유효성분의 의미 등과 관련하여서는 전술한 바가 그대로 유효하다.With respect to the meaning of the aqueous extract of sub-choc ethanol, the meaning of the hexane fraction, the meaning of the dichloromethane fraction, the meaning of the ethyl acetate fraction, and the meaning of the active ingredient in the composition for external application for skin improvement of acne of the present invention, One bar is still valid.
한편 본 발명의 항균성 피부 외용제 조성물 또는 여드름 개선용 피부 외용제 조성물(이하 "본 발명의 피부 외용제 조성물")은 그 유효성분인 부챗말 에탄올 수용액 추출물 또는 그 분획물을 항균 활성 또는 여드름 개선 활성을 나타낼 수 있는 한 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 20.000 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 항균 활성 또는 여드름 개선 활성을 나타낼 수 있는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.Meanwhile, the composition for external application for an antibacterial dermatological composition of the present invention or the composition for external application for improving acne (hereinafter referred to as "composition for external application for skin of the present invention"), (Effective amount) depending on the intended use, formulation, purpose of blending, etc. The usual effective amount will be determined within the range of 0.001 wt% to 20.000 wt% based on the total weight of the composition. Herein, "effective amount" refers to an amount of an effective ingredient capable of exhibiting antibacterial activity or acne improving activity. Such effective amounts can be determined experimentally within the ordinary skill of those skilled in the art.
본 발명의 피부 외용제 조성물은 구체적인 양태에 있어서 화장료 조성물로 파악할 수 있다.The composition for external application for skin of the present invention can be identified as a cosmetic composition in a specific embodiment.
본 발명의 조성물이 화장료 조성물로서 파악될 경우, 그 화장료 조성물은 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 에멀젼, 로션, 크림(수중유적형, 유중수적형, 다중상), 용액, 현탁액(무수 및 수계), 무수 생성물(오일 및 글리콜계), 젤, 마스크, 팩, 분말 등의 제형으로 제조될 수 있다.When the composition of the present invention is identified as a cosmetic composition, the cosmetic composition may be prepared in various forms, for example, emulsion, lotion, cream (oil-in-water type, water-in-water type, multiphase), solution, suspension (Water and water), anhydrous products (oil and glycol), gel, mask, pack, powder and the like.
본 발명의 조성물은 그 유효성분을 포함하는 이외에 화장료 제제에 있어서 수용가능한 담체를 포함할 수 있다. The composition of the present invention may contain an acceptable carrier in cosmetic formulations other than those containing the active ingredient.
여기서 "화장료 제제에 있어서 수용가능한 담체"란 화장료 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성을 지니지 않는 것을 말한다.As used herein, the term " acceptable carrier for a cosmetic preparation "refers to a compound or composition that is already known and used in the cosmetic preparation, or a compound or composition to be developed in the future, and has no toxicity that the human body can adapt to when contacted with skin.
상기 담체는 본 발명의 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 1 중량 % 내지 약 99.99 중량 %, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 50 중량% 내지 약 99 중량 %로 포함될 수 있다. The carrier may be included in the composition of the present invention in an amount of from about 1% by weight to about 99.99% by weight, preferably from about 50% by weight to about 99% by weight of the composition, based on the total weight thereof.
그러나 상기 비율은 화장료의 전술한 바의 제형에 따라 또 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴이나 손)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다. However, since the ratio depends on the above-mentioned formulation of the cosmetic composition and its specific application site (face or hands) or its preferable application amount, the ratio is limited in any aspect to the scope of the present invention It should not be.
한편 상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다. Examples of the carrier include alcohols, oils, surfactants, fatty acids, silicone oils, humectants, moisturizers, viscosifiers, emulsifiers, stabilizers, sunscreens, coloring agents and perfumes.
상기 담체로서 사용될 수 있는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.The compounds / compositions which can be used as the carrier and which can be used as alcohols, oils, surfactants, fatty acids, silicone oils, wetting agents, moisturizers, viscosifiers, emulsions, stabilizers, sunscreens, A person skilled in the art can select and use appropriate substances / compositions.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에 알려진 피부 보습 활성 물질, 항아토피 활성 물질, 항여드름 활성 물질, 미백 활성 물질 등 기능성 물질을 추가로 포함할 수도 있다.The cosmetic composition of the present invention may further comprise a functional substance such as a skin moisturizing active substance, an anti-atopic active substance, an anti-acne active substance, a whitening active substance, etc., which are known in the art.
본 발명의 조성물은 또 다른 구체적인 양태에 있어 피부 세정제 조성물로 파악할 수 있다. The composition of the present invention can be grasped as a skin cleanser composition in another specific embodiment.
본 발명의 피부 세정제 조성물은 고형상 또는 액상으로 제조될 수 있으며, 바디용 비누, 핸드용 비누, 세안제 등으로 제품화될 수 있다. The skin cleanser composition of the present invention can be manufactured in a solid or liquid form, and can be made into a soap for body, a soap for hand, a cleanser and the like.
본 발명의 피부 세정제에는 그 유효성분인 부챗말 에탄올 수용액 추출물 또는 분획물의 항균 활성을 저해하지 않은 한, 당업계에서 세정제의 제조에 사용되는 임의의 성분을 포함할 수 있다. The skin cleansing agent of the present invention may contain any component used in the production of a detergent in the art, so long as it does not inhibit the antibacterial activity of the aqueous extract of baclocta ethanol or the fraction thereof, which is an active ingredient thereof.
이러한 임의의 성분으로서는 예컨대, 폴리옥시에틸렌알킬에테르 황산염 등의 음이온 계면활성제, 아민 옥시드, 폴리옥시에틸렌알킬에테르 등의 비이온 계면활성제, 유분, 실리콘류, 저급 또는 고급 알코올 등의 알코올류, 라놀린 유도체, 단백 유도체, 아크릴 수지 분산액, 양이온 성 폴리머, 음이온성 폴리머, 비이온 성 폴리머, 비타민 등의 약제, 살균제, 방부제, pH 조정제, 산화 방지제, 금속 봉쇄제, 자외선 흡수제, 동식물 추출물 또는 그 유도체, 색소, 항료, 안료, 무기물 분체, 점토 광물, 나일론, 폴리에틸렌 등의 수불용성 폴리머 분체, 프로필렌 글리콜, 에틸알콜, 글리세린, 물 등을 들 수 있다.Examples of such optional components include anionic surfactants such as polyoxyethylene alkyl ether sulfate and the like, nonionic surfactants such as amine oxide and polyoxyethylene alkyl ether, alcohols such as oils, silicones, lower or higher alcohols, lanolin A preservative, a pH adjuster, an antioxidant, a metal blocker, an ultraviolet absorber, an animal or plant extract, or a derivative thereof, a protein derivative, an acrylic resin dispersion, a cationic polymer, an anionic polymer, a nonionic polymer, Water-insoluble polymer powders such as a colorant, a pigment, a pigment, an inorganic powder, a clay mineral, nylon and polyethylene, propylene glycol, ethyl alcohol, glycerin and water.
본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서 약제학적 조성물로 파악될 수 있다.The composition of the present invention can be identified as a pharmaceutical composition in another specific embodiment.
본 발명의 약제학적 조성물은 그 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 등을 포함하여, 국소형 제형 예컨대 크림, 로션, 연고(반고형의 외용약), 마이크로로에멀젼, 젤, 페이스트, 경피제제(TTS)(예컨대 패치제, 붕대 등) 등으로 제조될 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may be formulated into a wide variety of dosage forms, including pharmaceutically acceptable carriers, excipients and the like, in addition to the active ingredient, and may be formulated into a wide variety of preparations such as creams, lotions, ointments (semi-solid external medicine) (TTS) (e.g., patches, bandages, etc.), and the like.
상기에서 "약제학적으로 허용되는" 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응가능한 이상의 독성을 지니지 않는다는 의미이다.The term "pharmaceutically acceptable" as used herein means that the application (prescribing) subject does not have the above-mentioned toxicity that is adaptable without inhibiting the activity of the active ingredient.
약제학적으로 허용되는 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 전분(예컨대 옥수수 전분, 감자 전분 등), 셀룰로오스, 그것의 유도체(예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 등), 맥아, 젤라틴, 탈크, 고체 윤활제(예컨대 스테아르산, 스테아르산 마그네슘 등), 황산 칼슘, 식물성 기름(예컨대 땅콩 기름, 면실유, 참기름, 올리브유 등), 폴리올(예컨대 프로필렌 글리콜, 글리세린 등), 알긴산, 유화제(예컨대 TWEENS), 습윤제(예컨대 라우릴 황산 나트륨), 착색제, 풍미제, 안정화제, 항산화제, 보존제, 물, 식염수, 인산염 완충 용액 등을 들 수 있다. 이러한 담체는 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적당한 것을 하나 이상 선택하여 사용할 수 있다.Examples of pharmaceutically acceptable carriers include lactose, glucose, sucrose, starch (e.g. corn starch, potato starch, etc.), cellulose, derivatives thereof (e.g. sodium carboxymethylcellulose, ethylcellulose, etc.), malt, gelatin, talc, (E.g., peanut oil, cottonseed oil, sesame oil, olive oil, etc.), polyols (e.g., propylene glycol, glycerin, etc.), alginic acid, emulsifiers (e.g., TWEENS), wetting agents (For example, sodium lauryl sulfate), a coloring agent, a flavoring agent, a stabilizer, an antioxidant, a preservative, water, a saline solution, and a phosphate buffer solution. The carrier may be selected from one or more of suitable pharmaceutical formulations according to the formulation of the pharmaceutical composition of the present invention.
부형제도 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적합한 것을 선택하여 사용할 수 있는데, 예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 히드로프로필메틸셀룰로오스, 알긴산 나트륨, 폴리비닐피롤리돈 등의 현탁제나 분산제 등을 들 수 있다. The excipient may be selected according to the formulation of the pharmaceutical composition of the present invention. For example, suspending agents such as sodium carboxymethyl cellulose, methyl cellulose, hydropropyl methyl cellulose, sodium alginate, polyvinyl pyrrolidone, .
본 발명의 약제학적 조성물은 그 1일 투여량이 통상 0.001 ~ 150 mg/kg 체중 범위이고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중, 환자의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되는 것이므로 상기 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 아니 된다.
The daily dose of the pharmaceutical composition of the present invention is usually 0.001 to 150 mg / kg body weight, and may be administered once or several times. However, since the dosage of the pharmaceutical composition of the present invention is determined in view of various related factors such as route of administration, age, sex, weight, and patient's severity of the patient, the dose is limited in any aspect to the scope of the present invention Should not be understood to be.
전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 부챗말 추출물 또는 그 분획물을 이용한 피부 외용제 조성물을 제공할 수 있다. 본 발명의 피부 외용제 조성물은 화장료 조성물, 세정제 조성물, 또는 약제학적 조성물 등으로 제품화될 수 있다.
As described above, according to the present invention, it is possible to provide a composition for external application for skin using a parturfate extract or a fraction thereof. The external preparation for skin of the present invention can be commercialized as a cosmetic composition, a detergent composition, a pharmaceutical composition or the like.
도 1은 부챗말 추출·분획 공정의 개략도이다.
도 2는 부챗말 추출물 또는 그 분획물의 세포 독성을 나타내지 않음을 보여주는 결과이다.1 is a schematic diagram of a sub-shell extraction / fractionation process.
Figure 2 shows the results showing no cytotoxicity of the Bacchaea extract or its fractions.
이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described with reference to Examples and Experimental Examples. However, the scope of the present invention is not limited to these examples and experimental examples.
<< 실시예Example > > 부챗말Suburban 추출물의 제조 Preparation of extract
제주도 서귀포시 문섬 해안에서 2006년 4월 6에 채집한 부챗말을 부착생물을 제거한 후 시료를 음건한 다음 마쇄기로 분쇄하였다. 부챗말의 미세말 시료를 80% 에탄올에 상온에서 48시간 침출하고 3회 추출하였으며, 그 후 상층액을 회수하고 감압 농축하여 에탄올 추출물을 얻었다. 그리고 에탄올 추출물을 10g을 증류수 1L에 현탁시킨 후, 헥산(1L× 3), 디클로로메탄(1L× 3), 에틸아세테이트(1L× 3), 부탄올(1L× 3)로 각각 순차적으로 추출하여 각각의 분획물을 진공 건조하여 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트 및 부탄올 그리고 잔여 물층을 얻었다. 각 분획물은 해당 용매로 용해시켜 0.2 ㎛ membrane filter(Advantec MFS Inc. USA)로 제균하여 4℃에 보관하면서 본 연구에 사용하였다. On April 6, 2006, Seonggipo, Seogwipo city, Seogwipo city, Seongpipo city was sampled by removing the sticky organisms, shredded and shredded by grinder. The microsomes of Buchocalt were extracted with 80% ethanol at room temperature for 48 hours and extracted three times. Then, the supernatant was recovered and concentrated under reduced pressure to obtain an ethanol extract. 10 g of the ethanol extract was suspended in 1 L of distilled water and extracted successively with hexane (1 L × 3), dichloromethane (1 L × 3), ethyl acetate (1 L × 3) and butanol (1 L × 3) The fractions were vacuum dried to give hexane, dichloromethane, ethyl acetate and butanol and a residue layer. Each fraction was dissolved in the corresponding solvent and sterilized with a 0.2 μm membrane filter (Advantec MFS Inc. USA) and stored at 4 ° C for use in this study.
부챗말은 건조분말 59.2 g을 80 % 에탄올로 추출한 후 여과하여 얻어진 추출액를 감압 농축하여 조추출물 11.87 g을 얻었으며, 추출수율은 20.0 %였다. 순차적 분획물은 부챗말의 에탄올 추출물의 10 g을 증류수 1 L에 현탁시킨 후에 헥산 (1 L× 3), 디클로로메탄 (1 L× 3), 에틸아세테이트 (1 L× 3) 그리고 부탄올 (1 L× 3) 등으로 순차적으로 분획하여 헥산층에서 0.542 g, 디클로로메탄층에서 0.128 g, 에틸아세테이트층에서 0.058 g 및 부탄올층에서 1.470 g 그리고 잔사인 water 층에서 4.353 g의 분획물을 얻었다 추출·분획 공정의 개략도를 도 1에 나타내었다.The filtrate was extracted with 80% ethanol, and the extract was concentrated under reduced pressure to obtain 11.87 g of crude extract. The extraction yield was 20.0%. Sequential fractions were prepared by suspending 10 g of the ethanol extract of Buchocalt in 1 L of distilled water and then eluting with hexane (1 L × 3), dichloromethane (1 L × 3), ethyl acetate (1 L × 3) and butanol 3) and the like 0.542 g in the hexane layer, 0.128 g in the dichloromethane layer, 0.058 g in the ethyl acetate layer, 1.470 g in the butanol layer and 4.353 g in the water layer as the residue were obtained. A schematic diagram of the extraction and fractionation process is shown in Fig.
<< 실험예Experimental Example > > 부챗말의Boo-chat 피부균에In skin fungus 대한 항균 활성 실험 및 여드름 개선 활성에 대한 관능평가 실험 Experiments on antibacterial activity and sensory evaluation of acne improving activity
<< 실험예Experimental Example 1> 1> 항균 활성 실험Experiment of antibacterial activity
<실험예 1-1> 원판 확산법에 의한 실험 ≪ Experimental Example 1-1 > Experiment by disk diffusion method
본 실험에 사용한 균주는 피부에서 흔히 검출되는 3종의 균주인 스타필로코쿠스 아우레우스, 스타필로코쿠스 에피더미디스, 프로피오니박테리움 아크네스를 사용하였으며, 일부 스타필로코쿠스 에피더미디스 및 프로피오니박테리움 아크네스에 대해서는 항생제 내성균을 함께 사용하였다. Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, and Propionibacterium acnes were used as the strains used in this experiment, and three strains commonly found in the skin were used. Some strains of Staphylococcus epidermidis And Propionibacterium acnes were used together with antibiotic resistant bacteria.
혐기성 균인 프로피오니박테리움 아크네스는 anaerobic Jar(Oxoid, USA)에서 배양하였다. The anaerobic microorganism, Propionibacterium acnes, was cultured in an anaerobic Jar (Oxoid, USA).
균주들의 배지는 Tryptic soy agar(TSA)는 Difco(USA)사, GAM Broth는 Nissui(Japan)사에서 구입하여 사용하였다. The strains were purchased from Difco (USA) for Tryptic soy agar (TSA) and from Nissui (Japan) for GAM Broth.
아래의 [표 1]에 사용 균주, 배지 등을 정리하였다.Table 1 below shows the strains and media used.
항균력 측정은 원판 확산법(Disc diffusion assay)을 사용하였다(Hayes, A.J., Markovic, B., 2002. Toxicity of Australian essential oil Backhousia citriodora (Lemon myrtle). Part 11. Antimicrobial activity and in vitro cytotoxicity. Food . Chem . Toxicol . 40(4): 535-543). Antibacterial activity was measured using the disk diffusion method (Disc diffusion assay) (Hayes, AJ, Markovic, B., 2002. Toxicity of Australian essential oil Backhousia citriodora (Lemon myrtle). Part 11. Antimicrobial activity and in vitro cytotoxicity. Food. Chem .. Toxicol 40 (4): 535-543).
각 균주는 10 mL의 액체배지에 접종하고 37℃에서 18시간씩 3회 계대 배양하여 항균활성 시험 균주로 사용하였으며, 각각의 시험균 농도를 0.5 McFarland으로 106 - 108 CFU/mL 되게 한 후 pour-plate 방법에 균 접종 평판배지를 만들어 사용하였다. Each strain was inoculated into 10 mL of liquid medium and subcultured three times for 18 hours at 37 ° C. The strain was used as a test strain for antimicrobial activity. The concentration of each test strain was adjusted to 10 6 - 10 8 CFU / mL with 0.5 McFarland pour-plate method.
각각의 시료는 1 mg/ml 농도로 조제하여 농도별로 paper disc(Whatman No.5, 8 mm)에 천천히 흡수시킨 후, 용매를 완전히 증발시켰다. 시험용 평판배지 표면에 디스크를 밀착시키고 최적온도 37℃에서 배양한 후 디스크 주변에 생성된 생육저해환(clear zone, mm)의 크기를 측정하여 항균활성을 비교하였다. Each sample was prepared at a concentration of 1 mg / ml, slowly absorbed into paper discs (Whatman No. 5, 8 mm) by concentration, and the solvent was completely evaporated. The antimicrobial activity was measured by measuring the size of the clear zone (mm) generated around the disc after the disc was adhered to the surface of the test plate and incubated at the optimal temperature of 37 ° C.
결과를 아래의 [표 2]에 나타내었다.The results are shown in Table 2 below.
[표 2]를 참조하여 보면, 에탄올 추출물은 스타필로코쿠스 아우레우스와 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK4에 대해서 활성을 보였고, 헥산 분획물, 디클로로메탄 분획물 및 에틸아세테이트 분획물은 항생제 내성균을 포함하여 실험에 사용한 모든 균에 대해서 활성을 보였다. 특히, 헥산 분획물은 스타필로코쿠스 아우레우스에서 15 mm의 높은 생육저해환을 나타내었다. 부탄올 분획물과 잔여 물층은 모든 균에 대해서 활성을 나타내지 않았다.As shown in Table 2, the ethanol extract showed activity against Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis SK4, while the hexane fraction, the dichloromethane fraction and the ethyl acetate fraction contained antibiotic resistant bacteria All the bacteria used in the experiment were active. In particular, the hexane fraction exhibited a high inhibition of growth of 15 mm in Staphylococcus aureus. The butanol fraction and the residual layer did not show activity against all bacteria.
<실험예 1-2> 최소저해농도( Minimum inhibitory concentration , MIC )의 측정 <Experimental Example 1-2> Minimum inhibitory concentration ( Minimum inhibitory concentration , MIC )
최소저해농도(MIC)는 Micro-well dilution assay 방법(Amster D. 1996. Susceptibility testing of antimicrobial in liquid media, antibiotics in laboratory medicine. 4th ed. Williams and Wikins, MD, USA. p 52-111)에 따라 측정하였다. 각각의 균 농도를 0.5 McFarland으로 106 - 108 CFU/mL가 되게 한 후 96 well plate에 분주하고, 각 시료를 농도별로 10㎕씩 처리하여 배양하였다. 세균 배양액의 증식 정도를 Microplate reader(Powerwave XS, BioTek)로 650 nm에서 측정하였다. 세균만 접종한 well에서의 흡광도 값도 비교하여 최소억제농도를 정하였다. The minimum inhibitory concentration (MIC) was determined according to the micro-well dilution assay method (Amster D. 1996. Susceptibility testing of antimicrobial in liquid media, antibiotics in laboratory medicine 4th ed. Williams and Wikins, MD, USA, p 52-111) Respectively. Each bacterial concentration was adjusted to 10 6 - 10 8 CFU / mL with 0.5 McFarland, and the cells were dispensed into 96-well plates. Each sample was treated with 10 μl of each concentration. The degree of propagation of the bacterial culture was measured at 650 nm with a Microplate reader (Powerwave XS, BioTek). The minimum inhibitory concentration was also determined by comparing the absorbance values in wells inoculated with bacteria alone.
결과를 아래의 [표 3]에 나타내었다.The results are shown in Table 3 below.
[표 3]을 참조하여 보면, 에탄올 추출물은 모든 균에 대해서 1 내지 2 ㎎/㎖ 범위의 최소저해농도를 나타내었고, 헥산 분획물, 디클로로메탄 분획물 및 에틸아세테이트 분획물은 0.25 내지 2 ㎎/㎖ 범위의 최소 저해 농도를 나타내었다. 특히 에틸아세테이트 분획물은 항생제 내성균인 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK9와 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK19에 대해서 각각 0.5 ㎎/㎖ 및 0.25 ㎎/㎖로 비교적 낮은 농도의 최소저해농도를 나타내었다. As shown in Table 3, the ethanol extract showed a minimum inhibitory concentration ranging from 1 to 2 mg / ml for all strains, while the hexane fraction, the dichloromethane fraction and the ethyl acetate fraction had a minimum inhibitory concentration in the range of 0.25 to 2 mg / Minimum inhibitory concentration. In particular, the ethyl acetate fraction showed a minimum inhibitory concentration of 0.5 mg / ml and 0.25 mg / ml for Staphylococcus epidermidis SK9 and Staphylococcus epidermidis SK19, which are antibiotic resistant bacteria, respectively.
<실험예 1-3> 최소세균사멸농도( Minimal bactericidal concentration , MBC ) 측정 <Experimental Example 1-3> Minimum Bacterial Killing Concentration ( Minimal bactericidal concentration , MBC ) measurement
MIC로 선정된 농도보다 그 이상의 농도에 해당하는 well의 배양액 100㎕ 씩을 고체배지에 직접 도말하였다. 각각의 균을 배양 후 plate 상에서 육안으로 관찰되는 colony 수를 직접 계수하였다. 이때 확인되어지는 colony 수가 액체배양액으로부터 접종한 초기 접종균수의 99.9%를 사멸시키는 효과를 나타내는 것으로 확인 되어진 경우 이때의 처리농도를 최소세균사멸농도(MBC)로 정하였다(Cohen MA, Huband MD, Yoder SL, Gage JW, Roland GE., 1998, Bacterial eradication by clinafloxacin, CI-990, and ciprofloxacin employing MBC test, in-vitro time-kill and in-vivo time-kill studies. J Antimicrob Chemother . 41(6): 605-14).100 μl of the culture solution corresponding to a concentration higher than the MIC concentration was directly applied to the solid medium. After culturing each strain, the number of colonies observed visually on the plate was directly counted. When the colony count was confirmed to be effective in killing 99.9% of the inoculated bacteria inoculated from the liquid culture medium, the treatment concentration was determined as the minimum bacterial killing concentration (MBC) (Cohen MA, Huband MD, Yoder SL, Gage JW, Roland GE, 1998, Bacterial eradication by clinafloxacin, CI-990, and ciprofloxacin employing MBC test, in-vitro time-kill and in-vivo time-kill studies J Antimicrob Chemother . 41 (6): 605-14).
결과를 아래의 [표 4]에 나타내었다.The results are shown in Table 4 below.
스타필로코쿠스 아우레우스 및 항생제 내성균인 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK9에 대해서는 헥산 분획물이 3 ㎎/㎖의 최소세균사멸농도를 보였고, 에틸아세테이트 분획물은 항생제 내성균인 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK9 및 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK19에 대해서 각각 3 ㎎/㎖ 및 2 ㎎/㎖의 최소세균사멸농도를 보였다. Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis, an antibiotic resistant strain, For SK9, the hexane fraction showed a minimum bactericidal concentration of 3 mg / ml, and the ethyl acetate fraction showed the antibiotic resistant bacteria Staphylococcus epidermidis SK9 and Staphylococcus epidermidis SK19 showed the minimum bactericidal concentration of 3 ㎎ / ㎖ and 2 ㎎ / ㎖, respectively.
<실험예 1-4> MTT 법에 의한 세포 독성 평가 <Experimental Example 1-4> Evaluation of cytotoxicity by MTT method
부챗말 에탄올 추출물과 분획물의 세포 보호 및 독성 유무를 확인하기 위해 MTT assay를 이용한 세포생존율을 측정하였다. MTT 분석이란 탈수소 효소 작용에 의하여 노란색의 수용성 기질인 MTT 테트라졸리움을 청자색을 띄는 비수용성의 MTT 포르마잔 크리스탈로 환원시키는 세포내 미토콘드리아의 능력을 이용하는 검사법이다.Cell viability was measured by MTT assay in order to confirm cell protection and toxicity of ethanol extracts and fractions. MTT analysis is a test using the ability of intracellular mitochondria to reduce the yellow water-soluble substrate MTT tetrazolium to blue-purple water-insoluble MTT formazan crystals by dehydrogenase action.
RAW 264.7 세포주를 96 well plate에 1×105 cell/well의 농도로 DMEM 배지에 12시간 배양한 후, 부챗말의 에탄올 추출물 또는 분획물의 100 ㎍/㎖의 농도로 처리하여 24시간 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 200 ㎕의 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT; SIGMA, USA) 용액을 각 well에 첨가하여 37℃에서 4시간 배양 한후 상충액을 제거하고 200 ㎕의 DMSO를 첨가하여 비수용성의 보라색 formazan을 용해시켰다. 용해된 formazan의 양은 microplate reader(BioTek, USA)를 이용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 시료를 첨가하지 않은 배지만 넣고 배양하였고, 대조군의 흡광도를 기준으로 세포 생준률을 산출하였다.RAW 264.7 cells were cultured in DMEM medium for 12 hours at a concentration of 1 × 10 5 cells / well in a 96-well plate and cultured for 24 hours at a concentration of 100 μg / ml of ethanol extract or fraction of bovine coccol. After culturing, the medium was removed and 200 μl of 3- (4,5-Dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT; SIGMA, USA) solution was added to each well and incubated at 37 ° C. for 4 hours The confluent solution was removed and 200 μl of DMSO was added to dissolve the water-insoluble purple formazan. The amount of dissolved formazan was measured at 570 nm using a microplate reader (BioTek, USA). The control group was cultured in a medium containing no sample, and the cell viability was calculated based on the absorbance of the control group.
결과를 [도 2]에 나타내었다.The results are shown in Fig.
[도 2]를 참조하여 보면 부챗말의 에탄올 추출물과 분획물은 모두 특별한 세포 독성을 보이지 않음을 알 수 있다.Referring to FIG. 2, it can be seen that the ethanol extracts and fractions of Bucholt did not show any particular cytotoxicity.
<< 실험예Experimental Example 2> 2> 여드름 개선 활성에 대한 관능평가 실험Sensory evaluation test for acne improvement activity
상기 <실험예 1>에서 여드름균인 프로피오니박테리움 아크네스에 대해서 가장 항균 활성이 우수한 것으로 나타난 에틸아세테이트 분획물이 포함되어 제조된 영양 로션을 이용하여 여드름 개선 활성에 대해 관능평가를 수행하였다.In the <Experimental Example 1>, the sensory evaluation of the acne-improving activity was carried out using the nutritional lotion containing the ethyl acetate fraction, which showed the highest antimicrobial activity against Propionibacterium acnes, the acne bacterium.
영양 로션의 제조는 아래의 [표 5]의 성분 및 함량으로 제조하였으며, 이 제조예의 영양 로션의 여드름 개선 활성 유무를 검증하기 위하여 비교예의 영양 로션을 제조하여 함께 관능평가에 이용하였는데, 비교예의 영양 로션으로서는 아래의 [표 5]에서 실시예의 에틸아세테이트 분획물 대신에 정제수가 그 함량 만큼 더 포함된 영양 로션을 사용하였다.The nutritional lotion was prepared by the ingredients and contents shown in the following Table 5. In order to verify whether the nutritional lotion of the present invention had the acne improvement activity, the nutritional lotion of the comparative example was prepared and used for the sensory evaluation together. As the lotion, in the following [Table 5], instead of the ethyl acetate fraction of the example, a nutritious lotion containing as much of the purified water as its content was used.
(중량%)content
(weight%)
관능평가는 여드름 질환을 갖고 있는 10대 내지 20대의 남녀 60명을 2그룹으로 나누고, 각 그룹에 상기 [표 5]의 제조예의 영양 로션과 비교예의 영양 로션을 1일 2회 4주간 사용하도록 하여 설문 조사 형식으로 실시하였으며, 결과를 개선되었다고 응답한 사용자(A)의 수, 변함없다고 응답한 사용자(B)의 수, 악화되었다고 응답한 사용자(C)의 수로 아래의 [표 6]에 나타내었다. The sensory evaluation was carried out by dividing 60 men and women of 10 to 20 years old having acne disease into two groups and using the nutrition lotion of the preparation example of the above Table 5 and the nutritional lotion of the comparative example twice per day for 4 weeks The number of users (A) who answered that the results were improved, the number of users (B) who answered that they did not change, and the number of users (C) who answered that they were worse were shown in Table 6 below .
상기 [표 6]의 결과는 제조예의 영양 로션을 사용한 경우 전체적인 사용자의 2/3 이상에서 개선되었다는 응답을 얻었음을 보여준다. 비교예의 영양 로션의 경우 개선되었다고 응답한 사용자가 4명에 불과하여, 부챗말의 에틸아세테이트 분획물이 여드름 개선 활성을 가짐을 뒷받침한다.
The results of the above Table 6 show that the use of the nutrition lotion of the manufacturing example was improved in more than two thirds of the total users. In the case of the nutritional lotion of Comparative Example, only 4 users answered that the ethyl acetate fraction of Bucholt has an acne improving activity.
Claims (5)
Selected from the group consisting of aqueous ethanolic aqueous extracts of Pseudomonas sp. Collected from Seomyeok Island, Seogwipo city, Jeju Island, the hexane fraction of the aqueous ethanol extract, the dichloromethane fraction of the aqueous ethanol extract and the ethyl acetate fraction of the aqueous ethanol extract thereof Of the total amount of the cosmetic composition.
항균성은 스타필로코쿠스 아우레우스, 스타필로코쿠스 에피더미디스 및 프로피오니박테리움 아크네로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 미생물에 대한 항균성인 것을 특징으로 하는 항균성 피부 외용제 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the antimicrobial activity is antimicrobial activity against at least one microorganism selected from the group consisting of Staphylococcus aureus , Staphylococcus epidermidis and Propionibacterium acnes.
Selected from the group consisting of aqueous ethanolic aqueous extracts of Pseudomonas sp. Collected from Seomyeok Island, Seogwipo city, Jeju Island, the hexane fraction of the aqueous ethanol extract, the dichloromethane fraction of the aqueous ethanol extract and the ethyl acetate fraction of the aqueous ethanol extract thereof Of the total amount of the composition.
Selected from the group consisting of aqueous ethanolic aqueous extracts of Pseudomonas sp. Collected from Seomyeok Island, Seogwipo city, Jeju Island, the hexane fraction of the aqueous ethanol extract, the dichloromethane fraction of the aqueous ethanol extract and the ethyl acetate fraction of the aqueous ethanol extract thereof Of the total amount of the composition.
Selected from the group consisting of aqueous ethanolic aqueous extracts of Pseudomonas sp. Collected from Seomyeok Island, Seogwipo city, Jeju Island, the hexane fraction of the aqueous ethanol extract, the dichloromethane fraction of the aqueous ethanol extract and the ethyl acetate fraction of the aqueous ethanol extract thereof Of the total amount of the composition.
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| Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine, Vol. 1, No. 2, pp. 114-120 (2011. 4) * |
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