KR101525876B1

KR101525876B1 - 당나귀 껍질로부터 아교를 제조하는 방법 및 그 아교를 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101525876B1
Application number: KR1020150021208A
Authority: KR
Inventors: 이윤진; 장경희; 이채곤; 신대현; 박성훈; 차윤정; 김윤정; 이대우; 김동욱
Original assignee: 소망화장품주식회사; 주식회사 더마랩
Priority date: 2015-02-11
Filing date: 2015-02-11
Publication date: 2015-06-03

Abstract

본 발명은 당나귀 껍질로부터 아교를 제조하는 방법 및 그 아교를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로는 당나귀 껍질을 추출하여 아교를 제조함에 있어서, 추출과정 중에 조개껍질 분말을 이용하여 아교 생성율을 증가시키고, 피부 보습, 피부 염증 완화 및 피부 세포 재생 활성이 우수한 아교를 제조하여, 이를 피부 개선용 화장품의 제조에 이용하는 기술에 관한 것이다.

Description

당나귀 껍질로부터 아교를 제조하는 방법 및 그 아교를 함유하는 화장료 조성물{Method for making glue from donkey skin and cosmetics containing the same}

피부는 자외선, 환경오염 등의 외적 요인과 연령의 증가, 스트레스 등의 내적 요인에 의해 진행되는 노화로 인하여 그 기능이 저하되게 된다. 이 중 자외선은 피부 주름 생성, 탄력 저하, 피부 수분 감소 등의 원인이 되고, 이로 인해 피부 유연성 상실, 피부 건조, 피부 장벽 약화 등의 증상이 유발된다. 또한, 이러한 피부 손상은 피부 염증을 동반하며, 피부 염증 반응이 일어나면 관련 세포에서 유전자 변이, 신경 손상 등을 유발하여 염증 반응을 촉진시킨다.

본 발명자들은 항염증 활성을 가지는 다양한 물질들에 대하여 연구하던 중, 당나귀 껍질이 함유하고 있는 성분들에 대하여 연구하였으며, 당나귀 껍질이 함유하고 있는 아교 성분이 우수한 피부 보습 강화, 피부 염증 완화 및 피부 세포 재생 효과 등을 나타내어 보습 및 항염증 화장료로 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다. 본 발명자들은 추가적인 연구를 통하여 당나귀 껍질로부터 아교를 추출함에 있어서, 추출과정 중에 조개껍질 분말을 이용하는 경우 그 수율이 증가할 뿐 아니라, 피부 보습, 피부 염증 완화 및 피부 세포 재생 활성이 증대함을 발견하여 본 발명을 완성하였다.

종래 대한민국 공개특허 제2014-0059479호 "당나귀 껍질 추출물 및 당나귀 사골 추출물을 이용한 기능성 젤라틴 전약 제조방법"이 개시되어 있으나, 이는 당나귀 껍질 추출물인 아교를 식품으로 이용하기 위한 것으로서 화장품으로서의 이용에 대해서는 개시되어 있지 않다.

본 발명은 당나귀 껍질을 추출하여 아교를 제조함에 있어서, 조개껍질 분말을 이용하여 그 수율 및 피부보호 활성이 증대된 아교를 제조하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 상기 제조방법에 의하여 제조되어 피부 보습, 피부 염증 완화 및 피부 세포 재생효과가 우수한 아교 성분을 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, (A)당나귀 껍질의 잔털과 이물질을 제거하고, 당나귀 냄새를 제거하는 당나귀 껍질 전처리 단계; (B)전복 껍질, 굴 껍질, 피조개 껍질, 바지락 껍질, 가리비조개 껍질 및 진주조개 껍질로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 조개껍질을 800~1500℃로 2~5시간 가열 후 분쇄하여 분말화하는 조개껍질 분말 제조단계; (C)상기 당나귀 껍질과 조개껍질 분말을 2~4:1의 중량비로 혼합하여 교반하며 열처리 하는 단계; 및 (D)상기 혼합물을 추출하여 아교를 제조하는 단계를 포함하는 아교의 제조방법이 제공된다.

이때, 상기 조개껍질 분말은 진주조개 껍질의 분말인 것이 더욱 바람직하다.

상기 열처리는 당나귀 껍질과 조개껍질 분말을 혼합하여 교반하며 80~100℃에서 15~30분간 수행하는 것이 바람직하다.

상기 추출은 열수추출, 초임계추출 또는 스팀추출이며, 더욱 바람직하게는 스팀추출이다.

상기 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, 상기 제조방법에 의하여 제조된 아교를 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~10 중량% 함유하는 화장료 조성물이 제공된다.

상기 화장료 조성물은 피부주름개선, 피부보습, 피부염증완화 및 피부재생용으로 사용될 수 있다.

본 발명에 따라 제조되는 아교는 그 수율이 높고, 피부 보습 강화, 피부 염증 완화 및 피부 세포 재생효과가 우수하여, 피부주름개선, 피부보습, 피부염증완화 및 피부재생용 화장품의 제조에 유용하게 사용될 수 있다.

이하 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.

당나귀는 전 세계적으로 퍼져 있고 아프리카, 중앙아메리카, 아시아에 분포하며 주로 어린이와 여성의 운송수단으로 이용되어 왔다. 당나귀는 악조건의 기후에서도 생존율이 높아 사육이 쉬우며 질병에 강하고 우리나라에서는 축산물로 등록되어 있다. 동의보감에 의하면 당나귀의 뼈와 가죽 추출물의 노화 방지 및 골 건강에 대한 효능을 설명하고 있다.

한편 조개껍질은 음식물 쓰레기로 분리되지 않아 처리과정에서 많은 어려움이 있으며 이를 소각 등의 방법으로 처리하면 분진이나 유해한 가스 방출로 인해 환경오염을 초래한다. 그러나 조개껍질 분말에 함유된 탄산칼슘은 살균 능력을 갖고 있으며 조개껍질 분말이 함유하는 유용성분, 그 중 콘키올린은 혈행 촉진 작용을 하는 것으로 알려져 있다.

본 발명은 당나귀 껍질로부터 아교를 제조함에 있어서, 상기 조개껍질 분말을 이용함으로써 아교의 수율을 높일 뿐 아니라, 아교 자체의 피부보호활성을 증대시키는데 그 특징이 있다.

본 발명의 일 구체예에 따르면 다음과 같은 제조방법에 의하여 아교를 제조한다.

(A)당나귀 껍질의 잔털과 이물질을 제거하고, 당나귀 냄새를 제거하는 당나귀 껍질 전처리 단계; (B)전복 껍질, 굴 껍질, 피조개 껍질, 바지락 껍질, 가리비조개 껍질 및 진주조개 껍질로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 조개껍질을 800~1500℃로 2~5시간 가열 후 분쇄하여 분말화하는 조개껍질 분말 제조단계; (C)상기 당나귀 껍질과 조개껍질 분말을 2~4:1의 중량비로 혼합하여 교반하며 열처리 하는 단계; 및 (D)상기 혼합물을 추출하여 아교를 제조하는 단계를 포함하는 아교의 제조방법이 제공된다.

먼저, 당나귀 껍질을 추출하기 전에 잔털과 이물질을 제거하고, 당나귀의 냄새를 제거하는 전처리를 수행한다. 전처리를 수행 후 적당한 크기로 잘라 냉장 보관한다.

상기 조개껍질 분말은 조개껍질을 800~1500℃로 2~5시간 가열 후 분쇄하여 제조된다. 이 때 사용되는 조개껍질에 그 제한은 없지만, 진주조개 껍질을 사용하는 것이 더욱 바람직하다. 진주조개껍질에 부착된 부착물을 제거하고 능주층과 진주층이 잔존하도록 하여 조개껍질 분말을 제조하는 경우에 그 효과가 가장 우수하였다.

이어, 준비된 상기 당나귀 껍질과 조개껍질 분말을 혼합하여 열처리 한다. 상기 당나귀 껍질과 조개껍질 분말을 2~4:1의 중량비, 더욱 바람직하게는 2:1의 중량비로 혼합하여 교반하면서 열처리한다. 본 발명의 일 구체예에 따르면, 가로, 세로 각각 2~5cm의 적당한 크기로 잘라서 준비된 당나귀 껍질과 상기 조개껍질 분말을 혼합하여 교반하면서 80~100℃에서 15~30분간 볶아 준다.

이와 같이 열처리 된 상기 혼합물을 추출한다. 열수추출, 용매추출, 초임계추출 또는 스팀추출 방법에 의해 추출할 수 있으며, 스팀추출방법에 의하여 수행하는 것이 더욱 바람직하다. 상기 용매로는 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 프로판올, 부틸렌글리콜, 글리세린, 클로로포름, 에틸아세테이트, 디클로로메탄, 헥산, 아세톤, 아세토나이트릴, 페트로레움에테르 및 디에틸에테르로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 것이 사용될 수 있다.

이와 같이 제조된 아교 성분은 당나귀 껍질과 진주조개껍질 분말의 혼합 및 열처리 과정에서 진주조개껍질 분말에 인한 상승작용에 의하여 통상의 열수추출물이나 용매추출물에 비하여, 더욱 우수한 아교 생성율 증가(시험예 1), Collagen 발현 증가효과(시험예 2), Hyaluronan Synthase-3 발현 증가효과(시험예 3), Fliaggrin 발현 증가효과(시험예 4), Aquaporin-3 발현 증가효과(시험예 5), TNF-α발현 억제효과(시험예 6), 피부 세포재생 효과(시험예 7) 및 피부 자극 완화효과(시험예 8)를 나타내었다.

상기 유효성분으로서의 아교는 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~10 중량% 함유된다. 본 발명의 당나귀 껍질로부터 추출된 아교 성분을 함유하는 화장료 조성물은 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 그 예로는 화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 바디 로션, 바디 오일, 바디 젤, 샴푸, 린스, 헤어 콘디셔너, 헤어 젤, 화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스 등을 들 수 있다.

[실시예]

이하, 하기의 실시예와 시험예들을 통하여 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명이 이 예들에 의하여 한정되는 것은 아니다.

제조예 1 : 당나귀 껍질 전처리

당나귀 껍질은 경기도 용인에 위치한 "태산돈키팜"에서 제공받아 사용하였다. 제공받은 당나귀 껍질의 잔털과 이물질을 제거한 뒤 밀가루와 굵은 소금을 1:1로 혼합하여 첨가하고 3회 세척하여 당나귀 냄새를 제거하였다. 당나귀 껍질 2 kg을 가로 2cm, 세로 2cm가 되게 잘라 냉장 보관하였다.

비교예 1 : 당나귀 껍질로부터 아교성분 열수 추출물 제조

전처리되어 세절된 상기 당나귀 껍질 200g을 에탄올과 정제수 3:7(w/w) 비율의 혼합 용매 1000g과 혼합하였다. 이 혼합물을 3일간 침적하여 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 100℃로 8시간 끓여서 추출하였다. 추출한 뒤 여과지(Qualitive Filter Papers NO.2)를 이용하여 여과한 후 여액을 60℃ 이하에서 감압농축하여 파우더 형태로 4.2g을 수득하였다.

비교예 2 : 당나귀 껍질로부터 아교성분 초임계 추출물 제조

전처리되어 세절된 상기 당나귀 껍질 200g을 초임계유체추출기(SC-CO₂ extraction system, Ilshin Autoclave Co., LTD, Korea)의 추출조(extractor)에 충진 시킨 후, 포화 압력상태인 이산화탄소를 기기 내부로 주입시킨다. 이때 온도와 압력 조건을 40℃ -400bar로 고정시킨 뒤 1시간 동안 추출하였다. 추출한 뒤 진공농축기에 넣어 잔류 이산화탄소를 제거하여 파우더 형태로 8g을 수득하였다.

비교예 3 : 당나귀 껍질로부터 아교성분 스팀 추출물 제조

전처리되어 세절된 상기 당나귀 껍질 200g을 에탄올과 정제수 3:7(w/w) 비율의 혼합용매 1000g과 혼합하여 추출기 내부용기에 담아 물이 첨가된 외부용기에 넣어 완전히 밀봉한 다음 130℃에서 3시간 동안 고온고압스팀처리하여 추출하였다. 추출한 뒤 여과지(Qualitive Filter Papers NO.2)를 이용하여 여과한 후 여액을 60℃ 이하에서 감압농축하여 파우더 형태로 6g을 수득하였다.

제조예 2 : 진주조개 껍질 분말 제조

진주조개 껍질을 800℃에서 2시간 가열한 후 분쇄하여 조개껍질 분말을 제조하였다. 조개껍질에 부착된 부착물을 제거하고 능주층과 진주층이 잔존하도록 하여 조개껍질 분말을 제조하였다.

실시예 1 : 당나귀 껍질로부터 아교성분 열수 추출물 제조

상기 제조예 1의 당나귀 껍질과 상기 제조예 2의 진주조개껍질 분말을 혼합하되, 당나귀 껍질(200g) 과 진주조개껍질 분말(100g)을 2:1의 중량비로 혼합하여 교반하면서 80℃에서 15min 동안 열처리 하였다. 열처리 후 에탄올과 정제수 3:7(w/w) 비율의 혼합 용매 1000g과 혼합하였다. 이 혼합물을 3일간 침적하여 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 100℃로 8시간 끓여서 추출하였다. 추출한 뒤 여과지(Qualitive Filter Papers NO.2)를 이용하여 여과한 후 여액을 60℃ 이하에서 감압농축하여 파우더 형태로 16g을 수득하였다.

실시예 2 : 당나귀 껍질로부터 아교성분 초임계 추출물 제조

상기 제조예 1의 당나귀 껍질과 상기 제조예 2의 진주조개껍질 분말을 혼합하되, 당나귀 껍질(200g)과 진주조개껍질 분말(100g)을 2:1의 중량비로 혼합하여 교반하면서 80℃에서 15 min 동안 열처리 하였다. 열처리 후 초임계유체추출기(SC-CO₂ extraction system, Ilshin Autoclave Co., LTD., Korea)의 추출조(extractor)에 충진 시킨 후, 포화 압력상태인 이산화탄소를 기기 내부로 주입시킨다. 이때 온도와 압력 조건을 40℃, -400 bar로 고정시킨 뒤 1시간 동안 추출하였다. 추출한 뒤 진공농축기에 넣어 잔류 이산화탄소를 제거하여 파우더 형태로 14.2g을 수득하였다.

실시예 3 : 당나귀 껍질로부터 아교성분 스팀 추출물 제조

상기 제조예 1의 당나귀 껍질과 상기 제조예 2의 진주조개껍질 분말을 혼합하되, 당나귀 껍질(200g)과 진주조개껍질 분말(100g)을 2:1의 중량비로 혼합하여 교반하면서 80℃에서 15 min 동안 열처리 하였다. 열처리 후 에탄올과 정제수 3:7(w/w) 비율의 혼합용매 1000g과 혼합하여 추출기 내부용기에 담아 물이 첨가된 외부용기에 넣어 완전히 밀봉한 다음 130℃에서 3시간 동안 고온고압스팀처리하여 추출하였다. 추출한 뒤 여과지(Qualitive Filter Papers NO.2)를 이용하여 여과한 후 여액을 60℃ 이하에서 감압농축하여 파우더 형태로 20g을 수득하였다.

시험예 1: 아교 수득률 측정

본 발명의 방법으로 제조된 당나귀 껍질 추출물을 건조시킨 뒤 아교의 수득률을 측정하였다.

시료명	수득률(%)
비교예 1	2.1
비교예 2	4
비교예 3	3
실시예 1	8
실시예 2	7.1
실시예 3	10

상기 표 1에서 확인되는 바와 같이, 본 발명 실시예 1 내지 3에서 전체적으로 수득률이 높게 나타났다.

시험예 2 : Collagen 발현 증가 효과 확인

섬유아세포(CCD-986Sk)를 10% FBS가 첨가된 IMDM 배지를 이용하여 5×10⁵ cell/well로 조절한 후 12 well plate에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤, 상기 실시예 및 비교예의 시료를 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 RT-PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction)을 통해 콜라겐(collagen)의 발현 증가율을 확인하였다. 콜라겐(Collagen) 발현 증가율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 2에 나타내었다. 대조군으로는 아데노신(Adenosine)을 사용하였다.

collagen발현율(%) = (시료 collagen 발현양/대조군 collagen 발현양)×100

시료명	처리농도(w/v%)	collagen 발현율(%)
비교예 1	0.5	81.7
비교예 2	0.5	80.9
비교예 3	0.5	82.5
실시예 1	0.5	86.9
실시예 2	0.5	85.7
실시예 3	0.5	91.1
아데노신	0.05	83.8

상기 표 2에서 확인되는 바와 같이 동일 농도 처리 시, 실시예 1~3의 당나귀 껍질 추출물은 비교예 1~3의 당나귀 껍질 추출물보다 우수한 콜라겐 발현효과를 나타내었으며, 아데노신과 비교해도 동등하거나 우수한 효과를 나타내었다. 특히 실시예 3에서 가장 우수한 효과를 나타내었다.

시험예 3 : Hyaluronan Synthase-3 발현 증가 효과 확인

섬유아세포(CCD-986Sk)를 10% FBS가 첨가된 IMDM 배지를 이용하여 5×10⁵ cell/well로 조절한 후 12 well plate에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 시료를 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 Reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)을 통해 Hyaluronan Synthase-3(HAS-3)의 발현 증가율을 확인하였다. HAS-3 발현 증가율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 3에 나타내었다. 대조군으로는 히알루론산(Hyaluronic Acid)을 사용하였다.

HAS-3 발현율(%)=(시료 HAS-3 발현 양/대조군 HAS-3 발현 양)×100

시료명	처리농도(w/v%)	Hyaluronan Synthase-3 발현율(%)
비교예 1	0.5	81.4
비교예 2	0.5	79.6
비교예 3	0.5	82.4
실시예 1	0.5	82.9
실시예 2	0.5	86.7
실시예 3	0.5	90.4
히알루론산	0.05	87.8

상기 표 3에서 확인되는 바와 같이 동일 농도 처리 시, 실시예 1~3의 당나귀 껍질 추출물은 비교예 1~3의 당나귀 껍질 추출물보다 우수한 Hyaluronan Synthase-3 발현효과를 나타내었으며, 히알루론산과 비교해도 동등하거나 우수한 효과를 나타내었다. 특히 실시예 3에서 가장 우수한 효과를 나타내었다.

시험예 4 : Filaggrin 발현 증가효과 확인

섬유아세포(CCD-986Sk)를 10% FBS가 첨가된 IMDM 배지를 이용하여 5×10⁵ cell/well로 조절한 후 12 well plate에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 시료를 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 Reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)을 통해 필라그린(Filaggrin)의 발현 증가율을 확인하였다. Filaggrin 발현 증가율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 4에 나타내었다. 대조군으로는 히알루론산(Hyaluronic Acid)을 사용하였다.

Filaggrin 발현율(%)=(시료 Filaggrin 발현양/대조군 Filaggrin 발현양)×100

시료명	처리농도(w/v%)	Filaggrin 발현율(%)
비교예 1	0.5	80.7
비교예 2	0.5	83.4
비교예 3	0.5	82.9
실시예 1	0.5	84.5
실시예 2	0.5	87.6
실시예 3	0.5	92.7
히알루론산	0.05	85.8

상기 표 4에서 확인되는 바와 같이 동일 농도 처리 시, 실시예 1~3의 당나귀 껍질 추출물은 비교예 1~3의 당나귀 껍질 추출물보다 우수한 Filaggrin 발현효과를 나타내었으며, 히알루론산과 비교해도 동등하거나 우수한 효과를 나타내었다. 특히 실시예 3에서 가장 우수한 효과를 나타내었다.

시험예 5 : Aquaporin-3 발현 증가 효과 확인

섬유아세포(CCD-986Sk)를 10% FBS가 첨가된 IMDM 배지를 이용하여 5×10⁵ cell/well로 조절한 후 12 well plate에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 시료를 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 Reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)을 통해 Aquaporin-3의 발현 증가율을 확인하였다. Aquaporin-3 발현 증가율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 5에 나타내었다. 대조군으로는 히알루론산(Hyaluronic Acid)을 사용하였다.

Aquaporin-3 발현율(%)=(시료 Aquaporin-3 발현양/대조군 Aquaporin-3 발현양)×100

시료명	처리농도(w/v%)	Aquaporin-3 발현율(%)
비교예 1	0.5	82.5
비교예 2	0.5	84.6
비교예 3	0.5	83.3
실시예 1	0.5	84.5
실시예 2	0.5	85.5
실시예 3	0.5	92.4
히알루론산	0.05	88.6

상기 표 5에서 확인되는 바와 같이 동일 농도 처리 시, 실시예 1~3의 당나귀 껍질 추출물은 비교예 1~3의 당나귀 껍질 추출물보다 우수한 아쿠아포린-3(Aquaporin-3) 발현효과를 나타내었으며, 히알루론산과 비교해도 동등하거나 우수한 효과를 나타내었다. 특히 실시예 3에서 가장 우수한 효과를 나타내었다.

시험예 6 : TNF-α발현 억제 효과 확인

RAW 264.7 세포를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5×10⁵ cell/well로 조절한 후, 12 well plate에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 12시간 동안 기아상태를 유지시킨 후, LPS 10 ng/mL과 시료를 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 Reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)을 통해 TNF-α의 발현 억제율을 확인하였다. TNF-α 발현억제율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 6에 나타내었다. 대조군으로는 덱사메타손(Dexamethason)을 사용하였다.

TNF-α 발현 억제율(%)=100-[(시료 TNF-α 발현양/대조군 TNF-α 발현양)×100]

시료명	처리농도(w/v%)	TNF-α 발현억제율(%)
비교예 1	0.5	75.9
비교예 2	0.5	80.4
비교예 3	0.5	82.5
실시예 1	0.5	84.3
실시예 2	0.5	85.3
실시예 3	0.5	88.7
덱사메타손	0.05	85.4

상기 표 6에서 확인되는 바와 같이 동일 농도 처리 시, 실시예 1~3의 당나귀 껍질 추출물은 비교예 1~3의 당나귀 껍질 추출물보다 우수한 TNF-α 발현 억제효과를 나타내었으며, 덱사메타손과 비교해도 동등하거나 우수한 효과를 나타내었다. 특히 실시예 3에서 가장 우수한 효과를 나타내었다.

시험예 7: 피부 세포 재생 효과 확인

상기 당나귀 껍질 추출물의 피부 재생 효과를 확인하기 위해 wound healing assay를 수행하였다. 각질형성세포(HACAT)를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5×10⁵ cell/well로 조절한 후 6 well plate에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 6 well plate에 가득 자란 세포에 스크래치를 내어 세포의 일부분을 6 well plate 바닥에서 떨어지게 한 뒤, 상기 실시예 및 비교예의 시료를 처리하여 18시간 배양하였다. 세포가 재생된 정도를 확인하여 그 결과를 하기 표 7에 나타내었다.

세포재생율은 하기 식에 의해 산출되었고, 대조군으로는 덱사메타손(Dexamethason)을 사용하였다.

세포재생율(%) = (시료 세포 재생율/대조군 세포 재생율) × 100

시료명	처리농도(w/v%)	피부세포재생율(%)
비교예 1	0.5	80.1
비교예 2	0.5	83.2
비교예 3	0.5	84.6
실시예 1	0.5	88.5
실시예 2	0.5	88.4
실시예 3	0.5	92.7
덱사메타손	0.05	85.2

상기 표 7에서 확인되는 바와 같이 동일 농도 처리 시, 실시예 1~3의 당나귀 껍질 추출물은 비교예 1~3의 당나귀 껍질 추출물보다 우수한 피부세포재생효과를 나타내었으며, 덱사메타손과 비교해도 동등하거나 우수한 효과를 나타내었다. 특히 실시예 3에서 가장 우수한 효과를 나타내었다.

실시예 4 : 당나귀 껍질로부터 얻은 아교성분을 함유하는 크림 제조

상기 실시예에서 제조된 당나귀 껍질로부터 얻은 아교성분을 함유하는 크림을 하기 표 8의 조성 및 함량으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.

(중량%)	대조예	실시예 4
당나귀 껍질 스팀 추출물(실시예 3)	-	2
에틸렌디아민사아세트산,이나트륨염	0.02	0.02
구아하이드록시프로필트리모늄클로라이드	0.1	0.1
글리세린	2.0	2.0
판테놀	0.05	0.05
코카미도프로필베타인	2.0	2.0
암모늄라우릴설페이트	5.0	5.0
라우라마이드디이에이	2.0	2.0
글라이콜스테아레이트	1.0	1.0
나트륨라우릴설페이트	15.0	15.0
나트륨라우릴설페이트(30%)	20.0	20.0
염화세트리모늄	0.5	0.5
메칠클로로이소치아졸리논(1.05~1.2%)	0.01	0.01
메칠이소치아졸리논(0.3~0.45%)	0.01	0.01
염화마그네슘(0.5~1.0%)	0.01	0.01
질산마그네슘(21.0~23.5%)	0.01	0.01
시트릭산	0.07	0.07
디메치콘(55~60%)	0.5	0.5
라우레스-3(2~4%)	0.5	0.5
라우레스-20(2~4%)	0.5	0.5
향	0.15	0.15
정제수	To 100	To 100

시험예 8 : 피부 자극 완화 효과 확인

현재 피부 알레르기 증상이 없는 20 내지 30대 남녀 10명을 대상으로 하완의 안쪽 부위에 테입 스트리핑 법(Tape Stripping Method)을 통한 피부자극을 유발한 후, 본 발명에 따른 진주조개껍질 분말을 이용한 당나귀 껍질 스팀 추출물을 함유한 화장료와 함유되지 않는 화장료를 도포하여 유발된 자극이 진정되는 정도를 상대평가 하였다. 먼저 하완의 안쪽 부위 두 곳에 일반 스카치 테잎으로 30회 테이핑을 하여 피부 홍반을 유발하였다. 홍반 유발된 후, 본 발명에 따른 진주조개껍질 분말을 이용한 당나귀 껍질 스팀 추출물을 함유한 화장료를 도포하였으며, 본 발명에 따른 아교성분을 함유하지 않은 화장료를 도포하였다. 도포 후 3시간 후 피부자극 정도를 평가하였다.

<피부자극정도(홍반) 평가>

0 (무반응) 1 (매우 경미한 홍반흔적) 2 (희미한 또는 가벼운 홍반)

3 (경계가 뚜렷하나 약한 홍반) 4 (뚜렷한 홍반) 5 (심한 홍반)

시료명	피부자극정도
시료명	좌	우
대조예	1	1
실시예 4	0	0

상기 표 9에서 확인되는 바와 같이, 본 발명 진주조개껍질 분말을 이용한 당나귀 껍질 스팀 추출물을 함유하는 크림 조성물은 상기 진주조개껍질 분말을 이용한 당나귀 껍질 스팀 추출물을 함유하지 않은 대조예에 비해 피부자극완화 효과가 우수하였다.

실시예 5 : 유연 화장수 제조

하기 표 10에 기재된 조성으로 진주조개껍질 분말을 이용한 당나귀 껍질 스팀 추출물을 함유하는 유연 화장수를 통상의 방법으로 제조하였다.

성분	함량(중량%)
당나귀 껍질 스팀 추출물(실시예 3)	0.5
1,3-부틸렌 글리콜	5.2
올레일알코올	1.5
에탄올	3.2
폴리솔베이트 20	3.2
벤조페논-9	2.0
카르복실비닐폴리머	1.0
글리세린	3.5
향	미량
방부제	미량
정제수	잔량
계	100

실시예 6 : 영양 화장수(밀크로션) 제조

하기 표 11에 기재된 조성으로 진주조개껍질 분말을 이용한 당나귀 껍질 스팀 추출물을 함유하는 영양 화장수를 통상의 방법으로 제조하였다.

성분	함량 (중량%)
당나귀 껍질 스팀 추출물(실시예 3)	0.5
글리세린	5.1
프로필렌글리콜	4.2
토코페릴아세테이트	3.0
유동파라핀	4.6
트리에탄올아민	1.0
스쿠알란	3.1
마카다미아너트오일	2.5
폴리솔베이트 20	1.6
솔비탄세스퀴롤레이트	1.6
프로필파라벤	0.6
카르복실비닐폴리머	1.5
향	미량
방부제	미량
정제수	잔량
계	100

실시예 7 :영양 크림 제조

하기 표 12에 기재된 조성으로 진주조개껍질 분말을 이용한 당나귀 껍질 스팀 추출물을 함유하는 영양 크림을 통상의 방법으로 제조하였다.

성 분	함량(중량%)
당나귀 껍질 스팀 추출물(실시예 3)	0.5
친유형 모노스테아린산글리세린	2.0
스테아릴알콜	2.2
스테아린산	1.5
밀납	1.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄스테아레이트	0.6
정화식물유	1.0
스쿠알란	3.0
광물유	5.0
트리옥타노인	5.0
디메치콘	1.0
소듐마그네슘실리케이트	0.1
글리세린	5.0
베타인	3.0
트리에탄올아민	1.0
소듐히아루로네이트	4.0
방부제,향,색소	미량
정제수	잔량
합계	100

실시예 8 : 맛사지 크림 제조

하기 표 13에 기재된 조성으로 진주조개껍질 분말을 이용한 당나귀 껍질 스팀 추출물을 함유하는 맛사지 크림을 통상의 방법으로 제조하였다.

성 분	함량(중량%)
당나귀 껍질 스팀 추출물(실시예 3)	0.5
글리세린	4.0
바셀린	3.5
트리에탄올아민	0.5
유동파라핀	24.0
스쿠알란	3.0
밀납	2.1
토코페릴아세테이트	0.1
폴리솔베이트 60	2.4
카르복실비닐폴리머	1.0
솔비탄세스퀴올레이트	2.3
향	미량
방부제	미량
정제수	잔량
계	100

실시예 9 : 팩 제조

하기 표 14에 기재된 조성으로 진주조개껍질 분말을 이용한 당나귀 껍질 스팀 추출물을 함유하는 팩을 통상의 방법으로 제조하였다.

성 분	함량(중량%)
당나귀 껍질 스팀 추출물(실시예 3)	0.5
에틸알코올	3.0
EDTA-2Na	0.02
프로필렌 글리콜	5.1
글리세린	4.5
카보폴	1.0
폴리옥사이드	0.1
방부제	미량
향	미량
정제수	잔량
계	100

Claims

(A)당나귀 껍질의 잔털과 이물질을 제거하고, 당나귀 냄새를 제거하는 당나귀 껍질 전처리 단계;
(B)전복 껍질, 굴 껍질, 피조개 껍질, 바지락 껍질, 가리비조개 껍질 및 진주조개 껍질로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 조개껍질을 800~1500℃로 2~5시간 가열 후 분쇄하여 분말화하는 조개껍질분말 제조단계;
(C)상기 당나귀 껍질과 조개껍질 분말을 2~4:1의 중량비로 혼합하여 교반하며 열처리 하는 단계; 및
(D)상기 혼합물을 추출하여 아교를 제조하는 단계를 포함하는 아교의 제조방법.
제1항에 있어서, 상기 조개껍질 분말은 진주 조개껍질로 제조된 것임을 특징으로 하는 아교의 제조방법.
제1항에 있어서, 상기 열처리는 당나귀 껍질과 조개껍질 분말을 혼합하여 교반하며 80~100℃에서 15~30분간 수행하는 것임을 특징으로 하는 아교의 제조방법.
제1항에 있어서, 상기 추출은 열수추출, 초임계추출 또는 스팀추출인 것을 특징으로 하는 아교의 제조방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 하나의 제조방법에 의하여 제조된 아교를 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~10 중량% 함유하는 화장료 조성물.
제5항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부주름개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제5항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부보습용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제5항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부염증완화용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제5항에 있어서, 상기 화장료조성물은 피부재생용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제5항에 있어서, 상기 화장료조성물은 피부자극완화용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제5항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도로 구성된 군에서 선택된 어느 하나의 제형을 가지는 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.