KR101476639B1 - 감마-l-글루타밀-l-시스테닐글라이신 검출용 조성물 - Google Patents

감마-l-글루타밀-l-시스테닐글라이신 검출용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 시아닌 유도체를 함유하는 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신(γ-L-glutamyl-L-cystenylglycine; GSH)의 검출을 위한 조성물을 제공한다. 상기 시아닌 유도체는, 생체외(ex vivo) 및/또는 생체내(in vivo)에서, 티올 기를 함유하는 아미노산 또는 아미노산 유도체 중 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신(GSH)을 선택적으로 검출할 수 있다.

Description

감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신 검출용 조성물{Composition for detecting γ-L-glutamyl-L-cystenylglycine}
본 발명은 시아닌 유도체를 함유하는 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신(γ-L-glutamyl-L-cystenylglycine; GSH)의 검출을 위한 조성물에 관한 것이다. 상기 시아닌 유도체는, 생체외(ex vivo) 및/또는 생체내(in vivo)에서, 티올 기를 함유하는 아미노산 또는 아미노산 유도체 중 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신(GSH)을 선택적으로 검출할 수 있다.
생체 내에는 티올 기를 함유하는 아미노산 또는 아미노산 유도체들이 존재한다. 티올 기를 함유하는 대표적인 아미노산은 시스테인(cysteine)이고, 티올 기를 함유하는 대표적인 아미노산 유도체로는 호모시스테인(homocysteine), 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신(γ-L-glutamyl-L-cystenylglycine; GSH) 등이 있으며, 이들의 구조는 각각 다음과 같다.
Figure 112014020770645-pat00001
상기 티올 기를 함유하는 아미노산 유도체 중 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신은 생명유지와 관련된 세포의 활동 과정에서 무수히 많은 역할을 한다. 예를 들어, 산화환원간의 항상성(Redox Homeostasis; T. P. Dalton, H. G. Shertzer and A. Puga, Annu. Rev . Pharmacol . Toxicol ., 1999, 39, 67), 세포성장(cellulargrowth; Z. A. Wood, E. Schroeder, J. R. Harris and L. B. Poole, TransBiochem . Sci ., 2003, 28, 32) 과정에 관여하며, 또한 암, 에이즈(AIDS)에도 연관된 것으로 잘 알려져 있다(D. M. Townsend, K. D. Tew and H. Tapiero, Biomed . Pharmacother ., 2003, 57, 145).
본 발명자들은 생체외(ex vivo) 뿐만 아니라 생체내(in vivo)에서도, 티올 기-함유 생체 물질들을 효과적으로 검출해낼 수 있는 신규의 화합물로서 쿠마린 유도체를 개시한 바 있다 (대한민국 특허등록 제10-1328000호). 그러나, 티올 기를 함유하는 아미노산 또는 아미노산 유도체 중 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신(GSH)을 선택적으로 구분하여 검출할 수 있는 방법은, 이들 화합물들의 구조적 유사성 때문에 아직 개발되어 있지 못하다. 특히, 생체내에서 다양한 역할을 하는 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신을 선택적으로 검출할 수 있는 탐침을 개발한다면, 세포의 활동 과정을 분자수준에서 밝혀내는데 많은 기여를 할 수 있을 것으로 기대되고 있다.
본 발명자들은 생체 외(ex vivo)뿐만 아니라 생체 내(in vivo)에서, 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신(γ-L-glutamyl-L-cystenylglycine; GSH)을 선택적으로 검출해낼 수 있는 화합물을 설계하였다. 특히, 티올의 친핵성 성질을 고려하여, 시아닌에 친핵 방향족성 치환 반응(Nucleophilic aromatic substitution reaction; SNAr)을 이용하여 선택적으로 반응이 일어날 수 있도록 다양한 유도체를 고안하였다.
따라서, 본 발명은 시아닌 유도체를 포함하는, 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신(γ-L-glutamyl-L-cystenylglycine; GSH)을 선택적으로 검출할 수 있는 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 일 태양에 따라, 하기 화학식 1a의 화합물 또는 화학식 1b의 화합물을 포함하는 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신 검출용 조성물이 제공된다:
<화학식 1a>
Figure 112014020770645-pat00002
<화학식 1b>
Figure 112014020770645-pat00003
식 중, R1은 니트로, 할로겐, C1 내지 C4의 알킬, 또는 아미노이고, R2 및 R3는 독립적으로 C1 내지 C4의 알킬이고, R4는 수소 또는 2,5-디옥소피롤리딜이고, X는 할로겐이다.
상기 화학식 1a의 화합물 또는 화학식 1b의 화합물은 티올 기를 함유하는 아미노산 또는 아미노산 유도체 중 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신(γ-L-glutamyl-L-cystenylglycine; GSH)과 선택적으로 반응함으로써, 생체 외(ex vivo) 혹은 생체 내(in vivo)에서 GSH 검출용 탐침(GSH-detecting probe)으로서 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 화합물과 티올-함유 화합물(2-머캅토에탄올)과의 생체 외(ex vivo) 결합특성을 200MHz NMR을 통하여 분석한 결과이다. 도 1에서 A는 본 발명의 화합물(실시예 1의 화합물)의 200MHz NMR 스펙트럼이다. B 내지 D는 본 발명의 화합물(실시예 1의 화합물)에 2-머캅토에탄올을 첨가한 후 시간에 따라 어떠한 메커니즘으로 생성물이 만들어지는지를 나타내는 스펙트럼을 나타낸다. E는 본 발명의 화합물(실시예 1의 화합물)과 2-머캅토에탄올과의 최종 반응생성물의 스펙트럼을 나타낸다.
도 2는 본 발명에 따른 화합물과 여러 아미노산 그리고 티올-함유 아미노산들과의 결합 특성을 상대적 형광 반응(Ratiometric fluorescence responses)으로 분석한 결과를 나타낸다.
도 3은 본 발명에 따른 화합물과 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신(γ-L-glutamyl-L-cystenylglycine; GSH)과의 반응 속도(kinetics)를 평가한 결과를 나타낸다.
도 4는 세포 내에서 본 발명에 따른 화합물과 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신과의 선택적인 결합 특성을 공초점 현미경 이미징(confocal laser scanning microscope imaging)을 통하여 분석한 결과를 나타낸다.
본 발명은 시아닌에 마이클 받개(Michael acceptor) 그룹, 구체적으로는 이민의 불포화된 α, β, γ, δ를 도입하고, 티올이 마이클 주개(Micahel donor)로 작용하는 친핵 방향족성 치환 반응(Nucleophilic aromatic substitution reaction; SNAr)이 선택적으로 일어날 수 있도록 설계된 시아닌 유도체를 포함하는, 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신 검출용 조성물을 제공한다.
즉, 본 발명은 하기 화학식 1a의 화합물 또는 화학식 1b의 화합물을 포함하는 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신 검출용 조성물을 제공한다:
<화학식 1a>
Figure 112014020770645-pat00004
<화학식 1b>
Figure 112014020770645-pat00005
식 중, R1은 니트로, 할로겐, C1 내지 C4의 알킬, 또는 아미노이고, R2 및 R3는 독립적으로 C1 내지 C4의 알킬이고, R4는 수소 또는 2,5-디옥소피롤리딜이고, X는 할로겐이다.
본 발명의 검출용 조성물에서 탐침으로서 사용되는 화합물에 있어서, R2가 수소인 화합물은 별도의 반대 음이온(counter anion, 즉 -X) 없이 쌍성이온(Zwitterion) 형태인 화학식 1b의 형태로 존재할 수 있다. 또한, R2가 C1 내지 C4의 알킬인 화합물은 반대 음이온(counter anion)으로서 할로겐 음이온(즉, -X)을 가는 화학식 1a의 형태로 존재할 수 있으며, 상기 할로겐 음이온은 바람직하게는 브롬 음이온(즉, -Br)일 수 있다.
상기 화학식 1a의 화합물 또는 화학식 1b의 화합물은 라세믹체 혹은 입체 이성체의 형태(예를 들어, 디아스테레오머 형태)로 존재할 수 있으며, 본 발명은 상기 라세믹체 및 입체 이성체를 모두 포함한다.
상기 화학식 1a의 화합물 또는 화학식 1b의 화합물에 있어서, 바람직하게는 R1은 니트로, 브로모, 메틸, 또는 아미노이고, R2 및 R3는 부틸이고, R4는 수소 또는 2,5-디옥소피롤리딜이고, X는 브롬이다.
상기 화학식 1a의 화합물 또는 화학식 1b의 화합물 중 더욱 바람직한 화합물은 다음과 같다:
1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-(4-니트로페닐티오)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨 브로마이드;
2-((E)-2-((E)-2-(4-브로모페닐티오)-3-((E)-2-(1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)시클로헥-1-센일)비닐)-1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸-3H-인돌륨 브로마이드;
1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-(p-톨릴티오)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨 브로마이드;
2-((E)-2-((E)-2-(4-아미노페닐티오)-3-((E)-2-(1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)시클로헥-1-센일)비닐)-1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌륨 브로마이드;
3-(2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(2-카복시에틸)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-(4-니트로페닐티오)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨-1-일)프로파노에이트;
3-(2-((E)-2-((E)-2-(4-브로모페닐티오)-3-((E)-2-(1-(2-카복시에틸)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨-1-일)프로파노에이트;
3-(2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(2-카복시에틸)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-(p-톨릴티오)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨-1-일)프로파노에이트;
3-(2-((E)-2-((E)-2-(4-아미노페닐티오)-3-((E)-2-(1-(2-카복시에틸)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨-1-일)프로파노에이트; 및
3-(2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(3-(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시)-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-(4-니트로페닐티오)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨-1-일)프로파노에이트.
상기 화합물 중, 특히 바람직한 화합물은 1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-(4-니트로페닐티오)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨 브로마이드; 3-(2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(2-카복시에틸)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-(4-니트로페닐티오)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨-1-일)프로파노에이트; 및 3-(2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(3-(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시)-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-(4-니트로페닐티오)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨-1-일)프로파노에이트로부터 선택될 수 있다.
상기 화합물 중, 3-(2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(3-(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시)-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-(4-니트로페닐티오)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨-1-일)프로파노에이트에서 상기 2,5-디옥소피롤리딘-1-일옥시 기는 트라스투주맙(trastuzumab) 등과 같은 단일클론항체를 결합하기 위한 링커(linker)로서 기능할 수 있다.
상기 화학식 1a의 화합물은 하기 화학식 2의 구조를 갖는 1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-클로로시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌-1-륨브로마이드와 대응하는 치환된-페닐티올(예를 들어, 4-니트로페닐티올, 4-메틸페닐티올, 4-브로모페닐티올, 4-아미노페닐티올 등)을 반응시킴으로써 얻을 수 있다.
<화학식 2>
Figure 112014020770645-pat00006
상기 화학식 2의 화합물은 공지의 방법, 예를 들어, S. Achilefu, Z. Zhang, Org. Lett., 2004, 6, 2067에 따라 제조될 수 있다.
상기 화학식 2의 화합물과 치환된-페닐티올과의 반응은 친핵 방향족성 치환 반응(Nucleophilic aromatic substitution reaction; SNAr)에 의해 수행될 수 있다. 상기 친핵 방향족성 치환 반응은 디메틸포름아미드 등의 용매 존재 하에서 수행될 수 있다.
R4가 수소인 화학식 1b의 화합물은 상기에서와 같이 제조된 화합물을 가수분해함으로써 얻을 수 있다. 상기 가수분해 반응은 소듐 t-부톡시드와 반응시킨 후, 트리플루오로아세트산(TFA)을 반응시킴으로써 수행할 수 있다. 상기 가수분해 반응은 테트라히드로퓨란 등의 용매 존재하에서 수행될 수 있다.
R3가 2,5-디옥소피롤리딜인 화학식 1b의 화합물은 상기에서 제조된 화합물(즉, R4가 수소인 화학식 1b의 화합물)를 N, N'-디시클로헥센일카보디이미드 및 N-히드록시석신이미드와 반응시킴으로써 얻을 수 있다. 상기 반응은 디클로로메탄 등의 용매 존재하에서 수행될 수 있으며, 저온(예를 들어, 약 0℃)에서 반응시킴으로써 수행될 수 있다. 필요할 경우, 얻어진 생성물을 디에틸에테르 중에서 결정화할 수도 있다.
이하, 본 발명을 실시예 및 시험예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나, 하기 실시예 및 시험예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로 본 발명을 제한하는 것이 아니다.
실시예 1. 1-(3- 뷰톡시 -3- 옥소프로필 )-2-(( E )-2-(( E )-3-(( E )-2-(1-(3- 뷰톡시 -3-옥 소프로 필)-3,3- 디메틸인돌린 -2- 일리딘 ) 에틸리덴 )-2-(4- 니트로페닐티오 ) 시클로 헥-1- 센일 )비닐)-3,3-디메틸-3H- 인돌륨 브로마이드
Figure 112014020770645-pat00007
둥근바닥 플라스크에 1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-클로로시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌-1-륨브로마이드 0.2g을 넣고, 디메틸포름아미드(DMF) 3mL를 가하여 용해시켰다. 상기 용액에 p-니트로벤젠티올 0.078g을 넣고, 2시간 동안 상온에서 반응시켰다. 용액의 색이 갈녹색이 되었을 때, TLC로 출발물질이 사라졌을 때, 감압 농축하였다. 얻어진 농축물을 컬럼 크로마토그래피(용리액: 디클로로메탄/메탄올 = 10/1, v/v)로 정제하여 표제화합물을 제조하였다.
수율: 80 %
1H NMR (CDCl3,400MHz) 8.48 (d, 2H, J= 14 Hz), 8.06 (d, 2H, J= 9.2 Hz), 7.30-7.11 (m, 10H), 6.39 (d, 2H, J= 14 Hz), 4.54 (t, 4H, J= 6.4 Hz), 3.94 (t, 4H, J= 6.8 Hz), 2.86 (t, 4H, J= 6.4 Hz), 2.81 (t, 4H, J= 6 Hz), 2.01 (q, 2H, J= 6 Hz), 1.45-1.37 (m, 16H), 1.24 ( q, 4H, J= 7.2 Hz), 0.79(t, 6H, J= 7.2 Hz).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz): δ 172.23, 170.66, 147.31, 146.50, 145.17, 144.96, 141.53, 140.70, 134.70, 128.63, 125.75, 125.41, 124.38, 122.01, 111.14, 102.71, 65.00, 49.03, 40.67, 32.14, 30.22, 27.68, 26.66, 20.56, 18.81, 13.46.
HRMS (MALDI+,DHB): m/z obs'd 830.4167 ([M]+, cal'd 830.4197 for C50H60N3O6S).
실시예 2. 2-(( E )-2-(( E )-2-(4- 브로모페닐티오 )-3-(( E )-2-(1-(3- 뷰톡시 -3- 옥소프로필 )-3,3- 디메틸인돌린 -2- 일리딘 ) 에틸리덴 ) 시클로헥 -1- 센일 )비닐)-1-(3- 뷰톡 시-3- 옥소프로필 )-3,3-디메틸-3H- 인돌륨 브로마이드
Figure 112014020770645-pat00008
둥근바닥 플라스크에 1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-클로로시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌-1-륨브로마이드 0.2g을 넣고, 디메틸포름아미드(DMF) 3mL를 가하여 용해시켰다. 상기 용액에 p-브로모벤젠티올 0.098g을 넣고, 2시간 동안 상온에서 반응시켰다. 용액의 색이 갈녹색이 되었을 때, TLC로 출발물질이 사라졌을 때, 감압 농축하였다. 얻어진 농축물을 컬럼 크로마토그래피(용리액: 디클로로메탄/메탄올 = 10/1, v/v)로 정제하여 표제화합물을 제조하였다.
수율: 80 %
1H NMR (CDCl3,400MHz): δ 8.56 (d,2H,J= 14 Hz), 7.30- 7.12 (m, 10H), 7.01 (d, 2HJ= 8.4 Hz), 6.32 (d, 2H, J= 14 Hz), 4.51 (t, 4H,J= 6.4 Hz), 3.93 (t, 4H,J= 6.8 Hz), 2.85 (t, 4H,J= 6.4 Hz), 2.74 (t, 4H, J= 6 Hz), 1.96 (q, 2H, J= 6 Hz), 1.45-1.40 (m, 16H), 1.23 ( q, 4H, J= 7.2 Hz), 0.79(t, 6H, J= 7.2 Hz).
13C NMR (CDCl3, 100MHz,): δ 172.07, 170.68, 150.25, 145.61, 141.56, 140.72, 136.15, 134.60, 132.22, 128.55, 127.41, 125.18, 121.96, 119.06, 110.99, 102.24, 64.95, 48.97, 40.55, 32.10, 30.20, 27.71, 26.50, 20.60, 18.79, 13.44.
HRMS (MALDI+,DHB): m/z obs'd 863.3451 ([M]+, cal'd 863.3452 for C50H60BrN2O4S).
실시예 3. 1-(3- 뷰톡시 -3- 옥소프로필 )-2-(( E )-2-(( E )-3-(( E )-2-(1-(3- 뷰톡시 -3-옥 소프로 필)-3,3- 디메틸인돌린 -2- 일리딘 ) 에틸리덴 )-2-( p - 톨릴티오 ) 시클로헥 -1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H- 인돌륨 브로마이드
Figure 112014020770645-pat00009
둥근바닥 플라스크에 1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-클로로시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌-1-륨브로마이드 0.1g을 넣고, 디메틸포름아미드(DMF) 1.5mL를 가하여 용해시켰다. 상기 용액에 p-메틸벤젠티올 0.031g을 넣고, 2시간 동안 상온에서 반응시켰다. 용액의 색이 갈녹색이 되었을 때, TLC로 출발물질이 사라졌을 때, 감압 농축하였다. 얻어진 농축물을 컬럼 크로마토그래피(용리액: 디클로로메탄/메탄올 = 10/1, v/v)로 정제하여 표제화합물을 제조하였다.
수율: 70 %
1H NMR (CDCl3,400MHz): δ 8.64 (d, 2H, J= 14 Hz), 7.29-6.98 (m, 10H), 6.28 (d, 2H, J= 14 Hz), 4.49 (t, 4H, J= 6.4 Hz), 3.94 (t, 4H, J= 6.4 Hz), 2.84 (t, 4H, J= 6.4 Hz), 2.72 (t, 4H, J= 6 Hz), 2.14 (s, 3H), 1.96 (q, 2H, J= 5.6 Hz), 1.45-1.40 (m, 16H), 1.24 (q, 4H,J= 7.6 Hz), 0.79(t, 6H,J= 7.6 Hz).
13C NMR (CDCl3,100MHz): δ 171.94, 170.68, 152.48, 146.11, 141.57, 140.72, 135.48, 134.62, 133.30, 129.95, 128.48, 125.01, 110.86, 101.86, 48.92, 40.41, 32.06, 27.72, 26.41, 20.66, 20.63, 18.77, 13.43.
HRMS (MALDI+,DHB): m/z obs'd 799.4503 ([M]+, cal'd 799.4506 for C51H63N2O4S).
실시예4 . 2-(( E )-2-(( E )-2-(4- 아미노페닐티오 )-3-(( E )-2-(1-(3- 뷰톡시 -3- 옥소프로필 )-3,3- 디메틸인돌린 -2- 일리딘 ) 에틸리덴 ) 시클로헥 -1- 센일 )비닐)-1-(3- 뷰톡 시-3- 옥소프로필 )-3,3- 디메틸인돌륨 브로마이드
Figure 112014020770645-pat00010
둥근바닥 플라스크에 1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-클로로시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌-1-륨브로마이드 0.1g을 넣고, 디메틸포름아미드(DMF) 1.5mL를 가하여 용해시켰다. 상기 용액에 p-메틸벤젠티올 0.031g을 넣고, 2시간 동안 상온에서 반응시켰다. 용액의 색이 갈녹색이 되었을 때, TLC로 출발물질이 사라졌을 때, 감압 농축하였다. 얻어진 농축물을 컬럼 크로마토그래피(용리액: 디클로로메탄/메탄올 = 10/1, v/v)로 정제하여 표제화합물을 제조하였다.
수율: 80 %
1H NMR (CDCl3,400MHz): δ 8.66 (d, 2H, J= 14 Hz), 7.24-7.06 (m, 8H), 6.87 (d, 2H, J= 8.4 Hz), 6.54 (d, 2H, J= 8.4 Hz) , 6.17 (d, 2H,J= 14 Hz), 4.39 (t, 4H,J= 6.4 Hz), 3.90 (t, 4H, J= 6.8 Hz), 2.79 (t, 4H, J= 6.4 Hz), 2.61 (t, 4H, J= 5.6 Hz), 1.87 (q, 2H, J= 5.6 Hz) , 1.41-1.34 (m, 16H), 1.19 (q, 4H, J= 7.2 Hz), 0.74(t, 6H,J= 7.2 Hz).
13C NMR (CDCl3,100MHz): δ 171.72, 170.50, 154.96, 146.39, 145.58, 141.38, 140.56, 134.27, 128.29, 127.87, 124.79, 123.51, 121.86, 115.89, 110.54, 101.39, 64.79, 48.80, 40.11, 31.85, 30.03, 27.67, 26.17, 20.53, 18.62, 13.28.
HRMS (MALDI+,DHB): m/z obs'd 800.4649 ([M]+, cal'd 800.4458 for C50H63N3O4S).
실시예 5. 3-(2-(( E )-2-(( E )-3-(( E )-2-(1-(2- 카복시에틸 )-3,3- 디메틸인돌린 -2-일 리 딘) 에틸리덴 )-2-(4- 니트로페닐티오 ) 시클로헥 -1- 센일 )비닐)-3,3-디메틸-3H- 인 돌륨-1-일) 프로파노에이트
Figure 112014020770645-pat00011
둥근바닥 플라스크에 1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-(4-니트로페닐티오)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨 브로마이드 0.100g을 넣고, 테트라히드로퓨란(THF) 6mL를 가하여 용해시켰다. 상기 용액에 소듐 t-부톡시드 0.058g을 넣고, 20시간 동안 상온에서 반응시켰다. 상기 용액에 트리플루오로아세트산(TFA)을 넣고, 6시간 동안 상온에서 반응시켰다. TLC로 출발물질이 사라졌을 때, 감압 농축하였다. 얻어진 농축물을 컬럼 크로마토그래피(용리액: 디클로로메탄/메탄올 = 10/1, v/v)로 정제하여 표제 화합물을 제조하였다.
수율: 73%.
1H NMR (CD3OD, 400MHz): δ 8.60 (d, 2H, J= 14 Hz), 8.11 (d, 2H,J= 9.2 Hz), 7.43 (d, 2H,J= 9.2 Hz), 7.41-7.16 (m, 8H), 6.48 (d, 2H,J= 14 Hz), 4.36 (t, 4H,J= 7.2 Hz), 2.82 (t, 4H,J= 5.6 Hz), 2.60 (t, 4H,J= 7.2 Hz), 1.99 (q, 2H, J= 5.6 Hz), 1.39 (s, 12H).
13C NMR (CD3OD, 100MHz): δ 177.60, 174.07, 148.29, 148.26, 146.79, 146.56, 143.32, 142.67, 135.17, 129.84, 127.31, 126.52, 125.60, 123.46, 112.46, 103.52, 50.49, 43.04, 36.06, 28.12, 27.42, 22.10.
HRMS (MALDI+,DHB): m/z obs'd 718.2945 ([M]+, calc'd 718.2947 for C42H44N3O6S).
실시예 6. 3-(2-(( E )-2-(( E )-2-(4- 브로모페닐티오 )-3-(( E )-2-(1-(2- 카복시에틸 )-3,3- 디메틸인돌린 -2- 일리딘 ) 에틸리덴 ) 시클로헥 -1- 센일 )비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨-1-일) 프로파노에이트
Figure 112014020770645-pat00012
둥근바닥 플라스크에 2-((E)-2-((E)-2-(4-브로모페닐티오)-3-((E)-2-(1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)시클로헥-1-센일)비닐)-1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸-3H-인돌륨 브로마이드 0.104g을 넣고, 테트라히드로퓨란(THF) 6ml를 가하여 용해시켰다. 상기 용액에 소듐 t-부톡시드 0.058g을 넣고, 20시간 동안 상온에서 반응시켰다. 상기 용액에 트리플루오로아세트산(TFA)을 넣고, 6시간 동안 상온에서 반응시켰다. TLC로 출발물질이 사라졌을 때, 감압 농축하였다. 얻어진 농축물을 컬럼 크로마토그래피(용리액: 디클로로메탄/메탄올 = 10/1, v/v)로 정제하여 표제 화합물을 제조하였다.
수율: 68%.
1H NMR (CD3OD, 400MHz): δ 8.74 (d, 2H,J= 14 Hz), 7.43-7.34 (m, 8H), 7.24-7.20 (m, 2H), 7.18 (d, 2H, J= 8.8 Hz), 6.50 (d, 2H, J= 14 Hz), 4.38 (t, 4H, J= 7.2 Hz), 2.84 (t, 4H, J= 6.0 Hz), 2.62 (t, 4H,J= 7.2 Hz), 2.03 (q, 2H,J= 6.0 Hz), 1.48 (s, 12H).
13C NMR (CD3OD, 100MHz): δ 176.55, 172.62, 149.33, 145.82, 142.03, 141.33, 136.80, 133.77, 132.18, 128.38, 127.42, 124.93, 121.91, 118.73, 110.95, 101.76, 49.07, 41.72, 34.98, 26.78, 26.00, 20.80.
HRMS (MALDI+,DHB): m/z obs'd 751.2233 ([M]+, calc'd 751.2201 for C42H44BrN2O4S).
실시예 7. 3-(2-(( E )-2-(( E )-3-(( E )-2-(1-(2- 카복시에틸 )-3,3- 디메틸인돌린 -2-일 리 딘) 에틸리덴 )-2-( p - 톨릴티오 ) 시클로헥 -1- 센일 )비닐)-3,3-디메틸-3H- 인돌륨 -1-일) 프로파노에이트
Figure 112014020770645-pat00013
둥근바닥 플라스크에 1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-(p-톨릴티오)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨 브로마이드 0.106g을 넣고, 테트라히드로퓨란(THF) 6mL를 가하여 용해시켰다. 상기 용액에 소듐 t-부톡시드 0.058g을 넣고, 20시간 동안 상온에서 반응시켰다. 상기 용액에 트리플루오로아세트산(TFA)을 넣고, 6시간 동안 상온에서 반응시켰다. TLC로 출발물질이 사라졌을 때, 감압 농축하였다. 얻어진 농축물을 컬럼 크로마토그래피(용리액: 디클로로메탄/메탄올 = 10/1, v/v)로 정제하여 표제 화합물을 제조하였다.
수율: 70%.
1H NMR (CD3OD, 400MHz): δ 8.80 (d, 2H, J= 14 Hz), 7.41-7.34 (m, 6H), 7.21-7.08 (m, 6H) 6.47 (d, 2H, J= 14 Hz), 4.37 (t, 4H, J= 7.2 Hz), 2.82 (t, 4H,J= 6.0 Hz), 2.61 (t, 4H,J= 7.2 Hz), 2.22 (s, 3H), 2.03 (q, 2H, J= 6.0 Hz), 1.49 (s, 12H).
13C NMR (CD3OD, 100MHz): δ 176.59, 172.51, 151.26, 146.32, 142.06, 141.33, 135.50, 133.85, 133.79, 129.83, 128.32, 125.84, 124.78, 121.87, 110.84, 101.48, 49.02, 41.63, 34.95, 26.80, 25.99, 20.89, 19.46.
HRMS (MALDI+,DHB): m/z obs'd 687.3244 ([M]+, calc'd 687.3253 for C43H47N2O4S).
실시예 8. 3-(2-(( E )-2-(( E )-2-(4- 아미노페닐티오 )-3-(( E )-2-(1-(2- 카복시에 틸)-3,3- 디메틸인돌린 -2- 일리딘 ) 에틸리덴 ) 시클로헥 -1- 센일 )비닐)-3,3-디메틸-3H- 인 돌륨-1-일) 프로파노에이트
Figure 112014020770645-pat00014
둥근바닥 플라스크에 2-((E)-2-((E)-2-(4-아미노페닐티오)-3-((E)-2-(1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)시클로헥-1-센일)비닐)-1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌륨 브로마이드 0.106g을 넣고 테트라히드로퓨란(THF) 6ml를 가하여 용해시켰다. 상기 용액에 소듐 t-부톡시드 0.058g을 넣고 20시간 동안 상온에서 반응을 시켰다. 상기 용액에 트리플루오로아세트산(TFA)을 넣고, 6시간 동안 상온에서 반응시켰다. TLC로 출발물질이 사라졌을 때, 감압 농축하였다. 얻어진 농축물을 컬럼 크로마토그래피(용리액: 디클로로메탄/메탄올 = 10/1, v/v)로 정제하여 표제 화합물을 제조하였다.
수율: 71%.
1H NMR (CD3OD, 400MHz): δ 8.87 (d, 2H, J= 14 Hz), 7.42-7.19 (m, 8H), 7.03 (d, 2H, J= 8.8 Hz), 6.64 (d, 2H, J= 8.8 Hz), 6.45 (d, 2H, J= 14 Hz), 4.37 (t, 4H,J= 6.8 Hz), 2.80 (t, 4H, J= 6.0 Hz), 2.61 (t, 4H, J= 6.8 Hz), 2.00 (q, 2H, J= 6.0 Hz), 1.57 (s, 12H).
13C NMR (CD3OD, 100MHz): δ 178.06, 173.82, 154.93, 148.06, 147.84, 143.54, 142.76, 135.27, 129.74, 129.06, 126.11, 125.50, 123.29, 117.49, 112.19, 102.72, 50.44, 42.99, 36.35, 28.34, 24.42, 22.38.
HRMS (MALDI+,DHB): m/z obs'd 688.3055 ([M]+, calc'd 688.3205 for C42H46N3O4S).
실시예 9. 3-(2-(( E )-2-(( E )-3-(( E )-2-(1-(3-(2,5- 디옥소피롤리딘 -1-일) 옥시 )-3- 옥소프로필 )-3,3- 디메틸인돌린 -2- 일리딘 ) 에틸리덴 )-2-(4- 니트로페닐티오 )시 클로헥 -1- 센일 )비닐)-3,3-디메틸-3H- 인돌륨 -1-일) 프로파노에이트
Figure 112014020770645-pat00015
둥근바닥 플라스크에 3-(2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(2-카복시에틸)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-(4-니트로페닐티오)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨-1-일)프로파노에이트 0.015g을 넣고, 디클로로메탄 0.5ml를 가하여 용해시켰다. 상기 용액에 N, N'-디시클로헥센일카보디이미드 0.020g와 N-히드록시석신이미드 0.011g을 넣고, 1시간 동안 0℃에서 반응시켰다. TLC로 출발물질이 사라졌을 때, 1M HCl로 세척한 후, 감압 농축하였다. 얻어진 농축물에 디에틸에테르를 0.5mL씩 가하여 결정화한 후, 여과하고 건조하여 표제 화합물을 제조하였다.
수율: 40%.
1H NMR (CDCl3, 400MHz): δ 8.84 (d, 1H,J= 14.4 Hz), 8.33 (d, 1H, J= 13.2 Hz), 8.18 (d, 2H, J= 8.8 Hz) , 7.54-6.91 (m, 11H), 5.96 (d, 1H, J= 13.2 Hz) , 4.82 (t, 2H, J= 7.2 Hz), 4.32 (t, 2H,J= 6.8 Hz), 3.29 (t, 2H,J= 7.2 Hz), 3.12 (t, 2H,J=6.8 Hz), 3.05 (t, 2H,J= 6.8 Hz), 2.90 (s, 4H), 2.77 (t, 2H,J= 6.8 Hz), 2.07 (q, 2H,J= 6.8 Hz), 1.44 (s, 6H), 1.28 (s, 6H).
HRMS (MALDI+,DHB): m/z obs'd 815.3116 ([M]+, calc'd 815.3111 for C46H47N4O8S).
실시예 10. 시아닌 -항체 컨쥬게이트
Figure 112014020770645-pat00016
둥근바닥 플라스크에 트라스투주맙(trastuzumab) 2.5mg과 3-(2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(3-(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시)-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-(4-니트로페닐티오)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨-1-일)프로파노에이트를 넣고, 0.10M 소듐 포스페이트 수용액에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물은 크기 배제 겔(Sephadex® G-25) 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제화합물을 제조하였다.
참조예 1. 1-(3- 뷰톡시 -3- 옥소프로필 )-2-(( E )-2-(( E )-3-(( E )-2-(1-(3- 뷰톡시 -3-옥 소프로 필)-3,3- 디메틸인돌린 -2- 일리딘 ) 에틸리덴 )-2-(2- 히드록시에틸티오 ) 시클 로헥-1- 센일 )비닐)-3,3-디메틸-3H- 인돌륨 브로마이드
Figure 112014020770645-pat00017
둥근바닥 플라스크에 1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-클로로시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌-1-륨브로마이드 0.3g과 트리에틸아민(TEA) 0.05mL을 넣고, 에탄올 4mL를 가하여 용해시켰다. 상기 용액에 2-머캅토에탄올 0.059g을 넣고, 2시간 동안 상온에서 반응시켰다. 용액의 색이 갈녹색이 되었을 때, TLC로 출발물질이 사라졌을 때, 감압 농축하였다. 얻어진 농축물을 컬럼 크로마토그래피(용리액: 디클로로메탄/메탄올 = 10/1, v/v)로 정제하여 표제화합물을 제조하였다.
수율: 75 %
1H NMR (DMSO-d6, 200MHz) : δ 8.82 (d, 2H, J= 14 Hz), 7.62-7.22 (m, 8H), 6.39 (d, 2H,J= 14 Hz), 4.98 (t, 2H, J=5.4Hz), 4.48 (t, 4H,J=6.4Hz), 3.99 (t, 4H, J=6.4Hz), 3.56 (q, 2H, J=5.4Hz), 2.90-2.79 (m, 3H), 2.68 (t, 4H, J=5.8Hz), 1.81 (m, 2H), 1.70 (s, 12H), 1.53 (q, 4H, J= 7.2 Hz), 1.33 (q, 4H, J= 7.2Hz), 0.86(t, 6H, J= 7.2 Hz).
HRMS (MALDI+,DHB): m/z obs'd 753.4863 ([M]+, calc'd 753.4298 for C46H61N 2 O5S).
시험예 1. 생체외 ( ex vivo ) 티올 화합물과의 결합 특성
실시예 1에서 얻어진 화합물 4.55mg을 DMSO-d6 0.5mL을 이용하여 NMR 튜브에서 용해시켰다. 상기 용액에 2-머캅토에탄올 0.005mL를 첨가하고, 1시간, 3시간, 5시간 후에 200MHz NMR을 통하여 반응 전 및 반응 후의 물질의 구조를 확인하면서 반응과정을 확인하였다. 그 결과는 도 1과 같다. 도 1에서 A는 실시예 1에서 얻어진 화합물에 대한 200MHz NMR 스펙트럼이고, B 내지 D는 실시예 1에서 얻어진 화합물에 2-머캅토에탄올을 첨가하여 1시간, 3시간, 및 5시간 후에 얻어진 반응물의 200MHz NMR 스펙트럼이며, E는 참조예 1에서 얻어진 화합물의 200MHz NMR 스펙트럼이다.
도 1의 결과로부터, 티올화합물과 실시예 1에서 얻어진 화합물의 친핵 방향족성 치환 반응 (Nucleophilic aromatic substitution reaction; SNAr)을 통하여, 실시예 1의 화합물의 니트로페닐티오기가 2-머캅토에탄올의 티올기로 치환되었음을 알 수 있다.
시험예 2. 생체외 ( ex vivo ) 티올기 -함유 아미노산과의 선택적 결합 특성
실시예 1에서 얻어진 화합물을 100mM HEPES 완충용액(pH = 7.4)에 10μM의 농도로 14개의 큐벳에 용해시켰다. 이 후, 각각의 큐벳에 blank, Ala, Pro, Phe, Ser, Val, Arg, His, Asn, Asp, Lys, Cys, Hcy, Glu, Gly를 각각 1000 당량을 넣고 2시간 후, 형광 분광기를 이용하여 형광 반응을 측정하고, 이후, 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신(γ-L-glutamyl-L-cystenylglycine; GSH)을 1000 당량을 넣고 2시간 후 다시 형광 분광기를 이용하여 형광 반응을 측정하였다. 그 결과는 도 2와 같다.
도 2의 결과로부터, 티올기를 갖지 않는 아미노산과는 반응이 일어나지 않았으나, 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신(GSH)을 첨가하였을 때 선택적으로 반응이 일어남을 확인할 수 있다. 또한, Cys과 Hcy의 반응에서는 상기 화합물의 변형이 일어나 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신과도 반응이 일어나지 않는 것을 확인할 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 화합물은 티올기를 함유하는 아미노산 중 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신의 선택적인 검출을 위한 탐침으로써 유용하게 사용될 수 있다.
시험예 3. GSH 와의 반응 속도 평가
실시예 5 내지 8의 화합물을 각각 100mM HEPES 완충용액(pH = 7.4)에 10μM의 농도로 4개의 큐벳에 용해시켰다. 이 후, 각각의 큐벳에 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신(GSH) 1000 당량을 넣고, 2시간 후 흡광기를 이용하여 시간에 따른 흡광도를 측정하였으며, 이로부터 각 이탈기마다 알려진 시그마 값에 따라 Hammett plot을 얻었으며, 그 결과는 도 3과 같다.
도 3의 결과로부터, 실시예 5 내지 8의 화합물은 각각 GSH와 친핵 방향족성 치환 반응(SNAr)을 통하여, 대응하는 치환된-페닐티오기가 GSH의 티올기로 치환되었으며, 반응 속도는 이탈기로서 p-니트로페닐티오기를 갖는 화합물이 가장 빠른 것을 알 수 있다.
시험예 4. 세포 내 ( in vivo ) FSH 와의 결합 특성.
페니실린 100 units/mL, 스트렙토마이신 100mg/mL, 10% 열-불활성화시킨 우태아혈청을 함유하는 RPMI-1640 배지 중에서 BT-474세포와 McCoy5A 배지 중에서 MCF7 세포 (BT-474: HER2(+), MCF7: HER2(-))를 단독으로 배양하였다. 상기 세포 배양은 지름 35mm의 배양 접시 2개에 각각 BT-474 세포는 2 x 105 cells의 농도, MCF7 세포는 0.8 x 105cells의 농도로 접종하고, 실시예 10에서 제조된 허셉틴-컨쥬게이션된 화합물을 10μM의 농도로 처리하여 배양하였다. 각각 배양된 세포를 1시간 동안 37℃에서 배양한 후, 공초점 현미경 이미징(confocal laser scanning microscope imaging)을 이용하여 시각화하였다. 공초점 현미경 이미징은 3개의 채널을 이용하여 활성화시켰으며, 각각의 파장 (λex)은 405 nm, 488 nm 및 555 nm로 하였다. 그 결과는 도 4와 같다.
도 4의 결과로부터, 실시예 10에서 제조된 허셉틴-컨쥬게이션된 화합물은 허셉틴 리셉터가 많이 발현되는 BT-474 세포에 높은 형광이 검출되었음을 확인할 수 있다. 반면에 허셉틴 리셉터가 덜 발현되는 MCF7 세포에는 비교적 낮은 형광이 검출되는 것을 확인할 수 있다. 본 발명에 따른 화합물은 GSH가 발현되는 암세포의 치료에 있어서도 항암제(예를 들어, 허셉틴 등)의 진단 및 치료작용을 시각화할 수 있는 GSH 검출용 탐침으로 유용하게 사용될 수 있다.

Claims (2)

  1. 하기 화학식 1a의 화합물 또는 화학식 1b의 화합물을 포함하는 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신 검출용 조성물:
    <화학식 1a>
    Figure 112014020770645-pat00018

    <화학식 1b>
    Figure 112014020770645-pat00019

    식 중,
    R1은 니트로, 할로겐, C1 내지 C4의 알킬, 또는 아미노이고,
    R2 및 R3는 독립적으로 C1 내지 C4의 알킬이고,
    R4는 수소 또는 2,5-디옥소피롤리딜이고,
    X는 할로겐이다.
  2. 제1항에 있어서, 상기 화학식 1a의 화합물 또는 화학식 1b의 화합물이
    1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-(4-니트로페닐티오)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨 브로마이드;
    2-((E)-2-((E)-2-(4-브로모페닐티오)-3-((E)-2-(1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)시클로헥-1-센일)비닐)-1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸-3H-인돌륨 브로마이드;
    1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-(p-톨릴티오)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨 브로마이드;
    2-((E)-2-((E)-2-(4-아미노페닐티오)-3-((E)-2-(1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)시클로헥-1-센일)비닐)-1-(3-뷰톡시-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌륨 브로마이드;
    3-(2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(2-카복시에틸)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-(4-니트로페닐티오)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨-1-일)프로파노에이트;
    3-(2-((E)-2-((E)-2-(4-브로모페닐티오)-3-((E)-2-(1-(2-카복시에틸)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨-1-일)프로파노에이트;
    3-(2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(2-카복시에틸)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-(p-톨릴티오)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨-1-일)프로파노에이트;
    3-(2-((E)-2-((E)-2-(4-아미노페닐티오)-3-((E)-2-(1-(2-카복시에틸)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨-1-일)프로파노에이트; 및
    3-(2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(1-(3-(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시)-3-옥소프로필)-3,3-디메틸인돌린-2-일리딘)에틸리덴)-2-(4-니트로페닐티오)시클로헥-1-센일)비닐)-3,3-디메틸-3H-인돌륨-1-일)프로파노에이트
    로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 감마-L-글루타밀-L-시스테닐글라이신 검출용 조성물.
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