KR101460417B1 - 신규 화합물 및 상심자 추출물로부터 분리된 분리 화합물을 유효성분으로 함유하는 면역증강용 조성물 - Google Patents

신규 화합물 및 상심자 추출물로부터 분리된 분리 화합물을 유효성분으로 함유하는 면역증강용 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR101460417B1
KR101460417B1 KR1020120155860A KR20120155860A KR101460417B1 KR 101460417 B1 KR101460417 B1 KR 101460417B1 KR 1020120155860 A KR1020120155860 A KR 1020120155860A KR 20120155860 A KR20120155860 A KR 20120155860A KR 101460417 B1 KR101460417 B1 KR 101460417B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
compound
pyrrole
formyl
acid
butanoic acid
Prior art date
Application number
KR1020120155860A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20140092446A (ko
Inventor
김성연
이미경
박현
장보윤
김선범
조양희
이상훈
한상배
황방연
Original Assignee
원광대학교산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 원광대학교산학협력단 filed Critical 원광대학교산학협력단
Priority to KR1020120155860A priority Critical patent/KR101460417B1/ko
Publication of KR20140092446A publication Critical patent/KR20140092446A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101460417B1 publication Critical patent/KR101460417B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/32—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/33—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/333—Radicals substituted by oxygen or sulfur atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/30—Animal feeding-stuffs from material of plant origin, e.g. roots, seeds or hay; from material of fungal origin, e.g. mushrooms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/116—Heterocyclic compounds
    • A23K20/132—Heterocyclic compounds containing only one nitrogen as hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/03—Organic compounds
    • A23L29/045—Organic compounds containing nitrogen as heteroatom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23P—SHAPING OR WORKING OF FOODSTUFFS, NOT FULLY COVERED BY A SINGLE OTHER SUBCLASS
    • A23P10/00—Shaping or working of foodstuffs characterised by the products
    • A23P10/20—Agglomerating; Granulating; Tabletting
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/60—Moraceae (Mulberry family), e.g. breadfruit or fig
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/324—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on the immune system

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

본 발명은 신규 화합물 및 상심자 추출물로부터 분리된 분리 화합물을 유효성분으로 함유하는 면역증강용 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 본 발명은 대식세포 Raw 264.7 세포내에서 NO 생성증가, TNF-α 및 IL-12 등의 면역증강인자의 분비능 증가 효과를 나타내어 면역세포 내에서 활성 증진 효과를 나타냄으로서 면역 증강 효능이 우수하여 면역 저하증의 예방, 억제 및 치료에 우수한 면역증강 효능을 갖는 식품, 의약품 및 사료 첨가제로서 유용하다.

Description

신규 화합물 및 상심자 추출물로부터 분리된 분리 화합물을 유효성분으로 함유하는 면역증강용 조성물{A new compound and Composition comprising compounds isolated from the fruit extract of Morus alba L for immuno-stimulating activity}
본 발명은 신규 화합물 및 상심자 추출물로부터 분리된 분리 화합물을 유효성분으로 함유하는 면역증강용 조성물에 관한 것이다.
[문헌 1] Richard A. Goldsby, et al., KUBY Immunology, 2000
[문헌 2] Ragupathi, G., Yeung, K.S., Leung, P.C., Lee, M., Lau, C.B.S., Vickers, A., Hood, C., Deng, G., Cheung, N.K., Cassileth, B., Livingston, P., 2008. Evaluation of widely consumed botanicals as immunological adjuvants. Vaccine 26, 4860-4865.
[문헌 3] Won, D.P., Lee, J.S., Kwon, D.S., Lee, K.E., Shin, W.C., Hong, E.K., 2011. Immunostimulating activity by polysaccharides isolated from fruiting body of Inonotus obliquus. Molelular Cells 31, 165-173.
[문헌 4] Sun, H.X., Qin, F., Ye, Y.P., 2005. Relationship between haemolytic and adjuvant activity and structure of protopanaxadiol-type saponins from the roots of Panax notoginseng . Vaccine 23, 5533-42.
[문헌 5] Wolf, S.F., Sieburth. D., Sypek, J. 1994. Interleukin 12: a key modulator of immune function. Stem Cells 12, 154-168.
[문헌 6] Lee, J.S., Hong, E.K., 2011. Immunostimulating activity of the polysaccharides isolated from Cordyceps militaris. International Immunopharmacology 11, 1226-1233.
[문헌 7] Murray, P.J., Wynn, T.A., 2011. Protective and pathogenic functions of macrophage subsets. Nature Reviews Immunology 11, 723-737.
[문헌 8] 정보섭외, 도해 향약대사전, 영림사, p545-548, 1998)
[문헌 9] Hiermann, A., Kedwani, S., Schramm, H.W., Seger, C., 2002. A new pyrrole alkaloids from seeds of Castanea sativa. Fitoterapia 73, 22-27.
[문헌 10] Chin, Y.W., Lim, S.W., Kim, S.H., Shin, D.Y., Suh, Y.G., Kim, Y.B., Kim, Y.C., Kim, J., 2003. Hepatoprotective pyrrole derivatives of Lycium chinensis fruits. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 13, 79-81.
[문헌 11] Carmichael, J., DeGraff, W.G., Gazdar, A.F., Minna, J.D., Mitchell, J.B., Jobgen, W.S., 1987. Evaluation of a tetrazolium-based semiautomated colorimetric assay: assessment of chemosensitivity testing. Cancer Research 47, 936-942.
[문헌 12] Jobgen, W.S., Jobgen, S.C., Li, H., Meininger, C.J., Wu, G., 2007. Analysis of nitrite and nitrate in biological samples using high-performance liquid chromatography. Journal of Chromatography B Analytical Technologies in Biomedical and Life Sciences. 851, 71-82.
[문헌 13] Ledur, A., Fitting, C., David, B., Hamberger, C., Cavaillon, J.M., 1995. Variable estimates of cytokine levels produced by commercial ELISA kits: results using international cytokine standards. Journal of Immunological Methods 186, 171-179.
[문헌 14] Rahim, S.S., Khan, N., Boddupalli, C.S., Hasnain, S.E., Mukhopadhyay, S. 2005. Interleukin-10 (IL-10) mediated suppression of IL-12 production in RAW 264.7 cells also involves c-rel transcription factor. Immunology 114, 313-321.
[문헌 15] Cheng, A.W., Wan, F.C., Wang, J.Q., Jin, Z.Y., Xu, X.M., 2008. Macrophage immunomodulatory activity of polysaccharides isolated from Glycyrrhiza uralensis Fish. International Immunopharmacology 8, 43-50.
[문헌 16] Chen W., Zhang W., Shen W., Wang K., 2010. Effects of the acid polysaccharide fraction isolated from a cultivated Cordyceps sinensis on macrophages in vitro. Cell Immunol. 262(1), 69-74.
[문헌 17] 식품의약품안전청, 의약품등의 독성시험기준, 식품의약품안전청고시 2005-60호, 2005
면역계는 자연저항, 비특이성 면역체계 및 특이성 면역체계로 구분할 수 있다. 자연저항(1차 방어선)이란 미생물을 위시한 모든 침입자들을 그들의 종류에 관계없이 막아내는 해부생리학적 요소들을 말하며, 비특이적 면역(2차 방어선)은 자연저항을 돌파하여 체내로 들어온 침입자들을 제거하는 식세포로 구성된 방어체계를, 그리고 특이성 면역계(3차 방어선)는 림프구들로 구성된 면역체계를 말하는데, 이중 특이성 면역계는 기억능 그리고 자기와 비자기를 구분할 수 있는 능력을 지닌 고도로 발달한 면역체계이다 (Richard A. Goldsby, et al., KUBY Immunology, 2000).
대식세포는 많은 라이소솜을 가지고 있고 이들은 산성가수분해효소와 과산화 효소를 함유하고 있다. 또한 유리면과 플라스틱 표면에 강하게 부착하는 성질이 있으며 미생물이나 종양세포 등을 활발하게 탐식한다. 상기 세포는 IFN-γ등의 사이토카인 수용체를 가지고 있다. 이들은 보체성분, 인터페론, 인터루킨-1 및 종양괴사인자 같은 사이토카인을 생산하며 T-세포로부터 생산되는 여러 가지 사이토카인에 의해 기능이 증강될 수 있다. 백혈구의 일종인 T-세포는 혈중 소림프구의 약 70%를 차지한다. T-세포는 흉선에서 분화되며 T-세포항원수용체(TCR)를 갖는다. 말초혈액 T-세포는 CD4 양성인 TH 세포(helper T-cell)와 CD8 양성인 TC 세포(cytotoxic T-cell)로 나뉘며, CD4+ TH 세포는 MHC II 급(class) 분자에 결합된 항원을 인식하여 활성화되며, B세포를 도와서 항체생성을 가능하게 하거나 다른 T 세포의 기능을 돕는다. CD4+ TH 세포는 다시 그들이 생산하는 사이토카인을 근거로 TH1 및 TH2로 분류할 수 있다. 실험용 생쥐(mouse)의 TH1세포는 인터루킨-2(IL-2), 인터페론-감마(IFN-γ) 등을 분비하는 반면에 TH2 세포는 IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, IL-13 등을 분비한다. 그러나 사람에 있어서는 IL-2, IL-6, IL-10, IL-13의 생성이 엄격히 구분되지 않는다. TH1세포는 세포면역반응에 관여하며 세포독성 및 염증성 반응을 활성화한다. TH2 세포에서 생성된 사이토카인은 항체형성을 촉진시키는데, 특히 IgE의 생성을 도우며 호산구의 증식과 기능을 증강시키므로 TH2 사이토카인은 항체생성 및 알레르기 반응에서 흔히 발견된다. TH1 과 TH2 사이토카인은 서로간 억제기능을 가지고 있고, 동물의 감염증에서 항 IL-4 항체와 항 IFN-γ항체로 질환의 경과를 변화시킬 수 있음이 밝혀졌으며, 류마티스 관절염의 환자에 IFN-γ를 주사하여 증상의 호전이 관찰된 예도 있다 (Richard A. Goldsby, et al., KUBY Immunology. 2000).
천연물은 아시아 국가즐에서 다양한 질환의 치료에 사용되어 왔다. 폭넓게 사용되어 온 식물들은 면역증강, 건강 유지 및 장수를 위한 강장제로 사용되어 왔으며, 다양한 구조의 구성성분들, 특히, 폴리사카라드(polysaccharides),β-글루칸(glucans), 사포닌(saponins) 및 쿠르쿠미노이드(curcuminoids) 등의 성분들은 임상 및 약물 적용에 있어 폭넓게 면역증강제로서 제시되어 왔다 (Ragupathi et al., 2008; Won et al., 2011; Sun et al., 2005).
면역증강(Immunostimulation)은 암 및 염증 질환 등과 같은 다양한 질환에 대한 신체 방어 기전을 보강하는 중요한 치료학적 전략중 하나이다. 대식세포들은 면역반응에서 주요한 역할을 수행한다. 대식세포에서의 주요한 역할인 식세포 작용은 미생물 및 기타 발열성 입자들을 흡수하고 또한 종양괴사인자(tumor necrosis factor; TNF)-α, 인터루킨(interleukin; IL)-1β, IL-12과 같은 다수의 시토킨(cytokin) 및 일산화 질소 (nitric oxide; NO) 및 반응성 산소종(reactive oxygen species; ROS)과 같은 세포독성 및 염증성 물질을 분비함으로서 면역 반응을 자극시킨다 (Wolf et al., 1994; Lee and Hong, 2011; Murray and Wynn, 2011).
상심자(桑子)는 뽕나무과(Moraceae)에 속하는 뽕나무(Morus alba ) 열매로서, 당분, 탄닌산(tannic acid), 사과산, 비타민(vitamin) B1, B2, C, 카로텐(carotene), 리놀산(linolic acid), 스테아린산(stearic acid), 올레인산(oleic acid) 등을 함유한 것으로 알려져 있으며, 소갈증 변비 등의 치료에 사용되어 왔다 (정보섭외, 도해 향약대사전, 영림사, p545-548, 1998)
그러나, 상기 문헌의 어디에도 상심자 추출물로부터 분리된 화합물이 면역 증강 효과에 효과적이라는 어떠한 개시도 된 바가 없다.
따라서, 현대 객관적인 면역 활성 지표들을 이용하여 한약재로 사용되는 천연물 중에 면역증강효과 및 그 작용기전을 밝히고자 하였다.
이에 본 발명자들은 상심자 추출물로부터 분리된 화합물들이 대식세포 Raw 264.7 세포내에서 NO 생성증가, TNF-α 및 IL-12 등의 면역증강인자 의 분비능 생성 증가 효과를 나타내어 면역세포 내에서 활성 증진 효과를 나타냄으로서 면역 증강 효능이 우수하여 면역저하증의 예방, 억제 및 치료에 우수함을 확인하여 면역증강 효능을 갖는 식품, 의약품 및 사료 첨가제로서 유용하게 이용될 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
상기한 목적을 달성하기 위하여,
본 발명은 상심자 추출물로부터 분리된 면역증강활성을 나타내는, 하기의 구조를 갖는 신규한 알칼로이드 화합물인 (4-(2-포르밀(formyl)-5-(((3-히드록시부탄;hydroxybutan-2-yl)옥시(oxy))메틸(methyl))-1H-피롤(pyrrol)-1-yl)부타노익 산(butanoic acid) (=모롤 A:, Morrole A), 그 이성체 또는 이의 약리학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
Figure 112012108821771-pat00001
Morrole A
또한, 본 발명은 상심자 추출물로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 면역 증강용 약학조성물을 제공한다.
본 발명은 상심자 추출물로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 면역 증강용 건강기능식품을 제공한다.
또한, 본 발명은 상심자 추출물로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 면역 증강용 동물사료 첨가제를 제공한다.
본원에서 정의되는 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물에 가용한 추출물을 포함한다.
본원에서 정의되는 상기 상심자 추출물로부터 분리된 화합물은 5-(히드록시메틸;hydroxymethyl)-1H-피롤(pyrrole)-2-카르복스알데히드(carboxaldehyde) (Compounds 1), 2-포르밀(formyl)-1H-피롤(pyrrole)-1-부타노익산(butanoic acid) (Compound 2), 2-포르밀(formyl)-5-(히드록시메틸;hydroxymethyl)-1H-피롤(pyrrole)-1-부타노익산(butanoic acid) (Compound 3), 2-포르밀(formyl)-5-(메톡시메틸;methoxymethyl)-1H-피롤(pyrrole)-1-부타노익산(butanoic acid) (Compound 4) 및 신규 알칼로이드 화합물인 (4-(2-포르밀(formyl)-5-(((3-히드록시부탄;hydroxybutan-2-yl)옥시(oxy))메틸(methyl))-1H-피롤(pyrrol)-1-yl)부타노익 산(butanoic acid)로부터 선택된 화합물을 포함한다.
본 발명의 화합물들은 당해 기술 분야에서 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용 가능한 염 및 용매화물로 제조될 수 있다.
약학적으로 허용 가능한 염으로는 유리산(free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 산부가염은 통상의 방법, 예를 들면 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴과 같은 수혼화성 유기 용매를 사용하여 침전시켜서 제조한다. 동일한 몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올(예, 글리콜 모노메틸에테르)을 가열하고 이어서 상기 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시킬 수 있다.
이 때, 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 인산, 황산, 질산, 주석산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 아세트산, 트리플루오로아 세트산, 시트르산, 말레인산(maleic acid), 숙신산, 옥살산, 벤조산, 타르타르산, 푸마르산, 만데르산, 프로피온산 (propionic acid), 구연산(citric acid), 젖산(lactic acid), 글리콜산(glycollic acid), 글루콘산(gluconic acid), 갈락투론산, 글루탐산, 글루타르산(glutaric acid), 글루쿠론산(glucuronic acid), 아스파르트산, 아스코르빈산, 카본산, 바닐릭산 및 히드로 아이오딕산 등을 사용할 수 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리토 금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비 용해 화합물염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로서는 특히 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하며, 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염을 적당한 은염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.
본 발명의 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염은, 달리 지시되지 않는 한, 본 발명의 화합물에 존재할 수 있는 산성 또는 염기성기의 염을 포함한다. 예를 들면, 약학적으로 허용 가능한 염으로는 히드록시기의 나트륨, 칼슘 및 칼륨염이 포함되며, 아미노기의 기타 약학적으로 허용 가능한 염으로는 하이드로브로마이드, 황산염, 수소 황산염, 인산염, 수소 인산염, 이수소 인산염, 아세테이트, 숙시네이트, 시트레이트, 타르트레이트, 락테이트, 만델레이트, 메탄설포 네이트(메실레이트) 및 p-톨루엔설포네이트(토실레이트) 염이 있으며, 당업계에서 알려진 염의 제조 방법이나 제조과정을 통하여 제조될 수 있다.
또한, 상기의 구조식 (5)의 구조를 갖는 신규 화합물은 비대칭 중심을 가지므로 상이한 거울상 이성질체 형태로 존재할 수 있으며, 모든 광학 이성질체 및 R 또는 S형 입체 이성질체 및 이들의 혼합물도 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 한다. 본 발명은 라세미체, 하나 이상의 거울상 이성질체 형태, 하나 이상의 부분 입체 이성질체 형태 또는 이들의 혼합물의 용도를 포함하며, 당업계에서 알려진 이성질체의 분리 방법이나 제조과정을 포함한다.
본 발명의 상심자 추출물로부터 분리된 화합물은 하기와 같은 제조공정으로 제조되거나 상용으로 구입가능하다.
건조시킨 상심자를 통상적인 추출방법에 따라 제조할 수 있으며, 건조된 상심자 건조 중량의 1 내지 20배, 바람직하게는 5 내지 15배 부피의 물, 메탄올 등과 같은 C1 내지 C4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물 및 메탄올 혼합용매을 가하여 0.5 내지 10시간, 바람직하게는 2 내지 5시간씩, 70℃ 내지 100℃로, 1 내지 10회, 바람직하게는 2 내지 5회 반복하여 냉침추출, 열수추출, 초음파 추출 및 환류냉각 추출 등의 추출방법으로, 바람직하게는 열수 추출한 후, 추출액을 여지로 감압 여과한 다음, 여과액을 농축하여 동결건조한 후 본 발명의 상심자 추출물을 수득한 후에, 얻어진 메탄올 추출물에 물을 가하여 현탁시키고, 이를 연속적으로 CHCl3, EtOAc 및 n-BuOH으로 분획을 수행하고, 상기 EtOAc 분획물을 대상으로 CH2Cl2-MeOH 전개용매를 이용하여 실리카겔 ?럼 크로마토그래피법을 수행하여 6개의 분획물 (MFE1-MFE6)을 수득하고 얻어진 MFE2 분획물을 세파덱스(Sephadex) LH-20 을 충진하고 전개용매(MeOH-H2O; 1:1)를 이용한 컬럼크로마토그래피를 수행하여 6개 분획들 (MFE21-MFE26)을 수득하고, 상기 분획물 중 MFE23 분획물을 대상으로 세미프렙(semipreparative) HPLC를 수행하여 본 발명의 화합물들인 5-(히드록시메틸;hydroxymethyl)-1H-피롤(pyrrole)-2-카르복스알데히드(carboxaldehyde) (Compounds 1), 2-포르밀(formyl)-1H-피롤(pyrrole)-1-부타노익산(butanoic acid) (Compound 2), 2-포르밀(formyl)-5-(히드록시메틸;hydroxymethyl)-1H-피롤(pyrrole)-1-부타노익산(butanoic acid) (Compound 3), 2-포르밀(formyl)-5-(메톡시메틸;methoxymethyl)-1H-피롤(pyrrole)-1-부타노익산(butanoic acid) (Compound 4) 및 신규 알칼로이드 화합물인 모롤 에이{Morrole A=(4-(2-포르밀(formyl)-5-(((3-히드록시부탄;hydroxybutan-2-yl)옥시(oxy))메틸(methyl))-1H-피롤(pyrrol)-1-yl)부타노익 산(butanoic acid) 에이(A),(Compound 5)}, 을 각각 분리가능하다.
본 발명은 상기 제조방법 및 상기 제조방법으로 얻어진 상심자 추출물로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 면역 증강용 약학조성물을 제공한다.
본 발명의 면역 증강용 약학조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.1 내지 50 중량%로 포함한다.
본 발명의 약학조성물은 화학요법 및 방사선요법과 같은 항암요법에 의한 면역기능의 저하 또는 골수이식 후 면역저하로 인한 질환, 면역계손상으로 인한 에이즈 및 면역기능의 저하로 인한 암질환등과 같은 면역저하증의 예방 및 치료에 사용될 수 있다.
본 발명의 추출물로부터 분리된 화합물을 함유하는 약학조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 추출물로부터 분리된 화합물을 함유하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 추출물로부터 분리된 화합물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물로부터 분리된 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 추출물로부터 분리된 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물로부터 분리된 화합물은 1일 0.0001 내지 100㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 10㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 추출물로부터 분리된 화합물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명은 상기 상심자 추출물로부터 분리된 화합물을 함유하는 면역증강용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 추출물로부터 분리된 화합물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있다.
또한, 면역력 증강 효과를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물로부터 분리된 화합물의 양은 일반적으로 본 발명의 건강 기능 식품 조성물은 전체 식품 중량의 0.01 내지 50 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 5 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.
본 발명의 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제, 액제 등의 형태를 포함한다.
본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물로부터 분리된 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한점이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.
상기 외에 본 발명의 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 추출물로부터 분리된 화합물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명은 상기 상심자 추출물로부터 분리된 화합물을 함유하는 면역증강용 동물사료 첨가제 및 이를 포함하는 사료를 제공한다.
상기의 동물사료 첨가제용 조성물은 20 내지 90% 고농축액 이거나 분말 또는 과립형태일 수 있다.
본 발명의 동물사료 첨가제용 조성물은 구연산, 후말산, 아디픽산, 젖산, 사과산 등의 유기산이나 인산나트륨, 인산칼륨, 산성피로인산염, 폴리인산염(중합인산염) 등의 인산염이나 폴리페놀, 카테킨(catechin), 알파-토코페롤, 로즈마리 추출물(rosemary extract), 비타민 C, 녹차 추출물, 감초 추출물, 키토산, 탄닌산, 피틴산 등의 천연 항산화제 중 어느 하나 또는 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물을 함유하는 동물사료 첨가제 및 이를 포함하는 사료는 보조성분으로 아미노산, 무기염류, 비타민, 항생물질, 항균물질, 항산화, 항곰팡이 효소, 살아있는 미생물 제제 등과 같은 각종보조제가 곡물, 예를 들면 분쇄 또는 파쇄된 밀, 귀리, 보리, 옥수수 및 쌀; 식물성 단백질 사료, 예를 들면 평지, 콩 및 해바라기를 주성분으로 하는 것; 동물성 단백질 사료, 예를 들면 혈분, 육분, 골분 및 생선분; 당분 및 유제품, 예를 들면 각종 분유 및 유장 분말로 이루어지는 건조성분, 건조 첨가제를 모두 혼합한 후, 액체 성분과, 가열 후에 액체가 되는 성분, 즉, 지질, 예를 들면 가열에 의해 임의로 액화시킨 동물성 지방 및 식물성 지방 등과 같은 주성분 이외에 영양보충제, 소화 및 흡수향상제, 성장촉진제, 질병예방제 등과 같은 물질과 함께 사용될 수 있다.
상기 동물사료 첨가제용 조성물은 동물에게 단독으로 식용 담체 중에서 다른 사료 첨가제와 조합되어 투여될 수 있다.
또한, 상기 동물사료 첨가제용 조성물은 탑 드레싱으로서 또는 이들을 동물 사료에 직접 혼합하거나 또는 사료와 별도로, 별도의 경구 제형으로, 주사 또는 경피로 또는 다른 성분과 조합하여 쉽게 투여할 수 있다. 통상적으로, 당업계에 잘 알려진 바와 같이 단독 일일 투여량 또는 분할 일일 투여량을 사용할 수 있다.
상기 동물사료 첨가제용 조성물은 동물 사료와 별도로 투여할 경우, 당업계에 잘 알려진 바와 같이 조성물의 투여 형태는 이들의 비-독성 제약상 허용 가능한 식용 담체와 조합하여 즉석 방출 또는 서방성 제형으로 제조할 수 있다. 이러한 식용 담체는 고체 또는 액체, 예를 들어 옥수수 전분, 락토오스, 수크로스, 콩 플레이크, 땅콩유, 올리브유, 참깨유 및 프로필렌 글리콜일 수 있다. 고체 담체가 사용될 경우, 화합물의 투여형은 정제, 캡슐제, 산제, 토로키제 또는 함당정제 또는 미분산성 형태의 탑 드레싱일 수 있다. 액체 담체가 사용될 경우, 연 젤라틴 캡슐제, 또는 시럽제 또는 액체 현탁액제, 에멀젼제 또는 용액제의 투여 형태일 수 있다. 또한, 투여 형태는 보조제, 예를 들어 보존제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 용액 촉진제 등을 함유할 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물이 동물사료 첨가제로 포함되는 동물사료는 동물의 식이 요구를 충족시키는데 통상적으로 사용되는 임의의 단백질-함유 유기 곡분일 수 있다. 이러한 단백질-함유 곡분은 통상적으로 옥수수, 콩 곡분 또는 옥수수/콩 곡분 믹스로 주로 구성되어 있다.
상기의 동물사료 첨가제는 침지, 분무 또는 혼합하여 상기 동물사료에 첨가하여 이용될 수 있다.
본 발명은 포유류, 가금 및 어류를 포함하는 다수의 동물 식이에 적용할 수 있다. 보다 상세하게, 식이는 상업상 중요한 포유류, 예를 들어 돼지, 소, 양, 염소, 실험용 설치 동물(랫트, 마우스, 햄스터 및 게르빌루스쥐), 모피 소유 동물(예, 밍크 및 여우), 및 동물원 동물(예, 원숭이 및 꼬리 없는 원숭이), 뿐만 아니라 가축 (예, 고양이 및 개)에게 사용할 수 있다. 통상적으로 상업상 중요한 가금에는 닭, 터키, 오리, 거위, 꿩 및 메추라기가 포함된다. 송어와 같은 상업적으로 사육되는 어류도 포함될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물을 포함한 동물용 사료 배합 방법은, 상기 조성물을 동물 사료에 건조 중량 기준으로 사료 1kg당 약 1g 내지 100g의 양으로 혼입한다.
또한, 사료 혼합물은 완전히 혼합한 후, 성분들의 분쇄 정도에 따라 경점성의 조립 또는 과립 물질이 얻어진다. 이것을 매시로서 공급하거나, 또는 추가 가공 및 포장을 위해 원하는 분리된 형상으로 형성한다. 이 때, 저장 중에 분리되는 것을 방지하기 위해, 동물 사료에 물을 첨가하고, 이어서 통상의 펠릿화, 팽창화, 또는 압출 공정을 거치는 것이 바람직하다. 과잉의 물은 건조 제거될 수 있다.
본 발명의 상심자 추출물로부터 분리된 화합물은 대식세포 Raw 264.7 세포내에서 NO 생성증가, TNF-α 및 IL-12 등의 면역증강인자 의 분비능 생성 증가 효과를 나타내어 면역세포 내에서 활성 증진 효과를 나타냄으로서 면역 증강 효능이 우수하여 면역저하증의 예방, 억제 및 치료에 우수함을 확인하여 면역증강 효능을 갖는 식품, 의약품 및 사료 첨가제로서 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 Raw 264.7 세포에서의 시료의 면역증강활성을 나타낸 도이다{ (A) 세포 생존능 실험 결과; (B) NO 생성, (C) TNF-α, (D) IL-12 분비 및 (E) 대식세포에서의 식균 활성을 나타내며, 각 데이터는 평균 (mean ± SD)을 나타내고 유의성은 비처치군(UN)과의 상이성으로 간주함 (*p < 0.05, **p<0.01)}.
이하, 본 발명을 하기의 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 상심자 추출물로부터 화합물들의 분리
1.1. 메탄올 추출물
상심자 (Morus alba, 구입처: 대학한약국(익산시 신용동), 충북대학교 약학대학 약초원에서 동정; 보관번호; CBNU201009-MF) 1.0 kg을 50% MeOH로 1L를 첨가하고 6시간동안 100℃에서 3회 환류 추출법으로 추출하고 감압농축하여 메탄올 추출물 (131.8 g)을 얻고, 얻어진 메탄올 추출물에 정제수 200ml를 가하여 현탁시키고, 이를 연속적으로 CHCl3, EtOAc 및 n-BuOH으로 분획을 수행하였다.
여기에서 얻은 EtOAc 분획물 2.7 g을 대상으로 CH2Cl2-MeOH 전개용매를 이용하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피법을 수행하여 6개의 분획물 (MFE1-MFE6)을 수득하고 얻어진 MFE2 분획물을 세파덱스(Sephadex) LH-20 을 충진하고 전개용매(MeOH-H2O; 1:1)를 이용한 컬럼크로마토그래피를 수행하여 6개 분획들 (MFE21-MFE26)을 수득하였다.
1.2. 메탄올 추출물로부터 물질 분리
용리 용매 (MeOH-water with 0.1% acetic acid; 43:57, F=2 min/ml, Rt=11.4, 14.0 및 15.21 min, 각각)를 이용한 세미프렙(semipreparative) HPLC를 수행하여 MFE23 분획물로부터 피롤 알칼로이드 계열 화합물들인 (pyrrole alkaloids), 하기 물성치를 나타내는 2-포르밀(formyl)-1H-피롤(pyrrole)-1-부타노익산(butanoic acid) (Compound 2, 4.2mg),
2-포르밀(formyl)-5-(메톡시메틸;methoxymethyl)-1H-피롤(pyrrole)-1-부타노익산(butanoic acid) (Compound 4. 13.9mg) 및 신규 알칼로이드 화합물인 모롤A{ (4-(2-포르밀(formyl)-5-(((3-히드록시부탄;hydroxybutan-2-yl)옥시(oxy))메틸(methyl))-1H-피롤(pyrrol)-1-yl)부타노익산(butanoic acid), 3.9mg)을 각각 얻었고,
상기 n-BuOH 분획물 30.3 g을 대상으로 용매(methanol-water; 0%, 25%, 50%, 75%, 100% MeOH in water)를 이용한 XAD-2 컬럼크로마토그래피를 수행하여 5 분획물 (MFB1-MFB5)을 얻고 상기 MFB4 분획물을 대상으로 용매(MeOH-H2O; 1:1)를 이용한 세파덱스(Sephadex) LH-20 컬럼크로마토그래피법을 수행하여 3개 분획물 (MFB41-MFB43)을 수득하고 MFB43 분획물을 대상으로 용매(MeOH-water with 0.1% acetic acid; 45:55, F=2 min/ml, Rt=4.8 및 6.2 min, 각각)를 이용한 세미프렙(semipreparative) HPLC를 수행하여 하기 물성치를 나타내는 5-(히드록시메틸;hydroxymethyl)-1H-피롤(pyrrole)-2-카르복스알데히드(carboxaldehyde) (Compounds 1, 2.1 mg) 및 2-포르밀(formyl)-5-(히드록시메틸;hydroxymethyl)-1H-피롤(pyrrole)-1-부타노익산(butanoic acid) (Compound 3, 12.0mg)을 각각 분리하였고 이들의 구조를 기존문헌에 기재된 물성치와 비교하여 동정하였다. (Hiermann et al., 2002; Chin et al., 2003)
5-( 히드록시메틸 ; hydroxymethyl )-1 H -피롤( pyrrole )-2-카르복스알데히드( carb oxaldehyde) ( Compounds 1)
Figure 112012108821771-pat00002
1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 4.64 (2H, s, CH2-6), δ 6.60 (1H, d, J = 3.5 Hz, CH-5), 7.40 (1H, d, J = 3.5Hz, CH-4), 9.56 (1H, s, CH-1) ppm;
13C NMR (100 MHz, CD3OD): δ 56.8 (C-6), 108.5 (C-4), 125.7 (C-3), 132.6 (C-2), 142.0 (C-5), 178.1 (C-1)
ESI-MS (positive mode) m/z : 148.15 [M+Na]+
2- 포르밀 ( formyl )-1 H -피롤( pyrrole )-1- 부타노익산 ( butanoic acid ) ( Compound 2)
Figure 112012108821771-pat00003
1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 2.04 (2H, p, J = 7.2 Hz, CH2-H2´), 2.26 (2H, t, J = 7.2 Hz, CH2-H3´), 4.39 (2H, t, J = 7.2 Hz, CH2-H1´), 6.27 (1H, dd, J = 2.4, 4.0, CH-H4), 7.05 (1H, dd, J = 1.6, 4.0, CH-H3), 7.18 (1H, s, CH-5), 9.47 (1H, d, J = 0.8, CH-1) ppm;
13C NMR (100 MHz, CD3OD): δ 26.3 (C-2´), 30.1 (C-3´), 45.6 (C-1´), 108.7 (C-4), 125.3 (C-3), 128.1 (C-5), 132.3 (C-2), 175.1 (COOH), 179.4 (CHO)
ESI-MS (positive mode) m/z : 261.01 [2M-H]-
2-포르밀(formyl)-5-(히드록시메틸;hydroxymethyl)-1 H -피롤(pyrrole)-1-부타노익산(butanoic acid) (Compound 3)
Figure 112012108821771-pat00004
1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 2.04 (2H, m, H-2´), 2.33 (2H, m, H-3´), 4.42 (2H, m, H-1´), 4.66 (2H, s, H-6), 6.28 (1H, d, J = 4.0 Hz, H-4), 7.01 (1H, d, J = 4.0 Hz), 9.44 (1H, s, H-1) ppm;
13C NMR (100 MHz, CD3OD): δ 26.2 (C-2´), 30.4 (C-3´), 44.4 (C-1´), 55.0 (C-5), 110.8 (C-4), 125.9 (C-3), 132.1 (C-2), 143.2 (C-5), 175.3 (COOH), 179.5 (CHO)
ESI-MS (positive mode) m/z : 234.19 [M+Na]+
2-포르밀(formyl)-5-(메톡시메틸;methoxymethyl)-1 H -피롤(pyrrole)-1-부타노익산(butanoic acid) (Compound 4)
Figure 112012108821771-pat00005
1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 2.01 (2H, m, H-2´), δ 2.34 (2H, t, J = 7.6, H-3´), 3.38 (3H, s, H-OCH3), 4.39 (2H, m, H-1´), 4.51 (2H, s, H-6), 6.30 (1H, d, J = 4.0 Hz, H-4), 7.00 (1H, d, J = 4.0 Hz, H-3), 9.47 (1H, s, H-1) ppm;
13C NMR (100 MHz, CD3OD): δ 26.2 (C-2´), 30.3 (C-3´), 44.4 (C-1´), 56.8 (OCH3), 64.9 (C-6), 111.4 (C-4), 124.4 (C-3), 132.4 (C-2), 139.6 (C-5), 175.1 (COOH), 179.7 (CHO)
ESI-MS (positive mode) m/z : 248.21 [M+Na]+
4-(2- 포르밀 ( formyl )-5-(((3- 히드록시부탄 ; hydroxybutan -2- yl ) 옥시 ; oxy ) 메틸 ; methyl )-1H-피롤( pyrrol )-1- yl ) 부타노익 산( butanoic acid ) ( Compound 5)
Figure 112012108821771-pat00006
pale yellowish gum;
UV (MeOH) λmax (log ε): 293 (3.85); IRmax 3407, 2938, 1703, 1408 cm-1
1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.15 (3H, d, J = 6.4 Hz, CH3-4″), 1.18 (3H, d, J = 6.4 Hz, CH3-3″, 2.03 (2H, m, H-3′), 2.36 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-2′), 3.47 (1H, m, H-1″, 3.75 (1H, m, H-2″, 4.43 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-1′), 4.62 (1H, d, J= 12.4 Hz, H-6a), 4.67 (1H, d, J = 12.4 Hz, H-6b), 6.31 (1H, d, J = 4.0 Hz, H-4), 7.01 (1H, d, J= 4.0 Hz, H-3), 9.46 (1H, s, CHO) ppm;
13C NMR (100 MHz, CD3OD): δ 15.0 (C-3″, 18.6 (C-4″, 27.6 (C-2′, 31.8 (C-3′, 45.9 (C-1′, 63.1 (C-6), 70.9 (C-2″, 80.6 (C-1″, 112.6 (C-4), 126.0 (C-3), 133.7 (C-2), 141.8 (C-5), 176.6 (COOH), 181.0 (CHO) ESI-MS (positive mode) m/z : 306 [M+Na]+
HRESIMS (positive mode) m/z: 306.1312 [M+Na]+ (Calc. for [C14H21NO5 + Na]+ 306.1317).
실험예 1. 세포 생존능에 대한 효과
상기 실시예 화합물들의 새포 생존능에 대한 효과를 확인하기 위하여 문헌에 기재된 방법을 이용하여 하기와 같이 MTT 어세이법(assay)을 수행하였다 (Carmichael et al., 1987).
RAW 264.7 세포 (ATCC, USA)를 10% 열처리-불활성 우태아 혈청(heat-inactivated fetal bovine serum) 및 항생제(penicillin-streptomycin)를 첨가한 DMEM 배지(Gibco, USA)로 37℃ 5% CO2 및 95% 대기 함유한 가습화 조건하에서 배양하였다. RAW 264.7 세포들을 3, 10, 30 및 100 mM 농도의 시료들로 24시간 동안 처리하고 배양하였다.
실험결과, 도 1-A에서 나타난 바와 같이 본 발명 화합물들은 음성대조군(화합물을 처리하지 않은 군)과 비교하여 유의적인 세포독성을 나타내지 않음을 확인하였다.
실험예 2. 면역증강효과 실험.
2.1. NO , TNF -α 및 IL -12 분비의 증가 효과
상기 실시예 화합물들의 NO, TNF-α 및 IL-12 분비에 대한 증가효과를 확인하기 위하여 문헌에 기재된 방법을 이용하여 하기와 같이 문헌에 기재된 방법을 응용하여 측정하였다.(Jobgen, W.S., Jobgen, S.C., Li, H., Meininger, C.J., Wu, G., 2007. Analysis of nitrite and nitrate in biological samples using high-performance liquid chromatography. Journal of Chromatography B Analytical Technologies in Biomedical and Life Sciences. 851, 71-82).
RAW 264.7 세포 (ATCC, USA)를 96웰 마이크로플레이트에 웰 당 1×105 씩 분주하고, 3, 10, 30 및 100 mM의 농도로 본 발명 화합물을 처리한 후, 37℃, 5% CO2 조건에서 24시간 배양한 후, 상층액을 취하여, 50㎕의 세포 배양 상층액에 동량의 그리스 시약(Griess reagent, 0.1% (w/v)N-(1-naphthyl)ethylenediamine dihydrochloride + 1% (w/v) sulfanilamide in 5%(v/v)phosphoric acid)을 넣고 혼합한 다음, 상온에서 10분 두었으며, 그 후 인피니트 200 스펙트로포토메터 (Tecan사, Switzerland)를 사용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 리포폴리사카리드(Lipopolysaccharide; LPS, 100 ng/ml)를 양성 대조군으로 사용하였다.
또한, 같은 조건에서 50㎕의 세포 배양 상층액을 취하여 염증 매개물질(inflammatory mediator)인 TNF-α(tumor necrosis factor-α)와 IL-12 (Interlukin 12)의 ELISA 검사를 실시하였다 (R&D Systems Quantikine Mouse TNF-α/IL-12 kit; Ledur et al., 1995; Rahim et al., 2005).
실험결과, 도 1 B에 나타난 바와 같이 RAW 264.7세포에서 화합물 3,4의 아질산 이온(NO2 -)의 농도가 대조군 대비 각각 1.8, 1.5배 증가하였고, 양성대조군으로 사용한 LPS 단독 처리군과 유사한 증가를 나타내어, 이를 통해 갈근 추출물이 NO 분비를 증가시킴을 확인할 수 있었으며, RAW 264.7세포에서 TNF-α가 대조군 대비 2.37, 2.31배 증가, 양성대조군으로 사용한 LPS 단독 처리군과 유사한 증가효과를 나타내었고, IL-12분비 역시 대조군 대비 유의적인 증가 효과를 나타냄에 따라, 화합물 3,4는 측정된 TNF-α,IL-12 와 NO 분비를 모두 증가시킴을 확인할 수 있었다(도 1C, 1D , 참조).
2.2. RAW 264.7에서의 식균작용에 대한 활성 효과
상기 실시예 화합물들의 RAW 264.7에서의 식균작용에 대한 활성을 확인하기 위하여 문헌에 기재된 Neutral Red Uptake법을 이용하여 이용하여 분석을 수행하였다 (Cheng, W.X. et al., Cellular Immunology, 262, pp69-74 2010.).
RAW 264.7 세포 (ATCC, USA)를 96웰 마이크로플레이트에 웰 당 1×105 씩 분주하고, 3, 10, 30 및 100 mM의 농도로 본 발명 화합물을 37℃, 5% CO2 조건에서 24시간 배양하고, 100㎕의 0.075% Neutral Red를 넣고 37℃ 배양기에서 1시간 배양후, 0.01% acetic acid와 100% 에탄올을 동량으로 혼합한 용액 200㎕를 실온에서 2시간 처리후, 인피니트 200 스펙트로포토메터 (Tecan사, Switzerland)를 사용하여 570nm에서 흡광도를 측정하였다. 리포폴리사카리드(Lipopolysaccharide; LPS, 100 ng/ml)를 양성 대조군으로 사용하였다.
실험결과, 도 1E 에 나타난 바와 같이 화합물 3 처리에 따른 RAW 264.7세포의 탐식능은 대조군 대비 30mM 처리군에서 최대 2.29배 증가하였고, 4번 화합물 역시 모든 농도에서 탐식능을 유의적으로 증가시켰다. 이를 통해 화합물 3,4는 대식세포의 탐식능을 향상시키는 것을 확인할 수 있었다(도 1B 참조).
2.3. 실험 결과
본 실험 결과, 화합물 3 및 4는 100 mM까지 유의적인 세포독성이 없이 NO 생성을 증가시켰다 (표 1 및 2, 도 1 A 및 B). TNF-α 및 IL-12 생성에 대한 효과에서도 유사한 양상을 나타냈다 (표 3 및 4, 도 1 C 및 D).
추가적으로 100mM 화합물 3으로 처치한 RAW 264.7 세포에서의 식균 활성은 비처치군보다 약 1.93배 정도 높은 활성을 나타냈다 (표 4, 도 1 E). 화합물 4 역시, 유의적으로 식균 작용을 증강시키는 활성을 나타냈다.
세포 생존능 (%)
conc.(mM) 3 10 30 100
UN 100.0 ± 1.0
LPS 98.0 ± 1.0
화합물 1 98.3 ± 1.0 96.4 ± 1.0 96.0 ± 1.0 97.1 ± 1.0
화합물 2 96.4 ± 1.0 96.9 ± 1.0 97.2 ± 1.0 95.7 ± 1.0
화합물 3 96.0 ± 1.0 97.3 ± 1.0 96.9 ± 1.0 98.3 ± 1.0
화합물 4 97.1 ± 1.0 96.3 ± 1.0 96.3 ± 1.0 95.9 ± 0.9
화합물 5 98.0 ± 1.0 98.0 ± 0.9 97.0 ± 0.8 98.0 ± 0.9
NO (mM)생성
conc.(mM) 3 10 30 100
UN 10.7 ± 0.75
LPS 21.8 ± 1.00
화합물 1 11.6 ± 0.78 12.9 ± 0.43 12.4 ± 1.30 13.9 ± 1.40
화합물 2 12.6 ± 0.78 12.9 ± 0.43 12.4 ± 1.30 13.9 ± 1.40
화합물 3 15.3 ± 0.19 18.4 ± 1.06* 18.3 ± 0.80* 19.3 ± 0.78*
화합물 4 11.2 ± 0.52 15.5 ± 0.81* 16.3 ± 0.35* 14.2 ± 0.27*
화합물 5 10.5 ± 0.43 10.6 ± 0.77 10.0 ± 1.43 10.0 ± 0.71
TNF-a (ng/ml) 분비능
conc.(mM) 3 10 30 100
UN 0.86 ± 0.13
LPS 2.80 ± 0.13
화합물 1 0.89 ± 0.08 0.79 ± 0.01 1.16 ± 0.02 1.24 ± 0.05
화합물 2 0.75 ± 0.03 0.99 ± 0.04 0.69 ± 0.07 0.89 ± 0.03
화합물 3 1.06 ± 0.16 1.97 ± 0.02* 2.03 ± 0.04* 1.80 ± 0.05*
화합물 4 1.28 ± 0.04 1.90 ± 0.20* 1.98 ± 0.06* 1.99 ± 0.04*
화합물 5 0.86 ± 0.24 0.90 ± 0.43 0.87 ± 0.39 0.98 ± 0.40
IL-12(pg/ml) 분비능
conc.(mM) 3 10 30 100
UN 70.0 ± 23.0
LPS 593.0 ± 67.0
화합물 1 95.0 ± 19.0 103.0 ± 21.0 98.0 ± 30.0 95.0 ± 21.0
화합물 2 89.0 ± 13.0 105.0 ± 33.0 90.0 ± 32.0 101.0 ± 33.0
화합물 3 88.0 ± 40.0 133.0 ± 12.0* 160.0 ± 40.0* 155.0 ± 62.0
화합물 4 93.0 ± 35.0 103.0 ± 40.0 133.0 ± 20.0* 124.0 ± 30.0
화합물 5 98.0 ± 40.0 108.0 ± 20.0 93.0 ± 40.0 112.0 ± 30.0
식균 활성 (%)
conc.(mM) 3 10 30 100
UN 100.0 ± 0.67
LPS 284.1 ± 1.90
화합물 1 109.6 ± 0.73 90.9 ± 0.61 90.1 ± 0.60 90.9 ±0.61
화합물 2 99.1 ± 0.66 141.1 ± 0.94* 123.4 ± 0.83 111.2 ± 0.74
화합물 3 90.7 ± 0.61 162.7 ± 1.09* 228.9 ± 1.53** 192.6 ± 1.29*
화합물 4 140.8 ± 0.94* 152.2 ± 1.02* 145.0 ± 0.97* 175.8 ± 1.18*
화합물 5 78.6 ± 0.69 87.3 ± 0.33 85.9 ± 1.03 81.0 ± 0.98
통계학적 검정
통계학적 유의성은 스튜던트 시험법(Student’s t-test) 상에서 p<0.05 이하 수치를 통계학적으로 유의성이 있는 것으로 간주하였다.
실험예 3. 경구투여 독성실험
본 실험에서는 7주령의 ICR 마우스 (오리엔트바이오, Japan)를 사용하여 본 발명의 화합물들 투여 전 4시간 동안 마우스를 절식하고, 체중을 측정한 후, 식품의약품안전청의 독성시험기준(식품의약품안전청, 의약품등의 독성시험기준, 식품의약품안전청고시 2005-60호, 2005)에 따라 2,000 mg/kg을 최고 용량으로 정하고, 정제 증류수로 희석하여 5 mg/kg, 50 mg/kg 및 500 mg/kg의 시험물질을 제조하였다. 투여는 임상에서의 주요 적용경로인 경구투여로 하였으며, 투여방법은 동물을 경배부 피부 고정법으로 고정한 후 금속제 경구투여용 존대를 이용하여 위내에 직접주입 하였다. 1일 1회 당일 체중을 기준으로 체중 kg당 10 ml을 투여액량으로 하여 투여하였고, 시험동물에 시험물질투여 후 2시간동안은 사료를 제한하였으며, 이후 시험기간 동안 사료와 물은 계속 공급하였다.
식품의약품안전청의 독성시험기준 및 국제경제협력기구의 급성독성시험 가이드라인 (OECD Guideline for the Testing Chemicals revised draft guideline 420, Organization for Economic Cooperation and Development (OECD), 2001)에 독성시험기준에 따라 투여 후 처음 6시간 동안을 특별한 주의를 가지고 시험동물의 피부, 털, 눈, 점막, 호흡기, 순환기, 자율신경계, 중추신경계, 신체 운동 활동성, 행동형태 및 시험동물의 진전(tremors), 경련(convulsions), 유연(salivation), 설사(diarrhoea), 기면(lethargy), 수면(sleep), 혼수(coma) 등의 유무를 관찰하였다. 투여 후 14 일 동안 1일 1회씩 일반 임상증상을 관찰하고 시험동물의 개별 체중은 시험물질을 투여하기 전과 후, 시험기간 동안 1일 1회씩 측정하였다.
투여 후 14일째에 ICR 마우스를 에틸 에테르(ethyl ether)로 마취하고, 방혈 치사시킨 후 모든 장기를 적출하여, 개체 시험동물의 육안적 병변 관찰하고 장기의 무게를 측정하였다.
면역증강에 효과를 나타내는 본 발명의 화합물들의 단회 경구투여에 의한 급성독성시험결과, 본 연구에 사용된 시험동물 및 조건에서 투여된 최고 용량인 2,000 mg/kg에서 사망하는 개체가 관찰되지 않았으며, 사용한 어떠한 용량에서도 식품의약품안전청의 독성시험기준에 따라 관찰된 모든 지표에서 본 발명의 화합물들의 투여에 의한 독성은 유발되지 않았다. 결론적으로 본 발명의 화합물들은 급성독성시험 권고 최대용량인 2,000 mg/kg에서도 독성이 없이 안전함을 확인하였다.
본 발명의 화합물들을 포함하는 약학조성물의 제제 예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예 1. 산제의 제조
Compound 1 ---------------------------------------- 20 ㎎
유당 ---------------------------------------------- 100 ㎎
탈크 ---------------------------------------------- 10 ㎎
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
제제예 2. 정제의 제조
Compound 2 ---------------------------------------- 10 ㎎
옥수수전분 ---------------------------------------- 100 ㎎
유당 ---------------------------------------------- 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 ------------------------------- 2 ㎎
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
제제예 3. 캅셀제의 제조
Compound 3 ---------------------------------------- 10 ㎎
결정성 셀룰로오스 --------------------------------- 3 ㎎
락토오스 ------------------------------------------ 14.8 ㎎
마그네슘 스테아레이트 ----------------------------- 0.2 ㎎
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
제제예 4. 주사제의 제조
Compound 4 ---------------------------------------- 10 ㎎
만니톨 -------------------------------------------- 180 ㎎
주사용 멸균 증류수 -------------------------------- 2974 ㎎
Na2HPO4·12H2O ------------------------------------- 26 ㎎
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
제제예 5. 액제의 제조
Compound 5 ---------------------------------------- 20 ㎎
이성화당 ------------------------------------------ 10 g
만니톨 -------------------------------------------- 5 g
정제수 -------------------------------------------- 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
제제예 6. 건강 식품의 제조
Compound 4 ---------------------------------------- 1000 ㎎
비타민 혼합물 ------------------------------------- 적량
비타민 A 아세테이트 ------------------------------- 70 ㎍
비타민 E ------------------------------------------ 1.0 ㎎
비타민 B1 ------------------------------------------ 0.13 ㎎
비타민 B2 ------------------------------------------ 0.15 ㎎
비타민 B6 ------------------------------------------ 0.5 ㎎
비타민 B12 ----------------------------------------- 0.2 ㎍
비타민 C ------------------------------------------ 10 ㎎
비오틴 -------------------------------------------- 10 ㎍
니코틴산아미드 ------------------------------------ 1.7 ㎎
엽산 ---------------------------------------------- 50 ㎍
판토텐산 칼슘 ------------------------------------- 0.5 ㎎
무기질 혼합물 ------------------------------------- 적량
황산제1철 ----------------------------------------- 1.75 ㎎
산화아연 ------------------------------------------ 0.82 ㎎
탄산마그네슘 -------------------------------------- 25.3 ㎎
제1인산칼륨 --------------------------------------- 15 ㎎
제2인산칼슘 --------------------------------------- 55 ㎎
구연산칼륨 ---------------------------------------- 90 ㎎
탄산칼슘 ------------------------------------------ 100 ㎎
염화마그네슘 -------------------------------------- 24.8 ㎎
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
제제예 7. 건강 음료의 제조
Compound 1 ---------------------------------------- 100 ㎎
비타민 C ------------------------------------------ 15 g
비타민 E(분말) ------------------------------------ 100 g
젖산철 -------------------------------------------- 19.75 g
산화아연 ------------------------------------------ 3.5 g
니코틴산아미드 ------------------------------------ 3.5 g
비타민 A ------------------------------------------ 0.2 g
비타민 B1 ------------------------------------------ 0.25 g
비타민 B2 ------------------------------------------ 0.3g
물 ------------------------------------------------ 정량
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

Claims (7)

  1. 상심자 추출물로부터 분리된 면역증강활성을 나타내는, 하기 구조식 (5)의 구조를 갖는 신규한 알칼로이드 화합물인 (4-(2-포르밀(formyl)-5-(((3-히드록시부탄;hydroxybutan-2-yl)옥시(oxy))메틸(methyl))-1H-피롤(pyrrol)-1-yl)부타노익 산(butanoic acid) 또는 이의 약리학적으로 허용 가능한 염:
    Figure 112014077227037-pat00007

    Morrole A (5):
  2. 상심자 추출물로부터 분리된 2-포르밀(formyl)-1H-피롤(pyrrole)-1-부타노익산(butanoic acid) (Compound 2), 2-포르밀(formyl)-5-(히드록시메틸;hydroxymethyl)-1H-피롤(pyrrole)-1-부타노익산(butanoic acid) (Compound 3), 2-포르밀(formyl)-5-(메톡시메틸;methoxymethyl)-1H-피롤(pyrrole)-1-부타노익산(butanoic acid) (Compound 4) 및 (4-(2-포르밀(formyl)-5-(((3-히드록시부탄;hydroxybutan-2-yl)옥시(oxy))메틸(methyl))-1H-피롤(pyrrol)-1-yl)부타노익 산(butanoic acid)로 부터 선택된 화합물을 유효성분으로 함유하는 면역 증강용 약학조성물.
  3. 제 2항에 있어서, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택되어진 용매에 가용한 추출물인 약학조성물.
  4. 상심자 추출물로부터 분리된 2-포르밀(formyl)-1H-피롤(pyrrole)-1-부타노익산(butanoic acid) (Compound 2), 2-포르밀(formyl)-5-(히드록시메틸;hydroxymethyl)-1H-피롤(pyrrole)-1-부타노익산(butanoic acid) (Compound 3), 2-포르밀(formyl)-5-(메톡시메틸;methoxymethyl)-1H-피롤(pyrrole)-1-부타노익산(butanoic acid) (Compound 4) 및 (4-(2-포르밀(formyl)-5-(((3-히드록시부탄;hydroxybutan-2-yl)옥시(oxy))메틸(methyl))-1H-피롤(pyrrol)-1-yl)부타노익 산(butanoic acid)로 부터 선택된 화합물을 유효성분으로 함유하는 면역 증강용 건강기능식품.
  5. 제 4항에 있어서, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 건강기능식품.
  6. 상심자 추출물로부터 분리된 2-포르밀(formyl)-1H-피롤(pyrrole)-1-부타노익산(butanoic acid) (Compound 2), 2-포르밀(formyl)-5-(히드록시메틸;hydroxymethyl)-1H-피롤(pyrrole)-1-부타노익산(butanoic acid) (Compound 3), 2-포르밀(formyl)-5-(메톡시메틸;methoxymethyl)-1H-피롤(pyrrole)-1-부타노익산(butanoic acid) (Compound 4) 및 (4-(2-포르밀(formyl)-5-(((3-히드록시부탄;hydroxybutan-2-yl)옥시(oxy))메틸(methyl))-1H-피롤(pyrrol)-1-yl)부타노익 산(butanoic acid)로 부터 선택된 화합물을 유효성분으로 함유하는 면역 증강용 동물사료 첨가제.
  7. 제 6항의 동물사료 첨가제를 포함하는 사료.
KR1020120155860A 2012-12-28 2012-12-28 신규 화합물 및 상심자 추출물로부터 분리된 분리 화합물을 유효성분으로 함유하는 면역증강용 조성물 KR101460417B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020120155860A KR101460417B1 (ko) 2012-12-28 2012-12-28 신규 화합물 및 상심자 추출물로부터 분리된 분리 화합물을 유효성분으로 함유하는 면역증강용 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020120155860A KR101460417B1 (ko) 2012-12-28 2012-12-28 신규 화합물 및 상심자 추출물로부터 분리된 분리 화합물을 유효성분으로 함유하는 면역증강용 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20140092446A KR20140092446A (ko) 2014-07-24
KR101460417B1 true KR101460417B1 (ko) 2014-12-01

Family

ID=51739081

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020120155860A KR101460417B1 (ko) 2012-12-28 2012-12-28 신규 화합물 및 상심자 추출물로부터 분리된 분리 화합물을 유효성분으로 함유하는 면역증강용 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101460417B1 (ko)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105753761B (zh) * 2015-04-01 2018-06-08 安徽农达生物技术有限公司 一种从芜菁根中高效提取药效活性成分的方法
CN104844497B (zh) * 2015-05-05 2017-06-30 嵊州亿源投资管理有限公司 一种从紫金牛根中提取活性酸的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 13 (2003) 79-81, Hepatoprotective Pyrrole Derivatives of Lycium chinense Fruits *
Journal of Ethnopharmacology, Volume 145, Issue 1, 9 January 2013, Pages 393-396, Macrophage activating activity of pyrrole alkaloids from Morus alba fruits *

Also Published As

Publication number Publication date
KR20140092446A (ko) 2014-07-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101585159B1 (ko) 발효 작두콩 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증 또는 알러지 질환의 예방 및 치료용 조성물
KR101705548B1 (ko) 아피오스 추출물 또는 아피오스 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물
KR101072053B1 (ko) 갈근 추출물을 함유하는 면역증강용 동물사료 첨가제 및 사료
KR20180090198A (ko) 몰로키아 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물
KR101829637B1 (ko) 참옻나무 목심 추출물을 함유하는 항암치료 부작용에 따른 소화기능장애, 백혈구 감소증 및 골수부전증의 개선, 예방 또는 치료용 조성물
KR101059280B1 (ko) 갈근 추출물을 함유하는 면역증강용 조성물
KR101460417B1 (ko) 신규 화합물 및 상심자 추출물로부터 분리된 분리 화합물을 유효성분으로 함유하는 면역증강용 조성물
KR102315959B1 (ko) 새싹귀리 추출물을 포함하는 면역증강 조성물
KR101484709B1 (ko) 벌사상자 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증강 및 암질환 치료 또는 예방용 조성물
KR100921909B1 (ko) 조혈모세포 증식을 갖는 더덕의 부탄올 분획을 함유하는 건강식품 조성물
KR20210051637A (ko) 식물 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물 및 이의 제조방법
KR101129984B1 (ko) 사상자추출물을 함유하는 면역증강용 조성물
KR101790657B1 (ko) 잣박 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 조성물
KR102312675B1 (ko) 개똥쑥 추출물, 후박 추출물 또는 이들의 혼합 추출물을 포함하는 항염증, 비만 및 비알콜성 지방간 질환의 개선, 예방 또는 치료용 조성물
KR101151484B1 (ko) 갈만추출물을 함유하는 면역증강용 조성물
KR102046878B1 (ko) 메밀 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물
KR101675096B1 (ko) 상심자 추출물을 유효성분으로 함유하는 암질환 치료 또는 예방용 조성물
KR20150083327A (ko) 화살나무 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 천식의 예방 또는 치료용 조성물
KR102182507B1 (ko) 잎새버섯의 미세 크기의 성분을 포함하는 면역증강용 조성물
KR101949557B1 (ko) 땅두릅 추출물을 포함하는 면역증강용조성물
KR101832357B1 (ko) 콩나물 유래 면역증강용 추출물 및 그 제조방법
KR20150087657A (ko) 비파 분획추출물을 함유하는 면역증강용 조성물
KR102531295B1 (ko) 곤드레 착즙액을 포함하는 면역기능 증진용 식품 조성물의 제조방법 및 이에 따른 면역기능 증진용 식품 조성물
KR100909572B1 (ko) 오보바톨 및 그 합성 유도체들을 유효성분으로 함유하는 당뇨와 대사증후군 질환 예방 및 치료용 조성물
KR20230090527A (ko) 팥 어린잎 또는 줄기 추출물을 포함하는 면역증강 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20171106

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20191028

Year of fee payment: 6