KR101369238B1 - 광감각제를 포함하는 염증성 피부질환 개선용 조성물 - Google Patents

광감각제를 포함하는 염증성 피부질환 개선용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은, 아미노산 서열 Nicotinyl-GHK(Gly-His-Lys)을 포함하는 펩타이드 복합체를 유효성분으로 포함하는 피부질환 개선용 조성물을 제공한다.
본 발명에 의하면, 여드름과 같은 염증성 피부질환의 개선 및 치료에 효과적이며, 체내의 활성산소의 감소에 유효한 효과를 가진 피부질환 개선용 조성물을 제공할 수 있다.

Description

광감각제를 포함하는 염증성 피부질환 개선용 조성물{COMPOSITION FOR IMPROVING INFLAMMATORY SKIN CONDITION INCLUDING PHOTOSENSITIZER}
본 발명은 광감각제를 포함하는 염증성 피부질환 개선용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 특정한 펩타이드 복합체 및 활성성분을 포함하여 피부내의 활성산소의 제거 및 피부염증 작용을 감소시켜 여드름 등의 피부 염증성 질환의 개선 및 치료에 효과적인 조성물에 관한 것이다.
인체의 피부는 물리· 화학적으로 외계로부터 신체를 보호하는 동시에 전신의 대사에 필요한 생화학적 기능을 영위하는 생명유지에 필수 불가결한 기관이다.
사람의 머리털, 손· 발톱을 포함한 피부에 나타나는 모든 이상소견을 피부질환, 즉 피부병이라 한다. 피부는 신체의 표면을 덮고 있으므로 외계로부터 자극이나 여러 병원체에 직접 접촉될 기회가 많고, 체내로부터 큰 영향을 받는다. 더욱이 피부의 근소한 변화도 눈으로 보고 손으로 만질 수 있으며, 병변부의 일부를 채취하여 병리조직학적으로 검사하거나 미생물의 검색 등과 같은 검사를 하기가 쉬워, 개개 질병의 진단을 명확하게 하는 것이 용이하므로, 그 종류는 다른 장기의 것에 비하여 상당한 수에 이르며 병명도 복잡 다양하다. 비교적 흔한 피부질환에는 아토피 피부염, 접촉피부염, 지루성 피부염, 두드러기, 무좀, 완선, 건선, 단순· 대상포진, 피부건조증, 주부습진, 여드름 등이 있다.
한편, 생리적 자연현상인 세포 노화로 인해 피부를 구성하고 있는 기본 단위인 피부 세포의 분열이 정상적으로 이루어지지 않고 재생기간이 점차 길어져 피부가 탄력을 잃으며, 노화 각질이 쌓이고 피부가 건조해지면서 주름이 생기기 시작한다. 현재, 노화로 인한 피부 주름을 회복시키기 위해 수술이나 연고 및 비타민 C 요법 등을 사용하고 있지만 인간의 오랜 숙원인 팽팽하고 탄력 있는 피부를 유지시키기에는 역부족이다. 또한, 수년 전부터 과일 산이나 김치 추출물과 같은 천연물을 이용한 피부 노화 방지 및 피부 개선제가 개발되고 있으나, 남성호르몬인 안드로겐 억제작용 및 그에 따른 피지분비 증가 억제작용에 의한 피부 개선제로서의 기능을 수행할 뿐 피부질환에 대한 치료제로서의 효과는 전혀 나타내지 못하고 있는 실정이다.
또한, 여드름은 그 원인이 아직 밝혀져 있지 않으나, 남성 호르몬에 의해 피지가 과잉 생성되고, 이어서 그러한 피지는 프로피오니박테리움 아크네스( Propionibacterium acnes)가 생산하는 리파제 등에 의해 유리 지방산과 각종 저분자 물질로 분해되는데, 이들 유리 지방산 및 각종 저분자 물질에 의한 자극으로 인해 염증 반응이 나타나는 것으로 알려져 있다. 따라서 여드름은 남성 호르몬(안드로젠) 의존성(androgen-dependent) 만성 피부 질환이기도 하다. 지루성 피부염도 마찬가지이다.
염증 반응은 피부의 내피에 존재하는 인지질(phospholipids)의 구성 성분인 아라키돈산(arachidonic acid)이 인지질 분해효소(phospholipase, PL) A2에 의해 세포막으로부터 분리되는데, 이러한 아라키돈산은 사이클로옥시게나제 (cyclooxygenase, COX) 작용으로 프로스타글란딘(prostaglandin, PG) E2가 되고, 이것은 염증성 반응에서 중요한 역할을 한다. 그리고 PLA2는 활성산소 등에 의해 활성화되는데, 프. 아크네스가 루코사이트(leukocyte) 등을 만들고 이로 인해 활성산소가 만들어진다.
COX에는 COX-1과 COX-2가 있으며, COX-1은 구성효소이고, COX-2는 유도효소로 염증생성 시 유도되는 효소이다. 이와 같이 아라키돈산을 거쳐 COX-2 반응을 거치는 염증 반응이 여드름과 피부염의 주된 반응이다.
결과적으로 여드름은 피지의 과잉생성, 모공의 과각질화 및 프. 아크네스의 작용, 염증 유도로 이어지는 복합적인 인자에 의해 발병하는 질환으로 본다.
현재 여러 가지의 요인들의 복합적인 작용으로 발생하는 여드름에 대하여 다양한 치료법이 이루어지고 있다. 대표적인 치료법으로는 강산성을 띠는 물질을 이용하여 각질을 녹이는 방식의 각질제거제에 의한 방법, 여드름이 난 부위에 직접 발라 지방 유리산을 제거해주는 방법, 항생물질(Erythromycin, Clindamycin)의 도포에 의한 방법, 여드름 균에 항균 작용을 가지는 Benzoyl peroxide, 면포 형성을 억제하여 이미 나와 있는 면포수를 줄이는 비타민 A 유도체 등을 피부에 도포하는 방법, 경구용 항생제를 복용하는 것, 스테로이드계 약물을 이용하는 방법, 레이져를 이용하는 것 등의 여러 가지 방법들이 행해지고 있다. 하지만 이들 치료법들은 약물 및 물리적인 방법에 의한 치료법으로서 장시간 시행하면 여러 가지 부작용을 일으킬 소지가 있다. 특히 항생물질이나 스테로이드계 약물에 의한 방법은 체내에서 축척되거나 내성이 생기는 심각한 문제를 일으킬 수 있다.
한국특허출원번호 제KR10-2010-7013169호 "여드름 피부용 피부 외용제" 한국특허출원번호 제KR10-2011-7013938호 "염증성 피부 질환의 치료를 위한 1-아미노-알칼시클로헥산 유도체" 한국특허출원번호 제KR10-2011-7021558호 "피부, 점막 및/또는 두피의 치료 및/또는 관리에 사용되는 펩티드 및 화장료 또는 약학 조성물의 사용"
본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로, 여드름과 같은 염증성 피부질환의 개선 및 치료에 효과적인 조성물을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.
본 발명의 다른 목적은 체내의 활성산소의 감소에 유효한 효과를 가진 피부질환 개선용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명은 상기의 목적을 달성하기 위한 것으로, 아미노산 서열 Nicotinyl-GHK(Gly-His-Lys)을 포함하는 펩타이드 복합체를 유효성분으로 포함하는 피부질환 개선용 조성물을 제공한다.
또한, 상기 복합체는 EGF(Epidermal Growth Factor), IGF(Insulin-like Grwoth Factor), SOD1(Superoxide Dismutase 1) 또는 이들의 혼합물을 더 포함하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 복합체 중 각각의 함량비는 Nicotinyl-GHK(Gly-His-Lys)의 펩타이드 100중량부에 대하여 EGF(Epidermal Growth Factor) 5 내지 20중량부, IGF(Insulin-like Grwoth Factor) 5 내지 20중량부, 및 SOD1(Superoxide Dismutase 1) 5 내지 20중량부인 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 복합체 중 각각의 함량비는 Nicotinyl-GHK(Gly-His-Lys)의 펩타이드 100중량부에 대하여 EGF(Epidermal Growth Factor) 10중량부, IGF(Insulin-like Grwoth Factor) 10중량부, 및 SOD1(Superoxide Dismutase 1) 10중량부인 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 조성물은 아미노레불린산(ALA) 또는 메틸기가 치환된 메틸-아미노레불린산(Methyl-ALA)를 활성성분으로 포함하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 피부질환은 여드름, 아토피, 두드러기, 건선, 염증성 질환 중 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 의하면, 여드름과 같은 염증성 피부질환의 개선 및 치료에 효과적이며, 체내의 활성산소의 감소에 유효한 효과를 가진 피부질환 개선용 조성물을 제공할 수 있다.
도 1은 본 발명의 실시예에 따른 Realtime PCR application 그래프이다.
본 발명은, 아미노산 서열 Nicotinyl-GHK(Gly-His-Lys)을 포함하는 펩타이드 복합체를 유효성분으로 포함하는 피부질환 개선용 조성물을 제공한다.
이하, 본 발명을 첨부한 도면을 참조하여 상세히 설명한다.
본 발명은 여드름, 아토피, 두드러기, 건선, 염증성 질환 등과 같은 피부질환의 개선 및 치료에 효과적인 조성물에 관한 것으로, 특정한 아미노산 서열의 펩타이드 및 여러가지 첨가물질을 포함한 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 피부질환 개선용 조성물은 Nicotinyl-GHK(Gly-His-Lys)을 포함하는 펩타이드 복합체를 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 펩타이드 복합체에는 피부질환의 개선에 도움이 되는 물질이 포함될 수 있는데, 그 예로서 EGF(Epidermal Growth Factor), IGF(Insulin-like Grwoth Factor), SOD1(Superoxide Dismutase 1)를 들 수 있다.
상기 EGF(Epidermal Growth Factor)는 표피세포 성장인자로서 53개의 아미노산으로 구성된 단백질이며, 세포의 분열을 유도해 표피세포의 성장을 촉진하는 성분이며, 표피세포 및 내피세포의 세포증식 및 진피의 구성성분인 콜라겐을 합성하는 섬유 아세포의 증식을 촉진하는 성분이며 피부재생효과가 우수한 성분이다.
상기 IGF(Insulin-like Grwoth Factor)는 인슐린 유사 성장인자로서, IGF-I과 IGF-II가 있으며, IGF-II는 IGF-I 과 구조적으로 유사한 단백질이다. IGF-I은 간과 섬유아 세포에서 합성되는 proinsulin과 구조적으로 유사한 7.6 kD의 단일 사슬 폴리펩타이드 호르몬으로 성장호르몬(GH)의 작용을 나타낸다.
성장호르몬(GH)이 뇌하수체에서 분비되면 이에 따라 간에서 IGF가 생성된다. 이렇게 분비된 IGF-1은 인체의 혈액을 따라 전신에 분포되어 작용한다. IGF는 생명유지에 극히 중요한 인자로써 HGH가 191개의 아미노산으로 구성된 것과 달리 IGF는 70개의 아미노산으로 형성되어 있다. IGF는 성장 호르몬 체인의 또 다른 한 부분이며 IGF의 주된 작용은 GH와 연관해서 대부분의 효과를 발휘한다.
상기 SOD1(Superoxide Dismutase 1)는 항산화효소로서, 활성산소를 줄여주는 효소이다. 활성산소는 체내에서 일어나는 대사과정의 부산물로서, 평상시에는 SOD 효소가 활성산소를 과산화수소로 먼저 바꿔주면 연이어 글라타티온 퍼옥시다아제(Glutathione peroxidase(GPx))라는 효소가 작용하여 무독한 물로 변환시킨다. 따라서, SOD 활성이 떨어지면 활성산소는 이산화질소와 만나서 ONOO-라는 독성이 강한 물질이 되며, 이것은 연이어 우리 몸의 여러 세포를 공격하여 노화를 촉진하고 각종 질병의 발생을 촉발하게 된다.
상기 복합체 중에서의 각각의 함량비는 Nicotinyl-GHK(Gly-His-Lys)의 펩타이드 100중량부에 대하여 EGF(Epidermal Growth Factor) 5 내지 20중량부, IGF(Insulin-like Grwoth Factor) 5 내지 20중량부, 및 SOD1(Superoxide Dismutase 1) 5 내지 20중량부인 것이 바람직하며, 특히 Nicotinyl-GHK(Gly-His-Lys)의 펩타이드 100중량부에 대하여 EGF(Epidermal Growth Factor) 10중량부, IGF(Insulin-like Grwoth Factor) 10중량부, 및 SOD1(Superoxide Dismutase 1) 10중량부인 것이 가장 바람직하다.
본 발명에 따른 피부질환 개선용 조성물은 상기의 펩타이드 복합체와 함께 활성성분 물질로서 아미노레불린산(ALA)이나, 메틸기가 치환된 메틸-아미노레불린산(Methyl-ALA)를 더 포함할 수 있다.
ALA(5-aminolevulinic acid)는 C-5의 지방족 화합물로서 각종 유기체의 tetrapyrrole 생합성(porphyrin chlorophyll, heme 및 vitamin B12 등) 과정에서 발견되는 중간물질의 하나이며, 인간을 포함한 생물체 내에 클로로필(Chlorophyll)과 헴(heme)과 같은 테트라피롤(tetraphyrrolle)의 생합성 과정의 필수적인 전구체이다.
메틸-ALA는 5-ALA의 치환기 중 하나가 메틸기로 치환된 것으로, 친수성이 강한 5-ALA의 친유성을 증가시킴으로써 피부의 투과율을 증가시켜 피부개선 및 치료 효과가 증가될 수 있다.
이와 같은 본 발명에 따른 펩타이드 복합체 및 활성성분을 포함하는 조성물로부터 개선할 수 있는 피부질환은 생체 내의 활성 산소에 의하여 발생되는 피부노화 및 염증에 의한 각종 질환 등의 있으며, 그 예로 여드름, 아토피, 두드러기, 건선, 염증성 질환을 들 수 있다.
본 발명에 따른 조성물을 이용한 피부질환 개선 또는 치료를 위한 바람직한 구현예로, 본 발명의 조성물에 유효성분으로 포함되어 있는 광감각제의 활성화를 위해 LED 조사를 병용하여 사용하는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명의 보다 바람직한 구현예로는, 본 발명의 조성물에 대한 상기 LED 조사의 파장은 단파장 및 장파장 모두 효과적이며, 가장 바람직하게는 450 ~ 475 nm의 단파장, 650 ~ 675 nm의 장파장 조사이다.
본 발명의 보다 바람직한 구현예에 따르면, 상기 LED 조사 시간은 5 ~ 20분이며, 보다 더 바람직하게는 5 ~ 15분이고, 가장 바람직하게는 10분이다.
본 발명의 보다 바람직한 구현예에 따르면, 상기 LED의 조사거리는 10 cm 이내이며, 보다 더 바람직하게는 5 cm 이내이고, 가장 바람직하게는 2 cm 이내이다.
이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다 할 것이다.
[실시예]
펩타이드 복합체 제조
Superoxide Dismutase (SOD) 1ppm,
Epidermal Growth Factor (EGF) 1ppm,
Insulin-like Growth Factor (IGF) 1ppm,
Vitamin Peptide 10ppm)
[실험예]
1. 세포배양
Cyclooxygenase(COX)라는 효소는 우리 몸 속에서 COX-1과 COX-2의 두 개의 아형으로 존재한다. 그 중 COX-1은 보호작용을 맡은 효소로서 몸 어디에서나 발견되는 반면, COX-2는 주로 염증이 발생된 환경에서 유도적으로 발현이 증가되며 세균의 지질다당류(lipopolysaccharides), 사이토카인, 성장인자 그리고 종양 인자에 의해 표현이 증가된다. 즉 COX-2는 염증 유발성 prostaglandin의 합성을 촉진하는 효소이다.
본 실험은 인간각질형성세포주(HaCaT)에서 염증을 유발하는 효소인 COX-2의 발현정도를 mRNA 수준에서 확인하는 방법으로, 구체적으로는 인간 각질형성세포주(HaCaT)를 Dulbecco's Modified Eagle's Medium(DMEM), 10% Fatal bovine serum(FBS), 1% Antibiotic-Antimycotic(GIBCO, Cat No. 15240-062)과 함께 75 Cm2 flask에서 37℃, 5% CO2의 조건으로 배양하였다.
이 인간각질형성세포가 80%이상 confluence 될 때 6well plate에 1×105 cells/well 분주한 후, 세포배양 조건에서 confluence가 80%이상 도달될 때까지 배양하였다. 이 후 배지를 제거한 다음 각 시료를 새 배지로 교환 후 24시간 세포배양 조건에서 추가 배양하였다.
시험방법은 real-time PCR 법을 수행하였으며, 그 시험 순서는 아래와 같다.
2. RNA Isolation
RNA는 QiAzol Lysis Reagent(QIAGEN)을 이용한 total RNA isolation 방법으로 RNA를 분리하였다. 배지를 제거한 세포를 PBS(phosphated buffer saline)로 세척하고, 1ml의 QIAzol Lysis Reagent을 첨가하여 실온에서 10분간 처리한다. 이후 새로운 E-tube에 옮긴 후 200ul의 chloroform(Amresco)을 첨가하여 잘 섞은 후 실온에서 5분간 반응시킨 다음, 4℃, 12,000rpm에서 15분간 원심분리하여 mRNA층과 단백질 DNA층으로 분리시켰다. mRNA가 포함되어 있는 상등액 부분인 500ul을 새로운 E-tube에 옮기고 여기에 500ul의 Isopropanol(MERCK KGaA)을 첨가하여 상온에서 4 ~ 5회 inverting해 준 다음 상온에서 7분간 추가로 반응시켰다. 이를 다시 4℃, 13,000rpm으로 30분간 원심분리하여 mRNA pellet을 침전시켰다. 상등액을 제거하여 pellet을 1ml의 75% Ethanol로 세척한 후 건조하여 20ul의 RNA Free Water(WelGENE Inc.)에 녹여 NanoDropR Spectrophotometer(ND-1000, UV/VIS)을 사용하여, Total RNA 량을 5ug/ml로 정량하였다.
3. cDNA 합성
cDNA 합성은 PrimeScriptTM reagent Kit(TaKaRa, RR037A)를 이용하여 합성하였다. 자세하게는 total RNA 20ul에 50uM의 oligo-dT primer 1ul, 100uM의 Random Primer 4ul, 5X primeScript Buffer 4ul, PrimeScript RT enzyme Mix 1ul를 섞은 후 37℃에서 15분간 반응시켜 cDNA를 합성하였고, RTase를 불활성화시키기 위해 85℃에서 5초간 반응하였다.
4. Real-time PCR
각각의 유전자를 분석하기 위하여 합성된 cDNA로 Real-time PCR을 실시하였다. cDNA와 프로브(probe)(beta-actin, COX-2), TaqMan Gene expression master mix(AB, Pro. No.4369016)을 혼합한 후, 7500 Real time PCR system(applied biosystems)을 이용하여 수행하였다. 모든 유전자에 대하여 50℃에서 2분 1회, 95℃에서 10분 1회, 95℃에서 15초 동안 60회로 실시하였다. 실험에 사용한 프라이머들의 Applied Biosystems(USA)의 inventoried primers를 사용하였다. 발현율은 각각의 beta-actin과의 상대적인 차이를 보정하여 나타내었다.
[실험 결과]
인간각질형성세포주인 HaCaT에서 각각의 표 1의 처리군이 COX-2의 발현에 어떤 영향을 미치는지를 Real-time PCR 방법으로 시험하였다(표 1).
LED을 이용한 광 적용 조건은 표 2에 나타내었다.
그 결과 무처리 대조군과 비교하였을 때 가장 높은 COX-2 발현 감소효과를 보이는 그룹은 실험예 16의 처리군이었다. 특이하게도 무처리 대조군에 대비하여 LED Red의 조사만으로 COX-2의 발현이 약하게 증가하여 염증 유발의 효과가 있음을 확인하였으며, 이러한 COX-2 자극 조건하에서 ALA-2와 ALA-2+P&P Complex는 COX-2의 발현을 감소시키는 효과가 있음을 확인할 수 있다(도 1).
도 1은 본 발명의 실시예에 따른 Realtime PCR application 그래프이다.
구분 시험군 Ct차의 값
(beta actin 대비 COX-2 상대적 발현 양)
실험예 1 Control (무처리군) 1.00
실험예 2 LED Blue only 1.09
실험예 3 ALA-1 only 0.94
실험예 4 ALA-2 only 1.04
실험예 5 LED Blue + ALA-1 0.85
실험예 6 LED Blue + ALA-2 1.01
실험예 7 LED Blue + ALA-1 + P&P Complex 2.53
실험예 8 LED Blue + ALA-2 + P&P Complex 4.43
실험예 9 Control (무처리군) 1.0
실험예 10 LED Red only 0.85
실험예 11 ALA-1 only 1.82
실험예 12 ALA-2 only 1.97
실험예 13 LED Red + ALA-1 0.98
실험예 14 LED Red + ALA-2 3.28
실험예 15 LED Red + ALA-1 + P&P Complex 2.93
실험예 16 LED Red + ALA-2 + P&P Complex 5.24
* P&P complex : 펩타이드 복합체
ALA-1 : 5-Aminolevulinic Acid Hydrochloride/ CAS-No: 5451-09-2
ALA-2 : 5-Aminolevulinic Acid Methyl Ester Hydrochloride/ CAS-No: 79416-27-6
LED Blue : 단파장 블루광
LED Red : 장파장 레드광
Control : 대조군
파장 설정 전류 설정 전압 거리
450-475 nm(BLUE) 1.0-5.0A 5.0-15.0V 2 cm- 10 cm
650-675 nm(RED) 1.0-5.0A 5.0-15.0V 2 cm- 10 cm
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항 들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (6)

  1. 아미노산 서열 Nicotinyl-GHK(Gly-His-Lys); 및
    EGF(Epidermal Growth Factor), IGF(Insulin-like Grwoth Factor), SOD1(Superoxide Dismutase 1) 또는 이들의 혼합물
    을 포함하는 펩타이드 복합체; 및
    아미노레불린산(ALA) 또는 메틸기가 치환된 메틸-아미노레불린산(Methyl-ALA)의 활성성분
    을 유효성분으로 포함하는 염증성 피부질환 개선용 조성물.
  2. 삭제
  3. 제1항에 있어서,
    상기 복합체 중 각각의 함량비는 Nicotinyl-GHK(Gly-His-Lys)의 펩타이드 100중량부에 대하여 EGF(Epidermal Growth Factor) 5 내지 20중량부, IGF(Insulin-like Grwoth Factor) 5 내지 20중량부, 및 SOD1(Superoxide Dismutase 1) 5 내지 20중량부인 것을 특징으로 하는 염증성 피부질환 개선용 조성물.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 복합체 중 각각의 함량비는 Nicotinyl-GHK(Gly-His-Lys)의 펩타이드 100중량부에 대하여 EGF(Epidermal Growth Factor) 10중량부, IGF(Insulin-like Grwoth Factor) 10중량부, 및 SOD1(Superoxide Dismutase 1) 10중량부인 것을 특징으로 하는 염증성 피부질환 개선용 조성물.
  5. 삭제
  6. 삭제
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