CN117304257A - 一种活性肽、组合物及其在制备具有抗氧化和/或抗衰老作用的产品中的应用 - Google Patents

一种活性肽、组合物及其在制备具有抗氧化和/或抗衰老作用的产品中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN117304257A
CN117304257A CN202310774496.7A CN202310774496A CN117304257A CN 117304257 A CN117304257 A CN 117304257A CN 202310774496 A CN202310774496 A CN 202310774496A CN 117304257 A CN117304257 A CN 117304257A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
active peptide
skin
composition
gamma
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202310774496.7A
Other languages
English (en)
Inventor
刘晓宇
涂玮
刘杰
牛文芳
王志尧
王怀玲
曾传玲
罗强
陈能花
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shenzhen Haichuang Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Shenzhen Haichuang Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shenzhen Haichuang Biotechnology Co ltd filed Critical Shenzhen Haichuang Biotechnology Co ltd
Priority to CN202310774496.7A priority Critical patent/CN117304257A/zh
Publication of CN117304257A publication Critical patent/CN117304257A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/40—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing nitrogen
    • A61K8/44—Aminocarboxylic acids or derivatives thereof, e.g. aminocarboxylic acids containing sulfur; Salts; Esters or N-acylated derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/18—Antioxidants, e.g. antiradicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
    • A61Q17/04—Topical preparations for affording protection against sunlight or other radiation; Topical sun tanning preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/59—Mixtures
    • A61K2800/591—Mixtures of compounds not provided for by any of the codes A61K2800/592 - A61K2800/596

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

本发明涉及生物医药技术领域，具体公开了一种活性肽、组合物及其在制备具有抗氧化和/或抗衰老作用的产品中的应用。所述的活性肽，其具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；其中，SEQ ID NO:1的氨基酸序列为：Glu‑Ala‑Trp‑Gly‑Trp；SEQ ID NO:2的氨基酸序列为：Met‑Ala‑Gly‑His‑Glu。本发明所述的活性肽及其组合物具有抗氧化、抗衰老、抗UV暴露导致的光老化以及提高皮肤细胞活力等作用；因此，将其作为有效成分，用于制备具有相应功能的护肤品、保健品或药品具有重要的应用价值。

Description

一种活性肽、组合物及其在制备具有抗氧化和/或抗衰老作用 的产品中的应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种活性肽、组合物及其在制备具有抗氧化和/或抗衰老作用的产品中的应用。
背景技术
皮肤自然老化、紫外线辐照等因素影响，皮肤胶原蛋白、弹性纤维遭破坏、退化，均会导致皮肤皱纹出现，如鱼尾纹、眉间纹、额头纹、鼻唇纹等。此外，随着年龄增长、胶原蛋白合成能力下降，及其它环境因素、行为因素的影响，皮肤皱纹也会变得越来越明显。
大量研究表明，一些天然活性小分子能够促进皮肤细胞增殖，促进皮肤胶原蛋白、弹性纤维的合成，有些天然活性小分子还具有抑制诱发皮肤衰老的相关酶的表达及活性。如，γ-氨基丁酸(Gamma-aminobutyric acid,GABA)是一种重要的神经递质，具有延缓皮肤衰老、提高皮肤光泽、弹性的活性。研究表明，γ-氨基丁酸能够放松肌肤，减少面部肌肉紧张，具有减少皱纹的功效。同时,研究表明，γ-氨基丁酸还可促进肌肤血液循环及新陈代谢，提高肌肤营养供应，从而使皮肤健康、有弹性。此外,γ-氨基丁酸还具有抗氧化活性，能够保护皮肤免受环境污染及紫外线损伤。而大量的研究也表明，一些天然活性肽具有促进胶原蛋白合成、加速皮肤细胞再生和修复、增强皮肤屏障的功能；同时,研究表明，部分天然活性肽能够减少皮肤松弛及皱纹形成，也具有抗炎、抗氧化等活性。研究发现，除了天然活性小分子及一些天然活性肽，一些可注射的神经递质及微针或射频等美容技术也具有促进胶原蛋白分泌，改善皮肤质地、弹性，减少皱纹和色斑的功能。可注射的神经递质及微针或射频等美容技术据报道存在着会导致消费者面部僵硬、疼痛和红肿和水肿、色素改变、感染等风险，同时，其高昂的成本、潜在的医疗风险、可能引发的皮肤刺激以及效果不佳等缺点仍未能完全满足消费者的需求。因此，进一步开发更多的并具有延缓皮肤衰老、具有减少皮肤皱纹产生的护肤活性物或活性物组合具有重要的应用前景。
发明内容
为了克服现有技术中存在的至少之一的技术问题，本发明提供了一种活性肽以及组合物。
本发明的技术方案如下：
本发明首先提供了一种活性肽，其具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；
其中，SEQ ID NO:1的氨基酸序列为：Glu-Ala-Trp-Gly-Trp；
SEQ ID NO:2的氨基酸序列为：Met-Ala-Gly-His-Glu。
发明人在研究中惊奇的发现：SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的活性肽以及SEQID NO:2所示的氨基酸序列的活性肽具有抗氧化、抗衰老作用，尤其是具有抗UV暴露导致的光老化作用；同时还具有提高皮肤细胞活力作用，并且其抗氧化、抗衰老、抗UV暴露导致的光老化以及提高皮肤细胞活力等作用要优于γ-氨基丁酸以及已知的活性肽乙酰基六胜肽-3以及乙酰基八胜肽-3。
此外，研究还发现SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的活性肽以及SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的活性肽还能够促进皮肤细胞层粘连蛋白以及促进皮肤细胞胶原蛋白的表达和分泌，能够抑制皮肤细胞中基质金属蛋白酶3以及基质金属蛋白酶9的表达和活性，以及还能够抑制皮肤细胞转化生长因子β1(TGF-β1)的表达和/或分泌。
本发明还提供了一种组合物，其包含SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的活性肽。
优选地，所述的组合物中还包含γ-氨基丁酸。
优选地，γ-氨基丁酸与SEQ ID NO:1以及SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的活性肽的质量比为1:(1-100):(1-100)。
进一步优选地，γ-氨基丁酸与SEQ ID NO:1以及SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的活性肽的质量比为1:(1-50):(1-50)。
最优选地，γ-氨基丁酸与SEQ ID NO:1以及SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的活性肽的质量比为1:15.7:23.9。
发明人在进一步研究中惊奇的发现，将γ-氨基丁酸与SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的活性肽以及SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的活性肽组合后得到的组合物，其抗氧化、抗衰老、抗UV暴露导致的光老化以及提高皮肤细胞活力作用，相比于单独的γ-氨基丁酸、SEQID NO:1所示的氨基酸序列的活性肽、SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的活性肽，得到了显著的提高；具有更加优异的抗氧化、抗衰老、抗UV暴露导致的光老化以及提高皮肤细胞活力作用。
本发明还提供了一种上述活性肽或组合物在制备具有抗氧化和/或抗衰老作用的产品中的应用。
本发明还提供了一种上述活性肽或组合物在制备具有抗UV暴露导致的光老化作用的产品中的应用。
本发明还提供了一种上述活性肽或组合物在制备具有提高皮肤细胞活力作用的产品中的应用。
本发明还提供了一种上述活性肽或组合物在制备具有促进皮肤细胞层粘连蛋白的表达和/或分泌作用的产品中的应用。
本发明还提供了一种上述活性肽或组合物在制备具有促进皮肤细胞胶原蛋白的表达和/或分泌作用的产品中的应用。
本发明还提供了一种上述活性肽或组合物在制备具有抑制皮肤细胞中基质金属蛋白酶3和/或基质金属蛋白酶9的表达和/或活性的产品中的应用。
本发明还提供了一种上述活性肽或组合物在制备具有抑制皮肤细胞转化生长因子β1(TGF-β1)的表达和/或分泌的产品中的应用。
优选地，所述的产品为护肤品、保健品或药品。
有益效果：本发明提供了一种全新的活性肽；研究表明，SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的活性肽(以下简称为益生菌活性寡肽-A)、SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的活性肽(以下简称为益生菌活性寡肽-B)，及其与γ-氨基丁酸组成的组合物，具有抗氧化、抗衰老、抗UV暴露导致的光老化以及提高皮肤细胞活力等作用；同时还能够促进皮肤细胞层粘连蛋白以及促进皮肤细胞胶原蛋白的表达和分泌，能够抑制皮肤细胞中基质金属蛋白酶3以及基质金属蛋白酶9的表达和活性，以及还能够抑制皮肤细胞转化生长因子β1(TGF-β1)的表达和/或分泌。因此，进一步地将本发明所述的活性肽或组合物作为有效成分，用于制备具有相应功能的护肤品、保健品或药品具有重要的应用价值。
附图说明
图1为益生菌活性寡肽-A的HPLC检测谱图。
图2为益生菌活性寡肽-A的质谱图。
图3为益生菌活性寡肽-B的HPLC检测谱图。
图4为益生菌活性寡肽-B的质谱图。
图5为本发明活性肽及组合物对对线虫氧化性指标的影响实验结果图。
图6为本发明活性肽及组合物对对皮肤成纤维细胞氧化性指标及胶原蛋白、层粘连蛋白的影响实验结果图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1本发明活性肽的制备方法
(1)正常培养人皮肤成纤维细胞；
(2)分别取来自不同健康儿童的面部菌群的采集样本并分别加入培养基(培养基组成包括：蛋白胨8.5g/L、酵母粉8.5g/L、葡萄糖8.0g/L、醋酸钠3.0g/L，磷酸氢二钾1.0g/L、硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.2g/L)中，37℃静止培养6h。
(3)步骤②培养后的培养液，于固体培养基划线培养8h，判断细菌种类之后取菌并分别扩大培养(扩大培养方法为：将种子液转移至5L发酵罐，加入5L液体培养基，液体培养基pH值为6.5；培养温度为37℃；培养时间为24h，搅拌培养至菌体达OD600＝2.0时，结束培养，收集培养液，离心，收集菌体，冻干)。
(4)菌体裂解物制备：将步骤③所得不同菌体冻干粉分别与纯净水按质量比1:50混合，超声破碎20min，透析膜(孔径为＜1kDa、1-3kDa、3-5kDa、5-10kDa、10-15kDa、＞15kDa)依次透析菌体裂解物，收集不同菌株的不同分子量的菌体裂解物并冻干，参考文献方法对冻干物除脂、除糖处理，最终得不同菌株不同分子量菌体裂解物。
(5)基于步骤①培养的成纤维细胞，分别评价不同菌株不同分子量菌体裂解物提高成纤维细胞活力、促进成纤维细胞胶原蛋白生成的活性。实验结果显示，采集自供体LYT的，分子量＜1kDa的菌体裂解物(标记为LYT-6菌体裂解物)具有最强的提高成纤维细胞活力、促进成纤维细胞胶原蛋白生成的活性。
(6)少量水溶解LYT-6菌体裂解物，溶解物经葡聚糖凝胶(sephadex G 15)柱色谱分离，用1.0mM的(NH4)2SO4缓冲液进行洗脱，收集每1/4个柱体积的洗脱液作为一个馏分，得不同馏分，馏分标记为LYT-6-1、LYT-6-2……LYT-6-10组分。
(7)基于步骤(1)培养的成纤维细胞，分别评价步骤(6)得到的各馏分提高成纤维细胞活力、促进成纤维细胞胶原蛋白生成的活性。实验结果显示LYT-6-6组分具有最强的提高成纤维细胞活力、促进成纤维细胞胶原蛋白生成的活性。
(8)强LYT-6-6组分进一步通过HPLC分离、制备得到本发明所述的活性肽，HPLC的液相条件为：以0.1％三氟乙酸-乙腈溶液为流动相A，以0.1％三氟乙酸的水溶液为流动相B，测波长为220nm，流速为10mL/min；色谱柱为：XBridge BEH C18 OBD Prep Column,5μm,19mm*150mm；
收集10.87min色谱峰对应的洗脱液，经浓缩干燥后得本发明所述的益生菌活性寡肽-A；
收集10.97min色谱峰对应的洗脱液，经浓缩干燥后得本发明所述的益生菌活性寡肽-B；
HPLC洗脱过程设置为下表所示：
进一步的，我们利用质谱结合Edman降解法对益生菌活性寡肽-A以及益生菌活性寡肽-B进行氨基酸序列测定；结果如下：
益生菌活性寡肽-A：m/z 648.2764推断为[M+H]+离子；m/z 448.1975推断为[b3+H]+离子；m/z 444.1871推断为y4离子；m/z 369.1555推断为y3-H2O离子；m/z 262.1185推断为[b2+H]+离子；m/z 187.0865推断为[b1-H2O+H]+离子；m/z159.0916推断为[Trp-COOH+H]+离子；m/z 130.0651推断为y1离子。结合Marfey方法，最终鉴定益生菌活性寡肽-A为具有Glu-Ala-Trp-Gly-Trp氨基酸序列的寡肽，即本发明中SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的活性肽。
益生菌活性寡肽-B:m/z 544.2173推断为[M+H]+离子；m/z 526.2073推断为[M-H2O+H]+离子；m/z 413.1779推断为[b4+2H]+离子；m/z 397.1655推断为y4离子；m/z 342.1408推断为[b3+2H]+离子；m/z 285.1195推断为[b2+2H]+离子；m/z 195.0880推断为[b3-b1+H]+离子；m/z 148.0867推断为[b1+2H]+离子；m/z110.0712推断为[His-COOH+H]+离子。结合Marfey方法，最终鉴定活性物-2为具有Met-Ala-Gly-His-Glu氨基酸序列的寡肽，即本发明中SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的活性肽。
实施例2组合物的制备方法
将γ-氨基丁酸与本发明所述益生菌活性寡肽-A及益生菌活性寡肽-B按质量比为1:15.7:23.9混匀，即得所述的组合物(以下写为：γ-氨基丁酸、益生菌活性肽组合物)。
效果实施例1抗氧化、抗衰老活性评价
实施方法：20℃条件下培养N2野生型线虫，随机分成8组(每组数量不小于50条)，每组3个平行对照组。正常对照组用磷酸缓冲盐溶液代替活性物，实验组按照活性物50μg/mL的剂量预培养3天，除正常对照组外，其余各组线虫转移至含有百草枯(20nM)的培养皿上继续培养3天后。收集活体线虫，测定相同数量的活体线虫体内SOD、CAT活性及ROS、MDA、脂褐素含量。
结果如图5A、B、C、D、E所示，百草枯处理后，与空白对照组相比，线虫体内抗氧化酶SOD及CAT的活性显著降低，而ROS、MDA及脂褐素的含量则显著增加，说明百草枯暴露诱发线虫氧化应激，使线虫受到严重的氧化损伤，加速其衰老。其中，与空白对照组相比，百草枯组线虫体内抗氧化酶SOD、CAT的活性分别降低23.7％(##p<0.01)，19.8％(##p<0.01)，而ROS、MDA及脂褐素含量则分别增加234.2％(##p<0.01)、127.9％(##p<0.01)及137.8％(##p<0.01)。但是，我们分析实验结果发现，经γ-氨基丁酸、本发明活性肽及γ-氨基丁酸、益生菌活性肽组合物预处理的线虫体内的抗氧化酶SOD及CAT活性则高于百草枯组，且经γ-氨基丁酸、本发明活性肽及γ-氨基丁酸、益生菌活性肽组合物预处理的线虫体内ROS、MDA含量及脂褐素含量低于百草枯处理组。
进一步分析实验结果发现，γ-氨基丁酸、益生菌活性肽组合物提高线虫体内抗氧化酶SOD、CAT活性；提高线虫清除体内ROS、MDA及抑制脂褐素生成的活性强于同等浓度的γ-氨基丁酸、乙酰基六胜肽-3、乙酰基八胜肽-3或益生菌活性寡肽-A、益生菌活性寡肽-B。我们推测γ-氨基丁酸、与益生菌活性寡肽-A、益生菌活性寡肽-B可通过协同作用发挥提高线虫抗氧化酶SOD、CAT活性并提高线虫清除ROS、MDA及抑制脂褐素生成活性。
实验分组如下表所示：
效果实施例2抗UV暴露导致的光老化活性评价
实施方法：于20℃条件下培养N2野生型线虫，随机分成8组(每组数量不小于50条)，每组3个平行对照组。正常对照组用磷酸缓冲盐溶液代替活性物，实验组按照活性物50μg/mL的剂量预培养3天，除正常对照组外，其余各组线虫转移至新制备的NGM/OP50板上，并用配备有254nm UV灯泡(20瓦)以1000J/m2的强度照射3小时后。收集活体线虫，测定相同数量的活体线虫体内SOD、CAT活性及ROS、MDA、脂褐素含量。
结果如图5F、G、H、I、J所示，UV辐照处理后，与空白对照组相比，线虫体内抗氧化酶SOD、CAT活性显著下降，而线虫体内ROS、MDA及脂褐素含量则显著增加，说明UV辐照同样诱发线虫氧化应激，使线虫受到严重的氧化损伤，加速线虫衰老。其中，与空白对照组相比，UV辐照组线虫体内抗氧化酶SOD、CAT活性分别下降24.6％(##p<0.01)及23.1％(##p<0.01)，而ROS、MDA及脂褐素含量则分别增加128.4％(##p<0.01)、159.7％(##p<0.01)及169.8％(##p<0.01)。不同于UV辐照组，经γ-氨基丁酸、本发明活性肽及γ-氨基丁酸、益生菌活性肽组合物预处理的线虫体内SOD、CAT活性得到有效提高，且经γ-氨基丁酸、本发明活性肽及γ-氨基丁酸、益生菌活性肽组合物预处理的线虫体内ROS、MDA及脂褐素含量低于UV辐照组。进一步分析实验结果发现，γ-氨基丁酸、益生菌活性肽组合物提高线虫体内抗氧化酶SOD、CAT活性；提高线虫清除体内ROS、MDA及抑制体内脂褐素生成的活性强于同等浓度条件下的γ-氨基丁酸、乙酰基六胜肽-3、乙酰基八胜肽-3或益生菌活性寡肽-A、益生菌活性寡肽-B。我们推测γ-氨基丁酸与益生菌活性寡肽-A、益生菌活性寡肽-B可通过协同作用发挥提高线虫体内抗氧化酶SOD、CAT活性并提高线虫清除ROS、MDA及抑制体内脂褐素生成的活性。
实验分组如下表所示：
效果实施例3提高皮肤细胞活力，促进皮肤细胞胶原蛋白生成活性评价
实施方法：人皮肤成纤维细胞正常培养，待细胞生长至90％融合时，用0.25％胰蛋白酶消化后分别接种于24孔及6孔培养板中，待细胞50％融合时加入活性物(终浓度为50μg/mL)并继续培养48h后，收集细胞及培养上清，CCK 8试剂盒检测细胞活力；按ROS、MMP-3、MMP-9、I型胶原蛋白、III型胶原蛋白、原弹性蛋白、层粘连蛋白、化生长因子β1(TGF-β1)ELISA试剂盒操作说明书操作，检测其含量。
实验分组如下：
分析实验结果(图6A)显示，与空白对照组相比，活性物组的人皮肤成纤维细胞活力均有提高。其中，与γ-氨基丁酸及乙酰基六胜肽-3、乙酰基八胜肽-3组相比，益生菌活性寡肽-A、益生菌活性寡肽-B以及γ-氨基丁酸、益生菌活性肽组合物组的人皮肤成纤维细胞活力提升更明显。说明益生菌活性寡肽-A、益生菌活性寡肽-B以及γ-氨基丁酸、益生菌活性肽组合物提升人皮肤成纤维细胞活力的活性强于γ-氨基丁酸及乙酰基六胜肽-3、乙酰基八胜肽-3；进一步的，同等浓度条件下，γ-氨基丁酸、益生菌活性肽组合物组人皮肤成纤维细胞活力高于益生菌活性寡肽-A、益生菌活性寡肽-B及γ-氨基丁酸组。我们推测，益生菌活性寡肽-A、益生菌活性寡肽-B及γ-氨基丁酸可能通过协同作用更好的提高人皮肤成纤维细胞活力。
ROS的过量产生或积聚于细胞或机体内会诱发机体、细胞氧化应激并造成机体、细胞内生物活性分子的氧化损伤。故而，清除过量ROS在皮肤抗氧化、抗衰老过程中发挥着重要作用。进一步分析实验结果(图6B)显示，与空白对照组相比，活性物组的ROS含量均降低，说明活性物能够抑制人皮肤成纤维细胞ROS的产生或增强了细胞清除ROS的活性。其中，与空白对照组相比，γ-氨基丁酸、乙酰基六胜肽-3、乙酰基八胜肽-3组ROS含量是空白组ROS含量的95.6％、96.5％、95.3％。而益生菌活性肽及γ-氨基丁酸、益生菌活性肽组合物组ROS含量是空白组ROS含量的90.8％(p<0.05)、89.3％(p<0.05)、82.2％(p<0.05)。
进一步分析实验结果发现，γ-氨基丁酸、益生菌活性肽组合物抑制人皮肤成纤维细胞ROS的产生或增强细胞清除ROS的活性强于同等浓度的γ-氨基丁酸、乙酰基六胜肽-3、乙酰基八胜肽-3，强于同等浓度的益生菌活性寡肽-A、益生菌活性寡肽-B。我们推测γ-氨基丁酸、与益生菌活性寡肽-A、益生菌活性寡肽-B可能是通过协同作用发挥提高细胞抑制ROS的产生或增强细胞清除ROS的活性。
基质金属蛋白酶对细胞外基质的降解、重塑等起着关键作用，可以降解含或不含胶原成分的细胞外基质。研究表明，基质金属蛋白酶在衰老皮肤成纤维细胞的表达明显增强，说明其在皮肤衰老及皱纹形成过程中有重要作用，如基质金属蛋白酶3(MMP-3)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)。
分析实验结果发现，与空白对照组相比，活性物组的基质金属蛋白酶(MMP-3及MMP-9)的活性均有降低(图6C、6D)，说明活性物能够抑制细胞MMP-3及MMP-9的活性或者抑制其表达或分泌。进一步分析实验结果发现，同等浓度条件下，γ-氨基丁酸、益生菌活性肽组合物组MMP-3及MMP-9活性低于益生菌活性寡肽-A、益生菌活性寡肽-B及γ-氨基丁酸组，低于同等浓度条件下的乙酰基六胜肽-3及乙酰基八胜肽-3组。我们推测，益生菌活性寡肽-A、益生菌活性寡肽-B及γ-氨基丁酸可能通过协同作用抑制人皮肤成纤维细胞MMP-3及MMP-9的活性或者抑制其表达或分泌。
转化生长因子(TGF-β)是一大类多功能的细胞生长增殖调节蛋白，能诱导细胞外基质的合成，在皮肤老化及UV照射导致的皮肤光老化过程中具有重要作用。如研究发现，全反式维甲酸能够提高TGF-β活性和诱导其表达，进而增加光老化皮肤中I型前胶原的表达，发挥保护皮肤，延缓其衰老的活性。
分析实验结果发现，与空白对照组相比，活性物组的TGF-β1的活性均有升高(图6E)，说明活性物能够提高TGF-β1的活性或者促进其表达或分泌。进一步分析实验结果发现，同等浓度条件下，γ-氨基丁酸、益生菌活性肽组合物组TGF-β1活性高于益生菌活性寡肽-A、益生菌活性寡肽-B及γ-氨基丁酸组，高于同等浓度条件下的乙酰基六胜肽-3及乙酰基八胜肽-3组。我们推测，益生菌活性寡肽-A、益生菌活性寡肽-B及γ-氨基丁酸可能通过协同作用提高人皮肤成纤维细胞TGF-β1的活性或者促进其表达或分泌。
皮肤是人体重要的器官之一，它不仅是人体重要的保护屏障，还参与蛋白质、聚糖等结构生物分子的合成和代谢等。其中，胶原蛋白是皮肤中主要的蛋白质，大量研究表明，在皮肤衰老过程中，皮肤细胞合成的胶原蛋白、弹性蛋白等会减少，而细胞基质中的结构蛋白如纤连蛋白、层粘蛋白等也会下降。皮肤中蛋白的减少会进一步导致皮肤弹性的下降、皮肤屏障功能的受损并进一步导致、加速皮肤衰老。
分析γ-氨基丁酸、益生菌活性肽组合物对人皮肤成纤维细胞胶原蛋白、原弹性蛋白及层粘连蛋白含量影响实验结果显示，与空白对照组相比，活性物组的胶原蛋白以及原弹性蛋白和层粘连蛋白含量均有增加(图6F、6G、6H、6I)，说明活性物具有抑制细胞胶原蛋白、原弹性蛋白及层粘连蛋白的分解或促进其表达、分泌的活性。而进一步分析实验结果发现，同等浓度条件下，γ-氨基丁酸、活性肽组合物促进人皮肤成纤维细胞I型胶原蛋白、III型胶原蛋白、原弹性蛋白及层粘连蛋白表达、分泌活性强于益生菌活性寡肽-A、益生菌活性寡肽-B及γ-氨基丁酸，强于同等浓度的乙酰基六胜肽-3或乙酰基八胜肽-3。我们认为，益生菌活性寡肽-A、益生菌活性寡肽-B及γ-氨基丁酸通过协同作用能够更好的促进人皮肤成纤维细胞胶原蛋白、原弹性蛋白及层粘连蛋白的表达、分泌，发挥更佳优秀的抗氧化及抗皮肤衰老的活性，也能够更好的延缓皮肤胶原蛋白、弹性蛋白的流失，从而减少皮肤粗糙、松弛、塌陷、皱纹等问题。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。应当理解，本领域技术人员在本发明提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本发明所附权利要求的保护范围内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书可以用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1.一种活性肽，其特征在于，具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；
其中，SEQ ID NO:1的氨基酸序列为：Glu-Ala-Trp-Gly-Trp；
SEQ ID NO:2的氨基酸序列为：Met-Ala-Gly-His-Glu。
2.一种组合物，其特征在于，包含SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的活性肽。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述的组合物中还包含γ-氨基丁酸。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，γ-氨基丁酸与SEQ ID NO:1以及SEQ IDNO:2所示氨基酸序列的活性肽的质量比为1:(1-100):(1-100)。
5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，γ-氨基丁酸与SEQ ID NO:1以及SEQ IDNO:2所示氨基酸序列的活性肽的质量比为1:(1-50):(1-50)。
6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，γ-氨基丁酸与SEQ ID NO:1以及SEQ IDNO:2所示氨基酸序列的活性肽的质量比为1:15.7:23.9。
7.权利要求1所述的活性肽或权利要求2-6任一项所述的组合物在制备具有抗氧化和/或抗衰老作用的产品中的应用。
8.权利要求1所述的活性肽或权利要求2-6任一项所述的组合物在制备具有抗UV暴露导致的光老化作用的产品中的应用。
9.权利要求1所述的活性肽或权利要求2-6任一项所述的组合物在制备具有提高皮肤细胞活力作用的产品中的应用。
10.权利要求7-9任一项所述的应用，其特征在于，所述的产品为护肤品、保健品或药品。
CN202310774496.7A 2023-06-27 2023-06-27 一种活性肽、组合物及其在制备具有抗氧化和/或抗衰老作用的产品中的应用 Pending CN117304257A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310774496.7A CN117304257A (zh) 2023-06-27 2023-06-27 一种活性肽、组合物及其在制备具有抗氧化和/或抗衰老作用的产品中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310774496.7A CN117304257A (zh) 2023-06-27 2023-06-27 一种活性肽、组合物及其在制备具有抗氧化和/或抗衰老作用的产品中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117304257A true CN117304257A (zh) 2023-12-29

Family

ID=89280052

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310774496.7A Pending CN117304257A (zh) 2023-06-27 2023-06-27 一种活性肽、组合物及其在制备具有抗氧化和/或抗衰老作用的产品中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN117304257A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113248573B (zh) 改善皮肤生理特性的活性肽与间充质干细胞外泌体在药品或化妆品中的应用
KR20060087817A (ko) 항노화용 화장료 조성물
KR102281774B1 (ko) 피부 재생 및 항염 효과가 있는 피부 상태 개선용 조성물
KR100889973B1 (ko) 미세녹조류를 이용한 항산화, 주름개선, 항여드름ㆍ항염증및 미백효능을 가지는 기능성 추출물 및 그의 제조방법
WO2009145419A2 (ko) 식물성 펩톤을 포함하는 줄기세포 증식 촉진용 조성물
US20180344623A1 (en) Synergistic extract of palmaria palmata and jasmine, compositions comprising same and uses thereof
US20170112737A1 (en) Cosmetics and pharmaceutical applications of gallic acid and gallic acid derivatives
KR20150120426A (ko) 갈조류 추출물, 효모 추출물 및 아스코르브산을 함유하는 화장료 조성물
US9199101B2 (en) Use of a peptide hydrolysate of pea as moisturizing active agent
Jang et al. Antiaging activity of peptide identified from fermented Trapa Japonica fruit extract in human dermal fibroblasts
CN110590912A (zh) 一种新型抗氧化活性多肽oa-vi12及其制备方法与应用
CN111671695B (zh) 一种皮肤修复乳液及其在皮肤修复、抗皱中的应用
JP5583259B1 (ja) コラーゲン産生作用を有する新規な誘導体及びその製造方法
KR102130988B1 (ko) 꿀, 회화나무, 동아씨, 오미자, 괄루근, 상백피 및 인삼 저온숙성 복합 추출물의 제조방법 및 이를 포함하는 항노화 화장료 조성물
Bojarska Amino acids and short peptides as anti-aging “Superfood”
KR101753874B1 (ko) 데카펩타이드를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물
CN113876643B (zh) 一种源自酵母细胞外囊泡和溶解物的化妆品组合物
CN117304257A (zh) 一种活性肽、组合物及其在制备具有抗氧化和/或抗衰老作用的产品中的应用
CN110894476A (zh) 包括球形红菌菌株或其培养液的用于预防或改善老化的组合物
CN110872568A (zh) 包括短小芽孢杆菌菌株或其培养液的用于预防或改善老化的组合物
JP2016034910A (ja) サイトケラチン増加作用を呈するカロチノイド誘導体及びその製造方法
KR20170050327A (ko) 케라틴 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 항노화용 화장료 조성물
CN112515997A (zh) 一种具有舒缓抗炎作用的组合物及其应用
KR20160122379A (ko) 동치미 원료를 이용한 복합발효물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 화장료 조성물 및 화장료 조성물을 포함하는 화장품
KR20190046246A (ko) 피부노화방지 및 피부주름개선용 메셈브리안테뭄속 아이스플랜트와 콜라겐의 혼합 발효물, 발효 용해물의 제조방법 및 이를 포함하는 화장료 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination