KR102463787B1 - 녹각을 포함하는 파킨슨병용 약제학적 조성물 및 그 치료제 - Google Patents

Abstract

본 명세서는 파킨슨병에 사용하여 파킨슨병에 우수한 치료 효과를 제공하는 파킨슨병용 약제학적 조성물 및 그 치료제, 그 진단키트를 개시한다.

Description

녹각을 포함하는 파킨슨병용 약제학적 조성물 및 그 치료제{Parkinson's disease pharmaceutical composition and its therapeutic agent containing cornu cervi}

본 명세서는 퇴행성 뇌질환에 대해 녹각을 포함하는 파킨슨병용 약리학적 조성물 및 그 치료제를 제공한다.

파킨슨병(Parkinson's disease(PD))은 만성 진행성 신경 퇴행성 질환이다. 주요 병리학적 특징은 주로 SN(Substantia Nigra)에서 도파민성 뉴런의 극적인 손실이며, 세포질 내성 루이 소체(intracytoplasmic Lewy bodies) 및 영양 장애 성 신경 돌기(dystrophic neurites)의 형성이다.

그러나, 도파민성 뉴런의 손실 배후의 메카니즘은 아직 명확하지 않다.

본 실시예들은 파킨슨병에 사용하여 파킨슨병에 우수한 치료 효과를 제공하는 파킨슨병용 약제학적 조성물 및 그 치료제를 제공한다.

일 실시예는, 퇴행성 뇌질환에서 녹각 추출물을 유효성분으로 포함하는 파킨슨병 약제학적 조성물을 제공한다.

이때 파킨슨병 약제학적 조성물도파민성 신경세포에서 MPP+ 유발독성에 대한 상기 녹각 추출물의 아포토시스와 염증성 반응과 관련하여 나타내는 신경보호 효과를 나타낸다. 이때 도파민성 신경세포가 SH-SY5Y 세포일 수 있다.

다른 실시예는, 퇴행성 뇌질환에서 녹각 추출물을 유효성분으로 포함하는 파킨슨병 약제학적 조성물, 및 약제학적 조성물을 담는 담체를 포함하는 파킨슨병 치료제를 제공한다.

본 실시예들에 따르면, 파킨슨병용 약제학적 조성물 및 그 치료제를 파킨슨병에 사용하여 파킨슨병에 우수한 치료 효과를 제공한다.

도 1 및 도 2는 Cervi Cornu treatment의 다양한 농도(0, 1,25, 50, and 75 μg/ml)에서 Cytotoxicity이 분석된 결과를 나타내고 있다.
도 3 및 도 4는 Cervi Cornu treatment의 다양한 농도에서 TH abtibody를 사용한 도파민성 세포를 검색한 Western blot 결과를 도시하고 있다.
도 5는 5 μg/ml Cervi Cornu 및 500 μM MPP+로 처리된 SH-SY5Y cells의 Immunofluorescence image을 도시하고 있다.
도 6은 Cervi Cornu treatment의 다양한 농도에서 Bax and, Bcl2의 레벨을 검색한 Western blot 결과를 도시하고 있다.

이하, 본 발명의 일부 실시예들을 예시적인 도면을 통해 상세하게 설명한다. 각 도면의 구성요소들에 참조부호를 부가함에 있어서, 동일한 구성요소들에 대해서는 비록 다른 도면상에 표시되더라도 가능한 한 동일한 부호를 가지도록 하고 있음에 유의해야 한다. 또한, 본 발명의 실시예들을 설명함에 있어, 관련된 공지 구성 또는 기능에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명은 생략한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "치료", "억제" 및 "약화"란, 본 발명의 조성물을 개체에 사용하여, 특정 세포의 분화나, 특정 물질의 수준, 특정 질병 또는 질환의 진행을 감소시키거나 지연시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "개체"란, 인간을 포함한 모든 동물을 의미한다.

이하, 본 발명의 실시예들에 따른 파킨슨병에 사용하여 파킨슨병에 우수한 치료 효과를 제공하는 파킨슨병용 약제학적 조성물 및 그 치료제에 대하여 설명한다.

실시예: 약제학적 조성물 및 그 치료제

파킨슨병(Parkinson's disease(PD))은 만성 진행성 신경 퇴행성 질환이다. 파킨슨병(PD)은 노인에서 두 번째로 흔한 퇴행성 뇌 질환이다.

1817년에 제임스 파킨슨(James Parkinson)은 손 떨림, 근육 경직, 자세 불안정 등의 증상을 보이는 환자들에게 ‘떨림 마비’agitans, shaking palsy)라는 이름을 붙였다. 이후 이병을 파킨슨병 이라고 명명했다.

파킨슨병은 substantia nigra 부위에서 도파민성 신경 세포의 감소를 나타내는 진행성 퇴행성 신경질환이다. 지금까지 국내에서 파킨슨병과 관련된 세포 및 동물모델에서 신경세포 독성, 염증반응, 활성사노, 세포 사멸 기전 등에 대한 연구들이 진행되었으나 도파민 세포가 감소되는 원인은 아직 명확히 밝혀지지 않았다.

현재 치료법으로는 레보도파(levodopa, L-dopa), 도파민 수용체 효현제, 항아세틸 콜린성 등의 약물치료 방법이 있으며 약효가 더 이상 듣지 않게 되면 수술요법을 시행한다.

레보도파는 도파민의 전구체로써 도파민으로 대사되어 부족한 뇌내 도파민 농도를 보충시킴으로써 파킨슨병의 증상을 개선시키려고 사용되고 있다. 하지만 3-5년 이상 장기 투여 시 약물효과 시간이 점점 짧아지는 wearing-off 현상, 약물에 의한 운동조절 기능의 변동이 심해 지는 on-off 현상, 이상운동증 등의 부작용이 나타난다. 따라서, 부작용을 줄이면서 약물의 유효성을 지속시키고 파킨슨병의 진행을 늦추거나 막을 수 있는 치료법의 개발이 필요하다.

녹각(old altler, cornu cervi)은 매화록(梅花鹿 Cervus nippon Temminck) 또는 마록(馬鹿 Cervus elaphus Linnaeus), 수사슴의 골질화된 뿔로 신경(腎經)과 간경(肝經)으로 들어가 온신(溫腎), 강근골(强筋骨)하는 효능을 통해 녹용의 대용품으로 응용하기도 한다. 그리고 활혈(活血), 산어(散瘀), 소종(消腫)하는 작용이 우수한 것으로 알려져 있으며, 골다공증을 유발한 흰쥐에서 치료효과가 보고되었다. 또한 신경세포에서 산화스트레스 개선효과가 있는 것으로 보고되었으며 간세포에서 항염증 효과가 보고되었다.

발명자는, 산화스트레스와 염증반응이 파킨슨병에서 도파민 세포의 병증화와 관련이 있으므로 녹각이 파킨슨병에서의 치료효과를 나타낼 것으로 생각되었다.

아직까지 파킨슨병 관련 모델에서의 녹각의 효과에 관한 연구는 보고된 바 없다. 본 명세서에서는 녹각 물 추출물(CC)의 도파민성 세포에서의 신경보호 효과를 측정하고자 하였다. 이에 본 명세서에서는 도파민성 신경세포인 SH-SY5Y 세포에서 MPP+ 유발독성에 대한 녹각 물 추출물의 아포토시스(apoptosis)와 염증성 반응과 관련하여 나타내는 신경보호 효과를 측정하여 파킨슨병 치료를 확인하였다.

녹각 물 추출물(CC)은 물을 용매로 녹각을 추출한 추출물로, 물 이외의 용매를 시용하여 녹각 추출물을 얻을 수 있다. 따라서 본 명세서에서 녹각 추출물은 물을 포함하는 다양한 용매로 녹각을 추출한 추출물을 의미한다.

일 실시예는, 퇴행성 뇌질환에서 녹각 추출물을 유효성분으로 포함하는 파킨슨병 약제학적 조성물 및 그 치료제를 제공한다. 후술하는 실험예를 통해 이 파킨슨병 약제학적 조성물 및 그 치료제가 파킨슨병에 사용하여 파킨슨병에 우수한 치료 효과를 제공하는 것을 확인할 수 있었다.

특히 후술하는 실험예를 통해, 파킨슨병 약제학적 조성물이 도파민성 신경세포에서 MPP+ 유발독성에 대한 녹각 추출물의 아포토시스와 염증성 반응과 관련하여 나타내는 신경보호 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.

상기 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있으며, 상기 담체와 함께 제제화되어 식품, 의약품, 사료 첨가제 및 음용수 첨가제 등으로 제공될 수 있다. 본 발명에서 사용되는 용어 "약학적으로 허용 가능한 담체"란 생물체를 자극하지 않으면서, 투여되는 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제를 의미한다.

본 발명에서 용어, "약학적으로 허용 가능한 담체"란 생물체를 자극하지 않고 투여 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제를 말한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용되는 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.

본 명세서의 파킨슨병 치료용 조성물은 이를 유효성분으로 포함하는 어떠한 제형으로도 적용가능하며, 경구용 또는 비경구용 제형으로 제조할 수 있다. 본 명세서의 약학적 제형은 구강(oral), 직장(rectal), 비강(nasal), 국소(topical; 볼 및 혀 밑을 포함), 피하, 질(vaginal) 또는 비경구(parenteral; 근육내, 피하 및 정맥내를 포함) 투여에 적당한 것 또는 흡입(inhalation) 또는 주입(insufflation)에 의한 투여에 적당한 형태를 포함한다.

본 명세서의 조성물을 유효성분으로 포함하는 경구 투여용 제형으로는, 예를 들어 정제, 트로키제, 로렌지, 수용성 또는 유성현탁액, 조제분말 또는 과립, 에멀젼, 하드 또는 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르제로 제제화할 수 있다. 정제 및 캡슐 등의 제형으로 제제화하기 위해, 락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀룰로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제, 디칼슘 포스페이트와 같은 부형제, 옥수수 전분 또는 고구마 전분과 같은 붕괴제, 스테아르산 마스네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아릴푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌글리콜 왁스와 같은 윤활유를 포함할 수 있으며, 캡슐제형의 경우 상기 언급한 물질 외에도 지방유와 같은 액체 담체를더 함유할 수 있다.

본 명세서의 조성물을 유효성분으로 포함하는 비경구 투여용 제형으로는, 피하주사, 정맥주사 또는 근육내 주사 등의 주사용 형태, 좌제 주입방식 또는 호흡기를 통하여 흡입이 가능하도록 하는 에어로졸제 등 스프레이용으로 제제화할 수 있다. 주사용 제형으로 제제화하기 위해서는 본 발명의 조성물을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알의 단위 투여용으로 제제화할 수 있다. 좌제로 주입하기 위해서는, 코코아버터 또는 다른 글리세라이드 등 통상의 좌약 베이스를 포함하는 좌약 또는 관장제와 같은 직장투여용 조성물로 제제화할 수 있다. 에어로졸제 등의 스프레이용으로 제형화하는 경우, 수분산된 농축물 또는 습윤 분말이 분산되도록 추진제 등이 첨가제와 함께 배합될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물 및 그 치료제의 투여방법은 특별히 제한되는 것은 아니나, 목적하는 방법에 따라 정맥 내, 피하, 복강 내, 흡입, 피부도포, 패치제 또는 국소적용과 같이 비경구 투여하거나 경구 투여할 수 있다.

투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 일일 투여량은 치료를 필요로 하는 개체에 투여됨으로써 경감된 질병 상태에 대한 치료에 충분한 본 발명의 치료용 물질의 양을 의미한다. 치료용 물질의 효과적인 양은 특정 화합물, 질병 상태 및 그의 심각도, 치료를 필요로 하는 개체에 따라 달라지며, 이는 당업자에 의해 통상적으로 결정될 수 있다. 비제한적 예로서, 본 발명에 의한 조성물의 인체에 대한 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여 형태, 건강 상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있다.

이하, 실험예를 기술함으로써 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 다만, 하기의 실험예는 본 발명의 일 예시에 불과하며, 본 발명의 내용이 이에 한정되는 것으로 해석되어서는 아니된다.

실험예: 약제학적 조성물

재료 및 방법

1. 약재

본 실험에 사용한 녹각(CC)은 정도약업사(Seoul, Korea)에서 구입하였다. 잡질을 제거한 후 10배의 증류수에 2시간 동안 환류 추출 한 뒤 -60℃ 이하에서 얼려 동결건조 하였고. -20℃에 보관 후 매 실험 시 용매에 녹여 사용하였다.

2. 시약

세포배양에 필요한 Dulbeco’modified Eagle’medium(DMEM), fetal bovine serum (FBS), minimal essential medium(MEM), penicillin-streptomycin (P/S)은 Gibco사(Auckland,NZ)에서 구입하여 사용하였다. MPP+은 Sigma-aldrich사(St Louis, USA)에서 구입하여 사용하였다. Rabbit anti-tyrosine hydroxylase(TH) antibody는 Santa Cruz Biotechnology (Texas, USA), cytochrome c와 bax, bcl 2 antibody는 abcam사 (Cambridge,UK), EZ-CYTOX는 두젠바이오(Seoul, Korea), ABC standard kit 는 Vector사(Burlingame, USA)에서 구입하여 사용하였으며, 실험에 사용된 모든 시약은 분석용 등급 이상으로 사용하였다.

3. 세포배양

본 실험에 사용된 세포주는 human neuroblastoma인 SHSY5Y 세포이며, 한국세포주은행(Seoul, Korea)에서 분양 받아 사용하였다. 10% (v/v) FBS, 1% P/S을 포함하는 high-glucose DMEM 배지를 사용하였으며 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다.

4. Cell viability 측정

96 well plate에 2.0×140/well의 SH-SY5Y 세포를 분주하고 48시간 후, 녹각(CC) 1, 25, 50, 75 μg/ml 농도로 24시간 동안 처리하였다. 100 μl/ml의 EZ-CYTOX 를 처리하여 3시간 배양 후, spectrophotometer로 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.

MPP+ 용액에 대한 Cell viability를 측정하기 위하여 96 well plate에 2.0*?*의 SH-SY5Y 세포를 분주하고 48시간 후, NSW 1, 25, 50, 75 μg/ml 농도로 처리하였다. 6시간 후 MPP+ 용액 500 mg/ml를 처리 하여 18 시간 배양 후, 100 μl/ml의 EZCYTOX를 처리 하여 3시간 배양 후, spectrophotometer로 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포 생존율을 대조군에 대한 백분율로 표시하였다.

5. 웨스턴 블로팅(Western blot) 측정

SH-SY5Y 세포를 분주하고 48시간 후, 녹각(CC) 1, 25, 50, 75 μg/ml 농도로 처리하였다. 그 후 MPP+ 용액 500 mg/ml를 처리 하여 18 시간 배양 후, cold PBS 로 세척 후 lysis buffer 로 처리한 후 4℃에서 20분간 원심분리한 후 (12,000 rpm) 상층액을 12% sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDSPAGE)를 이용하여 단백질 농도별로 분리한 후 polyvinylidene difluoride (PVDF) membrane (Bio-Rad, USA)으로 옮겼다.

실온에서 1시간 동안 0.1% Tris 완충 식염수 (TBS, 20 mM Tris-HCl(pH 7.5)) 및 0.1% Tween-20을 함유한 150 mM NaCl (TBST)에 5% 탈지유를 첨가한 용액으로 차단하고, mouse anti-tyrosine hyroxylase (TH, 1:2000, Santa Cruz Biotechnology), rabbit anti-Bax (1:2000, abcam) 및 mouse anti-β-actin (1:5000, Santa Cruz Biotechnology) 항체와 함께 배양하였다. 0.1% TBST로 세척 한 후, 막을 anti-mouse IgG- peroxidase antibody (1:2000, Bio-Rad)와 항온 배양하고, 항원 - 항체 복합체를 Pierce ECL western blotting substrate (Thermo Scientific, USA)를 사용하여 현상하였다.

6. 통계분석

통계분석의 측정값은 평균±표준오차 (mean±error)로 표기하였다. 통계방법은 student t-test 및 ANOVA를 시행했으며 유의수준은 p-value＜0.05로 지정하였다.

7. 결 과

1) 녹각(CC)에 대한 Cell viability 측정

녹각(CC)에 대한 Cell viability를 측정하기 위하여 SH-SY5Y 세포에 0, 1, 25, 50, and 75 μg/ml 농도의 약물을 처리한 결과 모든 농도에서 세포 생존율이 통계적으로 유의미한 차이가 없었다 (도 1 참조).

2) SH-SY5Y에서 MPP+에 대한 녹각(CC)의 Cell viability 측정

MPP+ 용액에 대한 녹각(CC)의 세포보호효과를 확인하기 위하여 0, 1, 25, 50, and 75 μg/ml 농도의 약물을 처리하고 6시간 후 MPP+ 용액을 처리하여 결과를 확인하였다. MPP+만을 처리한 그룹에서만 대조군과 유의한 차이를 보였으며 (p＜0.05), MPP+ 용액만을 처리한 그룹에 대하여 75 μg/ml의 녹각(CC)를 처리한 그룹에서 유의한 차이를 보였다 (p＜0.05, 도 2 참조).

3) SH-SY5Y에서 MPP+에 대한 녹각(CC)의 세포 보호효과

MPP+ 용액의 신경독성에 대한 도파민성 세포에서의 녹각(CC)의 신경보호 효과를 관찰하기 위하여 SH-SY5Y세포에 MPP+를 처리하여 TH 발현을 확인하였다. 대조군에 비하여 MPP+만을 처리한 그룹에서 통계적으로 유의한 차이를 보였다(p＜0.05, 도 3 참조).

녹각(CC) 처리 그룹은 농도마다 차이는 있으나 MPP+ 용액만을 처리한 그룹과의 비교에서 25, 75 μg/ml의 농도에서 유의하게 TH의 발현 감소가 억제 되었다 (p＜0.05, 도 3 참조).

4) 녹각(CC)의 염증 조절을 통한 MPP+ 용액에 대한 신경보호 효과

MPP+ 용액의 신경독성에 대한 도파민성 세포에서의 녹각(CC)의 신경보호 효과를 관찰하기 위하여 SH-SY5Y세포에 MPP+를 처리하여 cox2와 iNOS 의 발현을 확인하였다.

대조군에 비하여 MPP+만을 처리한 그룹에서 cox2와 iNOS 가 통계적으로 유의하게 증가하였다 (p＜0.05, 도 4 참조).

녹각(CC) 처리 그룹은 농도마다 차이는 있으나 MPP+ 용액만을 처리한 그룹과의 비교에서 75 μg/ml의 농도에서 유의하게 cox2의 발현이 감소되었다 (p＜0.05, 도 4 참조).

iNOS 의 발현은 MPP+ 용액만을 처리한 그룹과의 비교에서 25, 50, 75 μg/ml의 농도에서 유의하게 감소되었다(p＜0.01, 도 4 참조).

5) 녹각(CC)의 cox2 조절을 통한 MPP+ 용액의 신경독성에 신경보호 효과

MPP+ 용액의 신경독성에 대한 도파민성 세포에서의 녹각(CC)의 신경보호 효과를 살펴보기 위하여 cox2 를 이용하여 형광염색을 한 결과 MPP+만을 처리한 그룹에서는 TH와 cox2의 merge 가 더 강하게 나타나고 75 μg/ml 녹각(CC)를 처리한 군에서는 control 과 비슷한 수준으로 나타났다(도 5 참조).

6) 녹각(CC)의 아포토시스 조절을 통한 MPP+ 용액의 신경독성에 대한 신경보호 효과

MPP+ 용액의 신경독성에 대한 도파민성 세포에서의 녹각(CC)의 신경보호 효과를 관찰하기 위하여 SH-SY5Y세포에 500 μM MPP+ 를 처리하여 cox2와 iNOS 의 발현을 확인하였다.

대조군에 비하여 MPP+만을 처리한 그룹에서 bax는 유의하게 증가하고 (p＜0.05), bcl2 는 유의하게 감소하였다 (p＜0.05, 도 6 참조).

녹각(CC) 처리 그룹은 농도마다 차이는 있으나 MPP+ 용액만을 처리한 그룹과의 비교에서 25, 75 μg/ml의 농도에서 유의하게 bax의 발현이 감소되었고 (p＜0.05), 75 μg/ml의 농도에서 bax/bcl2 비율이 유의하게 감소하였다(p＜0.01, 도 6 참조).

8. 종합

SH-SY5Y 세포에 0, 1, 25, 50, and 75 μg/ml 농도의 약물을 처리한 결과 모든 농도에서 세포 생존율이 크게 차이가 없었다.

MPP+의 신경독성에 대한 녹각(CC)의 세포보호효과를 확인하기 위하여 0, 1, 25, 50, and 75 μg/ml 농도의 약물을 처리하고 6시간 후 MPP+ 용액을 처리한 결과, MPP+만을 처리한 그룹에 비하여 75 μg/ml의 녹각(CC) 를 처리한 그룹에서 유의한 신경보호 효과를 나타냈다.

녹각(CC)의 신경보호 효과에 관한 기전을 탐색하기 위하여 산화 스트레스 및 아포토시스와 관련하여 실험을 진행하였다.

파킨슨병에서 산화 스트레스 및 아포토시스는 뉴런 도파민 세포의 감소를 유발한다. 파킨슨병을 유도하는 MPP+와 같은 뉴로톡신은 전자 수송 사슬의 복합체 I에서 과산화물의 생성을 자극하고 미토콘드리아 기질 탈수소 효소를 포함한 근위 산화 환원 부위에서 자유 라디칼 생성을 유발한다. 활성 산소 종이 증가된 미토콘드리아에서 생성한 산화 스트레스는 미토콘드리아 외막에서 Bax의 발현 및 세포 내 분포를 초래한다. 미토콘드리아의 Ca2+의 축적은 시토크롬 C를 방출하고 Bax 관련 메커니즘 이외의 메커니즘을 통해 과산화물 생성을 촉진한다.

결과적으로 대사 장애, 산화 스트레스 및 아포토시스가 발생한다. Bax는 미토콘드리아 내 막간 공간으로부터 세포질내로의 시토크롬 C와 같은 프로-아포토시스 단백질의 방출을 자극한다. 항- 아포토시스 단백질인 Bcl2는 Ca2+ 또는 Bax에 의해 매개된 시토크롬 C의 방출을 억제 할 수 있다. 본 실험에서 녹각(CC)의 처리는 MPP+에 증가된 Bax의 발현 증가를 억제함으로써 Bax/bcl2의 비율을 낮췄다.

이를 통하여 아포토시스에 의한 도파민성 뉴런의 사멸을 억제하는 기전을 통하여 신경보호 효과를 나타낸 것으로 생각된다.

파킨슨병에서 보여지는 유도성 산화 질소 iNOS는 산화 질소(NO)를 유도하여 미세 아교 세포를 활성화시킨다. 다양한 염증성 사이토카인과 함께 퇴행성 뇌질환의 과정에서 iNOS가 중요한 역할을 한다고 보고되었다. 또한, NO는 파킨슨병 동물 모델에서 도파민성 세포의 변성을 촉진시키는 역할을 한다. Cox(Cyclooxygenase)는 아라키도네이트로부터 프로스타글란딘의 형성에 관여하는 속도 조절 효소이며, 이의 유도 가능한 형태인 Cox2는 파킨슨병 동물 모델의 SN에서 고도로 발현된다. Cox2의 비정상적인 증가는 도파민의 산화를 유도하면서 파킨슨병에서와 같이 도파민성 뉴런의 선택적 취약성에 기여한다.

본 실험에서는 MPP+에 의하여 SH-SY5Y 세포에서 iNOS와 Cox2의 증가를 보였으며, 녹각(CC)를 처리한 그룹에서는 이러한 증가가 유의하게 감소되었다. 이는 산화스트레스에 의한 도파민성 세포의 선택적 취약성에 대항하는 녹각(CC)의 신경보호 효과의 작용기전을 보여준다.

이러한 실험예를 통해, 퇴행성 뇌질환에서 녹각 추출물을 유효성분으로 포함하는 파킨슨병 약제학적 조성물 및 그 치료제를 파킨슨병에 사용하여 파킨슨병에 우수한 치료 효과를 제공하는 것을 알 수 있다.

특히 위 실험예를 통해, 파킨슨병 약제학적 조성물이 도파민성 신경세포에서 MPP+ 유발독성에 대한 녹각 추출물의 아포토시스와 염증성 반응과 관련하여 나타내는 신경보호 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.

이하 실시예 및 실험예에 따른 약제학적 조성물을 포함하는 치료제 및 건강식품의 제조예들을 설명한다.

<제조예 1> : 치료제의 제조

<1-1> 산제의 제조

녹각 추출물 300 ㎎

유당 100 ㎎

탈크 10 ㎎

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

<1-2> 정제의 제조

녹각 추출물 50 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제 를 제조한다.

<1-3> 캡슐제의 제조

녹각 추출물 50 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

<1-4> 주사제의 제조

녹각 추출물 50 ㎎

주사용 멸균 증류수 적량

pH 조절제 적량

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플 당(2 ㎖) 상기의 성분함량으로 제조한다.

<1-5> 액제의 제조

녹각 추출물 1,000 ㎎

설탕 20 g

이성화 당 20 g

레몬향 적량

정제수를 가하여 전체 1000 ㎖로 맞추었다. 통상의 액제의 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 갈색병에 충전하고 멸균시켜 액제를 제조하였다.

<제조예 2> : 건강 식품의 제조

녹각 추출물 1,000 ㎎

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 B1 0.13 ㎎

비타민 B2 0.15 ㎎

비타민 B6 0.5 ㎎

비타민 B12 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

무기질 혼합물 적량

황산 제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

<제조예 3> : 건강 음료의 제조

녹각 추출물 1000 ㎎

구연산 1000 ㎎

올리고당 100 g

매실농축액 2 g

타우린 1 g

정제수를 가하여 전체 900 ㎖ 통상의 건강 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동 안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강 음료 조성물 제조에 사용한다.

이상 도면을 참조하여 실시예들을 설명하였으나 본 발명은 이에 제한되지 않으며, 상기 설명은 본 발명의 기술 사상을 예시적으로 설명한 것에 불과한 것으로서, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 다양한 수정 및 변형이 가능할 것이다. 따라서, 본 발명에 개시된 실시예들은 본 발명의 기술 사상을 한정하기 위한 것이 아니라 설명하기 위한 것이고, 이러한 실시예에 의하여 본 발명의 기술 사상의 범위가 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 보호 범위는 아래의 청구범위에 의하여 해석되어야 하며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 기술 사상은 본 발명의 권리범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (6)

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5. 파킨슨병에서 녹각 추출물을 유효성분으로 포함하는 파킨슨병 약제학적 조성물, 및 약제학적 조성물을 담는 담체를 포함하는 파킨슨병 치료제로, 　
   도파민성 신경세포에서 MPP+ 유발독성에 대한 상기 녹각 추출물의 아포토시스에 의한 도파민성 뉴런의 사멸을 억제하는 기전을 통하거나, 상기 녹각 추출물의 산화스트레스에 의한 도파민성 신경세포의 선택적 취약성에 대항하여 신경보호 효과를 나타내고,
   상기 녹각 추출물의 농도는 적어도　25　μg/ml이고,
   상기 도파민성 신경세포가 SH-SY5Y 세포인 파킨슨병 치료제.
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