KR100799270B1 - 산초나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 천연 항균조성물 - Google Patents

산초나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 천연 항균조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 산초나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 천연항균조성물에 관한 것이다. 특히 본 발명은 식중독균에 대하여 강한 살균효과를 가지며, 인체에 무해하고, 열 안정성이 우수한 산초나무 추출물 및 이를 포함하는 천연항균조성물을 제공한다.
산초나무, 식중독

Description

산초나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 천연 항균조성물{NATURAL ANTI-MICROORGANISM COMPOSITION CONTAINING EXTRACT FROM ZANTHOXYLUM SCHINIFOLIUM AS ACTIVE INGREDIENT}
도 1은 산초나무 추출물의 항균활성을 생육억제환으로 관찰한 것이고,
도 2는 종자를 제외한 산초나무 메탄올 추출물을 60 ℃(a) 또는 90 ℃(b)에서 각각 열처리하였을 때 항-비브리오 활성을 관찰한 것이고,
도 3은 70 % 에탄올 및 종자를 제외한 산초나무 메탄올 추출물 혼합물의 비브리오균의 생육억제를 확인한 것이고,
도 4는 LB 배지에 접종한 비브리오균(A)과, 10 %의 종자를 제외한 산초나무 메탄올 추출물이 첨가된 LB 배지에 접종한 비브리오균(B)을 각각 37시간 배양한 후 배양액의 탁도를 비교한 것이고,
도 5는 종자를 제외한 산초나무 메탄올 추출물의 농도별 비브리오균의 성장저해효과를 나타낸 그래프이고,
도 6은 종자를 제외한 산초나무 메탄올 추출물, 크린콜 및 산초나무 메탄올 추출물/크린콜(10 % 산초, 90 % 크린콜 조성물) 각각을 10 %로 첨가한 LB 배지에서 비브리오균의 생육을 관찰하여 나타낸 그래프이다.
[발명이 속하는 기술분야]
본 발명은 산초나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 천연항균조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 식중독균에 대하여 우수한 항균활성을 나타내는 산초나무 추출물 및 이를 포함하는 천연항균조성물에 관한 것이다.
[종래기술]
식중독은 세계 각국에서 발생하는 질환으로, 세균에 의한 발병이 대부분을 차지하고 있다. 식중독의 원인으로 작용하는 식품이 점차 다양해지고, 식중독 발병이 대형화됨에 따라 식중독 예방에 대한 관심이 높아지고 있다. 또한 환경오염과 더불어 세균 오염율이 증가되면서 식중독 사고의 위험성이 높아지고 있을 뿐만 아니라, 급속한 산업화와 인구의 증가는 수중생물 및 생태계의 균형을 위협하고 있다.
오염된 수계에서 자란 패류(shellfish)에서, 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)와 비브리오 파라헤몰리티쿠스(Vibrio parahaemolyticus) 등의 식중독 세균의 검출율이 높은 것으로 확인되고 있다. 또한 2000년도에 발생한 식중독 발생현항을 식품의약품안정청 통계자료로 살펴보면, 살모넬라, 포도상구균 및 장염비브리오가 식중독 원인에 50 % 이상을 차지하고 있어, 상기 3균주에 대한 예방책이 시급히 요구됨을 알 수 있다.
구분 계 살모넬라 포도상구균 장염비브리오 불검출 기타
건수(비율 %) 104(100) 30(28.8) 9(8.7) 14(13.5) 35(33.6) 15(15.4)
환자수(비율 %) 7,269(100) 2,591(35.6) 824(11.3) 235(3.2) 2,677(37.0) 942(13.0)
식중독 발병을 예방하기 위하여, 종래에는 화학적 합성품을 많이 사용하여 왔으나, 소비자들의 안정성 문제로 인한 기피현상으로 인하여 최근에는 오랫동안 식용해 온 천연 식품재료로부터 인체에 해가 없거나 또는 유해성이 적은 대체 보존료를 개발하기 위하여 많은 연구가 활발히 진행되고 있다. 특히, 소득향상과 함께 생활수준이 높아지고 건강에 대한 관심이 고조되면서 합성 보존료가 함유되어 있지 않은 식품에 대한 소비자의 선호도 변화가 인체에 해가 없는 천연항균물질에 대한 연구를 촉진시키고 있다(박석규, 박종철(1994) 한국생물공학회지, 9(5), 506-511(1994); 최석철, 정진숙.(1997) 한국섬유공학회, 34(6) p393-399(1997); 박찬성 (1998) 농산물저장유통학회지, 5(1), p89-96(1998)).
현재까지 상품화되어 있거나 항균성을 나타내는 천연물질로는 라이소자임, 폴리라이신, 프로타민, 콘알부민, 아비딘 등의 단백질과, 아세트산, 밴조익산, 알레익산 및 숙시닉산 등의 유기산, 팩틴분해물, 갈변반응물질, 저급지방산 에스테르 및 향신료가 있다(양지영, 한종흔, 강현록, 황미경, 이재우 (2001) 한국식품위생안전성학회, 16(1), p37-40). 향신료는 상당수가 여러균에 대하여 항균작용이 있는 것으로 알려져 있으며, 그중 가장 잘 알려진 것은 마늘과 양파이다.
그러나, 아직까지 식중독균에 대하여 탁월한 항균활성을 가지는 천연식물 유래 물질에 대한 개발은 미비한 실정이다.
상기 종래기술의 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 본 발명은 식중독균에 대하여 강한 항균활성을 가지는 식물유래 항균물질을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한 본 발명은 인체에 안전하며, 거부감없이 식품으로 섭취할 수 있는 식물유래 항균물질을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한 본 발명은 식중독 유발식품에 용이하게 첨가하여 식중독 발병을 예방할 수 있는 식물유래 항균물질을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 산초나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 항균조성물을 0.5 내지 20 중량%로 포함하는 식품을 제공한다.
이하 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명자들은 합성 항균성 화합물에 대한 대체물질로 사용가능하며, 인체에 안전하게 적용할 수 있는 항-식중독균 물질을 천연식물들로부터 검색하던 중, 산초나무가 우수한 항균활성을 가짐을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
산초나무는 학명 잔톡실럼 스키니폴리움(Zanthoxylum schinifolium)인 운향과에 속하는 식물로, 분지나무 또는 상초나무라고도 불리운다. 산초나무는 우리나라, 일본, 중국 등 동북아시아에 널리 자생하고 있으며, 산초나무의 껍질, 잎 및 과실은 향신료, 약용 및 제유용으로 사용되고 있다(이종원 (1998) 한국식품영양학회, 11(5), p493-498).
본 발명의 항균물질은 산초나무 추출물이다. 상기 산초나무 추출물은 통상의 식물 추출물 제조방법으로 제조할 수 있으며, 구체적으로는 휘발성 추출물 제조방법이다. 휘발성 추출물 제조방법은 산초나무를 파쇄하고, 여기에 에탄올을 가하여 감압농축한 다음 휘발된 증기가 냉각관을 통과하여 응축액의 액상형태로 둥근 플라스크에 포집되게 하고, 이 포집된 액을 농축하여 휘발성 추출물을 조제하는 방법이다.
산초나무 추출물에 사용되는 산초나무 부위는 산초나무 전체 또는 일부분일 수 있으며, 바람직하기로는 종자를 제외한 열매껍질(과피), 잎, 가지, 종자, 뿌리 또는 줄기를 1종 이상 사용하는 것으로, 종자 추출물에 비하여 다른 부위 추출물의 항균활성이 보다 우수하다.
추출용매는 증류수 또는 유기용매이며, 유기용매는 탄소수 1 내지 5의 저급알콜, 헥산, 에틸아세테이트 또는 클로로포름일 수 있다. 추출용매는 산초나무 건조중량에 1: 1 내지 1: 20 중량비로 가할 수 있으며, 추출용매는 단독으로 사용하거나, 1종 이상 혼합물형태로 사용할 수 있으며, 또한 순차적으로 다른 용매를 사용하여 추출과정을 반복실시할 수 있다.
추출조건은 고온에서 감압하는 것으로, 온도는 60 내지 250 ℃, 바람직하기로는 90 내지 220 ℃이고, 압력은 최대 100 mmHg, 바람직하기로는 10 내지 50 mmHg이다. 추출시간은 용매 또는 산초나무 사용중량에 따라 적절히 조절할 수 있어, 바람직하기로는 6 시간 내지 48시간이나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 산초나무 추출물은 바람직하기로는 산초나무의 종자를 제외한 부위열매껍질(과피), 잎, 가지, 뿌리 및 줄기로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택된 부위를 메탄올 또는 에탄올로 추출한 추출물이다.
본 발명은 산초나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균조성물을 제공한다. 본 발명의 항균조성물은 바람직하기로는 식중독균에 대하여 항균활성을 가지는 것이다. 항균조성물은 산초나무 추출물을 단독으로 포함할 수 있으며, 그 외 약리학적으로 허용가능한 물질을 더욱 포함할 수 있다. 상기 약리학적으로 허용가능한 물질은 기존 항균제 또는 살균제일 수 있으며, 희석제 또는 부형제일 수 있다. 기존 항균제의 일예로는 라이소자임, 폴리라이신, 프로타민, 콘알부민, 아비딘 등의 단백질과, 아세트산, 밴조익산, 알레익산 및 숙시닉산 등의 유기산, 팩틴분해물, 갈변반응물질, 저급지방산 에스테르 또는 향신료가 있다.
본 발명의 항균조성물은 바람직하기로는 산초나무 추출물을 0.5 내지 20 중량%로 포함하나, 상기 함량은 첨가물의 종류나 항균조성물의 제형에 따라 적절히 조절할 수 있다. 항균조성물의 제형은 사용목적에 따라 적절히 조절할 수 있으며, 적용가능한 대표적인 제형으로는 과립제, 산제, 시럽제, 액제, 에어로솔제, 유제, 현탁제 또는 주정제이다.
또한 본 발명의 항균조성물은 주정, 에탄올, 메탄올, 시판되는 알콜계 소독제 등의 알콜계 소독제를 더욱 포함할 수 있다. 본 발명의 산초나무 추출물은 알콜계 소독제와 함께 사용할 경우 항균활성이 현저히 향상되는 시너지 효과를 가지 므로, 항균조성물에 알콜계 소독제를 추가로 포함하여 항균효과를 극대화시킬 수 있다. 최적의 시너지 효과를 가지는 바람직한 비율은 산초나무 추출물 대 알콜계 소독제가 1:99 내지 1:4 중량비로 혼합되는 것이며, 상기 중량비 범위를 벗어날 경우 시너지 효과가 거의 없거나, 효과대비 비경제적일 수 있다. 상기 알콜계 소독제는 바람직하기로는 에탄올이다.
본 발명의 항균조성물은 인체에 무해하여 식품보존제나 식품부패방지제 또는 식품살균제로 사용할 수 있으며, 유효성분인 산초나무 추출물이 열에 안정하여 식품가공 이전에 처리하므로써 작업성이 매우 우수하다.
또한 본 발명은 항균조성물을 포함하는 식품을 제공한다. 상기 식품은 항균조성물은 0.5 내지 20 중량%로 포함할 수 있으며, 상기 항균조성물의 함량이 0.5 중량% 미만인 경우 식품의 항균활성이 미비할 수 있으며, 20 중량%초과하는 경우 사용량 대비 효과가 증가되지 않으므로 비경제적일 수 있다.
본 발명의 식품은 통상적인 식품이며, 바람직하기로는 향신료, 조미료 또는 와사비이다. 특히 와사비는 식중독의 주요원인인 생선회를 섭취할 때 함께 사용하는 식품이므로, 생선회에 생육하고 있는 유해균주를 매우 효과적으로 살균할 수 있다.
이하 본 발명의 실시예를 기재한다. 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 산초나무 추출물 제조
1-1. 산초나무 수 추출물 제조
서울경동시장에서 구입한 산초나무를 종자와 종자를 제외한 부분(열매껍질, 잎, 가지, 뿌리, 줄기)으로 분류하여 건조한 다음 각각 파쇄하였다. 각 파쇄물에 1:10 중량비율로 증류수를 가하고, 100 ℃로 감압농축한 다음 얻은 휘발성 추출물을 여과지(Wathman No.2)로 여과하였다. 여과액은 재차 회전진공 증발기를 이용하여 감압여과한 다음 1/10 부피로 농축하여 물 분획층의 시험액으로 사용하였다.
1-2. 산초나무 메탄올 추출물 제조
산초나무 중 종자만을 제외한 부분을 파쇄하여 1:10 중량비율로 에탄올을 가하고 60 ℃에서 감압농축하였다. 휘발된 증기가 4 ℃ 물이 흐르는 냉각관을 통과하여 응축액의 액상형태로 둥근 플라스크에 포집되게 하고 이 포집된 액을 60 ℃에서 5배 농축하여 휘발성 추출물로 조제하였다.
실시예 2: 산초나무 추출물의 항균성 시험
산초 추출물의 항균성 시험은 디스크 방법(Davidson, P. M and Parish, M. E. (1989) Food technology, 43, p148-155)을 이용하였다.
균주는 본 연구소에 보관 중인 시젤라 플랙스마리(Shigella flexmari), 세라티아 리큐팩시어스(Serratia liquefacieus), 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella enteritidis), 살모넬라 헤델버그(Salmonella hedelberg), 살모넬라 티피무리움(S. typhimurium) ATCC14028, 살모넬라 자비아나(S. javiana), 살모넬라 티피무리움 ATCC14023, E. coliO157:H7, 바실러스 섭틸리스(Bacillus subtilis) 3종, 엔테로박터 칼라카이(Enterobacter calacae), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 비브리오 파라헤몰리티쿠스(Vibrio parahaemolytics) 14 종을 사용하였 다.
상기 균주들은 각각 10 mL LB 배지에 접종하고, 37 ℃에서 16시간 배양한 후 0.1 mL을 취하여 LB 고체배지위에 고르게 도말하였다. 멸균된 10 mm 종이디스크에 산초나무 수 추출물 또는 산초나무 메탄올 추출물 70 ㎕을 떨어뜨려 건조시킨 후 37 ℃에서 24시간 배양하여 디스크 주위의 생육억제환(clear zone) 직경을 측정하였다. 이때 대조구로 증류수 및 메탄올 70 ul를 종이 디스크에 동일하게 가하여 측정하였다. 하기 표 2는 산초나무 메탄올 추출물(종자를 제외한 산추나무 부분)의 항균활성을 나타낸다.
항균력 균수(CFU/ml) 항균활성(생육저해환, mm) 배지
시젤라 플랙스마리 - 3.78 X 109 - SS
세라티아 리큐팩시어스 - 1.13 X 1010 - SS
살모넬라 엔테리티디스 + 9.62 X 109 + S
살모넬라 헤델버그 ++ ~X 108 14 SS
살모넬라 티피무리움 ATCC14028 + 6.90 X 109 + SS
살모넬라 티피무리움 ATCC14023 - 4.90 X 109 - SS
살모넬라 자비아나 - 1.25 X 1010 - SS
E. coli O157:H7 + 6.35 X 109 + MAC
SCB4 - ~ X 108 - PCA
타카나(Takana) - ~ X 108 - PCA
바실러스 - ~ X 108 - PCA
엔테로박터 칼라카이 - 1.89 X 1010 - MAC
스타필로코커스 아우레우스 ++ ~ X 106 14 PCA
비브리오 파라헤몰리티쿠스 ++ ~ X 109 16 TCBS
(-: 항균활성 없음, +: <12 mm, ++: >12 mm,
SS: 살모넬라 & 시젤라 아가, MAC: 맥콘키(MacConkey) 아가, PCA: 플레이트 카운트 아가, TCBS: 비브리오 선별아가)
표 2에서, 종자를 제외한 산초나무 메탄올 추출물은 스타필로코커스 아우레우스, 비브리오 파라헤몰리티쿠스, 살모넬라 헤델버르 및 E. coliO157 에 대하여 증식활성을 나타내어 선명한 클리오 존(Clear zone)이 관찰되었다.
도 1은 산초나무 추출물의 항균활성을 측정하기 위하여 생육억제환을 관찰한 것으로, a는 스타필로코커스 아우레우스에 산초나무 잎 및 가지 메탄올 추출물(1), 산초나무 잎 및 가지 수 추출물(2), 산초나무 종자 메탄올 추출물(3) 및 산초나무 종자 수 추출물(4) 각각을 함유한 디스크를 올려놓고 생육억제환 형성을 측정한 것이다. b는 살모넬라 하이데버그에 대하여, c는 비브리오 파라헤몰리티쿠스에 대하여 디스크 시험을 실시한 결과이다.
스타필로코커스 균주는 종자를 제외한 산초나무 메탄올 추출물, 및 종자를 제외한 산초나무 수 추출물에 의하여 생육이 억제되며(도 1a), 살모넬라 하이데버그는 종자를 제외한 산초나무 수 추출물을 제외한 추출물들에 의하여 생육이 억제되며(도 1b), 비브리오균은 4종의 추출물 모두에 의하여 생육이 억제됨을 확인할 수 있다. 즉, 산초나무 추출물은 산초나무 추출부위나 추출용매에 따라 각기 다른 항균활성을 가지므로, 각 균에 대하여 가장 강한 항균성을 가지는 추출물을 사용하거나 추출물들을 혼합물 형태로 사용하여 광범위한 균주에 대하여 살균용도로 사용할 수 있다. 또한 본 발명의 산초나무 추출물은 식중독 원인균의 50 % 이상을 차지하는 살모넬라, 포도상구균, 장염비브리오에 탁월한 항균효과가 있음이 확인되어, 식중독 예방을 위한 용도로 사용할 수 있다.
실시예 3: 산초 추출물의 열 안정성 시험
산초나무 잎 및 가지 메탄올 추출물을 항균물질로 사용하고, 균주로는 비브리오 파라헤몰리티쿠스를 사용하여 열 안정성을 확인하였다.
비브리오 파라헤몰리티쿠스 배양액 0.1 mL(108 CFU/mL)을 LB 평판에 도말하고, 멸균된 10 mm 종이 디스크를 얹고 말린 후 30, 60, 67 및 90 ℃에서 20분간 열처리된 산초나무 메탄올 추출물과 비교실험을 위해 세균에 저해능이 있는 70 % 에탄올을 각각 70 ul씩 종이 디스크에 떨어뜨려 건조시킨 후 37 ℃에서 24시간 배양하여 생육저해환을 측정하였다.
도 2는 산초나무 메탄올 추출물을 60 ℃(a) 또는 90 ℃(b)에서 각각 열처리하였을 때 항-비브리오 활성을 타 시판중인 소독제 등과 비교, 관찰한 것으로, (1)은 메탄올이고, (2)는 카미카-SD 이고, (3)은 크린콜이고, (4)는 종자를 제외한 산초나무 메탄올 추출물이다. 도 2에서, 비브리오 파라헤몰리티쿠스의 생육 저해환의 지름은 모든 가열처리구에서 처리온도와 관계없이 약 18 mm로 확인되어, 본 발명의 산초나무 추출물은 열 안정성을 가짐을 알 수 있다.
실시예 4: 산초나무의 항균활성 비교
장염비브리오의 원인균 비브리오 파라헤몰리티쿠스를 대상으로 기존의 알콜계 및 염소계 소독제와의 항균성 비교실험을 진행하였다.
비브리오 파라헤몰리티쿠스(~ X 109 CFU/ml) 0.1 mL을 TCBS 아가에 접종하여 건조시키고, 종이 디스크를 배지위에 올린 후 70 % 에탄올, 카미카-SD(Camica-SD) 64 ppm 및 산초나무 잎 및 가지 메탄올 추출물을 각각 70 ul씩 떨어뜨리고, 37 ℃에서 16시간 배양하여 항균활성을 관찰하였다. 항균활성은 표 3에 나타낸 바와 같이, 70 % 에탄올>산초나무 잎 및 가지 메탄올 추출물>카미카-SD 순으로 확인되었다.
산초 추출물 70 % 에탄올 카미카-SD
클리어 존(cm) 1.2 1.8 0
또한, 본 발명의 산초나무 잎 및 가지 메탄올 추출물을 기존 알콜계 소독제와 함께 사용할 경우, 시너지 효과가 있는지 확인하였다.
동일 균수의 비브리오 파라헤몰리티쿠스 0.1 mL을 LB 아가에 접종하여 말린 후 멸균된 종이 디스크에 10 %, 1 % 및 0.1 %로 산초나무 메탄올 추출물을 포함하는 70 % 에탄올 혼합물을 100 uL씩 흡수시켰다. 용매를 완전히 증발시키고 시험용 평판배지 위에 놓아, 37 ℃에서 24시간 배양한 다음 생육억제활성을 관찰하였다.
생육억제활성 결과는 도 3에 나타내었고, 생육억제환의 크기는 하기 표 4에 나타낸다. 도 3은 70 % 에탄올 및 종자를 제외한 산초나무 메탄올 추출물 혼합물에 의한 비브리오균의 생육억제를 확인한 것으로, (1)은 산초나무 메탄올 추출물을 0.1 %로 포함하는 70 % 에탄올 혼합물이고, (2)는 산초나무 메탄올 추출물을 10 %로 포함하는 70 % 에탄올 혼합물이고, (3)은 산초나무 메탄올 추출물을 1 %로 포함하는 70 % 에탄올 혼합물이고, (4) 는 70 % 에탄올이다.
저해환의 직경(mm)
70 % 에탄올 100 ul 14
10 % 산초나무 추출물*100 ul 17.5
1 % 산초나무 추출물 100 ul 17.5
0.1 % 산초나무 추출물 100 ul 18
산초나무 추출물 10 uL 12
*: 산초추출물 100 ul + 70 % 에탄올 900 ul
표 4 및 도 3에서, 70 % 에탄올에 종자를 제외한 산초나무 메탄올 추출물을 혼합하여 사용할 경우 산초나무 메탄올 추출물의 혼합비에 상관없이 약 2배정도의 저해환 증가현상을 확인할 수 있다.
실시예 5: 산초나무 추출물의 최소저해농도 측정
산초나무 추출물의 최소저해농도(minimum inhibitory concentration)는 Turbidmetric Assay법(Davidson, P. M and Parish, M. E. (1989) Food technology, 43, p148-155)을 이용하여 실험하였다.
비브리오 파라헤몰리티쿠스의 배양액 0.1 mL을 접종한 LB 배지(1012 내지 1013 CFU/mL)에 산초나무 메탄올 추출물을 0 %, 0.5 %, 3 % 및 10 %의 농도로 각각 첨가한 다음 37 ℃에서 33시간 배양하면서 시간대 시험군별로 스펙트로미터(Shimazu UV-1601)를 이용하여 파장 600 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 각 시험군별 시료를 이용하여 일반세균용 3M 페트리-필름 및 LB 아가에 단계별 희석액을 접종하여 생균수를 파악하였다.
그 결과는 도 4 및 도 5에 나타낸다.
도 4는 LB 배지에 접종한 비브리오균(A)과, 10 % 종자를 제외한 산초나무 메 탄올 추출물이 첨가된 LB 배지에 접종한 비브리오균(B)을 각각 37시간 배양한 후 배양액의 탁도를 비교한 것이고, 도 5는 종자를 제외한 산초나무 메탄올 추출물의 농도별 비브리오균의 성장저해효과를 나타낸 그래프이다. 도 4 및 도 5에서 종자를 제외한 산초나무 메탄올 추출물이 비브리오균의 생육을 억제함을 확인할 수 있다.
또한 종자를 제외한 산초나무 메탄올 추출물의 비브리오균 생육억제활성을 기존의 알콜계 소독제와 비교하였다. 알콜계 소독제로는 (주)진로에서 시판하고 있는 크린콜을 사용하였고, 상기 실험과 동일한 방법으로 실시하였다. 그 결과는 도 6에 나타낸다.
도 6은 종자를 제외한 산초나무 메탄올 추출물, 크린콜 및 종자를 제외한 산초나무 메탄올 추출물/크린콜(10 % 산초, 90 % 크린콜 조성물) 각각을 10 %로 첨가한 LB 배지에서 비브리오균의 생육을 관찰하여 나타낸 그래프이다. 도 6에서, 종자를 제외한 산초나무 메탄올 추출물 처리군이 가장 우수한 비브리오 생육저해 활성을 나타내었으며, 크린콜 처리군 및 산초/크린콜 처리군 역시 비브리오의 생육을 저해하나 그 활성에 있어서는 종자를 제외한 산초나무 메탄올 추출물 단독 처리군 보다 약한 것으로 확인되었다.
실시예 6: 산초나무 에탄올 추출물의 제조 및 이의 항균활성 검증
추출용매로 에탄올을 사용하여 실시예 1과 도일한 방법으로 실시하여 산초나무 에탄올 추출물을 제조하였다. 상기 산초나무 에탄올 추출물은 산초나무의 종자를 제외한 부분에서 추출한 것이다.
산초나무 에탄올 추출물의 항균활성을 70 % 에탄올, 자몽 추출물(Killol-plus), 알칼리 이온수, CG-100(GCL 사), 가드엠-53(롯데), 크린콜(진로), 하이큐 및 듀오 클린X2(Duo clean)와 비교실험하였다.
비브리오 파라헤몰리티쿠스(~ X 109 CFU/mL) 0.1 mL을 LB 아가에 접종하여 말리고, 종이 디스크를 배지위에 올린 후 산초나무 에탄올 추출물 및 그 외 소독제 각각을 50 ul씩 떨어뜨리고, 37 ℃에서 16시간 배양하여 저해능을 관찰하였다. 그 결과 항균활성은 산초나무 에탄올 추출물 ≒ 70 % 에탄올 > 자몽 추출물 > 하이큐의 순인 것으로 확인되었다(표 5).
소독액 명 적용농도 비브리오 파라헤몰리티쿠스 클리어존(mm) 비고
Duo 클린 X 2(50%) ~ X 107 CFU/mL 0 지텍바이오메디칼
70 % 에탄올(프로파놀-A) 95 % 0
산초나무 에탄올 추출물 10 % 16
자몽 추출물 원액 13 (주)에이에프뱅크
알칼리 이온수 원액 0 신김포농협
CG 100 원액 0 GCL corporation
가드엠-53 원액 11 롯데
크린콜 원액 0 진로
하이큐 원액 11
즉, 식음이 가능한 에탄올을 용매로 하여 추출한 산초나무 에탄올 추출물은 기존의 소독제에 비하여 현저한 항균활성을 가져, 식품으로 활용성이 높음을 확인할 수 있다.
또한 산초나무 에탄올 추출물의 비브리오균수 최소성장저해농도를 측정하였다. 비브리오 파라헤몰리티쿠스 균수에 따라 산초나무 에탄올 추출물을 10 %, 6 %, 5 %, 3 % 및 1 % 에탄올을 각각 첨가하여 배양한 다음 600 nm에서 흡광도를 측 정하였다. 그 결과 산초나무 에탄올 추출물은 10 %, 6 % 및 5 %은 각각 최대 ~ X 104 내지 ~ X 107 CFU/ml의 비브리오균 성장을 저해하였으며, 산초나무 에탄올 추출물을 1 % 및 3 %로 사용하였을 때 최대 105 CFU/ml의 비브리오균에 대하여 생육 저해능을 보였다. 따라서, 산초나무 에탄올 추출물의 첨가함량은 5 %로 산정할 수 있다.
상기에 언급한 바와 같이, 본 발명의 산초나무 추출물은 식중독균에 대하여 강한 살균효과를 가질 뿐만 아니라 인체에 무해하여 기존 합성 살균제의 대체물로 광범위하게 사용할 수 있으며, 열 안정성이 우수하여 식품가공시에 용이하게 적용시켜 항균활성을 유지시킬 수 있다.

Claims (7)

  1. 산초나무의 열매 껍질, 잎, 가지, 뿌리, 및 줄기로 이루어진 군 중에서 선택된 두 가지 이상의 부위를 메탄올로 추출한 산초나무 메탄올 추출물과,
    에탄올 수용액을 유효성분으로 포함하는
    살모넬라 엔테리티디스(Salmonella enteritidis), 살모넬라 헤델버그(Salmonella hedelberg), 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium) ATCC14028, 및 비브리오 파라헤몰리티쿠스(Vibrio parahaemolyticus)로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상의 균주에 대하여 항균활성을 갖는 것을 특징으로 하는, 항균조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제1항에 있어서, 상기 항균조성물은 자몽추출물, 라이소자임, 폴리라이신, 프로타민, 콘알부민, 아비딘 및 유기산으로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택되는 항균물질을 더욱 포함하는 것인, 조성물.
  5. 삭제
  6. 제1항 또는 제4항에 따른 항균조성물을 0.5 내지 20 중량%로 포함하는 식품.
  7. 제1항 또는 제4항에 따른 항균조성물을 0.5 내지 20 중량%로 포함하는 식품첨가물.
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