KR100774231B1

KR100774231B1 - 증식억제 활성을 지닌 피리미도 화합물 (ⅱ)

Info

Publication number: KR100774231B1
Application number: KR1020077017255A
Authority: KR
Inventors: 킨-천 룩; 파멜라 로린 로스만; 스테판 샤이블리흐; 성-사우 소
Original assignee: 에프. 호프만-라 로슈 아게
Priority date: 2002-11-04
Filing date: 2003-10-27
Publication date: 2007-11-07
Also published as: EP1560832A1; US7129351B2; CN1711264A; AU2003274086A1; WO2004041822A1; KR100763300B1; US7112676B2; AU2003276190A1; RU2005117340A; RU2331641C2; EP1560829A1; AR041739A1; DE60319260D1; KR20050074534A; DE60318888T2; ATE386744T1; CA2502182A1; WO2004041821A1; RU2005117341A; KR20070087689A

Abstract

티로신 키나아제의 Src 패밀리의 선택적 억제제인, 화학식 Ⅰ의 신규한 피리미도 화합물(식에서, R¹ 내지 R⁹ 는 발명의 상세한 설명에 정의된 바와 같다)을 개시하고 있다. 상기 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염은 고형 종양, 특히 유방, 결장, 간 및 이자 종양의 치료 또는 억제에 유용한 증식억제제이다. 또한, 상기 화합물을 함유하는 약학적 조성물 및 암치료를 위한 용도를 개시하고 있다.

티로신 키나아제, Src 패밀리의 선택적 억제제, 피리미도 화합물

Description

증식억제 활성을 지닌 피리미도 화합물 (Ⅱ) {PYRIMIDO COMPOUNDS HAVING ANTIPROLIFERATIVE ACTIVITY (Ⅱ)}

단백질 키나아제는 다양한 세포 기능을 조절하는 단백질(효소) 집단이다. 이는 단백질 기질 상의 특정한 아미노산을 인산화하여 상기 기질 단백질에 형태적 변이를 일으킴으로써 완성된다. 상기 형태적 변화가 기질의 활성 또는 다른 결합 파트너와의 상호작용 능력을 조절한다. 단백질 키나아제의 효소 활성은 상기 키나아제가 인산기를 기질에 첨가시키는 속도로 나타낸다. 이는, 예컨대 시간의 함수로서 생성물로 전환되는 기질의 양을 결정함으로써 측정할 수 있다. 기질의 인산화는 단백질 키나아제의 활성부위에서 일어난다.

티로신 키나아제는 아데노신 트리포스페이트(ATP)의 말단 인산의 단백질 기질 상 티로신 잔기로의 이동을 촉매하는 단백질 키나아제의 하위집합이다. 상기 키나아제는 세포 증식, 분화 및 이동을 유도하는 성장 인자 신호전달의 전파에 있어서 주요한 역할을 담당한다.

비수용체 티로신 키나아제의 Src 패밀리는 특히 암세포 조절 및 성장과 연관되어 있다. [D. H. Boschelli and F.Boschelli, "Small molecule inhibitors of Src family kinases", Drugs of the Future 2000, 25(7):717-736] 참조. Src 과발현은 결장, 유방, 간 및 이자 종양 뿐만 아니라 특정 B-세포 백혈병 및 림프종에서도 발견되었다. 719 쪽 확인. 증가된 Src 발현 및 활성은 또한 악성 종양의 증가와 관련있는 것으로 나타났다. 719 쪽 확인. 따라서, Src 억제제는 항종양제로서 유용하게 쓰일 수 있다.

단백질 키나아제 촉매적 활성의 소분자 억제제로서 여러 예가 존재한다. 특히, 소분자 억제제는 전형적으로 단백질 키나아제 ATP 결합부위 (또는 "활성부위") 와 강하게 결합함으로써 기질의 인산화를 방해한다. WO 98/24432 및 [Hennequin L. F. 등, J. Med. Chem. 2002, 45 (6), ppl300] 참조. 몇몇 상기 화합물은 다중 목표물을 억제한다. 예컨대, W0 99/61444 (Warner-Lambert) 는 하기 화학식의 2환 피리미딘 및 2환 3,4-디히드로피리미딘을 개시하고 있는 바, 이는 사이클린(cyclin) 의존적 키나아제 Cdk1, Cdk2 및 Cdk4 뿐만 아니라 성장 인자 수용체 티로신 키나아제 효소 PDGFR 및 FGFR 을 억제한다고 주장되고 있다:

미국 특허 제 6,150,373 호 (Hoffmann-La Roche Inc.) 는 하기 화학식의 2환 질소 헤테로사이클을 개시하고 있는 바, 이는 T-세포 티로신 키나아제 p56^lck 를 억제한다고 주장되고 있다:

WO 01/29041 A1 및 WO 01/29042 (F. Hoffmann-La Roche AG) 는 하기 화학식의 알킬아미노 치환된 2환 질소 헤테로사이클을 개시하고 있는 바, 이는 p38 매개 세포 기능을 억제하고 따라서 세포 증식 억제제로 언급된다:

WO 01/64679 A1 (SmithKline Beecham) 은 하기 화학식의 1,5-이치환(disubstituted)-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-D]피리미딘-2-온 화합물을 개시하고 있는 바, 이는 CSBP/P38 키나아제 매개 질환의 치료에 유용한 것으로 언급되고 있다:

하나 이상의 유형의 암, 특히 고형 종양의 치료를 위한, 단백질 키나아제의 촉매적 활성 억제에 유효한 쉽게 합성되는 소분자 화합물, 특히 비수용체 티로신 키나아제의 Src 패밀리 ("SFK") 에 대한 필요성은 상존한다. 상기 소분자 억제제가 또한 유리한 생체이용률 프로필을 갖는 것이 바람직하다. 따라서, 본 발명의 목적은 SFK 의 활성을 억제할 수 있는 신규한 피리미도 화합물 및 상기 화합물을 함유한 약학적 조성물을 제공하는 것이다. 상기 화합물은 암의 치료 또는 억제, 특히 고형 종양의 치료 또는 억제에 있어 유용하다.

본 발명은 하기 화학식 Ⅰ의 신규한 피리미도 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다:

[식에서,

R¹ 은 하기의 기에서 선택되고:

H,

C₁ _-10 알킬,

아릴, 시클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로사이클, NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, CN 및 NO₂ 에서 선택된 세 개 이하의 기로 치환된 C₁ _-10 알킬 (여기서 아릴, 시클로알킬, 헤테로아릴, 및 헤테로사이클 기는 NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³ ,SO₂R¹³, CN 및 NO₂에서 선택된 세 개 이하의 기로 서로 독립적으로 치환될 수 있다),

아릴,

저급 알킬, NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, CN 및 N0₂에서 선택된 세 개 이하의 기로 치환된 아릴,

헤테로아릴,

저급 알킬, NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, CN 및 N0₂에서 선택된 세 개 이하의 기로 치환된 헤테로아릴,

헤테로사이클,

저급 알킬, NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, S0₂R¹³, CN 및 N0₂ 에서 선택된 세 개 이하의 기로 치환된 헤테로사이클,

C₃ _-10 시클로알킬,

저급 알킬, NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, CN 및 NO₂ 에서 선택된 세 개 이하의 기로 치환된 C₃ _-10 시클로알킬,

C₂ _-10 알케닐,

NR¹⁰R¹¹, OR¹³, SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, S0₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, S0₂R¹³, CN 및 N0₂ 에서 선택된 세 개 이하의 기로 치환된 C₂ _-10 알케닐, 및

NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, S0₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, S0₂R¹³, CN 및 NO₂ 에서 선택된 세 개 이하의 기로 치환된 C₂ _-10 알키닐;

R², R³ 및 R⁴ 는 독립적으로 하기로 이루어진 기에서 선택되고:

H,

NR¹⁰R¹¹,

OR¹²,

SR¹²,

C₁ _-10 알킬,

시클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로사이클, NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, S0₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, S0₂R¹³, CN 및 NO₂ 에서 선택된 세 개 이하의 기로 치환된 C₁ _-10 알킬 (여기서, 시클로알킬, 헤테로아릴, 및 헤테로사이클 기는 저급 알킬, NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, S0₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, S0₂R¹³, CN 및 NO₂에서 선택된 세 개 이하의 기로 서로 독립적으로 치환될 수 있다),

헤테로아릴, 저급 알킬, NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, CN 및 N0₂ 에서 선택된 세 개 이하의 기로 치환된 헤테로아릴,

저급 알킬, NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, S0₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, S0₂R¹³, CN 및 N0₂ 에서 선택된 세 개 이하의 기로 치환된 헤테로사이클,

C₃ _-10 시클로알킬,

저급 알킬, NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, S0₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, CN 및 N0₂에서 선택된 세 개 이하의 기로 치환된 C₃ _-10 시클로알킬,

C₂ _-10 알케닐,

NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, S0₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, S0₂R¹³, CN 및 N0₂ 에서 선택된 세 개 이하의 기로 치환된 C₂ _-10 알케닐,

C₂ _-10 알키닐, 및

NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, S0₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, S0₂R¹³, CN 및 N0₂ 에서 선택된 세 개 이하의 기로 치환된 C₂ _-10 알키닐,

(단, 하나 이상의 R², R³ 또는 R⁴ 는 H 가 아니다);

R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸ 은 하기의 기에서 독립적으로 선택되고:

H,

저급 알킬,

히드록시 또는 알콕시로 치환된 저급 알킬,

NR¹⁵R¹⁶,

OH,

OR¹⁷,

SR¹⁷,

할로겐,

COR¹⁷,

CO₂R¹⁷,

CONR¹⁷R¹⁸,

S0₂NR¹⁷R¹⁸,

SOR^l7,

SO₂R¹⁷, 및

CN;

R⁹ 는 하기의 기에서 선택되고:

H,

, 및

COR¹⁷;

R¹⁰ 및 R¹¹ 은 하기의 기에서 선택되고:

H,

COR¹³,

CO₂R¹³,

CONR¹³R¹⁴,

SO₂R¹³,

SO₂NR¹³R¹⁴,

저급 알킬,

히드록시, 알콕시 또는 NR¹⁵R¹⁶ 에 의해 치환된 저급 알킬,

시클로알킬,

히드록시, 알콕시, 저급 알킬, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 로 치환된 시클로알킬,

헤테로사이클, 및

히드록시, 알콕시, 저급 알킬, 또는 NR¹⁵R¹⁶로 치환된 헤테로사이클,

또는, 다르게는, NR¹⁰R¹¹ 은 3 내지 7 개 원자를 지닌 고리를 형성할 수 있고, 상기 고리는 하나 이상의 추가적 헤테로 원자를 포함할 수 있으며, 하나 이상 의 저급 알킬, OR¹², COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, 및 SO₂NR¹³R¹⁴ 이루어진 기에 의해 치환될 수 있다;

R¹² 는 하기의 기에서 선택되고:

H,

저급 알킬,

COR¹³,

CONR¹³R¹⁴,

히드록시, 알콕시, 또는 NR¹⁵R¹⁶, 시클로알킬로 치환된 C₂ _-6 알킬,

헤테로사이클, 및

히드록시, 알콕시, 저급 알킬, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 로 치환된 헤테로사이클;

R¹³ 및 R¹⁴ 는 하기의 기에서 독립적으로 선택되고:

H,

저급 알킬,

히드록시, 알콕시, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 로 치환된 C₂ _-6 알킬,

시클로알킬,

헤테로사이클, 및

히드록시, 알콕시, 저급 알킬, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 로 치환된 헤테로사이클,

또는, 다르게는, NR¹³R¹⁴ 는 3 내지 7 개의 원자를 지닌 고리를 형성할 수 있고, 상기 고리는 하나 이상의 추가적인 헤테로 원자를 포함할 수 있으며, 하나 이상의 저급 알킬, OR¹⁷, COR¹⁷, CO₂R¹⁷, CONR¹⁷R¹⁸, SO₂R¹⁷, 및 S0₂NR¹⁷R¹⁸로 이루어진 기로 치환될 수 있다;

R¹⁵ 는 하기의 기에서 선택되고:

H,

저급 알킬,

COR¹⁷, 및

CO₂R¹⁷ ;및

R¹⁶, R¹⁷ 및 R¹⁸ 은 하기의 기에서 독립적으로 선택되고:

H, 및

저급 알킬,

또는, 다르게는, NR¹⁵R¹⁶ 및 NR¹⁷R¹⁸ 은 각각 독립적으로 3 내지 7 개의 원자를 지닌 고리를 형성할 수 있고, 상기 고리는 하나 이상의 추가적인 헤테로 원자를 함유할 수 있다;

R¹⁹ 및 R²⁰ 은 하기의 기에서 독립적으로 선택되며:

H, 및

저급 알킬; 및

R²¹ 은 하기로부터 선택된다:

저급 알킬, 및

히드록시, 알콕시 또는 NR¹⁵R¹⁶ 로 치환된 C₂ _-6 알킬].

상기 화합물은 비(非)수용체 티로신 키나아제의 Src 패밀리(SFKs)를 억제한다. 상기 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염은 증식억제 활성을 지니며, 암의 치료 또는 억제, 특히 고형 종양의 치료 또는 억제에 있어서 유용하다. 또한, 상기 화합물은 유리한 생체이용률 프로필을 지니고 있다. 본 발명은 또한 상기 화합물을 함유한 약학적 조성물 및 암의 치료 또는 억제, 가장 구체적으로는 유방, 결장, 간 및 이자 종양의 치료 또는 억제 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 치료적 유효량의 하나 이상의 화학식 Ⅰ의 화합물 및 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 치료를 필요로 하는 인간 환자에게 유효량의 화학식 Ⅰ의 화합물 및/또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 투여함으로써, 고형 종양의 치료 또는 억제, 특히 유방, 폐, 결장 및 전립선 종양, 가장 구체적으로는 유방 또는 결장 종양의 치료 또는 억제 방법에 관한 것이다.

본 발명은 추가적으로 화학식 Ⅰ의 화합물을 제조함에 있어서 유용한 신규한 중간체 화합물에 관한 것이다.

본원에서 사용된 하기의 용어는 다음과 같은 의미를 지닌다.

"알케닐" 은 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 지닌 직쇄 또는 분지쇄 지방족 탄화수소, 예컨대 비닐, 2-부테닐, 및 3-메틸-2-부테닐을 나타낸다.

"알키닐" 은 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 지닌 직쇄 또는 분지쇄 지방족 탄화수소, 예컨대 에티닐, 및 2-부티닐을 나타낸다.

"알킬" 은 탄소수 1 내지 10, 바람직하게는 1 내지 6, 더욱 바람직하게는 1 내지 4 의 직쇄 또는 분지쇄 포화 지방족 탄화수소를 나타낸다. 탄소수 1 내지 6 의 알킬기를 또한 본원에서 "저급 알킬" 로 지칭한다. 전형적인 저급 알킬기에는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, t-부틸, 2-부틸, 펜틸 및 헥실이 포함된다. 본원에서 사용되는 샘플 명칭인 C₁ _-4 알킬은 탄소수 1 내지 4 의 알킬을 의미한다.

"알콕시" 는 산소(RO-)에 의해 분자의 나머지 부분에 결합되어 있는 알킬 라디칼, 예컨대 메톡시, 에톡시를 의미한다.

"아릴" 은 방향족 탄소환상(carbocyclic) 라디칼, 예컨대 6-10 원 방향족 또는 부분적 방향족 고리 시스템을 의미한다. 바람직한 아릴기에는, 페닐, 나프 틸, 톨릴 및 자일릴이 포함되나 이에 제한되지는 않는다.

"시클로알킬" 은 3 내지 8 개의 원자를 함유한 비방향족, 부분 또는 완전 포화된 시클릭 지방족 탄화수소 기를 의미한다. 시클로알킬기의 예로는 시클로프로필, 시클로펜틸 및 시클로헥실이 포함된다.

"유효량" 또는 "치료적 유효량" 이란 인간 종양 세포주를 포함한 종양 세포의 증식을 상당히 억제하는, 하나 이상의 화학식 Ⅰ의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 양을 의미한다.

"할로겐" 은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드, 바람직하게는 염소, 불소 또는 브롬을 의미한다.

"헤테로 원자" 는 N, O 및 S 에서 선택된 원자, 바람직하게는 N 을 의미한다. 헤테로 원자가 N 인 경우, 이는 -NH-또는 -N-저급 알킬-로서 존재할 수 있다. 헤테로 원자가 S 인 경우, 이는 S, SO 또는 SO₂ 로서 존재할 수 있다.

"헤테로아릴" 은 2 개 이하의 고리를 함유한 방향족 헤테로시클릭 고리 시스템을 의미한다. 바람직한 헤테로아릴 기에는, 티에닐, 푸릴, 인돌릴, 피롤릴, 피리디닐, 피라지닐, 옥사졸릴, 티악솔릴(thiaxolyl), 퀴놀리닐, 피리미디닐, 이미다졸 및 테트라졸릴이 포함되나 이에 제한되지는 않는다.

"헤테로사이클" 또는 "헤테로사이클릴" 은 질소, 산소 또는 황 또는 이의 조합에서 선택된 1 내지 3 개의 헤테로 원자를 함유하는 3-내지 10-원 포화 또는 부분적 불포화 비방향족 1가의 환형 라디칼을 의미한다. 바람직한 헤테로사이클 의 예로는 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘, 및 모르폴린이 있다.

"히드록시" 는 1가 OH 기를 나타내는 접두사이다.

"IC₅₀" 은 측정된 특이적 활성(specific measured activity)의 50% 를 억제하는 데 필요한 본 발명의 특정 화합물의 농도를 말한다. IC₅₀ 은, 특히 하기의 실시예 12 에 상술한 바와 같이 측정된다.

"약학적으로 허용되는 염" 은 화학식 Ⅰ의 화합물의 생물학적 효능 및 특성을 보유하며, 적절한 비독성의 유기 또는 무기 산 또는 유기 또는 무기 염기로부터 형성되는 종래의 산부가 염 또는 염기부가 염을 말한다. 샘플 산부가 염에는 무기산에서 유래된 것, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 술팜산(sulfamic acid), 인산 및 질산, 및 유기산에서 유래된 것, 예컨대 p-톨루엔술폰산, 살리실산, 메탄술폰산, 옥살산, 숙신산, 시트르산, 말산, 락트산, 푸마르산 등이 포함된다. 샘플 염기부가 염에는 암모늄, 포타슘, 소디움 및, 4차 암모늄 히드록시드, 예컨대 테트라메틸암모늄 히드록시드가 포함된다. 약학적 화합물(즉, 약물)을 염으로 화학적 개질시키는 기술은 화합물의 개선된 물리적, 화학적 안정성, 흡습성, 유동성 및 가용성을 얻기 위한 것으로서 약제학 분야의 화학자에게 공지되어 있다. 예를 들어, [H. Ansel 등, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (6th Ed. 1995) at pp. 196 및 1456-1457] 참조.

약학적으로 허용되는 담체, 부형제 등과 같은 "약학적으로 허용되는," 물질이란 상기 특정 화합물이 투여된 대상자에 대하여 약리학적으로 허용가능하며 실질 적으로 무독성임을 의미한다.

치환된 알킬에서와 같은 "치환된," 은 치환이 하나 이상의 위치에서 일어날 수 있으며, 다르게 명시하지 않는 한, 각 치환 부위의 치환기가 상술한 선택 사항으로부터 독립적으로 선택됨을 의미한다.

한 구현예에서, 본 발명은 하기 화학식 Ⅰ의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다:

[식에서,

R¹ 은 하기의 기에서 선택되고:

H,

C₁ _-10 알킬,

아릴, 시클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로사이클, NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, CN 및 NO₂ 에서 선택된 세 개 이하 의 기로 치환된 C₁ _-10 알킬 (여기서 아릴, 시클로알킬, 헤테로아릴, 및 헤테로사이클 기는 NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³ ,SO₂R¹³, CN 및 NO₂에서 선택된 세 개 이하의 기로 서로 독립적으로 치환될 수 있다),

아릴,

헤테로아릴,

헤테로사이클,

C₃ _-10 시클로알킬,

C₂ _-10 알케닐,

H,

NR¹⁰R¹¹,

OR¹²,

SR¹²,

C₁ _-10 알킬,

시클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로사이클, NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, S0₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, S0₂R¹³, CN 및 NO₂ 에서 선택된 세 개 이하의 기 로 치환된 C₁ _-10 알킬 (여기서, 시클로알킬, 헤테로아릴, 및 헤테로사이클 기는 저급 알킬, NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, S0₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, S0₂R¹³, CN 및 NO₂에서 선택된 세 개 이하의 기로 서로 독립적으로 치환될 수 있다),

C₃ _-10 시클로알킬,

C₂ _-10 알케닐,

C₂ _-10 알키닐, 및

(단, 하나 이상의 R², R³ 또는 R⁴ 는 H 가 아니다);

R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸ 은 하기의 기에서 독립적으로 선택되고:

H,

저급 알킬,

히드록시 또는 알콕시로 치환된 저급 알킬,

NR¹⁵R¹⁶,

OH,

OR¹⁷,

SR¹⁷,

할로겐,

COR¹⁷,

CO₂R¹⁷,

CONR¹⁷R¹⁸,

S0₂NR¹⁷R¹⁸,

SOR^l7,

SO₂R¹⁷, 및

CN;

R⁹ 는 하기의 기에서 선택되고:

H,

, 및

COR¹⁷;

R¹⁰ 및 R¹¹ 은 하기의 기에서 선택되고:

H,

COR¹³,

CO₂R¹³,

CONR¹³R¹⁴,

SO₂R¹³,

SO₂NR¹³R¹⁴,

저급 알킬,

시클로알킬,

헤테로사이클, 및

또는, 다르게는, NR¹⁰R¹¹ 은 3 내지 7 개 원자를 지닌 고리를 형성할 수 있고, 상기 고리는 하나 이상의 추가적 헤테로 원자를 포함할 수 있으며, 하나 이상의 저급 알킬, OR¹², COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, 및 SO₂NR¹³R¹⁴ 이루어진 기에 의해 치환될 수 있다;

R¹² 는 하기의 기에서 선택되고:

H,

저급 알킬,

COR¹³,

CONR¹³R¹⁴,

헤테로사이클, 및

R¹³ 및 R¹⁴ 는 하기의 기에서 독립적으로 선택되고:

H,

저급 알킬,

히드록시, 알콕시, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 로 치환된 C₂ _-6 알킬,

시클로알킬,

헤테로사이클, 및

또는, 다르게는, NR¹³R¹⁴ 는 3 내지 7 개의 원자를 지닌 고리를 형성할 수 있 고, 상기 고리는 하나 이상의 추가적인 헤테로 원자를 포함할 수 있으며, 하나 이상의 저급 알킬, OR¹⁷, COR¹⁷, CO₂R¹⁷, CONR¹⁷R¹⁸, SO₂R¹⁷, 및 S0₂NR¹⁷R¹⁸로 이루어진 기로 치환될 수 있다;

R¹⁵ 는 하기의 기에서 선택되고:

H,

저급 알킬,

COR¹⁷, 및

CO₂R¹⁷ ;및

R¹⁶, R¹⁷ 및 R¹⁸ 은 하기의 기에서 독립적으로 선택되고:

H, 및

저급 알킬,

R¹⁹ 및 R²⁰ 은 하기의 기에서 독립적으로 선택되며:

H, 및

저급 알킬; 및

R²¹ 은 하기로부터 선택된다:

저급 알킬, 및

히드록시, 알콕시 또는 NR¹⁵R¹⁶ 로 치환된 C₂ _-6 알킬].

본원에서 상기 화학식 Ⅰ에 의해 개시되어 다루어지는 화합물은 상호변이성(tautomerism) 또는 구조 이성질성을 나타낼 수 있다. 본 발명은 상기 화합물의 임의의 상호변이성 또는 구조 이성질성 형태, 또는 상기 형태의 혼합물 (예컨대, 라세미 혼합물) 을 포함하고자 하며, 상기 화학식 Ⅰ에 나타낸 임의의 한 가지 상호변이성 또는 구조 이성질성 형태에 한정되는 것은 아니다.

화학식 Ⅰ의 화합물이 구조 이성질성을 나타내는 경우, 바람직한 광학 이성질체는 하기 화학식 Ⅰa 로 나타난다:

바람직한 구현예에서, 본 발명은 화학식 Ⅰ(식에서, R¹ 은 아릴, 및 CN 또는 CONR¹³R¹⁴ 로 치환된 아릴에서 선택됨) 의 화합물에 관한 것이다. 특히, 아릴이 페닐인 화합물들이 바람직하다.

화학식 Ⅰ의 화합물의 다른 바람직한 구현예에서, R¹ 은 저급 알킬 및 OR¹² 또는 CONR¹³R¹⁴ 로 치환된 C₂ _-6 알킬에서 선택된다. 특히, R¹ 이 저급 알킬인 화합물들이 바람직하다.

화학식 Ⅰ의 화합물의 다른 바람직한 구현예에서, R² 및 R³ 은 서로 독립적으로 C₁ _-10알킬 및 OR¹² 또는 NR¹⁰R¹¹ 로 치환된 C₁ _-10 알킬에서 선택된다.

화학식 Ⅰ의 화합물의 다른 바람직한 구현예에서, R² 는 OR¹² 이다.

화학식 Ⅰ의 화합물의 더욱 바람직한 구현예에서, R³ 은 H 이다.

화학식 Ⅰ의 화합물의 다른 바람직한 구현예에서, R³ 및 R⁴ 는 H 이다.

화학식 Ⅰ의 화합물의 다른 바람직한 구현예에서, R⁴ 는 NR¹⁰R¹¹ 로 치환된 C_1-10 알킬이다.

화학식 Ⅰ의 화합물의 다른 바람직한 구현예에서, R⁵, R⁶ 및 R⁸ 은 H 이고, R⁷ 은 O-저급 알킬, 바람직하게는 O-CH₃ 이다.

화학식 Ⅰ의 화합물의 다른 바람직한 구현예에서, R⁵ 는 할로겐, 바람직하게는 Br 이다.

화학식 Ⅰ의 화합물의 다른 바람직한 구현예에서, R⁹ 는 H 이다.

하기 화합물들은 본 발명에 따른 바람직한 구현예이다:

(±)-3-[7-[3-(2-히드록시-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴 (실시예 4);

(±)-3-[7-[3-(2-디에틸아미노-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴 (실시예 5b);

(±)-3-[7-[3-(2-디메틸아미노-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴 (실시예 6);

(±)-3-(3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-{3-[2-(4-메틸-피페라진-1-일)-에틸]-페닐아미노}-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일)-벤조니트릴 (실시예 7);

(±)-3-[7-[3-(2-디에틸아미노-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤즈아미드 (실시예 8);

(±)-3-[7-[3-(2-디메틸아미노-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤즈아미드 (실시예 9);

(±)-3-(3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-{3-[2-(4-메틸-피페라진-1-일)-에틸]-페닐아미노}-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일)-벤즈아미드 (실시예 10);

3-(2-브로모-페닐)-7-[4-(2-디에틸아미노-에톡시)-페닐아미노]-1,4-디메틸- 3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (거울상 이성질체 1) 실시예 11f);

3-(2-브로모-페닐)-7-[4-(2-디에틸아미노-에톡시)-페닐아미노]-1,4-디메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (거울상 이성질체 2) 실시예 11g); 및

(±)-3-(2-브로모-페닐)-7-[4-(2-디에틸아미노-에톡시)-페닐아미노]-1,4-디메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온.

본 발명의 화합물은 Src 티로신 키나아제를 억제한다. 상기 화합물은 암의 치료 또는 억제, 특히 고형 종양, 그 중에서도 유방, 결장, 간 및 이자 종양의 치료 또는 억제에 유용하다. 상기 화합물은 세포막 투과성이 매우 좋아서 향상된 경구 생체이용률과 같은 유리한 생체이용률 프로필을 지닌다.

대안적 구현예에서, 본 발명은 하나 이상의 화학식 Ⅰ의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 에스테르를 함유하는 약학적 조성물에 관한 것이다.

상기 약학적 조성물들은 경구적으로, 예컨대 정제, 코팅 정제, 당제, 경성 또는 연성 젤라틴 캡슐, 용액, 에멀젼 또는 현탁액의 형태로 투여될 수 있다. 이들은 또한 직장으로, 예컨대 좌약의 형태로, 또는 비경구적으로, 예컨대 주사액의 형태로 투여될 수도 있다.

화학식 Ⅰ의 화합물, 및/또는 이의 염을 포함하는 본 발명의 약학적 조성물은, 당업계에 공지된 방법, 예컨대 통상적인 혼합, 캡슐화, 용해, 과립화, 유화, 포획(entrappping), 당제-제조, 또는 동결건조 공정에 의해 제조할 수 있다. 상기 약학적 제제를 치료적으로 불활성인, 무기 또는 유기 담체와 함께 조제할 수 있다. 락토오스, 옥수수 녹말 또는 이의 유도체, 활석, 스테르산 또는 이의 염을 정제, 코팅 정제, 당제 및 경성 젤라틴 캡슐용 담체로서 사용할 수 있다. 연성 젤라틴 캡슐용 적절한 담체에는 식물유, 왁스 및 유지(油脂)가 포함된다. 활성 물질의 성질에 따라, 연성 젤라틴 캡슐의 경우 보통 담체가 필요없다. 용액 및 시럽의 제조를 위한 적절한 담체는 물, 폴리올, 자당, 전화당 및 글루코스이다. 주사용으로 적절한 담체는 물, 알코올, 폴리올, 글리세린, 식물유, 인지질 및 계면활성제이다. 좌약용으로 적절한 담체는 천연 또는 경화 오일, 왁스, 유지 및 반액체 폴리올이다.

상기 약학적 제제는 또한 보존제, 용해보조제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 감미제, 착색제, 향미료, 삼투압을 변화시키기 위한 염, 완충액, 코팅제 또는 항산화제를 포함할 수 있다. 이는 또한 화학식 Ⅰ의 성분 이외의 부가적인 활성 성분을 포함하여 다른 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있다.

또한 본 발명은 치료가 필요한 인간 환자에게 유효량의 화학식 Ⅰ의 화합물 및/또는 이의 염을 투여함으로써, 암, 특히 유방, 결장, 간 및 이자의 암을 치료하기 위한 화학식 Ⅰ의 화합물의 용도에 관한 것이다.

상기하였듯이, 화학식 Ⅰ의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물은 세포 증식 장애, 특히 종양 질환의 치료 또는 억제에 있어 유용하다. 이러한 화합물 및 상기 화합물을 함유한 제형은 특히, 예컨대 유방, 결장, 간 및 이자 종양과 같은 고형 종양의 치료 또는 억제에 유용하다. 따라서, 본 발명은 또한 치료를 요하는 환자에게 유효량의 화학식 Ⅰ의 화합물 및/또는 이의 염을 투여함으로써 상기 고형 종양을 치료하는 방법에 관한 것이다.

본 발명에 따른 화합물의 치료적 유효량은 질환의 증상을 예방, 경감 또는 개선시키고, 치료 중인 대상자의 수명을 연장시키는 효과가 있는 화합물의 양을 의미한다. 치료적 유효량의 결정은 당업계에 공지되어 있다.

본 발명에 따른 화합물의 치료적 유효량 또는 투여량은 광범위한 제한내에서 다양할 수 있고, 당업계에 공지된 방법으로 측정할 수 있다. 상기 투여량은 투여되는 특정 화합물(들), 투여 경로, 치료 조건, 및 치료받는 환자를 포함하는 각 구체적 경우에서의 개별적 필요에 따라 조정된다. 일반적으로, 체중이 약 70 kg 인 성인에 대한 경구 또는 비경구 투여의 경우, 1 일 투여량은 약 10 mg 내지 약 10,000 mg, 바람직하게는 약 200 mg 내지 약 1,000 mg 이 적절하며, 필요에 따라 그 상한은 초과될 수도 있다. 1 일 용량을 단일 투여 또는 분할 투여로서 투여할 수 있으며, 비경구 투여의 경우, 연속적인 주입으로 투여할 수 있다.

다른 구현예에서, 본 발명은 하기의 단계를 포함하는 청구항 제 1 항의 화학식 Ⅰ의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다:

*a) 하기 화학식의 화합물을:

[식에서, X 는 Cl 또는 SO₂CH₃ 이고, R¹, R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸ 은 청구항 제 1 항에 정의된 바와 같다]

하기 화학식의 아닐린 유도체와 반응시켜서:

[식에서, R², R³ 및 R⁴ 는 청구항 제 1 항에 정의된 바와 같다]

하기 화학식의 화합물을 수득하는 단계:

[식에서, R⁹ 는 H 이다], 및 필요에 따라,

b) 화학식 Ib 의 화합물을 산 할로겐화물 또는 무수물과 반응시켜서 화학식 Ⅰ의 화합물 (식에서, R⁹ 는

또는 COR¹⁷ 이고, R¹⁷, R¹⁹, R²⁰ 및 R²¹ 은 청구항 제 1 항에 정의된 바와 같다) 을 수득하는 단계,

및/또는 c) 필요에 따라, 화학식 Ⅰ의 화합물을 약학적으로 허용되는 염으로 전환시키는 단계.

본 발명은 또한 화학식 Ⅰ의 화합물의 합성에 유용한 하기의 신규한 중간체에 관한 것이다:

(±)-아세트산 2-{3-[8-(3-시아노-페닐)-6-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-7-옥소-5,6,7,8-테트라히드로-피리미도 [4,5-d]피리미딘-2-일아미노]-페닐}-에틸 에스테르 (실시예 3c); 및,

(±)-메탄술폰산(2-{3-[8-(3-시아노-페닐)-6-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-7-옥소-5,6, 7,8-테트라히드로-피리미도 [4,5-d] 피리미딘-2-일아미노]-페닐}-에틸)-에스테르 (실시예 5a).

본 발명의 화합물을 임의의 종래 방법으로 제조할 수 있다. 이들 화합물을 합성하는 적절한 방법은 실시예에 제공되어 있다. 일반적으로, 화학식 Ⅰ의 화합물을 하기의 합성 경로에 따라 제조할 수 있다.

본원 화합물은 비(非)수용체 티로신 키나아제의 Src 패밀리(SFKs)를 억제한다. 상기 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염은 증식억제 활성을 지니며, 암의 치료 또는 억제, 특히 고형 종양의 치료 또는 억제에 있어서 유용하다.

하기의 실시예는 본 발명의 화합물 및 제형의 바람직한 합성 방법을 예증한다.

실시예 1

실시예 1a

(±)-1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에탄올

문헌 [Ple, N.; Turck, A.; Martin, P.; Barbey, S.; Queguiner, G. Tet. Lett, 1993 (34), 1605-1608] 의 방법에 따라 2,4-디클로로피리미딘 (Aldrich) 으로부터 (±)-1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에탄올을 합성하였다.

실시예 1b

(±)-2,4-디클로로-5-(1-클로로에틸)-피리미딘

옥시클로라이드인 (5.0 mL, 53.11 mmol) (Aldrich) 중의 (±)-1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에탄올 (1.27 g, 6.60 mmol) 용액에 (상기 실시예 1a), 디이소프로필에틸-아민 (2.60 mL, 14.78 mmol) (Aldrich) 을 0 ℃에서 첨가하였다. 상기 반응물을 0 ℃에서 5 분간, 상온에서 15 분간, 이어서 115 ℃에서 3 시간 교반하였다. 반응물을 실온까지 냉각시키고, 톨루엔(10 mL)으로 희석한 후, 상기 반응물을 얼음(15 g)에 부었다. 10 분간 교반한 후, 층을 분리하고, 수성 추출물을 톨루엔으로 다시 세척하였다. 조합된 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (Biotage, 40M, 10:90 내지 15:85 에틸 아세테이트-헥산 기울기) 로 정제하여 (±)-2,4-디클로로-5-(1-클로로에틸)-피리미딘을 오일로서 수득하였다 (수율 1.233 g ; 88.3%).

실시예 1c

(±)-2,4-디클로로-5-(1-브로모에틸)-피리미딘

디브로모메탄 (0.35 mL) 중의 (±)-1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에탄올 (0.50 g; 2.60 mmol) (상기 실시예 1a) 및 디이소프로필에틸아민 (1.10 mL; 6.25 mmol) (Aldrich) 용액을 15 ℃로 냉각하였다. 옥시브로마이드인 (0.73 g; 2.83 mmol) 일부를 첨가하였다. 냉각조를 제거하고 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 20 분후, 상기 반응물을 에틸 아세테이트 및 물로 희석하였다. 유기상을 염수로 세척한 후, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하여 조 (±)-2,4-디클로로-5-(1-브로모에틸)-피리미딘 (0.61 g; 91.4%) 을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (Biotage, 40M, 10:90 에틸 아세테이트-헥산) 로 정제하여 순수한 (±)-2,4-디클로로-5-(1-브로모에틸)-피리미딘을 오일로서 (냉장실에 보관하면 고형화됨) 수득하였다.

다르게는, (±)-2,4-디클로로-5-(1-브로모에틸)-피리미딘을 다음과 같이 제조하였다.

에틸 2-포르밀부티레이트

테트라히드로푸란 (370 mL) 중의 디이소프로필아민 (120.6 mL, 0.86 mol) (Aldrich) 을 -30℃로 냉각하였다. n-부틸리튬 (헥산내에 2.5 M, 344.2 mL, 0.86 mol) (Aldrich) 을 적가하면서, 상기 반응 혼합물의 온도가 -30 내지 0 ℃ 로 유지되도록 하였다. 이어서 반응 혼합물을 드라이아이스-아세톤 조에서 -75 ℃로 냉각시켰다. 테트라히드로푸란 (170 mL) 중의 에틸 부티레이트 (100 g, 0.86 mol) (Aldrich) 용액을 28 분간에 걸쳐 적가하고, 반응 온도를 -75 내지 -70 ℃로 유지하였다. 상기 혼합물을 같은 온도에서 추가적으로 30 분간 교반하였다. 그 후, 에틸 포르메이트 (125 mL, 1.55 mol) (Aldrich) 를 상기 혼합물에 25 분간에 걸쳐 적가하고 온도를 -75 내지 -70 ℃로 유지하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 가온하고, 실온에서 3 시간 교반하였다. 냉각수 조에서 외부 냉각으로 반응 온도를 30 ℃ 미만으로 유지하면서, 아세트산 (98.55 mL, 1.72 mol), 이어서 물 (430 mL) 및 디클로로메탄 (200 mL) 을 첨가하였다. 층을 분리한 후, 유기층을 물 (300 mL) 로 세척하였다. 조합된 수층을 디클로로메탄 (200 mL) 으로 추출하였다. 조합된 유기층을 중탄산나트륨 수용액 (200 mL) 으로 세척하였다. 염기성 수용액을 디클로로메탄 (100 mL) 으로 추출하였다. 그 후 모든 유기층을 조합하여, 하룻밤 동안 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 증류하여 용매를 제거하고 약 180 mL 를 남겼다. (생성물 일부는 테트라히드로푸란과 함께 증류되었다.) 잔류물을 65-81 ℃에서 증류하였다(23 mm Hg). 70-81 ℃에서 분별 증류하여 (23 mm Hg) 에틸 2-포르밀부티레이트를 수득하였다. (수율 68.35 g, 55.1%).

5-에틸 우라실

빙수 조에서 냉각하여 반응 온도를 8 내지 15 ℃로 유지하면서, 요소(urea) (19.39 g, 0.32 mol) (J. T. Baker) 를 20 분에 걸쳐 발연 황산 (26-29.5% 유리 S0₃, 135 mL, 2.65 mol) (Aldrich) 에 첨가하였다. 30 분간 추가로 교반한 후, 에틸 2-포르밀부티레이트 (46.55 g, 0.32 mol) (상기 실시예 1c 의 것) 를 동일 온도로 반응을 유지하면서 18 분간에 걸쳐 첨가하였다. 다시 30 분간 교반한 후, 요소의 두번째 분획을 (15.07 g, 0.25 mol) 동일 온도에서 10 분에 걸쳐 가하였다. 이어서 상기 반응 혼합물을 실온에서 65 시간 교반하고, 90-100 ℃에서 2 시간 교반하였다 (기체 회전이 관찰되었고, 반응 온도가 110 ℃까지 오르는 발열 반응이 었다). 상기 혼합물을 빙수 조를 이용하여 30 ℃로 냉각하였다. 얼음(270 g)을 천천히 가하여 반응을 35 ℃ 미만으로 유지하였다. 그 후 혼합물을 5 ℃로 냉각하고 20 분간 교반하였다. 형성된 고형물을 여과로 수집하고, 냉수, 헥산 및 디에틸 에테르로 세척한 후, 흡입으로 건조하여 5-에틸 우라실을 수득하였다. (수율 38.85 g, 85.9%).

2,4-디클로로-5-에틸피리미딘

냉수 조에서 외부 냉각하면서, N,N-디이소프로필에틸아민 (195 mL, 0.86 mol) (Aldrich) 을 5-에틸 우라실 (52.3 g, 0.37 mol) (상기 실시예 1c 의 것) 및 옥시클로라이드인 (150 mL, 1.61 mol) (Aldrich) 에 천천히 첨가하였다. 상기 혼합물을 3.8 시간 동안 환류 가열하고, 실온으로 냉각하였다. 혼합물을 그 후 얼음(300 g)에 부었다. 에틸 아세테이트 (100 mL) 를 첨가하고, 혼합물을 빙수 조에서 냉각하면서 30 분간 20 ℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 Celite®로 여과하고 여과액을 에틸 아세테이트-헥산 (1:1, 3 X 300 mL) 으로 추출하였다. 조합 유기층을 물(250 mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하여 건조시켰다. 상기 잔류물을 에틸 아세테이트-헥산 (1:1)에 용해시키고, TLC 등급 실리카 겔로 여과하고 동일 용매로 용출하였다. 상기 여과액을 농축하여 건조시켜서 2,4-디클로로-5-에틸-피리미딘을 수득하였다. (수율 56.3 g, 85.2%).

(±)-2,4-디클로로-5-(1-브로모에틸)-피리미딘

N-브로모숙신이미드 (64.2 g, 0.35 mol) (Aldrich) 및 2,2'-아조-비스-이소부티로니트릴 (AIBN, 1.78 g) (Aldrich) 을 카본 테트라클로라이드 (400 mL) 중의 2,4-디클로로-5-에틸피리미딘 (56.3 g, 0.32 mol) (상기 실시예 1c 의 것) 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 1.5 시간 동안 환류 가열하고, 실온으로 냉각하였다. 반응 혼합물을 TLC 등급 등급 실리카 겔로 여과하고, 에틸 아세테이트-헥산 (1:8) 으로 용출하였다. 상기 여과액을 농축하여 건조시켜서 (±)-2,4-디클로로-5-(1-브로모에틸)-피리미딘을 수득하였다. (수율 81.3 g, 100%).

실시예 1d

(±)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-(4-메톡시-페닐)-아민

(±)-2,4-디클로로-5-(1-브로모에틸)-피리미딘 (1.97 g; 7.70 mmol) (상기 실시예 1c 의 것) 을 아세토니트릴에 (21 mL) 용해시켰다. p-아니시딘 (0.95 g; 7.70 mmol) (Aldrich), 탄산칼륨 (1.17 g; 8.48 mmol) 및 요오드화칼륨 (0.32 g; 1.93 mmol) 을 첨가하고 상기 혼합물을 실온에서 교반하였다. 16 시간 후, 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물로 분할하였다. 유기상을 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (Biotage 40M, 20:80 내지 25:75 에틸 아세테이트-헥산 기울기) 로 정제하여 (±)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-(4-메톡시-페닐)-아민을 수득하였다. (수율 1.82 g; 76.3%).

실시예 2

(±)-3-[7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도 [4,5-d] 피리미딘-1-일]-벤조니트릴

톨루엔(1 mL) 중의 (±)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-(4-메톡시-페닐)-아민 (0.10 g; 0.34 mmol) (상기 실시예 1d 의 것) 용액에 3-시아노페닐 이소시아네이트 (66.6 mg; 0.46 mmol) (Aldrich) 를 첨가하였다. 상기 혼합물을 110 ℃ 오일 조에서 2 시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 상기 반응물을 감압하에 농축하였다. 잔류물을 헥산과 함께 분쇄하고 간단히 건조하였다. 고형 잔류물 (중간생성물 요소) 을 새로 증류시킨 테트라히드로푸란 (1.5 mL) 에 용해시키고, 얼음-염수 조에서 냉각시킨 다음, 포타슘 tert-부톡시드 (테트라히드로푸란 내에서 1.0 M; 370 ㎕; 0.37 mmol) (Aldrich) 로 처리하였다. 냉각 상태에서 15 분 후, 상기 반응을 TLC 분석으로 완료하고, 실리카 겔 패드 (0.5 g) 로 여과하고 에틸 아세테이트로 세척하였다. 상기 여과액을 농축하고 그 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (Biotage, 12M, 40:60 에틸 아세테이트-헥산) 로 정제하여 (±)-3-[7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도 [4,5-d] 피리미딘-1-일]-벤조니트릴을 고체로서 수득하였다. (수율 0.13 g; 85.6%).

실시예 3a

아세트산 2-(3-니트로-페닐)-에틸 에스테르

3-니트로페네틸 알코올 (55 g, 0.33 mol) (Aldrich) 을 피리딘 (1.2 L) (Aldrich) 에 용해시켰다. 아세트산 무수물 (215 mL, 2.14 mol) (Aldrich) 을 천천히 첨가하고, 상기 혼합물을 실온에서 하룻밤 동안 교반하였다 (TLC: 헥산 내 30% 에틸 아세테이트는 완전히 전환되었음을 알려주었음). 얼음 및 물(200 mL)을 상기 반응 혼합물에 부었다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석한 후, 수성 1N 염산 (pH= ~1), 물, 및 염수로 차례로 세척하였다. 상기 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 감압하에서 농축하여 아세트산 2-(3-니트로- 페닐)-에틸 에스테르를 황색 오일로서 수득하였다. (수율 58.86 g, 0.28 mol, 85%).

실시예 3b

아세트산 2-(3-아미노-페닐)-에틸 에스테르

에틸 아세테이트 (150 mL) 중의 아세트산2-(3-니트로-페닐)-에틸 에스테르 (15 g, 71.7 mmol) (상기 실시예 3a 의 것) 용액에, 탄소상의 10% 팔라듐 (1.5 g) (Aldrich) 을 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 Parr 장치를 이용하여 50 psi 에서 1 시간 동안 수소화시켰다. 반응 혼합물을 Celite® 층(bed)상에서 여과하고 에틸 아세테이트로 세척하였다. 상기 여과액을 감압하에 농축하여 아세트산 2-(3-아미노-페닐)-에틸 에스테르를 수득하였다. (수율 12.81 g, 71.48 mmol, 99%).

실시예 3c

(±)-아세트산 2-{3-[8-(3-시아노-페닐)-6-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-7-옥소-5,6,7,8-테트라히드로-피리미도 [4,5-d]피리미딘-2-일아미노]-페닐}-에틸 에스테르

(±)-3-[7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도 [4,5-d] 피리미딘-1-일]-벤조니트릴 (1.00 g; 2.42 mmol) (상기 실시예 2 의 것) 및 아세트산 2-(3-아미노-페닐)-에틸 에스테르 (2.03 g; 11.3 mmol) (상기 실시예 3b 의 것) 의 혼합물을 110 ℃ 오일 조에서 1.5 시간 가열하였다. 냉각하면서, 상기 혼합물을 소량의 에틸 아세테이트를 함유한 헥산과 함께 분쇄하였다. 상청액을 버리고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (Biotage 40M; 50:50 내지 70:30 에틸 아세테이트-헥산 기울기) 에 의해 두 차례 정제하였다. 상기 정제된 물질을 에틸 아세테이트-헥산으로부터 결정화하여 (±)-아세트산 2-{3-[8-(3-시아노-페닐)-6-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-7-옥소-5,6,7,8-테트라히드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-일아미노]-페닐}-에틸 에스테르를 흰색 고체로서 수득하였다. (1.03 g; 77.5%). 녹는점:170-172 ℃.

실시예 4

(±)-3-[7-[3-(2-히드록시-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도 [4, 5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴

아세트산(±)-2-{3-[8-(3-시아노-페닐)-6-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-7-옥소-5,6,7,8-테트라히드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-일아미노]-페닐}-에틸 에스테르(10 g; 1.81 mmol) (상기 실시예 3c 의 것) 를 메탄올 (17 mL) 및 물 (7 mL) 의 혼합물에 용해시키고, 실온에서 19 시간 동안 탄산칼륨 (1.00 g; 7.26 mmol) 으로 처리하였다. 상기 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물-염수 혼합물로 분할하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 여과 및 농축하였다. 상기 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피 (Biotage 40M; 에틸 아세테이트) 로 정제하여 (±)-3-[7-[3-(2-히드록시-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴을 수득하였다. (수율 0.67 g; 72.9%). 소량의 추가적 물질이 농축 과정에서 용매 트랩(trap)에 부딪혀 들어왔다. 상기 물질을 회수하고 에틸 아세테이트로부터 결정화하였다. (수율 0.09 g; 9.9%). 녹는점: 195-200 ℃. HR-MS(ES⁺) m/z C₂₉H₂₆N₆0₃([M+H]⁺)에 대한 계산치: 507.2139; 실측치: 507.2145. HR-MS(ES⁺) m/z C₂₉H₂₆N₆0₃([M+Na]⁺)에 대한 계산치: 529.9158; 실측치: 529.1963.

실시예 5a

(±)-메탄술폰산(2-{3-[8-(3-시아노-페닐)-6-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-7-옥소-5,6,7,8-테트라히드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-일아미노]-페닐}-에틸)-에스테르

(±)-3-[7-[3-(2-히드록시-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴 (0.67 mg; 1.27 mmol) (상기 실시예 4 의 것) 을 디클로로메탄 (13 mL) 에 현탁하였다. 상기 혼합물을 트리에틸아민 (0.23 mL; 1.65 mmol) 및 메탄-술포닐 클로라이드 (0.13 mL; 1.68 mmol) (Aldrich) 로 처리하였다. 메탄술포닐 클로라이드로서 용액에 들어간 고형분을 첨가하였다. 45분 후, 박층 크로마토그래피에 의해 반응이 완료된 것으로 나타났다. 상기 반응물을 추가적인 디클로로메탄으로 희석하고 물 및 염수로 세척하였다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축 및 고 진공하에서 건조시켜서, 조 (±)-메탄술폰산(2-{3-[8-(3-시아노-페닐)-6-(4-메톡시 -페닐)-5-메틸-7-옥소-5,6,7,8-테트라히드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-일아미노]-페닐}-에틸)-에스테르를 발포체로서 수득하였다. 상기 물질은 더 이상의 정제없이 다음 단계에서 사용되었다. (수율: 0.76 g, 95.4%).

실시예 5b

(±)-3-[7-[3-(2-디에틸아미노-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도 [4,5-d] 피리미딘-1-일]-벤조니트릴

(±)-메탄술폰산 (2-{3-[8-(3-시아노-페닐)-6-(4-메톡시-페닐) -5-메틸-7-옥소-5,6,7,8-테트라히드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-일아미노]-페닐}-에틸)-에스테르 (1.18 g; 2.02 mmol) (상기 실시예 5a 의 것) 및 디에틸아민 (1.5 mL; 14.5 mmol) (Aldrich) 의 혼합물을 압력용기(pressure bottle)에 넣고 100 ℃ 에서 100 분간 가열하였다. 냉각하면서, 상기 혼합물을 농축하고, 잔류물을 에틸 아세테이트 및 물로 분할하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고 농축하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (Biotage 40S; 100:0 내지 50:50 에틸 아세테이트-메탄올) 로 정제한 후, 에틸 아세테이트 및 헥산으로부터 결정화하여 (±)-3-[7-[3-(2-디에틸아미노-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸- 2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴을 수득하였다. (수율 0.66 g; 57.9%).

녹는점:128-145 ℃. HR-MS(ES⁺) m/z C₃₃H₃₅N₇0₂ ([M+H]⁺) 에 대한 실측치: 562.2925; 실측치: 562.2925.

실시예 6

(±)-3-[7-[3-(2-디메틸아미노-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도 [4, 5-d] 피리미딘-1-일]-벤조니트릴

(±)-메탄술폰산(2-{3-[8-(3-시아노-페닐)-6-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-7-옥소-5,6,7,8-테트라히드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-일아미노]-페닐}-에틸)-에스테르 (0.19 g; 0.32 mmol) (상기 실시예 5a 의 것) 및 디메틸아민 (테트라히드로푸란 내에 2.0 M; 2.00 mL; 4.00 mmol) (Aldrich) 의 혼합물을 봄베 용기(bomb bottle)에 넣고 100 ℃ 에서 하룻밤 동안 가열하였다. 냉각하면서, 상기 혼합물을 농축하고 잔류물을 에틸 아세테이트 및 물로 분할하였다. 유기상을 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조하고 농축하였다. 이 시점에서, 조 물질을 앞선 작업에서 수득한 물질과 혼합하고, 플래쉬 크로마토그래피 (Biotage, 12S; 100:0 내지 50:50 에틸 아세테이트-메탄올)로 정제하였다. 이어서 상기 물질을 에틸 아세테이트 및 에테르로부터 결정화하여 (±)-3-[7-[3-(2-디메틸아미노-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴을 고체로서 수득하였다. (수율 0.12 g; 26.8%).

녹는점:120-135 ℃. HR-MS(ES⁺) m/z C₃₁H₃₁N₇0₂ ([M+H]⁺)에 대한 계산치: 534.2612; 실측치: 534.2619.

실시예 7

(±)-3-(3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-{3-[2-(4-메틸-피페라진-1-일)-에틸]-페닐아미노}-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일)-벤조니트릴

(±)-메탄술폰산 (2-{3-[8-(3-시아노-페닐)-6-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-7-옥소-5,6,7,8-테트라히드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-일아미노]-페닐}-에틸)-에스테르 (0.10 g; 0.16 mmol) (상기 실시예 5a 의 것) 및 1-메틸피페라진 (0.25 mL; 2.23 mmol) (Aldrich) 의 혼합물을 110 ℃에서 1 시간 가열하였다. 냉각하면 서, 상기 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고 물 및 염수로 세척하였다. 유기상을 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하였다. 상기 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피 (Biotage 12S; 100:0 내지 40:60 에틸 아세테이트-메탄올 기울기) 로 정제한 후, 에틸 아세테이트-헥산으로부터 결정화하여 (±)-3-(3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-{3-[2-(4-메틸-피페라진-1-일)-에틸]-페닐아미노}-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4, 5-d]피리미딘-1-일)-벤조니트릴을 수득하였다. (수율 60.6 mg ; 64.1%).

녹는점: 134-155 ℃. HR-MS(ES⁺) m/z C₃₄H₃₆N₈0₂([M+H]+)에 대한 계산치: 589.3034; 실측치: 589.3041.

실시예 8

(±)-3-[7-[3-(2-디에틸아미노-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4 메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도 [4,5-d]피리미딘-1-일]-벤즈아미드

(±)-3-[7-[3-(2-디에틸아미노-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸 -2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴 (0.35 g; 0.60 mmol) (상기 실시예 5b 의 것) 을 디메틸 술폭시드 (3.5 mL) 에 용해시키고, 생성된 용액을 빙수 조에서 냉각시켰다. 수성 수산화나트륨 (1 M; 1.15 mL; 1.15 mmol) 을 첨가하여, 벤조니트릴을 침전시켰다. 그 후, 수성 과산화수소 (30%; 195 ㎕; 1.91 mmol)를 첨가하였다. 상기 벤조니트릴을 천천히 용액으로 되돌렸다. 3 시간 후, 물을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 생성물을 검(gum)으로 초기에 분리한 다음 고형화하였다. 상기 고형물을 수집하고, 물로 세척한 후 건조하였다. 디클로로메탄-에테르로부터 재결정화하여, (±)-3-[7-[3-(2-디에틸아미노-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤즈아미드를 수득하였다. (수율 0.30 g; 84.8%). 녹는점:170-175 ℃. HR-MS(ES+) m/z C₃₃H₃₇N₇0₃([M+H]⁺) 에 대한 계산치: 580.3031; 실측치: 580.3032. IC₅₀ 0.0045 μM.

실시예 9

(±)-3-[7-[3-(2-디메틸아미노-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도 [4,5-d] 피리미딘-1-일]-벤즈아미드

(±)-3-[7-[3-(2-디메틸아미노-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴 (92.7 mg; 0.17 mmol) (상기 실시예 6 의 것) 을 디메틸 술폭시드 (1.0 mL) 에 용해시키고, 생성된 용액을 빙수 조에서 냉각하였다. 수성 수산화나트륨 (1 M; 300 ㎕; 0.30 mmol) 을 첨가하여, 벤조니트릴을 침전시켰다. 이어서 수성 과산화수소 (30%; 53 ㎕; 0.52 mmol) 를 첨가하였다. 상기 벤조니트릴이 다시 용액으로 되돌아간 다음 생성물이 용액으로부터 침전하였다. 4 시간 후, 반응물을 물로 희석하였다. 고형물을 수집하고, 물로 세척한 후 건조하였다. 디클로로메탄-에테르로부터 재결정화하여, (±)-3-[7-[3-(2-디메틸아미노-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤즈아미드를 수득하였다. (수율 72.9 mg; 76.1%).

녹는점:215-230 ℃. HR-MS(ES⁺)m/z C₃₁H₃₃N₇0₃([M+H]⁺) 에 대한 측정치: 552.2718; 실측치: 552.2722.

실시예 10

(±)-3-(3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-{3-[2-(4-메틸-피페라진-1-일)-에틸]-페닐아미노}-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d] 피리미딘-1-일)-벤즈아미드

(±)-3-(3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-{3-[2-(4-메틸-피페라진-1-일)-에틸]-페닐아미노}-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일)-벤조니트릴 (0.25 g; 0.41 mmol) (상기 실시예 7 의 것) 을 디메틸 술폭시드 (2.5 mL) 에 용해시키고, 생성된 용액을 빙수 조에서 냉각하였다. 수성 수산화나트륨(1 M; 750㎕; 0.75 mmol) 을 첨가하여, 벤조니트릴을 침전시켰다. 냉각조를 제거하였다. 상기 고형물이 용액으로 되돌아가고, 새로운 고형물이 침전하였다. 3 시간 후, 반응 혼합물을 물로 희석하였다. 고형물을 수집하고, 물로 세척한 후, 가정용 진공기로 공기 중 건조시켰다. 플래쉬 크로마토그래피 (Biotage 12S; 90:10 내지 60:40 클로로포름-메탄올 기울기) 로 정제한 후, 메탄올-에틸 아세테이트로부터 결정화하여, (±)-3-(3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-{3-[2-(4-메틸-피페라진-1-일)-에틸]-페닐아미노}-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일)-벤즈아미드를 흰색 고체로서 수득하였다. (수율 35.7 mg; 14.3%). 에테르 를 모 용액(mother liquor)에 첨가함으로써 두 번째 수확물을 수집하였다. (수율 87.8 mg; 35.1%). 녹는점: 243-251 ℃. HR-MS(ES⁺) m/z C₃₄H₃₈N₈0₃([M+H]⁺) 에 대한 계산치: 607.3140; 실측치: 607.3144.

실시예 11

3-(2-브로모-페닐)-7-[4-(2-디에틸아미노-에톡시)-페닐아미노]-1,4-디메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도 [4,5-d]피리미딘-2-온

실시예 11a

1-(4-메틸아미노-2-메틸술파닐-피리미딘-5-일)-에탄올

1.5g 의 4-메틸아미노-2-메틸술파닐-피리미딘-5-카르발데히드 (WO 00/24744 에 따라 제조됨) 를 30 mL THF 에 용해시켰다. 에테르 중의 14mL 의 1.4 M 메틸 마그네슘 브로마이드 용액을 5 ℃ 미만에서 적가하였다. 0 ℃에서 1 시간 동안 교반한 후, 다시 14 mL Grignard 용액을 30 분 이내에 첨가하였다. 0 ℃ 에서 30 분간 교반을 계속하고, 마지막으로 실온에서 25 시간 교반하였다. 상기 혼합물을 염화암모늄 포화 용액으로 켄칭하고(quenching) 에틸 아세테이트로 추출하였다.

수율: 조 표제 화합물 1.57 g

실시예 11b

[5-(1-클로로-에틸)-2-메틸술파닐-피리미딘-4-일]-메틸-아민

상기 실시예 11a 의 생성물 0.25 g 을 10 mL 클로로포름에 용해시키고, 티오닐 클로라이드 0.30 g 을 적가하였다. 상기 혼합물을 2 시간 환류시키고, 증발시켜서 0.31 g 의 표제 화합물을 히드로클로라이드 염으로서 수득하였다.

실시예 11c

5-[1-(2-브로모-페닐아미노)-에틸]-2-메틸술파닐-피리미딘-4-일-메틸-아민

상기 실시예 11b 의 생성물 0.25 g, 및 10 mL 아세토니트릴 중의 요오드화나트륨 34 mg 을 실온에서 15 분간 교반하였다. 생성된 현탁액을, 5 mL 아세토니트릴 중의 0.21 g 2-브로모아닐린 (Aldrich) 및 0.33 g N-에틸-디-이소프로필 아민 (Aldrich) 의 혼합물에 실온에서 적가하였다. 16 시간 계속해서 교반하고, 혼합물을 20 mL 물로 희석한 후 디클로로메탄으로 추출하였다. 실리카 상의 크로마토그래피로 (용출액 CHCl₃) 158 mg 의 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 11d

3-(2-브로모-페닐)-1,4-디메틸-7-메틸술파닐-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (거울상 이성질체 1 + 2)

10 mL 건조 DMF 중의 상기 실시예 11c 의 생성물 1.1g 에, 0.236 g 의 소디움 하이드라이드 (95%) 를 냉각하면서 첨가하였다. 실온에서 20 분간 교반한 후, 상기 혼합물을 5 ℃로 냉각하고, 총 1.01 g 의 카르보닐디이미다졸 (Aldrich) 을 소부분으로 나누어 처리하였다. 5 ℃에서 30 분간 및 실온에서 하룻밤 동안 교반을 계속하였다. 그 후, 과량의 소디움 하이드라이드를 냉각하에서 소량의 물을 첨가함으로써 파괴하였다. 상기 혼합물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 추출한 다음, 조합된 유기상을 증발시켰다. 조 생성물을 키랄 상(phase) Chiracel OD-CSP (Daicel 에서 시판 중인 20 ㎛ 물질, 용출액 헵탄/이소-프로판올 1:1) 에서 크로마토그래피하여, 담황색 분말로서 표제 생성물의 분리된 거울상 이성질체를 각각 470 mg 수득하였다. 처음 용출된 거울상 이성질체를 "거울상 이성질체 1" 로 부르고, 마찬가지로 하기의 제조 실시예에서 그로부터 유도된 키랄 화합물의 해당 거울상 이성질체를 "거울상 이성질체 1" 로 부른다. 두 번째로 용출된 거울상 이성질체를 "거울상 이성질체 2" 로 부르고, 마찬가지로 하기 제조 실시예에서 그로부터 유도된 키랄 화합물의 해당 거울상 이성질체를 "거울상 이성질체 2" 로 부른다.

실시예 11e

3-(2-브로모-페닐)-7-메탄술포닐-1,4-디메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d] 피리미딘-2-온; 거울상 이성질체 1

0.628 g 메타-클로로퍼벤조산 (77%) (Aldrich) 을 50 mL CH₂Cl₂ 에 용해시키고, 이 용액을 황산나트륨 상에서 여과하여 건조하였다. 건조된 MCPBA 용액을, 20 mL CH₂Cl₂ 중의 상기 실시예 11d 의 0.437 g 의 거울상 이성질체 1 용액에 실온 에서 적가하고, 하룻밤 동안 계속 교반하였다. 과량의 과산(peracid)을 묽은 소디움 비설파이트(sodium bisulfite) 용액으로 세척함으로써 제거하였다. 유기상을 수성 중탄산나트륨으로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 에틸 아세테이트/헵탄을 이용한 실리카 상의 크로마토그래피로 430 mg 의 표제 생성물을 수득하였다.

실시예 11f

3-(2-브로모-페닐)-7-[4-(2-디에틸아미노-에톡시)-페닐아미노]-1,4-디메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (거울상 이성질체 1)

1 mL 건조 NMP 중의 152 mg 의 4-(2-디에틸아미노-에톡시) 아닐린 ([Rohamann, Friedrich, Chem. Ber. (1939) 72: p.1333] 에 따라 제조됨) 을 에테르 내 HCl 2M 용액 0.43 mL 으로 처리하고, 실온에서 30 분간 교반하였다. 상기 실시예 11e 의 생성물 100 mg 을 첨가하고, 상기 혼합물을 16 시간 동안 120-130 ℃로 가열하였다. 상기 혼합물을 10 mL 물로 희석하고, NaOH 를 첨가함으로써 알칼리성 pH 로 조절하였다. CH₂Cl₂ 로 추출하고, 유기상을 농축시켜서 조 오일을 수득하였는 바, 여기서 NMP 및 과량의 아닐린을 Kugelrohr 오븐 내 고 진공하에서 증류 제거하였다. 잔류물을 0.1 mL 메탄올에 용해시키고, 0.5 mL 물로 천천히 희석하였다. 미세한 침전물이 형성되었고, 이를 원심 분리에 의해 단리하고, 마지막으로 분취용 HPLC-MS 로 추가 정제하였다.

수율: 표제 생성물 20 mg.

실시예 11g

*3-(2-브로모-페닐)-7-[4-(2-디에틸아미노-에톡시)-페닐아미노]-1,4-디메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (거울상 이성질체 2)

표제 생성물을 상기 실시예 11e 및 실시예 11f 의 화합물과 유사하게 수득하였으나, 단, 상기 실시예 11d 의 거울상 이성질체 2 생성물로부터 출발하였다.

증식억제 활성

본 발명의 화합물의 증식억제 활성은 하기 실시예 12 에 제시되어 있다. 이들 활성은, 본 발명의 화합물이 암, 특히 고형 종양, 예컨대 유방, 결장, 간 및 이자 종양, 더욱 구체적으로는 유방 및 결장 종양을 치료하는 데 유용하다는 사실을 나타낸다.

실시예 12

키나아제 검정

src-패밀리 티로신 키나아제 억제제로서의 본 발명에 따른 화합물의 활성을 다음과 같은 검정을 이용하여 나타내었다.

SRC-억제제-검정 파라미터:

반응 혼합물:

ATP 5 μM

펩티드 (Ro + Jal33-Ro) 10 μM

Jal33-Ro 196 nM

Ro 9.8 uM

PT66 230 ng/mL

검정 완충액: 4 mM MgCl₂

2 mM TCEP

50 mM HEPES

0.1 % Tween 20

pH 7.3

효소: 2.5 U/mL

억제제: 최대 25 μM

최소 0.42 nM

재료:

Eu-라벨링된 포스포티로신 항체: - Lck 에 대하여 Cisbio Mab PT66-K, -Src 에 대하여 EG & G Wallac PT66 Eu-W1024 (모두 시판 중).

펩티드: NH₂-A-E-E-E-I-Y-G-E-F-E-A-K-K-K-K-CONH₂, 및 Ja133-G-아미노카프릴산-A-E-E-E-I-Y-G-E-F-E-A-K-K-K-K-CONH₂, (여기서, Ja133 은 LightCycler-Red 640-N-히드록시 숙신이미드 에스테르^TM 임);

두 펩티드 모두 Zinsser SMP350 펩티드 합성기에서 최적화 고상(solid phase) 펩티드 합성 프로토콜 (Merrifield (1962) Fed. Proc. Fed. Amer. Soc Exp. Biol. 21,412) 에 의해 합성되었다. 간단히 말해, 160 mg (22:8 μmol 규모)의 Rink-Linker 개질 폴리스티렌 고상에서, 측쇄 기능기에 따라 임시 피페리딘 불안정 Fmoc- 및 영구 산 불안정 tert-Bu-, BOC- 및 O-tert-Bu-기로 각각 보호되는 20 배 과량의 아미노산을 반복하여 접합시킴으로써 펩티드를 합성하였다. 기질 서열AEEEIYGEFEAKKKK 는 N-말단에 스페이서 아미노산인 아미노카프릴산 및 글리신이 부가하여 첨가되었다. N-말단의 임시 보호기를 절단한 후, 여전히 첨가되어 보호되는 펩티드를 1.5 배의 LightCycler-Red 640-N-히드록시 숙신이미드 에스테르 (Roche Diagnostics GmbH 에서 입수함) 및 트리에틸아민으로 라벨링하였다. 3 시간 후, 수지를 디메틸포름아미드 및 이소프로판올로 세척하여 청색 수지의 용출액이 무색이 되게 하였다. 완전히 보호되는, 라벨링된 펩티드를 고상으로부터 제거하고, 80% 트리플루오르아세트산, 10% 에탄디티올, 5% 티오아니솔 및 5% 물의 혼합물로 처리하여 영구 보호기로부터 이탈시켰다. 최종적으로 상기 기질을 분취용 역상 HPLC 정제에 의해 단리하였다. 상기 정제로 12.2 mg RP-HPLC 단일 피크의 순수한 청색 물질(라이오필리세이트(lyophilisate))을 수득하였다. MALDI 질량 분광법 [2720. 0] 으로 그 동일성을 입증하였다.

효소: Upstate Lck (p56^lck, 활성), Upstate Src(p60^c ^- ^src, 부분 정제됨) 를 UBI 로부터 구입하였다.

균질성, 시간분해 형광 검정: 판독기: Perkin Elmer, Wallac Viktor 1420-040 멀티라벨 계수기; 시료분주장치(Liquid handling system): Beckman Coulter, Biomek 2000.

ATP, Tween 20, HEPES 를 Roche Molecular Biochemicals 사로부터, MgCl₂ 및 MnCl₂ 를 Merck Eurolab 사로부터, TCEP 를 Pierce 사로부터, 384 웰 저부피 형광 플레이트를 Falcon 사로부터 구입하였다.

검정 설명:

우선 효소를 본 발명에 따른 대응하는 양의 억제제와 함께 15 ℃의 수용액 내에서 15 분간 예비 배양하였다. 이어서 ATP, 펩티드 및 PT66 을 함유한 반응 혼합물을 첨가한 후, 흔들어서 인산화 반응을 시작하였다. 상기 반응의 진행 과정은 적절한 웰 플레이트 판독기에서 시간 분해 형광 분광기를 이용하여 즉시 모니터링하였다.

IC₅₀-값은 비선형 커브 핏(Excelfit)을 이용하여 반응 속도로부터 수득할 수 있다.

IC₅₀ 값을 포함한 상술한 시험관내 시험 결과를 하기 표 1 에 나타내었다. 본 발명의 화합물은 상기 제시된 검정에서 1.0 μM 미만의 IC₅₀ 값을 가진다.

IC₅₀ (μM) - 효소 억제 검정

실시예 13

정제 제형

항목	성분	Mg/정제
1	화합물 A*	5	25	100	250	500	750
2	무수 락토오스	103	83	35	19	38	57
3	크로스카르멜로오스 소디움	6	6	8	16	32	48
4	포비돈 K30	5	5	6	12	32	36
5	마그네슘 스테아레이트	1	1	1	3	6	9
	총 중량	120	120	150	300	600	900

*화합물 A 는 본 발명의 화합물을 나타낸다.

제조 과정:

1. 적절한 혼합기에서 항목 1, 2 및 3 을 15 분간 혼합한다.

2. 단계 1 의 분말 혼합물을 20% 포비돈 K30 용액(항목 4)과 함께 과립화한다.

3. 단계 2 의 과립을 50 ℃ 에서 건조한다.

4. 단계 3 의 과립을 적절한 밀링(milling) 장치로 통과시킨다.

5. 항목 5 를 밀링 과립화 단계 4 에 첨가하고, 3 분간 혼합한다.

6. 단계 5 의 과립을 적절한 프레스에서 압축시킨다.

실시예 14

캡슐 제형

항목	성분	mg/캡슐
1	화합물 A*	5	25	100	250	500
2	무수 락토오스	159	123	148	--	--
3	옥수수 녹말	25	35	40	35	70
4	활석	10	15	10	12	24
5	마그네슘 스테아레이트	1	2	2	3	6
	총 충전량(total fill weight)	200	200	300	300	600

*화합물 A 는 본 발명의 화합물을 나타낸다.

제조 과정:

1. 적절한 혼합기에서 항목 1, 2 및 3 을 15 분간 혼합한다.

2. 항목 4 & 5 를 첨가하고 3 분간 혼합한다.

3. 적절한 캡슐에 채운다.

실시예 15

주사액/에멀젼 제조

항목	성분	mg/mL
1	화합물 A*	1 mg
2	PEG 400	10-50 mg
3	레시틴	20-50 mg
4	대두유	1-5 mg
5	글리세롤	8-12 mg
6	물 q.s.	1 mL

*화합물 A 는 본 발명의 화합물을 나타낸다.

제조 과정:

1. 항목 1 을 항목 2 에 용해시킨다.

2. 항목 3, 4, 및 5 를 항목 6 에 첨가하고, 분산될 때까지 혼합한 후 균질화시킨다.

3. 단계 1 의 용액을 단계 2 의 혼합물에 첨가하고, 상기 분산물이 반투명해질 때까지 균질화시킨다.

4. 0.2 ㎛ 필터를 통해 멸균 여과하고 약병에 채운다.

실시예 16

주사액/에멀젼 제조

항목	성분	mg/mL
1	화합물 A*	1 mg
2	글리코푸롤	10-50 mg
3	레시틴	20-50 mg
4	대두유	1-5 mg
5	글리세롤	8-12 mg
6	물	q.s. 1 mL

*화합물 A 는 본 발명의 화합물을 나타낸다.

제조 과정:

1. 항목 1 을 항목 2 에 용해시킨다.

4. 0.2 ㎛ 필터를 통해 멸균 여과하고 약병에 채운다.

구체적이고 바람직한 구현예를 참고로 하여 본 발명을 설명하였으나, 당업자라면 일상적 실험 및 실습을 통해 본 발명의 변형과 개질이 가능하다는 점을 이해할 수 있을 것이다. 따라서, 본 발명을 상술한 설명에 의해 한정하고자 함은 아니며, 본 발명은 첨부된 청구항 및 그 동등물에 의해 정의된다.

Claims

하기 군에서 선택되는 화합물:

(±)-3-[7-[3-(2-히드록시-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴;

(±)-3-[7-[3-(2-디에틸아미노-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴; 및

(±)-3-[7-[3-(2-디메틸아미노-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴.
하기 군에서 선택되는 화합물:

(±)-3-(3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-{3-[2-(4-메틸-피페라진-1-일)-에틸]-페닐아미노}-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일)-벤조니트릴;

(±)-3-[7-[3-(2-디에틸아미노-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤즈아미드;

(±)-3-[7-[3-(2-디메틸아미노-에틸)-페닐아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤즈아미드;

(±)-3-(3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-{3-[2-(4-메틸-피페라진-1-일)-에틸]-페닐아미노}-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일)-벤즈아미드; 및

(±)-3-(2-브로모-페닐)-7-[4-(2-디에틸아미노-에톡시)-페닐아미노]-1,4-디메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온.
(+)-3-(2-브로모-페닐)-7-[4-(2-디에틸아미노-에톡시)-페닐아미노]-1,4-디메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 인 화합물.
(-)-3-(2-브로모-페닐)-7-[4-(2-디에틸아미노-에톡시)-페닐아미노]-1,4-디메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 인 화합물.
하기 단계를 포함하는, 하기 화학식 Ⅰ의 화합물의 제조 방법:

a) 하기 화학식 Ⅱ의 화합물을:

하기 화학식 Ⅲ의 아닐린 유도체와 반응시켜서:

하기 화학식 Ⅰ의 화합물을 수득하는 단계:

[상기 화학식 Ⅰ, Ⅱ 및 Ⅲ 에서,

X 는 Cl 또는 SO₂CH₃ 이고;

R¹ 은 하기의 기에서 선택되고:

C₁ _-6 알킬,

C₆ _-10 아릴, 및

CONR¹³R¹⁴ 또는 CN로 치환된 C₆ _-10 아릴;

R², R³ 및 R⁴ 는 독립적으로 하기로 이루어진 군에서 선택되고:

H,

OR¹², 및

N, O, S, 또는 이들의 조합에서 선택된 헤테로원자를 함유하는 3 내지 10원 고리인 헤테로사이클, NR¹⁰R¹¹ 또는 OR¹²로 치환된 C₁ _-6 알킬 (여기서, 상기 헤테로사이클 기는 C₁ _-6 알킬로 치환될 수 있다),

(단, 하나 이상의 R², R³ 또는 R⁴ 는 H 가 아니다);

R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸ 은 하기의 기에서 독립적으로 선택되고:

H,

OR¹⁷, 및

할로겐;

R⁹ 는 H 이고;

R¹⁰ 및 R¹¹ 은 하기의 기에서 독립적으로 선택되고:

H,

COR¹³,

CO₂R¹³,

CONR¹³R¹⁴,

SO₂R¹³,

SO₂NR¹³R¹⁴,

C₁ _-6 알킬,

히드록시, C₁ _-4알콕시 또는 NR¹⁵R¹⁶ 로 치환된 C₁ _-6 알킬,

C₃ _-8시클로알킬,

히드록시, C₁ _-4알콕시, C₁ _-6 알킬, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 로 치환된 C₃ _-8시클로알킬,

N, O, S, 또는 이들의 조합에서 선택된 헤테로원자를 함유하는 3 내지 10원 고리인 헤테로사이클, 및

히드록시, C₁ _-4알콕시, C₁ _-6 알킬, 또는 NR¹⁵R¹⁶로 치환된, N, O, S, 또는 이들의 조합에서 선택된 헤테로원자를 함유하는 3 내지 10원 고리인 헤테로사이클,

또는, NR¹⁰R¹¹ 은 3 내지 7 개 원자를 지닌 고리를 형성할 수 있고, 상기 고리는 N, O 또는 S에서 선택되는 하나 이상의 추가적 헤테로 원자를 포함할 수 있으며, 하나 이상의 C₁ _-6 알킬, OR¹², COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, 및 SO₂NR¹³R¹⁴로 이루어진 군에서 선택된 기에 의해 치환될 수 있다;

R¹² 는 하기의 기에서 선택되고:

H,

C₁ _-6 알킬,

COR¹³,

CONR¹³R¹⁴,

히드록시, C₁ _-4알콕시, 또는 NR¹⁵R¹⁶로 치환된 C₂ _-6 알킬,

C₃ _-8시클로알킬,

히드록시, C₁ _-4알콕시, C₁ _-6 알킬, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 로 치환된 C₃ _-8시클로알킬,

N, O, S, 또는 이들의 조합에서 선택된 헤테로원자를 함유하는 3 내지 10원 고리인 헤테로사이클, 및

히드록시, C₁ _-4알콕시, C₁ _-6 알킬, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 로 치환된, N, O, S, 또는 이들의 조합에서 선택된 헤테로원자를 함유하는 3 내지 10원 고리인 헤테로사이클;

R¹³ 및 R¹⁴ 는 하기의 기에서 독립적으로 선택되고:

H,

C₁ _-6 알킬,

히드록시, C₁ _-4알콕시, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 로 치환된 C₂ _-6 알킬,

C₃ _-8시클로알킬,

히드록시, C₁ _-4알콕시, C₁ _-6 알킬, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 로 치환된 C₃ _-8시클로알킬,

N, O, S, 또는 이들의 조합에서 선택된 헤테로원자를 함유하는 3 내지 10원 고리인 헤테로사이클, 및

히드록시, C₁ _-4알콕시, C₁ _-6 알킬, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 로 치환된, N, O, S, 또는 이들의 조합에서 선택된 헤테로원자를 함유하는 3 내지 10원 고리인 헤테로사이클,

또는, NR¹³R¹⁴ 는 3 내지 7 개의 원자를 지닌 고리를 형성할 수 있고, 상기 고리는 N, O 또는 S에서 선택된 하나 이상의 추가적인 헤테로 원자를 포함할 수 있으며, 하나 이상의 C₁ _-6 알킬, OR¹⁷, COR¹⁷, CO₂R¹⁷, CONR¹⁷R¹⁸, SO₂R¹⁷, 및 S0₂NR¹⁷R¹⁸로 이루어진 군에서 선택된 기로 치환될 수 있다;

R¹⁵ 는 하기의 기에서 선택되고:

H,

C₁ _-6 알킬,

COR¹⁷, 및

CO₂R¹⁷ ; 및

R¹⁶, R¹⁷ 및 R¹⁸ 은 하기의 기에서 독립적으로 선택되고:

H, 및

C₁ _-6 알킬,

또는, NR¹⁵R¹⁶ 및 NR¹⁷R¹⁸ 은 각각 독립적으로 3 내지 7 개의 원자를 지닌 고리를 형성할 수 있고, 상기 고리는 N, O 또는 S에서 선택된 하나 이상의 추가적인 헤테로 원자를 함유할 수 있다].
제 5 항에 있어서, b) 화학식 Ⅰ의 화합물을 약학적으로 허용되는 염으로 전환시키는 단계를 추가로 포함하는 것인 제조 방법.