KR100769357B1 - Mass propagation method for pine-mushroomTricholoma matsutake using solid matrix - Google Patents

Abstract

본 발명은 송이 균사체를 고체매질에서 배양하여 균사체를 생산하는 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 송이(Tricholoma matstutake)의 균사체를 인공으로 조성된 고체매질에서 배양하여 송이 균사체를 신속하고 대량으로 생산하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for producing mycelium by culturing the pine mycelium in a solid medium, and more specifically,Tricholoma matstutakeThe present invention relates to a method for rapidly and mass-producing cluster mycelium by culturing the mycelium of) in artificially prepared solid medium.

본 발명은 마사토, 펄라이트, 버미귤라이트, 톱밥, 소나무, 부엽토 중에서 2종 이상 혼합하여 조성된 고체 매질 내에서 신속하고 대량으로 생산할 수 있게 한다. 또한, 본 발명은 송이 자실체 생성을 위한 생리·생태적 연구와 송이 접종원 생산을 위한 균사체 배양용으로 이용될 수 있다. The present invention enables the rapid and mass production in a solid medium formed by mixing two or more kinds of masato, pearlite, vermiculite, sawdust, pine, and foliar soil. In addition, the present invention can be used for physiological and ecological studies for the production of pine fruit body and mycelium culture for the production of pine inoculum.

송이, 균사체 Cluster, mycelium

Description

고체 매질을 이용한 송이 균사체의 대량 생산방법 {Mass propagation method for pine-mushroom(Tricholoma matsutake) using solid matrix}Mass production method of pine mycelium using solid medium {Mass propagation method for pine-mushroom (Tricholoma matsutake) using solid matrix}

도 1은 생물반응기에서 송이 균사체 배양모습을 나타내는 그림이다.1 is a diagram showing the culture of mycelium mycelium in a bioreactor.

도 2는 초기 접종량별 송이 균사체 생장량을 나타내는 그림이다.2 is a diagram showing the growth of pine mycelium by the initial inoculation amount.

도 3은 고체 매질에서 송이 균사체 배양모습을 나타내는 그림이다.Figure 3 is a diagram showing the culture of mycelium mycelium in a solid medium.

도 4는 고체매질에서 송이 균사체 생장형태(a) 및 배양병 외관(b)을 나타내는 그림이다. 4 is a view showing the growth mycelium mycelium (a) and the appearance of the culture bottle (b) in a solid medium.

도 5a는 고체 매트리스의 재료별 송이 균사체 생장량을 나타내는 그림이다. Figure 5a is a diagram showing the growth of pine mycelium by material of the solid mattress.

도 5b는 고체 매질 조성별 송이 균사체 생장량을 나타내는 그림이다. (1. 백마사:피트모스:버미큘라이트:펄라이트:톱밥=1:1:1:1:1, 2. 백마사:피트모스:버미큘라이트:펄라이트=1:1:1:1, 3. 백마사:버미큘라이트:펄라이트=1:1:1, 4. 백마사:피트모스:펄라이트:톱밥=1:1:1:1, 5. 백마사:피트모스:톱밥=1:1:1, 6. 백마사:톱밥=1:1)Figure 5b is a diagram showing the growth of pine mycelium by the composition of the solid medium. (1. White horse: Fitmos: Vermiculite: Pearlite: Sawdust = 1: 1: 1: 1: 1, 2. White horse: Fitmos: Vermiculite: Pearlite = 1: 1: 1: 1, 3. White horse: Vermiculite: Pearlite = 1 : 1: 1, 4. White Horse: Pit Moss: Pearlite: Sawdust = 1: 1: 1: 1, 5. White Horse: Pit Moss: Sawdust = 1: 1: 1, 6. White Horse: Sawdust = 1: 1)

도 6은 고체 매질 내 부식토양 함량별 송이 균사체 생장량을 나타내는 그림이다. 6 is a diagram showing the growth of pine mycelium by the content of corrosion soil in the solid medium.

도 7은 고체 매질 내의 보릿가루 첨가량에 따른 송이 균사 생장량을 나타내 는 그림이다. 7 is a diagram showing the growth of cluster hyphae according to the amount of barley flour added in the solid medium.

도 8a는 고체 매질 내 수분 함량별 송이 균사체 생장량을 나타내는 그림이다. 8a is a diagram showing the growth of cluster mycelium by moisture content in a solid medium.

도 8b는 고체 매질 내에서의 배양기간에 따른 송이 균사 생장량을 나타내는 그림이다. 8b is a diagram showing the growth of cluster mycelia according to the incubation period in a solid medium.

본 발명은 송이 균사체를 고체매질에서 배양하여 균사체를 생산하는 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 송이(Tricholoma matstutake)의 균사체를 인공으로 조성된 고체매질에서 배양하여 송이 균사체를 신속하고 대량으로 생산하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for producing mycelium by culturing the pine mycelium in a solid medium, and more specifically, Tricholoma Matstutake ) is a method for rapidly and mass-producing cluster mycelium by culturing the mycelium of artificially prepared solid medium.

송이(Tricholoma matsutake)는 주름버섯목 송이과에 속하며 소나무의 뿌리에 공생균을 형성하여 소나무로부터 영양분을 얻는 외생균근균으로 한국을 비롯한 북한, 일본 및 중국 동아시아에서 널리 채집되고 있다. 이러한 송이는 외형이 크고 육질이 충실하며, 특히 그 독특한 향과 맛으로 오래전부터 최고의 식용버섯으로 알려져 왔다. Tricholoma matsutake ) is an exogenous mycorrhizal fungus that forms symbiotic bacteria at the roots of pine trees and is obtained from pine roots. It is widely collected in North Korea, Japan, China and East Asia. These clusters are large in appearance and faithful in quality, and have long been known as the best edible mushrooms for their unique aroma and taste.

또한, 송이는 예로부터 독특한 향기성분과 희소가치로 인하여 매우 인기가 높은 자연식품으로 많은 사람에게 애용되어 왔다. 현재까지도 인공재배가 불가능하여 자연에서 직접 채취한 버섯만을 식용으로 이용하고 있기 때문에 매우 고가로 유통되고 있다.In addition, matsutake has been popular with many people as a natural food very popular because of its unique fragrance and rare value. As it is still impossible to cultivate artificially, only mushrooms collected directly from nature are used for food, and they are distributed at very high prices.

송이의 영양성분에 관하여 살펴보면, 여러 가지 필수 아미노산 및 다양한 영양성분을 포함하고 있으며, 특히 다당류 성분 등은 항암 및 다양한 약리효과를 지니고 있는 것으로 보고되어 왔다. 일반적으로 버섯은 그 특성상 자실체뿐만 아니라 균사체에도 상당한 영양물질과 약리활성 물질을 포함하는 것으로 널리 알려지고 있다. 따라서 최근 여러 가지 버섯 균사체를 이용한 다양한 건강 음료 및 기능성 식품들이 개발되어 시판되고 있다. 그러나 송이는 활물기생균(活物寄生菌)으로서 그 독특한 생리적 특성상 생장속도가 느리기 때문에 균사체만을 대량배양을 통하여 상업적으로 이용하기에는 어려운 실정이다.Looking at the nutritional composition of the pine, it contains a variety of essential amino acids and various nutritional components, in particular polysaccharides, etc. have been reported to have anti-cancer and various pharmacological effects. In general, mushrooms are widely known to contain significant nutrients and pharmacologically active substances in mycelium as well as fruiting bodies. Therefore, various healthy drinks and functional foods using various mushroom myceliums have been recently developed and marketed. However, pine mushroom is an active parasitic bacterium (活 物 寄生菌) because of its unique physiological characteristics, because of its slow growth rate, it is difficult to commercially use only mycelium through mass culture.

우리나라에서 송이의 중요성이 크게 나타난 시기는 1967년경 송이가 수출되면서부터이며, 근래에는 해마다 송이의 수출로 벌어들이는 소득이 연평균 약 400억 원으로 추산되고 있다. 이러한 소득은 임업부산물로서 특별한 시설투자 없이도 송이 발생지의 농민들에게 중요한 소득원이 될 수 있으며, 나아가 산촌민의 경제 안정화의 효과를 생각해 볼 때 경제적 가치가 매우 크다고 할 수 있다.The importance of matsutake in Korea is from the export of matsutake around 1967. In recent years, annual income is estimated at about 40 billion won per year. These incomes are a by-product of forestry and can be an important source of income for farmers in Song-do area without special facility investment. Furthermore, the economic value is very high considering the effect of economic stabilization of mountain villagers.

하지만, 과거 30여 년의 기록에 의하여 볼 때 송이는 그 발생량이 매년 일정하지 못하고 풍년과 흉년을 번갈아가는 현상을 보이며, 1980년대를 시점으로 하여 점차 그 발생량이 감소하는 문제점을 나타내고 있다. 이는 송이가 기후변동 및 발생지의 주변 환경에 따라 그 발생량의 격차를 심하게 나타내며, 게다가 근래에는 소나무 숲의 솔잎혹파리 피해, 산불에 의한 소나무 숲의 감소, 송이산 방치로 인한 하부 식생의 밀생, 유기물의 퇴적이 많이 되므로 송이의 생산량이 전체적으로 감소하고 있기 때문이다. 이에 인위적인 노력에 의한 지속가능한 송이 생산과 나아가 송이의 인공재배를 위한 많은 연구들이 지금까지 이루어져 왔다. 하지만, 송이는 특징적으로 소나무의 뿌리와 공생관계에 있을 때에만 자실체를 형성하기 때문에 인공재배를 통한 자실체의 형성은 아직까지 실현되지 못하고 있으며, 다만 소나무 숲의 환경 조절에 의한 지속적인 송이의 생산과 송이 발생량 증가의 가능성은 확인이 되었다. 또한, 송이의 발생기에 적합한 기상조건의 조절의 방안은 아직까지 실현되지 못하고 있다.However, according to the record of the past 30 years, the clusters are not constant every year, and the phenomenon of alternating between the rich and the famine years shows the problem that the generation gradually decreases as of the 1980s. This shows a wide variation in the amount of pine depending on the climate change and the surrounding environment. In addition, pine needles in pine forests have been damaged, pine forests have been reduced by forest fires, and lower vegetation densities due to neglect of Mt. This is because the production of clusters is declining as a result of the large number of deposits. Therefore, many studies have been made to produce sustainable clusters by artificial efforts and furthermore, artificial clustering of clusters. However, since clusters form fruiting bodies only when they are in symbiotic relationship with the roots of pines, fruiting is not yet realized through artificial cultivation, but continuous production and clustering of pines by environmental control of pine forests The possibility of increased production was confirmed. In addition, a method of controlling weather conditions suitable for a cluster generator has not yet been realized.

우리나라에서 송이의 인공재배와 증수를 위한 연구는 1970년대를 시작으로 현재까지 약 30여 년 동안 이루어져 왔으며, 연구된 분야는 크게 네 부분으로 나누어진다. 첫째는 송이발생에 영향을 주는 기상·환경적인 요인에 관한 연구, 둘째는 송이균의 인공배양 및 균환형성에 관한 연구, 셋째는 송이가 발생하는 소나무 숲의 생태조사에 관한 연구, 넷째는 송이균의 유전적인 특성에 관한 연구이다.In Korea, research on artificial cultivation and multiplication of pine mushrooms has been conducted for about 30 years since the 1970s, and the researched fields are divided into four parts. First, research on meteorological and environmental factors affecting the occurrence of pine mushrooms, second, research on artificial culture and microbial formation of pine mushrooms, third, ecological investigation of pine forest where pine mushrooms occur, and fourth, This is a study on the genetic characteristics of

버섯을 인공적으로 만든 배지에서 만들기 위해서는 액체배지가 아닌 톱밥이나 토양 등 고체를 중심으로 만들어진 매질 위에서 균사 생장이 충분히 이루어져야 한다. 그러나 송이는 한천(agar)을 이용한 배지에서도 다른 버섯 균에 비하여 생장이 극히 느리며, 액체배양을 통하여 대량배양된 균은 고체 배지에 옮길 경우 활력이 급격히 떨어져서 사멸하게 된다. 이러한 문제로 인하여 송이 자실체(버섯) 생산이 인공적으로는 전혀 이루어지지 않고 있다.In order to make mushrooms in artificial media, it is necessary to grow enough mycelia on a medium made of solids such as sawdust or soil, not liquid medium. However, the cultivars grow very slowly compared to other mushrooms even in agar (agar) medium, and the bacteria grown in bulk through liquid culture lose their vitality rapidly when transferred to the solid medium. Due to these problems, pine fruit body (mushroom) production is not artificially done at all.

또한, 송이는 현재까지 재배가 되지 않는 균근성 버섯으로서 세계적으로 액체배지에서 배양하는 것이 가능한 수준까지 연구가 진전되었지만, 실질적으로 토양 등 고체매질을 기반으로 한 배양이 제대로 이루어지지 않았다. 이에 따라 버섯이 발생할 수 있는 새로운 터전을 마련하는 등 인공적인 기술을 도입하여 재배하려는 노력에 큰 진전을 볼 수 없는 상황이었다. 현재까지 송이 균사체를 액체배양 방법으로 대량 배양하는 방식과 관련한 보고는 다수 있으나, 인공적으로 송이 균사체를 토양 등 고체 매질 내에서 대량으로 배양하는 방법은 본 발명이 최초이다.In addition, the cluster is a fungus that is not cultivated to date, but research has been carried out to the level that can be cultured in a liquid medium around the world, but practically, the culture based on a solid medium such as soil has not been properly performed. As a result, it was not possible to make great progress in the effort to introduce artificial technology and grow, such as preparing a new place where mushrooms could occur. Until now, there have been many reports related to the method of mass cultivating pine mycelium by the liquid culture method, but the present invention is the first method of artificially cultivating the pine mycelium in a solid medium such as soil.

본 발명은 상기한 바와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위해 제안된 것으로, 본 발명의 목적은 송이 균사체를 고체매질에서 배양하여 균사체를 대량으로 생산하는 방법을 제공하는데 있다.The present invention has been proposed to solve the problems of the prior art as described above, an object of the present invention is to provide a method for mass production of mycelium by cultivating the pine mycelium in a solid medium.

상기의 목적을 달성하기 위한 본 발명은 송이 균사체를 고체매질에서 배양하여 균사체를 대량으로 생산하는 방법을 포함한다.The present invention for achieving the above object includes a method for culturing the mycelium in a solid medium to produce a mycelia in large quantities.

상기에서, 송이 균사체는 배지액 1리터당 전분 12~18g, 포도당 3~7g, 효모추출물 1.0~2g, 펩톤 0.1~1g, KH₂PO₄ 0.8~1.2g, MgSO₄ 0.1~1g인 액체배지에서 전 배양하는 것을 특징으로 한다.In the above, the cluster mycelium is a starch 12 ~ 18g per 1 liter of medium, glucose 3 ~ 7g, yeast extract 1.0 ~ 2g, peptone 0.1 ~ 1g, KH ₂ PO ₄ 0.8 ~ 1.2g, MgSO ₄ 0.1 ~ 1g It is characterized by culturing.

상기에서, 고체 매질은 마사토, 펄라이트, 버미귤라이트, 톱밥, 소나무, 부엽토 중에서 1종 이상 혼합하여 조성되는 것을 특징으로 한다.In the above, the solid medium is characterized in that the composition is mixed by one or more of masato, pearlite, vermiculite, sawdust, pine, leafwood.

또한, 상기에서 고체 매질은 보리나 보릿가루, 옥수수가루, 쌀겨를 단독 또는 혼합하여 추가로 더 포함하는 것을 특징으로 한다.In addition, the solid medium is characterized in that it further comprises a barley or barley flour, corn flour, rice bran alone or mixed further.

이하, 본 발명을 상세히 설명하면 다음과 같다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 순수 분리된 송이 균사체를 마사토 등이 함유된 고체 매질 내에서 인공적으로 신속하게 대량으로 배양하는 방법을 제공하는 것이다.The present invention is to provide a method for cultivating the purely isolated cluster mycelium artificially and rapidly in large quantities in a solid medium containing masato and the like.

본 발명은 송이 균사체를 고체매질에서 배양하기 위한 1) 고체매질 접종용 송이 균사체 조제방법, 2) 고체 매질의 조성물, 3) 고체 매질에서의 배양 방법의 3단계로 이루어져 있다.The present invention consists of three steps: 1) preparing a pine mycelium for incubation of a solid medium, 2) a composition of a solid medium, and 3) a cultivation method in a solid medium.

고체 매질 접종용 송이 균사체는 송이 자실체(버섯)에서 순수 분리된 송이 균사체를 액체배양하거나 고체 매질에서 순수 배양하여 활력이 왕성한 시기에 분쇄하고 이를 배양용 매질 부피의 10% 이상을 접종용으로 사용하는 것이 신속한 배양에 효과적이며, 고체매질의 조성물로는 마사토, 펄라이트가 우수하고, 조성물에 첨가되는 송이 균사체 배양용 영양원으로는 보릿가루가 가장 우수하며, 이외에 옥수수가루, 쌀겨도 양호하다.Cluster mycelium for solid medium inoculation is cultivated at the time of vitality by liquid culture of cluster mycelium purely separated from pine fruit body (mushroom) or pure culture in solid medium, and at least 10% of the volume of the culture medium is used for inoculation. It is effective for rapid cultivation, and the composition of the solid medium is excellent in masato and pearlite, and barley flour is the best as a nutrient source for culturing mycelium added to the composition, and corn flour and rice bran are also good.

또한, 3~4주 동안 전 배양된 균사체를 분쇄하여 고체 매질의 접종용 seed로 직접 사용하거나, 생물반응기에서 대량 배양하여 이를 고체매질 접종용 seed로 사용할 수 있다. 생물반응기 형태는 여러 종류를 사용할 수 있으나 풍선형 공기부양 식 생물반응기가 가장 적합하며, 송이 균사체를 seed로 5~10%(v/v) 정도 접종하는 것이 바람직하고 배양온도는 23~25℃, 공기 공급율은 0.05-0.1vvm으로 3~4주간 배양하여 고체매질 접종용 seed로 사용할 수 있다.In addition, the mycelium pre-cultured for 3-4 weeks may be ground and used directly as seed for inoculation of a solid medium, or may be used as a seed for inoculation of a solid medium by culturing in a bioreactor. Various types of bioreactors can be used, but a balloon-type air flotation type bioreactor is most suitable, and inoculation of 5 ~ 10% (v / v) of pine mycelium is preferred, and the incubation temperature is 23 ~ 25 ℃, Air supply rate is 0.05-0.1vvm incubated for 3-4 weeks can be used as seed for solid medium inoculation.

고체매질 내에서의 배양조건으로 매질의 pH는 4.5~5.5, 함수율은 30~70%, 배양온도는 23~25℃가 바람직하고, 배양기간은 매질 내의 접종량에 따라 다르지만 통상 1~2개월이면 매질 전체가 백색의 균사체로 덮어 완전한 송이 균사 덩어리를 형성한다.As a culture condition in a solid medium, the pH of the medium is preferably 4.5 to 5.5, the water content is 30 to 70%, and the culture temperature is 23 to 25 ° C. The incubation period depends on the inoculation amount in the medium, but is usually 1 to 2 months. The whole is covered with white mycelium to form a complete cluster of mycelia.

또한, 상기에서 생산된 고체 매질의 송이 균사체를 새로운 송이 균환 형성을 위한 접종원 매질 또는 송이 자실체 형성을 위한 기본배지로 사용할 수 있다.In addition, the cluster mycelium of the solid medium produced above may be used as a base medium for forming an inoculum medium for forming a new cluster fungus or a fruit cluster body.

이하 본 발명의 내용을 실시예를 통해 더욱 상세하게 설명하기로 한다. 다만, 이들 실시예는 본 발명의 내용을 이해하기 위해 제시되는 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 이들 실시예로 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the contents of the present invention will be described in more detail with reference to Examples. However, these examples are only presented to understand the content of the present invention, but the scope of the present invention is not limited to these embodiments.

[실시예 1] 접종용 송이 균사체 액체배양 및 조제Example 1 Liquid Culture and Preparation of Matsutake Mycelium for Inoculation

본 발명에 사용한 송이 균사체는 송이 자실체(버섯)로부터 순수분리 배양된 것이다. 최초 액체 배양용 재료로 사용하기 위하여 PDA 등 고체배지에 배양중인 균사체를 무균적으로 잘게 잘라 500㎖의 삼각플라스크에 넣고, 전 배양을 실시하였다. 배양액의 조성은 배지액 1리터당 전분(starch) 15g, 포도당(glucose) 5g, 효모 추출물(yeast extract) 1.5g, 펩톤(peptone) 0.5g, KH₂PO₄ 1g, MgSO₄ 0.5g을 첨가하여 pH는 5.2로 조절하였고, 배양온도는 24℃로 하였다. 4주 동안 전 배양된 균사체를 분쇄하여 생물반응기에서 대량 배양하였다(도 1). 생물반응기 형태는 풍선형 공기부양식 생물반응기를 사용하였으며, 송이 균사체를 seed로 5%(v/v)를 접종하여 상기의 배지 조성 및 배양조건으로 하고, 공기 공급율은 0.5vvm으로 4주간 배양하여, 이를 고체매질 접종용 seed로 사용하였다.The pine mycelium used in the present invention is purely separated and cultured from the pine fruit body (mushroom). In order to be used as a material for the first liquid culture, mycelium cultured in a solid medium such as PDA was aseptically chopped into a 500 ml Erlenmeyer flask, and precultured. The composition of the culture was pH 15g of starch, glucose 5g, yeast extract 1.5g, peptone 0.5g, KH ₂ PO ₄ 1g, 0.5g MgSO ₄ per liter of medium. Was adjusted to 5.2, the culture temperature was 24 ℃. For 4 weeks, the precultured mycelium was pulverized and mass cultured in a bioreactor (FIG. 1). As a bioreactor type, a balloon-type air-floating bioreactor was used, inoculated with 5% (v / v) of pine mycelium as a seed, and the above medium composition and culture conditions, and the air supply rate was 0.5vvm for 4 weeks. This was used as seed for solid medium inoculation.

배양된 송이 균사체의 활착률 등 균사의 생육량 조사는 각 조건별로 60일간 배양한 후 처리별 매질 내의 에르고스테롤(ergosterol) 함량으로 비교하였다. 에르고스테롤은 Hart와 Brookes(1996)의 방법을 일부 변형하여 추출하여 정량하였다. 즉 토양 3g, 또는 균사체 0.3g을 메탄올(MeOH) 35㎖에 현탁하여 3분간 ultra-sonication하고, 7,000 rpm에서 20분간 원심분리하여 상등액을 취하고, 다시 잔사에 메탄올 35㎖을 넣어 원심분리하여 상등액을 합한 후 메탄올로 100㎖로 표선하였다. 액체 배양한 균사체의 경우 원심분리의 과정을 생략하고 메탄올 100㎖로 표선하였다. 이 메탄올추출물에 에탄올(EtOH) 20㎖, KOH 1.0g을 혼합하여, 90℃ 한류 내각장치에서 1시간 사포닌화 하였다. 이 액을 일정량 취하여 핵산으로 분획하고 농축·건조하여, 일정량의 메탄올로 녹이고 pore size 0.2㎛로 여과하여 HPLC로 정량하였다. Investigation of mycelial growth, such as the adherence rate of the cultured pine mycelium, was incubated for 60 days in each condition and compared with the content of ergosterol in the medium for each treatment. Ergosterol was quantified by extracting some modifications of Hart and Brookes (1996). That is, 3 g of soil or 0.3 g of mycelium is suspended in 35 ml of methanol (MeOH), ultra-sonicated for 3 minutes, centrifuged at 7,000 rpm for 20 minutes, and the supernatant is taken. Combined and marked with 100 ml with methanol. In the case of liquid cultured mycelium, centrifugation was omitted and 100 mL of methanol was selected. 20 ml of ethanol (EtOH) and 1.0 g of KOH were mixed with the methanol extract, and saponified for 1 hour in a 90 ° C current-limiting cabinet apparatus. A certain amount of this solution was taken, fractionated with nucleic acid, concentrated and dried, dissolved in a certain amount of methanol, filtered to a pore size of 0.2 µm, and quantified by HPLC.

[실시예 2] 송이 균사 배양용 고체매질의 조성 Example 2 Composition of Solid Medium for Cultured Mycelial Mycelia

고체매질에 대한 초기 접종량별 송이 균사체 생장량을 측정하였다. 고체 매질로 백마사, 펄라이트, 버미귤라이트 및 피트모스를 각각 1:1:1:1로 섞은 배지를 사용하였는데, 그 결과 고체매질의 seed 접종량은 매질 부피의 10% 이상이 적합하였다(도 2). 도 3은 고체 매질에서 송이 균사체 배양 모습이고, 도 4는 고체매질에서 송이 균사체 생장형태(a) 및 배양병 외관(b)을 나타낸다.The growth of pine mycelium was determined according to the initial inoculation amount of the solid medium. As a solid medium, a medium mixed with white horse sand, pearlite, vermiculite, and pitmoss was 1: 1: 1: 1, and as a result, the seed inoculum of the solid medium was more than 10% of the medium volume (FIG. 2). FIG. 3 shows the cluster mycelium culture in a solid medium, and FIG. 4 shows the cluster mycelium growth form (a) and the appearance of a culture bottle (b) in a solid medium.

적합한 고체 매질을 파악하기 위하여 백마사, 톱밥, 피트모스, 펄라이트 및 버미귤라이트 각 재료에 따른 균사생장량을 비교하였다. 그 결과 고체 매트리스의 재료별 송이 균사체 생장량은 도 5a에 나타난 바와 같이 펄라이트>백마사>버미귤라이트>피트모스>톱밥 순으로 나타났다. 송이 균사는 호기성균이므로 펄라이트와 같이 다공성의 재질이 송이 균사체 생장에 가장 좋은 것으로 나타났으며 그 다음 백마사가 양호하였다(도 5a).In order to identify a suitable solid medium, the mycelial growth according to each material of white horse, sawdust, peat moss, pearlite and vermiculite was compared. As a result, the growth of cluster mycelium by material of the solid mattress was found in the order of pearlite> white horse yarn> vermiculite> pit moth> sawdust as shown in FIG. Since pine hyphae are aerobic bacteria, porous materials such as pearlite showed the best for growth of pine mycelium, and then white horse was good (FIG. 5a).

또한, 백마사에 각 재료를 혼합 처리하여 균사 생장량을 비교하였다. 그 결과 그림 5b에 나타난 바와 같이 혼합 처리별간 균사 생장량이 유사하였으나, 5 가지 모두 혼합 처리한 것과 백마사와 톱밥을 혼합 처리한 것에서 생장이 매우 저조하였다(도 5b: 1. 백마사:피트모스:버미큘라이트:펄라이트:톱밥=1:1:1:1:1, 2. 백마사:피트모스:버미큘라이트:펄라이트=1:1:1:1, 3. 백마사:버미큘라이트:펄라이트=1:1:1, 4. 백마사:피트모스:펄라이트:톱밥=1:1:1:1, 5. 백마사:피트모스:톱밥=1:1:1, 6. 백마사:톱밥=1:1). 단일 처리 중에서는 톱밥과 피트모스 처리가 가장 저조하였으나 혼합처리에서는 오히려 균사 생장에 도움을 주는 것으로 나타났다.In addition, the amount of mycelial growth was compared by mixing each material with a white horse yarn. As a result, as shown in Fig. 5b, the mycelial growth was similar among the mixed treatments, but growth was very low in the mixed treatment of all five and the mixed treatment of the white horse and the sawdust (Fig. 5b: 1. White horse: pitmos: vermiculite: pearlite) : Sawdust = 1: 1: 1: 1: 1, 2. White Horse: Fit Moss: Vermiculite: Pearlite = 1: 1: 1: 1, 3. White Horse: Vermiculite: Pearlite = 1: 1: 1, 4. White Horse: Fit Moss : Pearlite: Sawdust = 1: 1: 1: 1, 5. White Horse: Pitmos: Sawdust = 1: 1: 1, 6. White Horse: Sawdust = 1: 1). Among the single treatments, sawdust and peat moss treatments were the lowest, but mixed treatments were shown to aid mycelial growth.

산림토양의 부식(유기물) 처리가 송이 균사체 생장에 미치는 효과를 분석하 기 위하여 고체 매질 내의 부식토양 첨가량에 따른 송이 균사체 생장량을 비교하였다. 부식토양이 없는 것보다는 있을 때 생장이 양호한 경향이었으나 부식토양의 양이 아주 높을 때는 오히려 생장이 감소하는 것으로 나타났다(도 6).In order to analyze the effect of forest soil corrosion on the growth of pine mycelium, cluster mycelium growth was compared according to the amount of humus soil in solid medium. The growth tended to be good when there was no corrosive soil, but the growth was decreased when the amount of corrosive soil was very high (FIG. 6).

[실시예 3] 고체 매트리스에서 송이 균사체 배양 방법Example 3 Culture of mycelium mycelium on a solid mattress

송이버섯 균사체 배양용 영양원으로서 고체 매질에 첨가되는 조성물로 보릿가루가 가장 우수하였고, 이외에 옥수수가루, 쌀겨도 양호하였다. 밀가루, 덱스트린, 콩가루 등은 생장이 불량함을 육안 관찰되었다. 특히 매질 내의 보릿가루 농도를 높일수록 송이버섯 균사체의 생장량은 증가하였으며, 생육기간도 연장할 수 있었다(도 7).Barley flour was the best as a composition added to the solid medium as a nutrient for cultivating mycelium mycelium, and corn flour and rice bran were also excellent. Flour, dextrin, and soy flour were visually observed to be poorly grown. In particular, as the concentration of barley flour in the medium increased, the growth of the pine mushroom mycelium increased, and the growth period could be extended (FIG. 7).

또한, 고체 매질 내에서의 배양기간에 따른 송이 균사 생장량 및 고체 매질 내 수분 함량별 송이 균사체 생장량을 측정하였다. 그 결과, 매질 내에서의 배양조건으로 매질의 함수율이 30~70%일 경우 생장이 양호하였다(도 8a). 배양기간은 매질 내의 접종량에 따라 다르지만 통상 1~2개월이면 매질 전체가 백색의 균사체로 덮여 완전한 송이 균사 덩어리를 형성하였다(도 8b).In addition, the growth of pine mycelia according to the culture period in the solid medium and the growth of pine mycelium by water content in the solid medium were measured. As a result, the growth was good when the water content of the medium in the culture conditions in the medium 30 to 70% (Fig. 8a). The incubation period depends on the amount of inoculation in the medium, but usually 1 to 2 months, the whole medium was covered with white mycelium to form a complete cluster of mycelia (FIG. 8B).

이상에서 살펴본 바와 같이 본 발명은 송이 균사체가 고체 매질 내에서 신속한 대량 생산을 가능하게 함으로써, 송이 자실체 생성을 위한 생리·생태적 연구와 송이 접종원 생산을 위한 균사체 배양용으로 이용될 수 있다.As described above, the present invention enables rapid mass production of pine mycelium in a solid medium, so that the mycelium can be used for physiological and ecological studies for producing pine fruit bodies and for cultivating mycelium for producing pine inoculum.

또한, 본 발명을 통하여 송이가 새롭게 발생할 수 있는 균환을 인공적으로 형성하거나 고체배지 상에서 자실체를 인공적으로 유도하는 연구를 추진하는 등 인공재배 기술개발을 위한 초석이 될 수 있을 것이다.In addition, the present invention may be a cornerstone for artificial cultivation technology development such as artificially forming a fungus that can newly develop clusters or promoting research to artificially induce fruiting bodies on a solid medium.

Claims (4)

마사토, 펄라이트, 버미귤라이트, 톱밥 및 부엽토 중에서 선택된 1종 이상을 혼합한 후, 보리나 보릿가루, 옥수수 가루, 쌀겨를 단독 또는 혼합하여 추가로 더 포함하는 고체 매질에 송이 균사체를 배양하여 송이 균사체를 대량으로 생산하는 방법.After mixing one or more selected from masato, pearlite, vermiculite, sawdust and leafy soil, cultivate the pine mycelium on a solid medium further comprising barley or barley flour, cornmeal, and rice bran, furthermore How to produce in bulk. 제 1항에 있어서, 송이 균사체는 배지액 1리터당 전분 12~18g, 포도당 3~7g, 효모추출물 1.0~2g, 펩톤 0.1~1g, KH₂PO₄ 0.8~1.2g, MgSO₄ 0.1~1g인 액체배지에서 전 배양하는 것을 특징으로 하는 균사체를 대량으로 생산하는 방법.The pine mycelium is a liquid of starch 12 ~ 18g, glucose 3 ~ 7g, yeast extract 1.0 ~ 2g, peptone 0.1 ~ 1g, KH ₂ PO ₄ 0.8 ~ 1.2g, MgSO ₄ 0.1 ~ 1g Method for producing a large amount of mycelium, characterized in that pre-culture in the medium. 삭제delete 삭제delete

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