KR100627620B1

KR100627620B1 - 항염증 점안제

Info

Publication number: KR100627620B1
Application number: KR1020007012806A
Authority: KR
Inventors: 미야케겐사쿠; 츠리야요시히로; 야게타히로코; 스즈키히데카즈; 도요다요시히로
Original assignee: 와카모토 세이야꾸 가부시끼가이샤
Priority date: 1998-05-15
Filing date: 1999-05-14
Publication date: 2006-09-25
Also published as: JP4234907B2; CA2332271A1; EP1082966A1; US6495603B1; CA2332271C; CN1175904C; AU3730999A; HK1036412A1; WO1999059634A1; KR20010025026A; EP1082966A4; AU754064B2; CN1301177A

Abstract

에토돌락, N-(2-(시클로헥실옥시)-4-니트로페닐)메탄술폰아미드 및 멜록시캄으로부터 선택되는 COX-2를 선택적으로 저해하는 약제를 함유하는, 각막상피 장해 혹은 결막장해가 적은, 항염증효과가 우수한 항염증 점안제.

에토돌락, 멜록시캄, 각막상피장해, 결막장해, 항염증, 점안제

Description

항염증 점안제{ANTI-INFLAMMATORY EYE DROPS}

본 발명은 프로스타글란딘이 염증의 메디에이터(mediator:매개체)인 안염증 질환의 치료제에 관한 것이고, 특징적인 예로서 백내장 수술후 등의 전(前)안부 안염증 질환의 예방 및 치료를 위한 점안제에 관한 것이다.

염증의 메디에이터인 프로스타글란딘의 생합성을 저해함으로써 항염증작용을 발휘하는, 디클로페낙나트륨 등의 비스테로이드성 항염증 점안제는, 경구투여에 의한 염증성 질환의 치료 이외에, 국소투여에 있어서도 여러가지 염증성 질환에 사용되고 있다. 국소투여인 점안투여중에서도, 안염증성 질환, 특히 백내장 수술후의 전안부의 염증증상 및 수술중·수술후 합병증에 널리 사용되고 있다.

한편, 이와 같은 비스테로이드성 항염증 점안제의 사용은, 항염증작용은 우수하지만 각막상피장해와 같은 부작용의 발생이 임상의 장에서 1.6% 정도 지적되고 있고(와카모도 제약 의약품 첨부문서 1996년), 부작용인 각막상피장해가 적은 비스테로이드성 항염증 점안제의 개발이 요망되고 있다.

최근의 연구의 진보는, 비스테로이드성 항염증제의 작용점으로서 시클로옥시게나아제-1(이하, COX-1로 한다) 및 시클로옥시게나아제-2(이하 COX-2로 한다)의 2개의 효소저해를 지적하고 있다. COX-1은 세포의 보호의 역할이 있고, COX-2는 염 증에 관여하는 효소라고 생각되고 있으므로, COX-2를 선택적으로 저해하는 세포장애가 적은 항염증제의 개발이 기대되고 있다. 이와 같은 관점에서, 전신투여항염증약제의 부작용으로서의 위궤양의 연구는 상세히 연구되고 COX-1 및 COX-2의 역할은 거의 명확히 되어 있고, 위궤양의 발생에는 COX-1의 저해가 관여하는 것이 명백하게 되어 있다.

이와 같은 위궤양에 대하여는 작용 기서(mechanism)가 명확하게 되어 있지만, 위궤양과 동일한 작용기서가 각막상피장해의 원인인 것은 명확히 되어 있지 않다. 이와 같은 각막상피장해와 안염증질환에 대하여 COX-1 및 COX-2의 역할을 명확히 구별할 수 있는 약제의 개발이 기대된다. 전안부염증이 COX-2 저해제로 억제되는 것은 Masferrer, JL 등(Surv Ophthalmol 41 (suppl 2):S35-S40, 1997)이 설명하고 있지만, 여기서는 각막상피장해에 대하여 하등의 기재도 되어 있지 않다. 미야게(임상안과의보 51(11)190-191(1997))는 COX-2 선택저해제의 사용이 각막상피장해를 경감하는 것을 시사하고 있지만, 이 해결을 위한 구체적 기재는 없다.

본 발명자들은 비스테로이드성 항염증제중에서 COX-2를 선택적으로 저해하는 약제를 점안제로서 사용하여, 눈의 전안부염증질환과 세포장해성에 대하여 효과를 검토하여 본 발명을 완성시켰다.

즉, 본 발명은 COX-2 선택성이 높은 약물을 유효성분으로 하는 항염증성 점안제에 관한 것이다. 본 발명자들은, in vivo에서의 항염증효과와 in vitro에서의 세포장해성을 COX-1 및 COX-2의 선택성을 갖는 화합물로부터 선택하여 시험을 시도 한 결과, COX-2 선택성이 높은 약물을 유효성분으로 하는 항염증성 점안제가 우수한 항염증효과 및 세포장해성의 경감을 나타내는 것을 발견하였다. 본 발명은 각막상피세포 혹은 결막세포와 같은 세포에 대한 장해성이 경감한 항염증제 및 각막상피 장해성이 적은 점안제를 제공하는 것이다.

도 1은 에토돌락의 전방천자(穿刺)에 의하여 상승한 PGE₂함량에 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.

도 2는 에토돌락의 전방천자에 의하여 상승한 단백함량에 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.

본 발명의 점안제에 사용하는 COX-2의 선택성이 높은 비스테로이드성 항염증성 약제의 바람직한 예로서는, 에토돌락(1,8-diethyl-1,3,4,9-tetrahydropyrano[3,4-b]indole-1-acetic acid), N-(2-(시클로헥실옥시)-4-니트로페닐)메탄술폰아미드(NS-398) 및 멜록시캄(4-hydroxy-2-methyl-N-(5-methyl-2-thiazolyl)-2H-1,2-benzothiazine-3-carboxamide 1,1-dioxide)을 들 수 있다.

본 발명의 점안제는 무균제제가 바람직하고, 에토돌락 혹은 NS-398은 용해제로서 피마자유, 참기름 혹은 기타의 계면활성제를 사용하여도 좋고 연고제로서도 좋다.

멜록시캄도 또 동일하게 COX-2의 선택성이 높은 약제이고, 상기 약제에 비교 하여 수용성이 높은 것에 특징이 있고, 수용성 점안제로서 사용할 수 있고, 연고제로서도 사용할 수 있다.

이와 같은 염증성질환에 사용되는 약제의 바람직한 농도는, 수용성 제제인 멜록시캄은 0.1%로부터 1%의 농도로, 에토돌락 및 N-(2-(시클로헥실옥시)-4-니트로페닐)메탄술폰아미드와 같이 유제제(油製劑)로 하였을 때에는 0.5%로부터 5%이고, 각각 염증모델실험에서 효과를 나타낸다.

세포장해성에 관하여는, 각막상피세포 및 결막세포에 있어서 COX-2 선택성이 있는 약제는, 어느 것이나 세포장해성이 적은 것이었다. 특히 약제에 오래 폭로하였을때, 각막상피 장해성이 적은 것이 명백하게 되었다.

이와 같이 각막상피세포 혹은 결막세포 등의 세포장해가 적은 점안제, 특히 각막상피장해의 발생을 적게 한 항염증작용을 기대할 수 있는 COX-2 선택적 저해제가 점안제로서 적용되는 것은 본 발명이 처음이다.

이하, 실시예 및 시험예에 의하여 본 발명을 더욱더 상세히 설명한다.

실시예 1

에토돌락 5g

파라옥시벤조산프로필 0.01g

파라옥시벤조산메틸 0.05g

피마자유 100mL로 한다.

피마자유 80mL에 에토돌락, 파라옥시벤조산프로필 및 파라옥시벤조산메틸을 가하여 용해한 후, 피마자유로 100mL로 하고, 제균여과하여 본 발명의 점안제를 얻 었다.

실시예 2

N-(2-(시클로헥실옥시)-4-니트로페닐)메탄술폰아미드

5g

파라옥시벤조산프로필 0.01g

파라옥시벤조산메틸 0.05g

피마자유 100mL로 한다.

피마자유 80mL에 N-(2-(시클로헥실옥시)-4-니트로페닐)메탄술폰아미드, 파라옥시벤조산프로필 및 파라옥시벤조산메틸을 가하여 용해한 후, 피마자유로 100mL로 하고, 제균여과하여 본 발명의 점안제를 얻었다.

실시예 3

멜록시캄 0.5g

Tween-80 0.5g

메틸셀룰로오스 0.5g

붕산 0.1g

EDTA 0.005g

염화벤잘코늄 0.005g

0.1N 염산/0.1N 수산화나트륨 pH 7.2로 될때까지

정제수 100mL로 한다.

정제수 80mL에 멜록시캄, Tween-80(Polysorbate-80), 메틸셀룰로오스, 붕산, EDTA 및 염화벤잘코늄을 가하여 용해하였다. 0.1N 염산 또는 0.1N 수산화나트륨으로 pH 7.2로 조정하고, 정제수로 100mL로 하고, 제균여과하여 본 발명의 점안제를 얻었다.

본 발명의 점안제의 용법, 용량은 환자의 증상, 연령 등에 의하여 변동하지만, 통상 1일 1∼6회, 1회 1∼2적이 점안된다.

시험예 1 백색 집토끼 전안부 염증에 대한 효과

체중 1.8∼2.4kg의 일본 백색종 웅성 집토끼(일본 의과학 동물자재 연구소)를 각 군 6∼7마리로서 사용하였다.

헤파린(다께다 약품공업) 250U/kg을 집토끼의 귀정맥내에 투여후, 피검물질을 양쪽 눈에 약 60μL 점안하였다. 그후 45분후에 베녹실 점안액(산텐제약)으로 국소마취를 실시한 후, 27G 주사침으로 전방수(前房水)를 전량 채취하였다. 이것을 1차 방수라 한다. 방수 채취 90분후에 집토끼를 과량의 벤토바르비탈나트륨으로 마취사시킨후, 방수를 재차 채취하였다. 이것을 2차방수로 한다.

채취한 2차방수중의 프로스타글란딘 E₂(이하 PGE₂라 칭한다) 농도 및 단백량을 측정하고 염증의 지표로 하였다. PGE₂ 농도는, 방수 100μL를 Bond Elute C₁₈ 컬럼으로 전처리후, 바이오트랙 PGE₂ EIA 시스템(아마샴)을 사용하여 측정하였다. 또, 단백량은 Bovine serum albumin(나카라이)를 표준단백으로서 Lowry법으로 측정하였다.

피험물질인 에토돌락은 국방(局方:약전) 피마자유에 0.5%와 5% 농도로 용해 하였다. 멜록시캄은 생리식염수로 희석하여 사용하였다.

도 1 및 도 2에 도시하는 바와 같이, 에토돌락은 전방천자에 의한 방수중의 PGE₂ 함량 및 단백함량의 증대를 억제하였다.

또, 표 1에 나타내는 바와 같이 멜록시캄은 0.1%로부터 1.0%의 농도의 범위에서 단백 및 PGE₂량의 증대를 억제하고, 다른 약제에 비하여 현저한 효과를 나타낸다.

전방천자에 의하여 상승한 단백함량에 미치는 멜록시캄의 효과

	컨트롤	멜록시캄
	컨트롤	0.1%	0.5%	1.0%
단백량 (mg/ml) 저해율	22.9±1.0	16.2±1.9^** 29.3%	11.0±1.5^*** 52.2%	12.0±2.1^*** 47.6%
PGE₂함량 (pg/ml) 저해율	2717.4±506.8	680.6±239.9^* 75.0%	253.5±67.0^*** 90.7%	158.3±30.0^*** 94.2%
각각의 값은 11∼12안(眼)의 평균이다. , , **: P＜0.05, 0.01, 0.001:Dunnett 검정

시험예 2 LPS에 의해 야기된 포도막염에 대한 영향

체중 1.7∼2.4kg의 일본 백색종 웅성 집토끼를 각 군 12∼16안을 사용하였다.

집토끼 귓바퀴 정맥으로부터 E.coli 유래의 리포폴리사카라이드(LPS)(055:B5 type, Sigma)를 1.25㎍/kg 투여하고, 포도막염을 야기시켰다. LPS 투여 4hr후, 집토끼를 과량의 벤토바르비탈·나트륨(도꾜카세이)로 마취사시킨후, 전방수를 채취 하였다.

채취한 방수중의 PGE₂ 농도 및 단백량의 측정은 실시예 1과 동일하게 행하였다.

더욱이, 피험물질은 LPS 투여 1hr 전에, 양쪽 눈에 약 60μL를 각각 점안하였다.

피험물질인 NS-398은 국방피마자유로 0.5%와 5.0% 농도로 용해 또는 현탁하였다. 멜록시캄은 생리식염수로 희석하여 사용하였다.

표 2에 표시하는 바와 같이, NS-398은 PGE₂량의 증대를 현저히 억제하였다. 또 표 3에 표시하는 바와 같이, 멜록시캄은 0.1%로부터 1.0%의 범위로 단백 및 PGE₂량의 증대를 현저히 억제하고, 항염증작용이 우수한 것이 판명되었다.

LPS에 의해 야기된 포도막염에 대한 NS-398의 효과

	컨트롤	NS-398
		0.5%	5.0%
PGE₂함량 (pg/ml) 저해율	1336.3±380.1	455.3±118.6^## 65.9%	542.8±79.8^# 59.4%
각각의 값은 12∼16안의 평균이다. #, ##: P＜0.05, 0.01: Dunnett 검정

LPS에 의해 야기된 포도막염에 대한 멜록시캄의 효과

	컨트롤	멜록시캄
	컨트롤	0.1%	0.5%	1.0%
단백질 (mg/ml) 저해율	24.2±0.3	16.0±1.9^** 33.8%	14.3±2.6^** 40.8%	12.2±1.8^*** 49.4%
PGE₂함량 (pg/ml) 저해율	2500.4±647.3	1102.8±139.4 55.9%	780.9±189.4^** 68.8%	922.8±291.2^** 63.1%
각각의 값은 12안의 평균이다. , *: P＜0.01, 0.001: Dunnett 검정

시험예 3 각막상피세포 및 결막세포에 대한 시클로옥시게나아제 저해약의 영향

사용세포: 각막세포는 SV40 불사화 사람 각막상피세포주(Araki-Sasaki et al. IOVS 36:614-621, 1995)를 결막세포는 Chang 사람결막세포주(ATCC CCL-20.2)를 사용하였다.

시험방법: 세포를 96 구멍 플레이트로 배양하고, 30∼50% confluent한 후, 배지에서 단계희석한 피험물을 가하여, 37℃에서 배양하였다. 배양후, PBS(-)로 세척하고, 잔존한 세포수를 β-헥소사미니다아제 활성으로 측정하였다.

독성의 평가법: 피험물을 용해한 용매만으로 처치한 군을 음성대조로 하고, 그의 값을 세포생존수 100%로 하여, 각 피험물 농도의 세포생존율에 의한 용량상관곡선을 작성하고, 그 곡선으로부터 생존율 50%의 피험물농도(EC50)를 독성치로 하였다.

표 4에 나타내는 바와 같이, COX-2의 상대활성이 큰 에토돌락은, 인도메타신 혹은 디클로페낙나트륨과 같은 COX-1, COX-2 선택성이 작은 화합물에 비하여 각막상피세포 및 결막세포에 대하여 세포장해성이 약하였다. 이 사실은 각막장해성이 적은 비스테로이드성 항염증제의 개발에 길을 여는 것이다.

또 표 5에 나타내는 바와 같이 멜록시캄은 각막상피세포 및 결막세포에 대한 장해성이 약하였다.

각막상피세포 및 결막세포에 대한 스테로이드성 항염증제의 영향

	각막상피세포 EC50(mM)	결막세포 EC50(mM)
디클로페낙나트륨	0.30	0.13
인도메타신	0.57	0.37
에토돌락	1.00	0.80
피험물의 폭로시간 24hr

	각막상피세포 EC50(mM)		결막세포 EC50(mM)
피험약물의 폭로시간	24hr	48hr	24hr	48hr
멜록시캄	1.0<	0.84	0.97	0.38
디클로페낙나트륨	0.63	0.23	0.23	0.22

본 발명의 COX-2를 선택적으로 저해하는 약제는, 점안제로서 각막장해성이 적은 안염증성질환의 치료에 현저한 효과를 나타낸다. 특히 멜록시캄은 결막세포에 비하여, 각막상피세포에 장시간 폭로한 경우에도 우수한 효과를 나타낸다.

Claims

시클로옥시게나아제-2를 선택적으로 저해하는 약제를 유효성분으로 하는 안염증성질환을 치료하는 점안제.
제 1 항에 있어서, 시클로옥시게나아제-2를 선택적으로 저해하는 약제가 에토돌락인 것을 특징으로 하는 점안제.
제 2 항에 있어서, 에토돌락의 농도가 0.5∼5%인 것을 특징으로 하는 점안제.
제 1 항에 있어서, 시클로옥시게나아제-2를 선택적으로 저해하는 약제가 N-(2-(시클로헥실옥시)-4-니트로페닐)메탄술폰아미드인 것을 특징으로 하는 점안제.
제 4 항에 있어서, N-(2-(시클로헥실옥시)-4-니트로페닐)메탄술폰아미드의 농도가 0.5∼5%인 것을 특징으로 하는 점안제.
제 1 항에 있어서, 시클로옥시게나아제-2를 선택적으로 저해하는 약제가 멜록시캄인 것을 특징으로 하는 점안제.
제 6 항에 있어서, 멜록시캄의 농도가 0.1∼1%인 것을 특징으로 하는 점안제.