JPWO2004004738A1 - 角結膜上皮細胞障害治療薬又は予防薬 - Google Patents

Abstract

ミソプロストールのようなプロスタグランジンＥ類を有効成分とする角結膜上皮細胞障害治療用又は予防用点眼剤；プロスタグランジンＥ類と抗炎症剤を有効成分とする角結膜上皮細胞障害治療用又は予防用点眼剤を提供する。角膜又は結膜の物理的、化学的、機械的損傷に起因する、角膜又は結膜上皮細胞障害及び内因性角膜又は結膜上皮細胞障害に対し高い治療及び／又は予防効果を有する。

Description

本発明は、眼科用の角結膜上皮細胞障害治療薬又は予防薬に関する。更に詳しくは薬物、特に抗炎症剤等の薬物により生じた角結膜上皮細胞障害やプロスタグランジン類の減少により生じた角結膜上皮細胞障害の治療及び／又は予防効果を有する点眼薬に関する。

角膜は、眼球の前極にあって水晶体前房を透明に覆っており、上皮細胞層、ボーマン膜、実質層、デスメ膜及び内皮細胞層からなる整然とした層構造を有する組織である。角結膜上皮細胞障害は、角膜ヘルペス、細菌性角膜潰瘍、神経麻痺性角膜炎、糖尿病性角膜症、シェーグレン症候群、ドライアイ等の内因性疾患を伴う角結膜上皮細胞障害、又は術後、薬剤性、外傷、コンタクトレンズ装着等による外因性疾患又は物理的若しくは化学的障害によって生じ、病因によっては上皮の再生が認められない難治性角膜障害に進行し、視力障害や失明に至る。角膜実質の規則的、整然とした格子様構造の形成過程で、何らかの原因で角膜上皮細胞が損傷を受けた場合、角膜細胞の働きをする物質が角膜損傷の治癒に重要な働きをすることが推定される。
白内障手術、網膜手術や硝子体切除術、角膜癌の放射線治療などの合併症として角膜潰瘍等の角膜炎を発症する。この角膜炎の治療又は予防のためベタメサゾン等のステロイド及びジクロフェナックナトリウム等の非ステロイド性抗炎症剤が使用されるが、これら薬剤は炎症症状に対して治療上非常に有効な薬剤群である。しかしながらこれら薬剤の使用により、特に長期使用により角結膜上皮細胞障害、角結膜潰瘍を誘発し角膜融解に至り失明に至ることが知られている（Ｊｕｌｉａｎｎｅ Ｃ．Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ，ＡＲＣＨ ＯＰＨＴＨＡＬＭＯＬ．１１８ ＡＵＧ ２０００ １１２９−１１３２）。
視力の回復には、角膜上皮の正常な再生被覆が速やかに行われる必要がある。角結膜上皮細胞障害の治癒の機序は、第１相から第３相まであり、第１相は上皮細胞の接着・伸展・移動、第２相は上皮細胞の増殖、第３相は上皮細胞の分化からなり、第３相を経て初めて整然とした層構造をもつ上皮に戻る。これらの過程を修復する薬剤の開発が求められ、ヒアルロン酸、フィブロネクチンの点眼液等があるが満足のいくものでなく効果のある薬剤の開発が望まれている。
一方、プロスタグランジン類（以下「ＰＧ」と称する。）は哺乳類の組織又は器官に含有され、広範囲の生理活性を示す有機カルボン酸の１群であり、一般的な構造特性として、プロスタン酸骨格を有する。
ＰＧＥ_１，ＰＧＥ_２及びＰＧＥ_３は血管拡張、血圧降下、胃酸分泌減少、腸管運動亢進、子宮収縮、利尿、気管支拡張及び抗潰瘍作用を持つことが知られている。眼科領域におけるＰＧの応用については、ＰＧＦ_２α同属体が眼圧降下作用を有することが記載されている（Ａｌｍ，Ｔｈｅ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ｉｎ Ｇｌａｕｃｏｍａ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｏｐｈｔｈａｍｏｌｏｇｙ，ｖｏｌｕｍｅ ４，Ｎｏ．１１，４４−５０；１９９３）。
Ｐｅｄｒｏ Ｃｏｒｔｉｎａ ｅｔ ａｌ（Ｇｒａｅｆｅ’ｓ Ａｒｃｈ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ ２３５；１８０−１８５；１９９７）は、通常は嫌気性で且つ還元状態にある水晶体上皮細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ培養において、ジクロフェナックナトリウムの２５，５０及１００μＭが上皮細胞の増殖を抑制することで白内障手術時の副作用としての後発白内障を抑制するとしている。そしてＰＧＥ_２の１，１０，５０及び１００μＭの付加により上皮細胞の増殖が起こることから後発白内障のような細胞増殖による病態にＰＧＥ_２の関与を示唆している。しかし、角膜上皮細胞の障害回復については何等記載していない。
山本は、日本眼科学会雑誌（１０３（３）Ｐ−１６４；１９９９）に、家兎角膜片の研究について次のように発表している。ジクロフェナックナトリウムやインドメサシンのようなプロスタグランジン合成阻害剤は、単独では角膜上皮の伸張に影響を与えないが、表皮成長因子（ＥＧＦ）を同時に添加するとＥＧＦによる上皮伸長促進作用が阻害される。上皮細胞培養ではジクロフェナックナトリウム等は上皮の増殖及びＥＧＦによる増殖促進作用に影響を与えないが、ＥＧＦ添加により上皮細胞液中のＰＧＥ_２，ＰＧＦ_２α濃度が対照群に比べ上昇している。
同じ研究グループの月山らは第６６回中部眼科学会講演抄録集（Ｅ−Ｗ−２；２０００）に、角膜上皮細胞の単層培養において、一定面積の欠損部を作成した場合、ＥＧＦ添加で欠損部が減少し、プロスタグランジン合成阻害剤は単独では欠損部の面積に影響を与えないが、ＥＧＦとの同時投与で上皮創傷治癒促進作用を有意に抑制したことを発表している。ＥＧＦの添加が培養液中のＰＧＥ_２、ＰＧＦ_２α濃度を有意に上昇していることを述べているが、外部から添加されたＰＧについては何等記載していない。
同様に月山らは日本眼科学会誌（１０５ Ｐ３５；２００１）に、角膜上皮細胞の単層培養において欠損部を作成した場合にＥＧＦの添加は欠損部の創傷治癒を促進し、ジクロフェナックナトリウムの添加はこの上皮創傷治癒を抑制することを記載している。そしてＰＧＦ_２α誘導体であるラタノプロスト（Ｌａｔａｎｏｐｒｏｓｔ）の追加投与は上皮創傷治癒の有意な回復を認めたが、Ｌａｔａｎｏｐｒｏｓｔの単独投与では効果を認めていない。ＰＧＥ_２誘導体である１６，１６−ジメチルプロスタグランジンＥ_２（１６，１６−ｄｉｍｅｔｈｙｌ ＰＧＥ２）については、単独投与においてもＥＧＦとジクロフェナックナトリウムとの同時投与においても、角膜上皮創傷治癒に対する効果は認められなかった。何れにしろ、これらの結果は、ＰＧＥ_２誘導体の角結膜上皮細胞障害に対する効果に付いて何等記載も示唆もしていない。
抗炎症剤の副作用の典型として経口投与された場合の胃粘膜障害がある。ＰＧ類には粘膜保護作用があり、Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ ２１（２）８５−９１（１９９２）には、ジクロフェナックナトリウムとＰＧ誘導体であるミソプロストール（Ｍｉｓｏｐｒｏｓｔｏｌ、以下「ＭＳ」と称する）の合剤が胃潰瘍の発生を抑え、抗炎症活性は依然として維持されていることが報告されている。
同様に、ＷＯ９２／２１３５０には、非ステロイド性抗炎症剤とプロスタグランジンＥ類であるミソプロストール、プロスタグランジンＥ１（ＰＧＥ１）、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、１５Ｒ−メチルプロスタグランジンＥ２（１５Ｒ−ｍｅｔｈｙｌ ＰＧＥ２）、１６，１６−ジメチルプロスタグランジンＥ１（１６，１６−ｄｉｍｅｔｈｙｌ ＰＧＥ１）、１６，１６−ジメチルプロスタグランジンＥ２（１６，１６−ｄｉｍｅｔｈｙｌ ＰＧＥ２）の併用は副作用を軽減し、関節リュウマチ、骨粗鬆症治療剤としての有用性が記載されている。
この胃粘膜障害を軽減させるために非ステロイド性抗炎症剤の場合にシクロオキシゲナーゼ（以下「ＣＯＸ」と称する）の選択性のある薬剤すなわち、メロキシカムのようなＣＯＸ−２選択性のある薬剤が開発され市場においても一定の評価を受けている。しかしながら胃粘膜障害が完全には消失していない。選択性も相対的なものでＣＯＸ−２の活性もある程度残存しているからである。
眼科領域においては、眼の白内障手術時おいて抗炎症剤としての非選択的ＣＯＸ阻害剤に代わり、メロキシカムのようなＣＯＸ−２選択的抗炎症剤の使用が角膜細胞の損傷を軽減するとの技術が開示されている（ＷＯ９９／５９６３４）。しかしながら、ＣＯＸの選択性は相対的なものであり、ＣＯＸ−２活性を完全に抑えたものではなく、角結膜上皮細胞障害の治癒又は予防には別の手段が必要である。

このような実状から本発明の目的は、角結膜上皮細胞障害、特にＰＧＥ類の減少に起因する角結膜上皮細胞障害又は薬物に起因する角結膜上皮細胞障害の治療又は予防薬を提供することである。
本発明は種々の原因により生じた角結膜上皮細胞障害を治療又は予防する点眼剤であって、プロスタグランジン類を有効成分とする点眼剤に関するものである。
すなわち本発明は、以下に示す角結膜上皮細胞障害治療用又は予防用点眼剤を提供するものである。
１．プロスタグランジンＥ類を有効成分とする角結膜上皮細胞障害治療用又は予防用点眼剤。
２．プロスタグランジンＥ類が、ミソプロストール、プロスタグランジンＥ１（ＰＧＥ１）、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、１５Ｒ−メチルプロスタグランジンＥ２（１５Ｒ−ｍｅｔｈｙｌ ＰＧＥ２）、１６，１６−ジメチルプロスタグランジンＥ１（１６，１６−ｄｉｍｅｔｈｙｌ ＰＧＥ１）、１６，１６−ジメチルプロスタグランジンＥ２（１６，１６−ｄｉｍｅｔｈｙｌ ＰＧＥ２）、オキシプロストール及びこれらの低級アルキルエステルからなる群から選ばれる上記１記載の点眼剤。
３．角結膜上皮細胞障害が、プロスタグランジンＥ類の減少に起因することを特徴とする上記１又は２記載の点眼剤。
４．角結膜上皮細胞障害が、薬物に起因することを特徴とする上記１又は２記載の点眼剤。
５．角結膜上皮細胞障害の起因となる薬物が、抗炎症剤である上記４記載の点眼剤。
６．角結膜上皮細胞障害の起因となる抗炎症剤が、シクロオキシゲナーゼを非選択的に阻害する薬物である上記５記載の点眼剤。
７．角結膜上皮細胞障害の起因となるシクロオキシゲナーゼを非選択的に阻害する薬物が、ジクロフェナックナトリウムである上記６記載の点眼剤。
８．プロスタグランジンＥ類と角結膜上皮細胞障害の起因となる薬物を有効成分とする角結膜上皮細胞障害治療用又は予防用点眼剤。
９．角結膜上皮細胞障害の起因となる薬物が抗炎症剤である上記８記載の点眼剤。
１０．プロスタグランジンＥ類と抗炎症剤の質量比が１：２５〜５００００である上記９記載の点眼剤。
１１．プロスタグランジンＥ類がミソプロストールであり、抗炎症剤がジクロフェナックナトリウムである上記１０記載の点眼剤。
１２．ミソプロストールの濃度が０．０１μＭから１０μＭである上記１１記載の点眼剤。
１３．ジクロフェナックナトリウムの濃度が０．０１％から０．５％である上記１１記載の点眼剤。

図１は、本発明のＭＳの角膜上皮細胞障害に対する効果を示すグラフである。
図２は、本発明のＭＳの結膜上皮細胞障害に対する効果を示すグラフである。

本発明に使用されるプロスタグランジン類はプロスタグランジンＥ類であればいずれであっても良いが、ＭＳ、ＰＧＥ１、ＰＧＥ２、１５Ｒ−ｍｅｔｈｙｌ ＰＧＥ２、１６，１６−ｄｉｍｅｔｈｙｌ ＰＧＥ１、１６，１６−ｄｉｍｅｔｈｙｌ ＰＧＥ、オキシプロステロール及びこれらの低級アルキルエステル（例えば、炭素原子数１〜５の低級アルキルエステル）が好ましく、ＭＳが最も好ましい。
本発明はＭＳ単独の使用でも良いが、非選択性抗炎症剤のような角結膜上皮細胞障害の起因となる薬剤を眼科領域で使用する場合は、合剤として配合することも可能である。
本発明で用いられる非選択性抗炎症剤は、例えばジクロフェナック、インドメタシン、フルルビプロフェン、イブプロフェン等があげられるが、ジクロフェナックが好ましい。
プロスタグランジン類の使用量は単独の使用又は合剤の場合も０．００１μＭから１０μＭが望ましいが、点眼時において涙液に希釈されることを考えれば１０μＭ以上でも良い。また、ジクロフェナックナトリウムのような抗炎症剤と使用するときは、抗炎症剤の濃度によるが、抗炎症剤の質量１に対してＭＳの使用量は２５から５００００分の１の使用量が望ましい。一般的に抗炎症剤を点眼剤に使用する場合は０．０１％から０．５％の範囲で使用されるが、最も好ましい濃度は０．１％である。その場合には抗炎症剤の質量１に対してＭＳの使用量は２５から５００００分の１の使用量が望ましい。しかしながら、これらの濃度に限定されるものではない。
本明細書の中で用いる「点眼剤」という用語は、点眼液、眼還流液、眼軟膏剤又は凍結乾燥剤の剤形、すなわち目の治療に関する全ての剤型を含む。本発明の点眼剤は、任意の剤形で角結膜上皮細胞障害の治療又は予防薬として使用されるが、特に点眼液、眼還流液、クリーム、眼軟膏剤又は凍結乾燥剤の剤形とすることが好ましい。しかし、これらに限定されるものではない。点眼液、眼軟膏剤、クリームとする場合、添加剤としてデヒドロ酢酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸メチル等の保存剤、塩化ナトリウム、グリセリン等の等張化剤、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール等の増粘剤、エデト酸ナトリウム、多糖類等の安定化剤の一般的なものを使用することができるが、これらに、限定されるものではなく、眼生理的に許容されるものであればよい。上記各種剤型に添加される緩衝液としては、等張でｐＨ４−９、ｐＨ５−９の無刺激のものを使用することが好ましい。
本発明の点眼剤の例を以下に示す。
製剤例１
ミソプロストール ０．００２％
リン酸緩衝液 １．０ ％
塩化ベンザルコニウム ０．００１％
ポリソルベート８０ ０．５ ％
純水 全量を１００％とする
本発明の角膜疾患治療剤の用法、用量は、患者の症状、年齢等により変動するが、点眼液は通常、１日１−５回、１回当たり１−５滴点眼するのが良い。眼軟膏剤の場合は、通常、１日１−３回、角結膜嚢内に適量を塗布して使用する。
以下、本発明を実施例に基づき具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。

〔試験例〕
ＭＳのジクロフェナックナトリウムに起因するヒト角膜上皮細胞障害及びヒト 結膜細胞障害に対する効果
使用細胞：角膜細胞はＳＶ４０不死化ヒト角膜上皮細胞株（ＨＣＥＣ）（Ａｒａｋｉ−Ｓａｓａｋｉ ｅｔ ａｌ．ＩＯＶＳ ３６：６１４−６２１，１９９５）を、結膜細胞はＣｈａｎｇヒト結膜細胞株（ＣＣＬ−２０．２）（ＡＴＣ ＣＣＣＬ−２０．２）を使用した。
実験：細胞を１０％血清を含む増殖培地で５ｘ１０^４細胞／ｍＬに調整し、９６ウェルマルチプレートに１００μＬ／ウェルで播種し３７℃で一晩培養した。３０−５０％コンフルエントとした後、新鮮培地に溶解し、段階希釈したＭＳ、さらにジクロフェナックナトリウムを加え、３７℃、２４時間培養した。培養後、ウェルを洗浄し、新鮮培地を１００μＬ／ウェルおよびＷＳＴ−８（同仁化学：Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ−８）を１０μＬ／ウェルで加え、更に１．５時間培養後、４５０ｎｍ−６６０ｎｍの吸光度を測定し、残存した細胞数を計測した。
毒性の評価法：いずれの被験物も添加しない群を陰性対照とし、その吸光度を細胞生存率１００％として、各被験物濃度の細胞生存率による用量相関曲線を作成した。
表１及び図１にＳＶ４０不死化ヒト角膜上皮細胞の非ステロイド性抗炎症剤による角膜障害に対するミソプロストールの防御効果を示す。
非ステロイド性抗炎症剤であるジクロフェナックナトリウムは０．２５ｍＭから１ｍＭの範囲で細胞障害を起こし、ミソプロストールの０．０１μＭから１００μＭは細胞障害を改善した。ミソプロストール１００μＭの高濃度ではミソプロストールそのものによる細胞障害が認められた。

〔結果〕
図１及び表１から、ジクロフェナックナトリウムの０．２５、０．５及び１ｍＭは用量依存的に角膜上皮細胞の増殖を阻害した。この濃度は、上述した水晶体上皮細胞の増殖を阻害する濃度の１０倍に相当する。ＭＳの０．０１μＭから１０μＭの添加で有意に細胞増殖を増大させた。ＭＳの１００μＭは、ＭＳ自身に細胞毒性が認められた。
表２及び図２にヒト結膜上皮細胞の非ステロイド性抗炎症剤による角膜障害に対するミソプロストールの防御効果を示す。

〔結果〕
図２及び表２からジクロフェナックナトリウムの０．１２５、０．２５及び０．５ｍＭの範囲で用量依存的に結膜上皮細胞障害の増殖阻害が認められた。ＭＳの０．１，１及び１０μＭは細胞増殖阻害を回復した。ジクロフェナックナトリウムの高濃度では効果が低下していた。ＭＳ１００μＭではＭＳ自身に細胞毒性が認められた。

本発明は、ミソプロストールのようなプロスタグランジンＥ類を有効成分とする角結膜上皮細胞障害治療用又は予防用点眼剤であり、角膜又は結膜の物理的、化学的、機械的損傷に起因する、角膜又は結膜障害及び内因性角膜又は結膜障害に対し高い治療効果を有する。特にジクロフェナックナトリウムのような非ステロイド性抗炎症剤による角膜障害すなわち、細胞増殖阻害を抑制する効果がある。

Claims (13)

1. プロスタグランジンＥ類を有効成分とする角結膜上皮細胞障害治療用又は予防用点眼剤。
2. プロスタグランジンＥ類が、ミソプロストール、プロスタグランジンＥ１（ＰＧＥ１）、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、１５Ｒ−メチルプロスタグランジンＥ２（１５Ｒ−ｍｅｔｈｙｌ ＰＧＥ２）、１６，１６−ジメチルプロスタグランジンＥ１（１６，１６−ｄｉｍｅｔｈｙｌ ＰＧＥ１）、１６，１６−ジメチルプロスタグランジンＥ２（１６，１６−ｄｉｍｅｔｈｙｌ ＰＧＥ２）、オキシプロストール及びこれらの低級アルキルエステルからなる群から選ばれる請求項１記載の点眼剤。
3. 角結膜上皮細胞障害が、プロスタダランジンＥ類の減少に起因することを特徴とする請求項１又は２記載の点眼剤。
4. 角結膜上皮細胞障害が、薬物に起因することを特徴とする請求項１又は２記載の点眼剤。
5. 角結膜上皮細胞障害の起因となる薬物が、抗炎症剤である請求項４記載の点眼剤。
6. 角結膜上皮細胞障害の起因となる抗炎症剤が、シクロオキシグナーゼを非選択的に阻害する薬物である請求項５記載の点眼剤。
7. 角結膜上皮細胞障害の起因となるシクロオキシゲナーゼを非選択的に阻害する薬物が、ジクロフェナックナトリウムである請求項６記載の点眼剤。
8. プロスタグランジンＥ類と角結膜上皮細胞障害の起因となる薬物を有効成分とする角結膜上皮細胞障害治療用又は予防用点眼剤。
9. 角結膜上皮細胞障害の起因となる薬物が抗炎症剤である請求項８記載の点眼剤。
10. プロスタグランジンＥ類と抗炎症剤の質量比が１：２５〜５００００である請求項９記載の点眼剤。
11. プロスタグランジンＥ類がミソプロストールであり、抗炎症剤がジクロフェナックナトリウムである請求項１０記載の点眼剤。
12. ミソプロストールの濃度が０．０１μＭから１０μＭである請求項１１記載の点眼剤。
13. ジクロフェナックナトリウムの濃度が０．０１％から０．５％である請求項１１記載の点眼剤。

Images