JPWO2007132831A1 - 保存安定性に優れたs−アデノシル−l−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法、その製造物及び経口摂取用組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
酵素的合成法については、酵母などの微生物より単離精製したSAMe合成酵素(メチオニンアデノシルトランスフェラーゼ)を用い、アデノシン5’−三リン酸(ATP)とL−メチオニンを基質としてSAMeを酵素的に合成する方法であるが、この方法は、醗酵法と比べ、SAMeの蓄積量が多く、菌体からのSAMe抽出操作が必要ないなどの利点はあるものの、酵素の調製が煩雑であること、得られる酵素の活性が微弱であること、ATP分解酵素等の妨害物質を除去する必要があること、さらには、基質であるATPが極めて高価であるなど様々な問題を有し、必ずしも実用的な方法とは成り得なかった。
また、近年の遺伝子工学の発展により、クローン化したSAMe合成酵素遺伝子を用いることによって該酵素の調製がより簡便になり(例えば、非特許文献6〜9参照)、酵素調製の問題は解決されつつあるものの、依然として高価なATPを基質として使用する必要があるなど、他の実用上の問題は解決されていない。
即ち、本発明は、以下の(1)〜(8)に示す、保存安定性に優れたSAMeを高濃度に含む乾燥酵母の製造方法、該製造方法で得られたSAMe含有乾燥酵母、及び該乾燥酵母を用いて成型された経口摂取用組成物に関するものである。
(1)S−アデノシル−L−メチオニン生産能を有する酵母を用い、S−アデノシル−L−メチオニンを含有する乾燥酵母を製造する方法において、酵母の菌体培養液より分離した酵母菌体濃縮物にアスコルビン酸類又はその塩を添加した後に、該濃縮物を乾燥させることを特徴とする、S−アデノシル−L−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
(2)S−アデノシル−L−メチオニン生産能を有する酵母として、サッカロマイセス属に属する酵母を用いる、上記(1)に記載のS−アデノシル−L−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
(3)サッカロマイセス属に属する酵母がサッカロマイセス・セレビジエである、上記(2)に記載のS−アデノシル−L−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
(4)添加するアスコルビン酸類又はその塩が、アスコルビン酸若しくはアスコルビン酸誘導体、又はそれらの塩である、上記(1)に記載のS−アデノシル−L−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
(5)添加するアスコルビン酸類又はその塩が、L−アスコルビン酸又はL−アスコルビン酸ナトリウムである、上記(1)に記載のS−アデノシル−L−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
(6)アスコルビン酸類又はその塩の添加量が、酵母菌体濃縮物中に含まれるS−アデノシル−L−メチオニンに対して、0.05〜5倍モルの範囲であることを特徴とする、上記(1)に記載のS−アデノシル−L−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
(7)上記(1)〜(6)の何れかに記載した方法によって製造された、S−アデノシル−L−メチオニン含有乾燥酵母。
(8)上記(7)に記載のS−アデノシル−L−メチオニン含有乾燥酵母を用いて成型された経口摂取用組成物。
培地への炭素源、窒素源、各種無機塩類、各種添加剤等の培養成分の供給方法は、一括若しくは個別に連続的又は間欠的に行う。例えば、蔗糖、エタノール等の基質は他の培地成分との混合物として培養槽に供給してもよく、また他の培地成分とは別に独立して培養槽に供給してもよい。培養液のpH制御は、酸、アルカリ溶液によって行われる。アルカリとしては窒素源として使用されるアンモニア、尿素、又は非窒素系塩基、例えば、苛性ソーダ、苛性カリ等を用いてpH制御するのが望ましい。酸としては無機酸、例えば、リン酸、硫酸、硝酸、又は有機酸が用いられる。なお、無機塩類であるリン酸塩、カリウム塩、ナトリウム塩、硝酸塩等を用いてpHを制御することもできる。
アスコルビン酸又はその塩としては、L−アスコルビン酸、又はL―アスコルビン酸ナトリウムやL―アスコルビン酸カリウムなどのアルカリ金属塩、或いはL―アスコルビン酸カルシウムなどのアルカリ土類金属塩等が挙げられる。アスコルビン酸誘導体又はその塩としては、アスコルビン酸2−グルコシド、アスコルビン酸リン酸エステル、アスコルビン酸パルミチン酸エステル、アスコルビン酸ステアリン酸エステル又はそれらの塩等が挙げられる。そのうち、好ましくはアスコルビン酸又はその塩であり、より好ましくはL−アスコルビン酸又はL−アスコルビン酸ナトリウムであり、特に好ましくはL−アスコルビン酸ナトリウムである。アスコルビン酸類又はその塩は、粉末状、顆粒状、又は結晶状の形で医薬品や食品用途で汎用されており、安全に使用することができる。
(a)酵母菌体の培養
前述した公知の培養法(Schlenk F.,DePalma R.E.,J.Biol.Chem.,229,1037-1050(1957)(非特許文献1),Shiozaki S.,et all,Agric.Biol.Chem.,53,3269-3274(1989)(非特許文献3))に従って、L−メチオニン含有培地(Shiozaki S.,et all,J.Biotechnology,4,345-354(1986)(非特許文献6))にサッカロマイセス属に属する酵母サッカロマイセス・セレビジエIFO2346を接種し、培養温度27〜29℃で好気的に通気攪拌通気拌しながら6日間培養した。その結果、菌体濃度3.5質量%,SAMe含量205mg/g−乾燥酵母の酵母菌体培養液18Lを得た。
(b)酵母菌体の集菌
上記の酵母菌体培養液18Lを連続ロータリー型遠心分離器(日立HIMAC CENTRIFUGE CR10B2)で処理し、菌体濃度が乾物換算で18質量%に相当する液状の酵母菌体濃縮物3.49kgを得た。
(c)酵母菌体濃縮物へのアスコルビン酸類又はその塩の添加
上記の酵母菌体濃縮物3.49kgにL−アスコルビン酸ナトリウムを該酵母濃縮物中のSAMeに対して0.05、0.1、0.2、0.6、1.0、3.0、5.0又は6.0倍モル加えて、室温にて30分間攪拌溶解し、L−アスコルビン酸ナトリウムを添加した酵母菌体濃縮物を得た。
(d)乾燥酵母の製造
上記のL−アスコルビン酸ナトリウムを添加した酵母菌体濃縮物を凍結乾燥器(日本真空技術株式会社製)の凍結乾燥用ステンレストレーに流し込み−50℃で凍結した後、最終棚段温度25℃の条件で36時間凍結乾燥した。得られた凍結乾燥酵母をさらに粉砕することによって粉末乾燥酵母を得た。このようにして得られた粉末乾燥酵母を密閉ガラス容器中に詰め、40℃、RH75%の加速条件下、及び30℃の温度条件下で保存安定性試験を行った。表1(実施例1−1〜8−1)及び図1に40℃、RH75%での結果を、表2(実施例1−2〜8−2)及び図2に30℃での結果を示す。得られた粉末乾燥酵母中のSAMe含量を表1及び表2に示す。
なお、SAMe残存率は、SAMe含有乾燥酵母より過塩素酸を用いた公知の方法(例えば、非特許文献2)でSAMeを抽出し、液体クロマトグラフィーによって定量した。なお、液体クロマトグラフィーには以下の分析条件を用いた。
カラム:ナカライ(nacalai tesque) COSMOSIL 4.6φ×100mm
溶離液:0.2M KH2PO4水溶液/メタノール=95/5(体積比)
流速:0.7mL/min、検出器:UV(260nm)、SAMe保持時間:約150秒
酵母菌体濃縮物にL−アスコルビン酸を該酵母濃縮物中のSAMeに対し0.6、1.8、3.1又は4.3倍モル添加したこと以外は実施例1と同様に処理して、粉末乾燥酵母を得た。得られたSAMe含有乾燥酵母の密閉ガラス容器中、40℃、RH75%の加速条件下での保存安定性試験の結果を表1(実施例9−1〜12−1)に、30℃の温度条件下での保存安定性試験の結果を表2(実施例9−2〜12−2)に示す。得られた粉末乾燥酵母中のSAMe含量を表1及び表2に示す。
酵母菌体濃縮物にL−アスコルビン酸カルシウムを該酵母濃縮物中のSAMeに対し0.3、0.8、1.4、1.9又は2.5倍モル添加したこと以外は実施例1と同様に処理して粉末乾燥酵母を得た。得られた粉末乾燥酵母中のSAMe含量、及び得られた粉末乾燥酵母の密閉ガラス容器中、40℃、RH75%の加速条件下での保存安定性試験の結果を表1(実施例13−1〜17−1)に示す。
酵母菌体濃縮物にL−アスコルビン酸カリウムを該酵母濃縮物中のSAMeに対し0.5、1.5、2.5、3.5又は4.5当量を添加したこと以外は実施例1と同様に処理して粉末乾燥酵母を得た。得られた粉末乾燥酵母中のSAMe含量、及び得られた粉末乾燥酵母中の密閉ガラス容器中、40℃、RH75%の加速条件下での保存安定性試験の結果を表1(実施例18−1〜22−1)に示す。
実施例1と同様にして(a)から(b)までの操作を行い、得られた液状の酵母菌体濃縮物にL−アスコルビン酸、又はL−アスコルビン酸ナトリウムを酵母菌体濃縮物中のSAMeモルに対し1.0倍モル加えて、室温にて30分間攪拌、溶解し、L−アスコルビン酸又はL−アスコルビン酸ナトリウム溶解酵母菌体濃縮物を得た。
この酵母菌体を微粒子化装置として二流体ノズルを有するスプレードライヤを用いて、乾燥室の入口温度145℃、出口温度85℃、通液速度1.5g/分の条件にて噴霧乾燥し、粉末乾燥酵母を得た。得られた粉末乾燥酵母中のSAMe含量、及び得られたSAMe含有乾燥酵母の密閉ガラス容器中、40℃、RH75%の加速条件下での保存安定性試験の結果を表3(実施例23−1,24−1)に示す。
酵母菌体濃縮物へアスコルビン酸類又はその塩を添加しなかったこと以外は実施例1と同様に処理して、粉末乾燥酵母を得た。得られた粉末乾燥酵母中のSAMe含量を表1及び表2に示す。得られたSAMe含有乾燥酵母の密閉ガラス容器中、40℃、RH75%の加速条件下での保存安定性試験の結果を表1(比較例1−1)及び図1に示す。30℃の温度条件下での保存安定性試験の結果を表2(比較例1−2)及び図2に示す。
酵母菌体濃縮物にクエン酸を該酵母濃縮物中のSAMeモル比に対し2.8当量を添加したこと以外は実施例1と同様に処理して、粉末乾燥酵母を得た。得られた粉末乾燥酵母中のSAMe含量、及び得られたSAMe含有乾燥酵母の密閉ガラス容器中、40℃、RH75%の加速条件下での保存安定性試験の結果を表1(比較例2−1)に示す。
酵母菌体濃縮物にEDTAを該酵母濃縮物中のSAMeモル比に対し1.9当量を添加したこと以外は実施例1と同様に処理して、粉末乾燥酵母を得た。得られた粉末乾燥酵母中のSAMe含量、及び得られたSAMe含有乾燥酵母の密閉ガラス容器中、40℃、RH75%の加速条件下での保存安定性試験の結果を表1(比較例3−1)に示す。
実施例1(c)の操作において、(b)で得られた酵母菌体濃縮物に、pH2、3又は4となるように硫酸を添加した後、L−アスコルビン酸ナトリウムを該酵母濃縮物中のSAMeに対し0.6,1.0,1.7,2.8又は3.9倍モル添加したこと以外は実施例1と同様に処理して粉末乾燥酵母を得た。得られた粉末乾燥酵母中のSAMe含量、及び得られた粉末乾燥酵母の密閉ガラス容器中、40℃、RH75%の加速条件下での保存安定性試験の結果を表4(実施例25−1〜35〜1)に示す。
の保存安定性試験結果。
※実施例9−1〜12−1はL−アスコルビン酸を添加(乾燥法は凍結乾燥)
※実施例13−1〜17−1はL−アスコルビン酸カルシウムを添加(乾燥法は凍結乾燥)
※実施例18−1〜22−1はL−アスコルビン酸カリウムを添加(乾燥法は凍結乾燥)※比較例2−1はクエン酸を添加(乾燥法は凍結乾燥)
※比較例3−1はEDTAを添加(乾燥法は凍結乾燥)
※実施例9−2〜12−2はL−アスコルビン酸を添加(乾燥法は凍結乾燥)
※実施例5−1はL−アスコルビン酸ナトリウムを添加(乾燥法は凍結乾燥)
※実施例9−1、10−1はL−アスコルビン酸を添加(乾燥法は凍結乾燥)
※実施例23−1はL−アスコルビン酸ナトリウムを添加(乾燥法は噴霧乾燥)
※実施例24−1はL−アスコルビン酸を添加(乾燥法は噴霧乾燥)
Claims (8)
- S−アデノシル−L−メチオニン生産能を有する酵母を用い、S−アデノシル−L−メチオニンを含有する乾燥酵母を製造する方法において、酵母の菌体培養液より分離した酵母菌体濃縮物にアスコルビン酸類又はその塩を添加した後に、該濃縮物を乾燥させることを特徴とする、S−アデノシル−L−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
- S−アデノシル−L−メチオニン生産能を有する酵母として、サッカロマイセス属に属する酵母を用いる、請求項1に記載のS−アデノシル−L−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
- サッカロマイセス属に属する酵母がサッカロマイセス・セレビジエである、請求項2に記載のS−アデノシル−L−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
- 添加するアスコルビン酸類又はその塩が、アスコルビン酸若しくはアスコルビン酸誘導体、又はそれらの塩である、請求項1に記載のS−アデノシル−L−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
- 添加するアスコルビン酸類又はその塩が、L−アスコルビン酸又はL−アスコルビン酸ナトリウムである、請求項1に記載のS−アデノシル−L−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
- アスコルビン酸類又はその塩の添加量が、酵母菌体濃縮物中に含有するS−アデノシル−L−メチオニンに対して、0.05〜5倍モルの範囲であることを特徴とする、請求項1に記載のS−アデノシル−L−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
- 請求項1〜6の何れかに記載した方法によって製造された、S−アデノシル−L−メチオニン含有乾燥酵母。
- 請求項7に記載のS−アデノシル−L−メチオニン含有乾燥酵母を用いて成型された経口摂取用組成物。
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