JPH03501970A - Ｓ‐アデノシル‐ｌ‐メチオニン（ｓａｍ）のアシル化タウリン誘導体との親油性塩 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 および活性成分として前記の新規な塩を含有する治療用処方に関する。

一般にＳＡＭとして知られ、生物体に広く分布するＳＡＭ、すなわちＳ−７デノ シルーメチオニンは、下記の、多くの重要な生化学的作用を示す。

（ａ）　ＳＡＭは、多くのメチル基転移反応において、メチル基供与体として作 用する； （ｂ）　ＳＡＭは、この分子をメチルチオアデノシン（ＭＴＡ　）とホモセリン に変える特異的リアーゼの基質である。。

（ｃ）　ＳＡＭは、ｔＲＮＡに対するアミノ酪＠鎖供与体として作用する； （ｄ）　ＳＡＭは、ビオチンの生合成におけるアミノ酸鎖供与体でらる； （ｅ）　ＳＡＭは、アデノシル成分供与体でろる；（ｆ）　ＳＡＭは、リジン− １，３−アミノムターゼ、スレオニンシンターゼ、ピルビン酸ギ酸リアーゼおよ ヒＮ５−メチルテトラヒドロ葉酸−ホモジスティン　メチルトランスフェラーゼ のプロモーターでろる；（２）　ＳＡＭは、Ｈリボヌクレアーゼ、メチレン　テ トラヒドロ葉酸　レダクターゼおよびエタノールアミンリン酸　シチジルトラン スフェラーゼのインヒビターである； に）　ＳＡＭは、バクテリア化学走性と白血球化学走性に必要とされる； （ｉＪ　ＳＡＭは、原核生物および真核生物のＤＮＡ　レストリクシ冒ン　シス テムとＤＮＡ　モディフィケーションシステムに必要とされる。

しかも、その脱カルボキシル化合物、すなわち、Ｓ−７デノシルー（５’）−５ −メチルチオプロピルアミン（ｄｅｃａ　−８ＡＭ　）は、ポリアミン類の生合 成反応におけるプロピルアミン基供与体として作用する。

８ＡＭおよびｄｅｃａ　−ＳＡＭの多方面にわたる生物学的役割を論じた最近の 包括的論文がちる（　Ｚａｐｐｉａ　Ｖ、他、’　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　ａｎ ｄ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　Ａｄｅｎｏｓｙｌ−ｍ ｅｔｈｉｏｎｉｎｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｎｅｒｖｏｕｓ　８ｙ ｓｔｅｍ”　、第１ページ、Ｚａｐｐｉａ　Ｖ、他、Ｅｄｓ、、　Ｐｅｒｇａｍ ｏｎ　Ｐｒｅｓｓ　Ｎ、　Ｙ、　。

１９７９年；　Ｐａ１ｋ　Ｗ、他、”　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏ ｎ”　。

Ｍａｉｓｔｅｒ　Ａ、　Ｅｄ、、　Ｊ、　Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ　Ｎ、　Ｙ 、、　１９８０年；”Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｓ−Ａｄｅｎｏｓｙｌ ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ　ａｎｄ　Ｒｅ１ａ−ｔｅｄ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”　、 　Ｕｓｄｉｎ　Ｅ、他、Ｅｄｓ、、Ｍａｃ　Ｍ目ｔａｎＰｒｅｓｓ　Ｌ、　ｔ、 　Ｄ、、　１９８２年）。

これらの複合生物学的役割を有するので、ＳＡＭは次表に要約した一連の効果を 発現する。

このＳＡＭは、システィンを含有する培地に成育したイーストから得られる（Ｃ ａｎｔｏｎｉ　Ｇ、　Ｌ、　、　’Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ 　’　、第３巻、第６００ページ、１９６７年）。

このＳＡＭの製造は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓａｅを用い て培養をすることによって行なわれる。本発明による実験においては、このＳＡ Ｍの製造は、新規にノ・１“バープロジュースした微生物８ａｃｃｈａｒｏｍｙ ｃｅｓ　５ａｋｅ　Ｋｙｏｋａｉ　ｎ、　６を用いて行なった（　Ｙａｍａｄａ 、　Ｍ、他、”　Ｔｈ１ｒｄ　ＥｕｒｏｐｅａｎＣｏｎｇｒｅｓｓ　ｏｎ　Ｂｉ ｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　’　、第１巻、Ｖｅｒｌａｇ　Ｃｈｅ　−ｍｉ　ｅ、 　Ｗｅ　１ｎｈｅ　ｉｍ　）。

収率が増大し、培養培地１を当Ｉ）９２のＳＡＭを得ることができた。

薬物としてＳＡＭを大規模に利用する場合の主な問題点は、この化合物分子の熱 に対する安定性がよくないことである。実際、生物学的に活性な形態である５’ −［（３８）−３−アミノ−３−カルボキシプロピルコメチル−（Ｓ）−スルホ ニノ］−５′−デオキシアデノシンは、特に、近くにおるスルホニウム基によっ て高度に活性化されたアミノ酸のγ−メチレンのカルボキシルの炭素の分子内求 核性アタックを受けて、容易に減成される（　Ｚａｐｐｉａ　Ｖ。

他、”　Ｔｒａｎｓｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ’　、　Ｕｓｄｉｎ　Ｅ、他、Ｆｄ ｓ、　Ｅｌｓｅ　−ｖｉｅｒ　Ｎ、　Ｙ、、　１９７９年；　Ｚａｐｐｉａ　Ｖ 、他、’Ｍｅｔｈｏｄ　ｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ’　、第９４巻、第７３ペー ジ、１９８３年）。

この方法は、きわめて低いｐＨ値での還元が顕著でアシ、アミノ酸性のカルボキ シル基のイオン化を防止する。イオン化が可能な部位が多く存在するため、ＳＡ Ｍの電荷状態はｐＨの関数で示される。

ｐＨが酸性の場合、ＳＡＭは多電荷カチオンとして行動する。結晶固体としての その塩は、アニオンの特性と関同様、この場合もまた、ＳＡＭは減成して主とし てメチルチオアデノシン（ＭＴＡ）とホモシスティンになる。

特に安定な塩類が最近開示されている（アメリカ特許第４０５７６８６号公報） 。また経口投与が可能な同種の塩類も開示されている（ヨーロッパ公開特許第１ ６２５２４号公報）。

ＳＡＭの塩類は一般に水溶性であり、ときにはｐＨ値によって水溶性となる。経 口投与後のそのパイオアベラビリティは通常はそれ程高くはない。

式Ｉ ＳＡＭ”（Ｒ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）、−８Ｏ３−）。

で表わされる親油性アシルタウリンとのＳＡＭの塩類は、医薬組成物または化粧 料組成物を製造するのに特に有利な、すぐれた諸性質を有していることが今や明 らかとなった。

２．５までのｐＨ値では、ＳＡＭの電荷状態は、事実上親油性のカチオン−アニ オンの相互作用をひきおこし、解離性が乏しい塩を生ずる。この塩は溶液から沈 殿して白い固体を生成する。

５までの高いｐＨ値では、ゲル系のものが得られる。その硬さは生成するＳＡＭ 塩の濃度の関数である。５を超えるｐＨ値では、ＳＡＭの電荷状態は、カチオン −親油性アニオンの相互作用（ストイチオメトリーがα５以上でおることが特徴 である。）をおこす。これらの塩類は疎水性に乏しく、それ故に十分に水溶性で ある。このＳＡＭのストイテオメトリーは媒質のｐＨ値に左右するだけでなく、 使用するアシルタウリンの疎水性の程度によってもきまる。塩の安定性と沈殿の 収率のためには、ストイテオメトリー１：４〜５（ＳＡＭモル：親油性アニオン 塩）が特に好ましく、これは炭素原子数が１２〜２６の７シルタウリン類に関し ては、ｐＨ値１〜ｔ５の範囲で得られる。

式ＩのＳＡＭ塩類はワックス状の白い固体であって、ノ・イドログロスコピツク （ｈｙｄｒｏｇｒｏｓｃｏｐｉｃ　）ではなく、室温では安定である。それ故、 医薬または化粧料に使用することができる。

これらは水には溶解せず、有機溶媒には溶解する。

また、式Ｉの親油性塩の２種のものを含有するクロロホルム溶液を蒸発させるこ とによシ、脂肪相の溶液、特にレシチンの溶液を製造するのにも便利でちる。ミ セル溶液および／またはリポソーム溶液は、式１の塩類を水中で超音波処理する ことによシ容易に製造することができる。同一のｐＨ値では、ミセル溶液やリポ ソーム溶液は、溶液中の８ＡＭの化学安定性が他の塩類の化学安定性より高いの が特徴である。

ミセル溶液およびリポソーム溶液は、凍結乾燥またはスプレー乾燥して固体相に する。

これは分散しやすく、水を加えることによシ安定なミセル溶液および／またはリ ポソーム溶液を生成する。この作用は、活性成分を迅速に吸収させる注射剤およ び経口剤の処方には特に興味深いものである。

ＳＡＭの沈殿は、ｐＨ１〜ｔ５で行なうのが好ましい。

スルホニウム化合物のきわめて希薄な溶液（く１／μｍ）からでさえ収率が高い 。最も望ましいｐＨ値とＳＡＭの濃度（＝　３０　ｍＭ）では沈殿の収率は９０ ％以上でわシ、この２相の分離は室温で数分内に完了する。ｐＨを調整し、攪拌 しなからＳＡＭ溶液に５〜６倍モル過剰の、アシルタウリン濃厚水溶液を加える ことによシ、一般に沈殿が生成する。この方法は絶対に臨界的なものではなく、 転化処置（アシルタウリン溶液へのＳＡＭ添加）は収率や沈殿塩のストイテオメ トリーを変化させない。生成した沈殿を、通常は、デカンティシＬへ遠心分ＩＩ ＩＩまたは濾過によシ回収する。通常はそれを水で洗浄し、５０℃以下の温度で 乾燥する。別法として、その塩を水で洗浄した後、クロロホルム／アセトン（１ ：１　■／ｖ）に溶解し、溶媒と残留水を共沸混合物として、真空下に蒸発する 。

また別法として、ＣＨＣｌ３／アセトンの比が１：２（Ｖ／■）となるまでアセ トンを加えることにより、その有機溶媒からこの塩類を沈殿させることもできる 。その後、沈殿を常法通シに回収する。

酸性水溶液からのＳＡＭの沈殿は、中性分子またはイオン分子が高濃度で存在し ても妨けられることはない。スルホニウム化合物の減成主生成物であるＭＴＡが 存在すると、親油性ＳＡＭ塩が選択的に沈殿するから、このことは極めて特異的 なことである。

触媒としてジメチルアミノピリジンの存在下、化学量論上やや過剰の活性形態の カルボン酸（塩化物、無水物、イミダゾリッドなど）とタウリンを反応させるこ とによシ、アシルタウリン類を都合よく製造することができる。

この反応は、溶媒中、または、アシル化剤が液体である場合には溶媒なしで、不 一均相において行なうことがで＠、ｇｏ℃でＶｉ数時間で完了する。溶媒を蒸発 し、その残液を石油エーテルで洗浄した後、それがミセル質および／またはリポ ソーム質のスーツぐ一モレキュラー集合体を形成している場合には、水に溶解す るようになる。分子量１０，０００で切捨てるメンプランを用いてそれを透析に 付して、低分子量の水溶性夾雑物質を取シ除く。このようにして生成した溶液は 、８ＡＭの沈殿に直接用いることができる。

式Ｉの塩は、顕著なパイオアペラビリティを有することが特徴でおる。いろいろ なルートで、（Ｍｅｔ−Ｃ）ＳＡＭ−オレイルタウリンおよび（Ｎｅｔ　−Ｃ） 　ＳＡＭ−ミリストイルタウリンを投与した後の、ラットにおける血漿中の濃度 は、（Ｍｅｔ−Ｃ）　ＳＡＭ−サルフエイ）ｔたは（Ｍｅ　ｔ　−１４Ｃ）　Ｓ ＡＭ−サルフエイトーパラトルエンスルホネートを投与した後に得られるものよ り著しく高い。

類と比較すると、アシルタウリンＳＡＭは著しく改善されている。実際、アシル タウリンは、それが天然物に由来しているために、パイオアペラビリティが高く 、ＳＡＭの１り／ｄｉｅに相当する投与量より高い投与量で投与した場合でさえ も、禁忌がおこらないことが特徴でちる。

このようにして、ＳＡＭの安定形態のおるもの〈従来用いられた、天然物でない スルフォン・アニオンは、一般に代謝されることがなく、好ましくない副作用を おこすけれども、アシルタウリン類は、一般に生物体中に存在するアミダーゼに よって減成されてタウリンと脂肪酸を生成する。これらのものは、食物と一緒に 極めて大量に日々取シいれられている、らシふれた細胞質成分でおる。

他の既知の塩類と比較すると、式１の親油性塩類には下記の顕著な利点がおる。

すなわち、 （ａ）　化学安定性： （ｂ）　油溶性； （Ｃ）　安定なリポソーム・サスペンションおよび／またはミセル・サスペンシ ョンを生成することができること；（ｄ）ハイオアペラビリティが高いとと；（ ｅ）　低毒性； （ｆ）　現在まで使用されている経口剤および注射剤の形態以外に、たとえば直 腸剤または外用剤のような製剤形態にも製造することができること； （ｇｌ　使用する親油性アニオンは、生体親和性がめシ、その生体内劣化は生物 体中に通常存在する分子成分を放出する。

それ故、本発明はまた、活性成分としてＳＡＭの親油性塩の−を通常の担体と混 和状態にして含有する医薬組成物または化粧料組成物に関するものである。

本発明の医薬組成物は、ＳＡＭについての既知の治療適応のすべてに対して使用 することができる。これらは老化の諸プロセスと相関関係がおる病理学において 特に有用である。

本発明の化粧料は、皮膚の老化の諸プロセスの予防と処置に特に有用でちり、更 に一般的には、細胞の再生に効果がある処方の組成物として有用でちる。

本発明の医薬組成物の実例には、経口剤、注射剤、直腸剤または外用剤に適した 製剤があシ、たとえばカプセル剤、錠剤、全開、バイアル、クリームなどである 。

本発明の化粧料組成物の実例には、クリーム、ペースト、ローシｌン、エマルジ ョン、乳液、オイルなどがちる。

その１日量および投与形態は、二・三の７アクター（使用目的、患者の状態など ）によシ定まる。しかし、これらは、その組成物の毒性が極めて低いために１− 件一件の生薬について、いずれにしろ臨界的でないやり方で、容易に決定される 。

本発明の組成物は、補佐的活性を有するその他の治療上または美容上効果がある 薬物を含有することができる。

以下、実施例を挙げて不発Ｆ！Ａｔ１−説明するが、この実施例は本発明の範囲 を限定するものではない。

実施例１ Ｓｈｉｏｚａｋｉ　Ｓ、他の方法（Ａｇｒｉｃ、　Ｂｉｏｌ　、　Ｃｈｅｍ、第 ４８巻、第２２９３ページ、１９８４年）Ｋ従りて、１ｓｔの酢酸エチルでセル ２ァ・ペーストを処理し、その後３０分して２４１のαｓＮ　Ｈ，ＳＯ２を加え ることによシ、メチオニン強化培養培地に生育した９　Ｋ９の８ａｃｃａｒｏｍ ｙｃｅｓ　５ａｋｅ　ｋｙｏ−ｋａｉ　ｎ、　６を溶解した。これを濾過し、洗 浄して、［１４に９のＳＡＭを含有する６０１の抽出物を得た。この抽出物Ｏｐ Ｈ値をＮａＯＨで４．５に調整した。６ｔのイオン交換樹脂（１００〜２００メ ツシユ、Ｂｉｏ　Ｒｅｘ　７０　＠　）のカラムを用いて精製した。チャージン グをした後、このカラムを１０ｔの蒸溜水と５（ｌｔのＱ、　５　ＮＨ２・ｓｏ ４で洗った。

次いで、１０ｔのＩＩＬ５ＮＨ２Ｓ０４で１ＱＮｓＡＭを溶出した。集めた溶出 液は、力価が１５　ｆ／ｌであった。

この溶液ＱｐＨ値１ＮａＯＨで１にすると、オレイルタウリンが沈殿した。

このオレイルタウリンは、１４００−の無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中 にサスペンドした１７５２のタウリンを、触媒として１２のジメチルアミノピリ ジン（ＤＭＡＰ）の存在下、１１４Ｅｌ’の無水オレイン酸と７０℃で、１０時 間反応させることによシ製造することができる。真空下で溶媒を除去した後、油 状の残渣をエチルエーテルを用いた倍散をくシ返えして、５．３２２のオレイル タウリンをワックス状の白色固体として得た。

ＣＤＣｚｓ中で記録したそのＩＨ−ＮＭＲスペクトルは、アシル基のシグナルを 、δ５．３　；２．９　；２．４　；ｔ６　；ｔ３　；α９の位置に、タウリン のシグナルを、δ　五７と４．７の位置に、正しいインテグレーション・レイジ オで示した。

次に、２ｔの水に溶解した４６１ｆのオレイルタウリンを、ｐＨ１で、３　ｍＭ 　ＳＡＭの７ｔの水溶液に攪拌しながら添加した。

沈渣しやすい白色の沈殿が直ちに沈殿した。液体相を遠心分離した後、その沈殿 を１ｔの水で２回洗浄し、凍結乾燥して五９５２のワックス状白色固体（その８ ｔＭニオレイルタウリンのストイテオメトリーは、１：４．２でちる。）を得た 。

実施例２ ２ｔの水に溶解した１０２ｆのオレイルタウリンを用いて、１６ｔの１３ｍＭ　 ＳＡＭ溶液にｐＨ１１テ沈殿をオコさせた。白色固体が沈殿し、これを濾過した 。これを水で洗浄し、凍結乾燥して８７．９ｆの塩（８ｔＭニオレイルタウリン は１：４．３である。）を得た。

実施例３ ５００ｄの無水ピリジンにサスペンドし７’（１２５５’のタウリンヲ４５０２ の塩化アラキドン酸と５０℃で１０時間反応させた。真空下で溶媒を蒸発させた 後、その油状残渣をまずエチルエーテルで倍散した。次いでミセル系および／ま たはリポソーム系の形態にして水に溶解した後、水で透析し、低分子量の夾雑物 質を取シ除いた。

ＣＤＣｚｘ中で記録したＨ−ＮＭＲスペクトルは、正しいインテグレーション・ レイジオで、δ５．３；２−８；２．４；ｔ９；ｔ６；ｔ３；（１９の位置にア シル基のシグナルを、δ　３五７および４．６の位置にタウリンのシグナルを示 した。

２ｔのＨ，０に溶解した３７０２のアルキドニルタウリンを用いて、室温で、攪 拌下、ｐＨ１で、５．５ｔの五３ｍＭＳＡＭ溶液に沈殿をおこさせた。その沈殿 を加圧濾過によシ回収し、０．５ｔのＨ２Ｏで２回洗浄してから３ｔのＣＨＣＬ ３−アセトン１　：　１　（Ｖ／Ｖ）に溶解した。次にこの有機溶液を真空下で 蒸発した。

３５０りのワックス状白色固体を得た。そのＳＡＭ：アラキトニルタウリンのス トイチオメトリーは１：４．３であった・ 実施例４ 実施例３と同様に、７４（１’のアラキトニルタウリンを用いて、ｐＨ１で、１ １ｔの３３　ｍＭ　ＳＡＭ溶液に沈殿をおこさせ、その沈殿を遠心分離により集 めた。この沈殿をＨ２Ｏで２回洗浄した後、まず５ｔのｃｎｃｔｓに溶解し、次 いで１０ｔのアセトンを添加することによシ親油性塩を沈殿させた。

濾過によシ集めた生成物を不活性ガス流中で乾燥し、５８０９の１　：　４．５ 　ＳＡＭ−アラキトニルタウリン塩を得た。

実施例５ 実施例１で得た２００Ｆ（７）ＳＡＭ−オレイルタウリン塩を、３ｔのＣＨＣＬ ３に溶解した。

２００２の大豆レシチンをこの溶液に添加し、次いでこれを蒸発して、ＳＡＭ塩 のレシチン溶液と考えられる４００２のソフト・ペーストを得た。

５０ｆのこのペーストを１ｔのＨ２Ｏ中で超音波処理して、経時的に安定なミセ ル溶液および／またはリボンーム溶液を生成した。

補正書の写しく翻訳文）提出書 （特許法第１８４条の８） 平成２年４月９日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １） 一般式 ＳＡＭｎ＋〔Ｒ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＳＯ−３〕ｎ式中、Ｒ−ＣＯは炭 素原子数が、１〜２６であり、飽和もしくは不飽和の、直鎖または分枝鎖アシル 基あるいはシクロアルキル基で置換したアシル基を示し、ｎはＳＡＭの電荷に対 応して３〜６を示す。 で表わされるＳ−アデノシルーメチオニン（ＳＡＭ）の親油性塩 ２） 一般式 ＲＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＳＯ３Ｈ （式中、Ｒは前記と同義である。） で表わされるタウリンのアシル誘導体の水溶液と、ＳＡＭの水溶液とを、酸性の ｐＨ値で、室温下に反応させ、生成した沈殿をデカンテーション、ろ過または遠 心分離によって集め、水で洗浄して乾燥することを特徴とする請求項１に記載の 塩を製造する方法 ３） ＳＡＭを多量に含有させたイースト細胞の抽出液から、ＳＡＭ溶液を直接に得る ことを特徴とする請求項２に記載の方法 ４） ｐＨ値を１〜１５に保つことを特徴とする請求項２または３に記載の方法 ５） 洗浄した沈殿をＣＨＣｌ３−アセトン混液に溶解した後、溶媒と痕跡の水を共沸 混合物として、真空下に蒸発させることにより乾燥を行なうことを特徴とする請 求項２〜４に記載の方法 ６） 洗浄して、ＣＨＣｌ３−アセトン１：１（Ｖ／Ｖ）混液に溶解した沈殿を、ＣＨ Ｃｌ３／アセトンの割合が１：２（Ｖ／Ｖ）となるまでアセトンを添加すること により、この有機溶液から再沈殿させて、デカンテーション、遠心分離またはろ 過により回収し、次いで乾燥することを特徴とする請求項２〜４に記載の方法 ７） 乾燥を凍結乾燥により行なうことを特徴とする請求項２〜４に記載の方法 ８） ＳＡＭ塩と脂質化合物を含有する有機溶液を蒸発させることにより、ＳＡＭ塩と 脂質化合物を混合することを特徴とする請求項２〜７の方法 ９） ＳＡＭ塩またはＳＡＭ塩と親油性化合物との混合物を超音波処理して、ミセル溶 液および／またはリポソーム溶液を生成することを特徴とする請求項２〜６に記 載の方法１０） 適当な担体と混合して、請求項１に記載のＳＡＭ塩を含有することを特載とする 医薬組成物 １１） 適当な担体と混合して、請求項１に記載のＳＡＭ塩を含有することを特徴とする 化粧料組成物