JPS63267726A

JPS63267726A - 抗腫瘍剤

Info

Publication number: JPS63267726A
Application number: JP62100062A
Authority: JP
Inventors: Takeo Nomura; 武男野村; Shigehiro Yamamoto; 山本　茂博; Hiroshi Suzuki; 宏鈴木; Itaro Kokuni; 小國　伊太郎; Setsuko Kanetani; 金谷　節子; Keiko Nasu; 那須　恵子
Original assignee: Terumo Corp
Current assignee: Terumo Corp
Priority date: 1987-04-24
Filing date: 1987-04-24
Publication date: 1988-11-04

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は抗腫瘍剤に関する。特に茶葉より抽出した新規
な抗腫瘍剤に関する。

［従来の技術］茶（Ｃａｎ＋ｅｌｌｌａ　５ｌｎｅｎｓｌｓ　Ｌ、）　
、特に緑茶中に薬理効果を有する成分が含まれているこ
とは知られており、それらの成分としてビタミンＣ１カ
フエイン、キサンチン、タンニン、ゲラニオール、クロ
ロフィル、サポニン等が挙げられる。

抗腫瘍作用を有する成分としては、茶タンニン混合物及
びその主成分である０・ｅｐｉｇａｌ　ｌｏ　−ｃａｔ
ｅｃｈｉｎ　ｇａｌ　１ａｔｅ　（Ｅ　Ｇ　Ｃｇ　）が
原征彦らによって報告されている（第４３回日本癌学会
総会記事、昭和５９年１０月、９．２８０講演名隘９９
３）。

［発明の目的］本発明者らは茶葉について種々検討した結果、前記の（
−）　・ｅｐｉｇａｌ　Ｉｏ　−ｃａｔｅｃ旧ｎ　ｇａ
ｌｌａｔｅ（Ｅ　Ｇ　Ｃｇ）以外にも、茶葉を水により
抽出した抽出物からクロロホルム可溶分と酢酸エチル可
溶分とを除去したものに抗腫瘍作用を有する別の成分が
含まれていることを知り、本発明を完成させた。

従って、本発明の目的は抗腫瘍作用を有する新規な茶葉
抽出成分を提供することを目的とする。

［発明の目的を達成するための手段］上記の目的は以下の構成を有する本発明によって達成さ
れる。

１）茶葉を水で抽出し、得られた抽出液からクロロホル
ム可溶物および酢酸エチル可溶物をそれぞれ実質的に除
去し、次いで水層を乾燥することによって得られる抗腫
瘍剤。

２）水は高温である第１項記載の抗腫瘍剤。

３）採取した上清液からクロロホルム可溶物および酢酸
エチル可溶物をそれぞれ除去したのちに更に、得られた
水溶液をブタノールで抽出精製して得られる第１項記載
の抗腫瘍剤。

４）下記の物理化学的特性を有する第１項記載の抗腫瘍
剤。

（１）　　色と形状褐色、粉末（２）赤外線吸収スペクトル第１図に示す通りである。

Ｉ　ＲνＫＢ’　ｃｍ−’　：　３４００ｃｍ″″１．
１８ＬＯａｎ−’。

ａｘ８１０印−１（３）紫外線吸収スペクトル第２図に示す通りである。

溶媒は水を使用した。

ＵＶλ　　：２６８０１１ａＸＵＶλｌ１１ｎ：２５０ｎ１１（４）高速液体クロマトグラフィー第３図に示す通りである。

溶離液は、０．０５Ｍのリン酸緩衝液とアセトニトリル
の混合物（８０：　２０）を使用し、流速は１．０ｍｌ
／分とした。

保持時間は３．２分、３．８分、４．２分、４．７分、
６．０分、７．４分、及び８．４分にピークを認めた。

（５）溶解性水　　：きわめて溶は易いメタノール：溶は易いエタノール：やや溶は易いアセトン：きわめて溶けにくいクロロホルム及び酢酸エチルにはほとんどあるいは全く
溶けない。

茶は学名をカメリア　シネンシス（Ｃａｍｅｌｌｉａｓ
Ｉｎｅｎｓｉｓ　Ｌ、）といい、ツバキ科の常緑低木で
ある。

この植物の葉から飲料がつくられる。飲料に供される茶
を大別すると緑茶、紅茶、烏屯茶の３種類がある。本発
明においては、緑茶を原料として使用する。好適には、
無農薬で栽培した緑茶生葉を乾燥したものを使用する。

本発明による抗腫瘍剤は、以下のようにして得ることが
できる。

まず茶葉の凍結乾燥物を温度４０℃〜１００℃好ましく
は８０℃〜９８℃の熱水により抽出処理する。抽出処理
は、５分〜１時間行なう。

得られた熱水抽出物をｌＯ，０００ｒｐｎ＋の速度で１
０分間遠心分離処理して上清を採取する。土浦液をクロ
ロホルムにより処理する。クロロホルム処理は、室温で
、３０分〜ＩＯ数時間数回行なわれる。この処理によっ
て得られたクロロホルム層即ちクロロホルム可溶物を含
む層を廃棄する。このクロロホルム可溶物には、茶の成
分であるクロロフィル、カフェインがある。残りの水層
を採り、クロロホルム臭が消失するまで水分を蒸発させ
、次いで、酢酸エチルにより処理する。この酢酸エチル
処理は、室温で、３０分〜ＩＯ数時間数回行なわれる。

この処理によって得られた酢酸エチル層、即ち酢酸エチ
ル可溶物を含む層を廃棄する。茶葉中の酢酸エチル可溶
物には、前記した（−）−ｅｐｌｇａｌ　Ｉｏ　−ｃａ
Ｌｅｃｈ＋ｎｇａｌｌａｔｅ　　（Ｅ　Ｇ　Ｃｇ）が含
まれる。従って前記ＥＧＣｇを含まない残−りの水層を
採り、酢エチ臭が消失するまで水分を蒸発させ、ブタノ
ールにより抽出処理する。抽出は、室温で、３０分〜１
０数時間数回行なわれる。かくして得られた抽出液から
蒸留等により溶媒を留去し、次いで種々の方法により乾
燥することによって所望の抗腫瘍作用を有する茶葉抽出
物を得ることができる。

本発明の抗腫瘍剤である茶葉抽出物の特性は次のとおり
である。

（１）　　色と形状褐色、粉末状（２）赤外線吸収スペクトル第１図に示す通りである。

８１０　ｃｍ−１（３）紫外線吸収スペクトル第２図に示す通りである。

溶媒は水を使用した。

ＵＶλ　　：　２８８ｎｓａＸＵＶλ　　：　２５０ｎｍ１ｎ（４）高速液体クロマトグラフィー第３図に示す通りである。

条件は以下の通りとした：ボンブ：センシュー科学■製　３，１００型カラム：　
ＵＮｆＳＩＬ　ＰＡＫ　Ｃ１Ｂ（ガスクロ工業■製）溶離液二〇、０５Ｍリン酸緩衝液とアセトニトリルの混
合物（８０：　２０）流速：　１．Ｏｍｌ／分検　出：ＵＶモニター　２８０ｎｍ（日本分光■製　ｔｌＮＩＤＥｃ　１００−Ｃ）試　料
：各１１００ｐｐ　　２０μｇ導入保持時間３．２分、
３，８分、４．２分、４．７分、６．０分、７．４分、
及び８，４分にピークを認めた。

（５）溶解性水　　：きわめて溶は品いメタノール：溶は易いエタノール：やや溶は易いアセトン：きわめて溶けにくいクロロホルム、酢酸エチルにはほとんど或は全く溶けな
い。

（６）急性毒性経口投与　１０００ｍｇ／ｋｇ体重（ＩＣＲマウス雄）
で毒性なし参考のために、公知の茶葉抽出物である（→・ｅｐｌｇ
ａｌ　Ｉｏ　−ｃａｔｅｃｈｌｎ　ｇａｌ　１ａｔｅ　
（Ｅ　Ｇ　Ｃｇ）の毒性を示す。

（１）　　色と形状微褐色粉末（２）赤外線吸収スペクトル第４図に示す通りである。

（３）紫外線吸収スペクトル第５図に示す通りである。

溶媒はメタノールを使用した。

ＵＶλ　　：　２７７　ｎｍａｘＵＶλ　　：　２５０　ｎ＋＊ｎ（４）高速液体クロマトグラフィー第６図に示す通りである。

条件は、本発明の抗腫瘍剤の場合と同じにした。

保持時間４．２分、５．８分、６．３分、及び１０００
分にピークを認めた。

（５）溶解性水　　：やや溶けにくいメタノール：溶は易いエタノール：溶は易いアセトン：溶は品い酢酸エチル：やや溶は易いクロロホルムにはほとんど或は全く溶けない。

以上の特性より明らかなように、本発明による茶葉抽出
物は、（−）−ｅｐｌｇａｌ　ｔｏ　−ｃａｔｅｃｈｉ
ｎ　ｇａｌ　１ａｔｅ（Ｅ　Ｇ　Ｃｇ）と種々の物理化
学的特性を異にしている。従って、本発明の茶葉抽出物
は新規な物質であることが明らかである。

本発明の茶葉抽出物は、常法に従って製剤化され投与さ
れる。例えば、本抽出物の乾燥粉末をバイアル等の容器
にいれ、別にアンプル等の容器に生理食塩水、ブドウ糖
液あるいはカルボキシルメチルセルロース（ＣＭＣ）懸
濁液を用意し、用時粉末を懸濁溶解して注射する。その
他、エマルジョンにして注射してもよい。例えば油中水
（Ｗｌｏ）型エマルジョンの場合は流動パラフィン等の
鉱物油、ゴマ油、ビーナツツ油等の植物油にソルビタン
脂肪酸エステル等の界面活性剤を組み合せて用いる。

以下本発明を実施例、製剤例及び試験例によりさらに詳
しく説明する。

実施例　１無農薬で栽培した緑茶生葉の凍結乾燥物７５ｇを室温下
で９０℃の熱水Ｊ、２４７により１０分間かけて抽出し
、ガーゼ４枚を用いて濾過した。得られた消液をさらに
ＩＯ，０００ｒｐ１１で１０分間遠心分離し、その上清
を採取した。

上清をクロロホルム８００　ｍｌにより処理して、得ら
れたクロロホルム層を廃棄した。得られた水層をさらに
、クロロホルム各６００　ｍｌにより２回抽出し、得ら
れたクロロホルム層を廃棄した。クロロホルム臭が消失
するまで水層を蒸発させ、酢酸エチル３００　ｍｌによ
り３回処理し、酢酸エチル層５．０ｇを廃棄した。

残った水層を採取し、酢酸エチル臭がなくなるまで水分
を蒸発させた。次いでブタノール各３００　ｍｌにより
３回抽出処理した。得られたブタノール抽出層を蒸発さ
せ、凍結乾燥させたところ乾固物１．４ｇが得られた。

製剤例　１実施例１で得られた茶葉抽出物１００　ａ＋ｇを無菌５
％注射用ブドウ糖溶液１００　ｍｌ中に懸濁し、この液
を１ｍｌずつバイアルに無菌的に分注し、凍結乾燥した
。このようにして１バイアル中に１ｍｇの茶葉抽出物を
含む製剤を得た。用時、注射用蒸留水に懸濁して使用す
る。

製剤例　２上記１と同様にしてバイアルに製剤をつくった。

ただし、無菌５％注射用ブドウ糖溶液１００　ｍｌの代
りに薬局法ＣＭＣの０．５％注射用生理食塩水懸濁液１
００ｍ１を使用した。用時、注射用蒸留水に懸濁して使
用する。

上記実施例１で得られた抽出物について抗腫瘍作用の効
果を測定した。

試験例　１ザルコーマ１８０固形ガンに対する効果（試料調製）リン酸緩衝食塩水（ギブコ社製、リン酸９．５ｍＭを含
む、ＰＢＳ）に０．５％カルボキシメチルセルロース（
ＣＭＣ）を懸濁させた溶液に所定ｌａ度になるように実
施例１の抽出物を溶解させた。

（ザルコーマ１８０ガン細胞移植）ＩＣＲマウス腹腔中で継代培養したザルコーマ１８０ガ
ン細胞を腹水とともにとり出し、生理食塩水で適当に希
釈して細胞数が１．ＯＸＩＯ３個／ｍｌとなるように調
製した。この懸濁液の０．１ｍｌを４週令、雄ＩＣＲマ
ウス背部皮下に注射器を用いて細胞を移植した。

（試料投与）ザルコーマ１８０腫瘍細胞を移植したマウスに移植後１
日目より連日５日間上記試料を経口的に４００　ｍｇ／
ｋｇ投与した。１試料につき８匹のマウスを使用した。

対照は、何も投与しないものとした。

（効果の判定法）ガン細胞移植後３５白目にそれぞれのマウスの固形腫瘍
の重量を測定した。

腫瘍抑制率は以下の式により求めた。

（以下余白）腫瘍抑制率（％）（結　果）上記の方法によって測定した本発明の茶葉抽出物の腫瘍
抑制率は４５．５％であった。

［発明の効果コ以上説明したように、本発明によれば、茶葉を水で抽出
したものからクロロホルム可溶分と酢酸エチル可溶分と
を除去することにより新規な抗腫瘍剤を得ることができ
る。

本発明の抗腫瘍剤は、ザルコーマ１８０移植後のマウス
に経口投与することにより、著しい腫瘍抑制効果を示す
。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の抗腫瘍剤の赤外線吸収スペクトルを
示し、第２図は紫外線吸収スペクトルを示し、第３図は
高速液体クロマトグラフィーを示す。第４図は、公知の抗腫瘍作用を有する茶葉抽出物の赤外
線吸収スペクトルを示し、第５図は紫外線吸収スペクト
ルを示し、第６図は高速液体クロマトグラフィーを示す
。

Claims

【特許請求の範囲】１）茶葉を水で抽出し、得られた抽出液からクロロホル
ム可溶物および酢酸エチル可溶物をそれぞれ実質的に除
去し、次いで水層を乾燥することによって得られる抗腫
瘍剤。２）水は高温である特許請求の範囲第１項記載の抗腫瘍
剤。３）採取した上清液からクロロホルム可溶物および酢酸
エチル可溶物をそれぞれ除去したのちに更に、得られた
水溶液をブタノールで抽出精製して得られる特許請求の
範囲第１項記載の抗腫瘍剤。４）下記の物理化学的特性を有する特許請求の範囲第１
項記載の抗腫瘍剤。（１）色と形状褐色、粉末（２）赤外線吸収スペクトル第１図に示す通りである。ＩＲν＾Ｋ＾Ｂ＾ｒ＿ｍ＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１：３４０
０ｃｍ＾−＾１、１６１０ｃｍ＾−＾１、　８１０ｃｍ
＾−＾１（３）紫外線吸収スペクトル第２図に示す通りである。溶媒は水を使用した。ＵＶλ＿ｍ＿ａ＿ｘ：２６８ｎｍＵＶλ＿ｍ＿ｉ＿ｎ：２５０ｎｍ（４）高速液体クロマトグラフィー第３図に示す通りである。溶離液は、０．０５Ｍのリン酸緩衝液とアセトニトリル
の混合物（８０：２０）を使用し、流速は１．０ｍｉ／
分とした。保持時間は３．２分、３．８分、４．２分、４．７分、
６．０分、７．４分、及び８．４分にピークを認めた。（５）溶解性水：きわめて溶け易いメタノール：溶け易いエタノール：やや溶け易いアセトン：きわめて溶けにくいクロロホルム及び酢酸エチルにはほとんどあるいは全く
溶けない。