JPS63109799A - 乾式コレステロ−ル分析要素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 し産業上の利用分野コ 本発明は血液等の体液中のコレステロール、特に蛋白結
合コレステロールを含む総コレステロールの分析に適す
る乾式分析要素に関する。

［従来の技術］ コレステロールエステルを加水分解するために、コレス
テロールエステラーゼ等の酵素を利用する方法はよく知
られている。しかしこの方法の場合に、酵素以外に蛋白
質−コレスチロールエステルの結合を破壊しコレステロ
ールエステルを解離させる手段を必要とすることもよく
知られている。

米国特許３８６９３４９号で、リパーゼとともにプロテ
アーゼを用いることが知られている。また米国特許３９
２５１６４号では、コレステロールエステラーゼととも
にポリエチレングリコールアルキルエーテルのような界
面活性剤を用いることが知られている。また、米国特許
４２７５１５１号、同４２７４１５２号には、エチレン
グリコール単位が２０未満のポリエチレングリコールア
ルキルフェニルエーテル（アルキルフェノキシポリエト
キシエタノール）が有用なことが記載されている。

しかし多孔性液体展開層（以下、多孔性展１ｆＦＩ肩又
は展開層という）を有する乾式分析要素に、エチレング
リコール単位が２０未満のポリエチレングリコールアル
キルフェニルエーテルを酵素とともに展開層に含有させ
たとき、この界面活性剤は一定時間内の液体展開面積が
大き過ぎて、比色分析の感度が低下したり、液体展開の
定員性（供給液量と展開面積の比例性）が充分でなかっ
たり、塗布液の展開層に対する濡れ特性が不充分であっ
たりする欠点があった。また、展開層と支持体との間に
ある吸水層、試薬層、光遮蔽層、接着層等の親水性バイ
ンダーからなる層にこの界面活性剤を含有させたとき、
ある層と次に塗布される層の塗布液の濡れが不充分で、
塗布が不均一になることがしばしばあった。

［発明が解決しようとする問題点］ 本発明の目的は、一定時間内の液体展開面積が適当で、
蛋白結合コレステロールを含めた総コレステロールに対
する比色分析の感度が高い乾式コレステロール分析要素
の提供にある。

本発明の他の目的は、展開層における液体展開の定量性
（供給液量と展開面積の比例性）が充分で、塗布液の均
一な塗布が可能な乾式コレステロール分析要素の提供に
ある。

［発明の構成］ 本発明の上記目的は、少なくとも一つの水透過性層と多
孔性液体展開層を液体接触しうる状態で有する乾式分析
要素であって、前記展開層にコレステロールエステル加
水分解活性（コレステロールエステルヒドロラーゼ活性
）を有する酵素を含み、前記展ｒＷｉ層又は前記の少な
くとも一つの水透過性層にアルキルフェノキシポリグリ
シドールを含む乾式分析要素によって達成された。

［発明の構成の詳細な説明］ 本発明に用いるコレステロールエステル加水分解活性を
有する酵素は、リパーゼまたはコレステロールエステラ
ーゼのいずれでもよい、リパーゼは、植物（例えば小麦
胚）を起源とするもの、動物臓器（例えば膵臓）を起源
とするもの、微生物（例えばカンジダルゴサ）を起源と
するものいずれでもよい、特にＣｈｒｏｍｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ　ｖｉｓｅｏｓｕｓから得られたものが有用で
ある。

コレステロールエステラーゼは動物臓器を起源とするも
の、微生物を起源とするもの、いずれでもよいが、微生
物を起源とするものが好ましい１例えば、米国特許３９
２５１６４号に記載されたものを用いることができる（
カンジダルゴサ、アクチノミセス属、ストレプトミセス
属、ペニシリウム属等）。

本発明に用いるアルキルフェノキシポリグリシドールは
、アルキル基が炭素数４ないし２０のものが好ましい、
アルキル基はベンゼン環に２以上置換していてもよい（
ジアルキルフェノキシポリグリシドール等）、ベンゼン
環はアルキル基以外の置換基、例えばアルコキシ基、ハ
ロゲン原子などを有してもよい０分子中のグリシドール
単位は７ないし２０の範囲が適当であるが、塗布特性、
展開特性等、目的によってグリシドール単位の数は選択
される。

アルキルフェノキシポリグリシドールはコレステロール
エステル加水分解活性を有する酵素とともに多孔性展開
層に含有させることが好ましい。

コレステロールを検出定量するためには、公知の反応の
検出試薬組成物を利用できる。公知の検出反応として次
の２種類がある。

■コレステロールをコレスプロールオキシダーゼの酵素
活性によって酸化し、生成した過酸化水素またはコレス
テノンを公知の発色（呈色）反応又はコレステノンの蛍
光により検出定量する。

■コレステロールデヒドロゲナーゼの酵素活性による脱
水素反応で、生成したコレステノンを公知の反応により
検出定量するか、脱水素反応に共役してＮＡＤ又はＮＡ
ＤＰの還元により生ずるＮＡＤＨ又はＮ　Ａ　Ｄ　Ｐ　
ｔｌを、直接光学的に検出定量するか、又はさらに化学
反応を介して生成する有色物質を光学的に検出定量する
。

■コレステロールオキシダーゼにより生成した過酸化水
素を検出する発色試薬組成物は［＾］色原体とカプラー
を含み、ペルオキシダーゼの存在下に過酸化水素により
色原体とカプラーが酸化カプリングしてキノンイミン染
料を形成して発色する組成物、または ［１’！］ロイコ色素又は自己酸化発色性色原体でペル
オキシダーゼの存在下に過酸化水素により酸化されて色
素になり発色する化合物である。

色原体としては、＾１１．　（：ｌｉｌ、　Ｂｉｏｃｂ
ｅｍ、、１２４〜２７（１９６９）に記載の４−アミノ
アンチとリン（別名４−アミノフェナジン、すなわち１
−フェニル−２，３−ジメチル−４−アミノ−３−ピラ
ゾリン−５−オン）、特開昭５９−５４９６２等に記載
の１−（２，４，６−）リクロロフェニル）−２，３−
ジメチル−４−アミノ−３−ピラゾリン−５−オン。

１−（３，５−ジクロロフェニル）−２，３−ジメチル
−４−アミノ−３−ピラゾリン−５−オン等のトリｉ！
ｆｔＡ−４−アミノー３−ピラゾリン−５−オン、特公
昭５５−２５８４０等に記載の１−フェニル−２，３−
ジメチル−４−ジメチルアミノ−３−ピラゾリン−５−
オン等の４−アミノアンチピリン類似体を用いることが
できる。これらの化合物のうちでは、４−アミノアンチ
ピリン、１−（２，４，６−）ジクロロフェニル）−２
，３−ジメチル−４−アミノ−３−ピラゾリン−５−オ
ン、１−（３，５−ジクロロフェニル）−２，３−ジメ
チル−４−アミノ−３−ピラゾリン−５−オン等が好ま
しい。

カプラーとしては、＾ｎｎ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ、、６．２４〜２バ１９６９）、特公昭５５−２５
８４０、特公昭５８−４５５９９、特公昭５８−１８６
２８、特開昭５５−１６４３５６、特開昭５６＝１２４
３９８、特開昭５６−１５５８５２等に記載のフェノー
ル、２−ヒドロキシ−１−ベンゼンスルホン酸、４−ヒ
ドロキシ−１−ベンゼンスルホン酸、３．５−ジクロロ
−２−ヒドロキシ−１−ベンゼンスルホン酸、２−ヒド
ロキシ−３−メトキシ−１−ベンゼンスルホン酸等のフ
ェノールスルホン酸（アルカリ金属塩、アルカリ土類金
属塩を含む）；１−ナフトール、２−ナフトール；１，
７−ジヒドロキシナフタレン等のジヒドロキシナフタレ
ン；１−ヒドロキシ−２−ナフタレンスルホン酸、１−
ヒドロキシ−４−ナフタレンスルホン酸等のナフトール
スルホン酸くアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩を含
む）；その他のフェノール又はナフ１−−ル誘導体があ
る。これらの化合物のうちでは、１゜７−ジヒドロキシ
ナフタレン、ｉ−ヒドロキシ−２−ナフタレンスルホン
酸（Ｎａ塩、に塩、Ｌｉ塩を含む）、３．５−ジクロロ
−２−ヒドロキシ−１−ベンゼンスルホン？！！（Ｎａ
塩、に塩、Ｌ；塩を含む）が好ましい。

ロイコ色素として、特公昭５７−５５１９に記載の２−
（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシフェニル）−４
，５−ビス［４−（ジメチルアミノ）フェニルコイミダ
ゾール等のトリアリールイミダゾールロイコ色素、特開
昭５９−１９３３５２に記載の２−（３，５−ジメトキ
シ−４−ヒドロキシフェニル）−４−［４−（ジメチル
アミノ）フェニル］−５−フェネチルイミダゾール等の
ジアリールイミダゾールロイコ色素、特開昭６１−４９
６０に記載の２−（２−フェニル−３−インドリル）−
４，５−ジ［４−（ジメチルアミノ）フェニルコイミダ
ゾール等のジアリールインドリルイミダゾールロイコ色
素、特開昭６１−２２９８６８に記載の２−（４−ヒド
ロキシ−３，５−ジメトキシフェニル）−３−アセチル
−４，５−ビス［４−（ジエチルアミノ）フェニルコイ
ミダゾール等のトリアリールモノアシルイミダゾールロ
イコ色素、２−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシ
フェニル）−３−メチル−４，５−ビ、ｔ　［４−（ジ
エチルアミノ）フェニルコイミダゾール等のトリアリー
ルモノアルキルイミダゾールロイコ色素等がある。

■Ｎ　Ａ　Ｄ　１−１またはＮＡＤＰＨを定量する方法
として、電子伝達剤の存在下に電子受容性の色素前駆体
から可視域に吸収スペクトルを有するフォルマザン色素
を形成させる比色分析法が、特開昭４９−１１３９５号
等で知られている。この反応系を用いれば、可視域の分
光測光によりＮ　Ａ　Ｄ　ＨまたはＮＡＤＰＨの定量が
できる。

電子伝達剤としては、ジアホラーゼ（ＥＣ１，６，４゜
３〉、Ｎ−メチルフェナゾニウムメトスルフェート等を
用いることができる。

フォルマザン色素前駆体としては、ＩＮＴすなわち２−
（ｐ−ヨードフ、エニル）−３−（ｐ−ニトロフェニル
）−５〜フエニルテトラゾリウムクロリド、ＢＴ　すな
わち３．３’−（３，３°−ジメトキシ−４，４′−ビ
フェニレン）ビス［２，５−ジフェニルテトラゾリウム
クロリド］、３．３’−（４，４’−ビフェニレン）ビ
ス［２，５−ジフェニルテトラゾリウムクロリド］等を
用いることもできるが、ニトロテトラゾリウムブルー（
ＮＴＢ又はＮｌ３Ｔ）すなわち３，３°−（３，３’−
ジメトキシ−４，４’　−ビフェニレン〉ビス［２−（
ｐ−、ニトロフェニル）−５−フェニルテトラゾリウム
クロリド］が好ましい。

本発明においてはデオキシコール酸又はデオキシコール
酸の塩をコレステロールエステルヒドロラーゼ活性を有
する酵素が含有される層又はその層と液体接触しうる層
（ｌ［ｉ！ｉ接層等）に含有させることができる。デオ
キシコール酸の塩としてはナトリウム塩、カリウム塩、
リチウム塩等を用いることができる。デオキシコール酸
のかわりにコール酸、リトコール酸、ケノデオキシコー
ル酸、タウロコール酸、グリコール酸、タウロデオキシ
コール酸、グリコデオキシコール酸及びこれらのナトリ
ウム塩、カリウム塩、リチウム塩等のいずれか１種又は
２種以−Ｅの組合わせを用いることができる。

本発明の要素に用いられる試薬組成物の各成分の要素中
の含有層（要素１ｚ２当たり被覆Ｉｔ）は次のとおりで
ある。

コレステロールエステラーゼ：約５ｏｏｒｕ〜約５万Ｉ
υ、好ましくは約１０００１０〜約３万ＩＵリハ−セ：
約５０ＱＯＴｔｌ〜約３０万ＴＩＪ、好ましくは１万Ｉ
Ｕ〜２０万ＩＵ アルキルフェノキシポリグリシドール：約２００ｍｇ〜
約１０ｇ、好ましくは約５００６１１？〜約５．０ｇコ
レステロールオキシダーゼ：約１０００１Ｕ〜約３万Ｉ
ＩＪ、好ましくは約１５００１Ｕ〜約２万ＩＵペルオキ
シダーゼ：約１０００１Ｕ〜約１０万、好ましくは約２
０００ｒＵ〜約６万ＩＵ色原体又はロイコ色素：約０．
５ミリモル〜約１０ミリリ、好ましくは約１ミリモル〜
約５ミリモルカプラー：約２．５ミリモル〜約５０ミリ
モル、好ましくは約５ミリモル〜約２５ミリモル デオキシコール酸又はその塩：約２００ｍＨ〜約ｌｏｇ
、好ましくは約５００６１１？〜約５．０ｇ（デオキシ
コール酸のかわりに用いられる酸又は塩の場合も同ｊｌ
） コレステロールデヒドロゲナーゼ： 約２００■Ｕ〜約３万■ｕ、好＊Ｌ＜ｌｉ約３００ＩＵ
〜約Ｚ万ＴＩＪＮＡＤまたはＮＡＤＰ：約１０＋＋ｇ〜
約５０ｇ、好ましくは約３０ｗａｇ〜約２０ｇ 電子伝達剤：約ＩＩＩｇ〜約１０００ｍｇ、好ましくは
約５糟ｇ〜約５００ａｉｇ ジアホラーゼの場合約５００１Ｕ〜約２万ＩＵ、好まし
くは約７００１Ｕ〜約１万ｒＵ フオルマザン色素前駆体：約５ＩＩｇ〜約ｔｏｇ、好ま
しくは約２５ｍｇ〜約５ｇ 本発明は公知の多種の乾式分析要素に適用することがで
きる。特に検出試薬系と被検液がいずれも透過し得る固
体担体を含む要素に適用することができる。要素は光透
過性水不透過性の支持体上に、多孔性液体展開層のほか
に下塗り層、吸水層、接着層、発色（又は呈色）試薬層
、反応試薬層、光遮蔽層、濾過層、及び公知のその他の
層を有する多層構造であってもよい、このような分析要
素として、米（ＩＩ特許第３９９２１５８号、０開昭５
５−１８４３５６号及び特開昭６０−２２２７６９号等
各明細書に記載のものがある。

支持体を用いる場合、本発明の乾式分析要素の実用的に
採りうる構成は （＋）支持体上に多孔性液体展開層を有するもの。

支持体と展開層の間に吸水層を有するものが好ましい。

（２）支持体上に試薬層、展開層をこの順に有するもの
、支持体と試薬層の間に吸水層を有してもよい。

（３）支持体上に第二試薬層、第一試薬層、展開層をこ
の順に有するもの。支持体と第二試薬層の間に吸水層を
有してもよい。

（４）支持体上に試薬層、光遮蔽層、展開層をこの順に
有するもの、支持体と試薬層の間に吸水層を有してもよ
い。

（５）支持体上に第二試薬層、光遮蔽層、第一試薬層、
展開層をこの順に有するもの、支持体と第二試薬層の間
に吸水層を有してもよい。

上記（１）ないしく５）において吸水層と試薬層又は展
開層の間、試薬層と液体展開層の間、第二試薬層と第一
試薬層の間、又は光遮蔽層と試薬層もしくは展開層の間
に、濾過層を設けてもよい。

本発明の多層分析要素には、光透過性水不透過性支持体
の上に（場合によっては下塗層等の他の層を介して）吸
水層を設けることができる０本発明の乾式分析要素に備
えられる吸水層は親水性結合剤よりなる層、すなわち水
を吸収して膨潤する親水性ポリマーを層形成成分とする
層であることが好ましい。

吸水層に用いることができる親水性ポリマーは、水吸収
時の膨潤率が３０℃で約１，５から約２０、好ましくは
約２．５から約１５の範囲の天然または合成親水性ポリ
マーである。そのような親水性ポリマーの例としては、
ゼラチン（例、アルカリ処理ゼラチン、酸処理ゼラチン
、脱イオンゼラチン等）、ゼラチン誘導体（例、フタル
化ゼラチン等）、アガロース、ボリアクリルアミド、ポ
リビニルアルコール、ポリビニルピロリドン等をあげる
ことができる。

吸水層の乾燥時の厚さは約１μｌから約１００μｌの範
囲、好ましくは約３μｌから約３０μ履の範囲である。

さらに吸水層には、必要に応じて界面活性剤（カチオン
性、両性、又はノニオン性）やｐＨ緩衝剤を含有させる
ことができる。

吸水層には、吸水層が検出層を兼ねる場合、光遮蔽性（
反射性又は光吸収性）微粒子を必要に応じて含有させる
ことができる。

吸水層、光遮蔽層、Ｖ過層、試薬層等の層の上には、展
開層を接着し積層するための接着層を設けてもよい、接
着層は水で湿潤しているとき、又は水を含んで膨潤した
ときに展開層を接着することができるような親水性ポリ
マーからなることが好ましい、接着層に用いることがで
きる親水性ポリマーの例としては、吸水層に用いられる
と同様な親水性ポリマーがあげられる。これらのうちで
はゼラチン、ゼラチン誘導体、ポリアクリルアミド等が
好ましい、接着層の乾燥膜厚は一般に約０．５μｌから
約２０μ騎、好ましくは約１μｍから約１０７１ｚの範
囲である。なお、接着層は試薬層と展開層の間の他に、
他の眉間の接着力を向上させるため所望の２１１！ｌの
間に設けてもよい、接着層は親水性ポリマーと、必要に
よって加えられる界面活性剤等を含む水溶液を公知の方
法で、試薬層等の上に塗布する方法などにより設けるこ
とができる。

光遮蔽層は、親水性ポリマーをバインダーとして、光反
射性微粒子が分散されている水浸透性の層であることが
好ましい、光反射性微粒子は、試薬Ｒ（又は吸水Ｎ）に
生じた検出可能な変化（色変化、発色等）を光透過性を
有する支持体側から反射測光する際に、展開層に点着供
給された水性液体の色、特に試料が全血である場合のヘ
モグロビンの赤色等を遮蔽するとともに光反射層または
背景層としても機能する。光反射性を有する微粒子の例
としては、二酸化チタン微粒子、硫酸バリウム微粒子が
好ましい、必要に応じ展開層中にも上記のごとき光遮蔽
性微粒子を含有させてもよい。

多孔性液体展開層は、液体計量作用を有する展開層であ
ることが好ましい、液体計量作用を有するとは、その表
面に点着供給された液体試料を、その中に含有している
成分を実質的に偏在させることなく、横方向（層の平面
に沿う方向）に単位面積当りほぼ一定量の割合で広げ下
側の層に液体試料を供給する作用を有することである。

展開層のマトリックスを構成する材料としては、１紙、
不織布、織物生地（例、ブロード、ボブリン等の平織等
）、編物生地（例、トリコット編、ダブルトリコット編
、ミラニーズ編等）、ガラス繊維Ｐ紙、メンブランフィ
ルタ−（プラッシュポリマー層）、あるいはポリマーミ
クロビーズ等からなる三次元格子状構造物等を用いるこ
とができる。これらのうちでは、織物生地および編物生
地に代表される繊維質層を用いることが好ましい、これ
らの詳細については特開昭５５−１６４３５６号、特開
昭５７−６６３５９号及び特開昭６０−２２２７６９号
を参照すればよい。

本発明の乾式分析要素に用いることができる織物布生地
又は編物布生地は水洗等の脱脂処理により少なくとも糸
、ｍ物あるいは編物の製造時に付着した油脂類が実質的
に除去されていることが好ましい。

展開層、発色試薬層、反応試薬層又は吸水層には液体試
料を適用して分析操作を実施する時の要素内のｐＨを約
４．５から約９．０の範囲内の適宜な値に維持しうる公
知のｐ　Ｈ１１１８剤から適宜に選択して含有させるこ
とができる。用いうるｖＩ街剤としては、日本化学全編
「化学便覧基礎編」（東京、丸首：＋１．１９６６年発
行＞１３１２〜１３２０頁、Ｒ，Ｍ、Ｃ，Ｄａｗｓｏｎ
　ｅＬ　ａｌ　編ｒＤａＬａ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｃｈｅｓ
ｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｔ１」第２版（Ｏｘｆｏｒｄ
ａｔ　ｔｈｅ　Ｃ１ａｒｅｎｄｏｎ　Ｐｒｅｓｓ、１９
６９年発行）４７６〜５０８頁、’［１ｉｏｃｌ＋ｅｍ
ｉｓｔｒｙ」第５巻４６７〜４７７頁（１９６６年）、
「＾ｎａ−ＩｙＬｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅ＋＊１ｓｔｒ
ｙ」第１０４巻３００〜３１０頁（１９８０年）等に記
載のｐＨＭｆｉＩ剤がある。

本発明の多層分析要素は前述の諸特許明細書に記載の公
知の方法により調製することができる。

本発明の多層分析要素は一辺約１５ｍｍから約３０ｍｍ
の正方形またはほぼ同サイズの円形等の小片に裁断し、
特公昭５７−２８３３１．実開昭５６−１４２４５４．
特開昭５７−６３４５２　、実開昭５８−３２３５０　
、特表昭５８−５０１１４４等に記載のスライド枠に収
めて化学分析スライドとして用いることが、製造、包装
、輸送、保存５測定操作等諸種の観点で好ましい、　（
−ｊ！用目的によっては。

長いテープ状でカセットまたはマガジンに収めて用いる
こと、または小片を開口のあるカードに貼付または収め
て用いることができる。

本発明の多層分析要素は前述の諸特許明細書等に記載の
操作により液体試料中のアナライトであるコレステロー
ルの定量分析を実施できる。すなわち約５．Ｌから約３
０ｕＬ、好ましくは８ｕＬから１５ＬＩＬの範囲の全血
、血漿、血清、尿等の水性液体試料滴を展開層に点着し
、１分から１０分の範囲で、約２０℃から約４０°Ｃの
範囲の実質的に一定の温度で、好ましくは３７℃近傍の
実質的に一定の温度でインクベーションし、要素内の発
色又は変色を可視光又は紫外光の吸収極大波長またはそ
の近傍の波長の光を用いて光透過性支持体側から反射測
光し、予め作成した検量線を用いて比色測定法の処理に
より液体試料中の総コレスプロール含有量を求めること
ができる。あるいは、要素内の蛍光の強度を測光し、予
め作成した検量線分用いて液体試料中の総コレステロー
ル含有量を求めることができる９点着する液体Ｘ料の量
、インクベーション時間及び温度を一定にすることによ
りアナライトの定量分析を高精度で実施できる。測定操
作は特開昭６０−１２５５４３、特開昭６０−２２０８
８２、特開昭６１−２９４３６７、特開昭５８−１６１
８６７等に記載の化学分析装置により極めて容易な操作
で高精度の定量分析を実施できる。

［以下余白］ ［実施例１］ ゼラチン下塗が設けられている厚さ１８０μ鏑のポリエ
チレンテレフタレート（ＰＥＴ）無色透明平滑フィルム
（支持体）の上に下記の組成の発色層形成用水溶液を乾
燥膜厚が１５μ…になるよう塗布し、乾燥して発色層を
設けた。

発色層形成用水溶液の成分 アルカリ処理ゼラチン　　　　１２　ｇノニルフェノキ
シポリグリシドール （グリシドール単位平均１０含有）　　０．３ｇＮＡＤ
　　　　　　　　　　　　　ｏ、ｓｇジアホラーゼ　　
　　　　　　２８００１ＯＮＴＩ３（＊）　　　　　　
　　　　０．２ｇ水　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　９５ｍ１＊　３．３’−（３，３’−ジメトキ
シ−４，４′−ビフェニレン）ビス［２−（ｐ−ニトロ
フェニル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾリウム　ク
ロリド］ 次に発色層の上に、下記の組成の光遮蔽層形成用水溶液
を乾燥膜厚が７μ哨になるよう塗布し、乾燥して光遮蔽
層を設けた。

光遮蔽層形成用水溶液 アルカリ処理ゼラチン　　　　　１４ｇルチル型酸化チ
タン　　　　　　７０ビ水１００＋會１ 光遮蔽層の上に、下記の組成のゼラチン水溶液を乾燥膜
厚が２μｍになるよう塗布し、乾燥して接着層を設けた
。

接着層形成用水溶液 アリカリ処理ゼラチン　　　　　４ｇ ノニルフエノキシボリエトキシエタノール（オキシエチ
レン単位平均１０含有）　０．１゜水　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　９０ｇ接着層の上に約３０Ｈ
７ｍ２の割合で水を全面にほぼ一様に供給して湿潤させ
た後、グロー放電により親水化したＰＥＴ紡績糸製トリ
コットｔＡ物布生地（糸の太さ５０デニール相当、布の
厚さ平均２５０μｍ）を軽く圧力をかけながらラミネー
トし、乾燥して接着させて布ｒＡ開層を設けた。

布展開層の上に、下記組成のコレステロール分析用試ｉ
組成物の水懸濁液を２００ｍ１／＋ｎ’の割合でほぼ均
一に塗布し、乾燥させてコレステロール定量用一体型多
層分析要素を調製した。

エタノール　　　　　　　　　　５００１ポリビニルピ
ロリドン（平均分子ｉ３６万）（１０％エタノール溶液
）１８ｇ ２−アミノ−２−エチル−１，３−プロパンジオール１
　ｇ ノニルフェノキシポリエトキシエタノール（オキシエチ
レン単位平均４０含有）ｆｚｒノニルフエノキシボリグ
リシドール （グリシドール単位平均ＩＯ含有）　　３ｇデオキシコ
ール酸ナトリウム　　７ｇ 上記エタノール溶液に下記酵素液を添加し、懸濁させた
。

リパーゼ（＊　）　　　　　　　　１５０００　Ｉｌｌ
コレステロールデヒドロゲナーゼ ５０００　Ｉｌｌ 水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５１＊　
　Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕ−νｉｓｃｏｓｕｍか
ら産生えられたコレステロール定量用一体型多層分析要
素を１５ｍｍＸ　１５ｍ５の正方形に裁断し、プラスチ
ック製マウントに収めて、コレステロール定量用分析ス
ライドを完成した。

コレステロール濃度の異なる人血漿１０μＩを分　。

析スライドの展開層に点着し、３７℃で６分インクベー
ションした後、中心波長６００ｎ−の可視光でＰＥＴ支
持体側から反射光学濃度を測定した。その結果を第１表
に示す。

第　　１　　表 ［実施例２］ 実施例１と同様のＰＥＴフィルムの上に下記組成の水溶
液で乾燥膜厚が１５μ鋼になるように塗布、乾燥し発色
層を設けた。

アルカリ処理ゼラチン　　　　１２　ｇノニルフェノキ
シポリグリシドール （グリシドール単位平均１０倉有）　０．１　。

ジアホラーゼ　　　　　　　３０００　ＵＮＴＢ　　　
　　　　　　　　　　Ｏ，３５゜ビス（ビニルスルホニ
ルメチルカルボニルアミノ）メタン　　　　　　　　　
０．１２　ｇ水　　　　　　　　　　　　　　　　　　
１０５　ｇ次に下記組成の水懸濁液で乾燥膜厚が７μ蹟
になるように塗布、乾燥して光遮蔽層を設けた。

アルカリ処理ゼラチン　　　　７ｇ ルチル型酸化チタン　　　　　３５　ｇ水　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　５０１次にコレステロー
ルデヒドロゲナーゼを含む接着層を下記処方で乾燥膜厚
４μ鍋になるように塗布、乾燥して設けた。

コレステロールデヒドロゲナーゼ ３９０００　Ｕ ＮＡＤ　　　　　　　　　　　　０．９ｇアルカリ処理
ゼラチン　　　２０　。

ノニルフェノキシポリグリシドール （グリシドール単位平均１０含有）０．２　ｇ水　　　
　　　　　　　　　　　　　　２２０　ｇ接着層の上に
３０ｇ／ｍ２の割合で湿し水を供給湿潤させた後、実施
例１と同様のＰＥＴｖＪ績糸製編物布生地を軽く圧着し
つつラミネート接着して布展開層を設けた。

次にこの布展開層の上に、下記組成のコレステロール分
析用試薬組成物の水懸濁液を２０Ｏｎ＋Ｉ／ｍ２の割合
でほぼ均一に塗布し、乾燥させてコレステロール定量用
一体型多層分析要素を調製した。

エタノール　　　　　　　　　　５００閘１ポリビニル
ピロリドン（平均分子量３６万）（１０％エタノール溶
液）１８ｇ ２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール１
ｇ デオキシコール酸ナトリウム　　７ｇ ノニルフエノキシボリエトキシエタノール（オキシエチ
レン単位平均４０含有）６　ｇノニルフェノキシポリグ
リシドール （グリシドール単位平均１０含有）　　３ｇ上記エタノ
ール溶液に下記酵素液を添加した。

リパーゼＣ＊　＞　　　　　　　　１５０００　［１水
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３ｇ＊　　
Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｖｉｓｃｏｓｕ＋＊
から産生えられた要素を実施例１と同様にしてコレステ
ロール定型用化学分析スライドを完成した０次に実施例
１と同様の方法で検量線を作成した結果第２表の値を得
た。

第　　２　　表 ［実施例３］ リパーゼ１５０００１０のかわりにコレステロールエス
テラーゼ１２０００１Ｕを用いたほかは実施例２と同様
にして、実施例２と同様の結果がえられた。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 少なくとも一つの水透過性層と多孔性液体展開層を液体
   接触しうる状態で有する乾式分析要素であつて、前記展
   開層にコレステロールエステル加水分解活性を有する酵
   素を含み、前記展開層又は前記の少なくとも一つの水透
   過性層にアルキルフェノキシポリグリシドールを含む乾
   式分析要素。