JPS62121361A - 細胞集団もしくは亜集団を定量するための方法及び標準物並びに試薬キット - Google Patents
細胞集団もしくは亜集団を定量するための方法及び標準物並びに試薬キットInfo
- Publication number
- JPS62121361A JPS62121361A JP61273082A JP27308286A JPS62121361A JP S62121361 A JPS62121361 A JP S62121361A JP 61273082 A JP61273082 A JP 61273082A JP 27308286 A JP27308286 A JP 27308286A JP S62121361 A JPS62121361 A JP S62121361A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- measured
- particles
- sample
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
- G01N33/537—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
- G01N33/56972—White blood cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/967—Standards, controls, materials, e.g. validation studies, buffer systems
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/101666—Particle count or volume standard or control [e.g., platelet count standards, etc.]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、細胞集団も１． ＜は亜集団殊に血液細胞の
定量法並びにこのために好適な試薬に関する。
定量法並びにこのために好適な試薬に関する。
本発明方法は、特に、リンパ球殊にＴ −ＩＪンバ球も
しくはその亜集団、Ｔ−ヘルパー（Ｈθ］、ｆｏｒ ）
及びＴ−サプレツサー細胞の測定に好適である。
しくはその亜集団、Ｔ−ヘルパー（Ｈθ］、ｆｏｒ ）
及びＴ−サプレツサー細胞の測定に好適である。
従来の技術
Ｔ −ＩＪンバ球は、敬体のかつ細胞の免疫系に対する
調整機能を有する。これらは、発生段階及び機能に応じ
て分類される。Ｔ−細胞では、釉々の成熟段階が、下位
群におけると同様に区別されるはすである。これらは、
個々の発生段階及び機能的下位群にとって特異的である
表面では機能的判定で、かつ他方では血清学的識別によ
って可能である。種々の抗原組成の比較により、提供者
の細胞集団及びこれに伴なう現時点の免疫状態に関する
推論を引き出すことができる。
調整機能を有する。これらは、発生段階及び機能に応じ
て分類される。Ｔ−細胞では、釉々の成熟段階が、下位
群におけると同様に区別されるはすである。これらは、
個々の発生段階及び機能的下位群にとって特異的である
表面では機能的判定で、かつ他方では血清学的識別によ
って可能である。種々の抗原組成の比較により、提供者
の細胞集団及びこれに伴なう現時点の免疫状態に関する
推論を引き出すことができる。
静止Ｔ−細胞は、それらが機能的に活性になりうる以前
に抗原によってます刺激されるべきである。例えば、Ｔ
−ヘルパー細胞は、Ｂ−ＩＪンバ球を刺激して、増畑し
、分化しかつ抗体を生産させる。これは、同様に、リン
パ様細胞系統からマクロファージ及び特異的な表面抗原
を有する細胞に対する細胞毒反応をするように刺激され
るＴ−サプレツサー細胞を活性化する。
に抗原によってます刺激されるべきである。例えば、Ｔ
−ヘルパー細胞は、Ｂ−ＩＪンバ球を刺激して、増畑し
、分化しかつ抗体を生産させる。これは、同様に、リン
パ様細胞系統からマクロファージ及び特異的な表面抗原
を有する細胞に対する細胞毒反応をするように刺激され
るＴ−サプレツサー細胞を活性化する。
Ｔ−サプレツサーリンパ球は、活性状態で抗体−生産の
抑制及び所望のリンパ球培養欣中のオートログ（ａｕｔ
ｏｌ’ｏｇｅｎ ） Ｔ−細胞の反応に作用する。同様
に、このＴ−サプレツサー細胞は、ＨＬＡ−抗原を有す
る細胞（ＨＬＡ ＝ヒト白血球抗原）での感作の後のタ
ーデッド細胞に対する細面液中の通常の濃度並びにＴ−
ヘルパートＴ−サプレツサー細胞とからの商は、次の範
囲内に存在する： Ｔ−リンパ球（総） 細胞０．５〜１．５Ｘ１０’
／血液（罰）Ｔ−サプレツサー 細胞０．１５〜
０．４５Ｘ１０６／＊液（ゴ）Ｔ−ヘルパー
細胞０．６〜０．９Ｘ１０６／血ｇ（ゴ）Ｔ−ヘルパ
ー／チーサプレッサー １．２〜６．９種々の病
気は、Ｔ−細胞並集団の組成を変える作用をし、この際
、１果団の生産は低減又は強化される。これらの変動は
、疾病経過の非常に早期に現われる。この例には次のも
のがあるニー 複合リウマチ病、自己免疾病（例えばり
ウマチ性関節炎、系統的紅斑性狼涜）、 −伝染性疾病（例えば人よりＳ、ウィルス性及び真菌性
伝染病）、 −悪性Ｔ−細胞疾病（例えば白血病、リンパａ）。
抑制及び所望のリンパ球培養欣中のオートログ（ａｕｔ
ｏｌ’ｏｇｅｎ ） Ｔ−細胞の反応に作用する。同様
に、このＴ−サプレツサー細胞は、ＨＬＡ−抗原を有す
る細胞（ＨＬＡ ＝ヒト白血球抗原）での感作の後のタ
ーデッド細胞に対する細面液中の通常の濃度並びにＴ−
ヘルパートＴ−サプレツサー細胞とからの商は、次の範
囲内に存在する： Ｔ−リンパ球（総） 細胞０．５〜１．５Ｘ１０’
／血液（罰）Ｔ−サプレツサー 細胞０．１５〜
０．４５Ｘ１０６／＊液（ゴ）Ｔ−ヘルパー
細胞０．６〜０．９Ｘ１０６／血ｇ（ゴ）Ｔ−ヘルパ
ー／チーサプレッサー １．２〜６．９種々の病
気は、Ｔ−細胞並集団の組成を変える作用をし、この際
、１果団の生産は低減又は強化される。これらの変動は
、疾病経過の非常に早期に現われる。この例には次のも
のがあるニー 複合リウマチ病、自己免疾病（例えばり
ウマチ性関節炎、系統的紅斑性狼涜）、 −伝染性疾病（例えば人よりＳ、ウィルス性及び真菌性
伝染病）、 −悪性Ｔ−細胞疾病（例えば白血病、リンパａ）。
従って、免疫状態即ち、Ｔ−１７ンパ球の総数及びＴ−
ヘルパー及びＴ−サプレツサー細胞の相対分の検査は、
著るしい診断上の発展をもたらす。
ヘルパー及びＴ−サプレツサー細胞の相対分の検査は、
著るしい診断上の発展をもたらす。
細胞集団及び亜集団に関する従来の測定法は、主として
螢光物質で標識されている相応する特異性の抗体での細
胞の着色及び螢光顕微鏡下でのその計測よりなっている
。この方法は非常に経費がかかり、人集約的方法であり
、主観的杆価のみを可能とすることは公知のことである
。
螢光物質で標識されている相応する特異性の抗体での細
胞の着色及び螢光顕微鏡下でのその計測よりなっている
。この方法は非常に経費がかかり、人集約的方法であり
、主観的杆価のみを可能とすることは公知のことである
。
この原理は、螢光活性化セルソーター
［ｆｌｕｏｒｅｓｃｓｎｔ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃｅ
ｌｌ ５ｏｒｔｅｒ（ＦＡＣ８）］を用いて機械化し、
可視化することができる。
ｌｌ ５ｏｒｔｅｒ（ＦＡＣ８）］を用いて機械化し、
可視化することができる。
この方法では、機械的計測は排除される。しかしながら
、この方法は多大な装置経費を伴ない、熟練者の取扱い
が必要である。
、この方法は多大な装置経費を伴ない、熟練者の取扱い
が必要である。
発明が解決しようとする問題点
本発明の課題は、細胞集団の総数並びに特定の亜集団の
それを測定することのできる簡単な方法を提供すること
であった。
それを測定することのできる簡単な方法を提供すること
であった。
問題点を解決するための手段
この課題は本発明方法により解決される。
本発明の目的は、細胞集団もしくは亜集団全定量する方
法であり、これは、 特定の細胞集団を有する試料を被測定細胞集団の特性的
表面抗原に対して特異的に対向している標識付抗体と共
にインキュベートし、既知の種々の粒子き度を有する１
種以上の標準物を同じ標識付抗体と共に同様にインキュ
ベートシ（この際、この標遣浴液は、その沈殿特性が被
測定細胞と比較可能で、標識付抗体もしくはその一部分
に対して特異的に対向している分子を有している粒子よ
りなる）、 試料溶液の細胞並びに標慈溶孜の粒子から過剰の標識付
抗体を分離除去し、細胞上並びに粒子上の標識量を測定
し、試料からの測定値とＭ４進溶欣からの測定値を比較
することにより、試料中の被測定細胞の数を確認するこ
とよりなる。
法であり、これは、 特定の細胞集団を有する試料を被測定細胞集団の特性的
表面抗原に対して特異的に対向している標識付抗体と共
にインキュベートし、既知の種々の粒子き度を有する１
種以上の標準物を同じ標識付抗体と共に同様にインキュ
ベートシ（この際、この標遣浴液は、その沈殿特性が被
測定細胞と比較可能で、標識付抗体もしくはその一部分
に対して特異的に対向している分子を有している粒子よ
りなる）、 試料溶液の細胞並びに標慈溶孜の粒子から過剰の標識付
抗体を分離除去し、細胞上並びに粒子上の標識量を測定
し、試料からの測定値とＭ４進溶欣からの測定値を比較
することにより、試料中の被測定細胞の数を確認するこ
とよりなる。
本発明の方法は、一般に、細胞集団もしくは亜集団を定
量するために使用可能である。特に、血孜細胞殊にリン
パ球の定量のだめの方法が好適である。特に、この方法
はＴ−細胞及びＴ−ヘルパー及びＴ−サルッサー亜集団
の総数の測定時に有利であることが立証された。これに
より、診断及び治療経過管理のための現時点での免疫状
態に関する信用し５るかつ正確な報告を得ることができ
る。
量するために使用可能である。特に、血孜細胞殊にリン
パ球の定量のだめの方法が好適である。特に、この方法
はＴ−細胞及びＴ−ヘルパー及びＴ−サルッサー亜集団
の総数の測定時に有利であることが立証された。これに
より、診断及び治療経過管理のための現時点での免疫状
態に関する信用し５るかつ正確な報告を得ることができ
る。
被測定細胞集団を特性付ける抗原（細胞表面抗原）に対
向１．でいる抗体とし７て、ポリクロナール抗体もモノ
クロナール抗体も使用できる。
向１．でいる抗体とし７て、ポリクロナール抗体もモノ
クロナール抗体も使用できる。
完全抗体も抗体フラグメントも使用できろ。モノクロナ
ール抗体が特に有利である。
ール抗体が特に有利である。
使用抗体の標識付けのために、当業者にとっては、種々
の公知法が提供される。この際、すべての慣用のｍ識物
質例えばラジオアイソトープ、染料、螢光染料又は＃素
を使用することができる。本発明においては、特に酵素
での標識付けが有利である。標識酵素としては、例えば
ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコー
スオキシダーゼ又は特に有利にβ−ガラクトシダーゼを
使用することができろ。
の公知法が提供される。この際、すべての慣用のｍ識物
質例えばラジオアイソトープ、染料、螢光染料又は＃素
を使用することができる。本発明においては、特に酵素
での標識付けが有利である。標識酵素としては、例えば
ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコー
スオキシダーゼ又は特に有利にβ−ガラクトシダーゼを
使用することができろ。
この試験は、有利に抗体結合試験、有利に固相免疫慣定
として実施される。固犀相として被測定細胞もしくは細
胞と類似の大きさ、密度もしくは類似の沈殿特性を有す
る標富物の粒子を使用する。
として実施される。固犀相として被測定細胞もしくは細
胞と類似の大きさ、密度もしくは類似の沈殿特性を有す
る標富物の粒子を使用する。
リンパ球の特性をまねることのできる標準物を見つげる
試験開発には特別な困難があったので、リンパ球をこれ
で代えることができる。この標準物は、天然リンパ球−
積電物の利点を有すべきであるが、次のようなその欠点
を有すべきではないニ ー リンパ球は必要な範囲で提供可能でない、−リンパ
球は、バッチ毎の不光分な再現性をもたらす不均一性で
ある、 ＩＪンパ球は充分に安定ではなく、これがリンパ球種進
物の保持性に関する問題をもたらす。
試験開発には特別な困難があったので、リンパ球をこれ
で代えることができる。この標準物は、天然リンパ球−
積電物の利点を有すべきであるが、次のようなその欠点
を有すべきではないニ ー リンパ球は必要な範囲で提供可能でない、−リンパ
球は、バッチ毎の不光分な再現性をもたらす不均一性で
ある、 ＩＪンパ球は充分に安定ではなく、これがリンパ球種進
物の保持性に関する問題をもたらす。
これらのすべての欠点は、人工粒子を有する積電物によ
り克服できた。
り克服できた。
このような粒子としては、ガラス又はプラスチックから
成っていてよい小さい球が有利である。特にプラスチッ
ク粒子殊にメタクリレートを基礎として構成されている
ラテックス粒子が有利である。これらの粒子は、有利に
、１〜２０μｍ有利に７〜１３μｍｏ直径を有すべきで
ある。
成っていてよい小さい球が有利である。特にプラスチッ
ク粒子殊にメタクリレートを基礎として構成されている
ラテックス粒子が有利である。これらの粒子は、有利に
、１〜２０μｍ有利に７〜１３μｍｏ直径を有すべきで
ある。
との標珈粒子には、標識付抗体もしくはその一部分に対
向１．ている分子（蛋白質）が結合されている。この際
、これは、被測定細胞上の表面抗原と同じ作用を有する
蛋白質であってよい。
向１．ている分子（蛋白質）が結合されている。この際
、これは、被測定細胞上の表面抗原と同じ作用を有する
蛋白質であってよい。
しかしながら、この粒子は標識付抗体特にこの抗体のＦ
ｃ一部に対向している抗−抗体を有していてもよい。最
後に、この粒子上には、標識性は例えば酵素標識付けの
場合にその酵素を特異的に認識する抗体も存在していて
よい。
ｃ一部に対向している抗−抗体を有していてもよい。最
後に、この粒子上には、標識性は例えば酵素標識付けの
場合にその酵素を特異的に認識する抗体も存在していて
よい。
本発明のもう１つの目的物は、細胞集団もしくは亜集団
を定量するための、標準物であり、これは、被測定細胞
のそれと同じで、標識付抗体もしくはその一部に対向し
ている分子を有する粒子を含有する。
を定量するための、標準物であり、これは、被測定細胞
のそれと同じで、標識付抗体もしくはその一部に対向し
ている分子を有する粒子を含有する。
この積電物の製造のために、粒子をまず例えば過沃素酸
ナトリウムで活性化する。引続き、この活性化された粒
子の一部を非特異的抗体例えば羊−ＩｇＧと公知方法で
カップリングさせる。
ナトリウムで活性化する。引続き、この活性化された粒
子の一部を非特異的抗体例えば羊−ＩｇＧと公知方法で
カップリングさせる。
この活性化された粒子の他の部分を標識付抗体もしくは
その一部分に特異的に対向する分子と結合させる。この
双方の異なる糧類の標識された粒子の種々の分の混合に
より、その粒子数に関して一定であるが結合した特異的
分子に関しては変動する標漁溶液が製造される。
その一部分に特異的に対向する分子と結合させる。この
双方の異なる糧類の標識された粒子の種々の分の混合に
より、その粒子数に関して一定であるが結合した特異的
分子に関しては変動する標漁溶液が製造される。
特定の積電物中の特異的分子の正確な濃度は、免疫螢光
での慣用の計数又はセルンーター（Ｚｓｌｌｓｏｒｔｅ
ｒ ）を用いて確認することのできる既知リンパ球濃度
との比較により測定することができる。このように検定
された粒子の結合性は、被測定細胞集団もしくは亜集団
の測定数に相当する。
での慣用の計数又はセルンーター（Ｚｓｌｌｓｏｒｔｅ
ｒ ）を用いて確認することのできる既知リンパ球濃度
との比較により測定することができる。このように検定
された粒子の結合性は、被測定細胞集団もしくは亜集団
の測定数に相当する。
この標準物は溶液又は凍結乾燥物として存在しうる。こ
の凍結乾燥物は使用前に適当な溶剤例えば再蒸溜水中に
再懸濁させるべきである。
の凍結乾燥物は使用前に適当な溶剤例えば再蒸溜水中に
再懸濁させるべきである。
本発明の目的は、更に、本発明方法を実施するための試
薬混合物であり、これは、被測定細胞集団に対して特異
的に対向する標識付抗体、１種以上の標準物、標識物質
測定のための適当な検出系並びに場合により必要な他の
助剤を含有する。
薬混合物であり、これは、被測定細胞集団に対して特異
的に対向する標識付抗体、１種以上の標準物、標識物質
測定のための適当な検出系並びに場合により必要な他の
助剤を含有する。
個々の成分も、有利に、凍結乾燥形で存在する。これら
は、使用前に適当な溶剤例えば再蒸溜水中に再懸濁させ
るべきである。
は、使用前に適当な溶剤例えば再蒸溜水中に再懸濁させ
るべきである。
実施例
本発明を次の実施例につき詳述する。
例 １
Ｔ−リンパ球の総数の測定
１、溶液の製造
ａ）標本溶液
メタクリレートを基礎とするラテックス粒子（西ドイツ
特許出願公開第３０４８８８３号明細書の記載により製
造）を…５．０で過沃素酸ナトリウムで活性化する。こ
の活性化されたラテックス粒子を２分する。１方の半分
を非特異的な羊−工ｇＧと、他の半分を羊−ＩｇＧ−抗
一マウスーエｇＧとカップリングさせる。この双方のパ
ッチの種々の特定割合で混合することにより、細胞０．
４５ Ｘ １０’、１．５６Ｘ１０’もしくは３．３６
Ｘ １ Ｑ’／ ｍｌのリンパ球濃度に相当する６種
の積電溶液を製造する。この溶液を凍結乾燥させると、
この形で長時間保存可能である。その使用前に、この標
蕩物を再蒸溜水中に再懸濁させる（較正標進懸濁ｇａｑ
ｂ及びＣ）。
特許出願公開第３０４８８８３号明細書の記載により製
造）を…５．０で過沃素酸ナトリウムで活性化する。こ
の活性化されたラテックス粒子を２分する。１方の半分
を非特異的な羊−工ｇＧと、他の半分を羊−ＩｇＧ−抗
一マウスーエｇＧとカップリングさせる。この双方のパ
ッチの種々の特定割合で混合することにより、細胞０．
４５ Ｘ １０’、１．５６Ｘ１０’もしくは３．３６
Ｘ １ Ｑ’／ ｍｌのリンパ球濃度に相当する６種
の積電溶液を製造する。この溶液を凍結乾燥させると、
この形で長時間保存可能である。その使用前に、この標
蕩物を再蒸溜水中に再懸濁させる（較正標進懸濁ｇａｑ
ｂ及びＣ）。
ｂ）洗浄−緩衝液
燐酸水素二ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４・２Ｈ２０）
１．４７９燐酸二水素ナトリウム（ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ
２０） Ｑ 、 ２７ ｇ及び塩化ナトリウム
８．７７．９を再蒸溜水中に溶かし、水を充填し
て１ｊにする。この溶液に牛血清アルブミン０．２ ＝
１ （ｗ／ｖ）及びアジ化ナトリウム０．１４ （ｖｒ
／ｖ ）を添加する。貯蔵のために、凍結乾燥させる。
１．４７９燐酸二水素ナトリウム（ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ
２０） Ｑ 、 ２７ ｇ及び塩化ナトリウム
８．７７．９を再蒸溜水中に溶かし、水を充填し
て１ｊにする。この溶液に牛血清アルブミン０．２ ＝
１ （ｗ／ｖ）及びアジ化ナトリウム０．１４ （ｖｒ
／ｖ ）を添加する。貯蔵のために、凍結乾燥させる。
使用前に、この凍結乾燥物を再蒸溜水中に再懸濁させる
。
。
Ｃ）抗体−接合体
モノクロナール抗体ＯＤ６ （Ｍ−Ｔａ２１、Ｐ、 Ｒ
ｌｅｂｅｒ等によるＬｅｕｃｏｃｙｔｅ ｔｙｐｉｎｇ
： Ａ。
ｌｅｂｅｒ等によるＬｅｕｃｏｃｙｔｅ ｔｙｐｉｎｇ
： Ａ。
Ｂｅｒｎａｒｄ ｕ、ａ、 Ｅｄ、 １９８４．６０６
〜３１１頁、Ｂｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ、 Ｂｅ
ｒｌｉｎ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ中で詳細に特定されてい
る）を、β−Ｄ−がラクトシダーセとカップリングさせ
、凍結乾燥させる。
〜３１１頁、Ｂｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ、 Ｂｅ
ｒｌｉｎ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ中で詳細に特定されてい
る）を、β−Ｄ−がラクトシダーセとカップリングさせ
、凍結乾燥させる。
１回の測定当り、０．０２５Ｕを洗浄緩衝α中に溶かし
て使用する。
て使用する。
ｄ）基質溶液
クロルフェノールレッド−β−Ｄ−ガラクトシｐ６０〜
を、基質−緩衝液Ｃｙ：ｐｚｓ−緩衝液（ｐＨ７，１）
１００ ｍモル／ｌ、 ７．ｔ、パ５ ｅ ７ ｍマ
グネシウム２註 １％（ｗ／ｖ）及びアジ化ナトリウム０．１％（ｗ／ｖ
））６０ゴ中に溶かす。
を、基質−緩衝液Ｃｙ：ｐｚｓ−緩衝液（ｐＨ７，１）
１００ ｍモル／ｌ、 ７．ｔ、パ５ ｅ ７ ｍマ
グネシウム２註 １％（ｗ／ｖ）及びアジ化ナトリウム０．１％（ｗ／ｖ
））６０ゴ中に溶かす。
２、拭料蕩備
血液試料をエチレンジアミン四酢酸ー２ナトリウム塩（
ＥＤＴＡ−Ｎａ２・２Ｈ２０ ）と混合する。この新
製ＥＤＴＡ−血敬７．５−をリーゼー緩衝液（ Ｌｙｓ
ｅ−Ｐｕｆｆｅｒ ：塩化アンモニウム１５５ｍモル／
ｌ，炭酸水素カリウム Ｉ Ｑ ｍ ％に／ ｌ ＸＫＤＴＡ−Ｎａ２ Ｑ．
ｊ ｍモル／１）１５ゴと混合する。混合物を室温で７
〜１０分間放置させ、この際２〜６回注意深く旋回させ
る。その後、３００！９で１０分間遠心分離する。
ＥＤＴＡ−Ｎａ２・２Ｈ２０ ）と混合する。この新
製ＥＤＴＡ−血敬７．５−をリーゼー緩衝液（ Ｌｙｓ
ｅ−Ｐｕｆｆｅｒ ：塩化アンモニウム１５５ｍモル／
ｌ，炭酸水素カリウム Ｉ Ｑ ｍ ％に／ ｌ ＸＫＤＴＡ−Ｎａ２ Ｑ．
ｊ ｍモル／１）１５ゴと混合する。混合物を室温で７
〜１０分間放置させ、この際２〜６回注意深く旋回させ
る。その後、３００！９で１０分間遠心分離する。
凍結乾燥した赤血球を有する上澄みを吸引濾過する（パ
スツール−ピペット、真空ポンプ）。
スツール−ピペット、真空ポンプ）。
白血球−沈殿を回転混合させ（Ｖｏｒｔｅｘ−Ｍｉｓｃ
ｈｅｒ ） 、残留白血球の溶解のために、再度、リー
ゼ緩衝液？ＬＡ’で再ｌ！！！濁させる。この懸濁液ｆ
：．５分間放置し、この際場合により撮り回す。
ｈｅｒ ） 、残留白血球の溶解のために、再度、リー
ゼ緩衝液？ＬＡ’で再ｌ！！！濁させる。この懸濁液ｆ
：．５分間放置し、この際場合により撮り回す。
その後、ＰＢＳ （燐酸塩緩衝食塩水）溶液（塩化ナト
リウム１５０エ −緩衝Ｑ （ｐＨ７．３ ） １ ０ ｍモル／ｌ ）
４ｍ１＝２加える。これを改めて６００ｇで１０分間
遠心分離する。上澄みを吸引濾過する。
リウム１５０エ −緩衝Ｑ （ｐＨ７．３ ） １ ０ ｍモル／ｌ ）
４ｍ１＝２加える。これを改めて６００ｇで１０分間
遠心分離する。上澄みを吸引濾過する。
細胞沈殿を回転混合させ、それぞれ、ＰＢＳ−溶液５プ
で２回洗浄する。改めて遠心分離した後、上澄みを注意
深く吸引濾過する。沈殿を回転混合し、再懸濁−緩衝液
（ ＰＥ５−溶液、牛血清アルブミン０．２ ４ （ｗ
／ｖ） 、牛血清免疫グロブリン１係（ｗ／ｖ）、アジ
化ナトリウム０．１％（ｗ／ｖ）より成る）２ｄ中に入
れる。この細胞懸濁液を直ちに引続く操作に使用する。
で２回洗浄する。改めて遠心分離した後、上澄みを注意
深く吸引濾過する。沈殿を回転混合し、再懸濁−緩衝液
（ ＰＥ５−溶液、牛血清アルブミン０．２ ４ （ｗ
／ｖ） 、牛血清免疫グロブリン１係（ｗ／ｖ）、アジ
化ナトリウム０．１％（ｗ／ｖ）より成る）２ｄ中に入
れる。この細胞懸濁液を直ちに引続く操作に使用する。
６、測定の実施
波 長： ５７８Ｕｍ
温 度： 室温
半マイクロキュベット二 Ｎ厚 １ｃ！ｒＬ測定量：
１ｄ；試薬９値に対する測定円錐形底を有する遠心管
中に次のものをピペット導入する： ３００ｙで１０分遠心分離する。上澄みを注意深く吸引
濾過する。沈殿を回転混合し、次のようにピペット導入
する。
１ｄ；試薬９値に対する測定円錐形底を有する遠心管
中に次のものをピペット導入する： ３００ｙで１０分遠心分離する。上澄みを注意深く吸引
濾過する。沈殿を回転混合し、次のようにピペット導入
する。
これを充分に混合し、室＠（２０〜２５℃）で４５分間
インキュベートし、１５分間隔で激しく振出する。その
後各々２Ｍの洗浄緩衝液を加え、改ぬて混合し、６００
μで１０分間遠心する。上澄みを注意深く吸引濾過し、
沈殿を回転混合する。それぞれ洗浄緩衝ｇ２ｄと数回混
合し、３００μｇで１０分間遠心分離する。上澄みを再
び注意深く吸引濾過し、沈殿を回転混合する。引続きそ
れぞれ基質溶１１ｍ１でクロルフェノールレノｐ−β−
ガラクトシドを再懸濁させる。充分に混合し、室温（２
０〜２５℃）で３０分間インキュベートし、この際、１
５分後及び６０分後にそれぞれ激しく振出し、７００Ｉ
で５分間遠心する。溌明な上澄みの抽出は、試薬９値と
しての基質溶液に比べて測定する。
インキュベートし、１５分間隔で激しく振出する。その
後各々２Ｍの洗浄緩衝液を加え、改ぬて混合し、６００
μで１０分間遠心する。上澄みを注意深く吸引濾過し、
沈殿を回転混合する。それぞれ洗浄緩衝ｇ２ｄと数回混
合し、３００μｇで１０分間遠心分離する。上澄みを再
び注意深く吸引濾過し、沈殿を回転混合する。引続きそ
れぞれ基質溶１１ｍ１でクロルフェノールレノｐ−β−
ガラクトシドを再懸濁させる。充分に混合し、室温（２
０〜２５℃）で３０分間インキュベートし、この際、１
５分後及び６０分後にそれぞれ激しく振出し、７００Ｉ
で５分間遠心する。溌明な上澄みの抽出は、試薬９値と
しての基質溶液に比べて測定する。
４、 評 価
測定した較正標漁値及び相応する濃度を用いて、較正曲
線を得る。これから、測定値に相当する試料の細胞値を
直接読みとる。
線を得る。これから、測定値に相当する試料の細胞値を
直接読みとる。
例 ２
試料の進備、測定の実施及び評価を例１に記載の方法で
行なう。較正積重懸濁ｔｌｌｌ［Ｘｂ及びＣとして、細
胞０．２０ Ｘ １０’、０．６ ［Ｉ Ｘ １０’も
しくは２．０８ Ｘ １Ｑ６／ｄのＴ−ヘルパー湯度に
相当する懸濁液を使用する。更に、抗体接合体として、
Ｔ−ヘルパー亜集団にとって特徴的である表面抗原に特
異的に対向しているモノクロナール抗体ＯＤＡ（Ｍ−Ｔ
１５１、詳細は前記文献参照）とβ−ガラクトシダーゼ
とからの接合体を使用する。各測定のために、抗体０．
０５ Ｕ ｆ、使用する。
行なう。較正積重懸濁ｔｌｌｌ［Ｘｂ及びＣとして、細
胞０．２０ Ｘ １０’、０．６ ［Ｉ Ｘ １０’も
しくは２．０８ Ｘ １Ｑ６／ｄのＴ−ヘルパー湯度に
相当する懸濁液を使用する。更に、抗体接合体として、
Ｔ−ヘルパー亜集団にとって特徴的である表面抗原に特
異的に対向しているモノクロナール抗体ＯＤＡ（Ｍ−Ｔ
１５１、詳細は前記文献参照）とβ−ガラクトシダーゼ
とからの接合体を使用する。各測定のために、抗体０．
０５ Ｕ ｆ、使用する。
測定較正積電値から、試料に関する測定値て相応する細
胞値を直接読み取ることのできる較正直線を得ることが
できる。
胞値を直接読み取ることのできる較正直線を得ることが
できる。
例 ６
試料進備及び測定の実施を例１と同様に実施する。単に
、抗体接合体としてのβ−ガラクトシダーゼと特異的に
Ｔ−サプレツサー細胞の表面抗原に対向１−２ている抗
体ｃ Ｄ ８ （Ｍ−Ｔ８１１、詳細は前記文献参照）
とからの接合体を使用する。各々の測定のために抗体０
．０２５． Ｕを使用する。更に、較正標進懸濁液ａＸ
ｂ及びＣとして、細胞０．２９ Ｘ １０６．０．６
２ ｘ １０’もしくはＬｌ ７ ｘ １０６／ｌのＴ
−サプレツサー濃度に相当する６糧の異なる濃度の懸濁
液を使用する。
、抗体接合体としてのβ−ガラクトシダーゼと特異的に
Ｔ−サプレツサー細胞の表面抗原に対向１−２ている抗
体ｃ Ｄ ８ （Ｍ−Ｔ８１１、詳細は前記文献参照）
とからの接合体を使用する。各々の測定のために抗体０
．０２５． Ｕを使用する。更に、較正標進懸濁液ａＸ
ｂ及びＣとして、細胞０．２９ Ｘ １０６．０．６
２ ｘ １０’もしくはＬｌ ７ ｘ １０６／ｌのＴ
−サプレツサー濃度に相当する６糧の異なる濃度の懸濁
液を使用する。
本発明の試薬を用い、本発明によるＫＬＩＳＡ −法で
得られる結果は、従来の慣用の、非常に経費のかかる機
械的計測法で得られる値と非常に良好な相関関係を示す
（第１図、第２之及び第３図参照）。
得られる結果は、従来の慣用の、非常に経費のかかる機
械的計測法で得られる値と非常に良好な相関関係を示す
（第１図、第２之及び第３図参照）。
第１図は、総Ｔ−リン・２球（ｔ−ｐａｎ ）に関する
ＦＡＣＳ （螢光活性化セルソーター）と本発明方法に
よる細胞計測結果を示す相関関係図、第２図はＴ−へル
ノに一亜集団（ｔ−ヘルパー）に関するＦＡＣＳと本発
明方法による細胞計測結果を示す相関関係図、第３図は
Ｔ−サプレツサー亜集団（ｔ−サプレツサー）に関する
ＦＡＣＳと本発明方法による細胞計測結果号示す相関関
係図である。
ＦＡＣＳ （螢光活性化セルソーター）と本発明方法に
よる細胞計測結果を示す相関関係図、第２図はＴ−へル
ノに一亜集団（ｔ−ヘルパー）に関するＦＡＣＳと本発
明方法による細胞計測結果を示す相関関係図、第３図は
Ｔ−サプレツサー亜集団（ｔ−サプレツサー）に関する
ＦＡＣＳと本発明方法による細胞計測結果号示す相関関
係図である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、細胞集団もしくは亜集団を定量するために、被測定
細胞集団を有する試料を、被測定細胞集団の特性的表面
抗原に対して特異的に対向している標識付抗体と共にイ
ンキユベートし、既知の種々の粒子濃度を有する１種以
上の標準物を、同じ標識付抗体と共に同様にインキユベ
ートし、この際、標準溶液は、その沈殿特性が被測定細
胞のそれと比較可能で、標識付抗体もしくはその一部分
に対向している分子で負荷されている粒子より成り、 試料溶液の細胞並びに標準溶液の粒子から過剰の標識付
抗体を分離除去し、 細胞及び粒子上の標識量を測定し、試料からの測定値と
標準溶液からの測定値を比較することによつて、試料中
の被測定細胞の数を確認することを特徴とする、 細胞集団もしくは亜集団の定量法。 ２、標識付抗体として、Ｔ−リンパ球もしくはＴ−ヘル
パー又はＴ−サプレツサー亜集団の表面抗原に対向して
いる標識付モノクロナール抗体を使用する、特許請求の
範囲第１項記載の方法。 ３、標識付けをラジオアイソトープ、染料、螢光染料又
は酵素により行なう、特許請求の範囲第１項又は第２項
に記載の方法。 ４、標識酵素としてペルオキシダーゼ、アルカリホスフ
アターゼ、グルコースオキシダーゼ又はβ−ガラクトシ
ダーゼを使用する、特許請求の範囲第１項記載の方法。 ５、被測定細胞集団を有する試料を、被測定細胞集団の
特性的表面抗原に特異的に対向している標識付抗体と共
にインキユベートし、既知の種々の粒子濃度を有する１
種以上の標準物を、同じ標識付抗体と共に同様にインキ
ユベートし、試料溶液の細胞並びに標準溶液の粒子から
過剰の標識付抗体を分離除去し、細胞及び粒子上の標識
量を測定し、比較することにより試料中の被測定細胞の
数を確定する方法で細胞集団もしくは亜集団を測定する
ための標準物において、これは、その沈殿特性が被測定
細胞のそれと同じであり、標識付抗体もしくはその一部
分に対向している分子を有する粒子を含有することを特
徴とする、細胞集団もしくは亜集団を定量するための標
準物。 ６、粒子は、ガラス又はプラスチツクより成る、特許請
求の範囲第５項記載の標準物。 ７、プラスチツク粒子は、メタクリレートを基礎とする
ラテツクス粒子より成る、特許請求の範囲第６項記載の
標準物。 ８、粒子は、被測定細胞上の表面抗原と同じ抗原作用を
有する蛋白質、標識付抗体に対向している抗−抗体又は
標識を特異的に認識する抗体を有している、特許請求の
範囲第５項から第７項までのいずれか１項記載の標準物
。 ９、被測定細胞集団を有する試料を、被測定細胞集団の
特性的表面抗原に特異的に対向している標識付抗体と共
にインキユベートし、既知の種々の粒子濃度の１種以上
の標準物を同じ標識付抗体と共に同様にインキユベート
し、試料溶液の細胞並びに標準溶液の粒子から過剰の標
識付抗体を分離除去し、細胞及び粒子上の標識量を測定
し、比較することにより試料中の被測定細胞の数を確定
する方法で細胞集団もしくは亜集団を測定する方法を実
施するための試薬混合物において、これは、被測定細胞
集団に特異的に対向している標識付抗体、沈殿特性が被
測定細胞のそれと同じであり標識付抗体もしくはその一
部分に対向している分子を有する粒子を含有する標準物
１種以上、標識物質を測定するのに好適な検出系並びに
場合により必要な他の助剤を含有することを特徴とする
、細胞集団もしくは亜集団を定量するための試薬混合物
。 １０、抗体はβ−ガラクトシダーゼにより標識付けられ
ており、検出系はβ−ガラクトシダーゼの検出に必要な
試薬を含有している、特許請求の範囲第９項記載の試薬
混合物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3541033.7 | 1985-11-19 | ||
| DE19853541033 DE3541033A1 (de) | 1985-11-19 | 1985-11-19 | Verfahren zur quantifizierung von zellpopulationen bzw. subpopulationen sowie hierfuer geeignetes reagenz |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62121361A true JPS62121361A (ja) | 1987-06-02 |
| JPH0521508B2 JPH0521508B2 (ja) | 1993-03-24 |
Family
ID=6286390
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61273082A Granted JPS62121361A (ja) | 1985-11-19 | 1986-11-18 | 細胞集団もしくは亜集団を定量するための方法及び標準物並びに試薬キット |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4876189A (ja) |
| EP (1) | EP0224134B1 (ja) |
| JP (1) | JPS62121361A (ja) |
| KR (1) | KR870005249A (ja) |
| AT (1) | ATE50647T1 (ja) |
| AU (1) | AU574281B2 (ja) |
| CA (1) | CA1278258C (ja) |
| DE (2) | DE3541033A1 (ja) |
| IL (1) | IL80655A0 (ja) |
| ZA (1) | ZA868569B (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04252957A (ja) * | 1990-08-07 | 1992-09-08 | Becton Dickinson & Co | 絶対カウントのための一段試験 |
| JP2007232631A (ja) * | 2006-03-02 | 2007-09-13 | Osaka Univ | 生細胞内の特定タンパク質の定量方法および標準蛍光マイクロビーズの作製方法 |
Families Citing this family (41)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6159740A (en) * | 1987-03-13 | 2000-12-12 | Coulter Corporation | Method and apparatus for screening obscured or partially obscured cells |
| US5100777A (en) * | 1987-04-27 | 1992-03-31 | Tanox Biosystems, Inc. | Antibody matrix device and method for evaluating immune status |
| DE3736027A1 (de) * | 1987-10-24 | 1989-05-03 | Gerhard Dipl Phys Artmann | Verfahren zur ermittlung der zu einem bestimmten zeitpunkt vorliegenden form von zellen und einrichtung zur durchfuehrung des verfahrens |
| ES2035317T5 (es) * | 1987-11-09 | 1998-03-16 | Becton Dickinson Co | Metodo para analizar celulas hematopoyeticas en una muestra. |
| US5256532A (en) * | 1988-05-02 | 1993-10-26 | Zynaxis Technologies, Inc. | Methods, reagents and test kits for determination of subpopulations of biological entities |
| US5385822A (en) * | 1988-05-02 | 1995-01-31 | Zynaxis, Inc. | Methods for detection and quantification of cell subsets within subpopulations of a mixed cell population |
| FR2644893B1 (fr) * | 1989-03-24 | 1991-07-12 | Sanofi Sa | Trousse et methode de dosage applicables a des cellules entieres |
| FR2644894B1 (fr) * | 1989-03-24 | 1994-05-13 | Sanofi | Trousse et methode de dosage enzymatique applicables a des cellules entieres |
| WO1992014149A1 (en) * | 1991-02-01 | 1992-08-20 | Arizona Technology Development Corporation | Apparatus and methods for using hemozoin |
| US5459073A (en) * | 1991-05-08 | 1995-10-17 | Streck Laboratories, Inc. | Method and composition for preserving antigens and process for utilizing cytological material produced by same |
| US5460797A (en) * | 1991-05-08 | 1995-10-24 | Streck Laboratories, Inc. | Method for fixing tissues and cells for analysis using oxazolidine compounds |
| US5849517A (en) * | 1991-05-08 | 1998-12-15 | Streck Laboratories, Inc. | Method and composition for preserving antigens and nucleic acids and process for utilizing cytological material produced by same |
| CA2070244A1 (en) * | 1991-08-07 | 1993-02-08 | Young Ran Kim | Method and reagent composition for subtyping lymphocytes in peripheral blood |
| ES2123063T3 (es) | 1992-09-14 | 1999-01-01 | Stanford Res Inst Int | Marcadores convertidores al alza para ensayos biologicos y otros mediante tecnicas de excitacion laser. |
| US5342754A (en) * | 1992-09-14 | 1994-08-30 | Coulter Corporation | Preserved, non-infectious control cell for use in the identification of a disease through blood testing |
| US5585246A (en) * | 1993-02-17 | 1996-12-17 | Biometric Imaging, Inc. | Method for preparing a sample in a scan capillary for immunofluorescent interrogation |
| US5409826A (en) * | 1993-06-08 | 1995-04-25 | Coulter Corporation | Preserved, non-infectious control cells prepared by the modulation or modification of normal cells |
| JPH08330818A (ja) * | 1995-05-27 | 1996-12-13 | Nec Corp | パラボラアンテナの融雪装置 |
| DE19725133A1 (de) * | 1997-06-13 | 1998-12-17 | Micromet Ges Fuer Biomedizinis | Nachweis von seltenen Zellen |
| US6759246B1 (en) | 2001-11-30 | 2004-07-06 | Research & Diagnostic Systems, Inc. | Hematology control composition including lymphocyte analogs and method for preparation and use |
| US8748103B2 (en) | 2008-11-07 | 2014-06-10 | Sequenta, Inc. | Monitoring health and disease status using clonotype profiles |
| US9506119B2 (en) | 2008-11-07 | 2016-11-29 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Method of sequence determination using sequence tags |
| GB2477439B (en) | 2008-11-07 | 2012-02-15 | Sequenta Inc | Methods for correlating clonotypes with a disease in a patient |
| US8628927B2 (en) | 2008-11-07 | 2014-01-14 | Sequenta, Inc. | Monitoring health and disease status using clonotype profiles |
| US9365901B2 (en) | 2008-11-07 | 2016-06-14 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Monitoring immunoglobulin heavy chain evolution in B-cell acute lymphoblastic leukemia |
| US9528160B2 (en) | 2008-11-07 | 2016-12-27 | Adaptive Biotechnolgies Corp. | Rare clonotypes and uses thereof |
| ES2568509T3 (es) | 2009-01-15 | 2016-04-29 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Perfilado de la inmunidad adaptativa y métodos para la generación de anticuerpos monoclonales |
| RU2014144463A (ru) | 2009-06-25 | 2015-06-20 | Фред Хатчинсон Кансэр Рисёч Сентер | Способ измерения адаптивного иммунитета |
| US10385475B2 (en) | 2011-09-12 | 2019-08-20 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Random array sequencing of low-complexity libraries |
| US9279159B2 (en) | 2011-10-21 | 2016-03-08 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Quantification of adaptive immune cell genomes in a complex mixture of cells |
| ES2683037T3 (es) | 2011-12-09 | 2018-09-24 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Diagnóstico de tumores malignos linfoides y detección de enfermedad residual mínima |
| US9499865B2 (en) | 2011-12-13 | 2016-11-22 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Detection and measurement of tissue-infiltrating lymphocytes |
| DK2823060T3 (en) | 2012-03-05 | 2018-05-28 | Adaptive Biotechnologies Corp | Determination of associated immune receptor chains from frequency-matched subunits |
| US9150905B2 (en) | 2012-05-08 | 2015-10-06 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Compositions and method for measuring and calibrating amplification bias in multiplexed PCR reactions |
| CN105189779B (zh) | 2012-10-01 | 2018-05-11 | 适应生物技术公司 | 通过适应性免疫受体多样性和克隆性表征进行的免疫能力评估 |
| WO2015160439A2 (en) | 2014-04-17 | 2015-10-22 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Quantification of adaptive immune cell genomes in a complex mixture of cells |
| US9708657B2 (en) | 2013-07-01 | 2017-07-18 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Method for generating clonotype profiles using sequence tags |
| AU2015227054A1 (en) | 2014-03-05 | 2016-09-22 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Methods using randomer-containing synthetic molecules |
| US10066265B2 (en) | 2014-04-01 | 2018-09-04 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Determining antigen-specific t-cells |
| AU2015339191A1 (en) | 2014-10-29 | 2017-05-18 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Highly-multiplexed simultaneous detection of nucleic acids encoding paired adaptive immune receptor heterodimers from many samples |
| US10246701B2 (en) | 2014-11-14 | 2019-04-02 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Multiplexed digital quantitation of rearranged lymphoid receptors in a complex mixture |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5616872A (en) * | 1979-07-13 | 1981-02-18 | Ortho Diagnostics | Automatized identification and counting method of and apparatus for subclass of specified blood cell |
| JPS60155971A (ja) * | 1983-11-01 | 1985-08-16 | シ− エツクス リサ−チ インコ−ポレ−テツド | 抗原と白血球細胞抗体間の反応程度を測定する方法及びその装置 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU531777B2 (en) * | 1978-04-05 | 1983-09-08 | Syva Co. | Label/solid conjugate immunoassay system |
| US4381295A (en) * | 1979-04-26 | 1983-04-26 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Monoclonal antibody to human helper T cells and methods of preparing same |
| JPS56141559A (en) * | 1980-04-04 | 1981-11-05 | Toray Ind Inc | Reagent for immunological inspection |
| US4486530A (en) * | 1980-08-04 | 1984-12-04 | Hybritech Incorporated | Immunometric assays using monoclonal antibodies |
| DE3174918D1 (en) * | 1980-12-23 | 1986-08-14 | Boehringer Mannheim Gmbh | Hydrophilic latex particles, process for their preparation and their use |
| US4511662A (en) * | 1982-06-18 | 1985-04-16 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Simultaneous assay for T and B lymphocyte populations and subpopulations |
| US4745075A (en) * | 1984-09-06 | 1988-05-17 | Burroughs Wellcome Co. | Diagnostic test methods |
| US4828984A (en) * | 1986-04-11 | 1989-05-09 | Flow Cytometry Standards Corporation | Composition, synthesis and use of simulated cells |
| US4720465A (en) * | 1985-05-14 | 1988-01-19 | Fisher Scientific Company | Centrifugal kinetic agglutination assay |
| US4714682A (en) * | 1985-12-11 | 1987-12-22 | Flow Cytometry Standards Corporation | Fluorescent calibration microbeads simulating stained cells |
-
1985
- 1985-11-19 DE DE19853541033 patent/DE3541033A1/de not_active Withdrawn
-
1986
- 1986-10-31 CA CA000521967A patent/CA1278258C/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-11-05 US US06/927,803 patent/US4876189A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-11-12 ZA ZA868569A patent/ZA868569B/xx unknown
- 1986-11-13 DE DE8686115758T patent/DE3669206D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-11-13 EP EP86115758A patent/EP0224134B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-11-13 AT AT86115758T patent/ATE50647T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-11-16 IL IL80655A patent/IL80655A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1986-11-18 JP JP61273082A patent/JPS62121361A/ja active Granted
- 1986-11-19 AU AU65382/86A patent/AU574281B2/en not_active Ceased
- 1986-11-19 KR KR860009778A patent/KR870005249A/ko not_active Application Discontinuation
-
1989
- 1989-07-07 US US07/376,707 patent/US5094940A/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5616872A (en) * | 1979-07-13 | 1981-02-18 | Ortho Diagnostics | Automatized identification and counting method of and apparatus for subclass of specified blood cell |
| JPS60155971A (ja) * | 1983-11-01 | 1985-08-16 | シ− エツクス リサ−チ インコ−ポレ−テツド | 抗原と白血球細胞抗体間の反応程度を測定する方法及びその装置 |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04252957A (ja) * | 1990-08-07 | 1992-09-08 | Becton Dickinson & Co | 絶対カウントのための一段試験 |
| JPH07101218B2 (ja) * | 1990-08-07 | 1995-11-01 | ベクトン・ディッキンソン・アンド・カンパニー | 絶対カウントのための一段試験 |
| JP2007232631A (ja) * | 2006-03-02 | 2007-09-13 | Osaka Univ | 生細胞内の特定タンパク質の定量方法および標準蛍光マイクロビーズの作製方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3541033A1 (de) | 1987-05-21 |
| AU574281B2 (en) | 1988-06-30 |
| IL80655A0 (en) | 1987-02-27 |
| DE3669206D1 (de) | 1990-04-05 |
| AU6538286A (en) | 1987-05-21 |
| ZA868569B (en) | 1987-07-29 |
| EP0224134A1 (de) | 1987-06-03 |
| US5094940A (en) | 1992-03-10 |
| US4876189A (en) | 1989-10-24 |
| CA1278258C (en) | 1990-12-27 |
| ATE50647T1 (de) | 1990-03-15 |
| KR870005249A (ko) | 1987-06-05 |
| JPH0521508B2 (ja) | 1993-03-24 |
| EP0224134B1 (de) | 1990-02-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS62121361A (ja) | 細胞集団もしくは亜集団を定量するための方法及び標準物並びに試薬キット | |
| US5122453A (en) | Method for discriminating surface stained lymphocytes | |
| US5256532A (en) | Methods, reagents and test kits for determination of subpopulations of biological entities | |
| EP0559738B1 (en) | Methods for detection and quantitation of cell subsets within subpopulations of a mixed cell population | |
| JPS597265A (ja) | リンパ球群中のｂ細胞及びｔ細胞の相対量の同時測定方法 | |
| EP0280559B1 (en) | Agglutination immunoassay and kit for determination of a multivalent immune species using a buffered salt wash solution | |
| US20030008410A1 (en) | Immunoassay apparatus, kit and methods | |
| JPH06508687A (ja) | 可溶性ｈｌａクロス−マッチ | |
| JPS60259964A (ja) | 分析試料中の免疫学的に活性な物質の定量法 | |
| CA2046130A1 (en) | Biologically active reagent, analytical element and methods for use of the reagent | |
| CA1340973C (en) | Immunometric assay kit and method applicable to whole cells | |
| JP4127724B2 (ja) | リンパ球機能の測定方法 | |
| US6933106B2 (en) | Platelet immunoglobulin bead suspension and flow cytometry | |
| US3562384A (en) | Immunological indicator and test system | |
| US4808524A (en) | Test kit and method for the determination of Streptococcus A antigen | |
| US6461825B1 (en) | Immunometric assay kit and method applicable to whole cells | |
| JPH05223820A (ja) | 抽出組成物として界面活性剤混合物を使用する歯周病に随伴する微生物検出用キットおよびその検出方法 | |
| CA1254134A (en) | Specific binding flow cytometry method | |
| USRE33850E (en) | Test kit and method for the determination of Streptococcus A antigen | |
| JPH03251764A (ja) | 緩衝化洗浄組成物および試験キットならびに使用方法 | |
| Rush et al. | Solid-phase radioimmunoassay on polystyrene beads and its application to dopamine-β-hydroxylase | |
| JPH02298866A (ja) | 酵素検定キット及び完全細胞に適用可能な方法 | |
| EP0280557B1 (en) | Test kit, extraction device and method for the determination of streptococcus a antigen | |
| JPH0611507A (ja) | ヒトポドカリキシンの測定方法 | |
| JP3618797B2 (ja) | 免疫測定法 |