JPS6045851B2 - ヒト胎盤性ラクトゲンの製造方法 - Google Patents
ヒト胎盤性ラクトゲンの製造方法Info
- Publication number
- JPS6045851B2 JPS6045851B2 JP55180241A JP18024180A JPS6045851B2 JP S6045851 B2 JPS6045851 B2 JP S6045851B2 JP 55180241 A JP55180241 A JP 55180241A JP 18024180 A JP18024180 A JP 18024180A JP S6045851 B2 JPS6045851 B2 JP S6045851B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- human
- hpl
- lymphoblastoid
- animal
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/57554—Prolactin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/91—Cell lines ; Processes using cell lines
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ヒト胎盤性ラクトゲン（Ｈｕｍａｎｃｈｏ
ｒｉｏｎｉｃｓｏｍａｔｏｍａｍｍｏｔｒｏｐｉｎ又は
Ｈｕｍａｎｐｌａｃｅｎｔａｌｌａｃｔｏ■ｎ９以下Ｈ
ＰＬと略称する。
ｒｉｏｎｉｃｓｏｍａｔｏｍａｍｍｏｔｒｏｐｉｎ又は
Ｈｕｍａｎｐｌａｃｅｎｔａｌｌａｃｔｏ■ｎ９以下Ｈ
ＰＬと略称する。
）の製造方法に関する。 Ｉ−［ＰＬは胎盤絨毛の合肥
細胞 （ｓｙｎｃｙｔｉｏｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｃｅｌｌ）
が産生するホルモンで、成長促進作用および抗インシュ
リン作用などを有する。
細胞 （ｓｙｎｃｙｔｉｏｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｃｅｌｌ）
が産生するホルモンで、成長促進作用および抗インシュ
リン作用などを有する。
ＨＰＬを大量に安価に製造する方法は未だ知られてい
ない。
ない。
本発明者は、紐ルの大量供給を目ざして鋭意研究を続
けたところ、意外にも、ＨＰＬ産生能を有するヒト由来
のリンパ芽球様細胞が増殖速度が大きく、細胞当りの■
ル産生量も大で、■化産生細胞として好適てあることを
見い出し、本発明を完成した。
けたところ、意外にも、ＨＰＬ産生能を有するヒト由来
のリンパ芽球様細胞が増殖速度が大きく、細胞当りの■
ル産生量も大で、■化産生細胞として好適てあることを
見い出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明は、■ル産生能を有するヒト由来の
リンパ芽球様細胞をヒト以外の温血動物体内に移植し、
または、その温血動物の体液の供給を受けながら増殖さ
せた細胞からＨＰＬを産生せしめることを特徴とするＨ
ＰＬの製造方法に関するものである。
リンパ芽球様細胞をヒト以外の温血動物体内に移植し、
または、その温血動物の体液の供給を受けながら増殖さ
せた細胞からＨＰＬを産生せしめることを特徴とするＨ
ＰＬの製造方法に関するものである。
本発明の方法は、イソヒドロで培養させる場合とは違
つて、ＨＰＬの産生量が大であるだけでなく、高価な血
清などを含む栄養培地が不要、または大幅に節約でき、
更に細胞増殖中の維持管理も極めて容易である。
つて、ＨＰＬの産生量が大であるだけでなく、高価な血
清などを含む栄養培地が不要、または大幅に節約でき、
更に細胞増殖中の維持管理も極めて容易である。
すなわち、ＨＰＬ産生能を有するヒト由来のリンパ芽
球様細胞を、ヒト以外の温血動物体内に移植し、または
その動物の体液の供給を受けることのできるチャンバー
に収容し、通常の飼育をすれば、温血動物体から供給さ
れる栄養物を含有する体液を利用してその細胞が容易に
増殖しうるのである。
球様細胞を、ヒト以外の温血動物体内に移植し、または
その動物の体液の供給を受けることのできるチャンバー
に収容し、通常の飼育をすれば、温血動物体から供給さ
れる栄養物を含有する体液を利用してその細胞が容易に
増殖しうるのである。
更に、イソヒドロで培養させる場合と比較して、この
細胞の増殖が安定していること、その増殖速度の大きい
こと、得られる細胞量の大きいこと、更には細胞当りの
ＨＰＬ産生量の大きいことが特徴である。
細胞の増殖が安定していること、その増殖速度の大きい
こと、得られる細胞量の大きいこと、更には細胞当りの
ＨＰＬ産生量の大きいことが特徴である。
本発明て使用するヒト由来のリンパ芽球様細胞は、Ｈ
ＰＬ産生能を有し、かつヒト以外の温血動物の体内に移
植して容易に増殖するものであればよい。
ＰＬ産生能を有し、かつヒト以外の温血動物の体内に移
植して容易に増殖するものであればよい。
例えば、胎盤絨毛の合肥細胞、絨毛上皮腫細胞などの本
来■ル産生能を有する細胞及び肺癌細胞などの異所性■
ル産生能を有する細胞からＨＰＬ産生遺伝子を、ポリエ
チレングリコールやセンダイウイルスなどを利用する細
胞融合の手段や、ＤＮＡリガーゼ、制限酵素（ヌクレア
ーゼ）、ＤＮＡポリメラーゼなどの酵素を利用する遺伝
子組換えの手段などによつて導入したヒト由来のリンパ
芽球様細胞、または異所性ＨＰＬ産生能を有するヒト由
来のリンパ芽球様細胞などが好適である。これらリンパ
芽球様細胞の利用は、ヒト以外の温血動物に移植する時
、その宿主動物の細胞と混りにくい軟腫瘤を形成しやす
く、摘出後の分散も容易なので、生きたヒトリンパ芽球
様細胞の採取に極めて有利である。
来■ル産生能を有する細胞及び肺癌細胞などの異所性■
ル産生能を有する細胞からＨＰＬ産生遺伝子を、ポリエ
チレングリコールやセンダイウイルスなどを利用する細
胞融合の手段や、ＤＮＡリガーゼ、制限酵素（ヌクレア
ーゼ）、ＤＮＡポリメラーゼなどの酵素を利用する遺伝
子組換えの手段などによつて導入したヒト由来のリンパ
芽球様細胞、または異所性ＨＰＬ産生能を有するヒト由
来のリンパ芽球様細胞などが好適である。これらリンパ
芽球様細胞の利用は、ヒト以外の温血動物に移植する時
、その宿主動物の細胞と混りにくい軟腫瘤を形成しやす
く、摘出後の分散も容易なので、生きたヒトリンパ芽球
様細胞の採取に極めて有利である。
このようなヒトリンパ芽球様細胞には、ヒト白血病もし
くはヒト悪性リンパ腫由来の細胞株が適しており、例え
ばナマルバ（Ｎａｍａｌｖａ）細胞、ＢＡＬＬ−１細胞
、ＮＡＬＬ−１細胞、ＴＡＬＬ−１細胞、ＪＢＬ細胞な
どの公知ヒト由来細胞株が、特に有利に使用しうる。
くはヒト悪性リンパ腫由来の細胞株が適しており、例え
ばナマルバ（Ｎａｍａｌｖａ）細胞、ＢＡＬＬ−１細胞
、ＮＡＬＬ−１細胞、ＴＡＬＬ−１細胞、ＪＢＬ細胞な
どの公知ヒト由来細胞株が、特に有利に使用しうる。
本発明におけるＨＰＬの製造方法に使用する温血動物は
、ＨＰＬ産生能を有するヒト由来のリンパ芽球様細胞が
増殖しうるものであればよく、例えば、ニワト！八ハト
などの鳥類、イヌ、ネコ、サル、ヤギ、プタ、ウシ、ウ
マ、ウサギ、モルモツト、ラット、ヌードラツト、ハム
スター、普通マウス、ヌードマウスなどの噛乳類などが
使用できる。
、ＨＰＬ産生能を有するヒト由来のリンパ芽球様細胞が
増殖しうるものであればよく、例えば、ニワト！八ハト
などの鳥類、イヌ、ネコ、サル、ヤギ、プタ、ウシ、ウ
マ、ウサギ、モルモツト、ラット、ヌードラツト、ハム
スター、普通マウス、ヌードマウスなどの噛乳類などが
使用できる。
これらの動物にヒト由来のリンパ芽球様細胞を移植する
と好ましくない免疫反応を起すおそれがあるので、その
反応をできるだけおさえるために、使用する動物は、で
きるだけ幼若な状態、すなわち卵、胚、胎児、新生期、
幼少期のものの方が好ましい。
と好ましくない免疫反応を起すおそれがあるので、その
反応をできるだけおさえるために、使用する動物は、で
きるだけ幼若な状態、すなわち卵、胚、胎児、新生期、
幼少期のものの方が好ましい。
また、これら動物に、例えば、約２００〜６００レムの
エツクス線若しくはガンマ線を照射するか、または抗血
清若しくは免疫抑制剤など．を注射するなどの前処置を
ほどこして、免疫反応を弱めて移植してもよい。使用す
る動物がヌードマウス、ヌードラツトなどの免疫不全動
物の場合には、成長したものであつても免疫反応が弱い
ので、これらの前処置を必要とすることなく、培養．株
化されたヒト由来のリンパ芽球様細胞が移植でき、急速
に増殖できるので特に好都合である。また、ヒト由来の
リンパ芽球様細胞を、例えば先ずハムスターに移植し、
増殖させた後、この細胞を更にヌードマウスに移植する
などのようにヒト以外の温血動物間で移植してヒト由来
のリンパ芽球様細胞の増殖をより安定化したり、更にそ
れらから産生されるＨＰＬ量を増加させることも自由で
ある。この場合、同種間、同属間は勿論のこと、同綱間
、同門間移植であつてもよい。更に、ヒト由来のリンパ
芽球様細胞を移植する動物体内の部位は移植した細胞が
増殖し得る部位であればよく、例えば尿液腔、静脈、腹
腔、皮下など自由に選ばれる。
エツクス線若しくはガンマ線を照射するか、または抗血
清若しくは免疫抑制剤など．を注射するなどの前処置を
ほどこして、免疫反応を弱めて移植してもよい。使用す
る動物がヌードマウス、ヌードラツトなどの免疫不全動
物の場合には、成長したものであつても免疫反応が弱い
ので、これらの前処置を必要とすることなく、培養．株
化されたヒト由来のリンパ芽球様細胞が移植でき、急速
に増殖できるので特に好都合である。また、ヒト由来の
リンパ芽球様細胞を、例えば先ずハムスターに移植し、
増殖させた後、この細胞を更にヌードマウスに移植する
などのようにヒト以外の温血動物間で移植してヒト由来
のリンパ芽球様細胞の増殖をより安定化したり、更にそ
れらから産生されるＨＰＬ量を増加させることも自由で
ある。この場合、同種間、同属間は勿論のこと、同綱間
、同門間移植であつてもよい。更に、ヒト由来のリンパ
芽球様細胞を移植する動物体内の部位は移植した細胞が
増殖し得る部位であればよく、例えば尿液腔、静脈、腹
腔、皮下など自由に選ばれる。
また、直接動物体内にヒト由来のリンパ芽球様細胞を移
植することなく、動物細胞の通過を阻止し得る多孔性の
ｐ過膜、例えば孔径約１０−７〜１０−ｈを有するメン
ブランフイルター、限外淵過）膜、またはホローフアイ
バーなどを設けた公知の各種形状、大きさの拡散チャン
バーを動物体内、例えば腹腔内に埋設して、動物体から
の栄養物を含む体液の供給を受けつつ、そのチャンバー
内で培養株化されたヒト由来のリンパ芽球様細胞を増・
殖させることができる。また、必要に応じて、この拡散
チャンバー内の栄養物を含む体液を動物体内のそれと接
続して潅流させるようにした拡散チャンバーを、例えば
動物体表に取付け、拡散チャンバー内のヒト由来の”リ
ンパ芽球様細胞の増殖状態を透視できるようにすること
も、また、この拡散チャンバー部分のみを着脱交換てき
るようにして動物を層殺せずに寿命一杯細胞を増殖させ
て、動物個体当りの細胞生産量を更に高めることもでき
る。
植することなく、動物細胞の通過を阻止し得る多孔性の
ｐ過膜、例えば孔径約１０−７〜１０−ｈを有するメン
ブランフイルター、限外淵過）膜、またはホローフアイ
バーなどを設けた公知の各種形状、大きさの拡散チャン
バーを動物体内、例えば腹腔内に埋設して、動物体から
の栄養物を含む体液の供給を受けつつ、そのチャンバー
内で培養株化されたヒト由来のリンパ芽球様細胞を増・
殖させることができる。また、必要に応じて、この拡散
チャンバー内の栄養物を含む体液を動物体内のそれと接
続して潅流させるようにした拡散チャンバーを、例えば
動物体表に取付け、拡散チャンバー内のヒト由来の”リ
ンパ芽球様細胞の増殖状態を透視できるようにすること
も、また、この拡散チャンバー部分のみを着脱交換てき
るようにして動物を層殺せずに寿命一杯細胞を増殖させ
て、動物個体当りの細胞生産量を更に高めることもでき
る。
これら拡散チャンバーを利用する方法は、ヒト由来のリ
ンパ芽球様細胞が動物細胞と直接接触しないので、ヒト
由来の細胞のみが容易に採取できるだけでなく、好まし
くない免疫反応を起す心配も少ないので、免疫反応を抑
制する前処置の必要もなく、各種温血動物を自由に利用
できる特徴を有している。
ンパ芽球様細胞が動物細胞と直接接触しないので、ヒト
由来の細胞のみが容易に採取できるだけでなく、好まし
くない免疫反応を起す心配も少ないので、免疫反応を抑
制する前処置の必要もなく、各種温血動物を自由に利用
できる特徴を有している。
移植した動物の維持管理は、その動物の通常の飼育を続
ければよく、移植後と言えども特別の取扱いは何ら必要
としない。ヒト由来のリンパ芽球様細胞を増殖させるた
めの期間は通常１〜２問、通常１〜５週で目的を達する
ことができる。
ければよく、移植後と言えども特別の取扱いは何ら必要
としない。ヒト由来のリンパ芽球様細胞を増殖させるた
めの期間は通常１〜２問、通常１〜５週で目的を達する
ことができる。
このようにして得られるヒト由来のリンパ芽球様細胞数
は、動物個体当り約１０７〜１０１２、またはそれ以上
に達することを見いだした。換言すれば、本発明で使用
するＩ（ＰＬの製造方法により増殖させたヒト由来のリ
ンパ芽球様細胞数は、動物固体当り移植した細胞数の約
１σ〜１０７倍、またはそれ以上に達し、生体外の栄養
培地に接種して増殖させる場合の約１０１〜１Ｃｆ′倍
、またはそれ以上にも達して、ＨＰＬの製造に極めて好
都合である。このようにして増殖させたヒト由来のリン
パ芽球様生細胞から、ＨＰＬを産生させる方法は自由で
ある。
は、動物個体当り約１０７〜１０１２、またはそれ以上
に達することを見いだした。換言すれば、本発明で使用
するＩ（ＰＬの製造方法により増殖させたヒト由来のリ
ンパ芽球様細胞数は、動物固体当り移植した細胞数の約
１σ〜１０７倍、またはそれ以上に達し、生体外の栄養
培地に接種して増殖させる場合の約１０１〜１Ｃｆ′倍
、またはそれ以上にも達して、ＨＰＬの製造に極めて好
都合である。このようにして増殖させたヒト由来のリン
パ芽球様生細胞から、ＨＰＬを産生させる方法は自由で
ある。
例えば、腹腔内の腹水に浮遊状で増殖したヒト由来のリ
ンパ芽球様細胞を採取し、または皮下で増殖したヒト由
来のリンパ芽球様細胞を採取し、または皮下で増殖した
腫瘤を摘出し、分散させた後採取し、この細胞を約２０
〜４０℃に保つた栄養培地に細胞濃度が約１０１〜１０
３／ｍｌになるように浮遊させ、約１〜５０時間保つこ
とによつて■生を産生させればよい。この際、産生量を
より高めるために、例えばロイシン、リジン、アルギニ
ン、システインなどのアミノ酸、塩化ナトリウム、塩化
カリウム、塩化カルシウム、硫酸マグネシウムなどの塩
類、黄体形成ホルモン放出ホルモンなどのホルモンなど
の一種または二種以上の物質を共存させることも好都合
である。なお、本発明によつて、ＨＰＬの産生と同時に
他のホルモン例えばヒト絨毛性腺刺激ホルモン（Ｈｕｍ
ａｎｃｈＯｒｉＯｎｉｃｇＯｒｌａｄＯｔｒＯｐｉｎ，
以下ＨＣＧと略称する。
ンパ芽球様細胞を採取し、または皮下で増殖したヒト由
来のリンパ芽球様細胞を採取し、または皮下で増殖した
腫瘤を摘出し、分散させた後採取し、この細胞を約２０
〜４０℃に保つた栄養培地に細胞濃度が約１０１〜１０
３／ｍｌになるように浮遊させ、約１〜５０時間保つこ
とによつて■生を産生させればよい。この際、産生量を
より高めるために、例えばロイシン、リジン、アルギニ
ン、システインなどのアミノ酸、塩化ナトリウム、塩化
カリウム、塩化カルシウム、硫酸マグネシウムなどの塩
類、黄体形成ホルモン放出ホルモンなどのホルモンなど
の一種または二種以上の物質を共存させることも好都合
である。なお、本発明によつて、ＨＰＬの産生と同時に
他のホルモン例えばヒト絨毛性腺刺激ホルモン（Ｈｕｍ
ａｎｃｈＯｒｉＯｎｉｃｇＯｒｌａｄＯｔｒＯｐｉｎ，
以下ＨＣＧと略称する。
）などを産生せしめることも自由である。このようにし
て産生されたＨＰＬは、公知の精製分離法、例えば、塩
析、透析、淵過、遠心分離、濃縮、凍結乾燥などを行な
うことによつて容易に精製分離し、採取することができ
る。
て産生されたＨＰＬは、公知の精製分離法、例えば、塩
析、透析、淵過、遠心分離、濃縮、凍結乾燥などを行な
うことによつて容易に精製分離し、採取することができ
る。
更に高度の精製を必要とする場合には、例えばイオン交
換体への吸着・脱着、ゲル沖過、アフイニテイクロマト
グラフイー、等電点分画、電気泳動などの公知の方法を
組み合せれば最高純度のＨＰＬを採取することも可能で
ある。このようにして得たＨＰＬは、単一物質で、また
はこれにその他の一種若しくは二種以上の物質を含有せ
しめ、例えば、注射薬、外用薬、内服薬、診断薬などと
してヒトの疾患の予防、治療に有利に利用できる。
換体への吸着・脱着、ゲル沖過、アフイニテイクロマト
グラフイー、等電点分画、電気泳動などの公知の方法を
組み合せれば最高純度のＨＰＬを採取することも可能で
ある。このようにして得たＨＰＬは、単一物質で、また
はこれにその他の一種若しくは二種以上の物質を含有せ
しめ、例えば、注射薬、外用薬、内服薬、診断薬などと
してヒトの疾患の予防、治療に有利に利用できる。
ＨＰＬの産生量は、Ｐ．Ｂｅｃｈ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃ
ｌｌｎ．ＥｎｄＯｃｒｉｎＯｌ．，ＶＯｌ．２５，ｌ４
５７〜１４６２（１９６５）に報告されているラジオイ
ムノアツセイ法に準じて測定し、米国ＮＩＨより入手さ
れる標準ＨＰＬの重量で表示した。
ｌｌｎ．ＥｎｄＯｃｒｉｎＯｌ．，ＶＯｌ．２５，ｌ４
５７〜１４６２（１９６５）に報告されているラジオイ
ムノアツセイ法に準じて測定し、米国ＮＩＨより入手さ
れる標準ＨＰＬの重量で表示した。
なお、ＨＣＧの産生量は、Ａ．Ｒ．Ｍｉｄｇｌｅｙ，Ｊ
ｒ．，ＥｎｄＯｃｒｉｎＯｌＯｇｙ，■０１．７９，１
０−１８（１９６６）に報告されているラジオイムノア
ツセィ法に準じて測定し、国際単位（ＩＵ）で表示した
。以下、２〜３の実施例を述べる。
ｒ．，ＥｎｄＯｃｒｉｎＯｌＯｇｙ，■０１．７９，１
０−１８（１９６６）に報告されているラジオイムノア
ツセィ法に準じて測定し、国際単位（ＩＵ）で表示した
。以下、２〜３の実施例を述べる。
実施例１
絨毛性上皮腫瘍患者から摘出、細切、分散させて得たヒ
ト絨毛上皮腫細胞とリンパ芽球様ナマルバ細胞（Ｎａｍ
ａｌｖａｃｅｌｌ）とを１４０ｍＭＮａＣ１、５４ｍＭ
ＫＣ１、１ｍＭＮａＨ２Ｐ０４、２ｎ１ＭＣａＣ１２を
含有する塩類溶液にそれぞれ約１０１／Ｍｔになるよう
にフラスコ中に浮遊させ、これに予め紫外線で不活化し
たセンダイウイルスを含有する前記塩類溶液を氷冷下で
混合し、約５分後に３７℃恒温水槽に移して、約３紛間
攪拌しつつ細胞融合を起させ、リンパ芽球様ナマルバ細
胞にＨＰＬ産生能を導入した。
ト絨毛上皮腫細胞とリンパ芽球様ナマルバ細胞（Ｎａｍ
ａｌｖａｃｅｌｌ）とを１４０ｍＭＮａＣ１、５４ｍＭ
ＫＣ１、１ｍＭＮａＨ２Ｐ０４、２ｎ１ＭＣａＣ１２を
含有する塩類溶液にそれぞれ約１０１／Ｍｔになるよう
にフラスコ中に浮遊させ、これに予め紫外線で不活化し
たセンダイウイルスを含有する前記塩類溶液を氷冷下で
混合し、約５分後に３７℃恒温水槽に移して、約３紛間
攪拌しつつ細胞融合を起させ、リンパ芽球様ナマルバ細
胞にＨＰＬ産生能を導入した。
このリンパ芽球様ナマルバ細胞を成長したヌードマウス
の腹腔内に移植した後、通常の方法で５週間飼育した。
の腹腔内に移植した後、通常の方法で５週間飼育した。
皮下に生じた腫瘤約１５ｇを摘出し、細切した後、トリ
プシン含有の生理食塩水に懸濁して細胞を分散させた。
この細胞を牛脂児血清１０Ｖ′／ｖ％を補足したＥａｒ
ｌｅ培地１９９（ＰＨ７．２）で洗浄した後、Ｌ−アル
ギニンを３０ｒｒ１Ｍ存在せしめた同培地に細胞濃度約
１σ／ｍｌになるように浮遊させ、３５℃で２０時間保
つてＨＰＬを産生させた。その後、細胞を超音波処理し
、得られる上清を用いてＨＰＬの産生量を測定したとこ
ろ、浮遊液ｍｌ当り、約３４０ｐｇであつた。なお、こ
の上清にはＨＣＧの活性も認められ、その量は浮遊液ｍ
ｌ当り約２３０１Ｕであつた。
プシン含有の生理食塩水に懸濁して細胞を分散させた。
この細胞を牛脂児血清１０Ｖ′／ｖ％を補足したＥａｒ
ｌｅ培地１９９（ＰＨ７．２）で洗浄した後、Ｌ−アル
ギニンを３０ｒｒ１Ｍ存在せしめた同培地に細胞濃度約
１σ／ｍｌになるように浮遊させ、３５℃で２０時間保
つてＨＰＬを産生させた。その後、細胞を超音波処理し
、得られる上清を用いてＨＰＬの産生量を測定したとこ
ろ、浮遊液ｍｌ当り、約３４０ｐｇであつた。なお、こ
の上清にはＨＣＧの活性も認められ、その量は浮遊液ｍ
ｌ当り約２３０１Ｕであつた。
対照として、ヒト絨毛上皮腫細胞をヌードマウスに直接
移植した後、通常の方法で５週間飼育し、皮下に生じた
腫瘤約５ｇを摘出し、細切、分散させて得た細胞を用い
て同様にＨＰＬを産生させたところ浮遊液ｍｌ当りわず
かに約３ｐｇてあつた。実施例２ 肺癌患者から摘出、細切、分散させて得たヒト肺癌細胞
とリンパ芽球様ＪＢＬ細胞とを実施例１の方法に準じて
細胞融合させ、リンパ芽球則ＢＬ細胞にＨＰＬ産生能を
導入した。
移植した後、通常の方法で５週間飼育し、皮下に生じた
腫瘤約５ｇを摘出し、細切、分散させて得た細胞を用い
て同様にＨＰＬを産生させたところ浮遊液ｍｌ当りわず
かに約３ｐｇてあつた。実施例２ 肺癌患者から摘出、細切、分散させて得たヒト肺癌細胞
とリンパ芽球様ＪＢＬ細胞とを実施例１の方法に準じて
細胞融合させ、リンパ芽球則ＢＬ細胞にＨＰＬ産生能を
導入した。
この細胞を、ウサｌギから公知の方法で調製した抗血清
を予め注射し免疫反応を弱めた新生児ハムスターの皮下
に移植し、その後通常の方法で３週間飼育した。皮下に
生じた腫瘤約１０ｇを摘出し、細切した後、コラゲナー
ゼ含有の生理食塩水に懸濁して細胞を分散させた。
を予め注射し免疫反応を弱めた新生児ハムスターの皮下
に移植し、その後通常の方法で３週間飼育した。皮下に
生じた腫瘤約１０ｇを摘出し、細切した後、コラゲナー
ゼ含有の生理食塩水に懸濁して細胞を分散させた。
この細胞をヒト血清５Ｖ／ｖ％を補足したＥａｇｌｅの
最少基本培地（ＰＨ７．２）で洗浄した後、Ｌ−リジン
を２０ｍ１Ｍ１硫酸マグネシウム１０ｍＩ１！４存在せ
しめた同培地に細胞濃度約１（１ｆ′／Ｔｎｌになるよ
うに浮遊させ、３７℃に１５時間保つて１１ＰＬを産生
させた。その産生量を測定したところ、浮遊液ｍｌ当り
約１５０μｇであつた。対照としてヒト肺癌細胞をハム
スターに移植した後、３週間飼育し、皮下に生じた腫瘤
約Ｋｇを摘出し、細切、分散させて得た細胞を用いて同
様にＨＰＬを産生させたところ、浮遊液ＴＬＬ当りわず
かに約０．９ｐｇの産生量にすぎなかつた。実施例３新
生児ラットの静脈内へ、実施例１の方法に準じてＩ（Ｐ
Ｌ産生能を導入したリンパ芽球様ＢＡＬ．Ｌ−１細胞を
移植した後、通常の方法で４週間飼育した。生じた腫瘤
約３０ｇを摘出し、細切し、分散させた。
最少基本培地（ＰＨ７．２）で洗浄した後、Ｌ−リジン
を２０ｍ１Ｍ１硫酸マグネシウム１０ｍＩ１！４存在せ
しめた同培地に細胞濃度約１（１ｆ′／Ｔｎｌになるよ
うに浮遊させ、３７℃に１５時間保つて１１ＰＬを産生
させた。その産生量を測定したところ、浮遊液ｍｌ当り
約１５０μｇであつた。対照としてヒト肺癌細胞をハム
スターに移植した後、３週間飼育し、皮下に生じた腫瘤
約Ｋｇを摘出し、細切、分散させて得た細胞を用いて同
様にＨＰＬを産生させたところ、浮遊液ＴＬＬ当りわず
かに約０．９ｐｇの産生量にすぎなかつた。実施例３新
生児ラットの静脈内へ、実施例１の方法に準じてＩ（Ｐ
Ｌ産生能を導入したリンパ芽球様ＢＡＬ．Ｌ−１細胞を
移植した後、通常の方法で４週間飼育した。生じた腫瘤
約３０ｇを摘出し、細切し、分散させた。
この細胞を子牛血清１０Ｖ′／ｖ％を補足したＲＰＭＩ
ｌ６４嗟地（ＰＨ７．４）で洗浄した後、Ｌ−アルギニ
ン３０ｍＭ存在せしめた同培地に細胞濃度約１０７／ｍ
ｌになるように浮遊させ、３０℃で４叫間保つてＨＰＬ
を産生させた。その産生量を測定したところ、浮遊液ｍ
ｌ当り約４１０ｐｇであつた。なお、この上清にはＨＣ
Ｇの活性も認められ、その量は浮遊液ｍｌ当り約８７０
１Ｕであつた。対照として、ヒト絨毛上皮腫細胞をラッ
トに移植した後、４週間飼育し、生じた腫瘤約５ｇを摘
出し、細切、分散させて得た細胞を用いて同様に１１Ｐ
Ｌを産生させたところ、浮遊液ｍｌ当りわずか．に約２
μｇの産生量にすぎなかつた。実施例４ 成長した普通マウスに約４００レムのエツクス線を照射
してマウスの免疫反応を弱めた後、その皮下に実施例２
の方法に準じてＨＰＬ産生能を導入Ｓしたリンパ芽球様
ＮＡＬ，Ｌ−１細胞を移植し、通常の方法で３週間飼育
した。
ｌ６４嗟地（ＰＨ７．４）で洗浄した後、Ｌ−アルギニ
ン３０ｍＭ存在せしめた同培地に細胞濃度約１０７／ｍ
ｌになるように浮遊させ、３０℃で４叫間保つてＨＰＬ
を産生させた。その産生量を測定したところ、浮遊液ｍ
ｌ当り約４１０ｐｇであつた。なお、この上清にはＨＣ
Ｇの活性も認められ、その量は浮遊液ｍｌ当り約８７０
１Ｕであつた。対照として、ヒト絨毛上皮腫細胞をラッ
トに移植した後、４週間飼育し、生じた腫瘤約５ｇを摘
出し、細切、分散させて得た細胞を用いて同様に１１Ｐ
Ｌを産生させたところ、浮遊液ｍｌ当りわずか．に約２
μｇの産生量にすぎなかつた。実施例４ 成長した普通マウスに約４００レムのエツクス線を照射
してマウスの免疫反応を弱めた後、その皮下に実施例２
の方法に準じてＨＰＬ産生能を導入Ｓしたリンパ芽球様
ＮＡＬ，Ｌ−１細胞を移植し、通常の方法で３週間飼育
した。
皮下に生じた腫瘤約１５ｇを摘出し、分散させて得られ
た細胞を実施例２と同様に処理して１ＩＰＬを産生させ
た。その産生量は、浮遊液ｍｌ当り約２１０ｐｇであつ
た。対照っとして、ヒト肺癌細胞をマウスに移植した後
、３週間飼育し、生じた腫瘤約５ｇを摘出し、細切、分
散させて得た細胞を用いて同様にＨＰＬを産生させたと
ころ、浮遊液ｍｌ当りわずかに約１μｇにすぎなかつた
。実施例５ 孔径約０．５ミクロンのメンブランフイルターを設けた
内容量約１０ｍｔのプラスチック製円筒型拡散チャンバ
ー内に、実施例１の方法に準じてＨＰＬノ産生能を導入
したリンパ芽球様ＴＡＬＬ．−１細胞を生理食塩水で浮
遊させ、これを成長したラットの腹腔内に埋設した。
た細胞を実施例２と同様に処理して１ＩＰＬを産生させ
た。その産生量は、浮遊液ｍｌ当り約２１０ｐｇであつ
た。対照っとして、ヒト肺癌細胞をマウスに移植した後
、３週間飼育し、生じた腫瘤約５ｇを摘出し、細切、分
散させて得た細胞を用いて同様にＨＰＬを産生させたと
ころ、浮遊液ｍｌ当りわずかに約１μｇにすぎなかつた
。実施例５ 孔径約０．５ミクロンのメンブランフイルターを設けた
内容量約１０ｍｔのプラスチック製円筒型拡散チャンバ
ー内に、実施例１の方法に準じてＨＰＬノ産生能を導入
したリンパ芽球様ＴＡＬＬ．−１細胞を生理食塩水で浮
遊させ、これを成長したラットの腹腔内に埋設した。
このラットを通常の方法で４週間飼育した後、この拡散
チャンバーを取り出した。
チャンバーを取り出した。
これにより得−られたＴＡＬＬ−１細胞の濃度は約７×
１０３／ＲｌＬｌであつて、インビトロでの炭酸ガスイ
ンキュベーター中で培養する場合の約１σ倍以上にも達
することがわかつた。この細胞を実施例３と同様に処理
してＨＰＬを産生させた。その産生量を測定したところ
、浮遊液ｍｌ当り約３８０μｇであつた。なお、この上
清にはＨＣＧの活性も認められ、その量は浮遊液ｍｌ当
り約７５０１Ｕであつた。対照として、ヒト絨毛性上皮
腫細胞を同様に拡散チャンバー内に収容し、ラット腹腔
内に埋設して同様に４週間飼育し、細胞濃度約１０７／
ｍｌを得、この細胞を用いて同様にＨＰＬを産生させた
ところ、浮遊液ｍｌ当りわずかに約１μｇにすぎなかつ
た。実施例６３ｒＣで５日間保つたニワトリの受精卵に
、実施例１の方法に準じてヒト胎盤絨毛合胞細胞から１
１ＰＬ産生能を導入したリンパ芽球様ＪＢＬ細胞を移植
した後、３７Ｃで１週間保つた。
１０３／ＲｌＬｌであつて、インビトロでの炭酸ガスイ
ンキュベーター中で培養する場合の約１σ倍以上にも達
することがわかつた。この細胞を実施例３と同様に処理
してＨＰＬを産生させた。その産生量を測定したところ
、浮遊液ｍｌ当り約３８０μｇであつた。なお、この上
清にはＨＣＧの活性も認められ、その量は浮遊液ｍｌ当
り約７５０１Ｕであつた。対照として、ヒト絨毛性上皮
腫細胞を同様に拡散チャンバー内に収容し、ラット腹腔
内に埋設して同様に４週間飼育し、細胞濃度約１０７／
ｍｌを得、この細胞を用いて同様にＨＰＬを産生させた
ところ、浮遊液ｍｌ当りわずかに約１μｇにすぎなかつ
た。実施例６３ｒＣで５日間保つたニワトリの受精卵に
、実施例１の方法に準じてヒト胎盤絨毛合胞細胞から１
１ＰＬ産生能を導入したリンパ芽球様ＪＢＬ細胞を移植
した後、３７Ｃで１週間保つた。
この卵を割卵した後、増殖細胞を採取し、実施例１と同
様に処理してＨＰＬを産生させた。
様に処理してＨＰＬを産生させた。
Claims (1)
- １ ヒト胎盤性ラクトゲン産生能するヒト由来のリンパ
芽球様細胞をヒト以外の温血動物に移植し、またはその
温血動物の体液の供給を受けながら増殖させた細胞から
ヒト胎盤性ラクトゲンを産生せしめることを特徴とする
ヒト胎盤性ラクトゲンの製造方法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55180241A JPS6045851B2 (ja) | 1980-12-19 | 1980-12-19 | ヒト胎盤性ラクトゲンの製造方法 |
| IT49901/81A IT1148017B (it) | 1980-12-19 | 1981-12-14 | Procedimento per la produzione di lattogeno della placenta umana |
| GB8137708A GB2093038B (en) | 1980-12-19 | 1981-12-15 | Process for the production of human placental lactogen |
| CH8058/81A CH652746A5 (fr) | 1980-12-19 | 1981-12-17 | Production d'hormone lactogene, placentaire, humaine. |
| KR1019810004993A KR860001575B1 (ko) | 1980-12-19 | 1981-12-18 | 인체 태반성 락토겐의 제조방법 |
| FR8123686A FR2496466B1 (fr) | 1980-12-19 | 1981-12-18 | Production d'hormone lactogene, placentaire, humaine |
| US06/584,017 US4621053A (en) | 1980-07-30 | 1984-02-27 | Process for the production of human peptide hormones |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55180241A JPS6045851B2 (ja) | 1980-12-19 | 1980-12-19 | ヒト胎盤性ラクトゲンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS57102819A JPS57102819A (en) | 1982-06-26 |
| JPS6045851B2 true JPS6045851B2 (ja) | 1985-10-12 |
Family
ID=16079827
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP55180241A Expired JPS6045851B2 (ja) | 1980-07-30 | 1980-12-19 | ヒト胎盤性ラクトゲンの製造方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6045851B2 (ja) |
| KR (1) | KR860001575B1 (ja) |
| CH (1) | CH652746A5 (ja) |
| FR (1) | FR2496466B1 (ja) |
| GB (1) | GB2093038B (ja) |
| IT (1) | IT1148017B (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4987079A (en) * | 1982-07-06 | 1991-01-22 | Wilbur D. Smith | Composition and method for in vitro cell culture |
| CA1212918A (en) * | 1982-07-06 | 1986-10-21 | James S. Cullor | In vitro cell growth in allantoic fluid |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2016015B (en) * | 1978-01-22 | 1982-05-06 | Hayashibara Co | Method of preparing interferon and preparations containing interferon |
-
1980
- 1980-12-19 JP JP55180241A patent/JPS6045851B2/ja not_active Expired
-
1981
- 1981-12-14 IT IT49901/81A patent/IT1148017B/it active
- 1981-12-15 GB GB8137708A patent/GB2093038B/en not_active Expired
- 1981-12-17 CH CH8058/81A patent/CH652746A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1981-12-18 KR KR1019810004993A patent/KR860001575B1/ko active
- 1981-12-18 FR FR8123686A patent/FR2496466B1/fr not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB2093038B (en) | 1984-05-02 |
| IT1148017B (it) | 1986-11-26 |
| IT8149901A0 (it) | 1981-12-14 |
| KR830007088A (ko) | 1983-10-14 |
| JPS57102819A (en) | 1982-06-26 |
| CH652746A5 (fr) | 1985-11-29 |
| FR2496466A1 (fr) | 1982-06-25 |
| KR860001575B1 (ko) | 1986-10-10 |
| FR2496466B1 (fr) | 1985-06-21 |
| GB2093038A (en) | 1982-08-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR860000897B1 (ko) | 인체 에리트로포이에틴의 제조방법 | |
| US4621052A (en) | Process for the production of human epidermal growth factor | |
| JPS6030654B2 (ja) | ヒトコロニ−刺激因子の製造方法 | |
| JPS585671B2 (ja) | ヒト卵胞刺激ホルモンの製造方法 | |
| JPS586475B2 (ja) | ヒト絨毛性性腺刺激ホルモンの製造方法 | |
| KR860000900B1 (ko) | 인체 황체형성 호르몬의 제조방법 | |
| KR860000894B1 (ko) | 인체 인슐린의 제조방법 | |
| JPS5852634B2 (ja) | ウロキナ−ゼの製造法 | |
| JPS6045848B2 (ja) | ヒト成長ホルモンの製造方法 | |
| JPS5825439B2 (ja) | ヒト副甲状腺ホルモンの製造方法 | |
| JPS5825440B2 (ja) | ヒトカルシトニンの製造方法 | |
| JPS6045851B2 (ja) | ヒト胎盤性ラクトゲンの製造方法 | |
| US4621051A (en) | Process for the production of human multiplication-stimulating activity | |
| JPS58107197A (ja) | ツモアネクロシスフアクタ−の製造方法 | |
| JPS5826317B2 (ja) | ヒト甲状腺刺激ホルモンの製造方法 | |
| KR860000896B1 (ko) | 인체프롤랙틴(Human prolactin)의 제조방법 | |
| JPS6030656B2 (ja) | ヒトｔ細胞増殖因子の製造方法 | |
| KR860001591B1 (ko) | 인체 부신피질 자극호르몬의 제법 | |
| JPH0214039B2 (ja) | ||
| KR900007647B1 (ko) | 인간 칼리크레인의 제조방법 | |
| JPH0214038B2 (ja) | ||
| JPS6332479A (ja) | 骨髄単球系細胞 |