JPS6332479A - 骨髄単球系細胞 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、培養株化されｔヒト由来のγ−インターフェ
ロン産生能を有する骨髄単球系細胞に関するものであり
、更に詳しくは、培養株化されたヒト由来のγ−インタ
ーフェロン産生能を有する骨髄単球系細胞ＨＢＬ−３８
に関するものである。

（従来の技術） インターフェロンは、小林茂保＝ｒインターフェロンＪ
　１９７５年株式会社講談社発行、Ｄ、Ａ、Ｊ。

Ｔｙｒｅｌｌ著［工ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　ａｎｄ　Ｉｔ
ｓ　Ｃ１）ｎｉｃａｌｐｏｔｅｎｔｉａｌ　Ｊ　１９７
６年　Ｗｉｌｌｉａｍ　Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ　Ｍｅｄｉ
ｃａ１）３ｏｏｋｓ　Ｌｔｄ、　（Ｌｏｎｄｏｎ　）発
行、「蛋白質　核酸　酵素　Ｖｏｌ、２）　Ｎｏ、　４
　ｊ　１９７６年などにも記載されているように、例え
ば、ウィルス、細菌、原虫、リケッチャ、核酸、エンド
トキシン、多糖類などのインターフェロン誘導剤？生細
胞に作用させることによって、その細胞内外に誘導生成
される糖蛋白質であって、その細胞内での各種ウィルス
の増殖を非特異的に抑制する機能を持つ物質に与えられ
几名称である。

インターフェロンの持つこのような機能から、インター
フェロンは、その発見の当初よりウィルス性疾患の予防
剤、治療剤として期待されてきた。

マタ、近年インターフェロンは、ウィルス性腫瘍のみな
らず、非ウィルス性腫瘍に対しても抗腫瘍性が認められ
るようになって、医薬品としてのインターフェロンが鶴
首されるに至つ九。

インターフェロンニハ、α−インターフェロン（別名、
白血球インターフェロン）、β−インターフェロン（別
名、繊維芽細胞インターフェロン）およびγ−インター
フェロン（別名、免疫インターフェロン、タイプ■イン
ターフェロン）がアリ、この内α−インターフェロンに
ついては白血球などから、β−インターフェロンについ
ては繊維芽細胞などからの製造方法が確立され、最近、
これらを利用し定置薬品が市販されるまでに至った。

一方、γ−インターフェロンについては、多数の製造方
法が提案されているもののいずれも末だ工業的に実施さ
れるに至っていない。

例えば、特開昭５７−５８８９１号公報、特表昭５７−
５００９６１号公報、特表昭５８−５０２０３２号公報
、特開昭５９−８２０９２号公報、特開昭６０−７００
９９号公報、特開昭６０−８７３００号公報、特開昭６
０−１３９７００号公報、特開昭６０−１４９６００号
公報などで提案されているヒト末梢血からの白血球また
はＴ　−ＩＪンパ球を用いる方法は、原料の細胞を安定
して大量に供給することが困難であり、ま次細胞当シの
産生量も不充分である。

一！之、特開昭５５−９８１）８号公報で提案されてい
る方法は、培養株化されたヒト由来の細胞をヒト以外の
温血動物の体内に移植するか、またはヒト以外の温血動
物の体内もしくは体外に取り付は之拡散チャンバー内で
、その温血動物の体液の供給を受けながら増殖させ、得
られるヒト由来の細胞を用いてγ−インターフェロンｆ
ｔ製造する方法であシ、原料のヒト由来の細胞？大量に
安定して供給できる点できわめて優れている。

しかしながら、この方法については、培養株化され几ヒ
ト由来の細胞の違いによって、γ−インターフェロン産
生能に変動のあることが判明し、安定して高活性のγ−
インターフェロンを製造するにはなお改良の必要があり
、末だ工業的に実施するに至っていない。

γ−インターフェロンは、細胞増殖抑制作用、抗腫瘍作
用がα−インターフェロン、β−インターフェロンより
も著しく強く、また、α−インターフェロン、β−イン
ターフェロンナト；！−併用スることにより、これらの
抗ウィルス作用、細胞増殖抑制作用、抗腫瘍作用など？
増強することが知られており、その工業的製造方法の確
立が強く望まれている。

（発明が解決しようとする問題点） 本発明者等は、工業的規模で容易に実施しうるγ−イン
ターフェロンの製造方法？確立することを目的に、γ−
インターフェロン産生能の高いヒ゛ト由来細胞株の樹立
を目ざして研究を続は友。

その結果、新九に培養株化されたヒト由来の骨髄単球系
細胞ＨＢＬ−３８が、他のリンパ芽球様細胞とは違って
、高いγ−インターフェロン産生能を有し、γ−インタ
ーフェロン製造用細胞として好適であることを見いだし
、本発明を完成した。

本発明でいう培養株化され几ヒト由来の骨髄単球系細胞
とは、岩波書店発行、岸本忠三、渡辺弐編、「岩披講座
　免疫科学３、免疫担当細胞」第１８１〜２０４頁（昭
和６１年）およびＭｉｋｉｏ　５ｈｉｋｉｔａａｎｄ　
工ｓａｏ　Ｙａｍａｎｅ著「Ｍａｍｍａｒｉａｎ　ｆ：
ｅｌｌ　（：ｕｌｔｕｒｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＪ第１
４１〜１６２頁１９８５年５ｏｆｔ　５ｃｉｅｎｃｅｐ
ｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、　Ｔｏｋｙｏ　Ｊａｐａｎ　
　などに記載されているように、Ｔ−細胞、Ｂ−細胞に
属さない細胞であって、抗原抗体反応により骨髄単球系
抗原（Ｍｙｅｌｏｍｏｎｏｃｙｔｅ　ａｎｔｉｇｅｎ　
）の存在を示すことで同定される細胞を云う。

本発明者等が新たに樹立し７’ＣＨＢＬ−３８細胞のγ
−インターフェロン産生能は高く、そのまま、γ−イン
ターフェロン製造用に有利に利用できる。

必要ならば、この細胞のγ−インターフェロン産生能を
持つ遺伝子を、例えば、ポリエチレングリコールやセン
ダイウィルスなどを利用する細胞融合の手段やＤＮＡＩ
Ｊガーゼ、制限酵素（ヌクレアーゼ）、Ｄ　Ｎ　Ａポリ
メラーゼなどの酵素を利用する公知の遺伝子組換えの手
段などによって、よシ容易に継代培養しうる培養株化さ
れた細胞に導入してその増殖速度を更に高めることも、
また、そのγ−インターフェロン産生能？更に高めるこ
とも有利に実施できる。

本発明で使用する培養株化され念ヒト由来の骨髄単球系
細胞ＨＢＬ−３８を増殖させる方法は、適宜に選択する
ことができる。例えば、栄養培地に接種して増殖させる
生体外で行なう組織培養法や、ヒト以外の温血動物の体
内に移植するか、−１次は、ヒト以外の温血動物の体内
もしくは体外に取り付けた拡散チャンバー内に移植して
、その体液の供給を受けながら増殖させる生体内で行な
う方法などである。

まず、生体外で増殖させる場合について説明する。

この際使用する栄養培地は、ＨＢＬ−３８細胞を接種し
て増殖しうるものであればよく、例えば、ＲＰＭＩ　　
１６４０培地、イーグル最少基本培地などがあり、必要
に応じて、更に、ビタミン、ミネラル、炭水化物、アミ
ノ酸および哺乳類の血清など全補足して改良することも
できる。

培養方法は、単層培養法または浮遊培養法が適宜選択で
きる。

培養温度は、約２０〜４０℃、好ましくは約３５〜３８
℃、接種量は、接種後約１週間で最大細胞発育をみるこ
とができるような培地−当りの細胞数であって、好まし
くは培地−当り約１０’〜１０７個である。

ＨＢ　Ｌ−３８細胞金接種した培地を上記条件で約４〜
１０日間培養し、この間培地を定期的に新鮮なものと取
り替えて栄養物を充分補給するとともに、培地中に放出
された代謝産物を洗浄ま７’Ｃは希釈して増殖させるの
が望ましい。

次に、生体内で細胞を増殖させる方法について説明する
。

この方法では、ＨＢＬ−３８細胞全ヒト以外の温血動物
体内に移植するか、ま友は、その体液の供給を受けるこ
とのできるチャンバー内に収容し、通常の飼育をすれば
、温血動物の体内から供給される栄養物を含有する体液
を利用してＨＢＬ−３８細胞が容易に増殖しうろことか
ら、インビトロにおける組織培養のように高価な血清な
どを含む栄養培地を使わずして、または大幅に節約して
も大量のγ−インターフェロンを生成させることができ
る。

すなわち、ヒト以外の温血動物を利用する方法は、細胞
増殖中の維持管理が容易なことはもとより、インビトロ
で培養する場合と比較して、細胞の増殖が安定している
こと、加うるに細胞当りのγ−インターフェロン産生量
が増大すること、とシわけ２〜１０倍、ま之はそれ以上
にも高まるのできわめて有利である。

この方法に使用する温血動物は、培養株化されたヒト由
来の骨髄単球系細胞ＨＢＬ−３８が増殖し得るものであ
ればよく、例えばニワトリ、ハトなどの鳥類、イヌ、ネ
コ、サル、ヤギ、ブタ、ウシ、ウマ、ウサギ、モルモッ
ト、ラット、ハムスター、普通マウス、ヌードマウスな
どの哺乳類などが使用できる。

これら動物にＨＢＬ−３８細胞を移植すると好ましくな
い免疫反応を起すおそれがあるので、その反応をできる
だけおさえる友めに使用する動物は、できるだけ幼若な
状態、即ち卵、胚、胎児、または新生期、幼少期のもの
の方が好ましい。

また、これら動物に例えば、約２００〜６００レム程度
のエックス線若しくはガンマ線を照射するか、または抗
血清若しくは免疫抑制剤などを注射するなどの前処置を
ほどこして、免疫反応？弱めて移植してもよい。

使用する動物がヌードマウスの場合には、成長し友もの
であっても免疫反応が弱いので、これらの前処置を必要
とすることなく、ＨＢＬ−３８細胞が移植でき、急速に
増殖できるので特に好都合である。

また、ＨＢＬ−３８細胞？、例えば先づハムスターに移
植し堆積させ定径、この細胞を更にヌードマウスに移植
するなどのように、ヒト以外の温血動物間で移植してＨ
ＢＬ−３８細胞の増殖をより安定化し几り、更にそれら
から誘導生成されるγ−インターフェロン量？増加させ
ることも自由である。

この場合、同種間、同属間は勿論のこと同綱間、同門間
移植であってもよい。ＨＢＬ−３８細胞を移植する動物
体内の部位は移植した細胞が増殖し得る部位であればよ
く、例えば尿液腔、静脈、腹腔、皮下など自由に選ばれ
る。

また、直接動物体内にＨＢＬ−３８細胞を移植すること
なく、動物細胞の通過を阻止し得る多孔性の濾過膜、例
えば孔径的１０−７〜１０−５ｍ　ｉ有するメンブラン
フィルタ−１限外濾過膜またはホローファイバーなどを
設けた公知の各種形状、大きさの拡散５ンバーを動物体
内、例えば腹腔内に埋設して、動物体からの栄養物を含
む体液の供給を受けつつ、そのチャンバー内でＨＢＬ−
３８細胞を何れも増殖させることができる。

また、必要に応じて、このチャンバー内の栄養物を含む
溶液と動物体内の体液と接続し潅流させるようにしたチ
ャンバーを、例えば動物体表に取付け、チャンバー内の
ＨＢＬ−３８細胞の増殖状態を透視できるようＫするこ
とも、ま几、このチャンバ一部分のみを着脱交換できる
ようにして動物を屠殺せずに寿命一杯細胞を増殖させて
、動物個体当りの細胞生産量を更に高めることもできる
。

これらの拡散チャンバーを利用する方法は、ＨＢＬ−３
８細胞が動物細胞と直接接触しないので、ＨＢＬ−３８
細胞のみが容易に採取できるだけではなく、好ましくな
い免疫反応？起す心配も少ないので、免疫反応を抑制す
る前処置の必要もなく、各種温血動物を自由に利用でき
る特徴を有している。

移植した動物の維持管理は、その動物の通常の飼育を続
ければよく、移植後と言えども特別の取扱いは何ら必要
としないので好都合である。

ＨＢＬ−３８細胞を増殖させるための期間は通常約１〜
１０週の期間で目的を達成することができる。

このようにして得られるＨＢＬ−３８の細胞数は動物個
体当り約１０７〜１０１２、またはそれ以上に達する。

換言すれば、ヒト以外の温血動物を利用する方法により
増殖させ之ＨＢＬ−３８細胞数は、動物個体当り移植し
た細胞数の約１０２〜１０７倍、ま友はそれ以上にも達
し、生体外の栄養培地に接種して増殖させる場合の約１
０１〜１０６倍、ま几はそれ以上にも達して、γ−イン
ターフェロンの製造のため極めて好都合である。

このようにして増殖させたＨＢＬ−３８の生細胞を用い
てγ−インターフェロンを産生させる方法は自由である
。それが増殖した動物体内のままで、γ−インターフェ
ロン誘導剤？作用させることもできる。例えば、腹腔内
の腹水に浮遊状で増殖したＨＢＬ−３８細胞に、ま几は
皮下だ生じた腫瘍細胞に、ｒ−インターフェロン誘導剤
を直接作用させてｒ−インターフェロンを誘導生成させ
、次いでその腹水または腫瘍からγ−インターフェロン
を精製分取すればよい。

まｉ、ＨＢＬ−３８細胞全動物体内から取り出し、生体
外でγ−インターフェロン誘導剤を作用させてγ−イン
ターフェロンを誘導生成させることもできる。例えば、
腹水中で増殖したＨＢＬ−３８細胞を分取し、または皮
下に生じ九ＨＢＬ−３８細胞金含む腫瘍全摘出、分散し
、得られる細胞を約２０〜４０℃に保った栄養培地に細
胞濃度が約１０５〜１０８／　ｄになるように浮遊させ
、これにγ−インターフェロン誘導剤を作用させること
に工ってｒ−インターフェロンを誘導生成させ、これを
精製分取すればよい。

更に、ＨＢＬ−３８細胞を拡散チャンバー内で増殖させ
た場合には、増殖させた細胞をチャンバー内のままで、
ま友はチャンバーから取り出して、γ−インターフェロ
ン誘導剤き作用させ、γ−インターフェロンを誘導生成
させることもできる。

’Ｊｔ、ｒ−インターフェロンの誘導生成に際して、必
要ならば例えばヒトに種特異性の高いインターフェロン
を用いてプライミング処理をしたり、代謝阻害剤を使用
するスーパーインダクション法などの公知の方法を採用
することによって生成するγ−インターフェロン量を更
に高めることも自由である。

ま之、例えば増殖させｗＨＢＬ−３８細胞に先づ動物体
内のままでγ−インターフェロンを誘導生成させ次後、
次いで同一動物個体の特定の部位または全体から採取し
たＨＢＬ−３８細胞に動物体外でγ−インターフェロン
を誘導生成させる方法、ま之一度γ−インターフェロン
の誘導生成に使用しｔ細胞？更に２度以上γ−インター
フェロンの誘導生成に使用する方法、まｔは動物体内に
埋設、若しくは接続するチャンバーを交換して得られる
細胞数？増加させる方法などの方法によって、使用する
動物個体当りのγ−インターフェロン生成量を更に高め
ることも自由である。

γ−インターフェロン誘導剤としては、通常、例えばフ
ィトヘマグルチニン、コンカナバリンＡ１ポークウイー
ドミトーゲン、リボポリサンカリド、リピドＡ１エンド
トキシン、多糖類、細菌などのミトーゲンが好適である
。

また、感作化された細胞にとっては抗原もγ−インター
フェロン誘導剤である。これらγ−インターフェロン誘
導剤を用いる場合には、通常約０．００１μ９〜１０■
／−の濃度で使用される。必要ならば、例えば、ウィル
ス、核酸、ポリヌクレオチドなどのα−インターフェロ
ン誘導剤を併用して、γ−インターフェロン量を更に増
加させることも、α−インターフェロンとγ−インター
フェロンとを同時に生成させることも自由である。

このようにして誘導生成させたγ−インターフェロンは
、公知の精製分離法、例えば、塩析、透析、濾過、遠心
分離、濃縮、凍結乾燥など？行うことによって容易に精
製分離し、採取することができる。更に、高度の精製を
必要とする場合には、例えばイオン交換体への吸着・溶
出、ゲル濾過、アフィニティクロマトグラフィー、等電
点分画、高速液体クロマトグラフィー、電気泳動などの
公知の方法を更に組み合せればよく、とりわけ、モノク
ローナル抗体を利用したクロマトグラフィーなどによシ
最高純度のｒ−インターフェロンヲ採取することも可能
である。

このようにして得られたγ−インターフェロンは、γ−
インターフェロン感受性疾患の予防剤、治療剤などとし
て有利に利用できる。

γ−インターフェロン感受性疾患とは、γ−インタニフ
ェロンによって予防され、若しくは治療される疾患であ
シ、それがウィルス性疾患、例えば、流行性血戻炎、ヘ
ルペス性角膜炎、インフルエンザ、風疹、血清肝炎、エ
イズなどであっても、ま友非ウィルス性疾患、例えば、
肺ガン、肝ガン、骨肉腫などの悪性腫瘍などであっても
よい。

ま九、γ−インターフェロン感受性疾患予防剤、若しく
は治療剤は、その目的に応じてその形状を自白″６選択
できる。その−例？上げれば、噴霧剤、点眼剤、うがい
剤、注射剤などの液剤、軟責のようなペーヌト剤、粉剤
、顆粒剤、錠剤などの固剤などである。

これら予防剤、治療剤には、ｒ−インターフェロンを、
通常、ダラム当り１〜１０，０００，０００単位程度の
活性を含有せしめればよく、必要に応じて他の成分、例
えば、α−インターフェロン、ツモアネクロシス　ファ
クター、リンホトキシンなどのリンホカインや、他の化
学療法剤などを併用して、その予防効果、治療効果？高
めることも有利に実施できる。

更に必要ならば、補助剤、増量剤、安定剤などの１種、
若しくは２種以上を併用することも自由である。

ヒトニ種特異性の高いインターフェロンの活性は「蛋白
質　核酸　酵素　Ｖｏｌ、２０　Ｎｏ、６　Ｊ第６１６
〜６４３頁　１９７５年に報告されているヒト羊膜由来
のＦＬ細胞を使用して公知のプラーク半減法で測定した
。

なお、γ−インターフェロンの活性は、抗α−インター
フェロン抗体及び抗β−インターフェロン抗体を共存さ
せて、α−インターフェロン及びノーインターフェロン
を中和後、測定し友。

以下、本発明で祈念に樹立した骨髄単球系細胞ＨＢＬ−
３８について説明する。

急性骨髄性白血病患者（男性　５５才）からの白血球細
胞ｆ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏで栄養培地に培養した結果、２
）日後に細胞の増殖が認められた。それを継代培養し、
このうちの１種類？安定して増殖させることに成巧し、
これＴｈＨＢＬ−３ｓと命名し念。

＋１＋増殖能 牛胎児活性１０　Ｖ／Ｖ％　ｋ加え＊ＲＰＭＩ　１６４
０培地での増殖能を測定し友ところ、倍加時間は約３０
時間であっ之。

（２）形　態 増殖時にフラスコの底面に付着する性質？有してい念が
付着性は弱くすぐ遊離し友。また増殖時に細胞集塊の形
成もみられ念が、強固ではなく軽く触れると容易に単一
細胞に分散され友。

この細胞を、位相差顕微鏡で観察し７’（結果？第１図
に示し友。細胞の形態は約１５μｍの単一なほぼ円形を
してい次。ギムザ染色金行なった結果、核は円形のもの
の他に不規則な切込や弁葉傾向を示すものも認められ友
。

（３）染色体数 染色体の分析には対数増殖期の細胞を使用した。染色体
数の頻度分布金第１表に示した。１５０個の細胞につい
て観察し念結果、染色体数は低２倍体域にちゃ、その頻
度分布は４５本が最も多く５３個であっｔ。ま几４４本
の細胞も４２個認められ友。

第１表　染色体数の頻度分布 （４）　　抜型分析 抜型分析の結果を第２図に示した。細胞の性染色体はＸ
Ｙであり、！胞由来源と一致した。

染色体の屋１７０片方及びＡ１８の全部が欠落していた
。ノ伍５の短腕［Ｆ］と屋１２の長腕（ｑ）に染色体の
挿入が観察された。ま友同定不可能なマーカー染色体と
染色分体がそれぞれ１本誌められ几。

（５）　　細胞表面形質 各種細胞表面抗体を用いてＨＢＬ−３８細胞の同定を行
なった結果を第２表に示した。ヒツジ赤血球（Ｅ）、抗
体感作ウシ赤血球（ＥＡ）　、ヒト補体感作ウシ赤血球
（ＥＡＣ）　’に用い友分析では、ＥＡに１０％のロゼ
ツト形成がみられ友が、他のものは認められなかっ友。

ヤギ抗ヒト抗体を使用して、細胞表面免疫グロブリンの
検出を行なった結果、６種全て陰性であった。ま之モノ
クローナル抗体を用い念表面マーカーの検索の結果３Ａ
１　、　ＭＣ８−２、Ｂ３／２５．　ＭＹ−９は高い陽
性率を示し、ＮＵ−Ｔ２．　Ｌｅｕ−５，Ｌｅｕ−４，
Ａ−５０，ＢＡ−２゜ＯＫＴ　１．　ＮＵ　Ｎｌ、　Ｂ
２．　ＭＯ１，ＭＯ２は全て陰［６１ＥＢウィルス特異
核抗原（ＥＢＮＡ）の検索ＥＢＮＡについては、細胞株
樹立後早期より数回にわたって検索し几が、常に陰性で
あっ之。

（７）　　軟寒天培地中でのコロニー形成コロニー形成
因子（Ｃ３Ｆ）’に含む０．３　％寒天培地中でのコロ
ニー形成を試験し、培養１４日目で倒立顕微鏡によシ観
察し比結果、ミニロイド様のコロニーを形成する細胞が
認められに０それらの頻度は１〜２％であった。コロニ
ー形成因子を加えない場合は全く造られなかっ之。

以上の結果より、ＨＢＬ−３８細胞は、骨髄卓球系細胞
に属することが判明した。

次に、本発明を実験で詳細に説明する。

実験　培養株化されたヒト由来の各種リンパ芽球様細胞
のγ−インターフェロン産生能の比較 実験１．　生体外で増殖させた細胞によるインターフェ
ロンの産生 牛胎児血清２０　Ｖ／　ｖ％を補足し７’ｅＲＰＭＩ　
１６４０培地（ＰＨ７−２）に、培養株化され九ヒト由
来の各種細胞をそれぞれに接種し、３７℃で常法に従っ
て培養し、次いで、血清無添加のＲＰＭＩ　１６４０培
地（ｐａ　７．２　）で洗浄し、同培地に濃度１　ｘ　
１０６／ｒｎｌになるように懇濁した。

このようにして得之ヒト由来の各種細胞懸濁液それぞれ
にリポポリサツカリドを−当り約１０μ２を添加して３
７℃で２日間保ってインターフェロン全誘導させ、遠心
分離し、上清を用いてその−当りのインターフェロン活
性及びγ−インターフェロン活性を測定し几。

その結果を第３表にまとめた。

第　　３　　表 （注）数値はインターフェロン活性を示し、（）内の数
値はγ−インターフェロン活性を示す。

第３表の結果から明らかなように、培養株化され之ヒト
由来の各種リンパ芽球様細胞のγ−インターフェロン産
生能を比較し友ところ、従来、その産生が全く知られて
いない骨髄単球系細胞からの産生を見いだし、しかも、
その産生量の多いことが判明した。とりわけ、ＨＢＬ−
３８細胞は、γ−インターフェロン産生能が著しく高い
。

実験λ　生体内で増殖させ友細胞によるインターフェロ
ンの産生 新生児のハムスターに、ウサギから公知の方法で調製し
た抗血清を予め注射し、ハムスターの免疫を弱めた後、
その皮下に培養株化されたヒト由来の骨髄卓球系細胞金
それぞれ移植して、その後、通常の方法で３週間飼育し
念。

皮下に生じた腫瘍を摘出し７’（細切し几後、トリプシ
ン含有の生理食塩水に懸濁して細胞と分散、分取し几。

得られ之それぞれの細胞を実験１と同様に懸濁液とし、
同様に活性を測定し念。

その結果を第４表にまとめた。

（注）数値はインターフェロン活性と示し、０内の数値
はγ−インターフェロン活性と示す。

第３表および第４表の結果から明らか彦ように、培養株
化されたヒト由来の骨髄単球系細胞、とシわけ、ＨＢＬ
−３８細胞は、生体外で増殖させた細胞：りも、生体内
で増殖させ念細胞の方が顕著に高いγ−インターフニロ
ン産生量？示すことが判明し九〇 以下、γ−インターフェロンの製造例Ｔｈ　参考例とし
て示す。

参考例　Ｉ ＨＢＬ−３８細胞？仔牛血清１０ｖ／ｖ％を補足し念Ｒ
ＰＭＩ　１６４０培地（ｐＨ７，２）に細胞濃Ｈｓｘ１
ｏ）ｍｇになるよう接種した。

その後、常法に従って、定期的に新鮮な培地と取り替え
ながら３７℃で培養し、次いで、新鮮な同培地で洗浄し
、同培地に濃度２　Ｘ　１０６／−になるよう懸濁し几
。これにリポポリサツカリドを−当り約１０μ？添加し
、３７℃で２日間保ってインターフェロンを誘導させ之
。これ？遠心分離し、その上清−当り約５．１００単位
のγ−インターフェロンを得た。

参考例　２ 新生児のハムスターにウサギから公知の方法で調製し几
抗血清？予め注射し、・・ムスターの免疫反応を弱めた
後、その皮下にＨＢＬ−３８細胞全移植し、その後、通
常の方法で４週間飼育した。

皮下に生じ友釣２０２の腫瘍を摘出し友後、コラゲナー
ゼ含有生理食塩水に懸濁して細胞？分散、分取した。

この細胞全イーグルの最少基本培地で洗浄した後、３７
℃に保った同じ組成の培地に細胞濃度が約２　Ｘ　１０
’／−になるように希訳し、これに−尚りフィトへマグ
ルチニン２００μ２お：びリビドＡ５μ２を加え、３７
℃で２日間保ってインターフェロンを誘導させｔｏこれ
を遠心分離し、上清−当り約９３　、０００単位のγ−
インターフェロンを得九〇ハムスター１匹轟り約１８３
．０００．０００単位のγ−インターフェロンが得うし
た。

参考例　３ ３７℃で５日間保つ友ニワトリの受精卵に、ＨＢＬ。

−３８細胞全移植した後、３７℃で１週間保つ几。

この卵？割卵した後、増殖細胞を採取し、その細胞を参
考例２と同様に処理してインターフェロンを誘導させｆ
ｃ。　これを遠心分離し、上清−当り約３６．０００単
位のｒ−インターフェロン金得た。受精卵１０個個当的
６０，０００，０００単位のγ−インターフェロンが得
られ友。

【図面の簡単な説明】

図において、第１図は、ＨＢＬ−３８細胞の位相差顕微
鏡写真を示す。 第２図は、ＨＢＬ−３８細胞の核型分析の結果を示す写
真である。 ？　２　図

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）培養株化されたヒト由来のγ−インターフェロン
   産生能を有する骨髄単球系細胞。
2. （２）核型分析において、性染色体がＸＹであって、染
   色体Ｎｏ．５の短腕と染色体Ｎｏ．６１２の長腕に染色
   体の挿入があり、染色体Ｎｏ．１７の片方および染色体
   Ｎｏ．１８の全部が欠落した細胞であることを特徴とす
   る特許請求の範囲第（１）項記載の骨髄単球系細胞。
3. （３）モノクローナル抗体を用いた表面マーカーの検索
   において、モノクローナル抗体３Ａ１、ＭＣＳ−２、Ｂ
   ３／２５およびＭＹ−９が高い陽性率を示す細胞である
   ことを特徴とする特許請求の範囲第（１）項または第（
   ２）項記載の骨髄単球系細胞。
4. （４）骨髄単球系細胞がＨＢＬ−３８細胞であることを
   特徴とする特許請求の範囲第（１）項、第（２）項また
   は第（３）項記載の骨髄単球系細胞。