JPS6043393A - L−フエニルアラニンの製法 - Google Patents
L−フエニルアラニンの製法Info
- Publication number
- JPS6043393A JPS6043393A JP15141583A JP15141583A JPS6043393A JP S6043393 A JPS6043393 A JP S6043393A JP 15141583 A JP15141583 A JP 15141583A JP 15141583 A JP15141583 A JP 15141583A JP S6043393 A JPS6043393 A JP S6043393A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- phenylalanine
- ammonia
- reaction
- lyase activity
- bacterial cells
- Prior art date
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- Granted
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はL−フェニルアラニンの製法に関するし一フェ
ニルアラニンは必須アミノ酸の一つであり、栄養上又は
医薬上有用な物質である。
ニルアラニンは必須アミノ酸の一つであり、栄養上又は
医薬上有用な物質である。
微生物の生産する酵素を用いて、桂皮酸とアンモニア又
はアンモニア供与体からI、−フェニルアラニンを製造
する方法は知られている(英国特許第1489418号
公報、特開昭53−963881公報、特開昭56−2
6197号公報など)。
はアンモニア供与体からI、−フェニルアラニンを製造
する方法は知られている(英国特許第1489418号
公報、特開昭53−963881公報、特開昭56−2
6197号公報など)。
しかしながら、これらの公報に記載されている方法は、
まだ満足すべきものではない。
まだ満足すべきものではない。
本発明者らは桂皮酸とアンモニアとから効率良< r−
−フェニルアラニンを製造する方法について種々検討し
た結果、L−フェニルアラニンアンモニアリアーゼ活性
含有物及び界面活性剤の存在下、又は該i、−フェニル
アラニンアンモニアリアーゼ活性含有物の界面活性剤処
理物の存在下に、桂皮酸とアンモニアもしくはアンモニ
ア供与体とを水性培地中で反応せしめるにより効率よく
、L−フェニルアラニンが製造されることを見い出した
。
−フェニルアラニンを製造する方法について種々検討し
た結果、L−フェニルアラニンアンモニアリアーゼ活性
含有物及び界面活性剤の存在下、又は該i、−フェニル
アラニンアンモニアリアーゼ活性含有物の界面活性剤処
理物の存在下に、桂皮酸とアンモニアもしくはアンモニ
ア供与体とを水性培地中で反応せしめるにより効率よく
、L−フェニルアラニンが製造されることを見い出した
。
1ス下に本発明の詳細な説明する。
本発明に用いられる微生物としては、L−フェニルアラ
ニンアンモニアリアーゼ活性を有スる微生物であれば、
いずれでも使用される。その具体例としては、ロド!・
ルラ・ルブラATCC2025B、ロドトルラ・テキセ
ンシスTFO932−1ロl゛トルう・グルチニスI
FOO559、スポロボロマイセス・ロゼウスrFO1
040゜等があげられる。
ニンアンモニアリアーゼ活性を有スる微生物であれば、
いずれでも使用される。その具体例としては、ロド!・
ルラ・ルブラATCC2025B、ロドトルラ・テキセ
ンシスTFO932−1ロl゛トルう・グルチニスI
FOO559、スポロボロマイセス・ロゼウスrFO1
040゜等があげられる。
上記微生物を培養するための培地としては、炭素源、窒
素源、無機物等を程よく含有しておれば合成培地、天然
培地のいずれも使用可能である。
素源、無機物等を程よく含有しておれば合成培地、天然
培地のいずれも使用可能である。
炭素源としては、グルコース、シュークロース。
廃糖蜜などの糖類、グリセロール、ソルビトール。
マンニトール等の糖アルコール類が使用できる。
種無機及び有機のアンモニウム化合物、尿素などの窒素
化合物、ペプトン、酵母エキス、カゼイン加水分解物、
脱脂大豆あるいはその消化物等の窒性 素堕機物質等が使用できる。無機物としては、ナトリウ
ム、カリウム、マンガン、マグネシウム。
化合物、ペプトン、酵母エキス、カゼイン加水分解物、
脱脂大豆あるいはその消化物等の窒性 素堕機物質等が使用できる。無機物としては、ナトリウ
ム、カリウム、マンガン、マグネシウム。
カルシウム、銅等の金属の塩類や燐酸、硫酸、硝酸、塩
酸等の塩類が使用できる。
酸等の塩類が使用できる。
培養は、例えば、pH5〜8.20〜40℃で1〜5日
間行なう。
間行なう。
ついで、得られた上記微生物の培養液、菌体(例えば、
洗浄菌体、乾燥菌体)又はその処理物(例えば、菌体摩
砕物、菌体の自己消化物、菌体の超音波処理物、菌体を
例えばアクリルアミドゲルまたはカラギーナンゲル等に
より固定化したもの)ヲ桂皮酸とアンモニア又はアンモ
ニア供与体に、界面活性剤の存在下に作用させるか、ま
たは界面活性剤と接触させた、上記微生物の培養液、菌
体または菌体の処理物を桂皮酸とアンモニアまたはアン
モニア供与体に作用させ、L−フェニルアラニンを生成
させる。
洗浄菌体、乾燥菌体)又はその処理物(例えば、菌体摩
砕物、菌体の自己消化物、菌体の超音波処理物、菌体を
例えばアクリルアミドゲルまたはカラギーナンゲル等に
より固定化したもの)ヲ桂皮酸とアンモニア又はアンモ
ニア供与体に、界面活性剤の存在下に作用させるか、ま
たは界面活性剤と接触させた、上記微生物の培養液、菌
体または菌体の処理物を桂皮酸とアンモニアまたはアン
モニア供与体に作用させ、L−フェニルアラニンを生成
させる。
(3)
桂皮酸の濃度としては0.05〜1モル、アンモニア又
はアンモニア供与体の濃度としては1〜10モルの範囲
である。原料の桂皮酸、アンモニア又はアンモニア供与
体は一括又は間歇的に供給する。
はアンモニア供与体の濃度としては1〜10モルの範囲
である。原料の桂皮酸、アンモニア又はアンモニア供与
体は一括又は間歇的に供給する。
アンモニア供与体としては、酢酸アンモニウム。
塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム等のアンモニウム
塩があげられる。
塩があげられる。
使用される界面活性剤としては、両性界面活性剤として
、例えばアルキルグリシン[日本油脂製(以下同様)商
品名、アノンLG]、陽イオン界面活性剤として、オク
タデシルトリメチルアンモニウムクロリド(商品名カチ
オンAB)、ポリオキシエチレンオクタデシルアミン(
商品名ナイミーンS−215)、非イオン界面活性剤と
して、ポリオキシエチレンオクチルフェノールエーテル
(商品名ノニオンHS−204・5)、ポリオキシエチ
レンソルビタンモノステアレート(商品名ノニオン5T
−221)などがあげられるが、特にその中でも両性界
面活性剤のアルキルグリシンが好ましい。
、例えばアルキルグリシン[日本油脂製(以下同様)商
品名、アノンLG]、陽イオン界面活性剤として、オク
タデシルトリメチルアンモニウムクロリド(商品名カチ
オンAB)、ポリオキシエチレンオクタデシルアミン(
商品名ナイミーンS−215)、非イオン界面活性剤と
して、ポリオキシエチレンオクチルフェノールエーテル
(商品名ノニオンHS−204・5)、ポリオキシエチ
レンソルビタンモノステアレート(商品名ノニオン5T
−221)などがあげられるが、特にその中でも両性界
面活性剤のアルキルグリシンが好ましい。
反応液に添加する場合の添加量は界面活性剤により異な
るが、反応液に対して0.05〜10 u/V%、好ま
しくは0.5〜IOW/V%である。これらは、直接反
応液に加えるか、又は、水溶液と(4) して添加することができる。
るが、反応液に対して0.05〜10 u/V%、好ま
しくは0.5〜IOW/V%である。これらは、直接反
応液に加えるか、又は、水溶液と(4) して添加することができる。
反応は通常、温度20〜45℃、好ましくは25〜35
℃、pH8〜11、好ましくは9〜IOで5〜70時間
行う。反応後、反応液から生成したし一フェニルアラニ
ンの分離は通常のイオン交換樹脂法、沈澱法等により行
うことができる。
℃、pH8〜11、好ましくは9〜IOで5〜70時間
行う。反応後、反応液から生成したし一フェニルアラニ
ンの分離は通常のイオン交換樹脂法、沈澱法等により行
うことができる。
以下に実施例を示す。
実施例1゜
ロドトルラ・ルブラATCC20258を酵母エキス1
.0g、ペプトン1.0g、食塩0.5gおよびL−フ
ェニルアラニン0.05 gを含む培地1001で、2
8℃で17時間振とう培養した。該培養液から遠心分離
して得た菌体を0.9%冷食塩水で洗浄の後、遠心分離
して洗浄菌体を得た。該菌体に予め調製したアンモニア
2.8Mおよび桂皮酸150mMを含をする基質液(p
H=10)10mlを加え、さらに第1表に示す界面活
性剤の10%水溶液を第1表に示す様に加えて30℃で
5時間反応した。反応後、反応混合物を遠心分離して、
その上澄液をペーパークロマトグラフィー〔展開溶媒;
n−ブタノール:酢酸:水−5:2:2(V/V))で
分析して、フェニルアラニン生成量を測定した。その結
果を第1表に示す。
.0g、ペプトン1.0g、食塩0.5gおよびL−フ
ェニルアラニン0.05 gを含む培地1001で、2
8℃で17時間振とう培養した。該培養液から遠心分離
して得た菌体を0.9%冷食塩水で洗浄の後、遠心分離
して洗浄菌体を得た。該菌体に予め調製したアンモニア
2.8Mおよび桂皮酸150mMを含をする基質液(p
H=10)10mlを加え、さらに第1表に示す界面活
性剤の10%水溶液を第1表に示す様に加えて30℃で
5時間反応した。反応後、反応混合物を遠心分離して、
その上澄液をペーパークロマトグラフィー〔展開溶媒;
n−ブタノール:酢酸:水−5:2:2(V/V))で
分析して、フェニルアラニン生成量を測定した。その結
果を第1表に示す。
第1表
注)表中の数字はフェニルアラニン生成量(■/ml)
を示す。
を示す。
実施例2゜
実施例1と同様に培養して得た培養液200m1を実施
例1と同様の処理をして、洗浄菌体を得た。
例1と同様の処理をして、洗浄菌体を得た。
該菌体に予め調製したアンモニア8Mおよび桂皮酸30
0mMを含有スル基質液(p)l=IO)10mlを加
え、アノンL G添加又は無添加の条件下、30℃で反
応を行い、フェニルアラニン生成量を経時的に調べた。
0mMを含有スル基質液(p)l=IO)10mlを加
え、アノンL G添加又は無添加の条件下、30℃で反
応を行い、フェニルアラニン生成量を経時的に調べた。
その結果を第2表に示す。
た後、遠心分離し、更に、0.9%冷食塩水10m1で
洗浄し、遠心分離して、アノンL G処理菌体を得た。
洗浄し、遠心分離して、アノンL G処理菌体を得た。
この菌体およびアノンLG未処理菌体を用いて、アンモ
ニア2.8Mおよび桂皮酸150mMを含有する基質液
(pH=IO)を用いて、30℃で反応した。その結果
を第5表に示す。
ニア2.8Mおよび桂皮酸150mMを含有する基質液
(pH=IO)を用いて、30℃で反応した。その結果
を第5表に示す。
第5表
アノンLG処理 5.3 8.7 13.8 16.2
アノンLGの効果は、基質液に添加するだけではなく、
予め菌体と接触させることによっても、その効果を発揮
しうる。
アノンLGの効果は、基質液に添加するだけではなく、
予め菌体と接触させることによっても、その効果を発揮
しうる。
実施例6゜
f11
実施1と同様の処理で、300m1の培養液から△
ロドトルラ・ルブラATCC20258の洗浄菌体を採
取し、これをアノンL 02%水溶液201で室温下、
30分間、接触処理した。このアノンLG処理菌体を常
法通りにに一カラギーナンで固定化して、固定化菌体を
得た。この固定化菌体に、鍼 アンモニア2.8Mおよび桂皮ノ、150mMを含有す
る基質液(pH= 10) 30n+1を加えて30℃
で48時間反応さ(、経時的にL−フェニルアラニンの
生成量を調べた。比較として、上述と同様の培養液から
得た洗浄菌体およびアノン処理していない固定化菌体を
用いて、同一条件で反応させた。その結果を第6表に示
す。
取し、これをアノンL 02%水溶液201で室温下、
30分間、接触処理した。このアノンLG処理菌体を常
法通りにに一カラギーナンで固定化して、固定化菌体を
得た。この固定化菌体に、鍼 アンモニア2.8Mおよび桂皮ノ、150mMを含有す
る基質液(pH= 10) 30n+1を加えて30℃
で48時間反応さ(、経時的にL−フェニルアラニンの
生成量を調べた。比較として、上述と同様の培養液から
得た洗浄菌体およびアノン処理していない固定化菌体を
用いて、同一条件で反応させた。その結果を第6表に示
す。
第 6 表
固定化菌体 1.6 2.8 7.7 10.0(テノ
ン1.G処理) 〃0.8 1,2 1.2 1.3 (アノン未処理)
ン1.G処理) 〃0.8 1,2 1.2 1.3 (アノン未処理)
Claims (1)
- L−フェニルアラニンアンモニアリアーゼ活性を有する
微生物の培養物、菌体もしくはその処理物(以下「L−
フェニルアラニンアンモニアリアーゼ活性含有物」とい
う)及び界面活性剤の存在下、又は該L−フェニルアラ
ニンアンモニアリアーゼ活性含有物の界面活性剤処理物
の存在下に、桂皮酸とアンモニアもしくはアンモニア供
与体とを水性培地中で反応せしめてL−フェニルアラニ
ンを生成せしめ、これを採取することを特徴とするし一
フェニルアラニンの製法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP15141583A JPS6043393A (ja) | 1983-08-19 | 1983-08-19 | L−フエニルアラニンの製法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP15141583A JPS6043393A (ja) | 1983-08-19 | 1983-08-19 | L−フエニルアラニンの製法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS6043393A true JPS6043393A (ja) | 1985-03-07 |
JPH0347839B2 JPH0347839B2 (ja) | 1991-07-22 |
Family
ID=15518109
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP15141583A Granted JPS6043393A (ja) | 1983-08-19 | 1983-08-19 | L−フエニルアラニンの製法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS6043393A (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS61247395A (ja) * | 1985-04-23 | 1986-11-04 | Mitsui Toatsu Chem Inc | L−フェニルアラニンの製造法 |
US5981239A (en) * | 1997-09-24 | 1999-11-09 | Great Lakes Chemical Corp. | Synthesis of optically active phenylalanine analogs using Rhodotorula graminis |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5626197A (en) * | 1979-08-09 | 1981-03-13 | Tanabe Seiyaku Co Ltd | Preparation of l-phenylalanine |
-
1983
- 1983-08-19 JP JP15141583A patent/JPS6043393A/ja active Granted
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5626197A (en) * | 1979-08-09 | 1981-03-13 | Tanabe Seiyaku Co Ltd | Preparation of l-phenylalanine |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS61247395A (ja) * | 1985-04-23 | 1986-11-04 | Mitsui Toatsu Chem Inc | L−フェニルアラニンの製造法 |
JPH0468917B2 (ja) * | 1985-04-23 | 1992-11-04 | Mitsui Toatsu Chemicals | |
US5981239A (en) * | 1997-09-24 | 1999-11-09 | Great Lakes Chemical Corp. | Synthesis of optically active phenylalanine analogs using Rhodotorula graminis |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0347839B2 (ja) | 1991-07-22 |
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