JPS5946854A - 多層分析材料 - Google Patents
多層分析材料Info
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- JPS5946854A JPS5946854A JP57157442A JP15744282A JPS5946854A JP S5946854 A JPS5946854 A JP S5946854A JP 57157442 A JP57157442 A JP 57157442A JP 15744282 A JP15744282 A JP 15744282A JP S5946854 A JPS5946854 A JP S5946854A
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- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N31/00—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods
- G01N31/22—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods using chemical indicators
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- G—PHYSICS
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
- G01N33/525—Multi-layer analytical elements
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
本発明は多層分析材料に関し、特に液体試料中の過酸化
水素の定量を実旋する場合、または特定の成分をオキシ
ダーゼ酵素反応系に導入し生成した過酸化水素の定量に
より液体試料中の特定の成分の定量を実旌する場合に有
効なペルオキシダーゼを含む過酸化水素検出呈色指示薬
系を含む多層分析材料の改良に関するものである。 オキシダーゼ酵素を用い、被検物質又はその反応生成物
を酸化する−と同時に生成されるＨ ２ （Ｊ ２を適
当な手段により定量する定鯖法は、近年ますます重Ｓに
なってきている。その理由はペルオキシダーゼを用いて
色素の生成反応に導き、比ａ的にＩ−１２ｏ ２を定量
する方法をはじめとして、電極反応などの手段によりＨ
２（Ｊ２を定量する方法などＨ２Ｕ ２の定量は確実に
実施できるからである。 このような原理に承づく比色定量法としては、トライン
ダー（Ｐ、ｉ’ｒｉｎｄｅｒ）が尋人した試薬糸を用い
る方法（［Ａｎｎ、 Ｃｌ１ｎ、 ＩＪｉｏｃｌｌｅ
ｍ、Ｊ ４ 。 ２≠−，２７（／り６り））がよく知られている。 この方法は、オキシダーゼ酵素によって生成するＨ ２
（Ｊ ２にペルオキシダーゼを作用させ、μｍアミノ
アンチピリン（またはその類縁体）とフェノール類（ま
たはナフトール類）との酸化カップリング反応を起させ
、生成した色素を）ｉテｌｉｔするものである。この反
応系の利点は、オキシダーゼ酵素の種類を変えても同じ
検出系を利用することができる点にあり、広く、各種の
分析項目への応用が楡討されている。これらのうち、臨
１．）５化学検ｉｆ Ｌ特に重要なものは、グルコース
オキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、ウリ力−
−ビ、グルコ−スオキシダーゼ、フォスフォクルコース
オキシダーゼなどである。 これらのオキシダーゼ酵素と生成する１４２υ２の検出
糸とを一体型の多層分析−、フィルムや、濾紙片等への
含浸ストリップスの形体とした臨床検査用分析材料も広
く実用化されている。 これらの分析材料は、被検物質の検出に直接関与する試
蘭類を含有する組成物が、支持体となる戸紙状物や、フ
ィルム上の支持体に、含浸あるいは塗布された型体をし
ている。 一体型の多層分析フィルムは種々の構成をしており、必
要に応じて、各種の國能層がｓ ４ｑＪｔ Ｉｒｉされ
た形で組み込まれている。これらの機能層として公知の
ものとしては、液体試料の均一展開を目的とした展開層
（特公昭ｊ３−コ／ ＆ ７７、特開昭ｊ！−７６≠３
Ｊ′ｔ）、反射測定の白色散乱向及び、上層にある有色
成分と生成された検出用色素とを光学的に陥離する為の
光遮蔽施（特公昭！３−２／１，７７、特開昭ｊｔ／−
１７０／り１１特開昭、ｔｊ−，２ｔ４１．２１．特開
昭１１−．２７４！ｕ５’、特開昭ｊｊ−／１ｌｌＪｊ
ｔ等）、物質の選択的な拡散を目的としたバリヤ一層（
特開昭！−一３≠ざ、ｒ）または液体遮断層（特願昭ｓ
Ａ−／７１ｚ７≠、特廟昭！ｔ−／７６２７１）、生成
色素の媒染による効率的な検出を目的とした検出ハｑ（
特開Ｈｄ！／−４１０／Ｐ／ 、 特ｆｊＪＩ）／、＋
Ｊ′ ３− ／ Ｊ ／ ｏ ｒ Ｐ ）
、生成色素の他層への移動の１りυ止を目的とした
マイグレーション防止層（特開昭！ＩＩ−，２り７００
）、層間の接着性改良を目的とした接イ）層（特開昭５
ター７６弘３ｊｔ得・）などがある。 グルコースオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、７．７−
シヒドロキシナフタレンおよびグーアミノアンチピリン
を含む試４ｊ Ｉｒｉを有する６１述の特開昭３３−／
１ｌ１３！ｌ、等に開示の構成のグルコース定量用多層
分析フィルムにおいて、液体試料として溶血全血または
溶面血漿を用いた場合に、非、溶血全血または非溶血面
漿を用いた場合に比べて試薬層の発色光学濃度が小さく
ｊｒす、イ、’１ってクルコース濃度値が小さな値に
なることか（１１，出さ第１１、この発色光学濃度が小
さくなる”Ｌｉｌ Ｗｌｉは１１１１中カタラーゼの干
渉によるものと（１ト定された。本発明者らはカタラー
ゼによる干渉の除去のため鋭怠研冗を続けたところ、グ
ルコース定晴用多層分析フィルムにおいてグルコースオ
キシダーゼを含む層またはペルオキシダーゼを含む試薬
層に酢酸ナトリウムまたは酢酸を添加することにより発
色効率が著しく向１し、血中カタラーゼによる干渉作用
が自効に解７１’Ｊされること、さらに使用条件下にお
ける多ｌ＋４分析材料中の一連の反応速度が速まること
を見出し本発明に到達した。 本発明の目的はペルオキシダーゼを含むｒ−ｊ ２ Ｕ
２検出車色試薬組成物を含む試薬層を有する多層分析
材料において、血中カタラーゼによる呈色）を字一度の
低下、すなわち測定値の低下として現われる干渉作用が
除去された改良された多層分析飼料を提供することであ
る。 本発明の他の目的はオキシダーゼおよび製ルオキシダー
ゼを含むＨ２Ｕ２検出呈検出量組成物を含む試薬１−を
有する多層分析材料において、発色または呈色効率が向
トし、血中カタラーゼによる呈色光学濃度の減少、すな
わち測定値の低下として現われる干渉作用が除去された
改良された多層分析材料を提供することである。 本発明の他の目的はオキシダーゼおよびペルオキシダー
ゼを含むＨ２Ｕ ２４剣１］ｉ呈色試薬組成物を含む試
薬層を有する多部分１ｉｔ４料において、使用条件下に
おいて反応址〃１がｉ’ｒｌ、 （、定ｔ、１分析操作
に要する時間が９．１．（縮μｍ能な改Ｊ、シされた多
ＩＨ：／ｉ分析１４本・１を１１７供することである。 本発明の他の目的はオキシダーゼおよびペルオキシダー
ゼを含むＨ２０２検出量色試楽組成物を含む試薬層をイ
ｊする多１１４分析［う料にオ・いて、測定領域が拡大
された、すなわちダイナミックレンジが広い改良された
多層分析Ｆ４料を提供することである。 本発明の他の目的はグルコースオキシダーゼおよびペル
オキシダーゼを含むＨ２０２検出車色試薬組成物を含む
試薬層をイ゛１するグルコース定頃用多層分析材料にお
いて、発色効彰が向ｈＬ、血中カタラーゼによる呈色丸
字（１３度の減少、すｔ［わち測定値の低下として現れ
る干渉作用が除去され、使用条件下において反応速ｔＨ
がすくて定積分析操作に要する時間が短縮可能であり、
かつ測定領域が拡大された、すなわちダイナミックレン
ジが広い、改良された多層分析材料を提供することであ
る。 本発明は、 （ｔｌ 水不浸透性）′ｔ、透過性支持体の上に少な
くともベルオキシダーゼを含む試薬層、および多孔性展
開層の二つの脂を少なくとも有しこの順に槓瀬されてｔ
「る多層分析材料において、０１Ｊ記支持体以外の少な
くとも一つのＪＩＣ，２Ｊ”Ｃにおける水１０ｏｙに対
する溶解度が７２以上の水浴往モノカルボ゛ン酸または
その塩が含有されていることを特徴とする多層分析材料
であり、その主要な実施態様は （２）モノカルボン酸が脂肪族モノカルホン酸または芳
香族モノカルボン酸である（１）に記載の多層分析トｊ
料。 （３）モノカルボン酸またはその塩が蛸酸、酢酸、プロ
ピオン酸、酪酸、吉草酸および安息香酸、ならひにこれ
らの酸のアルカリ蛍属塩およびアンモニウム塩からなる
群から選ばれた少なくとも／４ｒｌｉの化合物である（
１）に記載の多層分析材料。 （４） アルカリ金属塩がリチウム塩、ナトリウム塩
およびカリウム塩である（３）に記・ｊ・父の多ｊ「・
１分析１す料。 （５１Ｍｌ 記試薬１１９にペルオキシダーゼとともに
少なくとも弘−アミノアンチピリンまたはそのａＦ４Ｍ
Ｌ体が含有される（１）ないい４）に記載の多層分析（
Ａ料。 ｔ６１ ＭｉＪ記試桑層または他のいずれか一つのハ
ηにオキシダーゼが含有されている１ｌｌｌｒいしく５
）に記載の多層分析？４￥４゜ （７）前記オキシダーゼがグルコ−スオキシダーゼ、マ
レートオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、ヘキソ
ースオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、Ｌ−
グルコノラクトンオキシダーゼ、ガラクトースオギシダ
ーゼ、キ→１−二／ブーンオキシダーゼ、ピルベートオ
キンダーゼ、ウリカーゼ、アスコルベートオキシダーゼ
、ラグテートオキシダーゼ、グリｆ／ンオキンダーゼ、
グリセロールオキダーセからなるＩ：￥からＪＨ３ばＡ
した／ （、、（（である（６）に記載の多層分析材料
。 ｃｓ＋ ＭｊＪ記オキシダーゼがグルコースオキシダ
ーゼである（６）に記載の多層分析飼料。 ｔ９） ｎ’＋Ｊ ｇ己オキシダーゼがコレステロー
ルオキシダーゼである（６）に記載の多層分析材料であ
る。 本発明の多層分析材料における光透過件水不浸透住支持
体は波長約λ００ｎｍから約７００ ｎ ｒｎの範囲の
少なくともあるボ１１囲の波長領域の磁磁波（紫外Ａ１
バ近紫外ＭＬ ”Ｊ視）ｔｌまたは近赤外線）を約≠０
４以上、好ましくは約Ｊ、ｔ％以上透過させることがで
き、実質的に水をその内部にγを透させることがなく、
かつその表面に設けられる後述の試薬層または下塗層に
含有されるバインダーポリマーまたは他の成分と実質的
に化学反応を生じさせない素材からなる。前述の規準に
あうかぎり支持体として用いることができる素材は何で
もよい。支持体としては、ポリエチレンテレフタレート
、ビスフェノールＡのポリカルボネート、ポリメチルメ
タクリレート、ポリスチレン、セルロースエステル（例
、セルロースジアセテート、セルローストリアセテート
、セルロースアセテートプロピオネート）などのポリマ
ーからなる透明シートまたはフィルムや透明ガラス板ｌ
（どで１！１１、さ約ｊＯＢｍから約−２ｍ１１１．奸
才しく一７Ｉ約７０１１１ＴＩ カら約Ｑ、ｊｎｌＴＩ
ｌの軸回のものを用いることかできる。 支持体の表面には試・者層（＋たは他のｋｆｉに層）を
支持体に一体に接若することケ容易にするｈ的で公知の
下墜層を設けるか、あるい
水素の定量を実旋する場合、または特定の成分をオキシ
ダーゼ酵素反応系に導入し生成した過酸化水素の定量に
より液体試料中の特定の成分の定量を実旌する場合に有
効なペルオキシダーゼを含む過酸化水素検出呈色指示薬
系を含む多層分析材料の改良に関するものである。 オキシダーゼ酵素を用い、被検物質又はその反応生成物
を酸化する−と同時に生成されるＨ ２ （Ｊ ２を適
当な手段により定量する定鯖法は、近年ますます重Ｓに
なってきている。その理由はペルオキシダーゼを用いて
色素の生成反応に導き、比ａ的にＩ−１２ｏ ２を定量
する方法をはじめとして、電極反応などの手段によりＨ
２（Ｊ２を定量する方法などＨ２Ｕ ２の定量は確実に
実施できるからである。 このような原理に承づく比色定量法としては、トライン
ダー（Ｐ、ｉ’ｒｉｎｄｅｒ）が尋人した試薬糸を用い
る方法（［Ａｎｎ、 Ｃｌ１ｎ、 ＩＪｉｏｃｌｌｅ
ｍ、Ｊ ４ 。 ２≠−，２７（／り６り））がよく知られている。 この方法は、オキシダーゼ酵素によって生成するＨ ２
（Ｊ ２にペルオキシダーゼを作用させ、μｍアミノ
アンチピリン（またはその類縁体）とフェノール類（ま
たはナフトール類）との酸化カップリング反応を起させ
、生成した色素を）ｉテｌｉｔするものである。この反
応系の利点は、オキシダーゼ酵素の種類を変えても同じ
検出系を利用することができる点にあり、広く、各種の
分析項目への応用が楡討されている。これらのうち、臨
１．）５化学検ｉｆ Ｌ特に重要なものは、グルコース
オキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、ウリ力−
−ビ、グルコ−スオキシダーゼ、フォスフォクルコース
オキシダーゼなどである。 これらのオキシダーゼ酵素と生成する１４２υ２の検出
糸とを一体型の多層分析−、フィルムや、濾紙片等への
含浸ストリップスの形体とした臨床検査用分析材料も広
く実用化されている。 これらの分析材料は、被検物質の検出に直接関与する試
蘭類を含有する組成物が、支持体となる戸紙状物や、フ
ィルム上の支持体に、含浸あるいは塗布された型体をし
ている。 一体型の多層分析フィルムは種々の構成をしており、必
要に応じて、各種の國能層がｓ ４ｑＪｔ Ｉｒｉされ
た形で組み込まれている。これらの機能層として公知の
ものとしては、液体試料の均一展開を目的とした展開層
（特公昭ｊ３−コ／ ＆ ７７、特開昭ｊ！−７６≠３
Ｊ′ｔ）、反射測定の白色散乱向及び、上層にある有色
成分と生成された検出用色素とを光学的に陥離する為の
光遮蔽施（特公昭！３−２／１，７７、特開昭ｊｔ／−
１７０／り１１特開昭、ｔｊ−，２ｔ４１．２１．特開
昭１１−．２７４！ｕ５’、特開昭ｊｊ−／１ｌｌＪｊ
ｔ等）、物質の選択的な拡散を目的としたバリヤ一層（
特開昭！−一３≠ざ、ｒ）または液体遮断層（特願昭ｓ
Ａ−／７１ｚ７≠、特廟昭！ｔ−／７６２７１）、生成
色素の媒染による効率的な検出を目的とした検出ハｑ（
特開Ｈｄ！／−４１０／Ｐ／ 、 特ｆｊＪＩ）／、＋
Ｊ′ ３− ／ Ｊ ／ ｏ ｒ Ｐ ）
、生成色素の他層への移動の１りυ止を目的とした
マイグレーション防止層（特開昭！ＩＩ−，２り７００
）、層間の接着性改良を目的とした接イ）層（特開昭５
ター７６弘３ｊｔ得・）などがある。 グルコースオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、７．７−
シヒドロキシナフタレンおよびグーアミノアンチピリン
を含む試４ｊ Ｉｒｉを有する６１述の特開昭３３−／
１ｌ１３！ｌ、等に開示の構成のグルコース定量用多層
分析フィルムにおいて、液体試料として溶血全血または
溶面血漿を用いた場合に、非、溶血全血または非溶血面
漿を用いた場合に比べて試薬層の発色光学濃度が小さく
ｊｒす、イ、’１ってクルコース濃度値が小さな値に
なることか（１１，出さ第１１、この発色光学濃度が小
さくなる”Ｌｉｌ Ｗｌｉは１１１１中カタラーゼの干
渉によるものと（１ト定された。本発明者らはカタラー
ゼによる干渉の除去のため鋭怠研冗を続けたところ、グ
ルコース定晴用多層分析フィルムにおいてグルコースオ
キシダーゼを含む層またはペルオキシダーゼを含む試薬
層に酢酸ナトリウムまたは酢酸を添加することにより発
色効率が著しく向１し、血中カタラーゼによる干渉作用
が自効に解７１’Ｊされること、さらに使用条件下にお
ける多ｌ＋４分析材料中の一連の反応速度が速まること
を見出し本発明に到達した。 本発明の目的はペルオキシダーゼを含むｒ−ｊ ２ Ｕ
２検出車色試薬組成物を含む試薬層を有する多層分析
材料において、血中カタラーゼによる呈色）を字一度の
低下、すなわち測定値の低下として現われる干渉作用が
除去された改良された多層分析飼料を提供することであ
る。 本発明の他の目的はオキシダーゼおよび製ルオキシダー
ゼを含むＨ２Ｕ２検出呈検出量組成物を含む試薬１−を
有する多層分析材料において、発色または呈色効率が向
トし、血中カタラーゼによる呈色光学濃度の減少、すな
わち測定値の低下として現われる干渉作用が除去された
改良された多層分析材料を提供することである。 本発明の他の目的はオキシダーゼおよびペルオキシダー
ゼを含むＨ２Ｕ ２４剣１］ｉ呈色試薬組成物を含む試
薬層を有する多部分１ｉｔ４料において、使用条件下に
おいて反応址〃１がｉ’ｒｌ、 （、定ｔ、１分析操作
に要する時間が９．１．（縮μｍ能な改Ｊ、シされた多
ＩＨ：／ｉ分析１４本・１を１１７供することである。 本発明の他の目的はオキシダーゼおよびペルオキシダー
ゼを含むＨ２０２検出量色試楽組成物を含む試薬層をイ
ｊする多１１４分析［う料にオ・いて、測定領域が拡大
された、すなわちダイナミックレンジが広い改良された
多層分析Ｆ４料を提供することである。 本発明の他の目的はグルコースオキシダーゼおよびペル
オキシダーゼを含むＨ２０２検出車色試薬組成物を含む
試薬層をイ゛１するグルコース定頃用多層分析材料にお
いて、発色効彰が向ｈＬ、血中カタラーゼによる呈色丸
字（１３度の減少、すｔ［わち測定値の低下として現れ
る干渉作用が除去され、使用条件下において反応速ｔＨ
がすくて定積分析操作に要する時間が短縮可能であり、
かつ測定領域が拡大された、すなわちダイナミックレン
ジが広い、改良された多層分析材料を提供することであ
る。 本発明は、 （ｔｌ 水不浸透性）′ｔ、透過性支持体の上に少な
くともベルオキシダーゼを含む試薬層、および多孔性展
開層の二つの脂を少なくとも有しこの順に槓瀬されてｔ
「る多層分析材料において、０１Ｊ記支持体以外の少な
くとも一つのＪＩＣ，２Ｊ”Ｃにおける水１０ｏｙに対
する溶解度が７２以上の水浴往モノカルボ゛ン酸または
その塩が含有されていることを特徴とする多層分析材料
であり、その主要な実施態様は （２）モノカルボン酸が脂肪族モノカルホン酸または芳
香族モノカルボン酸である（１）に記載の多層分析トｊ
料。 （３）モノカルボン酸またはその塩が蛸酸、酢酸、プロ
ピオン酸、酪酸、吉草酸および安息香酸、ならひにこれ
らの酸のアルカリ蛍属塩およびアンモニウム塩からなる
群から選ばれた少なくとも／４ｒｌｉの化合物である（
１）に記載の多層分析材料。 （４） アルカリ金属塩がリチウム塩、ナトリウム塩
およびカリウム塩である（３）に記・ｊ・父の多ｊ「・
１分析１す料。 （５１Ｍｌ 記試薬１１９にペルオキシダーゼとともに
少なくとも弘−アミノアンチピリンまたはそのａＦ４Ｍ
Ｌ体が含有される（１）ないい４）に記載の多層分析（
Ａ料。 ｔ６１ ＭｉＪ記試桑層または他のいずれか一つのハ
ηにオキシダーゼが含有されている１ｌｌｌｒいしく５
）に記載の多層分析？４￥４゜ （７）前記オキシダーゼがグルコ−スオキシダーゼ、マ
レートオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、ヘキソ
ースオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、Ｌ−
グルコノラクトンオキシダーゼ、ガラクトースオギシダ
ーゼ、キ→１−二／ブーンオキシダーゼ、ピルベートオ
キンダーゼ、ウリカーゼ、アスコルベートオキシダーゼ
、ラグテートオキシダーゼ、グリｆ／ンオキンダーゼ、
グリセロールオキダーセからなるＩ：￥からＪＨ３ばＡ
した／ （、、（（である（６）に記載の多層分析材料
。 ｃｓ＋ ＭｊＪ記オキシダーゼがグルコースオキシダ
ーゼである（６）に記載の多層分析飼料。 ｔ９） ｎ’＋Ｊ ｇ己オキシダーゼがコレステロー
ルオキシダーゼである（６）に記載の多層分析材料であ
る。 本発明の多層分析材料における光透過件水不浸透住支持
体は波長約λ００ｎｍから約７００ ｎ ｒｎの範囲の
少なくともあるボ１１囲の波長領域の磁磁波（紫外Ａ１
バ近紫外ＭＬ ”Ｊ視）ｔｌまたは近赤外線）を約≠０
４以上、好ましくは約Ｊ、ｔ％以上透過させることがで
き、実質的に水をその内部にγを透させることがなく、
かつその表面に設けられる後述の試薬層または下塗層に
含有されるバインダーポリマーまたは他の成分と実質的
に化学反応を生じさせない素材からなる。前述の規準に
あうかぎり支持体として用いることができる素材は何で
もよい。支持体としては、ポリエチレンテレフタレート
、ビスフェノールＡのポリカルボネート、ポリメチルメ
タクリレート、ポリスチレン、セルロースエステル（例
、セルロースジアセテート、セルローストリアセテート
、セルロースアセテートプロピオネート）などのポリマ
ーからなる透明シートまたはフィルムや透明ガラス板ｌ
（どで１！１１、さ約ｊＯＢｍから約−２ｍ１１１．奸
才しく一７Ｉ約７０１１１ＴＩ カら約Ｑ、ｊｎｌＴＩ
ｌの軸回のものを用いることかできる。 支持体の表面には試・者層（＋たは他のｋｆｉに層）を
支持体に一体に接若することケ容易にするｈ的で公知の
下墜層を設けるか、あるい
【Ｊ支持体の表向を公知の化
学的処理（例、酸処理、アルカリ処理）または物理化学
的処理（例、コロナ枚重処理、グロー放電処理、紫外線
照射処理、大焔処理）を施すことができる。 本発明の多層分析材料に…いらＡＬろ少なくともペルオ
キシダーゼを含む試Ａ：１に層とけ少／〔くともペルオ
キシダーゼを含む過酸化水素ｊ、’ｐ出用！−色Ａ：１
小薬糾成物（以下 １．１２０２１−色試虐という。）
を含む試薬刊我物が）、−１水件バインダーポリマーの
マトリクスの中に分散またはｒ？Ｇ ｌ’ｌイさね、て
Ｉ、［る試ｒつ４層である。 ）１２ （Ｊ ２呈色試薬はベルオギンダーービ、およ
びペルオキシダーゼと過酸化水素のイ′ｒ−在トで検出
口ｊ能ｉｃ変化（一般に色ｇＪ ＩＬｊ：のイタ化 ）
７層色または色相の変化）を起すλ桃奥七の化合物の組
合せからなるインジケータとからなる。インジケータと
して（１） ［Ａｎｎ、Ｃ１１ｎ、 Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ、Ｊ、乙、コグ−２７（／りｔり）、米国特許３．タ
タλ。 ｉｒｇ、特公昭ｊ乙−グ、１１タタ、特開昭ｊｊ−／ｌ
≠３ｊ６、特開昭ｆ／；−／２！３７３、特１顧昭！７
−６１．ｆ）を等に開示の、色原体としてグーアミノア
ンチピリンまたはその誘４体とカプラーとしてフェノー
ル、ナフトール、またはそれらの誘導体の４１１１合せ
。 グーアミノアンチピリン（＋−アミノ−，２，３−ジメ
チル−／−フェニル−３−ピラゾリン−！−オン）の諾
り側体の例として、≠−アミノーλ。 ３−ジメチル−／−（３−グロロフェニル）−３−ｅ−
ｙゾ’）ンーｊ−オン；グーアミノ−λ、３−９／チル
−／−（，２，４’、＆−）！１クロロフェニル）−３
−ピラゾリン−！−オン：≠−アミノーコーメチル−３
−フェニル−／−（，２，≠−、＋−トリクロロフェニ
ル）−３−ピラゾリン−，１−オン、≠−アミノー／−
（≠−アミノフェニル）−λ、３−ジメチルー３−ピラ
ゾリン−ｊ−オン、弘−アミノ−／−〔弘−（ジエチル
゛１′ミノ）フェニル〕−−、３−ジメチル−３−ヒラ
ゾリン−ｊ−オン、弘−アミノ−／７ （１７−アセト
１′ミドフェニル）−Ｘ、３−ジノプール−３−ピラゾ
リン−よ一オン、グーアミノ−１−（アミノ−λ−エチ
ルフェニル）−２，３−ジメチル−３−ピラゾリン−ｊ
−オン、グーアミノ−／−（アミノ−ｑ−メチルフェニ
ル）−，２，３−ジメチル−３−ピラゾリン−よ−オン
をあげることができる。グーアミノアンチピリン、Ｉ工
・よＯ・その栖づ、（休ｌ：１いずれもその酸付加塩（
４４＋１、塩化水素ｒＩｉ１．．．ｔ ）どし′〔も用
いることができる。 ナフトールとして、／−ナフトール、！−士ラフトール
あげることができる。 フェノール１匈棉１木とし−ＣＣカブフールレゾルシン
、ヒロガロール、フロログルシン％’ｌ 川−１または
ｐ−クレゾール、０−１ｒ■］−１またはｐ−メトキシ
フェノール、ｏ−、ｍ−、またはｐ−スルホフェノール
、０−またはｐ−クロロフェノールをあげることができ
る。 ナフトール誘導体として、ｌ、７−シヒドロキシナフタ
レン、グーメトキシ−／−ナフトールをあげることがで
きる。 フェノール誘導体およびナフトール誘導体としてこれら
の他１：Ｃ，Ｈ０［（、Ｍｅｅ’ｓ、’Ｉ’、Ｈ，Ｊａ
ｔｎｅｓｚ ＪＴｌ＋ｅ ’ｌ’ｂｅｏｒｙ ｏｆ
ｔｈｅ ＰｈｏｔｏｇｒａｐｈｉｃＰｒｏｃｅｓ
ｓＪ ｉ’ｂｉｒｄ Ｅｄｔｔｉｏｎ（へＩａｃｍｉ
ｌ ｆａｎＣｏ、、 Ｎｅｗ Ｍｏｒｋ、 ／り６
ｚ年発行） ｍ ３１７−３９ｔページに記載の化合物
も用いることができる。 これらの組合せのうちで好ましい組合せは弘−アミノア
ンチピリンと／、７−シヒドロキシカフタレ、ンの組合
せ、グーアミノーコ、３−ジメチル−／−（，２，弘、
６〜トリクロロフエニル）−３−ピラゾリン−！−オン
と７，７−シヒドロキンナフタレンの組合せである。 （２）特公昭ｊ！−，２ｔ♂グθに開示の色原体として
よ一ピラゾロン誘導体またはグーオキサシロン誘導体と
、カプラーとしてフェノール類、ナフトール類またはそ
の誘４゛ト体とのＡ；１１合せ。 （３）特開昭弘２−／／弘りざ７に開示リ色片体として
の≠−アミノピラゾロン１肉・ζ、ｊ、１本（（ｙｌ八
／−（≠−スルホフェニル）−Ｊ−メ；１−ルー３−
フェニルーグーアミノ−３−ヒラゾリン−ｊ−メン）と
カプラーとしてのフェノール、フェノール誘導体、また
は多価フェノール（（＞１．１、カテコール、レゾルシ
ン、ヒドロキノン、クレゾール、クアヤコール、ピロガ
ロール、オルシノール、ｉ’７ Ｊ’ｙ−ｆ−酸ンとの
組合せ。 （４）持分Ｈ（（ｊ ７− Ｊ−，５′／りに開示のｑ
づ・［形成物質として＋３−）ルエンスルボニルヒドラ
ジノーペンゾチアゾリウム、キノリニウム、またトラピ
リジニウム誘導体と、カプラーとし゛Ｃフェノール）、
〔１、ナフトール類、それらの誘・！゛１体、へ音１ｉ
５ｊアミン川または反応はメｔレン化合物との［ｌｊｌ
イ、ゝせ、Ｊ、たは染料前駆体としてトリアリールイミ
ダゾールｗＩｆ体（単独で用いられる几 ＋５１ 特１ｂｖｌ ｔｉｉ：Ｉタロ Ｊ Ｊ’
／ −ｔ Ｊ’ １ｍ 曲；ｌｕ／ｊ 水素ＩＪ’ｉ
与体（色原体）として弘−アミノアンチピリン類、４’
ｇ’ｆｐＨ−７’ ンｑ−ビリ’ｆＭｓ Ｎ＋ Ｎ
ｉｙ置装吻−ｏ−またはｐ−フェニレンジ゛アミン類、
２−ヒドラジノヘンジブ−アゾリン類またはｐ−ハロゲ
ノフェノールと、カプラーとしてＮ、Ｎ−ジ置換アニリ
ン類との組合せ。 （６）特開昭！７−タ≠ｔｊ３、特開昭夕７−タ１、ｔ
ｔｊｌｌ、、特開昭！７−タ≠ｌｊ！、！侍開昭５７−
１４７＆タ乙に開示の０−またはｐ−アミノフェノール
化合物または０−またはｐ−フェニレンジアミン化合物
と耐振散１住フェノール化合物、耐振ｆＬｋ作ナフトー
ル化合物、耐振敵性アシルアセトアミド化合物または耐
振１１（１牛ピラゾロン化合刊との組合せ。 などがあげられる。これらのインジケータのうちでは、
弘−アミノアンチピリンまたはその誘導体とナフトール
またはその誘導体の組合せが好」、しく、七のうちで≠
−アミノアンチピリンと／、７−シヒドロキシナフタレ
ンのＩＩｉ合せ、ｌ−アミノーコ、３−ジメチル−／−
（コ、≠、６−ドリクロロフエニル）−３−ピラゾリン
−！−オンと／ 、７−、／ヒドロ（ゾナフタレンの組
合せが最も好ましい。 ペルオキシダーゼとして１ｈ公１１ｉｊ ３ ｔ−グタ
タタタ、特公昭ｊ７−タｊ２０侍に１剤ボの１１１１山
起訴および動物起源のベルオキンダーーレ（ＥＣ／、／
／。 ／、７）、および特開昭ｊ７−タタ／り、２首に開示の
微生物起源のペルオキシター−１／（Ｅ（’／。 ／／、／、７）のうちからノ１≧菱了１１（二／ ４１
１圭たシは、！ ｌｌ７以上を組合せて用いることがで
きる。。 植物起源のペルオキシダーゼの例として、西洋わさび、
じゃがいも、いらじく（つ４液、かふ、だいこんから抽
出されたペルオキシダーゼを、 ｌ＋Ｊ物よじ源のペル
オキシダーゼのイシ１］として、牛！７１．から抽出さ
れたラクトペルオキシダーゼ、臼血味から抽出されたベ
ルドベルオキシダーゼを、伯生物起小ｎのペルオキシダ
ーゼとしてＡ ｌ ｔ ｅ ｒ ｎ ａ ｒ ｉ ａ
ｉ＝、Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ属、ｅｕｒｖｕｌａｒ
ｉａ属、Ｐｅ１ｌｉｃｕｌａｒｉａ属に屈し非特異的ベ
ルオキンダーゼ生組能を有する微生物起源のペルオキシ
ダーゼを、それぞれあげることができる。 その他に特公昭！ｔ−≠タタタタ、特公昭タフ−Ｊ！λ
Ｑ等に開不のチオジｒン酸鉄、タンニンｖ４ｉ鉄、フェ
ロシアン化鉄（いずれも飲（＋コ）化合物）、クロム硫
酸カリウム、沃化ナトリウム、沃化カリウム、モリブデ
ン酸アンモニウム、モリブデン酸カリウム等のベルオギ
シダーーｅ７古性を有する無機化合物を用いることもで
きる。 これらのうちで植物起源または微生物起Ｉｌ＋ｉｉの非
特異的ペルオキシダーゼが好ましい。 本発明の多層分析ｔＡ料においては、少なくともペルオ
キシダーゼを含む試薬層はペルオキシダーゼおよびイン
ジケータが親水性ポリマーバインダーの中に溶解または
分散されてなるものである。 バインダーとして用いることができる親水性ポリマーは
ペルオキシダーゼおよびインジケータと実質的に（０互
作用を生ずることがなく、被膜形成能を有するものであ
れば何でもよい。親水性ポリマーの例としてゼラチン、
酸処理ゼラチン、脱イオン化ゼラブーン、ゼラチン誘導
体（例、アシル化ゼラチン）、ポリビニルアルコール、
ポリビニルピロリドン、ポリビニルベンゼンスルホンＩ
’ｌ’２ナトリウム、カルボキシメチル−１ζルロース
、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシ
エチルセルロース、メチルセルロース、プルラン、プル
ラン誘導体、ポリアクリルアミド、アクリルアミドコポ
リマー（例、アクリルアミド−Ｎ−ビニルピロリドンコ
ポリマー、アクリルアミド−λ−ヒドロキシエチルアク
リルアミドコポリマー）、をあげることができる。試、
１１２層の厚さく ＜／Ｉ 燥１’７さ）は約５μｍか
ら約ｉｏｏμ口１、好τＥ Ｌ、、 ＜は約１０μｍか
ら約５ＯμＩＩ＋の範囲である。 試薬層におけるベルオキシダー・ビの含＝自：１１は〆
・、１夕千ＩＪ ／ ｍ２ｙハら約／θツノ（）／１１
＋２、好ましくけ約／万Ｕ／ｍ２から約６カＬＪ ／
ｍ ２のパ１３四である。 インジケータの含有…は液体砥料に含イｊされると予想
される被検成分の最大食合（・１に対し１・２、する化
学頃論によるＵｎまたはそれより多い【１Ｆが必すュ゛
で３）番）、この量は当業者が実験により決めろことが
できろ。 ペルオキシダーゼを含むＨ２Ｃ） ２ ’ｒ−色試）：
弓とともに用いられる１、２ｊ ０Ｃにおけろ水１００
１？に対する俗解度が７２以上の水ｔｇ性モノカルボン
酸またシまぞの塩（以下、水溶性モノカルボン酸または
その瑞、または単にモノカルボン酸等という。）につい
て説明する。 水溶性モノカルボン酸またはその塩は本開明は多層分析
飼料の支持体以外の少なくとも一つの層に合判されてい
れはよく、親水性バインダーポリマーを含む層の中に含
有されていて場合には親水性バインダーに溶解または分
散して含まれていることが好ましい。 水溶性モノカルボン酸またはその塩としては脂肪族モノ
カルボン酸およびその塩、芳香族モノカルボン酸および
その塩、芳香族置換脂肪族モノカルボン酸およびその塩
のいずれか１種または２棟以上を組合せて用いることが
できる。脂肪族モノカルボン酸としては炭素原チ数／乃
至ｊの直鎖または分岐状の飽和ｔ］ｈ肋族土族モノカル
ボンげられ、その具体例として、蟻酸、酢酸、プロピオ
ン酸、酪酸、吉草酸、イソ吉草酸があげられる。 脂肪族モノカルボン酸の塩としては炭素原子数／乃至ｊ
の直鎖または分岐状の飽和脂肪族モノカルボン酸のアル
カリ金属塩（例、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム
塩）およびアンモニウム’ ＪＬｊ カあケラれ、その
具体例として、蟻酸、ｕｒｒＬ プロピオン酸、酪酸、
吉草酸、イソ１１６酸、イソ１覧１°ｉ″（酸のそれぞ
れリチウム塩、ナトリウムＪ’ｉｎＹ％ カリウムＩ′
！ｉｉおよびアンモニウム塩があげられる。 芳香族モノカルボン酸塩の（：１１体例として安息青酸
リチウム、安５は青酸ナトリウム、 女、）、！、占酸
ノＪリウム、安、（支）、査酸アンモニウム、ｏ−トル
イル酸ナトリウム、０−トルイル酸カリウム、ｍ−）／
Ｉ／イル酸ナトリウム、ｐ−トルイル１ζノｒナトリウ
ム、ｐ−トルイル酸カリウム、ｐ−トルイル酸アンモニ
ウムがあげられる。 芳香族置換脂肪族モノカルボン自＝およびその嗜１の具
体例としてフェニル酢酸、フェニル酢酸ナトリウム、フ
ェニル酢酸カリウム、フェニルｆｎ酸１ンモニウムがあ
げられる。 これらの水ｍｔｌモノカルボンｌ’ｌ’５またはその塩
で好ましい化合物は酢酸、プロピオンｒ１ν、蟻酸ナト
リウム、蟻酸カリウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム
、酢酸アンモニウム、プロピオン酸ナトリラム、プロピ
オン酸カリウム、プロピオン＊＝アンモニウムである。 水１８０モノカルボ゛ン醒またはその塩は通常は１種類
を多１１９分析材料の少ｆ、ｃくとも一つの層に合判さ
せればよいが、必要に応じてλ種類以上を少なくとも一
つのｌ（４に混合して含有させるか、またはイｉ！数の
層に７種類すつ別個に含有させることができる。水ｒδ
性モノカルボン酸またはその塩は液状の化合物でも固体
状の化合物でもいずれでも用いることができ、固体状の
化合物の場合結晶水含有物や結晶アルコール含有物であ
ってもさしつかえなく用いることができる。 水溶性モノカルボン酸またはその塩は使用条件下におい
て液体試料に含まれる被検成分であるＨ’２ｕ２、また
は後述するように、オキシダーゼの触媒作用により液体
試料に含まれる被検成分が酸素により酸化されて生成し
たＨ２（Ｊ２が生体起源の液体試料に含まれるカタラー
ゼにより分解されるのを防ぐ作用を有するものと推定さ
れる。その結果、多層分析材料の中に導入されたＨ２（
Ｊ２はベルメキシダーゼの存在トにインジケータの検出
ｂ」能な変化（一般に色濃を川のシ薯に、発色、才たは
色相の縫化ンを起す反応にその実′ｃｃ ｒｒｖに全１
１１が組込まれると１１１一定され、活眼としで検出１
１］能な欧化の量が増大し１．ことに色濃曲の変化、発
色、色相の変化において生じた色のゲ０字１・：ｙ’
１１３’が増大−４’ル。 この他に水溶性モノカルボン酸また１・Ｊその塩の存在
によりメキシダーゼの四ｑする反応およびペルオキシダ
ーゼが関与する検出Ｖｊ能な変化を生する反応の全行程
またはそのいずれかの行程の反応速度が早まる作用をも
有すると推定さＡ（１、結束として液体試料の多ハ９分
析［１料への点着から検出可能な変化の検出・測定に要
する１２１間がｎ）縮される効果が達せられる。 水溶性モノカルボン酸またはその塙は少なくともペルオ
キシダーゼを含む試薬層、に含有されてもよく、あるい
は少なくともベルオギシダーぜを合む試薬層よりも上側
の（ずｔ（わち、少／［くともペルオキシダーゼを含む
試・省層に関し、てり特休とｊ更の側の）いずれかの層
または多孔ｆ／ｌ’ Ｉ＋、＋間層のいずれかに含有さ
れてもよく、あるいはさらに少なくともペルオキシダー
ゼを含む試薬層とそれより上側σ刀１→または展開層と
に含有されてもよい。水浴性モノカルボン酸またはその
塩がペルオキシダーゼまたシｊオキシダーゼの活性を阻
害する場合には、水浴性モノカルボン酸またはその塩を
ペルオキシダーゼまたはオキシダーゼを含む層と別のＩ
＋＊に含イ１させ、間に中間層を介在させて用いること
がでさる場合がある。被検成分またはそのオキシダーゼ
による酸化生成物が水溶性モノカルボン酸またはその塩
と同じ化合物（またはイメン）であったり、水／８件モ
ノカルボン酸またはその塩が被検成分の多層分析材料の
中におい−〔うけ全一連の反応に特異的に干渉したり一
連の反応を特異的に１ｉｆｔ害する場合には胸亘に他の
水溶性モノカルボン酸またはその塩を選択して用いなけ
ればならないことはいうまでもない。 水溶性モノカルボン酸またはその塩の多層分析材料中に
おける含有怜は液体試量中に含有されるカタラーゼ活性
を有する物質の量またはカタラーゼ活性値、および定に
分析操作の１カニに層分析材料の展開層に点イ１される
Ｂｉｔ休試体１の；Ｌ；に依存し、多層分析材料に点着
される液体試料中に含イＪさ）すると予想されるカタラ
ーセｌ占１牛をイＪする物質の総はまたをｊカタラーゼ
活１’！’ （ｌｆ７の総１１（の−：ン大イ＋ｆｌに
対応する化学１論によるＮまたはそれより多いｋが、液
体試料がＩＮ開されｒ虻透する１ｉＬ１．１桟に存在す
る必要があ１ハさらに削述の反応；ｌ！ｊ；厩をＩＪ１
．める′：＜す県な発現させるには場合によってはさら
に多くの１４が必要であるかもしれ／Ｃいことは容易に
理ｔＩ＋’＋’されよう。 本発明にｉｏいて水ｍｔ′−１−モノカルホン１弯また
はその塩の多層分析材料中における曹有ｉ１ｉは多層“
り分析飼料／ｍ にっき０ 、／ｍｅｑか２／ｅｑ、
（ＩＪましくは０ 、２ ＋ｎｅｑから０．ｊｅｔｌの
相聞Ｃある。 被検物質が過酸化水素（゛なく、化学反応により過酸化
水素を生成する反応糸に糾みこむことができる場合には
、被検物質が酸素と相１．ｌ、作用して過酸化水素を生
成するための触媒としてオキシダーゼを試襲層または他
の１曽に含ｆ１さ一４ｊ′でおくことができる。オキシ
ダーゼは被検物質に応じて１・り択される必要がある。 オキシダーゼとしては７種のメキシダーゼを用いられる
ことはもちろん、一連の連続反応を進行させる複数棟の
酵素の組会せ（その中の／ ４Ｊｌ＋はオキシダーゼで
ある。）を用いることもできる。さらに必要な局舎には
オキシダーゼとともにそのオキシダーゼの補因子および
／または他酵素を組合せて用いることはいうまでもない
。 オキミノダーゼ（必要な場合には捕酵素もともに）はペ
ルオキシダーゼおよびインジケータを含む試・部層に含
有させるか、あるいは１′、Ａ薬１１゛ｑよりも上側の
層に含有させるか、さらにはペルオキシダーゼおよびイ
ンジケータを含む試薬とそれよりも上側の層（７層また
は複数のハ★）の両方（または合ｈ１３層以上）に含有
させることができる。ここで試望層より上側の層という
表現には多孔＋３１”展開層をも含めることができる。 オキシダーゼが触媒獲るＡ５ｆｉの反応には酸素の４ｊ
在が必須であり、多層分析←ｊ料においては酸素は′！
３Ｙ気中から展開層を経て他の層内へ拡散するので、オ
キシダーゼが触媒−９゛る酸化反応の効率的な進行にと
っては酸素の層中への拡散σノ効率的な速成を目的とし
た特廟昭夕ｔ−９３ｔ３／に開示した、オキシダーゼを
ペルオキシダーゼおよびインジウ゛−タ手′島む試ｎ／
Ｅ ／ｌ”ｉより」二側の層、ことに多孔１１１：展開
１曽４゛たは多孔Ｖ目ノ１３曲層に１両接する１０″１
に含有さ−１−た４＋′）ｂψ、の多層１分わ目旧、゛
［どすることが好ましい。才だ二Ｉレスチロールエステ
ルのように親油ｔ！Ｊ：物Ｉｆｆ］が破検′向′１′Ｊ
であるＬＩ、ｊ合には、親水ｔ’ｔ’バインダーポリマ
ーをＴ’＋する層へは被検物Ｖｔが浸透しにくいので、
ことに＜−（Ｌｌ’目１．す１１）１層の内部にオキシ
ダーゼを含有さ一１゛ることが好守しい。 本発明の多層分析［」料に含イ゛１させることがでへる
オキシダーゼとしてｒｌり素（０２）をアクセプタとす
るオキシダーゼがあげられ、その例として次の酵素をあ
げることができる。（）内はＥＣＮｕｒｎｂｅｒ を表
わ−Ｃ０ グリコレートオキシダーゼ（／、／、３．７）。 マレートオキシダーゼ（ｉ、／、、ｙ、３）。 グルコースオキシダーゼ（／、／、、３．４’）。 ヘギソースオキシダーイ（／、／、３．に）。 コレステロールオキシダーセ（／、／、３．６）。 アリールアルコールオキシダーゼ（／、／、３．７）。 ］、−グルコノラクトンオギシダ〜ゼ（／、／、３．ｔ
ｒ）。 ガラクトースオキシダーゼ（／、／、３．り）。 アルコールオキシダーゼ（／、／、３．／３）。 ■ノーコーヒドロキシ酸オキシダーゼ（ｉ、／、３．／
夕）。 アルデヒドオキシダーゼ（／、２．３．／）。 キサンチンオキシダーゼ（／、、２＃、２）。 ビルベートオキシダーゼ（／、、２．Ｊ、Ｊ）。 ビルベートオキシダーゼ（Ｃ（ＪＡ−アセチル化）（／
、２．３．６）。 ラドステロールオキシダーゼ（／、３，３０．２）、。 １ノーアス／ぐルテートオキシダーゼ（／９弘、３゜７
）。 ］、−アミノ酸オキシダーゼ（／、４ｔ、３．２）。 Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ（１，ｌＡ、３．３）。 アミンオキシダーゼ（フラビン含有）（／、＋。 ３、弘）。 ビリドキ廿ミンホスフェートオキシダーゼ（／。 ４．３．３；） 。 アミンオキシダーゼ（碕１含自）（／、１１．３．６）
。 Ｄ−グリコレートオキシダーゼ（／、４ｔ、ｊ、７）。 サルコシンオキシダーゼ（／、！、３．／）。 Ｎ−メチルアミノ醇オキシダーセ（／、３．３．．２）
。 Ｎ −メチル−Ｌ−リンンオギシダ−（イ（／、夕。 ３．４ｔ）。 ウリカーゼ（ウレートオキシクーセ）（／、７゜３．３
）。 スルフイトオキシダーセ（／ 、ｇ、３．／）。 アスコルベートオキンダーセ′（仁１０．３．３）。 ３−ヒドロキシアントラニレートオ〜ノダーゼ（／、１
０．３．！；）。 アルギニン 、２−４−ノオギシゲーｊ゛−ゼ（／、／
３゜ｉｘ、ｉ）。 リシン ２−モノオキシゲナーゼ（／、１３゜／、２．
２）。 トリプトファン −一モノオキヅゲナーゼ（／。 ／３．／、２．３）。 ラクテートオギシタ゛−ゼ（ラクヅーートコーモノオキ
シゲナーゼ）（／、／３．／、２．グ）。 ジメチルアニリンモノオキシゲナーゼ（／、／ＩＩ。 ／３＃）。 コレステロール７α−七ノオキシゲナーセ（／。 ／ｕ、／３．／７）。 Ｆｌ ａｖｏｐｒｏ １ ｅ ｊ ｎ −Ｉ ｉ ｎｋ
ｅｄ ｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ（１，／≠、／グ、
／）。 フェニルアラニンモノオキシゲナーゼ（／、／≠。 ／１．／）。 グリセロールオキシダーゼ（東洋醸造から販売）。 グリシンオキシダーゼ（化学大辞典第３巻（／り６０年
２月発行）に記載） オキシダーゼ！含む複数種の酵素の組合せの例として以
下のものがある。 グリセロールキナーゼ（，２，７，／、３０）および１
ノーα−グリセロ畑酸オキシダーゼ（／、／。 タタ、ｊ；または特開昭タＪ−７２１タコ、特開昭６３
−ｊ４ｔざＰ３に開示ンの組合せ（特開昭５３−２≠ｇ
り３に開示） トリグリセリド加水分解活性をもつり、ｅ−ゼ、グリセ
ロールキナーゼ（２，７，／、３０）およびＬ−α−グ
リセロ燐酸オギシターセ（／、／、タタ、ｊ；または特
開昭！１３−７．２ざりλ、特開昭１３−．２１ＡＩＹ
３に開示）ノ、（ｌｌｉＹせ（Ｑ’！ｊ開昭夕３−．２
≠ｇ！Ｐ３に開示） エステラーゼ作用をもつり・ｇ−ゼ、プロテアーゼおよ
びコレステロールオキシダー−１２（／ 、 ／ 、３
。 ６）の組合せ（特開昭タ０−／３７／タコに開フト）グ
ルタミルビルベートトランヌアミナーゼ（アラニンアミ
ノトランスフェラーゼと同じ。Ｊ、、４゜／、、２）お
よびピルベートオキシダー（イ（／、、２゜３．３）の
組合せ（特願昭、５′乙−タ３ｔ３２に１１１１示） グルタミルオキぜロアセテートトランヌアミナーセ（グ
ルタミン−オキソ酸アミノトランスフェラーゼと同じ。 コ、乙、／、／夕）、オギサロアレテートデ力ルポキシ
ラーゼ（ゲ、／、／、３）およびピルベートオキシで一
ゼ（／、２，３．３）の組合せ（特願Ｈ６タ６−７３ｔ
３．２に開示）これらのオキシダーゼのうちで、本発明
の多１１・１分析材料において好ましいものはグリセロ
ールオキシダーゼ、マレートオキシダーゼ、グリコース
オキシダーゼ、ヘキソースオキシダーゼ、コレステロー
ルオキシダーセＩ ｓ ＩＪ−グルコノラタトンオキシ
ダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、キサンチンオキシ
ダーゼ、ピルベートオキシダーゼ、ウリカーゼ、アスコ
ルベートオキシダーゼ、ラクテートオキシダーゼ、グリ
シンオキシダーゼ、グリセロールオキシダーゼなど、お
よびオキシダーゼを含む複数種の酵素の組合せとして例
示した組合せがあげられる。 オキシダーゼの多層分析月料中における含有−は、主と
して液体試料に含有される過陸化水黍欠生成する被検物
質の予想される最大ｌとオキシダーゼおよびペルオキシ
ダーゼの活性値の比により決めることができ、これは当
業者が実験により決めることができるが、おおよその含
有量として約／千Ｕ／ｍ２から約１０万Ｕ ／ ｍ ２
、好ましくは約３千Ｕ／ｍ２から約夕万Ｕ／ｍ２の範囲
である。 オキシダーゼがグルコースオキシダーゼの場合には、そ
の含有量は約λ千Ｕ ／ ｍ ２から約≠万Ｕ／ｍ２、
好ましくは約グ干Ｃ１／ ｍ ” ７Ｐ ｈ約コカＵ／
Ｉｎ２の範囲である。 ペルオキシダーゼ、およびオキシダーゼはそれぞれのｌ
古恍がｊ７／人になる）゛１２ノＩ・’Ｉ Ｉ’ Ｈ（
ｐ’ｔが、））１ハさらにはそれぞれの活呼はイオン、
ｊ！、鵬や：２ｆ ｌメ） （二共在する陽イオンや陰
イオンの神用に上べ）・；顎響をもうける。従って多ノ
曽分析Ｆ、Ｉ料においてを、【、弔−にペルオキシダー
ゼを含む試悲ハ９、オキシダーゼを含む１曽、またはペ
ルオキシダーゼとオキシダーゼをともに含む試ＩＭそれ
ぞれのｐ ｔｌ値を、−）いて必要に応じてイオン強夷
−や共存するイメン伸ｔ［どのｌｌｄ Ｆ−をＡ”＜
ｙｈに設定−４−ることか、よいう丁４ｊｉ結果（定１
ｒ；鞘度、くりかえし再環ゼＶなどについて）をＢ＜ろ
ためにはきわめて重要である。かかる目的のｌ−６に多
孔住展曲層、試薬層、）シフ顎Ｐ（ｋ層その他の機能胎
生に酸、アルカリ、塩、級１！ｌｆ口１１、ハト白ｌ１
１ｋ ？＋’ｌ、界面ｌ古件りりなどを含有させておく
ことは本発明の′）５が１１に当って特に重要なことで
ある。これら反応条件設定の為の試薬類の神１．４１
％ 、Ｆｊｔ ｔｃど）′；Ｊ１分１ノ「の目的その他
によって大きく変化−「るので、目的に従って；＋＞：
ｉ ’Ｆ＋’、選択する必要がある。 ペルオキシダーゼおよびインジケーターを含む試薬層に
酸、アルカリまたは緩衝剤を含有さすて過ｉ（化水素の
存在下で検出ｉｊ能な変化を起させるには、ペルオキシ
ダーゼの最ｓｍ ｐＨ値であるｐ ｋ−１７，０を中心
１＝シてｐＨ約ｒ、ｏから約り、０１好ましくは約１．
０から♂、Ｏの軸回のｐＨ値範囲の下で変化を生じさせ
ることが好ましい。 オキシダーゼはその最適ｐ Ｈ値は酵素の種類により異
なるが、例示すれば、グルコースオキシダーゼ： ｐ［
ＪｖＪｔ 、 Ａ ；ヘキソースオキシダーゼ：ｐＨ約
４ 、３ ：コレステロールオキシダーゼ：ｐｌＪ約夕
、ざ；ガラクトースオキシダーゼ：ｐＨ約７．θ；アル
コールオキシダーゼ：ｐＨ約７゜ｊ；ウリカーゼ：ｐＨ
７，３へど、タ；アスコルベートオキシダーゼーｐト（
約５．４ ； ］、−］α−グリセロ燐、酸オキシダー
ゼ ｐＨ７、夕〜７．７である。 オキシダーゼを含む層はオキシダーゼの種類によりそれ
ぞれの最適ｐＨ値またはその近傍のｐ）Ｊ値範囲にｆｉ
１Ｍ整することが好ましい。ペルオキシダーゼの最、＋
Ｍｐ”（直と異ｔ【る１１２」１・４１目１１直をもつ
オキシダーゼはそれ故に別々の１１１に３自させること
が好ましい。例えはグルコースオキシダーゼを多孔往展
開層または後述する接イ゛−ＩＩ１９に含有さ升るυ）
）合には、多孔Ｐ展開類または接（：ｊ ｂ’Ｑに使用
条件下においてグルコースオキシダーゼの（ｊ４ に４
ｐ Ｈ４直であるｐＨ５、６を中心としてｐｌｉＪ、
４からｐ ）（７。 ｔ、好ましくはｐ １１４１ 、０からｐＨ７，０の１
１．ｕ囲に維持１−ることかできる酔４たは包仲ｆ剤ち
−加えることができる。 試薬層、他の層、または第孔件ｊｌン開題に含イ１−さ
せることができる酸、アルカリ化たは籾ｉ・１１ｆ剤と
して脂肪族ヒドロキシカルボンｈ＞？ （１”’、グリ
コール酸、乳酸、α−ヒドロキシ配酸、グリセリン酸、
タルトロン酸、りんご酸、め石１１．ｊ゛ｊ 、＜えん
酸）、脂肪族ジカルボン酸（例、マロン的、こはく酸、
グルタル酸、α−メチルグルタル酸、β−メチルグルタ
ル酸、３．３−ジメチルグルタル酸、α。 α′−ジメチルグルタル酸）、水酸化リチウム、水酸化
ナトリウム、水酸化カリウム、日本化学余堀「化学側Ｑ
楠礎梱」（東京、九番■、／り６を年発行）／３／
２−／３．２０ページに記載の緩衝剤（例、くえん酸水
素カリウム−くえん酸、燐酸二水素カリウムー燐酸水素
二ナトリウム）、［ＨｉｏｃｂｅｍｉｓｔｒｙＪ 、
！ （２）、ｌｌ６７−４′７７（／り４Ａ）のＮｏｒ
ｍａｎ Ｅ、 Ｇｏｏｄら著ロー１ｙｄｒｏｇｅｎ
Ｉｏｎ ）Ｊｕｆｆｅｒｓ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏ
ｇｉｃａｌｌＬｅｓｅａｒｃｈＪ Ｒ，Ｍ、 Ｃ，
］Ｊａｗｓｏｎ ｅｔ ａｌ ４ｊ［Ｄａｔｅ
ｆｏｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅ５ｅａｒｃｈＪ
第５ｅａｒｃｈＪｒｄ ａｔ ｔｈｅ Ｃ１ａｒｅｎｄ
ｏｎ Ｐｒｅｓｓ、 ／りｔり年発行） 弘７Ｇ−１
０１ｆページ、［Ａｎａｌｙｔ １ｃａｌＢｉｏｃｈｅ
ｔｎｉｓｔｒｙＪ、１０１１−１３００−３１０（１５
ｉ′１０）等に記載の緩衝剤（例、！−（Ｎ−モルホリ
ノ）エタンスルホン酸、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペ
ラジン−Ｎ′−２−ヒドロキシプロパン−３−スルホン
酸（Ｈｅｐｐｓｏ）ナトリウム塩またｌｄカリウム塩、
Ｎ−コーヒドロギシエチルビベラジン−Ｎ’ −３−プ
ロパンスルホン酸（Ｅｐｐｓ）ナトリウム塩またはカリ
ウム塩）、その他の緩衛Ｍ”−Ｃ（ｌ”Ｉ ％ マレイ
ン敞七ノナナトリウムまたはモノカリクム塩、３１３−
ジメチルグルタル酸モノナトリウムまたは七ノカリウノ
・ぬ） 、？！！（機ｎｉｋ （（〆１′師。 燐酸）がある。これらのうもではくえん「没、酒１酸、
りんご酸、グルタル酸、α−メフ゛ルグルタル酸、！−
メチルグルタル酸、α、α′−ジメチルグルタル酸、３
．３−、、／メチルグルタルｌ’１４．７Ｊ＜酸化リチ
ウム、１４ｅｐｐｓｏ Ｎａ塩：！′た）Ｊ、 Ｋ塩、
ＥＩＩＩ）ＳＮａ 塩またはに塩が好ましい。 本発明の多層分析し料における多孔畔ｇ９間層（以ト、
展開１曽ということがある。）は分析材料の最外面に位
置しくすなわち、分析飼料において試薬層に関して支持
体と反対側の１１′り外曲に位ｋ）二する。）で、被検
体液が点−６される面であり、その作用は点着された被
検体液がｉｌν（合体を含んだまま液体の客用には無関
係に単位ｎ＋凹゛１当番月よぼ一定容量の被検体液を試
〜５層に供給１−る機能を果すことである。この作用（
展開作用）により少ｆｃくともペルオキシダーゼを含む
試−％ ＩＩ”＋ （以下、試薬１？ｒｉということが
ある。）に供給される被検体液の容量１、さらには被検
体液に含まれる被検体の容量は単（ｊ７：面積当りほぼ
等しいことになり、またこＯｆｆ：用が存在するゆえに
、定量分析に際して被検体液ン正確に秤取しなくても定
量分析が実施できることを意味する。当然のことである
が被検体液を正確（：秤取して定量分析を実施すること
を排除するものでもないシ７、被検体液を正確に秤取す
ることによＩ）定常の精度が高まる場合がある。 本発明の分析材料における多孔性展開層として、特開昭
！ Ｆ −ｔ ３ Ｊ ｆ ｌｒ（特公昭！３−．２／
１７７）、米国特許ｆＡＪタタ２／！ｇ号に開示されて
いる非粋維等方的多孔性層（例、メンブランフィルタ−
またはプラッシュポリマ一層、微小球体または粒子を接
着剤で結合することにより製造された球体または粒子間
の相互結合空間により等力的多孔件が形成されている１
曽）、特開昭タタータＯｒｊりに開示されている微小球
状ビーズが水により膨潤しない接着剤により点接触状に
接着されて形成された三次元格子構造物からなる連続窄
隙含有等方的多孔注構造物層、特開昭タター７６グ３！
乙に開示されているｚＪ＜洗さオした４’ｉｉｌ物また
は親ｔｌ化処理植物からなる情維賀〕″峠力廿々孔往展
ｉ）旧１４、特開昭タフ−ｔｔ３ｊりに開／１ζさノじ
Ｃいる蜀理的縞性化処ＪＭ！された表面を１′Ｉ「るｔ
ｉ、’（’ｌ勿からなるオ戒ポ１１′貝異方件多孔件ｒ
ＬＮ開肋、特１’＋！ｉ’ｌ ｌ’ｉｉ Ｊ’、 ”グ
３７θに開フバされている合成、トリマ−４・ヅｆｌｉ
ｔ、 ｚ＜ルプヲ含ム抄造紙、抄造汁ｉ紙または不織イ
１」からｌ「る（ｉｌｌイ、１［賀異方性黍孔件展開ハ
リを用いイ）ことが（゛き、かつこれらの展開層はここ
にあけた！１．：ｒ計明１１１１１出に開示の方ｌ夫に
より；：電（することができｂ０゛！た！ｌ、’ｒ Ｉ
Ｉ４１１ｒ＋ ’Ｉターｔ Ｊ ｆｆざｒに開示さ１し
ているごと＜、−１ｉな化チタン、醇化亜鉛、またはイ
＋ｎ？ １１後パリ［ツムの微粉末を合判１−るメンフ
ランフィルターまたはフラッシュポリマー１鱒は後述−
する毘；ｌｆ、Ｌ、蔽層（幅ＪＬｔ線ブロッギングｒｔ
・ｊ、白色醒景ハ′４または）し反り、＋ ｋ’ｉ ）
をかねる１１を開胸として本発明において用いることが
できる。さらにカーボンブラックを含イ４するメンフラ
ンフィルターまたはプラッシュポリマー１（１を後述１
゛る）Ｃｇ蔽繭層かねる展開層として用いることができ
る。 被検体液が全血の場合、好ましいＷ聞届として前述の三
次元格子構造物からなる連続窄呻谷有寺方的多孔注構造
′Ｐｊ層および前述の繊維質異方性多孔性展開層があげ
られる。 本発明の多層分析材料においては試薬層と展開層の間に
水および被検体透過性の光遮蔽層（色遍繭層、輻射線ブ
ロッキング層、背景層または九反射層ともいう。）を設
けることができる。）ｆ ３ｐｊ、繭層は、たとえば、
赤血球を含む全血の如く、被検体液が右色粒チを含む場
合に有用な層である。即ち毘ゼ；１繭層の片側にある着
色粒子の色はこの層によってさえぎられて反対側、すな
わち透明支持体側からは着色粒子の色は全く見えず、従
って比色定ｌｉｔまたは螢）し測）を定態に当って着色
粒子が定量の妨害をしない。光遮蔽ＩＮは、二酸化チタ
ン微粉末、硫酸バリウム微粉末、酸化並鉛微粉末、アル
ミニウム微粉末またはカーボンブラックの如き微粉体を
水および被検体透過性の親水性ポリマーバインダー中に
分散した層で、！μｍからｉｏｏμＩ１１ 。 好ましくは５μｍから３０μｍの範囲の厚さがあり、被
検体液および被検体は通過しつるものである。光ｉ１ｉ
［層のポリマーバインダーとし−Ｃは試薬層に用いたの
と同じ種類のＹｑ水Ｖ（：ポリマーの中から漠亘に選択
して用いることができる。 光遮咄層としては二６り化チタンイ１り扮」、酸化１口
１鉛微粉、値６１２ハリウムイ、改粉末またはカーホン
ブラックなどの）し遮蔽能な４１する微粒子を含んだメ
ンブランフィルタ−（プラッシュポリマーｂ質光遮蔽層
として用いることかでさる。多孔’Ｐ（）Ｔｈ遮蔽層は
特開１１／Ｊ ＩＩ−？ −ｔ ３ ｌｒｆ ｇ （’
ｉ；、公昭３３−２／１７７）または特開昭ｊｌ／Ｌ−
ツタ７００１Ｘ開示の方法により設けることができる。 本発明の多層分析ｔＡ料においてはＩ＋Ｉ’■層を試店
層、光遮蔽層、または必要により設けられる他の層の上
に接着し積層して一体化するための接ｉ”ｆを強化する
目的でａ２ ’Ｉｔ ＩＩ’！を設けることができる。 ことに展開層として多孔性のシート状、フィルム状また
は膜状の素材を用いる場合には接イ°を層を設けること
が好ましい。 接着層としては試碧層のバインダーとして用いられてい
る水および被検体透過性親ｄ（性ボリマーを用いること
ができ、この場合には接着層の親水性ポリ・マーが半乾
きの状態のとき、または親水はポリマーを水または界面
活性剤を含む４（で湿潤させておいて、展開層として用
いる多孔性のシート状、フィルム状または膜状の累材を
適当な圧力をかけて接着層に接福することができる。接
狗層の厚さは０１５８ｍから／夕μｍ１好ましくはθ、
ｊμｒｎから５μｍの範囲である。 本発明の多層分析材料には前記の諸層のほかに必要に応
じて、特開昭ｊ２−３弘ざ♂、特１如昭３゛７−／７４
．！７４Ｌ、 特願＋１４ｄ！４−／ ７ｔ、２７ｊに
開示のバリヤ一層または液体既断層、特開昭ｊ／−グＯ
／り／、特開昭！１３−／３１０♂７等に開示の検出層
または媒染層、特開昭ｊ弘−２７７０θに開示のマイグ
レーション阻止層、特開昭５弘−２＆７ＦＪ（特公昭タ
フ−２ｇ２７７）、特開昭タ／−弘Ｏ／り／等に開示の
中間局、特開昭ｊ３−／３１０１９、特開昭Ｊ−７−１
１０ｔ４＃、特開昭タフ−！ｏｔｔｏ、将ｊ顧昭３７−
６／り３６等に開示の蛋白賃を通過させることができる
親水性バインダーポリマーを用いたｈ′９．特開昭夕２
−ざＪ′ゲタに開示の試桑含イｊ倣粒子分散ｊ（・１、
実開昭タフ−弘コタタ／に開４くの一定（イ旧１’ｌの
液体試料点着供給用ポーラス体（パッチ）、１゛、Ｉ卸
１１７（Ｊ ４−タ３ｔ３２に開示の酵累等の試ｕｈを
含む定面梢多孔性１冑を設けることができる。 本発明の多層分析材料はここまでの況明から明らかなと
おり、透明支持体のにに神４にペルオキシダーゼを含む
試薬層および１１υ開１４”ｉが設けられた４１゛：￥
１戊を有するが、好ましい′火す色態（！１ことして、
透明支持体の上に舶にペルオキシダーゼを含む試；ｉ；
１５層、Ｗ：、４蔽層および展開層が設けら１］、たイ
、′〆「処をイ］するもの、透明支持体の七にＩｌｌ＋
ｉ ＋ニベルプ°キシダーゼを含む試薬層、光遮１！ｌ
ｋ層、接百ハ・１およびｌｌ１ｊ開層が設（すられた４
台１戊を有するもの、 ｊｌｔｌＪＪ支刊ｆ体の１に１
唄ニヘルオキシダーゼを含む試・ζｊ５１ｐ＋１ オキ
シダーゼを含む光遮蔽層および展開層が設けられた）・
Ｘ１代を有するもの、透明支持体の１に舶にベルオキシ
ダーゼを含む試薬１曽、）シ遮繭層、オキシダーゼを含
む接着層、および展（ｊ（４層が設けられた（１″１１
戚を（１するもの、透明支持体の上に順にベルオキシダ
ーゼを含む試薬層、）を遮蔽１曽、オキシダーゼを含む
接着層、およびオキシダーゼを含む展開層が設けられた
構成を自するもの、透明支持体の北に順にペルオキシダ
ーゼを含むＩＩＪＬ 、、＋、（１層、オキシダーゼを
含む光メ１．へ穀層、メ“ギシダーセ′を含む接眉層、
およびＩＩρ開層間層けられた構成をイ］するもの、透
明支持体の１に順にペルオキシダーゼおよびオキシダー
ゼを含む試薬層、光遮蔽層、および展開層が設けられた
構成を有するもの、透明支持体の」二に順にベルオキシ
ダーゼおよびオキシダーゼを會む試薬層、オキシダーゼ
を含む光遮蔽層、接Ｔ′１１ｆ−八および展開層が設け
られた構成な冶するもの、透明支持体の」二に順にペル
オキシダーゼおよびオキシダーゼを含む試薬層、）シ遮
繭層、オキシダーゼを含む試薬層、および展開層が設（
ブられた構成をイｊするもの、さらにこれらの１曽構成
のバリエーション、などがある。 本発明の多層分析ｔＡ料は前述の特許間に１１１μＦに
開示の方法に従って製造することができ、その具体例は
巾記する実施例に１ｉｌ−細に況明されている。また本
発明の多ｉ（／ｊ分析財利は１１１Ｊ連の４″「静間（
ｉｌｌ ｊ！１に開示の操作手＋１１１（と同様にして
被４す・体１１り中のｆｌ・Ｖ検物賀を定イｆすること
かできる。木フト明の吊層分４ハｔ」料は実開昭ｊグー
／乙、２．２Ｐグ、′［□１開昭タクー／タロ０７７、
実開昭夕４− ／ １１．７．４７３≠、守：”＋ｌ！
＋！Ｌｌ昭ｊｊｔ−ｌＥ＆’／θＯに聞手のスライド（
′１シに収めて化学分オハスライドまたはｑ！Ｊ’ Ｉ
ｌｉ！ｌ’ｌ昭ｔＸ−６７タコ≠に開示の液体試料展開
浦助伺をよ・孔ｎ展開層の１−に設けたＭｌ ａの化字
分ｖ１ス″ノイドとして用いるのが製造、り側送、保・
１３′、測定１′？１作などｃ） ′ｉ； −（）ｌｆ
ｎ Ｔ 好ましい。 実施例 １ ゼラチン下１１７りが施されである厚さ７ｇｊμＩ１１
の透明ポリエチレンプレフタレート（１’ Ｅ Ｔ ）
フィルム玉に、干紀組成から成ｚＩＩｌｌＬ中グル：Ｊ
−／Ｌ／ １７ｍ １１３定晴用の試薬層を乾１□７
゛イρのＩｌｌ、’ ＩＩ、ｊがおよオ／りμｍになる
ように塗布、Ｉｌｌ躊ｒ’：ｉ； Ｌ、 ｌ、：。 ベルオキシダーゼ 、２ｒ、ｏｏｏｌＩＪ／、
７−シヒドロキシナフタレン タ ２グーア
ミノアンチピリン タ ？ゼラチン
＋２００ ９ノニオンｔ（Ｓ、２１
０（日本油脂■製活聞活住剤；ポリオキシエチレン ノニルフェニルエーテル） ２９この上に、
０．２９のノニオン１１８２１０及びグルコースオキシ
ダーゼタｏ 、ｏｏｏｌＵを含む二酸化チタン粉末１重
に部をゼラチンｌ東星部に混合分散したものより成る光
遮蔽層を乾燥膜〜がおよそ７５８ｍになるように幣布、
乾燥した。 次に、水１００ｒａｌｌ中にゼラチン≠２と酢酸ナトリ
ウムコタの割合で溶解し、さらにこれにノニオンＨＳ
２ ／ ０を０．２９加えて接石層饋イｉｉ液とした。 この液を光遮蔽層の上に乾燥膜厚が弘μ丁１〕となるよ
うに塗布、Ｉ乱燥し接看層を形成させた。次に、接Ｒ層
に３０ ？ ／ ｍ２ の割合で水を湿し水として供給
、湿潤させたのち、綿１００チのブロード（東洋紡製１
００双糸ブロード）を圧着ラミネートし、乾燥させて多
孔性展開層を設け、グルコース定量用の多１＠分析フィ
ルムを完成させた。 このフィルムな／、ｊｔ癖１ｘ／、３ｃｍの１Ｆ、方形
のチップに裁…「したのら、牛１１ｉｔＪＩＩ＋１３７
−Ａ ３４１ 、ｔλに開示のプラスチックマウント（
スライド枠）と同様のマウントに収めてグルコース定［
（１相比字分相スツイドとした。このスライドを用い０
％ Ｎ ａｌ’の干渉作用に対する緩和効果を１、・、
７１べた。〜・ξリン採血したのち遠心性り１１［によ
って調’：１：ｔ したヒト北東に異なる頃のグルコー
スをＭ６１ＪＩＩ Ｌ、 、倹肯月１検体とした。その
１０μｔを十「記の分（１１スライドのｌｒｄ開層間層
に点着し、３７°（゛で６分１１１１インクベーシヨン
したのち、！ ００ ｎ ｍのｉｉｌ、＋１定）′己で
反射ｒ１１．ｌｌ）’ｔにより発色丸字ゲ４度を測定し
た。 測定結果を第７表に示−づ−。 比申父１列 １ 酢市ナトリウムをｈｉｓ加し７（いほかＬｌ、 ’、、
ｌ、ｈｉｌ１例１と同様にしてグルコース定トｉ用化学
分析スライドを作製し、実施例１と同様の力ＹｊｌにＪ
ご）で発色九学瀞苅を測定した。測定活用を弔／表に不
一「。 本光明の多層性１ハフイルＪテ・を用いｆ−化宇分４ハ
スライドでは比蚊仲１に比べ−Ｃ屈巳１’１．’ ”ｊ
：（（、’４１．１．１の」胃入が見られる。 実施例 ２ ヒト全能をヘパリンＮ ａＪ・′抹１１旧〕３」シー心
労：’４１ｋ して血漿をｉｌ、ｊ、た。そのグルコー
ス、（イ）’ ｌ’ｔ ＋１． ／ ０１ Ｔ：９ ／
ｄｔとクルコースオキシダーゼｒ・−゛糸屯（・ｌＩ＋
７人により実ン則された。 またその一部を浴面した部分／％ｌｌ旧Ｉｌｌ ’ｓｉ
、ｃを１°、ｆた。 部分溶血血暁についてヘモグロヒン含イ４；１Ｆを測定
じたところ７３７ａ：ｕ／ ｄ ｔであ−）／、７ｏ’
ノニ／、’ｆｌｉ １ｐＨ１および比較例１と同様にし
て作詩したタル！−ス定慣用化学分析スライドを用い、
＋’＋ｉｌ記２種の皿”：＋’ｉを検体として発色紙１
疾を行７ＴＣつた。３７°Ｃで６つＹのインクベーショ
ンの後の発色）’Ｃ学（ｊ：、’、 Ｉ！！−は−・、
２表のとおりであった。 第 λ 表 血漿および部分浴皿皿漿を検体とした場合の発色）を学
＃度 本発明の多層分析フィルムを用いた化学分析スライドで
は、溶血ヘモグロビンによる干渉作用がよく緩和されて
いるとともに発色光学濃度が増大していることが確かめ
られた。 実施例 ３および４ 酢酸ナトリウムにかえてそれぞれ酢酸（実施例３）また
は酢酸アンモニウム（実施例４）１．り？を加えたほか
は実施例１と同トＬにしてグルコース分析スライドをイ
゛μ大した。ヒト′亡１１１１をヘパリンＮ ａ ｋ’
抹皿置退心分離して内だ非７６冊血東（グルコースオキ
シダー（酵素「（上極法によりそのグルコース合判量は
Ｊ ００１ｎｙ／ ｄ ｌ−と測定さハた。）を検体と
して、それぞれ１０μｌずつこれらのスライドの多孔往
展Ｈｉｉ ＩＮに点４＜Ｉしｓ ３７°（′で６分のイ
ンクベーションの後に光色）Ｙ：、’Ｉｉ’： ｌ＋、
’、ｉ Ｉ肛を反射用ＩＩ ）ＹＳにより測定した。結
果を第３とに／Ｊ＜−１−０実施例 ５ ｂ′Ｆ酸ナトリウムにかえて、１酸ナトリウム７゜０９
を加えたほかは実施例１と同１．←にしてグルコース分
析スライドを作製した。このものについて実ｔｉｉ１例
３と同様にして色テス） メ＋： ［ｉつだ。結果を第
３表に示す。 実施例 ６ 酢酸ナトリウムにかえてブｒＪピオン岐カリマクム／、
！ｔを加えたほかは実施トす１と同＋、ｋにしてグルコ
ース分析スライドを作製した。このものについて実施例
３と同様の発色テストを行った。結果を第３−１ｉに示
す。 比較例 ２〜６ 酢酸ナトリウムにかえて３，３−ジメチルゲルタ−ル ゛ナトリウム、灼酸ｌ水素λナトリウム（Ｎａｚ）ＩＰ
（Ｊ４）、燐酸λ水系／カリウム（ＫＨ２ＰＯ４）のそ
オｔぞれ／ｙ＋加えたほかは実Ｍｌｊ例１と同ｔｈにし
てグルコース分析スライドを作製し、実施例３と同様の
方７去により発色テストを行った。ほかＣ二比較例１と
同様にして作製したクルコース分析スライド（二つｌ／
）ても実施例３と同様の方法によ，り発色テストをイ丁
第 ３ 表 各柚ｒ没または１品の１メ２ ｆｌ・ 第３表から、木光四の多層分析フィルムを用いた化学分
析スライドにおいては兜色丸学が亀の増大がみられるこ
とが明らかで木，る。 実施例 ７ 酢酸ナトリウムを接お層ζー，ｊ，１加するかわりに、
展開層にあらかじめ、ｌθチ水浴液として含浸乾燥させ
たもの（酢酸ナトリウム含潰喰、２ ｆ ／ ｍ２）を
用いたほかは実施例１と同様にしてグルコース分析スラ
イドを作製した。ヘパリンＮａＦ採１ｉｔｕ’だウサギ
の新鮮全血１０μノを検体として発色光学Ｉｖ度を反射
測定したところθ、！／であった。 比較例１と同様にして作製したグルコース分析スライド
ではＯ１弘６であった。 実施例 ８ 酢酸ナトリウムを接着層中に添加するかわりに試薬１７
９中に加えた（ｒ＋１：酸ナトリウム含有ｔケλ２／ｎ
１２）ほかは実施例１と同様にしてグルコース分析スラ
イドを作製した。非溶血ヒ） ＋１１清及び部分浴脂血
７ｊＴを用いて実施例２と同様の測定を行ったところ、
溶血の影響を緩和する作用があることが確かめられた。 実施例 ９ 酢酸ナトリウムを接着層中のかわりに光連敞１冑中に姫
加したほかは実施例１と同様にしてグルコース分析スラ
イドを作製した。同時に比較例１と同様にしてａ［酸ナ
トリウムを含ま／ｒいグルコース分析材スライドを作製
した。それぞれのスライドについて、ヘパリン採血後面
ちに」・ｉ心労；’ａｔ’ ｔ、て調製した溶血のない
ウサギ血漿を用いてつわ色テストを行った。 酢酸ナトリウムを添加したスライドではう０ビー）を学
娘度が０．！；７であったのに対し酢酸ナトリウムフ１
１（添１１０のスライドではＯ１夕弘であった。 実施例 ｌＯ グルコースオキシターゼにかえて、コレステロールオキ
シダーゼタθ、θｏ ｏ Ｊ ｊｌを毘ｓ！ｊＳ 繭層
用組成に加え、さらにコレステロールエステラーゼ２夕
、ｏｏｏｌＵを接青１１Ｍ用ポ１１成に加えたほかは実
施例１と同様にしてコレステロール分４１［スライドを
作製した。 このスライドについて、Ｊｂγｉ＋；Ｉｌコレステロー
ルおヨヒエステル型コレステロール乞所：’！Ｉｔコレ
ステロール換算３７タｙｔ） ／ ｄ ｌ含有する非（
？ζ［１１【ヒト１１ル清および部分溶匣ヒト皿清を用
いて実施例２と同様にして発色テストを行った。３７°
（’４分のインクベーション後の波長り００口ｍでの反
射１Ｉｌ１１毘による発色丸字濃１ｆはそれぞれＯ１≠
７及びＯ，グ！であった。 比較例 ７ 酢酸ナトリウムを含まｔ【い他は実施例１０と同様にし
てコレステロール分ｌｉ用スライドを作・公した。この
スライドについて、実施例１０と同じ試料を用いて実施
例１０と同様にして発色テストヲｆ丁なった。３７°０
６分のインクベーゾヨンイｆ’（の波長！００ｎ口１で
の反射１ｌｉｌ ）Ｙ：、による発色光学濃ＩＪｔは非
溶＋＋＋＞血清で０．１１１７、ｑ皿血清で０．ψ／で
あった。 実施例 １１ 実施例】及び比較例１と同様にしてＩｌ−Ｌ４したグル
コース分析月１スライドについて、以下の実１５Ａ ’
Ｘ行い反応中のｐ Ｈを測定した。ｐＨ測定には東亜？
ｋＬ波社Ｈｐ ｔ］メーターＨＭ／ｌ＋二、表面ｐｈｉ
則定用屯極電極Ｓ −／ ４ ｔ ＩＩ’を接続した測
定器を用いた。 グルコース分析ス・ノイドの多孔性展開層にイオン反快
して脱イオンした蒸溜水（ｐＨ７，）、哲理血清（ｐｌ
ｌｇ、４Ｌ）、新鮮ヒト血漿（ｐＨ７゜４ｔ）の３棟の
検液をそれぞれｉｏμ１点看し点播液が展開さ、ｌした
後に多層分析材料の多孔性展開層を朶ｊｌｉ４１１除去
し、接着１所側からｐｔｔ’磁極を表向にあてて展開量
除去後を公債にｐＨを測定した。また、このＪ４１Ｌの
検液３棟をＰＥ″１゛フィルムの表面に藺下し、゛電極
をＰＥＴフィルムの検液に、密着させて七のＩ） Ｈ値
を測定した。なお、？４ｉＬ４ｄＩ！の校正には、ｐ
１４グ、０／及び７．ｒ４の矯酸標準液（２夕℃）を、
ＰＥ’ｌ’フィルム上に１０ｐｌを採取し、゛電極を直
接フィルムに密着させる方法に、１−り測定した。 反応中のｐＨ値測定結果を第を表に示す。 いずれのり！１合もｐ Ｈは、２〜３分で平衡値に到達
することが明らかである。 なお、始めから展開層を除去し、かつ支持体から塗布Ｉ
Ｐ＋のみを剥離した試料について」二記と同じ検波を接
着層に点播し、接着層側からおよび試薬層側からそれぞ
れ′４．極（ｏｓ−ｉｔｚｈ’＞を接触させてｐＨを測
定したところ、平衡値は±ｏ、ｉ！以内の積置で上記の
測足僅に一致していた。 冥施例 １２ 実施例１と同様にして作製したグルコース分析スライド
について、ｐＨ指示楽を用いる方法により使用条件下で
反応が進行中の層のｐ ｌ−Ｊ値を測定した。指示薬と
してはプロ七チモールブルー（Ｂ’ｌ’Ｈ）およびプロ
モチ七−ルパープル（Ｂ ’ｉ’ Ｐ ）を混合したマ
スキング指示薬ヲ用いた。この指示薬の呈色とｐＨ値の
関係についてはあらかじめ、燐酸緩衝液をｐ Ｈメータ
ーで軟土したｐ ）ｊ １１ｊｉ°既知の緩衝液を用い
て較正し、かつ日立３’ＩＯ分丸）しｅ計を用いて吸収
スペクトルを測定しキャリブレーションカーブを求めて
おいた。 次に、イオン交換して脱イオンしたｍ ％ｌ ７Ｊ（（
ｐｉ→７．０）、営理血清（ｐＨ♂、≠）％新鮮ヒ）
１ｍ漿（ｐｌ−１７，弘）を検液とし、これにそれぞれ
上記マスキング指示薬を少ドを７４≧加した液を調製し
て、前記グルコーススライドの多孔性展開肋に点播しｊ
分後のマスキング指示薬の呈色をＰＥＴフィルム（支持
体）側から測定した。當理皿ｒｅ＜ 、血漿では含有さ
れるグルコースによるう６色と徂なるので一波長法によ
る反射スにクトル（日立３１１０分毘光岐計を用いた。 ）の測定を行い、グルコースに７，４づく呈色を消去し
た。結果を第Ｖ表に示す。 弔弘表のｐＨ測定値と実施例１ないし９、および比軟（
＞ｉｌ ｉないし６の結果を比較すると、本発明の水浴
性モノカルボン酸またはその塩′Ｊａ：含イイする多層
分Ｕ「フィルムは使用条件上−において反兄・中のｐ＃
１値にかかわらず、発色）を学濃紘の狛犬がみられ、カ
タラーゼ活性阻害効果が自効に作用していることがわか
る。
学的処理（例、酸処理、アルカリ処理）または物理化学
的処理（例、コロナ枚重処理、グロー放電処理、紫外線
照射処理、大焔処理）を施すことができる。 本発明の多層分析材料に…いらＡＬろ少なくともペルオ
キシダーゼを含む試Ａ：１に層とけ少／〔くともペルオ
キシダーゼを含む過酸化水素ｊ、’ｐ出用！−色Ａ：１
小薬糾成物（以下 １．１２０２１−色試虐という。）
を含む試薬刊我物が）、−１水件バインダーポリマーの
マトリクスの中に分散またはｒ？Ｇ ｌ’ｌイさね、て
Ｉ、［る試ｒつ４層である。 ）１２ （Ｊ ２呈色試薬はベルオギンダーービ、およ
びペルオキシダーゼと過酸化水素のイ′ｒ−在トで検出
口ｊ能ｉｃ変化（一般に色ｇＪ ＩＬｊ：のイタ化 ）
７層色または色相の変化）を起すλ桃奥七の化合物の組
合せからなるインジケータとからなる。インジケータと
して（１） ［Ａｎｎ、Ｃ１１ｎ、 Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ、Ｊ、乙、コグ−２７（／りｔり）、米国特許３．タ
タλ。 ｉｒｇ、特公昭ｊ乙−グ、１１タタ、特開昭ｊｊ−／ｌ
≠３ｊ６、特開昭ｆ／；−／２！３７３、特１顧昭！７
−６１．ｆ）を等に開示の、色原体としてグーアミノア
ンチピリンまたはその誘４体とカプラーとしてフェノー
ル、ナフトール、またはそれらの誘導体の４１１１合せ
。 グーアミノアンチピリン（＋−アミノ−，２，３−ジメ
チル−／−フェニル−３−ピラゾリン−！−オン）の諾
り側体の例として、≠−アミノーλ。 ３−ジメチル−／−（３−グロロフェニル）−３−ｅ−
ｙゾ’）ンーｊ−オン；グーアミノ−λ、３−９／チル
−／−（，２，４’、＆−）！１クロロフェニル）−３
−ピラゾリン−！−オン：≠−アミノーコーメチル−３
−フェニル−／−（，２，≠−、＋−トリクロロフェニ
ル）−３−ピラゾリン−，１−オン、≠−アミノー／−
（≠−アミノフェニル）−λ、３−ジメチルー３−ピラ
ゾリン−ｊ−オン、弘−アミノ−／−〔弘−（ジエチル
゛１′ミノ）フェニル〕−−、３−ジメチル−３−ヒラ
ゾリン−ｊ−オン、弘−アミノ−／７ （１７−アセト
１′ミドフェニル）−Ｘ、３−ジノプール−３−ピラゾ
リン−よ一オン、グーアミノ−１−（アミノ−λ−エチ
ルフェニル）−２，３−ジメチル−３−ピラゾリン−ｊ
−オン、グーアミノ−／−（アミノ−ｑ−メチルフェニ
ル）−，２，３−ジメチル−３−ピラゾリン−よ−オン
をあげることができる。グーアミノアンチピリン、Ｉ工
・よＯ・その栖づ、（休ｌ：１いずれもその酸付加塩（
４４＋１、塩化水素ｒＩｉ１．．．ｔ ）どし′〔も用
いることができる。 ナフトールとして、／−ナフトール、！−士ラフトール
あげることができる。 フェノール１匈棉１木とし−ＣＣカブフールレゾルシン
、ヒロガロール、フロログルシン％’ｌ 川−１または
ｐ−クレゾール、０−１ｒ■］−１またはｐ−メトキシ
フェノール、ｏ−、ｍ−、またはｐ−スルホフェノール
、０−またはｐ−クロロフェノールをあげることができ
る。 ナフトール誘導体として、ｌ、７−シヒドロキシナフタ
レン、グーメトキシ−／−ナフトールをあげることがで
きる。 フェノール誘導体およびナフトール誘導体としてこれら
の他１：Ｃ，Ｈ０［（、Ｍｅｅ’ｓ、’Ｉ’、Ｈ，Ｊａ
ｔｎｅｓｚ ＪＴｌ＋ｅ ’ｌ’ｂｅｏｒｙ ｏｆ
ｔｈｅ ＰｈｏｔｏｇｒａｐｈｉｃＰｒｏｃｅｓ
ｓＪ ｉ’ｂｉｒｄ Ｅｄｔｔｉｏｎ（へＩａｃｍｉ
ｌ ｆａｎＣｏ、、 Ｎｅｗ Ｍｏｒｋ、 ／り６
ｚ年発行） ｍ ３１７−３９ｔページに記載の化合物
も用いることができる。 これらの組合せのうちで好ましい組合せは弘−アミノア
ンチピリンと／、７−シヒドロキシカフタレ、ンの組合
せ、グーアミノーコ、３−ジメチル−／−（，２，弘、
６〜トリクロロフエニル）−３−ピラゾリン−！−オン
と７，７−シヒドロキンナフタレンの組合せである。 （２）特公昭ｊ！−，２ｔ♂グθに開示の色原体として
よ一ピラゾロン誘導体またはグーオキサシロン誘導体と
、カプラーとしてフェノール類、ナフトール類またはそ
の誘４゛ト体とのＡ；１１合せ。 （３）特開昭弘２−／／弘りざ７に開示リ色片体として
の≠−アミノピラゾロン１肉・ζ、ｊ、１本（（ｙｌ八
／−（≠−スルホフェニル）−Ｊ−メ；１−ルー３−
フェニルーグーアミノ−３−ヒラゾリン−ｊ−メン）と
カプラーとしてのフェノール、フェノール誘導体、また
は多価フェノール（（＞１．１、カテコール、レゾルシ
ン、ヒドロキノン、クレゾール、クアヤコール、ピロガ
ロール、オルシノール、ｉ’７ Ｊ’ｙ−ｆ−酸ンとの
組合せ。 （４）持分Ｈ（（ｊ ７− Ｊ−，５′／りに開示のｑ
づ・［形成物質として＋３−）ルエンスルボニルヒドラ
ジノーペンゾチアゾリウム、キノリニウム、またトラピ
リジニウム誘導体と、カプラーとし゛Ｃフェノール）、
〔１、ナフトール類、それらの誘・！゛１体、へ音１ｉ
５ｊアミン川または反応はメｔレン化合物との［ｌｊｌ
イ、ゝせ、Ｊ、たは染料前駆体としてトリアリールイミ
ダゾールｗＩｆ体（単独で用いられる几 ＋５１ 特１ｂｖｌ ｔｉｉ：Ｉタロ Ｊ Ｊ’
／ −ｔ Ｊ’ １ｍ 曲；ｌｕ／ｊ 水素ＩＪ’ｉ
与体（色原体）として弘−アミノアンチピリン類、４’
ｇ’ｆｐＨ−７’ ンｑ−ビリ’ｆＭｓ Ｎ＋ Ｎ
ｉｙ置装吻−ｏ−またはｐ−フェニレンジ゛アミン類、
２−ヒドラジノヘンジブ−アゾリン類またはｐ−ハロゲ
ノフェノールと、カプラーとしてＮ、Ｎ−ジ置換アニリ
ン類との組合せ。 （６）特開昭！７−タ≠ｔｊ３、特開昭夕７−タ１、ｔ
ｔｊｌｌ、、特開昭！７−タ≠ｌｊ！、！侍開昭５７−
１４７＆タ乙に開示の０−またはｐ−アミノフェノール
化合物または０−またはｐ−フェニレンジアミン化合物
と耐振散１住フェノール化合物、耐振ｆＬｋ作ナフトー
ル化合物、耐振敵性アシルアセトアミド化合物または耐
振１１（１牛ピラゾロン化合刊との組合せ。 などがあげられる。これらのインジケータのうちでは、
弘−アミノアンチピリンまたはその誘導体とナフトール
またはその誘導体の組合せが好」、しく、七のうちで≠
−アミノアンチピリンと／、７−シヒドロキシナフタレ
ンのＩＩｉ合せ、ｌ−アミノーコ、３−ジメチル−／−
（コ、≠、６−ドリクロロフエニル）−３−ピラゾリン
−！−オンと／ 、７−、／ヒドロ（ゾナフタレンの組
合せが最も好ましい。 ペルオキシダーゼとして１ｈ公１１ｉｊ ３ ｔ−グタ
タタタ、特公昭ｊ７−タｊ２０侍に１剤ボの１１１１山
起訴および動物起源のベルオキンダーーレ（ＥＣ／、／
／。 ／、７）、および特開昭ｊ７−タタ／り、２首に開示の
微生物起源のペルオキシター−１／（Ｅ（’／。 ／／、／、７）のうちからノ１≧菱了１１（二／ ４１
１圭たシは、！ ｌｌ７以上を組合せて用いることがで
きる。。 植物起源のペルオキシダーゼの例として、西洋わさび、
じゃがいも、いらじく（つ４液、かふ、だいこんから抽
出されたペルオキシダーゼを、 ｌ＋Ｊ物よじ源のペル
オキシダーゼのイシ１］として、牛！７１．から抽出さ
れたラクトペルオキシダーゼ、臼血味から抽出されたベ
ルドベルオキシダーゼを、伯生物起小ｎのペルオキシダ
ーゼとしてＡ ｌ ｔ ｅ ｒ ｎ ａ ｒ ｉ ａ
ｉ＝、Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ属、ｅｕｒｖｕｌａｒ
ｉａ属、Ｐｅ１ｌｉｃｕｌａｒｉａ属に屈し非特異的ベ
ルオキンダーゼ生組能を有する微生物起源のペルオキシ
ダーゼを、それぞれあげることができる。 その他に特公昭！ｔ−≠タタタタ、特公昭タフ−Ｊ！λ
Ｑ等に開不のチオジｒン酸鉄、タンニンｖ４ｉ鉄、フェ
ロシアン化鉄（いずれも飲（＋コ）化合物）、クロム硫
酸カリウム、沃化ナトリウム、沃化カリウム、モリブデ
ン酸アンモニウム、モリブデン酸カリウム等のベルオギ
シダーーｅ７古性を有する無機化合物を用いることもで
きる。 これらのうちで植物起源または微生物起Ｉｌ＋ｉｉの非
特異的ペルオキシダーゼが好ましい。 本発明の多層分析ｔＡ料においては、少なくともペルオ
キシダーゼを含む試薬層はペルオキシダーゼおよびイン
ジケータが親水性ポリマーバインダーの中に溶解または
分散されてなるものである。 バインダーとして用いることができる親水性ポリマーは
ペルオキシダーゼおよびインジケータと実質的に（０互
作用を生ずることがなく、被膜形成能を有するものであ
れば何でもよい。親水性ポリマーの例としてゼラチン、
酸処理ゼラチン、脱イオン化ゼラブーン、ゼラチン誘導
体（例、アシル化ゼラチン）、ポリビニルアルコール、
ポリビニルピロリドン、ポリビニルベンゼンスルホンＩ
’ｌ’２ナトリウム、カルボキシメチル−１ζルロース
、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシ
エチルセルロース、メチルセルロース、プルラン、プル
ラン誘導体、ポリアクリルアミド、アクリルアミドコポ
リマー（例、アクリルアミド−Ｎ−ビニルピロリドンコ
ポリマー、アクリルアミド−λ−ヒドロキシエチルアク
リルアミドコポリマー）、をあげることができる。試、
１１２層の厚さく ＜／Ｉ 燥１’７さ）は約５μｍか
ら約ｉｏｏμ口１、好τＥ Ｌ、、 ＜は約１０μｍか
ら約５ＯμＩＩ＋の範囲である。 試薬層におけるベルオキシダー・ビの含＝自：１１は〆
・、１夕千ＩＪ ／ ｍ２ｙハら約／θツノ（）／１１
＋２、好ましくけ約／万Ｕ／ｍ２から約６カＬＪ ／
ｍ ２のパ１３四である。 インジケータの含有…は液体砥料に含イｊされると予想
される被検成分の最大食合（・１に対し１・２、する化
学頃論によるＵｎまたはそれより多い【１Ｆが必すュ゛
で３）番）、この量は当業者が実験により決めろことが
できろ。 ペルオキシダーゼを含むＨ２Ｃ） ２ ’ｒ−色試）：
弓とともに用いられる１、２ｊ ０Ｃにおけろ水１００
１？に対する俗解度が７２以上の水ｔｇ性モノカルボン
酸またシまぞの塩（以下、水溶性モノカルボン酸または
その瑞、または単にモノカルボン酸等という。）につい
て説明する。 水溶性モノカルボン酸またはその塩は本開明は多層分析
飼料の支持体以外の少なくとも一つの層に合判されてい
れはよく、親水性バインダーポリマーを含む層の中に含
有されていて場合には親水性バインダーに溶解または分
散して含まれていることが好ましい。 水溶性モノカルボン酸またはその塩としては脂肪族モノ
カルボン酸およびその塩、芳香族モノカルボン酸および
その塩、芳香族置換脂肪族モノカルボン酸およびその塩
のいずれか１種または２棟以上を組合せて用いることが
できる。脂肪族モノカルボン酸としては炭素原チ数／乃
至ｊの直鎖または分岐状の飽和ｔ］ｈ肋族土族モノカル
ボンげられ、その具体例として、蟻酸、酢酸、プロピオ
ン酸、酪酸、吉草酸、イソ吉草酸があげられる。 脂肪族モノカルボン酸の塩としては炭素原子数／乃至ｊ
の直鎖または分岐状の飽和脂肪族モノカルボン酸のアル
カリ金属塩（例、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム
塩）およびアンモニウム’ ＪＬｊ カあケラれ、その
具体例として、蟻酸、ｕｒｒＬ プロピオン酸、酪酸、
吉草酸、イソ１１６酸、イソ１覧１°ｉ″（酸のそれぞ
れリチウム塩、ナトリウムＪ’ｉｎＹ％ カリウムＩ′
！ｉｉおよびアンモニウム塩があげられる。 芳香族モノカルボン酸塩の（：１１体例として安息青酸
リチウム、安５は青酸ナトリウム、 女、）、！、占酸
ノＪリウム、安、（支）、査酸アンモニウム、ｏ−トル
イル酸ナトリウム、０−トルイル酸カリウム、ｍ−）／
Ｉ／イル酸ナトリウム、ｐ−トルイル１ζノｒナトリウ
ム、ｐ−トルイル酸カリウム、ｐ−トルイル酸アンモニ
ウムがあげられる。 芳香族置換脂肪族モノカルボン自＝およびその嗜１の具
体例としてフェニル酢酸、フェニル酢酸ナトリウム、フ
ェニル酢酸カリウム、フェニルｆｎ酸１ンモニウムがあ
げられる。 これらの水ｍｔｌモノカルボンｌ’ｌ’５またはその塩
で好ましい化合物は酢酸、プロピオンｒ１ν、蟻酸ナト
リウム、蟻酸カリウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム
、酢酸アンモニウム、プロピオン酸ナトリラム、プロピ
オン酸カリウム、プロピオン＊＝アンモニウムである。 水１８０モノカルボ゛ン醒またはその塩は通常は１種類
を多１１９分析材料の少ｆ、ｃくとも一つの層に合判さ
せればよいが、必要に応じてλ種類以上を少なくとも一
つのｌ（４に混合して含有させるか、またはイｉ！数の
層に７種類すつ別個に含有させることができる。水ｒδ
性モノカルボン酸またはその塩は液状の化合物でも固体
状の化合物でもいずれでも用いることができ、固体状の
化合物の場合結晶水含有物や結晶アルコール含有物であ
ってもさしつかえなく用いることができる。 水溶性モノカルボン酸またはその塩は使用条件下におい
て液体試料に含まれる被検成分であるＨ’２ｕ２、また
は後述するように、オキシダーゼの触媒作用により液体
試料に含まれる被検成分が酸素により酸化されて生成し
たＨ２（Ｊ２が生体起源の液体試料に含まれるカタラー
ゼにより分解されるのを防ぐ作用を有するものと推定さ
れる。その結果、多層分析材料の中に導入されたＨ２（
Ｊ２はベルメキシダーゼの存在トにインジケータの検出
ｂ」能な変化（一般に色濃を川のシ薯に、発色、才たは
色相の縫化ンを起す反応にその実′ｃｃ ｒｒｖに全１
１１が組込まれると１１１一定され、活眼としで検出１
１］能な欧化の量が増大し１．ことに色濃曲の変化、発
色、色相の変化において生じた色のゲ０字１・：ｙ’
１１３’が増大−４’ル。 この他に水溶性モノカルボン酸また１・Ｊその塩の存在
によりメキシダーゼの四ｑする反応およびペルオキシダ
ーゼが関与する検出Ｖｊ能な変化を生する反応の全行程
またはそのいずれかの行程の反応速度が早まる作用をも
有すると推定さＡ（１、結束として液体試料の多ハ９分
析［１料への点着から検出可能な変化の検出・測定に要
する１２１間がｎ）縮される効果が達せられる。 水溶性モノカルボン酸またはその塙は少なくともペルオ
キシダーゼを含む試薬層、に含有されてもよく、あるい
は少なくともベルオギシダーぜを合む試薬層よりも上側
の（ずｔ（わち、少／［くともペルオキシダーゼを含む
試・省層に関し、てり特休とｊ更の側の）いずれかの層
または多孔ｆ／ｌ’ Ｉ＋、＋間層のいずれかに含有さ
れてもよく、あるいはさらに少なくともペルオキシダー
ゼを含む試薬層とそれより上側σ刀１→または展開層と
に含有されてもよい。水浴性モノカルボン酸またはその
塩がペルオキシダーゼまたシｊオキシダーゼの活性を阻
害する場合には、水浴性モノカルボン酸またはその塩を
ペルオキシダーゼまたはオキシダーゼを含む層と別のＩ
＋＊に含イ１させ、間に中間層を介在させて用いること
がでさる場合がある。被検成分またはそのオキシダーゼ
による酸化生成物が水溶性モノカルボン酸またはその塩
と同じ化合物（またはイメン）であったり、水／８件モ
ノカルボン酸またはその塩が被検成分の多層分析材料の
中におい−〔うけ全一連の反応に特異的に干渉したり一
連の反応を特異的に１ｉｆｔ害する場合には胸亘に他の
水溶性モノカルボン酸またはその塩を選択して用いなけ
ればならないことはいうまでもない。 水溶性モノカルボン酸またはその塩の多層分析材料中に
おける含有怜は液体試量中に含有されるカタラーゼ活性
を有する物質の量またはカタラーゼ活性値、および定に
分析操作の１カニに層分析材料の展開層に点イ１される
Ｂｉｔ休試体１の；Ｌ；に依存し、多層分析材料に点着
される液体試料中に含イＪさ）すると予想されるカタラ
ーセｌ占１牛をイＪする物質の総はまたをｊカタラーゼ
活１’！’ （ｌｆ７の総１１（の−：ン大イ＋ｆｌに
対応する化学１論によるＮまたはそれより多いｋが、液
体試料がＩＮ開されｒ虻透する１ｉＬ１．１桟に存在す
る必要があ１ハさらに削述の反応；ｌ！ｊ；厩をＩＪ１
．める′：＜す県な発現させるには場合によってはさら
に多くの１４が必要であるかもしれ／Ｃいことは容易に
理ｔＩ＋’＋’されよう。 本発明にｉｏいて水ｍｔ′−１−モノカルホン１弯また
はその塩の多層分析材料中における曹有ｉ１ｉは多層“
り分析飼料／ｍ にっき０ 、／ｍｅｑか２／ｅｑ、
（ＩＪましくは０ 、２ ＋ｎｅｑから０．ｊｅｔｌの
相聞Ｃある。 被検物質が過酸化水素（゛なく、化学反応により過酸化
水素を生成する反応糸に糾みこむことができる場合には
、被検物質が酸素と相１．ｌ、作用して過酸化水素を生
成するための触媒としてオキシダーゼを試襲層または他
の１曽に含ｆ１さ一４ｊ′でおくことができる。オキシ
ダーゼは被検物質に応じて１・り択される必要がある。 オキシダーゼとしては７種のメキシダーゼを用いられる
ことはもちろん、一連の連続反応を進行させる複数棟の
酵素の組会せ（その中の／ ４Ｊｌ＋はオキシダーゼで
ある。）を用いることもできる。さらに必要な局舎には
オキシダーゼとともにそのオキシダーゼの補因子および
／または他酵素を組合せて用いることはいうまでもない
。 オキミノダーゼ（必要な場合には捕酵素もともに）はペ
ルオキシダーゼおよびインジケータを含む試・部層に含
有させるか、あるいは１′、Ａ薬１１゛ｑよりも上側の
層に含有させるか、さらにはペルオキシダーゼおよびイ
ンジケータを含む試薬とそれよりも上側の層（７層また
は複数のハ★）の両方（または合ｈ１３層以上）に含有
させることができる。ここで試望層より上側の層という
表現には多孔＋３１”展開層をも含めることができる。 オキシダーゼが触媒獲るＡ５ｆｉの反応には酸素の４ｊ
在が必須であり、多層分析←ｊ料においては酸素は′！
３Ｙ気中から展開層を経て他の層内へ拡散するので、オ
キシダーゼが触媒−９゛る酸化反応の効率的な進行にと
っては酸素の層中への拡散σノ効率的な速成を目的とし
た特廟昭夕ｔ−９３ｔ３／に開示した、オキシダーゼを
ペルオキシダーゼおよびインジウ゛−タ手′島む試ｎ／
Ｅ ／ｌ”ｉより」二側の層、ことに多孔１１１：展開
１曽４゛たは多孔Ｖ目ノ１３曲層に１両接する１０″１
に含有さ−１−た４＋′）ｂψ、の多層１分わ目旧、゛
［どすることが好ましい。才だ二Ｉレスチロールエステ
ルのように親油ｔ！Ｊ：物Ｉｆｆ］が破検′向′１′Ｊ
であるＬＩ、ｊ合には、親水ｔ’ｔ’バインダーポリマ
ーをＴ’＋する層へは被検物Ｖｔが浸透しにくいので、
ことに＜−（Ｌｌ’目１．す１１）１層の内部にオキシ
ダーゼを含有さ一１゛ることが好守しい。 本発明の多層分析［」料に含イ゛１させることがでへる
オキシダーゼとしてｒｌり素（０２）をアクセプタとす
るオキシダーゼがあげられ、その例として次の酵素をあ
げることができる。（）内はＥＣＮｕｒｎｂｅｒ を表
わ−Ｃ０ グリコレートオキシダーゼ（／、／、３．７）。 マレートオキシダーゼ（ｉ、／、、ｙ、３）。 グルコースオキシダーゼ（／、／、、３．４’）。 ヘギソースオキシダーイ（／、／、３．に）。 コレステロールオキシダーセ（／、／、３．６）。 アリールアルコールオキシダーゼ（／、／、３．７）。 ］、−グルコノラクトンオギシダ〜ゼ（／、／、３．ｔ
ｒ）。 ガラクトースオキシダーゼ（／、／、３．り）。 アルコールオキシダーゼ（／、／、３．／３）。 ■ノーコーヒドロキシ酸オキシダーゼ（ｉ、／、３．／
夕）。 アルデヒドオキシダーゼ（／、２．３．／）。 キサンチンオキシダーゼ（／、、２＃、２）。 ビルベートオキシダーゼ（／、、２．Ｊ、Ｊ）。 ビルベートオキシダーゼ（Ｃ（ＪＡ−アセチル化）（／
、２．３．６）。 ラドステロールオキシダーゼ（／、３，３０．２）、。 １ノーアス／ぐルテートオキシダーゼ（／９弘、３゜７
）。 ］、−アミノ酸オキシダーゼ（／、４ｔ、３．２）。 Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ（１，ｌＡ、３．３）。 アミンオキシダーゼ（フラビン含有）（／、＋。 ３、弘）。 ビリドキ廿ミンホスフェートオキシダーゼ（／。 ４．３．３；） 。 アミンオキシダーゼ（碕１含自）（／、１１．３．６）
。 Ｄ−グリコレートオキシダーゼ（／、４ｔ、ｊ、７）。 サルコシンオキシダーゼ（／、！、３．／）。 Ｎ−メチルアミノ醇オキシダーセ（／、３．３．．２）
。 Ｎ −メチル−Ｌ−リンンオギシダ−（イ（／、夕。 ３．４ｔ）。 ウリカーゼ（ウレートオキシクーセ）（／、７゜３．３
）。 スルフイトオキシダーセ（／ 、ｇ、３．／）。 アスコルベートオキンダーセ′（仁１０．３．３）。 ３−ヒドロキシアントラニレートオ〜ノダーゼ（／、１
０．３．！；）。 アルギニン 、２−４−ノオギシゲーｊ゛−ゼ（／、／
３゜ｉｘ、ｉ）。 リシン ２−モノオキシゲナーゼ（／、１３゜／、２．
２）。 トリプトファン −一モノオキヅゲナーゼ（／。 ／３．／、２．３）。 ラクテートオギシタ゛−ゼ（ラクヅーートコーモノオキ
シゲナーゼ）（／、／３．／、２．グ）。 ジメチルアニリンモノオキシゲナーゼ（／、／ＩＩ。 ／３＃）。 コレステロール７α−七ノオキシゲナーセ（／。 ／ｕ、／３．／７）。 Ｆｌ ａｖｏｐｒｏ １ ｅ ｊ ｎ −Ｉ ｉ ｎｋ
ｅｄ ｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ（１，／≠、／グ、
／）。 フェニルアラニンモノオキシゲナーゼ（／、／≠。 ／１．／）。 グリセロールオキシダーゼ（東洋醸造から販売）。 グリシンオキシダーゼ（化学大辞典第３巻（／り６０年
２月発行）に記載） オキシダーゼ！含む複数種の酵素の組合せの例として以
下のものがある。 グリセロールキナーゼ（，２，７，／、３０）および１
ノーα−グリセロ畑酸オキシダーゼ（／、／。 タタ、ｊ；または特開昭タＪ−７２１タコ、特開昭６３
−ｊ４ｔざＰ３に開示ンの組合せ（特開昭５３−２≠ｇ
り３に開示） トリグリセリド加水分解活性をもつり、ｅ−ゼ、グリセ
ロールキナーゼ（２，７，／、３０）およびＬ−α−グ
リセロ燐酸オギシターセ（／、／、タタ、ｊ；または特
開昭！１３−７．２ざりλ、特開昭１３−．２１ＡＩＹ
３に開示）ノ、（ｌｌｉＹせ（Ｑ’！ｊ開昭夕３−．２
≠ｇ！Ｐ３に開示） エステラーゼ作用をもつり・ｇ−ゼ、プロテアーゼおよ
びコレステロールオキシダー−１２（／ 、 ／ 、３
。 ６）の組合せ（特開昭タ０−／３７／タコに開フト）グ
ルタミルビルベートトランヌアミナーゼ（アラニンアミ
ノトランスフェラーゼと同じ。Ｊ、、４゜／、、２）お
よびピルベートオキシダー（イ（／、、２゜３．３）の
組合せ（特願昭、５′乙−タ３ｔ３２に１１１１示） グルタミルオキぜロアセテートトランヌアミナーセ（グ
ルタミン−オキソ酸アミノトランスフェラーゼと同じ。 コ、乙、／、／夕）、オギサロアレテートデ力ルポキシ
ラーゼ（ゲ、／、／、３）およびピルベートオキシで一
ゼ（／、２，３．３）の組合せ（特願Ｈ６タ６−７３ｔ
３．２に開示）これらのオキシダーゼのうちで、本発明
の多１１・１分析材料において好ましいものはグリセロ
ールオキシダーゼ、マレートオキシダーゼ、グリコース
オキシダーゼ、ヘキソースオキシダーゼ、コレステロー
ルオキシダーセＩ ｓ ＩＪ−グルコノラタトンオキシ
ダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、キサンチンオキシ
ダーゼ、ピルベートオキシダーゼ、ウリカーゼ、アスコ
ルベートオキシダーゼ、ラクテートオキシダーゼ、グリ
シンオキシダーゼ、グリセロールオキシダーゼなど、お
よびオキシダーゼを含む複数種の酵素の組合せとして例
示した組合せがあげられる。 オキシダーゼの多層分析月料中における含有−は、主と
して液体試料に含有される過陸化水黍欠生成する被検物
質の予想される最大ｌとオキシダーゼおよびペルオキシ
ダーゼの活性値の比により決めることができ、これは当
業者が実験により決めることができるが、おおよその含
有量として約／千Ｕ／ｍ２から約１０万Ｕ ／ ｍ ２
、好ましくは約３千Ｕ／ｍ２から約夕万Ｕ／ｍ２の範囲
である。 オキシダーゼがグルコースオキシダーゼの場合には、そ
の含有量は約λ千Ｕ ／ ｍ ２から約≠万Ｕ／ｍ２、
好ましくは約グ干Ｃ１／ ｍ ” ７Ｐ ｈ約コカＵ／
Ｉｎ２の範囲である。 ペルオキシダーゼ、およびオキシダーゼはそれぞれのｌ
古恍がｊ７／人になる）゛１２ノＩ・’Ｉ Ｉ’ Ｈ（
ｐ’ｔが、））１ハさらにはそれぞれの活呼はイオン、
ｊ！、鵬や：２ｆ ｌメ） （二共在する陽イオンや陰
イオンの神用に上べ）・；顎響をもうける。従って多ノ
曽分析Ｆ、Ｉ料においてを、【、弔−にペルオキシダー
ゼを含む試悲ハ９、オキシダーゼを含む１曽、またはペ
ルオキシダーゼとオキシダーゼをともに含む試ＩＭそれ
ぞれのｐ ｔｌ値を、−）いて必要に応じてイオン強夷
−や共存するイメン伸ｔ［どのｌｌｄ Ｆ−をＡ”＜
ｙｈに設定−４−ることか、よいう丁４ｊｉ結果（定１
ｒ；鞘度、くりかえし再環ゼＶなどについて）をＢ＜ろ
ためにはきわめて重要である。かかる目的のｌ−６に多
孔住展曲層、試薬層、）シフ顎Ｐ（ｋ層その他の機能胎
生に酸、アルカリ、塩、級１！ｌｆ口１１、ハト白ｌ１
１ｋ ？＋’ｌ、界面ｌ古件りりなどを含有させておく
ことは本発明の′）５が１１に当って特に重要なことで
ある。これら反応条件設定の為の試薬類の神１．４１
％ 、Ｆｊｔ ｔｃど）′；Ｊ１分１ノ「の目的その他
によって大きく変化−「るので、目的に従って；＋＞：
ｉ ’Ｆ＋’、選択する必要がある。 ペルオキシダーゼおよびインジケーターを含む試薬層に
酸、アルカリまたは緩衝剤を含有さすて過ｉ（化水素の
存在下で検出ｉｊ能な変化を起させるには、ペルオキシ
ダーゼの最ｓｍ ｐＨ値であるｐ ｋ−１７，０を中心
１＝シてｐＨ約ｒ、ｏから約り、０１好ましくは約１．
０から♂、Ｏの軸回のｐＨ値範囲の下で変化を生じさせ
ることが好ましい。 オキシダーゼはその最適ｐ Ｈ値は酵素の種類により異
なるが、例示すれば、グルコースオキシダーゼ： ｐ［
ＪｖＪｔ 、 Ａ ；ヘキソースオキシダーゼ：ｐＨ約
４ 、３ ：コレステロールオキシダーゼ：ｐｌＪ約夕
、ざ；ガラクトースオキシダーゼ：ｐＨ約７．θ；アル
コールオキシダーゼ：ｐＨ約７゜ｊ；ウリカーゼ：ｐＨ
７，３へど、タ；アスコルベートオキシダーゼーｐト（
約５．４ ； ］、−］α−グリセロ燐、酸オキシダー
ゼ ｐＨ７、夕〜７．７である。 オキシダーゼを含む層はオキシダーゼの種類によりそれ
ぞれの最適ｐＨ値またはその近傍のｐ）Ｊ値範囲にｆｉ
１Ｍ整することが好ましい。ペルオキシダーゼの最、＋
Ｍｐ”（直と異ｔ【る１１２」１・４１目１１直をもつ
オキシダーゼはそれ故に別々の１１１に３自させること
が好ましい。例えはグルコースオキシダーゼを多孔往展
開層または後述する接イ゛−ＩＩ１９に含有さ升るυ）
）合には、多孔Ｐ展開類または接（：ｊ ｂ’Ｑに使用
条件下においてグルコースオキシダーゼの（ｊ４ に４
ｐ Ｈ４直であるｐＨ５、６を中心としてｐｌｉＪ、
４からｐ ）（７。 ｔ、好ましくはｐ １１４１ 、０からｐＨ７，０の１
１．ｕ囲に維持１−ることかできる酔４たは包仲ｆ剤ち
−加えることができる。 試薬層、他の層、または第孔件ｊｌン開題に含イ１−さ
せることができる酸、アルカリ化たは籾ｉ・１１ｆ剤と
して脂肪族ヒドロキシカルボンｈ＞？ （１”’、グリ
コール酸、乳酸、α−ヒドロキシ配酸、グリセリン酸、
タルトロン酸、りんご酸、め石１１．ｊ゛ｊ 、＜えん
酸）、脂肪族ジカルボン酸（例、マロン的、こはく酸、
グルタル酸、α−メチルグルタル酸、β−メチルグルタ
ル酸、３．３−ジメチルグルタル酸、α。 α′−ジメチルグルタル酸）、水酸化リチウム、水酸化
ナトリウム、水酸化カリウム、日本化学余堀「化学側Ｑ
楠礎梱」（東京、九番■、／り６を年発行）／３／
２−／３．２０ページに記載の緩衝剤（例、くえん酸水
素カリウム−くえん酸、燐酸二水素カリウムー燐酸水素
二ナトリウム）、［ＨｉｏｃｂｅｍｉｓｔｒｙＪ 、
！ （２）、ｌｌ６７−４′７７（／り４Ａ）のＮｏｒ
ｍａｎ Ｅ、 Ｇｏｏｄら著ロー１ｙｄｒｏｇｅｎ
Ｉｏｎ ）Ｊｕｆｆｅｒｓ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏ
ｇｉｃａｌｌＬｅｓｅａｒｃｈＪ Ｒ，Ｍ、 Ｃ，
］Ｊａｗｓｏｎ ｅｔ ａｌ ４ｊ［Ｄａｔｅ
ｆｏｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅ５ｅａｒｃｈＪ
第５ｅａｒｃｈＪｒｄ ａｔ ｔｈｅ Ｃ１ａｒｅｎｄ
ｏｎ Ｐｒｅｓｓ、 ／りｔり年発行） 弘７Ｇ−１
０１ｆページ、［Ａｎａｌｙｔ １ｃａｌＢｉｏｃｈｅ
ｔｎｉｓｔｒｙＪ、１０１１−１３００−３１０（１５
ｉ′１０）等に記載の緩衝剤（例、！−（Ｎ−モルホリ
ノ）エタンスルホン酸、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペ
ラジン−Ｎ′−２−ヒドロキシプロパン−３−スルホン
酸（Ｈｅｐｐｓｏ）ナトリウム塩またｌｄカリウム塩、
Ｎ−コーヒドロギシエチルビベラジン−Ｎ’ −３−プ
ロパンスルホン酸（Ｅｐｐｓ）ナトリウム塩またはカリ
ウム塩）、その他の緩衛Ｍ”−Ｃ（ｌ”Ｉ ％ マレイ
ン敞七ノナナトリウムまたはモノカリクム塩、３１３−
ジメチルグルタル酸モノナトリウムまたは七ノカリウノ
・ぬ） 、？！！（機ｎｉｋ （（〆１′師。 燐酸）がある。これらのうもではくえん「没、酒１酸、
りんご酸、グルタル酸、α−メフ゛ルグルタル酸、！−
メチルグルタル酸、α、α′−ジメチルグルタル酸、３
．３−、、／メチルグルタルｌ’１４．７Ｊ＜酸化リチ
ウム、１４ｅｐｐｓｏ Ｎａ塩：！′た）Ｊ、 Ｋ塩、
ＥＩＩＩ）ＳＮａ 塩またはに塩が好ましい。 本発明の多層分析し料における多孔畔ｇ９間層（以ト、
展開１曽ということがある。）は分析材料の最外面に位
置しくすなわち、分析飼料において試薬層に関して支持
体と反対側の１１′り外曲に位ｋ）二する。）で、被検
体液が点−６される面であり、その作用は点着された被
検体液がｉｌν（合体を含んだまま液体の客用には無関
係に単位ｎ＋凹゛１当番月よぼ一定容量の被検体液を試
〜５層に供給１−る機能を果すことである。この作用（
展開作用）により少ｆｃくともペルオキシダーゼを含む
試−％ ＩＩ”＋ （以下、試薬１？ｒｉということが
ある。）に供給される被検体液の容量１、さらには被検
体液に含まれる被検体の容量は単（ｊ７：面積当りほぼ
等しいことになり、またこＯｆｆ：用が存在するゆえに
、定量分析に際して被検体液ン正確に秤取しなくても定
量分析が実施できることを意味する。当然のことである
が被検体液を正確（：秤取して定量分析を実施すること
を排除するものでもないシ７、被検体液を正確に秤取す
ることによＩ）定常の精度が高まる場合がある。 本発明の分析材料における多孔性展開層として、特開昭
！ Ｆ −ｔ ３ Ｊ ｆ ｌｒ（特公昭！３−．２／
１７７）、米国特許ｆＡＪタタ２／！ｇ号に開示されて
いる非粋維等方的多孔性層（例、メンブランフィルタ−
またはプラッシュポリマ一層、微小球体または粒子を接
着剤で結合することにより製造された球体または粒子間
の相互結合空間により等力的多孔件が形成されている１
曽）、特開昭タタータＯｒｊりに開示されている微小球
状ビーズが水により膨潤しない接着剤により点接触状に
接着されて形成された三次元格子構造物からなる連続窄
隙含有等方的多孔注構造物層、特開昭タター７６グ３！
乙に開示されているｚＪ＜洗さオした４’ｉｉｌ物また
は親ｔｌ化処理植物からなる情維賀〕″峠力廿々孔往展
ｉ）旧１４、特開昭タフ−ｔｔ３ｊりに開／１ζさノじ
Ｃいる蜀理的縞性化処ＪＭ！された表面を１′Ｉ「るｔ
ｉ、’（’ｌ勿からなるオ戒ポ１１′貝異方件多孔件ｒ
ＬＮ開肋、特１’＋！ｉ’ｌ ｌ’ｉｉ Ｊ’、 ”グ
３７θに開フバされている合成、トリマ−４・ヅｆｌｉ
ｔ、 ｚ＜ルプヲ含ム抄造紙、抄造汁ｉ紙または不織イ
１」からｌ「る（ｉｌｌイ、１［賀異方性黍孔件展開ハ
リを用いイ）ことが（゛き、かつこれらの展開層はここ
にあけた！１．：ｒ計明１１１１１出に開示の方ｌ夫に
より；：電（することができｂ０゛！た！ｌ、’ｒ Ｉ
Ｉ４１１ｒ＋ ’Ｉターｔ Ｊ ｆｆざｒに開示さ１し
ているごと＜、−１ｉな化チタン、醇化亜鉛、またはイ
＋ｎ？ １１後パリ［ツムの微粉末を合判１−るメンフ
ランフィルターまたはフラッシュポリマー１鱒は後述−
する毘；ｌｆ、Ｌ、蔽層（幅ＪＬｔ線ブロッギングｒｔ
・ｊ、白色醒景ハ′４または）し反り、＋ ｋ’ｉ ）
をかねる１１を開胸として本発明において用いることが
できる。さらにカーボンブラックを含イ４するメンフラ
ンフィルターまたはプラッシュポリマー１（１を後述１
゛る）Ｃｇ蔽繭層かねる展開層として用いることができ
る。 被検体液が全血の場合、好ましいＷ聞届として前述の三
次元格子構造物からなる連続窄呻谷有寺方的多孔注構造
′Ｐｊ層および前述の繊維質異方性多孔性展開層があげ
られる。 本発明の多層分析材料においては試薬層と展開層の間に
水および被検体透過性の光遮蔽層（色遍繭層、輻射線ブ
ロッキング層、背景層または九反射層ともいう。）を設
けることができる。）ｆ ３ｐｊ、繭層は、たとえば、
赤血球を含む全血の如く、被検体液が右色粒チを含む場
合に有用な層である。即ち毘ゼ；１繭層の片側にある着
色粒子の色はこの層によってさえぎられて反対側、すな
わち透明支持体側からは着色粒子の色は全く見えず、従
って比色定ｌｉｔまたは螢）し測）を定態に当って着色
粒子が定量の妨害をしない。光遮蔽ＩＮは、二酸化チタ
ン微粉末、硫酸バリウム微粉末、酸化並鉛微粉末、アル
ミニウム微粉末またはカーボンブラックの如き微粉体を
水および被検体透過性の親水性ポリマーバインダー中に
分散した層で、！μｍからｉｏｏμＩ１１ 。 好ましくは５μｍから３０μｍの範囲の厚さがあり、被
検体液および被検体は通過しつるものである。光ｉ１ｉ
［層のポリマーバインダーとし−Ｃは試薬層に用いたの
と同じ種類のＹｑ水Ｖ（：ポリマーの中から漠亘に選択
して用いることができる。 光遮咄層としては二６り化チタンイ１り扮」、酸化１口
１鉛微粉、値６１２ハリウムイ、改粉末またはカーホン
ブラックなどの）し遮蔽能な４１する微粒子を含んだメ
ンブランフィルタ−（プラッシュポリマーｂ質光遮蔽層
として用いることかでさる。多孔’Ｐ（）Ｔｈ遮蔽層は
特開１１／Ｊ ＩＩ−？ −ｔ ３ ｌｒｆ ｇ （’
ｉ；、公昭３３−２／１７７）または特開昭ｊｌ／Ｌ−
ツタ７００１Ｘ開示の方法により設けることができる。 本発明の多層分析ｔＡ料においてはＩ＋Ｉ’■層を試店
層、光遮蔽層、または必要により設けられる他の層の上
に接着し積層して一体化するための接ｉ”ｆを強化する
目的でａ２ ’Ｉｔ ＩＩ’！を設けることができる。 ことに展開層として多孔性のシート状、フィルム状また
は膜状の素材を用いる場合には接イ°を層を設けること
が好ましい。 接着層としては試碧層のバインダーとして用いられてい
る水および被検体透過性親ｄ（性ボリマーを用いること
ができ、この場合には接着層の親水性ポリ・マーが半乾
きの状態のとき、または親水はポリマーを水または界面
活性剤を含む４（で湿潤させておいて、展開層として用
いる多孔性のシート状、フィルム状または膜状の累材を
適当な圧力をかけて接着層に接福することができる。接
狗層の厚さは０１５８ｍから／夕μｍ１好ましくはθ、
ｊμｒｎから５μｍの範囲である。 本発明の多層分析材料には前記の諸層のほかに必要に応
じて、特開昭ｊ２−３弘ざ♂、特１如昭３゛７−／７４
．！７４Ｌ、 特願＋１４ｄ！４−／ ７ｔ、２７ｊに
開示のバリヤ一層または液体既断層、特開昭ｊ／−グＯ
／り／、特開昭！１３−／３１０♂７等に開示の検出層
または媒染層、特開昭ｊ弘−２７７０θに開示のマイグ
レーション阻止層、特開昭５弘−２＆７ＦＪ（特公昭タ
フ−２ｇ２７７）、特開昭タ／−弘Ｏ／り／等に開示の
中間局、特開昭ｊ３−／３１０１９、特開昭Ｊ−７−１
１０ｔ４＃、特開昭タフ−！ｏｔｔｏ、将ｊ顧昭３７−
６／り３６等に開示の蛋白賃を通過させることができる
親水性バインダーポリマーを用いたｈ′９．特開昭夕２
−ざＪ′ゲタに開示の試桑含イｊ倣粒子分散ｊ（・１、
実開昭タフ−弘コタタ／に開４くの一定（イ旧１’ｌの
液体試料点着供給用ポーラス体（パッチ）、１゛、Ｉ卸
１１７（Ｊ ４−タ３ｔ３２に開示の酵累等の試ｕｈを
含む定面梢多孔性１冑を設けることができる。 本発明の多層分析材料はここまでの況明から明らかなと
おり、透明支持体のにに神４にペルオキシダーゼを含む
試薬層および１１υ開１４”ｉが設けられた４１゛：￥
１戊を有するが、好ましい′火す色態（！１ことして、
透明支持体の上に舶にペルオキシダーゼを含む試；ｉ；
１５層、Ｗ：、４蔽層および展開層が設けら１］、たイ
、′〆「処をイ］するもの、透明支持体の七にＩｌｌ＋
ｉ ＋ニベルプ°キシダーゼを含む試薬層、光遮１！ｌ
ｋ層、接百ハ・１およびｌｌ１ｊ開層が設（すられた４
台１戊を有するもの、 ｊｌｔｌＪＪ支刊ｆ体の１に１
唄ニヘルオキシダーゼを含む試・ζｊ５１ｐ＋１ オキ
シダーゼを含む光遮蔽層および展開層が設けられた）・
Ｘ１代を有するもの、透明支持体の１に舶にベルオキシ
ダーゼを含む試薬１曽、）シ遮繭層、オキシダーゼを含
む接着層、および展（ｊ（４層が設けられた（１″１１
戚を（１するもの、透明支持体の上に順にベルオキシダ
ーゼを含む試薬層、）を遮蔽１曽、オキシダーゼを含む
接着層、およびオキシダーゼを含む展開層が設けられた
構成を自するもの、透明支持体の北に順にペルオキシダ
ーゼを含むＩＩＪＬ 、、＋、（１層、オキシダーゼを
含む光メ１．へ穀層、メ“ギシダーセ′を含む接眉層、
およびＩＩρ開層間層けられた構成をイ］するもの、透
明支持体の１に順にペルオキシダーゼおよびオキシダー
ゼを含む試薬層、光遮蔽層、および展開層が設けられた
構成を有するもの、透明支持体の」二に順にベルオキシ
ダーゼおよびオキシダーゼを會む試薬層、オキシダーゼ
を含む光遮蔽層、接Ｔ′１１ｆ−八および展開層が設け
られた構成な冶するもの、透明支持体の」二に順にペル
オキシダーゼおよびオキシダーゼを含む試薬層、）シ遮
繭層、オキシダーゼを含む試薬層、および展開層が設（
ブられた構成をイｊするもの、さらにこれらの１曽構成
のバリエーション、などがある。 本発明の多層分析ｔＡ料は前述の特許間に１１１μＦに
開示の方法に従って製造することができ、その具体例は
巾記する実施例に１ｉｌ−細に況明されている。また本
発明の多ｉ（／ｊ分析財利は１１１Ｊ連の４″「静間（
ｉｌｌ ｊ！１に開示の操作手＋１１１（と同様にして
被４す・体１１り中のｆｌ・Ｖ検物賀を定イｆすること
かできる。木フト明の吊層分４ハｔ」料は実開昭ｊグー
／乙、２．２Ｐグ、′［□１開昭タクー／タロ０７７、
実開昭夕４− ／ １１．７．４７３≠、守：”＋ｌ！
＋！Ｌｌ昭ｊｊｔ−ｌＥ＆’／θＯに聞手のスライド（
′１シに収めて化学分オハスライドまたはｑ！Ｊ’ Ｉ
ｌｉ！ｌ’ｌ昭ｔＸ−６７タコ≠に開示の液体試料展開
浦助伺をよ・孔ｎ展開層の１−に設けたＭｌ ａの化字
分ｖ１ス″ノイドとして用いるのが製造、り側送、保・
１３′、測定１′？１作などｃ） ′ｉ； −（）ｌｆ
ｎ Ｔ 好ましい。 実施例 １ ゼラチン下１１７りが施されである厚さ７ｇｊμＩ１１
の透明ポリエチレンプレフタレート（１’ Ｅ Ｔ ）
フィルム玉に、干紀組成から成ｚＩＩｌｌＬ中グル：Ｊ
−／Ｌ／ １７ｍ １１３定晴用の試薬層を乾１□７
゛イρのＩｌｌ、’ ＩＩ、ｊがおよオ／りμｍになる
ように塗布、Ｉｌｌ躊ｒ’：ｉ； Ｌ、 ｌ、：。 ベルオキシダーゼ 、２ｒ、ｏｏｏｌＩＪ／、
７−シヒドロキシナフタレン タ ２グーア
ミノアンチピリン タ ？ゼラチン
＋２００ ９ノニオンｔ（Ｓ、２１
０（日本油脂■製活聞活住剤；ポリオキシエチレン ノニルフェニルエーテル） ２９この上に、
０．２９のノニオン１１８２１０及びグルコースオキシ
ダーゼタｏ 、ｏｏｏｌＵを含む二酸化チタン粉末１重
に部をゼラチンｌ東星部に混合分散したものより成る光
遮蔽層を乾燥膜〜がおよそ７５８ｍになるように幣布、
乾燥した。 次に、水１００ｒａｌｌ中にゼラチン≠２と酢酸ナトリ
ウムコタの割合で溶解し、さらにこれにノニオンＨＳ
２ ／ ０を０．２９加えて接石層饋イｉｉ液とした。 この液を光遮蔽層の上に乾燥膜厚が弘μ丁１〕となるよ
うに塗布、Ｉ乱燥し接看層を形成させた。次に、接Ｒ層
に３０ ？ ／ ｍ２ の割合で水を湿し水として供給
、湿潤させたのち、綿１００チのブロード（東洋紡製１
００双糸ブロード）を圧着ラミネートし、乾燥させて多
孔性展開層を設け、グルコース定量用の多１＠分析フィ
ルムを完成させた。 このフィルムな／、ｊｔ癖１ｘ／、３ｃｍの１Ｆ、方形
のチップに裁…「したのら、牛１１ｉｔＪＩＩ＋１３７
−Ａ ３４１ 、ｔλに開示のプラスチックマウント（
スライド枠）と同様のマウントに収めてグルコース定［
（１相比字分相スツイドとした。このスライドを用い０
％ Ｎ ａｌ’の干渉作用に対する緩和効果を１、・、
７１べた。〜・ξリン採血したのち遠心性り１１［によ
って調’：１：ｔ したヒト北東に異なる頃のグルコー
スをＭ６１ＪＩＩ Ｌ、 、倹肯月１検体とした。その
１０μｔを十「記の分（１１スライドのｌｒｄ開層間層
に点着し、３７°（゛で６分１１１１インクベーシヨン
したのち、！ ００ ｎ ｍのｉｉｌ、＋１定）′己で
反射ｒ１１．ｌｌ）’ｔにより発色丸字ゲ４度を測定し
た。 測定結果を第７表に示−づ−。 比申父１列 １ 酢市ナトリウムをｈｉｓ加し７（いほかＬｌ、 ’、、
ｌ、ｈｉｌ１例１と同様にしてグルコース定トｉ用化学
分析スライドを作製し、実施例１と同様の力ＹｊｌにＪ
ご）で発色九学瀞苅を測定した。測定活用を弔／表に不
一「。 本光明の多層性１ハフイルＪテ・を用いｆ−化宇分４ハ
スライドでは比蚊仲１に比べ−Ｃ屈巳１’１．’ ”ｊ
：（（、’４１．１．１の」胃入が見られる。 実施例 ２ ヒト全能をヘパリンＮ ａＪ・′抹１１旧〕３」シー心
労：’４１ｋ して血漿をｉｌ、ｊ、た。そのグルコー
ス、（イ）’ ｌ’ｔ ＋１． ／ ０１ Ｔ：９ ／
ｄｔとクルコースオキシダーゼｒ・−゛糸屯（・ｌＩ＋
７人により実ン則された。 またその一部を浴面した部分／％ｌｌ旧Ｉｌｌ ’ｓｉ
、ｃを１°、ｆた。 部分溶血血暁についてヘモグロヒン含イ４；１Ｆを測定
じたところ７３７ａ：ｕ／ ｄ ｔであ−）／、７ｏ’
ノニ／、’ｆｌｉ １ｐＨ１および比較例１と同様にし
て作詩したタル！−ス定慣用化学分析スライドを用い、
＋’＋ｉｌ記２種の皿”：＋’ｉを検体として発色紙１
疾を行７ＴＣつた。３７°Ｃで６つＹのインクベーショ
ンの後の発色）’Ｃ学（ｊ：、’、 Ｉ！！−は−・、
２表のとおりであった。 第 λ 表 血漿および部分浴皿皿漿を検体とした場合の発色）を学
＃度 本発明の多層分析フィルムを用いた化学分析スライドで
は、溶血ヘモグロビンによる干渉作用がよく緩和されて
いるとともに発色光学濃度が増大していることが確かめ
られた。 実施例 ３および４ 酢酸ナトリウムにかえてそれぞれ酢酸（実施例３）また
は酢酸アンモニウム（実施例４）１．り？を加えたほか
は実施例１と同トＬにしてグルコース分析スライドをイ
゛μ大した。ヒト′亡１１１１をヘパリンＮ ａ ｋ’
抹皿置退心分離して内だ非７６冊血東（グルコースオキ
シダー（酵素「（上極法によりそのグルコース合判量は
Ｊ ００１ｎｙ／ ｄ ｌ−と測定さハた。）を検体と
して、それぞれ１０μｌずつこれらのスライドの多孔往
展Ｈｉｉ ＩＮに点４＜Ｉしｓ ３７°（′で６分のイ
ンクベーションの後に光色）Ｙ：、’Ｉｉ’： ｌ＋、
’、ｉ Ｉ肛を反射用ＩＩ ）ＹＳにより測定した。結
果を第３とに／Ｊ＜−１−０実施例 ５ ｂ′Ｆ酸ナトリウムにかえて、１酸ナトリウム７゜０９
を加えたほかは実施例１と同１．←にしてグルコース分
析スライドを作製した。このものについて実ｔｉｉ１例
３と同様にして色テス） メ＋： ［ｉつだ。結果を第
３表に示す。 実施例 ６ 酢酸ナトリウムにかえてブｒＪピオン岐カリマクム／、
！ｔを加えたほかは実施トす１と同＋、ｋにしてグルコ
ース分析スライドを作製した。このものについて実施例
３と同様の発色テストを行った。結果を第３−１ｉに示
す。 比較例 ２〜６ 酢酸ナトリウムにかえて３，３−ジメチルゲルタ−ル ゛ナトリウム、灼酸ｌ水素λナトリウム（Ｎａｚ）ＩＰ
（Ｊ４）、燐酸λ水系／カリウム（ＫＨ２ＰＯ４）のそ
オｔぞれ／ｙ＋加えたほかは実Ｍｌｊ例１と同ｔｈにし
てグルコース分析スライドを作製し、実施例３と同様の
方７去により発色テストを行った。ほかＣ二比較例１と
同様にして作製したクルコース分析スライド（二つｌ／
）ても実施例３と同様の方法によ，り発色テストをイ丁
第 ３ 表 各柚ｒ没または１品の１メ２ ｆｌ・ 第３表から、木光四の多層分析フィルムを用いた化学分
析スライドにおいては兜色丸学が亀の増大がみられるこ
とが明らかで木，る。 実施例 ７ 酢酸ナトリウムを接お層ζー，ｊ，１加するかわりに、
展開層にあらかじめ、ｌθチ水浴液として含浸乾燥させ
たもの（酢酸ナトリウム含潰喰、２ ｆ ／ ｍ２）を
用いたほかは実施例１と同様にしてグルコース分析スラ
イドを作製した。ヘパリンＮａＦ採１ｉｔｕ’だウサギ
の新鮮全血１０μノを検体として発色光学Ｉｖ度を反射
測定したところθ、！／であった。 比較例１と同様にして作製したグルコース分析スライド
ではＯ１弘６であった。 実施例 ８ 酢酸ナトリウムを接着層中に添加するかわりに試薬１７
９中に加えた（ｒ＋１：酸ナトリウム含有ｔケλ２／ｎ
１２）ほかは実施例１と同様にしてグルコース分析スラ
イドを作製した。非溶血ヒ） ＋１１清及び部分浴脂血
７ｊＴを用いて実施例２と同様の測定を行ったところ、
溶血の影響を緩和する作用があることが確かめられた。 実施例 ９ 酢酸ナトリウムを接着層中のかわりに光連敞１冑中に姫
加したほかは実施例１と同様にしてグルコース分析スラ
イドを作製した。同時に比較例１と同様にしてａ［酸ナ
トリウムを含ま／ｒいグルコース分析材スライドを作製
した。それぞれのスライドについて、ヘパリン採血後面
ちに」・ｉ心労；’ａｔ’ ｔ、て調製した溶血のない
ウサギ血漿を用いてつわ色テストを行った。 酢酸ナトリウムを添加したスライドではう０ビー）を学
娘度が０．！；７であったのに対し酢酸ナトリウムフ１
１（添１１０のスライドではＯ１夕弘であった。 実施例 ｌＯ グルコースオキシターゼにかえて、コレステロールオキ
シダーゼタθ、θｏ ｏ Ｊ ｊｌを毘ｓ！ｊＳ 繭層
用組成に加え、さらにコレステロールエステラーゼ２夕
、ｏｏｏｌＵを接青１１Ｍ用ポ１１成に加えたほかは実
施例１と同様にしてコレステロール分４１［スライドを
作製した。 このスライドについて、Ｊｂγｉ＋；Ｉｌコレステロー
ルおヨヒエステル型コレステロール乞所：’！Ｉｔコレ
ステロール換算３７タｙｔ） ／ ｄ ｌ含有する非（
？ζ［１１【ヒト１１ル清および部分溶匣ヒト皿清を用
いて実施例２と同様にして発色テストを行った。３７°
（’４分のインクベーション後の波長り００口ｍでの反
射１Ｉｌ１１毘による発色丸字濃１ｆはそれぞれＯ１≠
７及びＯ，グ！であった。 比較例 ７ 酢酸ナトリウムを含まｔ【い他は実施例１０と同様にし
てコレステロール分ｌｉ用スライドを作・公した。この
スライドについて、実施例１０と同じ試料を用いて実施
例１０と同様にして発色テストヲｆ丁なった。３７°０
６分のインクベーゾヨンイｆ’（の波長！００ｎ口１で
の反射１ｌｉｌ ）Ｙ：、による発色光学濃ＩＪｔは非
溶＋＋＋＞血清で０．１１１７、ｑ皿血清で０．ψ／で
あった。 実施例 １１ 実施例】及び比較例１と同様にしてＩｌ−Ｌ４したグル
コース分析月１スライドについて、以下の実１５Ａ ’
Ｘ行い反応中のｐ Ｈを測定した。ｐＨ測定には東亜？
ｋＬ波社Ｈｐ ｔ］メーターＨＭ／ｌ＋二、表面ｐｈｉ
則定用屯極電極Ｓ −／ ４ ｔ ＩＩ’を接続した測
定器を用いた。 グルコース分析ス・ノイドの多孔性展開層にイオン反快
して脱イオンした蒸溜水（ｐＨ７，）、哲理血清（ｐｌ
ｌｇ、４Ｌ）、新鮮ヒト血漿（ｐＨ７゜４ｔ）の３棟の
検液をそれぞれｉｏμ１点看し点播液が展開さ、ｌした
後に多層分析材料の多孔性展開層を朶ｊｌｉ４１１除去
し、接着１所側からｐｔｔ’磁極を表向にあてて展開量
除去後を公債にｐＨを測定した。また、このＪ４１Ｌの
検液３棟をＰＥ″１゛フィルムの表面に藺下し、゛電極
をＰＥＴフィルムの検液に、密着させて七のＩ） Ｈ値
を測定した。なお、？４ｉＬ４ｄＩ！の校正には、ｐ
１４グ、０／及び７．ｒ４の矯酸標準液（２夕℃）を、
ＰＥ’ｌ’フィルム上に１０ｐｌを採取し、゛電極を直
接フィルムに密着させる方法に、１−り測定した。 反応中のｐＨ値測定結果を第を表に示す。 いずれのり！１合もｐ Ｈは、２〜３分で平衡値に到達
することが明らかである。 なお、始めから展開層を除去し、かつ支持体から塗布Ｉ
Ｐ＋のみを剥離した試料について」二記と同じ検波を接
着層に点播し、接着層側からおよび試薬層側からそれぞ
れ′４．極（ｏｓ−ｉｔｚｈ’＞を接触させてｐＨを測
定したところ、平衡値は±ｏ、ｉ！以内の積置で上記の
測足僅に一致していた。 冥施例 １２ 実施例１と同様にして作製したグルコース分析スライド
について、ｐＨ指示楽を用いる方法により使用条件下で
反応が進行中の層のｐ ｌ−Ｊ値を測定した。指示薬と
してはプロ七チモールブルー（Ｂ’ｌ’Ｈ）およびプロ
モチ七−ルパープル（Ｂ ’ｉ’ Ｐ ）を混合したマ
スキング指示薬ヲ用いた。この指示薬の呈色とｐＨ値の
関係についてはあらかじめ、燐酸緩衝液をｐ Ｈメータ
ーで軟土したｐ ）ｊ １１ｊｉ°既知の緩衝液を用い
て較正し、かつ日立３’ＩＯ分丸）しｅ計を用いて吸収
スペクトルを測定しキャリブレーションカーブを求めて
おいた。 次に、イオン交換して脱イオンしたｍ ％ｌ ７Ｊ（（
ｐｉ→７．０）、営理血清（ｐＨ♂、≠）％新鮮ヒ）
１ｍ漿（ｐｌ−１７，弘）を検液とし、これにそれぞれ
上記マスキング指示薬を少ドを７４≧加した液を調製し
て、前記グルコーススライドの多孔性展開肋に点播しｊ
分後のマスキング指示薬の呈色をＰＥＴフィルム（支持
体）側から測定した。當理皿ｒｅ＜ 、血漿では含有さ
れるグルコースによるう６色と徂なるので一波長法によ
る反射スにクトル（日立３１１０分毘光岐計を用いた。 ）の測定を行い、グルコースに７，４づく呈色を消去し
た。結果を第Ｖ表に示す。 弔弘表のｐＨ測定値と実施例１ないし９、および比軟（
＞ｉｌ ｉないし６の結果を比較すると、本発明の水浴
性モノカルボン酸またはその塩′Ｊａ：含イイする多層
分Ｕ「フィルムは使用条件上−において反兄・中のｐ＃
１値にかかわらず、発色）を学濃紘の狛犬がみられ、カ
タラーゼ活性阻害効果が自効に作用していることがわか
る。
Claims (8)
- （１）水不浸透性光透過性支持体の上に少なくともペル
オキシダーゼを含む試薬層、および多孔性展開層の二つ
の層を少なくとも有しこの順に積層されてなる多層分析
材料において、前記支持体以外の少なくとも一つの層に
２ｊ ０Ｃにおける水１００９に対する溶解度が７９以
上の水浴性モノカルボン酸またはその塩が含有されてい
ることを特徴とする多層分析材料。 - （２）モノカルボン酸が脂肪族モノカルボン酸または芳
香族モノカルボン酸である特許請求の範囲ｌに記載の多
層分析材料。 - （３）モノカルボン酸またはその塩が蟻酸、酢酸、プロ
ピオン酸、酪酸、吉草酸および安息香酸、ならびにこれ
らの酸のアルカリ金属塩およびアンモニウム塩からなる
群から選ばれた少なくとも７種の化合物である特許請求
の範囲１に記載の多層分析材料。 - （４）アルカリ金属塩がリチウム塩、ナトリウム塩およ
びカリウム塩である特ｔ°ト請求の範囲３に記載の多層
分析材料。 - （５）前記試薬層にペルオキシダーゼとともに少なくと
もｌ−アミノアンチピリンまたはその誘纏体が含有され
る特許請求の範囲工ないし４に記載の多層分析材料。 - （６）前記試薬層または他のいずれか一つの膚にオキシ
ダーゼが含有されている特許請求のＩＩα囲ｌないし５
Ｃ：記載の多層分析材料。 - （７）肖り記オキシダーゼがグルコ−スオキシダーゼ、
マレートオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、ヘキ
ソースオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、Ｌ
−グルコノラクトンオキシダーゼ、ガラクトースオギシ
ダーゼ、ギサンチンオキシダーゼ、ピルベートオキシタ
ーヅ、ウリカーゼ′、アスコルベートオキシターゼ、ラ
グテートオキシダーゼ、グリシンオキシダーセ、グリセ
ロールオキシダーゼからなる群から琺ばれた／４！ｌＩ
である特許請求のＩ！Ｉｎ囲６に記載の多肋分４）ｒ
’ｉＡ料。 - （８）前記オキシダーゼがグルコースオキシダーゼであ
る特許請求の範囲６に記載Ｑ多層分析例料。 ＋９１ ０ｉＪ、！己オキシダーゼがコレステロールオ
キシダーゼである特許請求の範囲６に記載の多層分析Ｈ
料。
Priority Applications (4)
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|---|---|---|---|
| JP57157442A JPS5946854A (ja) | 1982-09-10 | 1982-09-10 | 多層分析材料 |
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|---|---|---|---|
| JP57157442A JPS5946854A (ja) | 1982-09-10 | 1982-09-10 | 多層分析材料 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6282357A (ja) * | 1985-09-30 | 1987-04-15 | マイルス・インコーポレーテッド | 試料中の成分の検出用試験具及びその製造方法 |
| JPH04339751A (ja) * | 1991-05-15 | 1992-11-26 | Kuwabara Yasunaga | カップ状容器 |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5954962A (ja) * | 1982-09-22 | 1984-03-29 | Fuji Photo Film Co Ltd | 多層分析材料 |
| CA1226796A (en) * | 1983-11-07 | 1987-09-15 | Anand Kumar | Reflective particle-containing analytical element |
| JPS61124393A (ja) * | 1984-11-20 | 1986-06-12 | Konishiroku Photo Ind Co Ltd | 過酸化水素検出用分析素子 |
| US4863694A (en) * | 1985-02-26 | 1989-09-05 | Siemens Aktiengesellschaft | Chemically sensitive component |
| JPS62296A (ja) * | 1985-06-26 | 1987-01-06 | Kyowa Medetsukusu Kk | 過酸化水素の定量方法 |
| US4673654A (en) * | 1985-10-31 | 1987-06-16 | Warner-Lambert Company | Composition for determining peroxidase-like activity of hemoglobin |
| US4935346A (en) | 1986-08-13 | 1990-06-19 | Lifescan, Inc. | Minimum procedure system for the determination of analytes |
| JPS6348457A (ja) * | 1986-08-19 | 1988-03-01 | Fuji Photo Film Co Ltd | 乾式多層分析要素 |
| US4876207A (en) * | 1988-02-16 | 1989-10-24 | Eastman Kodak Company | Compositions for the detection of high levels of hydrogen peroxide |
| SE9003496D0 (sv) * | 1990-11-02 | 1990-11-02 | Eka Nobel Ab | Analysmetod |
| JPH04200396A (ja) * | 1990-11-30 | 1992-07-21 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd | 過酸化水素の酵素学的高感度測定法及びそのための試薬 |
| US5817454A (en) * | 1995-06-07 | 1998-10-06 | Coffee Chek, Inc. | Portable apparatus and method for detection of methylxanthine chemical species |
| RU94044169A (ru) * | 1994-12-16 | 1996-10-20 | И.А. Кочетов | Многослойный аналитический элемент |
| US6893552B1 (en) | 1997-12-29 | 2005-05-17 | Arrowhead Center, Inc. | Microsensors for glucose and insulin monitoring |
| US6458326B1 (en) | 1999-11-24 | 2002-10-01 | Home Diagnostics, Inc. | Protective test strip platform |
| US6562625B2 (en) | 2001-02-28 | 2003-05-13 | Home Diagnostics, Inc. | Distinguishing test types through spectral analysis |
| US6541266B2 (en) | 2001-02-28 | 2003-04-01 | Home Diagnostics, Inc. | Method for determining concentration of an analyte in a test strip |
| US6525330B2 (en) | 2001-02-28 | 2003-02-25 | Home Diagnostics, Inc. | Method of strip insertion detection |
| US20060200070A1 (en) * | 2005-02-14 | 2006-09-07 | Callicoat David N | Method and apparatus for calibrating an analyte detection system with a calibration sample |
| US7534394B1 (en) | 2005-07-11 | 2009-05-19 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Potentiometric titration method for quantitative determination of hydrogen peroxide |
| WO2012120293A1 (en) * | 2011-03-07 | 2012-09-13 | Archimed Llp | Biosensor comprising an oxidase enzyme and a hydrogen peroxide indicator means |
| GB201113880D0 (en) * | 2011-08-12 | 2011-09-28 | Archimed Llp | Novel compositions |
| CN102288747B (zh) * | 2011-08-19 | 2013-11-27 | 长沙三诺生物传感技术股份有限公司 | 去除干扰的干化学定量测试试条、谷丙或谷草转氨酶定量测试试条及检测方法 |
| WO2014125237A1 (en) | 2013-02-12 | 2014-08-21 | Microarray Limited | Novel biosensor |
| WO2015176155A1 (en) * | 2014-05-21 | 2015-11-26 | Spi Technology Ltd. | Apparatus and method for measuring hydrogen peroxide in water |
Family Cites Families (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2332760C3 (de) | 1972-06-30 | 1982-03-04 | Eastman Kodak Co., 14650 Rochester, N.Y. | Material für die quantitative spektrophotometrische Analyse einer Flüssigkeit |
| JPS5214120B2 (ja) | 1973-03-02 | 1977-04-19 | ||
| US3992158A (en) * | 1973-08-16 | 1976-11-16 | Eastman Kodak Company | Integral analytical element |
| DE2346719C3 (de) | 1973-09-17 | 1980-01-24 | Siemens Ag, 1000 Berlin Und 8000 Muenchen | Mehrschichtige Bestrahlungsmaske für die Röntgenstrahl-Fotolithografie |
| US3983005A (en) * | 1974-03-25 | 1976-09-28 | Eastman Kodak Company | Integral element for the analysis of cholesterol |
| USRE30267E (en) | 1975-06-20 | 1980-05-06 | Eastman Kodak Company | Multilayer analytical element |
| US4042335A (en) | 1975-07-23 | 1977-08-16 | Eastman Kodak Company | Integral element for analysis of liquids |
| US4089747A (en) | 1976-08-09 | 1978-05-16 | Eastman Kodak Company | Compositions for the detection of hydrogen peroxide |
| CA1114269A (en) | 1976-08-19 | 1981-12-15 | Charles D. Warburton | Integral element for the detection of glycerol or triglycerides |
| CA1095819A (en) | 1977-01-14 | 1981-02-17 | Eastman Kodak Company | Element for analysis of liquids |
| US4098574A (en) | 1977-08-01 | 1978-07-04 | Eastman Kodak Company | Glucose detection system free from fluoride-ion interference |
| US4166093A (en) | 1977-08-08 | 1979-08-28 | Eastman Kodak Company | Reduction of detectable species migration in elements for the analysis of liquids |
| JPS5910620Y2 (ja) | 1978-05-02 | 1984-04-03 | 富士写真フイルム株式会社 | 多層化学分析材料用カ−トリッジ |
| US4169751A (en) | 1978-05-30 | 1979-10-02 | Eastman Kodak Company | High frequency bonding with concentrators |
| US4211845A (en) | 1978-11-24 | 1980-07-08 | Miles Laboratories, Inc. | Glucose indicator and method |
| US4258001A (en) | 1978-12-27 | 1981-03-24 | Eastman Kodak Company | Element, structure and method for the analysis or transport of liquids |
| JPS55164356A (en) * | 1979-06-08 | 1980-12-22 | Fuji Photo Film Co Ltd | Multi-layer analysis sheet for liquid sample analysis |
| JPS568549A (en) | 1979-07-02 | 1981-01-28 | Fuji Photo Film Co Ltd | Multilayer chemical analyzing material |
| DE2950584C2 (de) | 1979-12-15 | 1984-07-12 | Robert Bosch Gmbh, 7000 Stuttgart | Schaltungsanordnung mit steuerbarem Widerstand |
| JPH0131957Y2 (ja) | 1980-03-28 | 1989-10-02 | ||
| US4322496A (en) * | 1980-04-17 | 1982-03-30 | Eastman Kodak Company | Inhibition of lactate oxidase |
| US4333733A (en) | 1980-07-17 | 1982-06-08 | Eastman Kodak Company | Continuous release of reagent in an analytical element to reduce assay interference |
| JPH0122135Y2 (ja) | 1980-08-25 | 1989-06-29 | ||
| JPS5761936A (en) | 1980-08-30 | 1982-04-14 | Kobe Steel Ltd | Signal processing method for crack detection on surface of heat steel stock |
| JPS5763452A (en) | 1980-10-02 | 1982-04-16 | Fuji Photo Film Co Ltd | Slide frame for chemical analysis |
| JPS5766359A (en) | 1980-10-09 | 1982-04-22 | Fuji Photo Film Co Ltd | Sheet-like material for analysis |
| JPS5794655A (en) | 1980-12-04 | 1982-06-12 | Konishiroku Photo Ind Co Ltd | Element for analysis |
| JPS5794653A (en) | 1980-12-04 | 1982-06-12 | Konishiroku Photo Ind Co Ltd | Element for analysis |
| JPS5794654A (en) | 1980-12-04 | 1982-06-12 | Konishiroku Photo Ind Co Ltd | Element for analysis |
| JPS585035B2 (ja) | 1980-12-11 | 1983-01-28 | 上田化学工業株式会社 | ペルオキシダ−ゼの製造法 |
| JPS57142562A (en) | 1981-02-27 | 1982-09-03 | Fuji Photo Film Co Ltd | Quantitative analysis film and colorimetric quantitative analysis |
| JPS57182648A (en) | 1981-05-06 | 1982-11-10 | Fuji Photo Film Co Ltd | Analysis sheet of multilayer liquid |
| JPS57208998A (en) | 1981-06-17 | 1982-12-22 | Fuji Photo Film Co Ltd | Multi-layered analytical film for determination of transaminase |
| JPS57208997A (en) | 1981-06-17 | 1982-12-22 | Fuji Photo Film Co Ltd | Liquid analyzing material for oxidase enzyme reaction system |
| JPS5877660A (ja) | 1981-11-02 | 1983-05-11 | Fuji Photo Film Co Ltd | アンモニアまたはアンモニア生成基質分析用一体型多層分析材料および検出法 |
| JPS5877661A (ja) | 1981-11-02 | 1983-05-11 | Fuji Photo Film Co Ltd | アンモニアまたはアンモニア生成基質分析用一体型多層分析材料および検出法 |
-
1982
- 1982-09-10 JP JP57157442A patent/JPS5946854A/ja active Granted
-
1983
- 1983-09-08 US US06/530,207 patent/US4587100A/en not_active Expired - Lifetime
- 1983-09-09 DE DE8383108933T patent/DE3364963D1/de not_active Expired
- 1983-09-09 EP EP83108933A patent/EP0103288B2/en not_active Expired
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6282357A (ja) * | 1985-09-30 | 1987-04-15 | マイルス・インコーポレーテッド | 試料中の成分の検出用試験具及びその製造方法 |
| JPH0525306B2 (ja) * | 1985-09-30 | 1993-04-12 | Miles Inc | |
| JPH04339751A (ja) * | 1991-05-15 | 1992-11-26 | Kuwabara Yasunaga | カップ状容器 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0103288B1 (en) | 1986-07-30 |
| EP0103288A1 (en) | 1984-03-21 |
| US4587100A (en) | 1986-05-06 |
| EP0103288B2 (en) | 1992-05-06 |
| DE3364963D1 (en) | 1986-09-04 |
| JPH04637B2 (ja) | 1992-01-08 |
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| US4578245A (en) | Multilayer analytical element | |
| CA1084393A (en) | Process for the determination of substrates or enzyme activities | |
| US3983005A (en) | Integral element for the analysis of cholesterol | |
| CN1125341C (zh) | 用于目视检测条的化学计时器及其制备和应用 | |
| JPH0431675B2 (ja) | ||
| JPH09121894A (ja) | ヘマトクリットに低応感の血糖ストリップグルコース濃度測定用試薬ストリップ | |
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