JPS5942894A - 生理活性物質ｓｓ１２５３８ｃ及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な生理活性物・ｔｌＳＳｌ　２　り　、’
ｖ　８　（：及びその製造法に関する。

本発明者らは天然の土壌より数多くの微生物を単離し、
その生産物について神”、　＜！７）冗をよ、（こｌ、
＋つだ結果、１葉県さつきが丘の土壌から分離１だ菌株
、８１２５３８は新規１１微生物でル）す、￥４Ｆらし
い生理活性物質８８１２５３８ｃを生産ｊうこと並びに
この生理活性物質はｆ、Ｑ　ｔ＋、た血Ｔｌ拡張什用と
一部のダラム陽性菌及び糸状菌ｅ（−×・１する抗菌１
′ｌ’；　ｌｉｔン有づ−ることを見出し本発明を光成
１．た。

ｊ）よりら、本発明は新規ソＩ、　４ｉ１．！ｌｉ　ｉ
占性物′ｔす＋Ｊ　Ｓｌ　２５５８０及びその１１Ｉ！
ｊ吉ｌ、１を１ノ＋”　’ｔｉｃするものである。

本発明のｔ、１：　Ｊ、１１！活性物質り寸）＋１２５
３８（３を産生す４）閑は−イ【、Ｃｏ１、うｌ、ｒ　
ｉ’／ｌ学的性ノｌ÷１を有する。

１ノヒｐ貝 胞子升成ＩＩ′１糸は、気１イ１糸、１、す「）５純分
枝１〜、その先端部ばｒ−）Ｉ！７んノ；へでふる１、
Ｉｔ扁ｔ１−系は認められない。

１＋＋ｉ、熟１．た分生胞子＆土、　　１０　（１，〜
１以ヒが連鎖し、胞子の形は、ケｉｊ　ｌ’ｌ簡プヒ〜
瑣円形で、その大ぎさは。

０．５〜ｆ１．８　Ｘ　Ｉｊ、１３〜１．５１ｔｍであ
る。胞子表面構造は、毛状で七）ろ。ｊｌ−１子のり、
鞭毛胞子−菌核はいずれも認めし）れ７．【い、また、
力・生菌糸の分断も認められノ（い。

２各種培地における生育状囲（２７”Ｃ１１４日間培養
） ６生理的性状 （１）生育温度軛曲 生有用能温度　１６−＝３９℃ 生育至適温度　２６〜５５　”（、： （２）ゼラチンの液化　陽性 （３）澱粉の加水分解　Ｉ４１’１．。

（４）　　Ｉ＋’へ一１１ｉｉ牛乳の凝固　賜（二（（
５）脱脂牛乳のペゾトン化　陽性 （６）　メラニン様色素の生ＩＪシ、１＼、５性（７）
　　硝酸塩の還元　　陽性 （８）　　セルロースの分解　１〜ｋｍｌ（９）　　炭
薬源の利用 Ｄ−グルコース　　＋ Ｌ−１ラビノース　− シュークロース　　− Ｄ−キシロース　　− Ｌ−イノシトール　− Ｄ−マンニトール　− Ｄ−フラクトース　− ラムノース　　　　− ラフィノース　　　−ト セルロース　　　　− 、ゲラクトース　　　１− ｌノリシン ラフ［−ス　　　　＋ Ｄ−ソルビトール　＋ ＩＪ−マノノース　　＋ ・ｆヌリン （注）」−二利用、１゛る 一：利用しプＡい 以−にの性状Ｊ、門２Ｌび細胞１．Ｃ４組成と１．て、
Ｊ」−ジアミノピメリン酸を含むことより、５１２５．
３８＆がストレプトミセス属にＪ／１４ｊることは明ら
かである。さらに、同菌株の菌学的性状をワックスマン
著［ジ・アクチノｉセナス（Ｔｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙ
ｃｅｔｅｓ月第２巻（１９６１年）、シャーリングとゴ
ツトリープのＩＳＰ報告１インターナショナル・ジャー
ナル・オデ・ゾステマテイノク・バクテリオロジー（Ｉ
ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　！
−１ｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏ１ｏｇｙ　）
　Ｊ第１８：Ｗ６９頁、２７９貞（１９６８年）、同第
１９七５’／１目（１９６９年）、同第２２巻２６５負
（１９）２年）　：ｊ、Ｓよび１バークーズ・マニュア
ル・オデ・デイターミネイティブ・バクテリオロジ−（
Ｂｅｒｇ８ｙ’　ｅλｑａｎｕａ］−ｏｆｌ）ｅｔｅｒ
ｍｉｎａｔｉｖｅ　’　Ｂａｃｔｅｒｉｏ１ｏ１４ｙ月
第８版（１ラフ４年）よ月極８版１−７．）と５本８１
２５６８林＋ｊ）よりｒ（、気菌糸の色がグレイ・カラ
ー　・シリーズ、ｌｌｉ：ｔ＋鎖がらせん状、胞子表面
構造が手広、メラニン様色素を生成せず、炭素源の利用
」１°邑囲かせ寸い脂、２しては、ストレプトミセス・
カルテクケ′シス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｏｅ　　ｋａ
ｒｎａｔａｋｅｎｓｊ　ｎ　　）　　と　ス　ト　し　
プ　トミセス・バクタム（Ｓ、ｐａｃｔｕｍ　）の棟が
Ｉｄ！めらＪ′する。こ１＋ら２閑株ど、Ｓ　１２　、
’、−＋　５１３　＋’、ｌ、とり比較を打った結果を
示すと次表のと」Ｇりでに、る。

（−ノーにみ［−）れろように５１２５５８株と、スト
Ｌ／　７”　）　ミー１−ノ・ｈルナタケンシスエ５ｐ
５５４５株とは、気Ｉ■糸の色調、硝酸塩の還元、ラフ
ィノースの利用能の点で大ぎ〈異なる。他方、ストレプ
トミセス・バクタムエｓｐ　５５も０４１、とは、硝＃
地のｉ　’ｙｔ’、、ラフィノースの利用能で異なるが
、他の醒学的１’を状かは番す一致する。したがって。

Ｓ　１２５５８４３４、は、ストレプトミセス・バクタ
ムに属する一閃株であ７．）、と同定した。

本ボ明渚は、８１２５５８株を公知の菌４′４′と１〆
別１−るため１１こ、ストレプトミセス・バクタムＳ　
１２５３８　（８ｔｒ＠ｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｐａｃｔｕ
＋＋ｔ　５１２５３８　）と命名し２、■や技術院微生
物ｆ：　＊　４を術研死所に受託番号微１：研閑寄第６
４６６号（ｐ］ｅｎＭｐ−６４３６）として覇ｄ１．シ
た。

本発明の／−１−坤活性ノ吻仙ｓ　ｓ　１２５６８０は
、」―記菌株を栄、ｊ％、、源ｉ“有堵地に匪鍾し１、
好気的に培養せしめるごとにより製造さ才する。

牛１ｊｌｊ油性物ｊｌｑＳＳ　１２５６８０生産株とし
ては、上記ｔＷ　４Ａ：：　＆Ｊ、もとより、その人上
並ひに１然変異株も同様に使用できる。

培養に用いられる培地としては、当該菌が利用する栄養
源を含むものであれば、合成培地、半合成培地、天然培
地の何れでもよい。

培地中の栄養源のうら、炭素源としては１例えば〃゛ル
コースグリセロール、デキストリン、ｌ’ｆ粉、水あめ
、糖みつ１尺豆油等あるいはこれらの混合物が使用され
る。また窒素源としては、大豆粉、小麦胚芽、肉エキス
、ペプトン、乾燥酵旬、綿実か′１−　　魚粉−コ−ン
ステイーデリカーーーイ碓酸アンモニウノ・、硝酔ナト
リウム等あるいはこれらの混合物を使用することができ
ろ。

またその他必要に応じて炭酸力・ルシウム、塙化す）　
＋７ウム、燐酸塩等の無機塩類を添加したり、菌の発育
を助け、物質ｓ、５１２５３８０の生産を促進する如き
、有機物、無機物及びシリコン油又はアデカノール（商
品名）等の一般的消泡剤を適宜添加することかできろ。

培養法としては、一般抗生物俤の生産と同じく液体用層
法、管に深部培養法が最も適している。

培養は好気的条件下で行われ、培養に適白な温度は２６
〜６０°Ｃであ）るが多くの場合２７℃付近で培養する
。生理活性物質ｓｓｌ　２５３８０は振盪培養、採部培
養共に２〜７日でその蓄積が最高に達する。

斯くして得られた培券物中から生理油性物質ｓ　ｓ　１
２５６８０ン単離″″ｆるには、伽記実施例に示す如く
、本生理ｌ古性物質５ｓ１２５５８ｃの理化学的性状を
考慮して種々の方法を適当に組合せることによって行う
。

すなわち、生理活性物質５ｓ１２５ろ８Ｃは通常菌体及
び培養濾液中に存在するので、遠心分離又は濾過等の手
段によって培養物から菌体を分離し、その菌体及び培養
濾液から通常の分離方法、例えば溶媒抽出法、沈殿法、
イオン交換樹脂法、ｒル濾過法、吸着若しくは分配カラ
ムクロマト法、透析法など適宜組合せて生理活性物１ｆ
ＳＳ１２５６Ｅｌを分離精製する。

好ましい分離棺製法の例としては次の方法が挙げられる
。

すなわち、培養液を遠心分離等により菌体と濾液に分け
る。次いで菌体及び濾液を適当な溶媒、例えばメタノー
ル、酢酸エチル等で抽出する。菌体抽出液と濾液抽出液
を合わせ溶媒を′ｄ去づ−る。

得られた残渣を少量の水に溶解した後、酢酸エチルで数
回抽出し、減圧乾固すると暗褐色の油状物を得る。この
油状物をシリカゾルを用いる吸着クロマトグラフィーに
付す。活性画分を集め、減圧濃縮すると５Ｅ１１２５３
８０は無色の油−状物碩として単離される。

以上の如くして得られた５ｓ１２５３８０は次のような
理化学的性質および生物学的性質を有する。

１、理化学的性質 ■　物質の色・性状：無色の油状物質 ■　分子１ｔ（８８１２５３８０のアセテートのマスス
ペクトルより） １４ ■　薄層クロマトグラフィー 担体ニジリカゲルプレートＦ２５４ （メルク社製） ■　呈巴ｊ又ルじ、＼ ／、／ｌ−ジニトロフェニルヒＰラジン試薬で黄［へ馨
呈〜１−る。アニスアルデヒド做酊で濃紫巴を・呈゛づ
イ）。塩化第２鉄反応は陽性である。

■　溶剤にメ゛・」」°る浴ＩＱ’ｆ性り［１０小ルム
、　ｒ乍ｒ歳、−＋−チル、アセトン、エチルエーテル
、エタ／−ル、メタノール、ヒリジ／、べ／ゼン、ジメ
チルスルホキシドに１１１溶。水に離俗。

■　紫’Ａ　ｒｔＡｄ吹収スペクトル ＭｅＯＴｌ　　　　　　　１係 λ　　　゛）５９　ｎｍ　　Ｅ　　　１．（４０（２’
Ｓ　’１図）ｍａＸ　　　　　　　ｌ（：Ｉｎ （７）　　赤外Ｍ＆吸収スペクトル（１代１ｍ法）第２
図 ■　ｌｆｉ　−ＮＭＲスペクトル（゛ゾＬＪ　ＭＨｚ　
）ボクロロホルム溶欣ｒＪＪＴｔ、…を左博物醐として
測定した。第６図 ０１３　（４Ｎ　ＭＲスペクトル 、小りロロホルム浴（゛戊申ＴＭＳを基哨り勿′酌とし
て側５にシた。

δ（：［）ｐＩｎ）　　１　ｄＵ、４．　１６２．２．
　１５６．９゜１３８．０＋　　１３６．５＋　　１５
５．８＋１３５．５．　１６４．０．　１２５．３゜１
２５．１　、　１１８．４．　１１−ｉ［Ｊ。

１　０　５、．３．　８　２．／　、　　、５　５．ン
、　４　）、９゜５６．８．　５０．１　、　’１７．
５．　１６．５゜１５、ｉ　　１５．１．　　′ｌ　５
．１．　１７．９゜１０．６．　９．８゜ Ｏ分子式（ＮＭＲ及びマス７にクトルより）０２５Ｈ３
８０゜ ■　祠造式 −にｆｊ（Ｌの理化字的測市１１い−より、本発明物質
５ｓ１２５３８ｃは士＾「：の式で表ゎさ几る４１°「
造のものと決定した。

２、生物学的性質 （１）　　血管拡張作用 実験動物として体重１５〜２５ｋｇの雄性雑犬（１群４
頭）を用い、ベントパルビタールナトリウム（３０Ｉｎ
？／　ｋ５７１．ｖ、　）で麻酔した後、人工呼吸下に
左冠状動脈を露出し、血流量を測定するための電磁流量
計のプローグを装着し、また、在人Ｍｉ［４Ｑ豚肉には
ポリエチレンカニユーレを挿入した。

被検化合物は、少ψのジメチルスルホキシドに溶解し、
注射用生理食塩液にて希釈し、静脈内に投与した。

実験動物の血流量は、前記電磁流量計により、血圧はポ
リエチレンカニユーレから圧トランジユーザーを介する
ことにより、また心拍数は心電図のＰＲ間隔から瞬時心
拍Ｈ１゛、ｔ：り測定！２、ポリグラフ上に記録し、被
検化合物の投与前後の変動を調べた。

この結果を第１表に示す。

＋＋　（、：：、、自 （２）抗菌作用 牛埋泊性物質ＢＥ３１２５５８０の奇神做生物に対する
最小発育１刺止イ〆１．・度（Ｍ：ｔＣ）を弔２表に示
す。

第　２　表 以上述べた諸性質から本発明化合物に類似する既知生理
１’ｉ’＋性物ノｔ！■のそれと比軟（またが該当する
物質はｈ　＜　ｇ　に　１２５３８　ｃは新規な生Ｂ！
活性物質と判断された。

斜上の如く、本犠明の生Ｊ’ｌ！　１占性物質８８１２
５３８　。

は血圧降下作用を示すほか、冠動脈血流量を顕著に増力
１１さぜ、しかもその力価は現在一般に使用されている
ジビリダモールの、れ５よそ６倍であるから、例えば虚
血性心疾患に対する治療系及び血圧降下剤として有用の
ものである。また、ｓｓ　１２５３８０は、一部のダラ
ム陽性菌及び糸状菌に対しての抗菌作用がｌｌめられる
ことから抗菌剤としても有用なものである。

次に実７１＋ｉ例を挙げ、本発明を説明する。

実施例１ ８８１２りう８Ｃの生厘閑ストレゾトミセス・バクタム
５１２５３８（微工研菌寄第６４６６号）をグリセロー
ル２．０　％、デキストリン２．０　％、ソイトン１．
０４、酵母エキス０．６％、［８アンモニウム０．２％
、炭酸カルシウム０．２％（ｐｌ（７，１］）の液体培
地に接種し、２７°Ｃで４８時間振替侍して種培養を得
た、次いで上記液体培地１６４を５０１容のジャーノア
メンタ−中に入れ、この培地中に前記種培養ろＱ　Ｑ　
ｍｌ：を接種し、通気量１６１／分、堺拌敷４００　ｒ
、ｐｏｍ、　、培東温度２７℃の条件下で９６時間培養
しまたう培養終了後、」１を弊１（ｉｌをつ７）・心外
離し、得られたｉｌ＋’Ｊ液に等量の酢酸エチル（（加
え、６回抽出する。一方菌体にはメタノール５１を加え
で１１γ拌した後濾過する（この操作を２回行なった）
。この抽出液のメタノールン減Ｌ１：留去［７た後、残
渣の水溶液を酢酸エチル１１で３１ｒｌｌ　４ｒｉ出【
また。

こ」１．を前記のン；Ｒ液からの抽出液２合わせ、溶ｆ
ｌｊｌを減圧留去すると粗５Ｅ１１２５ろ８Ａ（／侍願
昭５７−５７７９　’Ｏ号）、粗Ｓ８１２５３８Ｂ　（
１１’＃ＩＱ昭５７−１０４８９９号）及び柑５ｓ１２
５３８０の混合物が得られる。この混合物を少ｔｆｔの
クロロホルムに溶解し、同溶媒でシリカゲル（メルク社
製；ギーゼルケゞル６０）カラムクロマトグラフィー（
カラムザイズ５　ｃｒｎ　Ｘ　５０　ｃｍ、　）に付す
と、まずＴｌｔ　Ｓ　Ｓ　１２５ろ８Ｃを含有する両分
が溶出され、次いでイ」４　Ｆｌ　ｓ　１２５５８　Ａ
及び材ｔｓ　５１２５３８Ｅを含有する両分がＩＩｙ４
次浴出される。８８１２５５８ａを含有する両分を分取
し、溶媒を留去すると淡黄色油状のＳｒ＋　１７　ｈろ
８Ｃの粗精製物的１．！、、５ｇが得られた。この８　
Ｇ　１２　’５３８０　ｍ４ｉ？Ｊ　Ｋｕ約（Ｊ、６Ｍ
を少爪のベンに゛ン／酢酸工′１−ル（４：　１　）に
浴解し、同溶媒でシリカケ８ル（メルク社製：キーゼル
グル６０）カラムクロマトグラフィー（カラムサイズ２
　ｃｍ、　Ｘ　３０　ｃｍ、　）にτ１した。ｓｓｌ　
２５３８０の溶出区分を！（モめ溶媒を留去１−ると純
粋なＳＳｉ　７り６８Ｃの無色油状物的［Ｊ、１５Ｉが
得られた。

【図面の簡単な説明】

部１図は杢゛ｆＩｌ！ｉ明の生理＃ｉヂ１物袈５ｓ１２
５３８０の紫外線Ｉ吸収スペクトル（溶媒二メタ、〕−
ル）である。 第２図は本発明の生鯉活性′ＩＡ質５ｓ１２５３８０の
赤外線１吸収スペクトル（液１１９１法）でｋ】る。 第５図は本元明の生理的ｅｔ；物質５Ｆ３１２５５８０
のｌＨ−ＮＭＲスペクトル＜ｍｅ：ｈクロロポルム）で
ある。 以上 出翻人　ニスニスＷＭ　４株式会社 代理人　弁理士有　賀　三　幸　　７ 弁理士　高　野　登志雌　　　、 弁理士　小　野　信　美“１ １ 千葉県印施郡酒々井町東酒々井 ４−４−７２

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）下記の理化学的性質に有する生理活性？ｌ質ＢＢ
   １２５５８００ ■　物質の色及び性状：無色の油状物質（つ　分子）ｔ
   ’ｒ　（Ｓ　Ｓ　１２　ｂ　３８　Ｃのアセテートのマ
   ススペクトルより） １４ ■　ｆｋ％層クロマトグラフィー ）Ｕ体二りリカグルグレートＦ２５４ （メルク社製） ■　菫色反応 ン、４−ジニトロフェニルヒドラジン試桑で黄色を呈す
   る。アニスアルデヒドＩＱ＋、　Ａ々でンｆ）紫１ｉ１
   ．を呈する。塩化第２絋反応は陰性でｋ）る。 ■　浴剤に×・１する溶解性 り１３　（１ホ／Ｉ／　ム、Ｗｒ　ｔＩ８７．−ｒ　＝
   ｐル、−７−１＝　１−ンーＪ−デルエーテル、メタノ
   ール＋５、メタノール、虻リジン、ベンゼン、ヅメ１ル
   スルホ：１シトに可溶。水にＳ沼。 ■　紫外線吸収スペクトル ■　赤外線吸収スペクトル（ｉｉ［Ｊｉ（Ｉ法）ａ［３
   ２図 ■”１１−　ＮＭＲｙ、ベクトル（９０ＭＨｚ　）ｉＪ
   ｉクロロホルム溶液中’ｌ’Ｖｒ　１４を基準物゛ｆり
   と１−て測＞ヒした。第６図 ω）　　ｉ３ａ　−ＮＭＲスペクトル 月１クロロホルム溶液中Ｔｉｔ（ｓを基傳！ニガＪ竹と
   して測＞屁した。 δ（ｐｐｍ）　　１８０−４．　１６シ、’２　、　１
   　５６．９゜１　５　８．０．　　１　６　６　、ｂ、
   　　　’Ｉ　　３　　ｂ　、と３　。 １　３５．５．　１　３４．０．　１　２５．３゜１　
   ２３．１．　１　１　８．４．　１１１３．０゜１０５
   、、う、　　８２．７．　５５．２．　４２．９゜６６
   ．８．　６　　Ｕ、１　、　１　７．５．　１　６．５
   ゜１　５．５．　１　３．１．　１　３．１．　１　２
   ．９゜Ｉ　　Ｏ，６，９，８ ■　分子式（ＮＭＲ及びマススペクトルより）０２ａＨ
   ａｅＯ４ ＋２１　４’ｔ’ｌ造が次の式 ％式％ で表わされるものである特許請求の範囲第１項記載の生
   理活性物質８８１２５３８００ （３）　　ノトレゾトミセス属に属する生理活性物質５
   ｓ１２５３ｊ３ｃ生産菌を培養し、その培養物からＦ記
   の理化学的性質を有する生理活性物質８８　１　２　５
   ３８　　Ｃ１ ■　物隔り色及び性状：無ビーの油状物η（紗　分子諷
   （ｓ　ｓ　１２　ｓ　３　ｓ　ｃのアセテートのマスス
   ペクトルより） １４ ■　釉層クロマトグラフィー ｊ坦体：シリカゲルプ’　ｌ／　−１・Ｆｑｓｔ（メル
   クィｌセ（） ■　呈色反応 ２．４−ジニトロフェニルヒーラジン試薬で黄ｆｆＩを
   呈する。アニスアルデヒド個り蛤゛で。■＋紫１！、を
   呈する。塩化第２鉄反応は陰性である。 ■　溶剤に対する溶解性 クロロホルム、酢酸エチル、アセトン、エチルエーテル
   、エタノール、メタノール、ピリジン、べ／ゼン、ジメ
   チルスルホキシドに用浴。水にｌ１ｌＩＩト浴。 （６）紫外的！吸収スペクトル １≠ ２Ｍ００”　　２３９ｎｍ　　Ｂ　　　　８４０　　（
   ｍ　Ｉ　図）ｍａｘ　　　　　　　１ａｎ （メン　赤外Ｈ１多やＩＩＭスベクトノ’　（ｙｉ　ｌ
   ｌ９１法）弔ン図 ■　相、　−ＮＭ）？　、ｌベクトル（９Ｄ　ＭＨｚ　
   ）ｉｌｉりｉノロホルム溶液中ＴＭＳを基準物質として
   迎１定【、た。第５図 Φ’）　　１″（ニーＮＭＲヌベクトル重クロロホルム
   溶液中ＴＭＳを基準物質として【則定した。 δ（ｐｐｍ）　　１　Ｂ　０．４．　１６２−２．　１
   ５６．９゜１３８．０．　１３６．５．　１５５．８゜
   １５５．３．　１５４．０．　１２５．ｊ。 ＋　２　ｓ、１．　１１８．４．　１１８．０゜＋　０
   ５．６．　８２．７．　５５．２．　４２．９゜６６．
   ８．　３０．１　、　１７．５．　１６．５゜１　！＝
   ）、６．　１５．１．　１５．１．　１２−９゜１　０
   ．６．　　’７’、８ υ　分子式（ＩＪＭＲｌｆｚびマススペクトルより）０
   ２６１３８０４ を採取することを特徴とｊる／：１：　Ｊ１４４　ｆ占
   性物ノ汀８　Ｓ　１２５３１３０の製造法。　　′