JPS58220688A - 生理活性物質ｓｓ１２５３８ｂ及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な生理活性物質ｓｓ　１２５５８Ｂ及びそ
の製造法に関する。

本発明者らは天然の十彌より数劣くの命生物を単離し、
その生産物について物々研究をおこなった結果、千葉系
さつきが丘の土壌から分離した菌株、８１２５３Ｂは新
規な微生物であり、新らしい生理活性物質５ｓ１２５３
ＢＢを生理すること並びにこの生理活性物質は優れたＩ
ｒＴｌ管拡張作用さ一邪のダラム陽性菌及び糸状−に対
する抗菌作用を有することを見出し本発明を完成した。

すなわち、本発明は新規な生理活性物情５ｓ１２５３Ｂ
Ｂ及びその製造法を掃供するものである。

本発明の生理？＾性物質５ｓ１２５３８Ｂをｔａｒ、生
する菌は、次のような藺学的性賃を有する。

１、形態 胞子形成菌糸は、気菌糸より単純分枝し、その先端部は
らせん形である。輪生糸は認められない。

成熟した分生胞子は、１０個以上が連鎖し、胞子の形は
、短円筒形〜橢円形で、その大きさは、０．５〜０．８
　Ｘ　Ｏ，８〜１．５　ｔｔｍである。胞１子表面構造
は、毛状である。胞子のう、鞭毛胞子、菌核はいずれも
認められない。また、基中菌糸の分断も認められない。

２、各神培、地における生育状聾（２７°０１１４日間
培養） 以下余白 ・１゜ ６、生理的性状 （１）生育温度範囲 生育ｏＪ能湿温度１６〜３９＝Ｃ 生ｆｆ＃：ｉＭ？Ｍ２　２６〜３５°Ｃ（２）ゼラチン
の液化　陽性 （３）勲粉の加水分解　陽性 （４）脱脂牛乳の凝固　陽性 （５）脱脂牛乳のペプトン化　陽性 （６）　　メラニン様色素の生成　陰性（７）硝酸塩の
還元　　陽性 （８）セルロースの分解　陰性 （９）　　炭素源の利用 Ｄ−グルコース　　＋ Ｌ−アラビノース　− シュークロース　　− Ｄ−キシロース　　− Ｌ−イノシトール　− Ｄ−マンニトール　− Ｄ−フラクトース　− ラムノース　　　　− ラフィノース　　　＋ セルロース がラクトース　　　＋ サリシン　　　　　− ラクトース　　　　＋ Ｄ−ソルビトール　＋ Ｄ−マンノース　　＋ イヌリン　　　　　− （注）＋：利用する 一：利用しない 以上の性状および細胞壁組成として、Ｌ−ジアミノピメ
リン階を含むことより、８１２５６８株がストレゾトミ
セス鵬に属することは明らかである。さらに、同菌株の
菌学的性状をワックスマン著［ジ・アクチノミセテス（
Ｔｂｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）Ｊ第２巻（１９
６１年）、シャーリングとゴツトリープのＩＳＦ報告［
イン一二ナショナル・ジャーナル・オプ・システマテイ
ツク・バクテリオロジ−（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃ
ｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）Ｊ第１８巻６９頁；　２７９頁（
１９６８年）、同第１９巻３９１山（１９６９年）、同
第２２巻２６５自（１９７２年）および「パーシーズ・
マニュアル・オプ・ディターミオ、イテイプ・バクテリ
オロシー（Ｂｅｒｇｅｖ′ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆＤｅ
ｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）
Ｊ　８１＜８１Ｗ　（１９７４年）より検索すると、本
８１２５３８株のように、気菌糸の色がグレイ・カラー
・シリーズ、胞子鎖がらせん状、胞子表面構造が毛状、
メラニン挿色素率生成せず、炭素源の利用帥、囲がせま
い株さしては、ストレプトミセス・カルナタケンシス （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｋａｒｎａｔａｋｅｎｓ
ｉｓ　）とストレプトミセス・バクタム（Ｓ、ｐａｃｔ
ｕｍ　）の樟が閣められる。これら２菌株と、５１２５
３・８株との比較を行った結果を示すと次表のとおりで
ある。

以下余白 上表にみられるようにｓ　１２５３８株と、ストレプト
ミセス・カルナタケンシスＩ　５Ｆ５３４５株とは、気
菌糸の色調、硝酸塩の還元、ラフィノースの利用能の点
で大きく異なる。他方、ストレプトミセス・バクタムｌ
５Ｐ５５３０株とは、硝酸塩の還元、ラフィ／−スの利
用能で異なるが、他の菌学的性状がほぼ一敏する。した
がっｃ１Ｂ　１２５３８株は、ストレプトミセス・バク
タムに属する一菌株であると同定した。

本発明者は、５１２５３８株を公知の菌株と区別するた
めに、ストレプトミセス・バクタム８１２５３８　（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｐａｃｔｕｍ　８１２５３８
）と命名し、工業技術院微生物工業技術研究所に受託番
号微工研紹寄第６４呂６号（ＦＥＲＭ　Ｐ　−６４３３
）として寄託した。

本発明の生理活性物質ｓｓ　１２５３８Ｂは、−Ｆａａ
　ｍ　ａ　＋　ｅｓ　＊　ｍ　＊　＊　＊　ｍ　ａｃ　
＊　＝ｔＱ：”’ｂ　、　ｔｓ　＠　ｎ　ａｃ　＊　＊
せしめることにより製造される。

生理活性物質５Ｓ１２５３８Ｂ生産株としては、上記菌
株はもとより、その人工並び番こ自然変異株も同様に使
用できる。

培養に用いられる培地とし−ｒ　４′ｉ、当該閑が利用
する栄養源を含むものであれは、合成組曲、半会成培地
、天然培地の何れでもよい。

培地中の栄養瀞のうち、炭侶源としては、例λばグルコ
ース、グリセロール、デキストリン、帥粉、水あめ、糖
みつ、大蔓油等あるいはこれらの混合物が使用される。

また窒素源としては、大豆粉、小麦胚芽、肉エキス、ペ
プトン、乾燥酵母、綿実かす、魚粉、コーンステイープ
リカー、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム等あるいは
これらの梶合物を使用することができる。

またその他必要に応じて炭酸カルシウム、塙化すｌ−Ｉ
Ｊウム、燐酸塩等の無機塩類を冷加したり、菌の発育を
助け、物質５ｓ１２５３ＢＢの生産を促進する如き、有
機物、無機物及びシリコン油又はアヂカノール（商品名
）等の一般的消泡剤を適宜添加することができる。

培養法としては、一般抗生物質の生産さ同じく液体培養
法、特に深部培養法が最も適している。

培養は好気的条件下で行われ、培養に過当な温度は２６
〜５０′Ｃであるが多くの場合２７°゛Ｃ付近で培養す
る。生理活性物質５Ｓ１２５３８Ｂは振Ｏつ培養、深部
培養共に２〜７日でその蓄積が最高に達する。

斯くして得られた培養物中から生理活性物質５Ｓ１２５
３８Ｆを単離する？ζは、債記実施例に示ず如ぐ、本生
理活性物質５Ｓ１２５３８Ｂの理化学的性状を考慮して
樺々の方法を適当に組合せることによって行う。

すなわち、生理活性物質５ｓ１２５３８Ｂは通常菌体及
び培’＃ＩＥＩｌ中に存在するので、遠心分離又は濾過
等の手段によって培養物から菌体を分離し、その菌体及
び培養Ｆ液から通常の分離方法、例えば溶媒油出法、沈
殿法、イオン交換樹脂法、デル濾過法、吸着若しくは分
配カラムクロマト法、透析法など適π組合せて生理活性
物質 ５Ｓ１２５３８Ｂを分離卆冑製する。

好ましい分離精剣法の例としては次の方法が誉げられる
。

すなわち、培養液を遠心分離等により菌体七枦液に分け
る。次いで菌体及びＦ液を適当な溶好、例えばメタノー
ル、酢酸エチル等で抽出する。菌体抽出液とｐ液抽出液
を合わぜ電媒９　Ｗ４去する。

得られた残渣を少量の水に溶解した後、酢酸エチルで数
回抽出し、減圧乾同すると暗褐色の油状物を得る。この
油状物をシリカデルを用いる吸着クロマトグラフィーに
付す。活性画分を集め、減圧濃縮すると８８１２５３８
Ｂは無色の油状物質きして即−１ｔされる◇ 以上の如くして得られた５ｓ１２５３８Ｂは次のような
理化学的性質および生物学的性儂を有する０ １、＃化学的性質 ■　物質の色・性状：無色の油状物質 ■　分子量（８８１２５３８Ｂのアセテートのマススペ
クトルより） ８６ ■　薄層クロマトグラフィー 担体ニジリカゲルプレートＦ２５４ （メルク社製） ■　μ色反応 ２１，４−ジニトロフェニルヒドラジン試薬で機色を呈
する。アニスアルデヒド硫酸で濃紫色を呈する。塩化第
２鉄反応は陰性である。

■　浴剤に対する溶解性 クロロホルム、酢酸エチル、アセトン、エチルエーテル
、エタノール、メタノール、ピリジン、ベンゼン、ジメ
チルスルホキシドに可溶。水に離溶。

■　紫外線吸収スペクトル 煩 ′１％ λＭｅ０Ｈ２３９ｎｍ　　Ｅｌｏｌｏ　、、（第１図）
ｍａｘ　　　　　　　１ｃｍ ■　赤外線吸収スペクトル（液膜法） 第２図 ■　ｌ）１−　Ｎ　Ｍ　Ｒスペクトル（９０ＭＨ２）車
クロロポルム溶液中ＴＭ８を基準物肩上して測定した。

第３　＋＝ ■　１３Ｃ−Ｎ　Ｍ　Ｒスペクトル 車りロロホルム婢液中ＴＭＳを基準物物々して測定した
。

δ（ｐ　ｐ　ｍ　）　　１Ｂ１．５．１６７．２．１５
９．１．１３Ｂ、１　　、１ろ６，４、１３５．９　、
１３５．２．１３３．９．１２５．２．１２２．９．１
１８．４．１１７．８１８８．４．８２．６．５５．８
．４２．９．３６．８．３０．２．１７．４．１６．５
．１３゜１．１３．１．１０．６．９．４■　分子式（
ＮＭＲ及びマススペクトルより）Ｃ２４Ｈ３４０４ ■　構造式 上記の理化学的測定値より、本弁明物僧５Ｓ１２５’１
８Ｂは下記の式で表わされる構造のものと決定した。

２、生物学的性質 （１）、血・胃拡張作用 実験動物として体重１５〜２５に９の雄性雑犬（１Ｂ４
頭）を用い、槓ントパルビタールナトリウム（５０ｍｇ
／ｒｇｉ、ｖ、）で麻酔した後、人工呼吸下に左冠状動
脈を露出し、面Ｉ＃薫を測定するための電磁流量計のゾ
ローグを装着し、また、左大關−１脈内にはポリエチレ
ンカニユーレを挿入した。

被検化合物は、少量のジメチルスルホキシドに溶解し、
注射用生理食塩液にて希釈し、静脈内に投与した。

実験動物の血流量は、前記電磁流量計により、血圧はポ
リエチレンカニユーレから圧トランジューサーを介する
ことにより、また１１２拍数は心′亀図のＰＲＩＩ＋隔
から瞬時心旧計より測定し、ポリグラフ上に記録し、補
極化合物の投与前後の変動を調べた。

この結果を第１表に示４−。

υ丁余白 （２）抗菌作用 生理活性物質５Ｓ１２５３ＢＢθ）各神価生物に対する
最小発７９阻止濃度（ＭＩＣ）を亀２表に示す。

第　　２　　表 以上述べた諸性質から本発明化合物に類似する既知生理
活性物質のそれと比較したが該当する物質はなく５Ｓ１
２５３８Ｂは新規な生理活性物質と判断□された。

斜上の如く、本発明の生理活性物質５ｓ１２５ろ８Ｂは
血圧降下作用を示すほか、冠動脈血汁゛般を顕著に増加
させ、しかもその力価は現在一般に使用されているジビ
リダモールのおよそ３０倍であるから、例えば虚廂性心
疾磨に対する治療薬及び面圧降下剤として有用のもので
ある。また、５Ｓ１２５３８Ｂは、一部の、ダラム陽性
菌及び糸状菌に対しての抗菌作用が認められるこ吉から
抗閑剤としても有用なものである。

次に実施例を埜げ、本発明を説明する。

実施例１ ＳＳ、１２５３８Ｂの生産菌ストレプトミセス・バクタ
ム８１２５３８（微工研菌寄第６４６３号）をグリセロ
ール２．０％、デキストリン２．０％、ソイトン１．０
％、酵母エキス０．３％、硫酸アンモニウム０．２％、
炭酸カルシウム０．２％（ｐＨ７，０）の液体培地に接
種し、２７”ｃで４８時間振！ｐして神ｊ＠養を得た。

次いで上記液体培地１６１を６ｏｌ容のゾヤーファメン
ター中に大和５、この培地中に前記ＨＴ培＊　３００　
ｍｌを接種し、辿気惜１６１／分、攪拌数４０　Ｏｒ、
ｐ、ｍ、、培養温度２７”Ｃ（７Ｂ東件下で９６時間培
養した。培養終了後、培Ｓ′液を遠心分離し、得られた
ｖ液に等量の酢酸エチルを加え、３回抽出する。一方菌
体にはメタノール５１ｆ；−加えて攪拌した後濾過する
（この４す作を２回行なった）。この抽出液のメタノー
ルを減圧幀去した後、残金の水Ｉｆｉ液を酢酸エチル１
１で３回抽出した。

これを前記のＰ液からの抽出液と合わせ、溶Ｗを減圧留
去すると粗Ｓ、５１２５ろ８Ａ（特願昭５７−５７７９
０号）と粗５ｓ１２５６８Ｂの混合物が得られる。この
混合物を少碕のクロロボルムに浴解し、同溶媒でシリカ
ゲル（メルク社製：キーゼルｒル６０）カラムクロマト
グラフィー（カラムサイズ３　ｃｍ　ｘ　３０　ｃｍ　
）に利す吉、まず相５Ｓ１２５３’８Ａを含有する両分
が溶出され、次いで粗５ｓ１２５３８Ｂを含有する両分
が溶出される。後者の両分を分取し、溶媒を留去すると
淡黄色油状の５ｓ１２５３ＢＢの粗精製物約０．５ｇが
得られた。このＳＳＢ１２５３８Ｂ精製物約０．５．９
ヲ少１ｍのベンゼン／酢酸エチル（１：１）に溶解し、
同浴様でシリカデル（メルク社製；キーゼルデル６０）
カラムクロマトグラフィー（カラムサイズ２ｃｒｒＬｘ
３０ｃｒｆＬ）に付した。

Ｓ　Ｓ　１２，５３８　Ｂの溶出区分を集め溶媒を留去
すると純粋なｓｓ　１２５３８Ｂの無色油状物約０．１
２．！ｉ’が得られた。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の生理活性物質５ｓ１２５３８Ｂの紫外
線吸収スペクトル（＃媒：メタノール）である。 第２図は本発明の生理活性物質８８１２５３８Ｂの赤外
線吸収スペクトル（液膜法）である。 第６図は本発明の生理活性物質ｓｓ　１２５３８Ｂ１１
′ （Ｄ　ＩＨ−Ｎ　Ｍ　Ｒスペクトル（溶媒二重クロロホ
ルム）である。 第１頁の続き ０発　明　者　横井好− 相市相７−３−３コーポ金子２０ ′　３号 ０発　明　者　中島利章 千葉県印施郡酒々井町東酒々井 −４−７２

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ＋１１　　下記の理化学的性質を有する生理活性物質８
   ８１２５３８Ｂ。 ■　物質の色及び性状：無色の油状物質■　分、予断（
   ｓｓ１２５３ＢＢのアセテートのマススペクトルより） ８６ ■　８１層クロマトグラフィー 担体ニジリカゲルプレートＦ２５４ （メルク社製） ■　離合反応 ２．４−ジニトロフェニルヒドラジン試薬で黄色を呈す
   る。アニスアルデヒド硫酸で声紫色を呈する。塩化第２
   鉄反応は陰性である。 ■　溶剤に対する溶解性 クロロホルム、酢酸エチル、アセトン、エチルエーテル
   、エタノール１．メタノール、ビリシン、ベンゼン、ジ
   メチルスルホキシドに可溶。水に難溶。 ■　紫外線吸収スペクトル １％ ２Ｍ８”　　２３９ｎｍ　　Ｅ　　　　１０１０　　（
   第１図）ｍａｘ　　　　　　　　ｌ　ａｎ ■　赤外腓吸収スペクトル（酸膜法） 第２図 ■　ＩＨ−ＮＭＲスペクトル（９０ＭＨｚ　＞重クロロ
   ホルム溶液中ＴＭＳを基準物質として測定した。ｔＡ３
   図 ■　１３Ｃ−Ｎ　Ｍ　Ｒスペクトル １クロロホルム癖液中ＴＭＳを基葦物質声して測定した
   。 δ（ｐｐｍ）　　１８１−５．１６７．２．１５９．１
   ．１３８．１．１３６．４．１３５．９．１３５．２．
   １３３．９、１２５．２、１２２．９、１１８．４、１
   １７．８．８８．４．８２．６．５５．８．４２．９．
   ３６．８、６０．２、１７．４、１６．５．１６．１、
   １６．１、１０．６、９．４■　分子式（ＮＭＲ及びマ
   ススペクトルより）Ｃ２４Ｈ３ａＯａ （２）構造、が次の式 で表わされるものである特許請求の範囲第１項記載の生
   理活性物質Ｓ’８１２５３８Ｂ。 １ （３）　　ストレゾトミセス属に属する生理活性物質重 ８８１２５３８Ｂ生産、菌を培養し、その培養物から下
   記の理化学的性質を有する生理活性物質５ｓ１２５３８
   Ｂｓ ■　物質の色及び性状：無色の油状物’ｆ４■　分子量
   （ＳＳ１２５３８Ｂのアセテートのマススペクトルより
   ） ８６ ■　薄層クロマトグラフィー 担体ニジリカデルプレートＦ’２ａ４ （メルク社製） ■　緘色反応 ２．４−ジニトロフェニルヒドラジン試畢で黄色を呈す
   る。アニスアルデヒド硫Ｍで濃紫色を呈する。塩化第２
   鉄反応は陰性である。 ■　溶剤に対する溶解性 、。。、ｊ’、””’／ｌ、””’Ａ、ｌ！Ｉ￥　ｉ！
   ！！　！　ｆ　／Ｌ’、アヤＦ７、。 チルエーテル、エタノール、メタノール、ぎリジン、ベ
   ンゼン、ジメチルスルホキシドに可溶。水に離溶。 ■　紫外線吸収スペクトル １％　１０１０　　（第１図） 芦ＯＨ２３９ｎＯＨ２３９ｎ ａｘ ■　赤外緋吸収スペクトル（液膜法） 第２図 ■　ＩＨ−Ｎ　Ｍ　Ｒスペクトル（９０ＭＨ２）重、ク
   ロロホルム溶液中ＴＭ８を基準物質として測定した。第
   ６図 ■　１３Ｃ−Ｎ　Ｍ　Ｒスペクトル 重クロロホルム溶液中ＴＭ８を基準物質として測定した
   。 δ（ｐｐｍ）　　１８１．５．１６７．２．１５９．１
   ．１３８．１．１３６．４．１３５．９．１３５．２．
   １３３．９．１２５．２．１２２．９．１１８．４．１
   １７．８．８８．４．８２．６．５５．８．４２，９．
   ６６．８．３０．２．１７．４．１６．５．１６．１．
   １３．１．１０．６％９・４ ■　分子式（ＮＭＲ及びマススペクトルより）０２４Ｈ
   ３４０４ を採板することを特徴とする生理粘性物ＩＩ匂５ｓ１２
   ５３８Ｂの製造法。