JPS5829080B2 - モノアミンオキシダ−ゼ ノ ソクテイホウ - Google Patents
モノアミンオキシダ−ゼ ノ ソクテイホウInfo
- Publication number
- JPS5829080B2 JPS5829080B2 JP3866872A JP3866872A JPS5829080B2 JP S5829080 B2 JPS5829080 B2 JP S5829080B2 JP 3866872 A JP3866872 A JP 3866872A JP 3866872 A JP3866872 A JP 3866872A JP S5829080 B2 JPS5829080 B2 JP S5829080B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- monoamine oxidase
- benzaldehyde
- visible region
- absorption
- benzylamine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
この発明はベンジルアミン同族体を含む基質溶液（以下
基質溶液と称す）を用い酵素学的反応を行なわせ、生体
試料中に含まれるモノアミンオキシダーゼの量に比例し
て生成するベンツアルデヒド同族体を適当な方法で反応
液から分離して得られたベンツアルデヒド同族体溶液の
可視部における適当に選ばれた波長を用い比色すること
によって生体試料中に含まれていたモノアミンオキシダ
ーゼ活性度を知る方法に関する。
基質溶液と称す）を用い酵素学的反応を行なわせ、生体
試料中に含まれるモノアミンオキシダーゼの量に比例し
て生成するベンツアルデヒド同族体を適当な方法で反応
液から分離して得られたベンツアルデヒド同族体溶液の
可視部における適当に選ばれた波長を用い比色すること
によって生体試料中に含まれていたモノアミンオキシダ
ーゼ活性度を知る方法に関する。
モノアミンオキシダーゼは生体内においてアミンの代謝
に関与する重要な酵素であって１次式（Ｉ）に従ってア
ミンの酸化的脱アミノ反応を触媒する酵素である。
に関与する重要な酵素であって１次式（Ｉ）に従ってア
ミンの酸化的脱アミノ反応を触媒する酵素である。
最近モノアミンオキシダーゼについて肝硬変症の大部、
慢性心不全、糖尿病あるいは甲状腺機能亢進症の若干例
で異常値を示すことが報ぜられている。
慢性心不全、糖尿病あるいは甲状腺機能亢進症の若干例
で異常値を示すことが報ぜられている。
従来、肝の臨床においては肝内の線維増生の状態を正確
に知る方法として針生検あるいは腹腔鏡下の針生検が行
なわれていた。
に知る方法として針生検あるいは腹腔鏡下の針生検が行
なわれていた。
これらの方法をもってしては観察材料の制約あるいは頻
回に実施することの困難さから多くを期待できず、これ
に代る有効な手段として体液を用いるか、結合組織中の
化学的物質の測定あるいはこれら物質の代謝に関与する
酵素の活性度を測定し疾患の度合を窺知しようとする試
みがなされ多数の症例につき測定した結果、血中モノア
ミンオキシダーゼの測定が肝線維症の有力なる補助診断
法たりうるという結論が提出されている。
回に実施することの困難さから多くを期待できず、これ
に代る有効な手段として体液を用いるか、結合組織中の
化学的物質の測定あるいはこれら物質の代謝に関与する
酵素の活性度を測定し疾患の度合を窺知しようとする試
みがなされ多数の症例につき測定した結果、血中モノア
ミンオキシダーゼの測定が肝線維症の有力なる補助診断
法たりうるという結論が提出されている。
（伊藤憲−１他五名：最近医学、２５巻、第１１号、２
３４２頁）生体試料中のモノアミンオキシダーゼ活性度
の測定法としては、種々の方法があるが、公知文献（Ｃ
ｈａｌｅｓ Ｍ、ＭｃＥｗｅｎ ： Ｊ、 Ｂｉｏｌ、
Ｃｈｅｍ。
３４２頁）生体試料中のモノアミンオキシダーゼ活性度
の測定法としては、種々の方法があるが、公知文献（Ｃ
ｈａｌｅｓ Ｍ、ＭｃＥｗｅｎ ： Ｊ、 Ｂｉｏｌ、
Ｃｈｅｍ。
２４０．２００３．１９６５）のようにベンツアルデヒ
ドの紫外線吸収スペクトルを分光学的にすなわち２５０
ｎｍにおける吸光度を測定し、生成ベンツアルデヒド量
を知り試料中のモノアミンオキシダーゼ活性度を知る方
法は紫外部の吸光度を測定するという操作が通常の検査
室への普及の障害となって実用性を失っている。
ドの紫外線吸収スペクトルを分光学的にすなわち２５０
ｎｍにおける吸光度を測定し、生成ベンツアルデヒド量
を知り試料中のモノアミンオキシダーゼ活性度を知る方
法は紫外部の吸光度を測定するという操作が通常の検査
室への普及の障害となって実用性を失っている。
また、該酵素によって生成するアンモニアを測定する方
法は生体試料中には揮発性アミン類ならびに該反応以外
に予め試料中に含まれるアンモニアの影響を受は正確な
値を得難い。
法は生体試料中には揮発性アミン類ならびに該反応以外
に予め試料中に含まれるアンモニアの影響を受は正確な
値を得難い。
モノアミンオキシダーゼは（Ｉ）反応によって酸素を消
費するから、消費酸素量を検圧計によって測定する方法
があるが感度が低いため、微量の生体試料を用いる臨床
検査には応用し難い。
費するから、消費酸素量を検圧計によって測定する方法
があるが感度が低いため、微量の生体試料を用いる臨床
検査には応用し難い。
又、生成する過酸化水素をカタラーゼと反応性色素を用
いて測定し、活性値を求める方法は反応性色素が測定操
作中に変化し誤差の原因となり正確を期し難いなど従来
の該酵素の測定法はすべて実用し難い種々の欠点を有し
ていた。
いて測定し、活性値を求める方法は反応性色素が測定操
作中に変化し誤差の原因となり正確を期し難いなど従来
の該酵素の測定法はすべて実用し難い種々の欠点を有し
ていた。
本発明者らは従来のかかる欠点を有するモノアミンオキ
シダーゼ活性度の測定法に関し鋭意研究Ｑ結果、病院の
検査室あるいは臨床検査センターなどにおいて日常検査
として容易に実施し得る実用性ある方法を発明した。
シダーゼ活性度の測定法に関し鋭意研究Ｑ結果、病院の
検査室あるいは臨床検査センターなどにおいて日常検査
として容易に実施し得る実用性ある方法を発明した。
すなわち常法に従って生体試料と基質溶液とを混合し、
一定時間前置し試料中に含まれるモノアミンオキシダー
ゼの量に比例して生成する微量のベンツアルデヒド同族
体を適当な方法で分離して得られるベンツアルデヒド同
族体溶液を通常の分光光度計あるいは比色計を用いて測
定することにより試料中に存在していたモノアミンオキ
シダーゼの活性度を正確に定量できる方法を発見し、本
発明を完成したものである。
一定時間前置し試料中に含まれるモノアミンオキシダー
ゼの量に比例して生成する微量のベンツアルデヒド同族
体を適当な方法で分離して得られるベンツアルデヒド同
族体溶液を通常の分光光度計あるいは比色計を用いて測
定することにより試料中に存在していたモノアミンオキ
シダーゼの活性度を正確に定量できる方法を発見し、本
発明を完成したものである。
さらに詳しくは、たとえば常法に従って基質溶液と生体
試料とを混合し好ましくは３７℃の水浴につげ、一定時
間前置すると試料中のモノアミンオキシダーゼの酵素学
的触媒作用により基質成分であるベンジルアミン同族体
は酸化的脱アミン反応によりそれぞれに相当するベンツ
アルデヒド同族体に変化する。
試料とを混合し好ましくは３７℃の水浴につげ、一定時
間前置すると試料中のモノアミンオキシダーゼの酵素学
的触媒作用により基質成分であるベンジルアミン同族体
は酸化的脱アミン反応によりそれぞれに相当するベンツ
アルデヒド同族体に変化する。
反応液に、ベンジルアミン同族体は溶解せずベンツアル
デヒド体のみを溶解し、さらに水に難溶な溶媒たとえば
シクロヘキサンを添加して振とう抽出して溶媒層を分離
するとベンツアルデヒド同族体を含む溶液が得られるか
ら分光学的に見てそれぞれに至適の波長における吸光度
を測定し、酵素反応によって生成したベンツアルデヒド
同族体の量を知り生体試料中に含まれていたモノアミン
オキシダーゼの活性度を測定するものである。
デヒド体のみを溶解し、さらに水に難溶な溶媒たとえば
シクロヘキサンを添加して振とう抽出して溶媒層を分離
するとベンツアルデヒド同族体を含む溶液が得られるか
ら分光学的に見てそれぞれに至適の波長における吸光度
を測定し、酵素反応によって生成したベンツアルデヒド
同族体の量を知り生体試料中に含まれていたモノアミン
オキシダーゼの活性度を測定するものである。
また、上記方法の変法として１選択されたベンジルアミ
ン同族体を含む基質溶液を用い常法通り酵素反応を行な
った後、反応液を酸性となし、水に難溶な適当な溶媒で
抽出することにより、ベンツアルデヒド同族体のみを溶
媒層に抽出分離する方法も可能である。
ン同族体を含む基質溶液を用い常法通り酵素反応を行な
った後、反応液を酸性となし、水に難溶な適当な溶媒で
抽出することにより、ベンツアルデヒド同族体のみを溶
媒層に抽出分離する方法も可能である。
ここに用いる水に難溶な溶媒としてはシクロヘキサンの
他デカリン、ヘキサン、キシレン、酢酸エチル、酢酸イ
ソプロピル、エチルエーテル等一般に芳香族、脂肪族、
エステル類。
他デカリン、ヘキサン、キシレン、酢酸エチル、酢酸イ
ソプロピル、エチルエーテル等一般に芳香族、脂肪族、
エステル類。
エーテル類、ケトン類の有機溶媒が有効に利用できる。
また反応液を酸性に維持する酸物質として＋’３塩酸、
過塩素酸、トリクロル酢酸、酢酸等一般に無機酸、有機
酸類が有効に利用でき、特に種類は限定されない。
過塩素酸、トリクロル酢酸、酢酸等一般に無機酸、有機
酸類が有効に利用でき、特に種類は限定されない。
以上の説明で明らかなように本発明は従来紫外部で実施
されていた測定が可視部で感度よく正確に測定できるよ
うになったことから生体試料中のモノアミンオキシダー
ゼが病院などの検査室で既に常置されている分光光度計
又は比色計を用い容易に測定できるようになった点にお
いて日常検査への応用性が拡大され臨床医学に貢献する
ところ大なるものがある。
されていた測定が可視部で感度よく正確に測定できるよ
うになったことから生体試料中のモノアミンオキシダー
ゼが病院などの検査室で既に常置されている分光光度計
又は比色計を用い容易に測定できるようになった点にお
いて日常検査への応用性が拡大され臨床医学に貢献する
ところ大なるものがある。
さらに従来紫外領域で測定されていた測定が可視領域で
測定できるようになったことは生体試料中に含まれ、測
定に障害を与える物質の影響も少なくなり、より真値に
近い値が得られるようになったことは本発明の他方の大
きな利点である。
測定できるようになったことは生体試料中に含まれ、測
定に障害を与える物質の影響も少なくなり、より真値に
近い値が得られるようになったことは本発明の他方の大
きな利点である。
以下実施例を挙げ詳細に説明する。
実施例に記載されたものはその一例を述べたもので本発
明はかかる実施例に限定されるものではない。
明はかかる実施例に限定されるものではない。
またかかる本発明の範囲に包含される試薬ならびに反応
剤の全ての比率、時間、温度ならびに、ｐＨ条件におけ
る変形が当業者によって容易に決められることが理解さ
れるであろう。
剤の全ての比率、時間、温度ならびに、ｐＨ条件におけ
る変形が当業者によって容易に決められることが理解さ
れるであろう。
実施例 １
０．１Ｍ）’Ｊスス−酸緩衝液に化合物（Ｉ［［）を溶
解して基質緩衝液を調製する。
解して基質緩衝液を調製する。
標準液としては既知の活性を持つ血清を用いることが望
ましいが化合物［）の一定量を含む溶液を用いることが
できる。
ましいが化合物［）の一定量を含む溶液を用いることが
できる。
遠沈管に基質緩衝液２．０ ｍｌをとり３７℃で３分間
加温したのち、血清０．３ ｒｕｌを加え３７℃恒温水
槽中で２時間インキュベートする。
加温したのち、血清０．３ ｒｕｌを加え３７℃恒温水
槽中で２時間インキュベートする。
反応液に。シクロヘキサン４ｒｒｔｌを加えてバイブロ
ミキサーで３０秒間振とう抽出し３０００ｒ、ｐ、ｍ、
でｉ。
ミキサーで３０秒間振とう抽出し３０００ｒ、ｐ、ｍ、
でｉ。
分間遠心分離して上層（抽出層）をとる。
この際抽出層の分離を容易にするために硫酸ナトリウム
約１０■を加えるとよい。
約１０■を加えるとよい。
血清の代りに標準液０．３ ｍｌならびに蒸留水０．３
１１Ｌｌをそれぞれ遠沈管にとり血清と同様に操作して
上層をとる。
１１Ｌｌをそれぞれ遠沈管にとり血清と同様に操作して
上層をとる。
呈色のピークは４８０ｎｍにあるので、蒸留水を用いて
操作した試薬盲検を対照にして血清ならびに標準液を用
いて操作した呈色液の吸光度を４８０ｎｍで比色する。
操作した試薬盲検を対照にして血清ならびに標準液を用
いて操作した呈色液の吸光度を４８０ｎｍで比色する。
血清中のモノアミンオキシダーゼによって生成したベン
ツアルデヒド体量は次の式で算出される。
ツアルデヒド体量は次の式で算出される。
血清モノアミンオキシダーゼの活性は血清０．３ｍｌを
用い２時間インキュベートして生成したアルデヒド量か
ら血清１１ｒＬｌあたり１時間インキュベートした場合
に生成するアルデヒド量に換算し次のように単位が求め
られる。
用い２時間インキュベートして生成したアルデヒド量か
ら血清１１ｒＬｌあたり１時間インキュベートした場合
に生成するアルデヒド量に換算し次のように単位が求め
られる。
実施例 ２
実施例１において化合物（ＩＩＩ）の代わりに化合物（
Ｖ）、化合物（ＩＶ）の代りに化合物（ＶＩ）を用いて
実施例１と同様に操作する。
Ｖ）、化合物（ＩＶ）の代りに化合物（ＶＩ）を用いて
実施例１と同様に操作する。
実施例 ３
実施例１においてシクロヘキサンの代すＫ ｎヘキサン
を用いて実施例１と同様に操作する。
を用いて実施例１と同様に操作する。
実施例 ４
実施例１と同様に基質緩衝液および標準液を調製する。
遠沈管に基質緩衝液１．０−をとり３７℃で３分間加温
したのち血清０．３ｍｌを加え３７℃恒温水槽水で２時
間インキュベートする。
したのち血清０．３ｍｌを加え３７℃恒温水槽水で２時
間インキュベートする。
反応液に塩酸を加えて酸性となしたのちシクロヘキサン
を加え以下実施例１と同様に操作する。
を加え以下実施例１と同様に操作する。
実施例 ５
実施例４において塩酸の代りに過塩素酸を加え以下実施
例４と同様に操作する。
例４と同様に操作する。
さらに、そのほかの、本発明の可視部に吸収をもつベン
ジルアミン同族体の具体例を表■に示す。
ジルアミン同族体の具体例を表■に示す。
又、上記基質に対応するベンツアルデヒド同族体のλｍ
ａｘを表■に示す。
ａｘを表■に示す。
但し、ｘ、ｙは表１と同様。
上述した実施例の種々の他の例ならびに変形は。
以上述べた記載ならびに特許請求範囲の記載に基いて１
本発明の精神と範囲を逸脱することなく当業者カ推考で
きるものである。
本発明の精神と範囲を逸脱することなく当業者カ推考で
きるものである。
したがって、その他の例ならびに変形は特許請求の範囲
に記載される本発明の範囲に包含されるものである。
に記載される本発明の範囲に包含されるものである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 可視部に吸収を持つ一般式■で表現されるベンジル
アミン同族体もしくはそのオルトまたはメタ異性体（以
下ベンジルアミン同族体と称す）、またはその塩を基質
とし、酵素学的反応を行なわせ、生成する可視部に吸収
を持つ一般式■で表現されるベンツアルデヒド同族体も
しくはそのオルトまたはメタ異性体（以下ベンツアルデ
ヒド同族体と称す）を反応液から分離し比色することを
特徴とする生体試料中に含まれるモノアミンオキシダー
ゼ活性度の測定方法。 上式中Ｒは可視部に吸収を持つ置換基、すなわち置換基
Ｒ１、又はＲ２もしくはその塩を表わし、ＯはＲのオル
ト位異性体、ｍはＲのメタ位異性体を表わす。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3866872A JPS5829080B2 (ja) | 1972-04-19 | 1972-04-19 | モノアミンオキシダ−ゼ ノ ソクテイホウ |
| DE2319097A DE2319097C3 (de) | 1972-04-19 | 1973-04-16 | Verfahren zur Bestimmung der enzymatischen Aktivität von Mono-Amin-Oxydase |
| US351642A US3894914A (en) | 1972-04-19 | 1973-04-16 | Determination of monoamine oxidase activity |
| FR7314130A FR2181376A5 (ja) | 1972-04-19 | 1973-04-18 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3866872A JPS5829080B2 (ja) | 1972-04-19 | 1972-04-19 | モノアミンオキシダ−ゼ ノ ソクテイホウ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS492594A JPS492594A (ja) | 1974-01-10 |
| JPS5829080B2 true JPS5829080B2 (ja) | 1983-06-20 |
Family
ID=12531637
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3866872A Expired JPS5829080B2 (ja) | 1972-04-19 | 1972-04-19 | モノアミンオキシダ−ゼ ノ ソクテイホウ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5829080B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60188590U (ja) * | 1984-05-22 | 1985-12-13 | 日本電気ホームエレクトロニクス株式会社 | 洗濯機の脚 |
-
1972
- 1972-04-19 JP JP3866872A patent/JPS5829080B2/ja not_active Expired
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60188590U (ja) * | 1984-05-22 | 1985-12-13 | 日本電気ホームエレクトロニクス株式会社 | 洗濯機の脚 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS492594A (ja) | 1974-01-10 |
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