JPH1192389A - 免疫賦活剤 - Google Patents
免疫賦活剤Info
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- JPH1192389A JPH1192389A JP9272157A JP27215797A JPH1192389A JP H1192389 A JPH1192389 A JP H1192389A JP 9272157 A JP9272157 A JP 9272157A JP 27215797 A JP27215797 A JP 27215797A JP H1192389 A JPH1192389 A JP H1192389A
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- immunostimulator
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Abstract
(57)【要約】
【目的】経口投与によって、免疫グロブリンＡ量を増加
させることのできる免疫賦活剤を提供する。 【構成】エンテロコッカス属の菌体または処理物を有効
成分とし、体内の免疫グロブリンＡ量を高め腸管免疫力
の促進を行うことができる。
させることのできる免疫賦活剤を提供する。 【構成】エンテロコッカス属の菌体または処理物を有効
成分とし、体内の免疫グロブリンＡ量を高め腸管免疫力
の促進を行うことができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、パイエル板内の免疫グ
ロブリンＡ（以下ＩｇＡ）を産生するＢ細胞や、Ｂ細胞
を活性化させるＴ細胞または抗原提示細胞を活性化さ
せ、感染症予防または有害な炎症の発生を抑制する作用
をもつＩｇＡの産生量を増強させる経口投与可能な製剤
に関するものである。
ロブリンＡ（以下ＩｇＡ）を産生するＢ細胞や、Ｂ細胞
を活性化させるＴ細胞または抗原提示細胞を活性化さ
せ、感染症予防または有害な炎症の発生を抑制する作用
をもつＩｇＡの産生量を増強させる経口投与可能な製剤
に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】生体が外界と接する境界には皮膚と粘膜
があるが、粘膜面積の方がはるかに広いことはよく知ら
れている。その中でも、腸管粘膜表面はもっとも広い面
積を有し、多くのウイルス、細菌、寄生虫、病原性抗原
や食物抗原が進入する場所である。そのため、腸管粘膜
には、それら異物抗原類から身体を守るための腸管免疫
システムが存在する。
があるが、粘膜面積の方がはるかに広いことはよく知ら
れている。その中でも、腸管粘膜表面はもっとも広い面
積を有し、多くのウイルス、細菌、寄生虫、病原性抗原
や食物抗原が進入する場所である。そのため、腸管粘膜
には、それら異物抗原類から身体を守るための腸管免疫
システムが存在する。
【０００３】病原性物質や異種たんぱくの進入を防ぐ作
用を有するものとして、ＩｇＡが存在する。このＩｇＡ
は、細菌やウイルスの中和、組織への細菌の付着の抑
制、食物抗原によるアレルギーの抑制に重要な役割を果
たしている。
用を有するものとして、ＩｇＡが存在する。このＩｇＡ
は、細菌やウイルスの中和、組織への細菌の付着の抑
制、食物抗原によるアレルギーの抑制に重要な役割を果
たしている。
【０００４】ＩｇＡの産生にはパイエル板内の白血球で
ある、Ｂ細胞、Ｔ細胞および抗原提示細胞が大きく係わ
っている。Ｔ細胞および抗原提示細胞は、Ｂ細胞を活性
化する作用を有している。そして活性化したＢ細胞の増
加によって、ＩｇＡの産生量が亢進することはすでに知
られている。
ある、Ｂ細胞、Ｔ細胞および抗原提示細胞が大きく係わ
っている。Ｔ細胞および抗原提示細胞は、Ｂ細胞を活性
化する作用を有している。そして活性化したＢ細胞の増
加によって、ＩｇＡの産生量が亢進することはすでに知
られている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】幼児や老人または体力
が低下したした人は免疫力が弱くなっており、病原菌な
ど外部からの異物に対する抵抗力が低いことが知られて
いる。そのため、細菌やウイルスの中和、組織への細菌
の付着の抑制、食物抗原によるアレルギーの抑制に重要
な役割を果たしているＩｇＡの産生量を高値に保つ作用
を有する食品が望まれている。
が低下したした人は免疫力が弱くなっており、病原菌な
ど外部からの異物に対する抵抗力が低いことが知られて
いる。そのため、細菌やウイルスの中和、組織への細菌
の付着の抑制、食物抗原によるアレルギーの抑制に重要
な役割を果たしているＩｇＡの産生量を高値に保つ作用
を有する食品が望まれている。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは真菌、細
菌、ウイルスに対する感染防御力を高める作用のあるエ
ンテロコッカス属に属する菌体に着眼した。その菌体を
用いて実験を行ったところ、実施例２に示したようにパ
イエル板構成細胞からのＩｇＡ産生量の増加が認められ
た。さらに、経口投与の場合にも同様の効果がみられた
ことより、本発明を完成させた。
菌、ウイルスに対する感染防御力を高める作用のあるエ
ンテロコッカス属に属する菌体に着眼した。その菌体を
用いて実験を行ったところ、実施例２に示したようにパ
イエル板構成細胞からのＩｇＡ産生量の増加が認められ
た。さらに、経口投与の場合にも同様の効果がみられた
ことより、本発明を完成させた。
【０００７】実施例３に示すようにパイエル板に含まれ
るリンパ球細胞の活性の指標となる幼若化反応の亢進も
濃度依存的にみられたことより、ＩｇＡ産生を行うＢ細
胞の活性化が強まり、異物に対する反応性が高まってい
ることも示されている。また、アジュバント効果も得ら
れると考えられる。
るリンパ球細胞の活性の指標となる幼若化反応の亢進も
濃度依存的にみられたことより、ＩｇＡ産生を行うＢ細
胞の活性化が強まり、異物に対する反応性が高まってい
ることも示されている。また、アジュバント効果も得ら
れると考えられる。
【０００８】この発明に使用する乳酸菌は、食用、もし
くは健常人の腸管に生息している菌株であるので、副作
用の危険性はない。また、実際に投与するには、生菌
体、死菌体、あるいは菌体を磨砕、抽出、溶菌などの処
理をしたものを用いることができる。これらを製剤にす
るにはデンプン、乳糖、大豆蛋白等の担体、賦形剤、結
合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯具剤等の添加物
を用いて周知の方法で錠剤や顆粒剤に製剤することがで
きる。
くは健常人の腸管に生息している菌株であるので、副作
用の危険性はない。また、実際に投与するには、生菌
体、死菌体、あるいは菌体を磨砕、抽出、溶菌などの処
理をしたものを用いることができる。これらを製剤にす
るにはデンプン、乳糖、大豆蛋白等の担体、賦形剤、結
合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯具剤等の添加物
を用いて周知の方法で錠剤や顆粒剤に製剤することがで
きる。
【０００９】使用量は、症状、年齢等により異なるが、
有効成分として１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重を通常成人に
対して１日１回又は数回に分けて投与することができ
る。
有効成分として１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重を通常成人に
対して１日１回又は数回に分けて投与することができ
る。
【００１０】
実施例１．菌体標品作製 エンテロコッカス・フェカリス（Enterococcus faecali
s）ＮＦ−１０１１（微工研菌寄第１２５６４号）を以
下に示す組成のロゴサ液体培地に接種し（菌数：１０6
個／ｍｌ）、３７℃で１０〜１６時間培養し、生菌数約
１０9個／ｍｌの培養液を得た。得られた培養液を１２,
０００×ｇで２０分間遠心分離して集菌し、蒸留水で２
回洗浄して菌体を得た。この菌体を蒸留水で懸濁し、１
１０℃で１０分間加熱して死菌体懸濁液を作製し、次
に、凍結乾燥法で乾燥処理して乾燥死菌体（以下菌体標
品）を得た。
s）ＮＦ−１０１１（微工研菌寄第１２５６４号）を以
下に示す組成のロゴサ液体培地に接種し（菌数：１０6
個／ｍｌ）、３７℃で１０〜１６時間培養し、生菌数約
１０9個／ｍｌの培養液を得た。得られた培養液を１２,
０００×ｇで２０分間遠心分離して集菌し、蒸留水で２
回洗浄して菌体を得た。この菌体を蒸留水で懸濁し、１
１０℃で１０分間加熱して死菌体懸濁液を作製し、次
に、凍結乾燥法で乾燥処理して乾燥死菌体（以下菌体標
品）を得た。
【００１１】ロゴサ液体培地の組成を示す。 トリプチケース １０ｇ 酵母エキス ５ｇ トリプトース ３ｇ リン酸一カリウム ３ｇ リン酸二カリウム ３ｇ クエン酸三アンモニウム ２ｇ ツイーン８０（界面活性剤） １ｇ グルコース ２０ｇ システイン塩酸塩 ０．２ｇ 塩類溶液（１のとおり） ５ｍｌ 蒸留水 １０００ｍｌ （ｐＨ７．０に調整、１２１℃で１５分間加熱滅菌） （１）塩類溶液：ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １１．５ｇ ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．６８ｇ ＭｎＳＯ4・２Ｈ2Ｏ ２．４ｇ 蒸留水 １００ｍｌ
【００１２】実施例２．マウスパイエル板細胞からのＩ
ｇＡ産生促進作用 ＢＡＬＢ／ｃマウス雄性８-１２週齢（日本ＳＬＣ）よ
りパイエル板を取り出し、酵素（Ｄｉｓｐａｓｅ II：
ベーリンガー・マンハイム）でシングル・セルにした。
１０％ＦＣＳ加ＲＰＭＩ培地中で細胞を５×１０6個に
調製し、９６穴平底プレートにモノレイヤーを作製し
た。ＩｇＡ誘導剤として、実施例１で作製した菌体標品
を０．１、１０、１００、１０００μｇ/ｍｌ添加し、
７日間混合培養した。混合培養終了後、上清を採取しＩ
ｇＡ量を測定した。
ｇＡ産生促進作用 ＢＡＬＢ／ｃマウス雄性８-１２週齢（日本ＳＬＣ）よ
りパイエル板を取り出し、酵素（Ｄｉｓｐａｓｅ II：
ベーリンガー・マンハイム）でシングル・セルにした。
１０％ＦＣＳ加ＲＰＭＩ培地中で細胞を５×１０6個に
調製し、９６穴平底プレートにモノレイヤーを作製し
た。ＩｇＡ誘導剤として、実施例１で作製した菌体標品
を０．１、１０、１００、１０００μｇ/ｍｌ添加し、
７日間混合培養した。混合培養終了後、上清を採取しＩ
ｇＡ量を測定した。
【００１３】得られたＩｇＡをＥＬＩＳＡ法にて測定し
た。測定方法はＲｏｂｅｒｔ．Ｌ．Ｃｏｆｆｍａｎらの
方法（Journal of Experimental Medicine vol.170 pp:
1039-1044 (1989)）を参考にして行った。
た。測定方法はＲｏｂｅｒｔ．Ｌ．Ｃｏｆｆｍａｎらの
方法（Journal of Experimental Medicine vol.170 pp:
1039-1044 (1989)）を参考にして行った。
【００１４】パイエル板細胞に何も添加せずに培養した
時の対照群の値を１とした時の比活性の結果を図１に示
す。菌体標品は濃度依存的にＩｇＡ産生量を増加させ、
１００、１０００μｇ/ｍｌ添加した時の比活性が１．
５、１．８となり、パイエル板細胞から有意（ｐ＜０．
０５）にＩｇＡ産生の増強がみられた。
時の対照群の値を１とした時の比活性の結果を図１に示
す。菌体標品は濃度依存的にＩｇＡ産生量を増加させ、
１００、１０００μｇ/ｍｌ添加した時の比活性が１．
５、１．８となり、パイエル板細胞から有意（ｐ＜０．
０５）にＩｇＡ産生の増強がみられた。
【００１５】実施例３．マウスパイエル板細胞のリンパ
球幼若化作用 実施例２で用いたパイエル板モノレイヤーを使用した。
菌体標品と混合培養後、上清を回収した後のパイエル板
モノレイヤーにＭＴＴ試薬を添加した。２時間後、パイ
エル板細胞がＭＴＴ試薬を取り込み産生した色素を抽出
し、波長５８８ｎｍで吸光度を測定して幼若化反応を測
定した。
球幼若化作用 実施例２で用いたパイエル板モノレイヤーを使用した。
菌体標品と混合培養後、上清を回収した後のパイエル板
モノレイヤーにＭＴＴ試薬を添加した。２時間後、パイ
エル板細胞がＭＴＴ試薬を取り込み産生した色素を抽出
し、波長５８８ｎｍで吸光度を測定して幼若化反応を測
定した。
【００１６】パイエル板細胞に何も添加せずに培養した
時の対照群の値を１とした時の比活性の結果を図２に示
す。菌体標品は濃度依存的に幼若化反応を強め、１０、
１００、１０００μｇ/ｍｌ添加したときに比活性の値
は、それぞれ１．４、１．６、１．８と有意（ｐ＜０．
０５）に増加した。
時の対照群の値を１とした時の比活性の結果を図２に示
す。菌体標品は濃度依存的に幼若化反応を強め、１０、
１００、１０００μｇ/ｍｌ添加したときに比活性の値
は、それぞれ１．４、１．６、１．８と有意（ｐ＜０．
０５）に増加した。
【００１７】実施例４．経口投与によるＩｇＡ産生増強
作用 ３週齢の雄性ＢＡＬＢ/ｃマウス（日本ＳＬＣ）を７匹
づつに分け、一方は実施例１で作製した菌体を５％混合
したＣＥ−２（日本クレア）を与えた（菌体標品群）。
もう一方にはＣＥ−２のみを与えた（対照群）。この飼
料は実験終了時まで与えた。
作用 ３週齢の雄性ＢＡＬＢ/ｃマウス（日本ＳＬＣ）を７匹
づつに分け、一方は実施例１で作製した菌体を５％混合
したＣＥ−２（日本クレア）を与えた（菌体標品群）。
もう一方にはＣＥ−２のみを与えた（対照群）。この飼
料は実験終了時まで与えた。
【００１８】経時的にマウスを代謝ゲージに入れて糞便
を採取し、得られた糞便を凍結乾燥した。凍結乾燥した
糞便を、１０ｍｇ/ｍｌになるように緩衝液に懸濁し
た。懸濁液を７００×ｇ、５分、４℃の条件で遠心分離
して上清を回収し、ＩｇＡサンプルとした。このサンプ
ルを最適濃度に希釈して、ＥＬＩＳＡ法で測定した。Ｅ
ＬＩＳＡの方法は、実施例２で行った方法と同様にして
行った。
を採取し、得られた糞便を凍結乾燥した。凍結乾燥した
糞便を、１０ｍｇ/ｍｌになるように緩衝液に懸濁し
た。懸濁液を７００×ｇ、５分、４℃の条件で遠心分離
して上清を回収し、ＩｇＡサンプルとした。このサンプ
ルを最適濃度に希釈して、ＥＬＩＳＡ法で測定した。Ｅ
ＬＩＳＡの方法は、実施例２で行った方法と同様にして
行った。
【００１９】糞便中ＩｇＡ量の経時的変化を図３に示
す。投与開始時の糞便中ＩｇＡ量は両群ともに糞便１ｇ
当たり約１５０ｎｇであった。投与開始５週まで経時的
にＩｇＡ量は増加したが、両群間に差はみられなかっ
た。しかし、投与開始から１０週以降に菌体標品群の糞
便中ＩｇＡは対照群と比較して増加し、菌体標品群およ
び対照群のＩｇＡ量はそれぞれ、１０週目には１２００
±４３０ｎｇおよび６３０±３７０ｎｇ、１３週目には
１４００±８００ｎｇおよび５４０±１３０ｎｇ、実験
終了時の１５週目（マウス週齢：１８週齢）には１２０
０±３１０ｎｇおよび６１０±２２０ｎｇと有意（ｐ＜
０．０５）な増加がみられた。
す。投与開始時の糞便中ＩｇＡ量は両群ともに糞便１ｇ
当たり約１５０ｎｇであった。投与開始５週まで経時的
にＩｇＡ量は増加したが、両群間に差はみられなかっ
た。しかし、投与開始から１０週以降に菌体標品群の糞
便中ＩｇＡは対照群と比較して増加し、菌体標品群およ
び対照群のＩｇＡ量はそれぞれ、１０週目には１２００
±４３０ｎｇおよび６３０±３７０ｎｇ、１３週目には
１４００±８００ｎｇおよび５４０±１３０ｎｇ、実験
終了時の１５週目（マウス週齢：１８週齢）には１２０
０±３１０ｎｇおよび６１０±２２０ｎｇと有意（ｐ＜
０．０５）な増加がみられた。
【００２０】実施例５．乳酸菌処理物によるＩｇＡ産生
増強作用 実施例１の方法に従って培養したエンテロコッカス・フ
ェカリスＮＦ−１０１１菌体を回収後、蒸留水に懸濁
し、ムタノリシンを３０μｇ/ｍｌ（終濃度）添加し、
３７℃で４時間処理後、１１０℃で１０分間加熱した。
この菌体懸濁液を、凍結乾燥法で乾燥処理して、乳酸菌
処理物を作製した。
増強作用 実施例１の方法に従って培養したエンテロコッカス・フ
ェカリスＮＦ−１０１１菌体を回収後、蒸留水に懸濁
し、ムタノリシンを３０μｇ/ｍｌ（終濃度）添加し、
３７℃で４時間処理後、１１０℃で１０分間加熱した。
この菌体懸濁液を、凍結乾燥法で乾燥処理して、乳酸菌
処理物を作製した。
【００２１】実施例４の方法に基づき、各群１０匹づつ
雄性ＢＡＬＢ/ｃマウス（日本ＳＬＣ）を飼育した。投
与開始から３週目には、乳酸菌処理物を投与した群の糞
便１ｇ中のＩｇＡ量は１４００±２７０ｎｇになり、対
照群の９７０±３４０ｎｇと比較して有意（ｐ＜０．０
５）に高い値が得られた。
雄性ＢＡＬＢ/ｃマウス（日本ＳＬＣ）を飼育した。投
与開始から３週目には、乳酸菌処理物を投与した群の糞
便１ｇ中のＩｇＡ量は１４００±２７０ｎｇになり、対
照群の９７０±３４０ｎｇと比較して有意（ｐ＜０．０
５）に高い値が得られた。
【００２２】
【発明の効果】経口投与によりＩｇＡの産生量が増加し
たことから、この食品を摂取することで感染症などの予
防に役立つことが期待される。また、糞便中のＩｇＡの
増加量が、幼年期から対照群に比べて多いことより、腸
管免疫力を促進する作用もあるといえる。
たことから、この食品を摂取することで感染症などの予
防に役立つことが期待される。また、糞便中のＩｇＡの
増加量が、幼年期から対照群に比べて多いことより、腸
管免疫力を促進する作用もあるといえる。
【図１】マウスパイエル板細胞のＩｇＡ産生量を比活性
で表したグラフである。
で表したグラフである。
【図２】マウスパイエル板細胞のリンパ球幼若化を比活
性で表したグラフである。
性で表したグラフである。
【図３】マウスに菌体標品を投与したときの糞便中Ｉｇ
Ａ量を示したグラフである。
Ａ量を示したグラフである。
Claims (3)
- 【請求項１】エンテロコッカス属に属する菌体、死菌体
もしくは化学・酵素処理または物理的処理による溶菌物
または破砕物を有効成分とする免疫賦活剤 - 【請求項２】経口投与によって、免疫グロブリンＡ産生
能を増強する作用を有する請求項１記載の免疫賦活剤 - 【請求項３】パイエル板内の白血球の幼若化作用を有す
る請求項１記載の免疫賦活剤
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9272157A JPH1192389A (ja) | 1997-09-17 | 1997-09-17 | 免疫賦活剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9272157A JPH1192389A (ja) | 1997-09-17 | 1997-09-17 | 免疫賦活剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1192389A true JPH1192389A (ja) | 1999-04-06 |
Family
ID=17509892
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9272157A Pending JPH1192389A (ja) | 1997-09-17 | 1997-09-17 | 免疫賦活剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1192389A (ja) |
Cited By (6)
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| WO2011108275A1 (ja) | 2010-03-04 | 2011-09-09 | 株式会社ロッテ | イムノグロブリンａ分泌促進剤 |
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1997
- 1997-09-17 JP JP9272157A patent/JPH1192389A/ja active Pending
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