JPH10175877A - ヘリコバクター・ピロリのウレアーゼ活性阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍などの予防剤や
治療剤として有効な、ヘリコバクター・ピロリが産生す
るウレアーゼの活性阻害作用を有し、かつ安全で長期投
与が可能なヘリコバクター・ピロリのウレアーゼ活性阻
害剤を提供する。 【解決手段】 ケイヒ抽出物を有効成分とし、特に、胃
炎、胃潰瘍又は十二指腸潰瘍の予防及び治療剤として用
いられるヘリコバクター・ピロリのウレアーゼ活性阻害
剤である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は新規なヘリコバクタ
ー・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒ
ｉ）のウレアーゼ活性阻害剤、さらに詳しくは、胃炎、
胃潰瘍、十二指腸潰瘍などの予防や治療剤として有効
な、ヘリコバクター・ピロリが産出するウレアーゼの活
性阻害作用をもつ薬剤に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】１９８３年に胃炎又は胃潰瘍患者の胃粘
膜生検組織から、カンピロバクター・ピロリ（Ｃａｍｐ
ｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）が高率に検出され
ることが報告［「ランセット（Ｌａｎｃｅｔ）」第１２
７３〜１２７５ページ（１９８３年）］されて以来、胃
炎あるいは胃・十二指腸潰瘍の発症に、この菌が関与し
ていることが次第に明らかにされてきた。この菌は、そ
の後、カンピロバクター属の他の菌とは別属に属するこ
とが証明され、ヘリコバクター・ピロリ（以下、単に
「ピロリ菌」ということがある）と改名され、胃炎ある
いは胃・十二指腸潰瘍疾患との関連性が深いことが、臨
床的にも明らかになってきた。

【０００３】このピロリ菌は、胃粘膜、特に胃の出口で
ある幽門部に好んで感染するグラム陰性のらせん状桿菌
であり、鞭毛をもつ微好気性菌である。ピロリ菌自体は
酸には弱いが、他の菌とは異なりウレアーゼを体表面に
もつことから、宿主由来の胃内の尿素をアンモニアに分
解して胃酸を中和するため、胃の中での生育が可能とな
る。

【０００４】このようなピロリ菌について、ＮＩＨ（Ｎ
ａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａ
ｌｔｈ）は、１９９４年２月に「ヘリコバクター・ピロ
リ陽性の消化性潰瘍症例は、初回あるいは再発にかかわ
らず除菌すべきである」と勧告声明を出しており、ま
た、ＷＨＯ（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉ
ｚａｔｉｏｎ）は、１９９４年に、ヘリコバクター・ピ
ロリは高率に発がんを誘発するものと認定している。

【０００５】ピロリ菌が胃内に定着・増殖し、病原性を
発揮する機構としては、ピロリ菌は、他の大腸菌と同じ
ように経口的に胃に到達し、鞭毛を使って粘液層を泳い
で胃粘膜層に至り、接着（癒着）し、ここで自ら産生す
るウレアーゼによって、宿主由来の尿素を分解し、アン
モニアを生成して胃酸を中和し、好ましい生活環境を整
備して増殖を開始するが、この際ピロリ菌が合成するア
ンモニアは、胃の粘膜の表面を覆う粘液を剥がして、粘
膜をむき出しの状態にするため、粘膜は胃酸にさらされ
て、炎症が起こるためであると一般に考えられている。

【０００６】そして、ピロリ菌が、このようにして粘膜
に住みつくと、インターロイキン（生理活性物質）を生
じ、その結果、リンパ球が増え、好中球（いずれも白血
球の仲間）に作用して活性化をもたらす。好中球の活性
化によって次亜塩素酸を生じ、この次亜塩素酸がアンモ
ニアと反応して、細胞に傷害を与える作用が強いモノク
ロラミンを生成する。このようにして炎症を起すことに
なるが、この際、ストレスなどによって胃酸の分泌が過
剰になると、粘膜はさらに傷付けられ、炎症が潰瘍に進
んでいくと考えられている。

【０００７】ところで、これまでこのようにして起こる
胃炎或は胃・十二指腸潰瘍の予防及び治療に、抗ヘリコ
バクター・ピロリ活性を有する抗生物質などを利用しよ
うとする試みが、種々行われてきた。例えば、ペニシリ
ン、アンピシリンなどのβラクタム剤、エリスロマイシ
ン、クラリスロマイシンなどのマクロライド剤、ストレ
プトマイシン等のアミノグリコシド剤、あるいはテトラ
サイクリン剤等の抗生物質、及びビスマス製剤のような
ピロリ菌に対して強い抗菌作用を示すものを投与するこ
とや、また、最近では、Ｈ₂受容体拮抗剤、プロトンポ
ンプ阻害剤などの抗消化性潰瘍剤において、ピロリ菌に
対する抗菌活性を併せもつ薬剤の開発も行われている。

【０００８】しかしながら、従来の抗生物質などの投与
では、長期投与時の安全性が問題とされており、また、
再発のおそれがある上、耐性菌が発生するおそれもあ
る。従来の薬剤の中でも臨床的に応用されてきているも
のもあるが、その評価が一定せず、安全で長期投与が可
能である有効な薬剤は、これまで見出されていないのが
実情であり、このような状況から、有効で安全な胃炎或
は胃・十二指腸潰瘍の予防及び治療に有効で安全な薬剤
の出現が望まれていた。

【０００９】他方、ウレアーゼ活性阻害剤としては、例
えばヒドロキサム酸（特許第１４３２７５６号）及びそ
の変異体やジスルフィドなどが知られているが、食生活
上で使用経験が長く、安全性の確認された香辛料、特に
ケイヒから得られた抽出物が強いウレアーゼ阻害作用を
もつことは、これまで知られていない。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、このような
事情のもとで、ピロリ菌が産生するウレアーゼの活性阻
害作用を有し、しかも安全で長期投与が可能であって、
胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍などの予防及び治療剤とし
て有効な薬剤を提供することを目的としてなされたもの
である。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、安全で長
期投与が可能なピロリ菌のウレアーゼ活性阻害剤を開発
すべく鋭意研究を重ねた結果、従来よりシナモンとして
食品の香辛料などに多用され、また神経性胃炎治療剤と
して著名な安中散を始めとし、種々の漢方薬の成分とし
て用いられているケイヒの抽出物が、ピロリ菌の産生す
るウレアーゼの活性阻害作用を有し、このものを有効成
分として含有するものが、前記目的に適合しうることを
見出し、この知見に基づいて本発明を完成するに至っ
た。

【００１２】すなわち、本発明は、ケイヒ抽出物を有効
成分とすることを特徴とするヘリコバクター・ピロリの
ウレアーゼ活性阻害剤を提供するものである。

【００１３】

【発明の実施の形態】本発明のウレアーゼ活性阻害剤に
おいて、有効成分として用いられるケイヒ抽出物の原料
であるケイヒ（Ｃｉｎｎａｍｏｍｉ Ｃｏｒｔｅｘ）
は、クスノキ科の常緑樹であって、葉、枝根部に独特の
芳香をもち、それから得られた精油は、古くからシナモ
ン（Ｃｉｎｎａｍｏｎ）として、食品の賦香などに用い
られている。また、ケイヒは、漢方薬の成分として、安
中散を始め、温経湯、黄連湯、葛根湯、桂枝湯、桂枝加
芍薬湯などの多くの漢方薬に使用されている。このよう
に、ケイヒは、古くから食品用香辛料や漢方薬などに用
いられており、その安全性については全く問題はない。

【００１４】ケイヒの抽出方法については特に制限はな
いが、高極性物質が高濃度で抽出されるような方法が好
ましい。抽出溶剤としては、水性溶媒例えば水、又は水
とアルコールとの混合物が好適である。このアルコール
としては、メタノールやエタノールなどの低級アルコー
ルが好ましい。

【００１５】次に、ケイヒの抽出処理の好適な１例につ
いて説明する。まずケイヒの葉、樹皮、小枝、根などを
十分に乾燥したのち、細断、粉砕などの前処理を施し、
粉末状にする。次に、この粉末１ｋｇに対し、前記抽出
溶剤、例えば水を５〜５０リットル程度加え、抽出処理
する。この抽出処理は室温で行ってもよいが、３０〜１
００℃程度に加温して行ってもよい。この際、溶剤抽出
を効果的に行うために、抽出溶剤が内部まで十分に浸透
するように、適当にかきまぜるのが有利である。

【００１６】抽出処理終了後、ろ過、遠心分離、デカン
テーションなどの公知の手段を用いて固液分離する。得
られた抽出液は、必要に応じ、減圧濃縮したのち、ｎ‐
ヘキサンなどの炭化水素系溶剤を加え、十分にかきまぜ
又は振とう後、炭化水素系溶剤層と水層とに分離する。
次いで、水層をカラムクロマトグラフィーに付し、メタ
ノール溶出部と水溶出部に分離する。メタノール溶出部
から、メタノールを留去することにより、所望のケイヒ
抽出物が得られる。メタノールの留去手段については特
に制限はなく、従来慣用されている方法を用いることが
できる。

【００１７】なお、ケイヒ粉末を抽出処理する前に、予
め水蒸気蒸留又はｎ‐ヘキサンなどの炭化水素系溶剤に
よって、脱精油処理しておくことにより、上記抽出処理
を効率よく行うことができる。

【００１８】本発明のヘリコバクター・ピロリのウレア
ーゼ活性阻害剤は、このようにして得られたケイヒ抽出
物を有効成分として含有するものであるが、該ケイヒ抽
出物は、そのまま、あるいは、希釈又は濃縮若しくは凍
結乾燥したのち、粉末状又はペースト状に調製し、所望
により適宜製剤化して、胃炎、胃潰瘍又は十二指腸潰瘍
の予防剤及び治療剤として用いることができる。

【００１９】また、製剤中のケイヒ抽出物の含有量は、
乾燥重量として、通常０．０００１〜５０重量％、好ま
しくは０．００１〜３０重量％の範囲である。製剤の剤
形については特に制限はなく、例えば錠剤、カプセル
剤、丸剤、顆粒剤、液剤など、いずれであってもよい。
さらに、この剤形に応じて、賦形剤などの添加剤を適宜
用いることができる。また、本発明のウレアーゼ活性阻
害剤には、所望により、制酸剤や胃粘膜修復剤などの他
の有効成分を配合してもよい。

【００２０】さらに、本発明のウレアーゼ活性阻害剤
は、例えば常法に従って液体や固形の食品の形に調製す
ることができ、一般によく知られている他の食品素材、
香料なども適宜併用することができる。このような他の
食品素材としては、従来食品分野において慣用されてい
るもの、例えば小麦粉、デンプン、タンパク質やその分
解物、糖質、脂質、ビタミン類、ミネラルなどが挙げら
れる。

【００２１】

【発明の効果】本発明のウレアーゼ活性阻害剤は、ピロ
リ菌が産生するウレアーゼの活性阻害作用を有し、しか
も安全で長期投与が可能であって、胃炎、胃潰瘍、十二
指腸潰瘍などの予防及び治療剤として有効である。ま
た、本発明のウレアーゼ活性阻害剤は、医薬品の形態及
び食品の形態のいずれの形態としても提供することがで
きる。

【００２２】

【実施例】次に、本発明を実施例及び試験例によりさら
に詳細に説明するが、本発明は、これらの例によってな
んら限定されるものではない。

【００２３】実施例１ 広南ケイヒ粉末２．０ｋｇを水１５リットル中に投入
し、４０℃で５時間抽出処理を行ったのち、これを遠心
分離機にかけて、固形物と抽出液とに分離した。次い
で、抽出液を全量が２．２リットルになるまで濃縮し
た。この濃縮液を２等分し、一方の濃縮液１．１リット
ルを凍結乾燥したところ、固形物６１．１ｇが得られ、
水による抽出物の収率は６．１１重量％であった。次
に、残りの濃縮液１．１リットルについて、ｎ‐ヘキサ
ン１．１リットルによる抽出処理を３回行ったところ、
ｎ‐ヘキサン可溶画分は４６０ｍｇであり、その収率は
０．０４６重量％であった。一方、ｎ‐ヘキサンによる
抽出処理後の水層はカラムクロマトグラフィー（カラ
ム：径８．２ｃｍ、長さ３１ｃｍ、充填剤：ＭＣＩ−ｇ
ｅｌ ＣＨＰ−２０）に付し、水２リットル及びメタノ
ール１リットルを用いて溶出し、水溶出部とメタノール
溶出部に分離し、メタノール溶出部を濃縮乾燥してこの
ケイヒ抽出物（イ）１７．７７ｇ（収率１．７８重量
％）を得た。さらにケイヒ抽出物（イ）６ｇをメタノー
ル１００ミリリットルに溶解し、カラムクロマトグラフ
ィー（カラム：径４ｃｍ、長さ３５ｃｍ、充填剤：Ｓｅ
ｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０）に付し、エタノール及びメ
タノールで順次溶出し、９個のフラクションを得た。そ
れぞれのフラクションを濃縮乾燥することにより、ケイ
ヒ抽出物（ロ）〜（ヌ）を得た。一方、水溶出部を凍結
乾燥したところ、ケイヒ抽出物（ル）３１．４３ｇ（収
率３．１４重量％）を得た。

【００２４】実施例２ ベトナムケイヒ末２．０ｋｇを水１５リットル中に投入
し、４０℃で５時間抽出処理を行ったのち、遠心分離し
て抽出液から固形分を除去した。次いで、この抽出液を
１．５リットルになるまで減圧濃縮したのち、凍結乾燥
することにより固形生成物１０５．９８ｇ（収率１０．
５９％）を得た。このようにして得た固形生成物のうち
５５．９３ｇを水１リットルに溶解し、カラムクロマト
グラフィー（カラム：径８．２ｃｍ、長さ３１ｃｍ、充
填剤：ＭＣＩ−ｇｅｌ ＣＨＰ−２０）に付し、水４リ
ットル及びメタノール３リットルで溶出した。この溶出
液を凍結乾燥することにより、水溶出部からケイヒ抽出
物（ヲ）４０．０４ｇ（収率３．７９％）、メタノール
溶出部からケイヒ抽出物（ワ）１４．１６ｇ（収率１．
３４％）を得た。

【００２５】実施例３ 広南ケイヒ末１．０ｋｇを、水１．５リットルずつを用
い６０℃で各３時間ずつ３回抽出したのち、各抽出液を
合し、１．５リットルになるまで濃縮した。次いで、こ
の水抽出液を水飽和ｎ‐ブタノール１．５リットルで２
回抽出したのち、このｎ‐ブタノール抽出液を濃縮、乾
固し、ｎ‐ブタノール抽出物１６．３ｇを得た。このｎ
‐ブタノール抽出物にｎ‐ヘキサン３００ミリリットル
を加え、６０℃で１時間還流抽出し、ヘキサン抽出液を
濃縮、乾固し、ヘキサン抽出液０．２１ｇを得た。この
残留物に対し、アセトン３００ミリリットルで３０分間
還流抽出する操作を３回繰り返したのち、アセトン抽出
液を濃縮、乾固し、アセトン抽出物９．９８ｇを得た。
この残留物を乾燥し、ケイヒ抽出液（カ）６．０ｇを得
た。

【００２６】実施例４ ベトナムケイヒ末１．０ｋｇを６０℃の水１．５リット
ルで３時間抽出する操作を３回繰り返したのち、水抽出
液を合し、１．５リットルまで濃縮した。次いで、この
水抽出液を、水飽和ｎ‐ブタノール１．５リットルで２
回抽出したのち、ｎ‐ブタノール抽出液を濃縮、乾固
し、ｎ‐ブタノール抽出物１５．３ｇを得た。このブタ
ノール抽出物に、ヘキサン３００ミリリットルを加え、
６０℃で１時間還流抽出し、ヘキサン抽出液を濃縮、乾
固し、ヘキサン抽出液０．８３ｇを得た。抽出物に対
し、アセトン３００ミリリットルで３０分間還流抽出す
る操作を３回繰り返したのち、アセトン抽出液を濃縮、
乾固し、アセトン抽出物３．０７ｇを得た。この残留物
を乾燥し、ケイヒ抽出物（ヨ）１．２２ｇを得た。

【００２７】試験例 実施例１で得た（イ）〜（ヌ）の各画分及び実施例２で
得た（ヲ）、（ワ）、実施例３で得た（カ）についてウ
レアーゼ活性阻害測定試験を、ピロリ菌由来のウレアー
ゼと構造的に類似し、一般的にピロリ菌由来のウレアー
ゼの活性阻害測定に使用されるナタ豆（ジャックビー
ン）由来のウレアーゼを用い、下記の方法により実施し
た。¹³Ｃ−標識尿素（９９原子％¹³Ｃ、トレーサーテク
ノロジー社製）１ｍｇを、外径５ｍｍのＮＭＲチューブ
内に入れ、１／１５モル／リットル濃度のリン酸ナトリ
ウム緩衝液（ｐＨ７）５８０μｌを加えて¹³Ｃ−尿素を
溶解し、¹³Ｃ−ＮＭＲ測定を行って¹³Ｃ−尿素のシグナ
ルを確認したのち、ＮＭＲチューブを１０分間氷冷し
た。¹³Ｃ−ＮＭＲのリファレンスとしてＴＳＰ（３‐ト
リメチルシリルプロピオン酸ナトリウム−ｄ₄）を用
い、ＴＳＰのシグナルを０ｐｐｍとした。

【００２８】一方、ウレアーゼ［ナタ豆由来、和光純薬
（株）製］３０ｍｇを１／１５モル／リットル濃度のリ
ン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７）２０ｍｌ中に含有する
ウレアーゼ溶液を１０分間氷冷したのち、このウレアー
ゼ溶液２０μｌを上記のＮＭＲチューブ内に加えて、た
だちに¹³Ｃ−ＮＭＲ測定を開始し、１分後から１５分後
まで１分毎に積算回数２０回（測定時間１分間）として
ＮＭＲスペクトルを測定した。

【００２９】図１は、１分後から１５分後まで１分毎に
測定したＮＭＲスペクトルを、リファレンス（ＴＳＰ）
のシグナルの高さが一定になるように重ね書きしたもの
である。１分後のスペクトルに、尿素のシグナル（１６
５．２ｐｐｍ）と¹³Ｃ−標識尿素から生成した¹³Ｃ−標
識二酸化炭素由来の二酸化炭素（炭酸塩）のシグナル
（１６２．６ｐｐｍ）を確認することができた。

【００３０】尿素のシグナルは時間の経過とともに減少
し、一方、二酸化炭素のシグナルが経時的に増加してい
く様子が確認できた。なお、測定終了後の反応液のｐＨ
は８であった。また、測定後のＮＭＲチューブの内部か
ら気体を抜き取り、ＧＣ−ＭＳ測定を行ったところ、¹³
Ｃ−標識二酸化炭素（ｍ／ｚ：４５）の存在が確認でき
た。

【００３１】上記方法により、ＮＭＲチューブにウレア
ーゼ溶液、被検薬物として実施例で得られたケイヒ抽出
物（イ）〜（カ）と表１に示す種類の他の生薬及び¹³Ｃ
−標識尿素を加え、¹³Ｃ−ＮＭＲ測定を行い、¹³Ｃ−標
識尿素の消失時間を、被検薬物を加えていない状態での
それをコントロールとして比較検討した。その結果を表
１に示す。なお、参考のため、従来知られているウレア
ーゼ活性阻害剤であるヒドロキサム酸及びジスルフィド
の¹³Ｃ−標識尿素の推定消失時間も併記した。

【００３２】

【表１】

【００３３】表１から明らかなように、広南ケイヒ抽出
物（ヌ）及び（カ）は強いウレアーゼ活性を有すること
が分かった。この広南ケイヒ抽出物（カ）について、¹³
Ｃ−標識尿素の分解を１分後から２７分後まで経時的に
観測したＮＭＲスペクトルを図１に示す。この図におい
て１６５．２ｐｐｍのシグナルは尿素由来のものであ
り、１６２．６ｐｐｍのシグナルは¹³Ｃ−尿素から生成
した¹³Ｃ−二酸化炭素由来のものである。

【図面の簡単な説明】

【図１】 ウレアーゼによる¹³Ｃ−標識尿素の分解の経
時変化の例を示す¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル図。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ケイヒ抽出物を有効成分とすることを特
   徴とするヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃ
   ｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）のウレアーゼ活性阻害剤。
2. 【請求項２】 ケイヒ抽出物が、水性溶媒による抽出物
   である請求項１記載のヘリコバクター・ピロリのウレア
   ーゼ活性阻害剤。
3. 【請求項３】 胃炎、胃潰瘍又は十二指腸潰瘍の予防及
   び治療剤として用いられる請求項１又は２記載のヘリコ
   バクター・ピロリのウレアーゼ活性阻害剤。