JPH10139674A - インターロイキン１２産生促進剤 - Google Patents
インターロイキン１２産生促進剤Info
- Publication number
- JPH10139674A JPH10139674A JP8312660A JP31266096A JPH10139674A JP H10139674 A JPH10139674 A JP H10139674A JP 8312660 A JP8312660 A JP 8312660A JP 31266096 A JP31266096 A JP 31266096A JP H10139674 A JPH10139674 A JP H10139674A
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- Japan
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- lactobacillus
- interleukin
- lactic acid
- acid bacteria
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 インターロイキン１２の産生を促進する新規
な手段を提供する。 【解決手段】 ラクトバチルス（Ｌ）・アシドフィル
ス、Ｌ・カゼイ、Ｌ・デルブリュッキイ、Ｌ・ファーメ
ンタム、Ｌ・ケフィア、Ｌ・プランタラム、ラクトコッ
カス・ラクティス、ロイコノストック・ラクティス、ス
トレプトコッカス・サーモフィルス、エンテロコッカス
（Ｅ）・フェカーリス、Ｅ・フェシウム等、乳酸菌の菌
体よりなるインターロイキン１２産生促進剤。
な手段を提供する。 【解決手段】 ラクトバチルス（Ｌ）・アシドフィル
ス、Ｌ・カゼイ、Ｌ・デルブリュッキイ、Ｌ・ファーメ
ンタム、Ｌ・ケフィア、Ｌ・プランタラム、ラクトコッ
カス・ラクティス、ロイコノストック・ラクティス、ス
トレプトコッカス・サーモフィルス、エンテロコッカス
（Ｅ）・フェカーリス、Ｅ・フェシウム等、乳酸菌の菌
体よりなるインターロイキン１２産生促進剤。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、乳酸菌の菌体を有
効成分とするインターロイキン１２産生促進剤に関する
ものである。
効成分とするインターロイキン１２産生促進剤に関する
ものである。
【０００２】
【従来の技術】細菌、ウイルス等の感染、腫瘍、細胞障
害などに対して生体は免疫反応によって対応するが、そ
の免疫応答は、免疫担当細胞間の直接的あるいは間接的
な相互作用により調節されている。そして、免疫応答の
調節にはリンパ球、マクロファージ等が産生するインタ
ーロイキン、ＴＮＦα等のサイトカインが重要な役割を
演じている。
害などに対して生体は免疫反応によって対応するが、そ
の免疫応答は、免疫担当細胞間の直接的あるいは間接的
な相互作用により調節されている。そして、免疫応答の
調節にはリンパ球、マクロファージ等が産生するインタ
ーロイキン、ＴＮＦα等のサイトカインが重要な役割を
演じている。
【０００３】現在、インターロイキンに属するサイトカ
インとしては１７種類が知られているが、その一つであ
るインターロイキン１２（以下、ＩＬ−１２という）に
ついては次のような作用が確認されている。
インとしては１７種類が知られているが、その一つであ
るインターロイキン１２（以下、ＩＬ−１２という）に
ついては次のような作用が確認されている。
【０００４】 ＮＫ細胞やＴ細胞に作用してインター
フェロンγや腫瘍壊死因子αの産生を誘導し、マクロフ
ァージを活性化する。 ＮＫ細胞およびＣＤ８+Ｔ細胞の細胞障害活性を増
強する。 インターロイキン２と相乗的に作用して細胞障害性
リンパ球を活性化すると共にリンホカイン活性化キラー
細胞を誘導する。 ナイーブＴ細胞からＴｈ１細胞への分化を促す。
フェロンγや腫瘍壊死因子αの産生を誘導し、マクロフ
ァージを活性化する。 ＮＫ細胞およびＣＤ８+Ｔ細胞の細胞障害活性を増
強する。 インターロイキン２と相乗的に作用して細胞障害性
リンパ球を活性化すると共にリンホカイン活性化キラー
細胞を誘導する。 ナイーブＴ細胞からＴｈ１細胞への分化を促す。
【０００５】これらの作用があることにより、ＩＬ−１
２は感染症、自己免疫疾患、炎症、腫瘍、ＡＩＤＳな
ど、多くの疾患の治療に利用可能になるものと期待され
ている〔 Review．Blood（1994)84:4008■4027; Annu.R
ev.Immunol（1995)13:251■276; Life Sience（1996)5
8:635■654 〕。
２は感染症、自己免疫疾患、炎症、腫瘍、ＡＩＤＳな
ど、多くの疾患の治療に利用可能になるものと期待され
ている〔 Review．Blood（1994)84:4008■4027; Annu.R
ev.Immunol（1995)13:251■276; Life Sience（1996)5
8:635■654 〕。
【０００６】特開平８−３８０４７号公報には、上述の
ようなＩＬ−１２の産生がケフィア粒の投与によって促
進されることが記載されている。ケフィア粒のこの作用
は、ケフィア粒およびそれを使った発酵物中に含まれる
多くの微生物やそれらが産生する多糖類、蛋白質糖の複
合作用であって、従来知られている乳酸菌や発酵乳によ
る免疫系の活性化とは作用機序が異なると説明されてい
る。
ようなＩＬ−１２の産生がケフィア粒の投与によって促
進されることが記載されている。ケフィア粒のこの作用
は、ケフィア粒およびそれを使った発酵物中に含まれる
多くの微生物やそれらが産生する多糖類、蛋白質糖の複
合作用であって、従来知られている乳酸菌や発酵乳によ
る免疫系の活性化とは作用機序が異なると説明されてい
る。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、免疫反応で
重要な役割をするＩＬ−１２の産生を促進する新規な手
段を提供し、感染症、自己免疫疾患、炎症、腫瘍、ＡＩ
ＤＳなど、多くの疾患の治療と予防を容易にすることを
目的とするものである。
重要な役割をするＩＬ−１２の産生を促進する新規な手
段を提供し、感染症、自己免疫疾患、炎症、腫瘍、ＡＩ
ＤＳなど、多くの疾患の治療と予防を容易にすることを
目的とするものである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成すること
に成功した本発明は、ある種の乳酸菌の菌体は経口投与
されたときＩＬ−１２の産生を顕著に促進するという、
本発明者らによる新規な知見に基づくものである。
に成功した本発明は、ある種の乳酸菌の菌体は経口投与
されたときＩＬ−１２の産生を顕著に促進するという、
本発明者らによる新規な知見に基づくものである。
【０００９】すなわち、本発明はラクトバチルス・アシ
ドフィルス、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス
・デルブリュッキイ、ラクトバチルス・ファーメンタ
ム、ラクトバチルス・ケフィア、ラクトバチルス・プラ
ンタラム、ラクトコッカス・ラクティス、ロイコノスト
ック・ラクティス、ストレプトコッカス・サーモフィル
ス、エンテロコッカス・フェカーリスおよびエンテロコ
ッカス・フェシウムの各菌体が示すインターロイキン１
２産生促進作用を利用する、インターロイキン１２産生
促進剤を提供するものである。
ドフィルス、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス
・デルブリュッキイ、ラクトバチルス・ファーメンタ
ム、ラクトバチルス・ケフィア、ラクトバチルス・プラ
ンタラム、ラクトコッカス・ラクティス、ロイコノスト
ック・ラクティス、ストレプトコッカス・サーモフィル
ス、エンテロコッカス・フェカーリスおよびエンテロコ
ッカス・フェシウムの各菌体が示すインターロイキン１
２産生促進作用を利用する、インターロイキン１２産生
促進剤を提供するものである。
【００１０】
【発明の実施の形態】上記乳酸菌群のＩＬ−１２産生促
進作用は、マウスの脾臓細胞に乳酸菌菌体を添加する試
験により確認された（後記実施例参照）。
進作用は、マウスの脾臓細胞に乳酸菌菌体を添加する試
験により確認された（後記実施例参照）。
【００１１】本発明のＩＬ−１２産生促進剤に使用する
乳酸菌は、乳酸菌培養の常法に従い任意の条件で培養す
ることができ、得られた培養物から遠心分離等の集菌手
段によって分離された菌体をそのまま本発明のために用
いることができる。
乳酸菌は、乳酸菌培養の常法に従い任意の条件で培養す
ることができ、得られた培養物から遠心分離等の集菌手
段によって分離された菌体をそのまま本発明のために用
いることができる。
【００１２】製剤化に際しては、菌体に賦形剤、安定
剤、矯味剤等を適宜混合して凍結乾燥するほか、加熱乾
燥して死菌体にしてもよい。また、乳酸菌のＩＬ−１２
産生促進作用を妨げない範囲で、他の任意の薬剤を混合
して製剤化することもできる。剤形としては、粉末剤、
錠剤、ドリンク剤等が可能である。
剤、矯味剤等を適宜混合して凍結乾燥するほか、加熱乾
燥して死菌体にしてもよい。また、乳酸菌のＩＬ−１２
産生促進作用を妨げない範囲で、他の任意の薬剤を混合
して製剤化することもできる。剤形としては、粉末剤、
錠剤、ドリンク剤等が可能である。
【００１３】本発明によるＩＬ−１２産生促進剤は、通
常、経口投与する。適当な投与量は成人１日当たり菌体
重量で約１０〜１０００mgである。急性毒性および長期
間服用時の副作用は認められない。
常、経口投与する。適当な投与量は成人１日当たり菌体
重量で約１０〜１０００mgである。急性毒性および長期
間服用時の副作用は認められない。
【００１４】本発明によるＩＬ−１２産生促進剤は、そ
の作用に基づき感染症、自己免疫疾患、炎症、腫瘍、Ａ
ＩＤＳなど、多くの疾患の治療と予防に有効な手段にな
るものと期待される。
の作用に基づき感染症、自己免疫疾患、炎症、腫瘍、Ａ
ＩＤＳなど、多くの疾患の治療と予防に有効な手段にな
るものと期待される。
【００１５】
【実施例】以下、各種乳酸菌のＩＬ−１２産生促進作用
を確認した試験の結果を示して本発明を説明する。な
お、試験した乳酸菌は、ヒトの糞便や消化管から分離し
たもの、または酪農関連乳酸菌を、常法によりＭＲＳ培
地で培養後、滅菌水懸濁と遠心分離を３回繰り返すこと
により洗浄し、１００℃で３０分間加熱してから凍結乾
燥したものである。
を確認した試験の結果を示して本発明を説明する。な
お、試験した乳酸菌は、ヒトの糞便や消化管から分離し
たもの、または酪農関連乳酸菌を、常法によりＭＲＳ培
地で培養後、滅菌水懸濁と遠心分離を３回繰り返すこと
により洗浄し、１００℃で３０分間加熱してから凍結乾
燥したものである。
【００１６】試験法：７週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスの
脾臓を摘出し、単細胞浮遊液を調製する。これを１０％
ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ1640培地（100U/ml結晶ペ
ニシリンＧカリウム、100μg/ml硫酸ストレプトマイシ
ンを含む）を用いて、乳酸菌の加熱死菌体（０.２μg）
と共に、６×105/200μl/ウェル（９６ウェル平底マイ
クロプレート，Ｎunc社）で培養する。培養は、５％炭
酸ガス、３７℃の条件で行なう。７日目の培養上清を集
め、その中のＩＬ−１２量を、下記サンドイッチＥＬＩ
ＳＡ法により測定する。
脾臓を摘出し、単細胞浮遊液を調製する。これを１０％
ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ1640培地（100U/ml結晶ペ
ニシリンＧカリウム、100μg/ml硫酸ストレプトマイシ
ンを含む）を用いて、乳酸菌の加熱死菌体（０.２μg）
と共に、６×105/200μl/ウェル（９６ウェル平底マイ
クロプレート，Ｎunc社）で培養する。培養は、５％炭
酸ガス、３７℃の条件で行なう。７日目の培養上清を集
め、その中のＩＬ−１２量を、下記サンドイッチＥＬＩ
ＳＡ法により測定する。
【００１７】サンドイッチＥＬＩＳＡ法：一次抗体であ
るラット抗マウスＩＬ−１２抗体（クローンＣ１５.
６，genzyme社）を５０mＭ炭酸ナトリウム緩衝液（pＨ
９.６）で５μg／mlとなるように溶解し、９６ウェルマ
イクロプレートに５０μl加え、一夜、４℃でコーティ
ングする。次いで、洗浄液（0.8％塩化ナトリウム、0.0
5％Ｔween20を含むリン酸緩衝化生理食塩水）で各ウェ
ルを洗浄後、１％ＢＳＡを含む洗浄液でブロッキングを
行なう。１％ＢＳＡを含む洗浄液で培養上清を希釈し、
その５０μlを各ウェルに加え、３７℃で９０分間イン
キュベートする。洗浄後、二次抗体として洗浄液で５μ
g/mlとなるように溶解したビオチン標識ラット抗マウス
ＩＬ−１２抗体（クローンＣ１７.８，genzyme社）を５
０μl加え、３７℃で９０分間インキュベートしてから
洗浄する。次いで、洗浄液で１５００倍に希釈した西洋
ワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン（Sero
tec社）を５０μl加え、３７℃で９０分間インキュベー
トする。洗浄後、発色用緩衝液（クエン酸-リン酸緩衝
液）１００mlに 0-フェニレンジアミン４０mgおよび３
１％過酸化水素水２０μlを溶解してなる基質溶液５０
μlをウェルに添加し、遮光下に３７℃で１０分間酵素
反応を行なって発色させる。その後、２.５Ｍ硫酸で反
応を停止させてから４９２nmの吸光度を測定し、リコビ
ナントマウスＩＬ−１２（genzyme社）標準液より作成
した標準曲線から、培養上清中のＩＬ−１２量（pg/m
l）を求める。
るラット抗マウスＩＬ−１２抗体（クローンＣ１５.
６，genzyme社）を５０mＭ炭酸ナトリウム緩衝液（pＨ
９.６）で５μg／mlとなるように溶解し、９６ウェルマ
イクロプレートに５０μl加え、一夜、４℃でコーティ
ングする。次いで、洗浄液（0.8％塩化ナトリウム、0.0
5％Ｔween20を含むリン酸緩衝化生理食塩水）で各ウェ
ルを洗浄後、１％ＢＳＡを含む洗浄液でブロッキングを
行なう。１％ＢＳＡを含む洗浄液で培養上清を希釈し、
その５０μlを各ウェルに加え、３７℃で９０分間イン
キュベートする。洗浄後、二次抗体として洗浄液で５μ
g/mlとなるように溶解したビオチン標識ラット抗マウス
ＩＬ−１２抗体（クローンＣ１７.８，genzyme社）を５
０μl加え、３７℃で９０分間インキュベートしてから
洗浄する。次いで、洗浄液で１５００倍に希釈した西洋
ワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン（Sero
tec社）を５０μl加え、３７℃で９０分間インキュベー
トする。洗浄後、発色用緩衝液（クエン酸-リン酸緩衝
液）１００mlに 0-フェニレンジアミン４０mgおよび３
１％過酸化水素水２０μlを溶解してなる基質溶液５０
μlをウェルに添加し、遮光下に３７℃で１０分間酵素
反応を行なって発色させる。その後、２.５Ｍ硫酸で反
応を停止させてから４９２nmの吸光度を測定し、リコビ
ナントマウスＩＬ−１２（genzyme社）標準液より作成
した標準曲線から、培養上清中のＩＬ−１２量（pg/m
l）を求める。
【００１８】試験結果を表１に示す。ＩＬ−１２産生促
進作用は特定の乳酸菌だけに認められ、中でもこの作用
が顕著であったのはラクトバチルス・カゼイ、同プラン
タラム、同ラクティス、ロイコノストック・ラクティ
ス、エンテロコッカス・フェカーリス、同フェシウム等
であった。ストレプトコッカス・サーモフィルスは菌株
による相違が大きかった。
進作用は特定の乳酸菌だけに認められ、中でもこの作用
が顕著であったのはラクトバチルス・カゼイ、同プラン
タラム、同ラクティス、ロイコノストック・ラクティ
ス、エンテロコッカス・フェカーリス、同フェシウム等
であった。ストレプトコッカス・サーモフィルスは菌株
による相違が大きかった。
【００１９】
【表１】 乳酸菌 ＩＬ−１２産生量 (pg/ml) ラクトバチルス・アシドフィルス ATCC4357 ２００ ラクトバチルス・カゼイ YIT9029(FERM BP-1366) ９５８ ラクトバチルス・カゼイ ATCC393 １１９６ ラクトバチルス・デルブリュッキイ ATCC11842 ２０６ ラクトバチルス・ファーメンタム ATCC14931 ２７４ ラクトバチルス・ケフィア NRIC1693 ２１０ ラクトバチルス・プランタラム ATCC14917 ２５９６ ラクトコッカス・ラクティス ATCC19257 １０２８ ラクトコッカス・ラクティス ATCC19435 １４０５ ロイコノストック・ラクティス ATCC19256 １１００ ストレプトコッカス・サーモフィルス ATCC19258 １１９５ ストレプトコッカス・サーモフィルス YIT2021(FERM P-15933) ２４０ エンテロコッカス・フェカーリス ATCC19433 ２８２２ エンテロコッカス・フェシウム ATCC19434 ２８７０ Control（乳酸菌無添加） 検出限界以下 ラクトバチルス・ガッセリ ATCC 33323 検出限界以下 ラクトバチルス・ヘルベティクス ATCC15009 検出限界以下 ラクトバチルス・パラカゼイ ATCC25302 検出限界以下
【００２０】
【発明の効果】本発明によるＩＬ−１２産生促進剤は、
ヒトの腸内フローラを構成する乳酸菌や酪農製品製造に
古くから利用されて来た乳酸菌からなるものであるか
ら、長期間に経口摂取しても安全であるだけでなく、整
腸作用、抗腫瘍作用、抗変異作用、血圧低下作用、抗潰
瘍作用、コレステロール低下作用等、乳酸菌について周
知の有用作用が複合的に作用することが期待できるの
で、これを用いることにより各種の感染、自己免疫疾
患、炎症、腫瘍、ＡＩＤＳなど、多くの疾患の予防と治
療が容易になることが期待される。
ヒトの腸内フローラを構成する乳酸菌や酪農製品製造に
古くから利用されて来た乳酸菌からなるものであるか
ら、長期間に経口摂取しても安全であるだけでなく、整
腸作用、抗腫瘍作用、抗変異作用、血圧低下作用、抗潰
瘍作用、コレステロール低下作用等、乳酸菌について周
知の有用作用が複合的に作用することが期待できるの
で、これを用いることにより各種の感染、自己免疫疾
患、炎症、腫瘍、ＡＩＤＳなど、多くの疾患の予防と治
療が容易になることが期待される。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 高見澤 康太郎 東京都港区東新橋１−１−19 株式会社ヤ クルト本社内
Claims (2)
- 【請求項１】 ラクトバチルス・アシドフィルス、ラク
トバチルス・カゼイ、ラクトバチルス・デルブリュッキ
イ、ラクトバチルス・ファーメンタム、ラクトバチルス
・ケフィア、ラクトバチルス・プランタラム、ラクトコ
ッカス・ラクティス、ロイコノストック・ラクティス、
ストレプトコッカス・サーモフィルス、エンテロコッカ
ス・フェカーリスおよびエンテロコッカス・フェシウム
からなる群から選ばれた乳酸菌の菌体よりなるインター
ロイキン１２産生促進剤。 - 【請求項２】 ラクトバチルス・アシドフィルス ATCC4
357、ラクトバチルス・カゼイ YIT9029（FERM BP-136
6)、ラクトバチルス・カゼイ ATCC393、ラクトバチルス
・デルブリュッキイ ATCC11842、ラクトバチルス・ファ
ーメンタム ATCC14931、ラクトバチルス・ケフィア NRI
C1693、ラクトバチルス・プランタラムATCC14917、ラク
トコッカス・ラクティス ATCC19257、ラクトコッカス・
ラクティス ATCC19435、ロイコノストック・ラクティス
ATCC19256、ストレプトコッカス・サーモフィルス ATC
C19258、ストレプトコッカス・サーモフィルス YIT2021
（FERM P-15933)、エンテロコッカス・フェカーリス AT
CC19433およびエンテロコッカス・フェシウム ATCC1943
4からなる群から選ばれた乳酸菌の菌体よりなるインタ
ーロイキン１２産生促進剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8312660A JPH10139674A (ja) | 1996-11-11 | 1996-11-11 | インターロイキン１２産生促進剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8312660A JPH10139674A (ja) | 1996-11-11 | 1996-11-11 | インターロイキン１２産生促進剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10139674A true JPH10139674A (ja) | 1998-05-26 |
Family
ID=18031895
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8312660A Pending JPH10139674A (ja) | 1996-11-11 | 1996-11-11 | インターロイキン１２産生促進剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10139674A (ja) |
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