JPH0956382A - 植物の形態形成を制御するタンパク質をコードする遺伝子 - Google Patents
植物の形態形成を制御するタンパク質をコードする遺伝子Info
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- JPH0956382A JPH0956382A JP7216187A JP21618795A JPH0956382A JP H0956382 A JPH0956382 A JP H0956382A JP 7216187 A JP7216187 A JP 7216187A JP 21618795 A JP21618795 A JP 21618795A JP H0956382 A JPH0956382 A JP H0956382A
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- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 植物の形態形成を制御する遺伝子を取得し、
これを用いて植物の形態を制御する。 【解決手段】 植物の形態形成を制御する活性を有し、
配列番号1に示すアミノ酸配列又はこのアミノ酸配列に
おいて植物の形態形成を制御する活性に影響を与えない
1又は2以上のアミノ酸残基の置換、欠失あるいは挿入
を有するアミノ酸配列を含むタンパク質をコードする遺
伝子、あるいはこの遺伝子に対するアンチセンスRNA
を発現するDNAで植物を形質転換する。
これを用いて植物の形態を制御する。 【解決手段】 植物の形態形成を制御する活性を有し、
配列番号1に示すアミノ酸配列又はこのアミノ酸配列に
おいて植物の形態形成を制御する活性に影響を与えない
1又は2以上のアミノ酸残基の置換、欠失あるいは挿入
を有するアミノ酸配列を含むタンパク質をコードする遺
伝子、あるいはこの遺伝子に対するアンチセンスRNA
を発現するDNAで植物を形質転換する。
Description
【0001】
【発明の属する技術分野】本発明は、植物の生態形成を
制御する遺伝子DNAと、その遺伝子に対するアンチセ
ンスRNAをコードするDNA、並びにこれらのDNA
で形質転換された植物体に関し、植物の茎の長さ、およ
び花序形態を調節する技術を提供するものである。
制御する遺伝子DNAと、その遺伝子に対するアンチセ
ンスRNAをコードするDNA、並びにこれらのDNA
で形質転換された植物体に関し、植物の茎の長さ、およ
び花序形態を調節する技術を提供するものである。
【0002】
【従来の技術】植物形態は、遺伝的要因と環境要因によ
って影響されると考えられている。従来、茎の長さの短
い植物や花序形態が変化した植物を作出する方法の一つ
として、遺伝的にそれらの形態が異なる植物と交配する
ことにより有用品種の形態を変える方法があるが、親品
種よりも性状の優れた個体を安定して得ることは困難で
ある。
って影響されると考えられている。従来、茎の長さの短
い植物や花序形態が変化した植物を作出する方法の一つ
として、遺伝的にそれらの形態が異なる植物と交配する
ことにより有用品種の形態を変える方法があるが、親品
種よりも性状の優れた個体を安定して得ることは困難で
ある。
【0003】また、自然突然変異や突然変異誘発処理に
より形態に影響を与える遺伝子に変異が起こり、その遺
伝子機能が低下することによって形態変化を示す個体を
選抜することも可能であるが、有用遺伝形質を保持した
まま、特定の形態形成を制御する遺伝子だけに変異が発
生した個体を任意に作出することは非常に困難である。
より形態に影響を与える遺伝子に変異が起こり、その遺
伝子機能が低下することによって形態変化を示す個体を
選抜することも可能であるが、有用遺伝形質を保持した
まま、特定の形態形成を制御する遺伝子だけに変異が発
生した個体を任意に作出することは非常に困難である。
【0004】そこで植物の形態形成を制御する遺伝子を
単離することができれば、該遺伝子に対するアンチセン
スRNAを発現するように組み込んだベクター(アンチ
センスRNA発現ベクター)で植物を形質転換すること
により、茎の長さが短くなった植物を作出することが可
能になると考えられる。
単離することができれば、該遺伝子に対するアンチセン
スRNAを発現するように組み込んだベクター(アンチ
センスRNA発現ベクター)で植物を形質転換すること
により、茎の長さが短くなった植物を作出することが可
能になると考えられる。
【0005】シロイヌナズナ(アラビドプシス・サリア
ナ (Arabidopsis thaliana))は、栄養期(vegetaive s
tage)から再生期(reproductive stage)への転移に花
芽の伸長を伴い、蕾の生成及びそれに続く節間(intern
ode)の伸長は強く連携しており、厳密に順序づけられ
た分枝様式(highly ordered branching pattern)を示
す。シロイヌナズナの標準的なエコタイプ(ecotype)
として知られているLandsberg erecta(ランズバーグ・
エレクタ)株は、内因性エレクタ(erecta:わい化)変
異を保持しており、異なる花芽構造を示す。頂部に花が
密生するコンパクトな花芽を形成する。変異は、多面発
現的(pleiotropic)であり、円形の葉と短く平坦な莢
(silique)を有する(以上、Huang, I. et al., (199
1) UCLAキーストーンシンポジウムで発表された要
旨)。
ナ (Arabidopsis thaliana))は、栄養期(vegetaive s
tage)から再生期(reproductive stage)への転移に花
芽の伸長を伴い、蕾の生成及びそれに続く節間(intern
ode)の伸長は強く連携しており、厳密に順序づけられ
た分枝様式(highly ordered branching pattern)を示
す。シロイヌナズナの標準的なエコタイプ(ecotype)
として知られているLandsberg erecta(ランズバーグ・
エレクタ)株は、内因性エレクタ(erecta:わい化)変
異を保持しており、異なる花芽構造を示す。頂部に花が
密生するコンパクトな花芽を形成する。変異は、多面発
現的(pleiotropic)であり、円形の葉と短く平坦な莢
(silique)を有する(以上、Huang, I. et al., (199
1) UCLAキーストーンシンポジウムで発表された要
旨)。
【0006】また、Landsberg erecta株の変異と同一遺
伝子座の変異を有することが遺伝学的に知られているわ
い化変異体が取得されており、er-101株、er-102株及び
er-103株と命名されている。
伝子座の変異を有することが遺伝学的に知られているわ
い化変異体が取得されており、er-101株、er-102株及び
er-103株と命名されている。
【0007】
【発明が解決しようとする課題】上述したように、植物
のわい化と特定の遺伝子との関係は、ある程度経験的に
知られているが、その遺伝子自体は未だ取得されていな
い。
のわい化と特定の遺伝子との関係は、ある程度経験的に
知られているが、その遺伝子自体は未だ取得されていな
い。
【0008】本発明は、上記観点からなされたものであ
り、植物の形態形成を制御する遺伝子を提供することを
課題とする。また、該遺伝子又は該遺伝子に対するアン
チセンスRNAをコードするDNAで植物を形質転換
し、形態形成を制御する遺伝子の発現を促進あるいは抑
制することによって、茎の長さが長くなった植物又は茎
の長さが短くなった植物、あるいは花序形態の変化した
植物を提供することも課題としている。
り、植物の形態形成を制御する遺伝子を提供することを
課題とする。また、該遺伝子又は該遺伝子に対するアン
チセンスRNAをコードするDNAで植物を形質転換
し、形態形成を制御する遺伝子の発現を促進あるいは抑
制することによって、茎の長さが長くなった植物又は茎
の長さが短くなった植物、あるいは花序形態の変化した
植物を提供することも課題としている。
【0009】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に、本発明者らはシロイヌナズナの染色体DNAから植
物の形態形成を制御する遺伝子をクローニングし、該遺
伝子を組み込んだアンチセンス発現ベクターを得た後、
該ベクターDNAで形質転換した植物個体の形態が変化
することを見いだし、本発明を完成するに至った。
に、本発明者らはシロイヌナズナの染色体DNAから植
物の形態形成を制御する遺伝子をクローニングし、該遺
伝子を組み込んだアンチセンス発現ベクターを得た後、
該ベクターDNAで形質転換した植物個体の形態が変化
することを見いだし、本発明を完成するに至った。
【0010】すなわち本発明は、植物の形態形成を制御
する活性を有し、配列番号1に示すアミノ酸配列又はこ
のアミノ酸配列において植物の形態形成を制御する活性
に影響を与えない1又は2以上のアミノ酸残基の置換、
欠失あるいは挿入を有するアミノ酸配列を含むタンパク
質をコードするDNAである。
する活性を有し、配列番号1に示すアミノ酸配列又はこ
のアミノ酸配列において植物の形態形成を制御する活性
に影響を与えない1又は2以上のアミノ酸残基の置換、
欠失あるいは挿入を有するアミノ酸配列を含むタンパク
質をコードするDNAである。
【0011】また本発明は、上記のDNAの発現を抑制
するアンチセンスRNAをコードするDNAを提供す
る。このDNAとしては、配列番号1記載の塩基配列の
少なくとも一部に実質的に相補的な塩基配列を有するD
NAが挙げられる。
するアンチセンスRNAをコードするDNAを提供す
る。このDNAとしては、配列番号1記載の塩基配列の
少なくとも一部に実質的に相補的な塩基配列を有するD
NAが挙げられる。
【0012】本発明はさらに、前記タンパク質をコード
するDNAで形質転換された植物体、及び前記アンチセ
ンスRNAをコードするDNAで形質転換された植物体
を提供する。
するDNAで形質転換された植物体、及び前記アンチセ
ンスRNAをコードするDNAで形質転換された植物体
を提供する。
【0013】本発明のDNAによりコードされるタンパ
ク質は、形質の変化が著しい茎、花などでの発現量が多
く、植物の形態形成の制御、特に茎の伸長に関わるタン
パク質であり、このタンパク質をコードする遺伝子で植
物を形質転換し、該遺伝子の発現量を増加させることに
よって、茎の伸長を促進できることが期待される。
ク質は、形質の変化が著しい茎、花などでの発現量が多
く、植物の形態形成の制御、特に茎の伸長に関わるタン
パク質であり、このタンパク質をコードする遺伝子で植
物を形質転換し、該遺伝子の発現量を増加させることに
よって、茎の伸長を促進できることが期待される。
【0014】一方、前記アンチセンスRNAをコードす
るDNA、すなわち植物の形態形成の制御に関する遺伝
子の発現を抑制するDNAで植物を形質転換することに
より、形質転換植物の茎の伸長を抑制することができる
ことが期待される。
るDNA、すなわち植物の形態形成の制御に関する遺伝
子の発現を抑制するDNAで植物を形質転換することに
より、形質転換植物の茎の伸長を抑制することができる
ことが期待される。
【0015】尚、本明細書において、「染色体DNA」
及び「染色体遺伝子」は、植物細胞の核染色体に含まれ
るDNA及びこのDNA上に存在する遺伝子をいう。ま
た、本発明により提供される植物の形態形成の制御に関
する遺伝子を、「形態制御遺伝子」または「本発明の遺
伝子」ということがある。
及び「染色体遺伝子」は、植物細胞の核染色体に含まれ
るDNA及びこのDNA上に存在する遺伝子をいう。ま
た、本発明により提供される植物の形態形成の制御に関
する遺伝子を、「形態制御遺伝子」または「本発明の遺
伝子」ということがある。
【0016】
【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態を説明
する。本発明の遺伝子は、例えば、形態形成の制御に関
する変異を有する植物体から、その表現形質変異に関わ
る変異遺伝子を単離することにより取得することができ
る。さらに、得られた変異遺伝子の塩基配列に基づいて
作製したオリゴヌクレオチドをプローブとするハイブリ
ダイゼーション、あるいは変異遺伝子の塩基配列に基づ
いて作製した1対のオリゴヌクレオチドをプライマーと
するPCR(ポリメラーゼ・チェイン・リアクション)
により、野生型植物の染色体DNAから野生型遺伝子を
取得することができる。
する。本発明の遺伝子は、例えば、形態形成の制御に関
する変異を有する植物体から、その表現形質変異に関わ
る変異遺伝子を単離することにより取得することができ
る。さらに、得られた変異遺伝子の塩基配列に基づいて
作製したオリゴヌクレオチドをプローブとするハイブリ
ダイゼーション、あるいは変異遺伝子の塩基配列に基づ
いて作製した1対のオリゴヌクレオチドをプライマーと
するPCR(ポリメラーゼ・チェイン・リアクション)
により、野生型植物の染色体DNAから野生型遺伝子を
取得することができる。
【0017】形態形成の制御に関する変異を有する植物
体の作製、この変異体からの本発明の遺伝子の単離法、
及び本発明の遺伝子の利用法を詳細に説明する。尚、D
NAの切断、連結、形質転換、遺伝子の塩基配列の決
定、ハイブリダイゼーション等一般の遺伝子組換えに必
要な方法は、各操作に使用する市販の酵素等に添付され
ている説明書や、Molecular cloning (Maniatis T. et
al. Cold Spring HarborLaboratory Press)に記載され
ている。
体の作製、この変異体からの本発明の遺伝子の単離法、
及び本発明の遺伝子の利用法を詳細に説明する。尚、D
NAの切断、連結、形質転換、遺伝子の塩基配列の決
定、ハイブリダイゼーション等一般の遺伝子組換えに必
要な方法は、各操作に使用する市販の酵素等に添付され
ている説明書や、Molecular cloning (Maniatis T. et
al. Cold Spring HarborLaboratory Press)に記載され
ている。
【0018】<1>植物の形態形成を制御する遺伝子の
単離・同定 (1)形態形成の制御に関する変異を有する植物体の作
製 植物、例えばシロイヌナズナの形態形成を制御する遺伝
子に変異を起こさせるには、外来遺伝子を植物細胞に導
入し、染色体DNAに挿入させることによって、挿入部
位の遺伝子を破壊する変異誘発法(遺伝子破壊)を用い
る。適用できる遺伝子導入法としては、アグロバクテリ
ウムを用いる方法や、植物プロトプラスト細胞に対する
エレクトロポーレーション法、ポリエチレングリコール
法、マイクロインジェクション法などが挙げられる。こ
れらの方法のうち、シロイヌナズナに対しては形質転換
効率の高さと、遺伝子導入による変異以外の変異の誘起
が少ない点から、アグロバクテリウムを用いる方法が有
効である。
単離・同定 (1)形態形成の制御に関する変異を有する植物体の作
製 植物、例えばシロイヌナズナの形態形成を制御する遺伝
子に変異を起こさせるには、外来遺伝子を植物細胞に導
入し、染色体DNAに挿入させることによって、挿入部
位の遺伝子を破壊する変異誘発法(遺伝子破壊)を用い
る。適用できる遺伝子導入法としては、アグロバクテリ
ウムを用いる方法や、植物プロトプラスト細胞に対する
エレクトロポーレーション法、ポリエチレングリコール
法、マイクロインジェクション法などが挙げられる。こ
れらの方法のうち、シロイヌナズナに対しては形質転換
効率の高さと、遺伝子導入による変異以外の変異の誘起
が少ない点から、アグロバクテリウムを用いる方法が有
効である。
【0019】ここでは、バイナリーベクター系(植物細
胞にDNA導入可能なT−DNA、大腸菌などの微生物
で機能可能な複製起点、及び好ましくは植物細胞または
微生物細胞の選択用のマーカー遺伝子を含むベクター
系)を用いたアグロバクテリウム感染法によって外来遺
伝子を植物細胞に導入し、形態形成を制御する遺伝子に
関する変異植物を作製する方法を示す。
胞にDNA導入可能なT−DNA、大腸菌などの微生物
で機能可能な複製起点、及び好ましくは植物細胞または
微生物細胞の選択用のマーカー遺伝子を含むベクター
系)を用いたアグロバクテリウム感染法によって外来遺
伝子を植物細胞に導入し、形態形成を制御する遺伝子に
関する変異植物を作製する方法を示す。
【0020】シロイヌナズナ(Arabidopsis thaliana)
の野生株に、Tiプラスミド由来のバイナリーベクター
(マーカーとして、例えばハイグロマイシン耐性遺伝子
及びアンピシリン耐性遺伝子を有する)を、インプラン
タ(in planta)アグロバクテリウム感染法(Chang S.
S., Park S.K. et al. Plant J. 5, No.4(1994))など
により感染させ、約6週間育成後に採種する。得られた
種子をハイグロマイシンを含む寒天培地に播種し、生育
させる。ハイグロマイシン耐性を示す形質転換植物をロ
ックウールに移植して育成し、茎の伸長状態が野生型植
物に比べて異なる変異体(erecta変異体)を視覚的に選
択する。
の野生株に、Tiプラスミド由来のバイナリーベクター
(マーカーとして、例えばハイグロマイシン耐性遺伝子
及びアンピシリン耐性遺伝子を有する)を、インプラン
タ(in planta)アグロバクテリウム感染法(Chang S.
S., Park S.K. et al. Plant J. 5, No.4(1994))など
により感染させ、約6週間育成後に採種する。得られた
種子をハイグロマイシンを含む寒天培地に播種し、生育
させる。ハイグロマイシン耐性を示す形質転換植物をロ
ックウールに移植して育成し、茎の伸長状態が野生型植
物に比べて異なる変異体(erecta変異体)を視覚的に選
択する。
【0021】こうして得られる変異体は、植物の形態形
成を制御する遺伝子にバイナリーベクターが挿入するこ
とによって変異している可能性が高い。
成を制御する遺伝子にバイナリーベクターが挿入するこ
とによって変異している可能性が高い。
【0022】(2)形態遺伝子の変異遺伝子の単離 上記のようにして得られる形態の変化した変異体から、
その変異に関わる変異遺伝子を、いわゆるプラスミドレ
スキュー法を用いて単離する。すなわち、変異植物体か
らCell, 35 (1983) p.35記載の方法等で染色体DNAを
調製して制限酵素で切断し、セルフライゲーションによ
り分子内の末端同士を連結する。得られた環状DNA
が、染色体に挿入されたバイナリーベクターを含んでい
れば、このDNA分子は大腸菌細胞で自律複製可能なプ
ラスミドとして機能し、形質転換体はマーカー薬剤(例
えばアンピシリン)耐性を示す。
その変異に関わる変異遺伝子を、いわゆるプラスミドレ
スキュー法を用いて単離する。すなわち、変異植物体か
らCell, 35 (1983) p.35記載の方法等で染色体DNAを
調製して制限酵素で切断し、セルフライゲーションによ
り分子内の末端同士を連結する。得られた環状DNA
が、染色体に挿入されたバイナリーベクターを含んでい
れば、このDNA分子は大腸菌細胞で自律複製可能なプ
ラスミドとして機能し、形質転換体はマーカー薬剤(例
えばアンピシリン)耐性を示す。
【0023】上記環状DNAで大腸菌を形質転換し、マ
ーカー薬剤に耐性な形質転換体から組換えプラスミドD
NAを回収することによって、バイナリーベクターと共
に形態制御遺伝子を含む染色体DNA断片を得ることが
できる。
ーカー薬剤に耐性な形質転換体から組換えプラスミドD
NAを回収することによって、バイナリーベクターと共
に形態制御遺伝子を含む染色体DNA断片を得ることが
できる。
【0024】あるいは、変異植物体から染色体DNAを
調製し、適当な制限酵素で切断した後にプラスミドある
いはファージベクターに連結し、これで大腸菌を形質転
換することにより染色体ライブラリーを作製する。この
ライブラリーからT−DNA等をプローブとしてクロー
ンを選抜することによっても、変異遺伝子断片を有する
クローンを選択することができる。
調製し、適当な制限酵素で切断した後にプラスミドある
いはファージベクターに連結し、これで大腸菌を形質転
換することにより染色体ライブラリーを作製する。この
ライブラリーからT−DNA等をプローブとしてクロー
ンを選抜することによっても、変異遺伝子断片を有する
クローンを選択することができる。
【0025】(3)形態制御遺伝子の野生型遺伝子の単
離 野生型のシロイヌナズナから、P1ファージベクター等
を用いて染色体DNAライブラリーを作製し、上記のよ
うにして得られる変異遺伝子断片をプローブとするハイ
ブリダイゼーションによって、形態制御遺伝子の野生型
遺伝子を単離することが出来る。また、変異遺伝子の塩
基配列に基づいてプライマーを作製し、PCRにより野
生型植物の染色体DNAから野生型遺伝子を増幅するこ
とによっても、本発明の遺伝子を取得することができ
る。
離 野生型のシロイヌナズナから、P1ファージベクター等
を用いて染色体DNAライブラリーを作製し、上記のよ
うにして得られる変異遺伝子断片をプローブとするハイ
ブリダイゼーションによって、形態制御遺伝子の野生型
遺伝子を単離することが出来る。また、変異遺伝子の塩
基配列に基づいてプライマーを作製し、PCRにより野
生型植物の染色体DNAから野生型遺伝子を増幅するこ
とによっても、本発明の遺伝子を取得することができ
る。
【0026】後記実施例で得られたシロイヌナズナの形
態制御遺伝子を含むDNA断片の塩基配列を、配列表配
列番号2に示す。この遺伝子は、27個のエクソン(ex
on)と26個のイントロン(intron)を含んでいる。
態制御遺伝子を含むDNA断片の塩基配列を、配列表配
列番号2に示す。この遺伝子は、27個のエクソン(ex
on)と26個のイントロン(intron)を含んでいる。
【0027】上記のように、本発明の遺伝子は多数のイ
ントロンを含んでいる。エクソン部分、すなわち植物の
形態形成を制御するタンパク質をコードするDNAを得
るには、形態制御遺伝子のcDNAを単離すればよい。
cDNAライブラリーは、シロイヌナズナの地上部組織
からmRNAを抽出し、逆転写酵素を用いてcDNAを
合成し、ポリメラーゼ反応によって2本鎖化したものを
ベクターに挿入し、大腸菌等を形質転換することにより
作製することができる。cDNAクローニングキットが
市販されているのでこれらを使用してもよい。得られた
cDNAライブラリーから、染色体遺伝子をプローブと
して形態制御遺伝子cDNAクローンを得る。
ントロンを含んでいる。エクソン部分、すなわち植物の
形態形成を制御するタンパク質をコードするDNAを得
るには、形態制御遺伝子のcDNAを単離すればよい。
cDNAライブラリーは、シロイヌナズナの地上部組織
からmRNAを抽出し、逆転写酵素を用いてcDNAを
合成し、ポリメラーゼ反応によって2本鎖化したものを
ベクターに挿入し、大腸菌等を形質転換することにより
作製することができる。cDNAクローニングキットが
市販されているのでこれらを使用してもよい。得られた
cDNAライブラリーから、染色体遺伝子をプローブと
して形態制御遺伝子cDNAクローンを得る。
【0028】上記のようにして後記実施例で得られたc
DNAの塩基配列、及びこの塩基配列から推定されるア
ミノ酸配列を、配列表配列番号1に示す。この遺伝子の
翻訳産物は、Nature、345(1990)p.743に記載されて
いるRLK5と相同性を示した。このRLK5遺伝子は、細胞膜
上に存在するレセプター様のプロテインキナーゼとして
単離されたが、既知のプロテインキナーゼ遺伝子の塩基
配列との相同性により単離されたもので、その遺伝子や
翻訳産物の機能などは全く不明である。このRLK5遺伝子
の発現パターンは、形態形成の制御に関する遺伝子とは
異なり、地上部だけでなく、根でも発現しており機能的
には両者は異なった遺伝子であると考えられる。
DNAの塩基配列、及びこの塩基配列から推定されるア
ミノ酸配列を、配列表配列番号1に示す。この遺伝子の
翻訳産物は、Nature、345(1990)p.743に記載されて
いるRLK5と相同性を示した。このRLK5遺伝子は、細胞膜
上に存在するレセプター様のプロテインキナーゼとして
単離されたが、既知のプロテインキナーゼ遺伝子の塩基
配列との相同性により単離されたもので、その遺伝子や
翻訳産物の機能などは全く不明である。このRLK5遺伝子
の発現パターンは、形態形成の制御に関する遺伝子とは
異なり、地上部だけでなく、根でも発現しており機能的
には両者は異なった遺伝子であると考えられる。
【0029】<2>形態制御遺伝子の利用 本発明の遺伝子は、植物の形態形成の制御、特に茎の伸
長に関わる遺伝子であり、この遺伝子で植物を形質転換
し、該遺伝子の発現量を増加させることによって、茎の
伸長を促進できることが期待される。
長に関わる遺伝子であり、この遺伝子で植物を形質転換
し、該遺伝子の発現量を増加させることによって、茎の
伸長を促進できることが期待される。
【0030】本発明の遺伝子を用いて植物を形質転換す
るには、エレクトロポレーション(電気的穿孔法)ある
いはアグロバクテリウムのTiプラスミドを利用する方
法などの方法によって、プロトプラストにDNAを導入
すればよい。その際、本発明の遺伝子としては、染色体
遺伝子を用いてもよいし、mRNAから調製したcDN
Aを用いてもよい。
るには、エレクトロポレーション(電気的穿孔法)ある
いはアグロバクテリウムのTiプラスミドを利用する方
法などの方法によって、プロトプラストにDNAを導入
すればよい。その際、本発明の遺伝子としては、染色体
遺伝子を用いてもよいし、mRNAから調製したcDN
Aを用いてもよい。
【0031】一方、本発明の遺伝子の発現を抑制するア
ンチセンスRNA、すなわち形態制御遺伝子から転写さ
れるmRNAの全長又はその少なくとも一部に相補的な
配列を有するRNA、を発現するDNAで植物を形質転
換することにより、形質転換植物の茎の伸長を抑制する
ことができることが期待される。
ンチセンスRNA、すなわち形態制御遺伝子から転写さ
れるmRNAの全長又はその少なくとも一部に相補的な
配列を有するRNA、を発現するDNAで植物を形質転
換することにより、形質転換植物の茎の伸長を抑制する
ことができることが期待される。
【0032】アンチセンスRNAを発現するDNAは、
アンチセンス鎖(センス鎖(コード鎖)に相補的な塩基配
列を有する鎖)又は少なくともその一部をプロモーター
の下流に連結することにより得られる。言い換えれば、
コード鎖又はその少なくとも一部と相同な配列を含む2
本鎖DNAを、本来の転写の向きと逆向きにしてプロモ
ーターの下流に連結することにより得られる。尚、アン
チセンス鎖も、染色体DNAあるいはcDNAから得ら
れるが、染色体DNAを用いる場合にはイントロンは本
発明遺伝子の発現を抑制する機能を果たすことが期待で
きないので、エクソン部分を用いることが好ましい。ま
た、アンチセンス鎖の少なくとも一部としては、コード
領域、5’非翻訳領域又は3’非翻訳領域のいずれも使
用し得る。さらに、アンチセンスRNAをコードするD
NAは、3’非翻訳領域に加え、mRNAの3’末端に
付加されるポリA鎖に相補的なポリdUをコードする配
列を含んでいてもよい。
アンチセンス鎖(センス鎖(コード鎖)に相補的な塩基配
列を有する鎖)又は少なくともその一部をプロモーター
の下流に連結することにより得られる。言い換えれば、
コード鎖又はその少なくとも一部と相同な配列を含む2
本鎖DNAを、本来の転写の向きと逆向きにしてプロモ
ーターの下流に連結することにより得られる。尚、アン
チセンス鎖も、染色体DNAあるいはcDNAから得ら
れるが、染色体DNAを用いる場合にはイントロンは本
発明遺伝子の発現を抑制する機能を果たすことが期待で
きないので、エクソン部分を用いることが好ましい。ま
た、アンチセンス鎖の少なくとも一部としては、コード
領域、5’非翻訳領域又は3’非翻訳領域のいずれも使
用し得る。さらに、アンチセンスRNAをコードするD
NAは、3’非翻訳領域に加え、mRNAの3’末端に
付加されるポリA鎖に相補的なポリdUをコードする配
列を含んでいてもよい。
【0033】本発明に使用し得るプロモーターとして
は、CaMV 35Sプロモーター等が挙げられる。ア
ンチセンスRNAをコードするDNAで植物を形質転換
するで植物を形質転換するには、本発明の遺伝子で形質
転換するのと同様にすればよい。
は、CaMV 35Sプロモーター等が挙げられる。ア
ンチセンスRNAをコードするDNAで植物を形質転換
するで植物を形質転換するには、本発明の遺伝子で形質
転換するのと同様にすればよい。
【0034】さらに、本発明の遺伝子のコード領域の上
流には、本発明の遺伝子の発現を制御する領域が含まれ
る。この領域としては、配列番号2の塩基番号1〜17
52で表される配列の少なくとも一部を含む領域、より
具体的には塩基番号396〜1752の領域が挙げられ
る。この領域は、植物細胞において遺伝子の発現制御に
利用することができることが期待される。
流には、本発明の遺伝子の発現を制御する領域が含まれ
る。この領域としては、配列番号2の塩基番号1〜17
52で表される配列の少なくとも一部を含む領域、より
具体的には塩基番号396〜1752の領域が挙げられ
る。この領域は、植物細胞において遺伝子の発現制御に
利用することができることが期待される。
【0035】
【実施例】以下に、本発明を実施例によりさらに具体的
に説明する。 (1)形態形成の制御に関する変異体植物の作製 シロイヌナズナ(アラビドプシス) エコタイプWS(Was
silewskija、LEHLE SEEDS 社より購入)株に、Tiプラス
ミド由来のバイナリーベクター(ハイグロマイシン耐性
遺伝子及びアンピシリン耐性遺伝子を有し、大腸菌細胞
内で自律複製可能)であるpGDW32を持つアグロバクテリ
ウムEHA101株(Agrobacterium tumefacience)を、イン
プランタ(in planta)アグロバクテリウム感染法(Cha
ng S.S.,Park S.K. et al. Plant J. 5, No.4(1994))
により感染させた。
に説明する。 (1)形態形成の制御に関する変異体植物の作製 シロイヌナズナ(アラビドプシス) エコタイプWS(Was
silewskija、LEHLE SEEDS 社より購入)株に、Tiプラス
ミド由来のバイナリーベクター(ハイグロマイシン耐性
遺伝子及びアンピシリン耐性遺伝子を有し、大腸菌細胞
内で自律複製可能)であるpGDW32を持つアグロバクテリ
ウムEHA101株(Agrobacterium tumefacience)を、イン
プランタ(in planta)アグロバクテリウム感染法(Cha
ng S.S.,Park S.K. et al. Plant J. 5, No.4(1994))
により感染させた。
【0036】具体的には、以下のようにして行った。pG
DW32を導入したアグロバクテリウムを、抗生物質(ハイ
グロマイシン)を含むLB液体培地で一晩増殖させた。
この培養液10μlをGamborg’s B5培地
(ショ糖2%を含み、pH5.5)190μlに希釈
(1/20)した。播種から19〜23日後、抽台を始めた
ばかりの生育段階でアグロバクテリウム処理を行った。
DW32を導入したアグロバクテリウムを、抗生物質(ハイ
グロマイシン)を含むLB液体培地で一晩増殖させた。
この培養液10μlをGamborg’s B5培地
(ショ糖2%を含み、pH5.5)190μlに希釈
(1/20)した。播種から19〜23日後、抽台を始めた
ばかりの生育段階でアグロバクテリウム処理を行った。
【0037】伸び始めたばかりの花茎をその基部におい
て11号メスを用いて切り取り、26G×1/2サイズ
の注射針を用いて切り口からロゼット茎の中央部を貫通
させた。この傷口にアグロバクテリウム希釈液1μlを
注入した。この間、照度を3000〜4000ルクスに
した。接種3日後に植物をロックファイバーのミニポッ
トに移植し、その後は通常の栽培を行った。接種から約
6週間後、早く形成された約半分の莢から種子を収穫し
た。
て11号メスを用いて切り取り、26G×1/2サイズ
の注射針を用いて切り口からロゼット茎の中央部を貫通
させた。この傷口にアグロバクテリウム希釈液1μlを
注入した。この間、照度を3000〜4000ルクスに
した。接種3日後に植物をロックファイバーのミニポッ
トに移植し、その後は通常の栽培を行った。接種から約
6週間後、早く形成された約半分の莢から種子を収穫し
た。
【0038】得られた種子を、10μg/mlのハイグロマイ
シンを含むB5寒天培地に播種し、温度22℃、湿度30-40
%、照度6000-12000ルクスの照明下で、明期12時間/暗期
12時間の光周期で生育させた。栄養素は1/1000に希釈し
たHYPONeX(村上物産(株)製)を用いた。ハイグロマ
イシン耐性を示すpGDW32のT-DNA挿入配列を持つ形質転
換植物をロックウールに移植して育成し、T4種子(第4
世代の種子)を採取した。この際、視覚的に検索を行
い、茎の伸長状態が野生型植物に比べて異なる変異体を
得た。
シンを含むB5寒天培地に播種し、温度22℃、湿度30-40
%、照度6000-12000ルクスの照明下で、明期12時間/暗期
12時間の光周期で生育させた。栄養素は1/1000に希釈し
たHYPONeX(村上物産(株)製)を用いた。ハイグロマ
イシン耐性を示すpGDW32のT-DNA挿入配列を持つ形質転
換植物をロックウールに移植して育成し、T4種子(第4
世代の種子)を採取した。この際、視覚的に検索を行
い、茎の伸長状態が野生型植物に比べて異なる変異体を
得た。
【0039】(2)変異遺伝子の単離 アラビドプシスのゲノムDNAを、Cell, 35 (1983) p.35
に記載の方法等により調製した。
に記載の方法等により調製した。
【0040】-80℃で凍結したアラビドプシス組織
(根) 5g を、乳鉢を用いて液体窒素中で微粉末になる
まで粉砕し、これを25ml の DNA 単離用バッファー(50
mM Tris-HCl,pH7.5, 0.2M NaCl, 20mM EDTA-Na2, 2% N-
ラウロイルザルコシンナトリウム塩, 3g/ml 尿素, 5% T
E飽和フェノール)を加えて撹拌し、25ml のフェノール
/クロロホルムを加えた後、1.5ml の10% SDS(ドデシル
硫酸ナトリウム) を加えて10分間、室温で緩やかに撹
拌した。これを6000prm で10分遠心した後、水層に25ml
のフェノール/クロロホルムを加えた後、再度6000prm
で10分遠心した。この水層に15mlのエタノールを加え、
撹拌した後直ちに、6000prm で10分遠心した。上清を捨
て、沈殿に25mlの70%エタノールを加えて、ボルテック
スにより撹拌し、6000prm で10分遠心した後上清を捨
て、減圧下で乾燥した。これを400μlのTE,pH8.0(10μ
g/μl RNase)に溶解した。
(根) 5g を、乳鉢を用いて液体窒素中で微粉末になる
まで粉砕し、これを25ml の DNA 単離用バッファー(50
mM Tris-HCl,pH7.5, 0.2M NaCl, 20mM EDTA-Na2, 2% N-
ラウロイルザルコシンナトリウム塩, 3g/ml 尿素, 5% T
E飽和フェノール)を加えて撹拌し、25ml のフェノール
/クロロホルムを加えた後、1.5ml の10% SDS(ドデシル
硫酸ナトリウム) を加えて10分間、室温で緩やかに撹
拌した。これを6000prm で10分遠心した後、水層に25ml
のフェノール/クロロホルムを加えた後、再度6000prm
で10分遠心した。この水層に15mlのエタノールを加え、
撹拌した後直ちに、6000prm で10分遠心した。上清を捨
て、沈殿に25mlの70%エタノールを加えて、ボルテック
スにより撹拌し、6000prm で10分遠心した後上清を捨
て、減圧下で乾燥した。これを400μlのTE,pH8.0(10μ
g/μl RNase)に溶解した。
【0041】上記のようにして、形態形成の制御に関す
る変異体から調製した 200μg の染色体DNA を、続いて
CsCl 超遠心法により精製した。このうち、1μg の
染色体 DNA を EcoRI又はXbaIで切断し、フェノール抽
出、エタノール沈殿で制限酵素断片を精製した後、セル
フライゲーションにより分子内の末端同士を連結し、得
られた環状DNAで大腸菌(XL1-Blue MRF'(STRATAGEN
E社から購入))を形質転換した。その結果、約1000コ
ロニーのアンピシリン耐性を示す形質転換株を得ること
ができた。得られた耐性コロニーからプラスミドDNA
を抽出して解析を行った。
る変異体から調製した 200μg の染色体DNA を、続いて
CsCl 超遠心法により精製した。このうち、1μg の
染色体 DNA を EcoRI又はXbaIで切断し、フェノール抽
出、エタノール沈殿で制限酵素断片を精製した後、セル
フライゲーションにより分子内の末端同士を連結し、得
られた環状DNAで大腸菌(XL1-Blue MRF'(STRATAGEN
E社から購入))を形質転換した。その結果、約1000コ
ロニーのアンピシリン耐性を示す形質転換株を得ること
ができた。得られた耐性コロニーからプラスミドDNA
を抽出して解析を行った。
【0042】上記のようにしてレスキューされたプラス
ミドのうち、EcoRIで切断したDNAから得られたものをpR
Ea及びpREb、XbaIで切断したDNAから得られたものをpRX
a及びpRXbと命名した。
ミドのうち、EcoRIで切断したDNAから得られたものをpR
Ea及びpREb、XbaIで切断したDNAから得られたものをpRX
a及びpRXbと命名した。
【0043】(3)変異遺伝子の単離 上記のようにしてレスキューされたプラスミドに含まれ
ている染色体DNA断片をプローブとして、染色体DN
Aライブラリーからの変異遺伝子の単離を行った。P1
ファージベクター(DU PONT社から購入した)を用い
て、The Plant Journal, 7 (1995) p.351に記載の方法
にしたがって、アラビドプシス エコタイプ コロンビ
ア株の核DNAライブラリーを調製した。一方、上記pR
XbとpREaからそれぞれ調製したEcoRI-XbaI断片を32P標
識し、これらをプローブとして、プラークハイブリダイ
ゼーションを行った。その結果、2つの陽性クローンが
得られ、それぞれ28D7、61H10と命名した。これらのク
ローンの制限酵素地図の作製を行い、28D7は約25kb、61
H10は約75kbのアラビドプシス染色体DNA由来の挿入
断片を持つことがわかった(図1)。
ている染色体DNA断片をプローブとして、染色体DN
Aライブラリーからの変異遺伝子の単離を行った。P1
ファージベクター(DU PONT社から購入した)を用い
て、The Plant Journal, 7 (1995) p.351に記載の方法
にしたがって、アラビドプシス エコタイプ コロンビ
ア株の核DNAライブラリーを調製した。一方、上記pR
XbとpREaからそれぞれ調製したEcoRI-XbaI断片を32P標
識し、これらをプローブとして、プラークハイブリダイ
ゼーションを行った。その結果、2つの陽性クローンが
得られ、それぞれ28D7、61H10と命名した。これらのク
ローンの制限酵素地図の作製を行い、28D7は約25kb、61
H10は約75kbのアラビドプシス染色体DNA由来の挿入
断片を持つことがわかった(図1)。
【0044】さらに、塩基配列決定のために挿入DNA
断片に含まれる変異遺伝子のサブクローニングを実施し
た。この際、T-DNAに隣接する配列の制限酵素地図と、
挿入断片のサザン解析を実施し、挿入断片上のT-DNA挿
入部位を推定した(図2)。この挿入部位の近傍の染色
体DNA配列をBluescript II SK+にサブクローニング
した。得られたサブクローンの挿入断片上の位置を図3
に示す。
断片に含まれる変異遺伝子のサブクローニングを実施し
た。この際、T-DNAに隣接する配列の制限酵素地図と、
挿入断片のサザン解析を実施し、挿入断片上のT-DNA挿
入部位を推定した(図2)。この挿入部位の近傍の染色
体DNA配列をBluescript II SK+にサブクローニング
した。得られたサブクローンの挿入断片上の位置を図3
に示す。
【0045】(4)形態形成の制御に関する遺伝子のcD
NAクローンの単離 アラビドプシス エコタイプ コロンビア株の地上部組
織からmRNAを調製し、Molecular cloning(Sambroo
k, J., Fritsch, E. F. and Maniatis, T. (1989)、A L
aboraroty Manual, second edition, Cold Spring Harb
or LaboratoryPress, Cold Spring Harbor, NY)の方法
によりcDNAを調製し、λYES(CLONTECH社から購入
した)をベクターとしてcDNAライブラリーを作製し
た。一方、前記pRXbとpREaからT-DNAに隣接する配列を
切り出し、これを32P標識した。これらをプローブとし
て、ファージライブラリーの300,000プラークを対象と
してプラークハイブリダイゼーションを行った。こうし
て選択したプラスミドをpKUT161とした。
NAクローンの単離 アラビドプシス エコタイプ コロンビア株の地上部組
織からmRNAを調製し、Molecular cloning(Sambroo
k, J., Fritsch, E. F. and Maniatis, T. (1989)、A L
aboraroty Manual, second edition, Cold Spring Harb
or LaboratoryPress, Cold Spring Harbor, NY)の方法
によりcDNAを調製し、λYES(CLONTECH社から購入
した)をベクターとしてcDNAライブラリーを作製し
た。一方、前記pRXbとpREaからT-DNAに隣接する配列を
切り出し、これを32P標識した。これらをプローブとし
て、ファージライブラリーの300,000プラークを対象と
してプラークハイブリダイゼーションを行った。こうし
て選択したプラスミドをpKUT161とした。
【0046】(5)形態形成の制御に関する遺伝子の解
析 pKUT161に含まれるcDNAクローンと染色体遺
伝子の塩基配列を決定した。cDNAの塩基配列及びこ
の配列から推定されるアミノ酸配列を配列表配列番号1
に示す。また、染色体遺伝子を含むDNA断片の塩基配
列を配列番号2に示す。
析 pKUT161に含まれるcDNAクローンと染色体遺
伝子の塩基配列を決定した。cDNAの塩基配列及びこ
の配列から推定されるアミノ酸配列を配列表配列番号1
に示す。また、染色体遺伝子を含むDNA断片の塩基配
列を配列番号2に示す。
【0047】cDNAの塩基配列から推定されるアミノ酸配
列の解析を行ったところ、この遺伝子の翻訳産物は、Na
ture、345(1990)p.743に記載されているRLK5と相同
性を示した。このRLK5遺伝子は、細胞膜上に存在するレ
セプター様のプロテインキナーゼとして単離されたが、
既知のプロテインキナーゼ遺伝子の塩基配列との相同性
により単離されたもので、その遺伝子や翻訳産物の機能
などは全く不明である。このRLK5遺伝子の発現パターン
は、形態形成の制御に関する遺伝子とは異なり、地上部
だけでなく、根でも発現しており機能的には両者は異な
った遺伝子であると考えられる。
列の解析を行ったところ、この遺伝子の翻訳産物は、Na
ture、345(1990)p.743に記載されているRLK5と相同
性を示した。このRLK5遺伝子は、細胞膜上に存在するレ
セプター様のプロテインキナーゼとして単離されたが、
既知のプロテインキナーゼ遺伝子の塩基配列との相同性
により単離されたもので、その遺伝子や翻訳産物の機能
などは全く不明である。このRLK5遺伝子の発現パターン
は、形態形成の制御に関する遺伝子とは異なり、地上部
だけでなく、根でも発現しており機能的には両者は異な
った遺伝子であると考えられる。
【0048】(6)形態形成の制御に関する変異体の解
析 前記(1)で得られた形態形成の制御に関する変異体
は、茎の伸長状態から、Landsberg erecta株のエレクタ
変異と同一遺伝子座の変異であると考えられた。そこで
まず、先のLandsberg erecta株、er-103株と本発明で単
離した変異体の遺伝的な相補試験を行った。その結果こ
れらの変異はすべて同一遺伝子座の変異に起因すること
が判明し、単離した変異体をer-104株とした。
析 前記(1)で得られた形態形成の制御に関する変異体
は、茎の伸長状態から、Landsberg erecta株のエレクタ
変異と同一遺伝子座の変異であると考えられた。そこで
まず、先のLandsberg erecta株、er-103株と本発明で単
離した変異体の遺伝的な相補試験を行った。その結果こ
れらの変異はすべて同一遺伝子座の変異に起因すること
が判明し、単離した変異体をer-104株とした。
【0049】Landsberg erecta株、er-103株からmRN
Aを単離し、RT−PCR(逆転写−PCR)法で増幅
した。すなわち、mRNAを鋳型とし、配列番号4に示
す塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをプライマーと
して逆転写反応を行い、続いて得られたcDNAを鋳型
とし、前記オリゴヌクレオチドを3’側プライマー及び
配列番号3に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド
を5’側プライマーに用いてPCR反応を行った。
Aを単離し、RT−PCR(逆転写−PCR)法で増幅
した。すなわち、mRNAを鋳型とし、配列番号4に示
す塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをプライマーと
して逆転写反応を行い、続いて得られたcDNAを鋳型
とし、前記オリゴヌクレオチドを3’側プライマー及び
配列番号3に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド
を5’側プライマーに用いてPCR反応を行った。
【0050】得られた増幅産物を鋳型とし、上記オリゴ
ヌクレオチドプライマーを用いたダイレクトシーケンス
法により、塩基配列を決定した。その結果、Landsberg
erecta株では配列番号1の塩基番号2299番のTがAに置
換したのに伴い、アミノ酸番号750番のイソロイシン残
基がリジン残基に置換していた。er-103株では配列表配
列番号1の塩基番号896番のGがAに置換することによ
り、アミノ酸番号282番のメチオニン残基がイソロイシ
ン残基に置換していた。
ヌクレオチドプライマーを用いたダイレクトシーケンス
法により、塩基配列を決定した。その結果、Landsberg
erecta株では配列番号1の塩基番号2299番のTがAに置
換したのに伴い、アミノ酸番号750番のイソロイシン残
基がリジン残基に置換していた。er-103株では配列表配
列番号1の塩基番号896番のGがAに置換することによ
り、アミノ酸番号282番のメチオニン残基がイソロイシ
ン残基に置換していた。
【0051】これら全ての変異体間で、形態形成の制御
に関する遺伝子の塩基配列の一部が、アミノ酸配列の変
化を引き起こす変異を持つことが判明し、この遺伝子が
形態形成を制御する遺伝子(形態制御遺伝子)であるこ
とが同定できた。
に関する遺伝子の塩基配列の一部が、アミノ酸配列の変
化を引き起こす変異を持つことが判明し、この遺伝子が
形態形成を制御する遺伝子(形態制御遺伝子)であるこ
とが同定できた。
【0052】(7)形態制御遺伝子の発現解析 上記のようにして単離されたcDNA、並びに染色体遺伝子
が形態形成を制御する遺伝子であることを確認するもう
一つの方法として、変異体植物の各組織での発現量分
析、及び野生型植物と変異体植物の間での遺伝子の発現
量の変化を、ノーザン分析により比較分析した。プロー
ブにはcDNAクローンを用いた。Landsberg erecta変
異体と野生型植物の個体全体を用いたノーザン分析の結
果から、形態制御遺伝子の発現(mRNAの生成)が、野生
型植物では強く観察されるのに対して、変異体ではほと
んど認められたかった。
が形態形成を制御する遺伝子であることを確認するもう
一つの方法として、変異体植物の各組織での発現量分
析、及び野生型植物と変異体植物の間での遺伝子の発現
量の変化を、ノーザン分析により比較分析した。プロー
ブにはcDNAクローンを用いた。Landsberg erecta変
異体と野生型植物の個体全体を用いたノーザン分析の結
果から、形態制御遺伝子の発現(mRNAの生成)が、野生
型植物では強く観察されるのに対して、変異体ではほと
んど認められたかった。
【0053】また、野生型植物の各組織での形態制御遺
伝子の発現量分析を行った結果、変異体で形質の変化が
著しい茎、花などでの発現量が多く、このことからもこ
の遺伝子が茎の伸長に関わる遺伝子であることが確認さ
れた。
伝子の発現量分析を行った結果、変異体で形質の変化が
著しい茎、花などでの発現量が多く、このことからもこ
の遺伝子が茎の伸長に関わる遺伝子であることが確認さ
れた。
【0054】さらに、上述したように、形態制御遺伝子
の発現は部位及び時期特異的であるので、本発明の遺伝
子の発現制御領域は、植物における外来遺伝子発現の制
御に利用し得る。そのような発現制御領域としては、配
列番号2の塩基番号1〜1752で表される配列の少な
くとも一部を含む領域、より具体的には塩基番号396
〜1752の領域が挙げられる。
の発現は部位及び時期特異的であるので、本発明の遺伝
子の発現制御領域は、植物における外来遺伝子発現の制
御に利用し得る。そのような発現制御領域としては、配
列番号2の塩基番号1〜1752で表される配列の少な
くとも一部を含む領域、より具体的には塩基番号396
〜1752の領域が挙げられる。
【0055】
【発明の効果】本発明により、植物の形態形成を制御す
る遺伝子が提供される。この遺伝子の発現量を増やすこ
とによって、茎の伸長を促進できることが期待される。
また、この遺伝子に対するアンチセンスRNAを発現す
るDNA配列で植物を形質転換することにより、茎の伸
長を抑制できることが期待される。
る遺伝子が提供される。この遺伝子の発現量を増やすこ
とによって、茎の伸長を促進できることが期待される。
また、この遺伝子に対するアンチセンスRNAを発現す
るDNA配列で植物を形質転換することにより、茎の伸
長を抑制できることが期待される。
【0056】
配列番号:1 配列の長さ:3176 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:cDNA to mRNA 起源 生物名:シロイヌナズナ(Arabidopsis thaliana) 株名:コロンビア 配列の特徴: 特徴を表す記号: CDS 存在位置: 51..2978 CTTTTAAAGT ATATCTAAAA ACGCAGTCGT TTTAAGACTG TGTGTGAGAA ATG GCT 56 Met Ala 1 CTG TTT AGA GAT ATT GTT CTT CTT GGG TTT CTC TTC TGC TTG AGC TTA 104 Leu Phe Arg Asp Ile Val Leu Leu Gly Phe Leu Phe Cys Leu Ser Leu 5 10 15 GTA GCT ACT GTG ACT TCA GAG GAG GGA GCA ACG TTG CTG GAG ATT AAG 152 Val Ala Thr Val Thr Ser Glu Glu Gly Ala Thr Leu Leu Glu Ile Lys 20 25 30 AAG TCA TTC AAA GAT GTG AAC AAT GTT CTT TAT GAC TGG ACA ACT TCA 200 Lys Ser Phe Lys Asp Val Asn Asn Val Leu Tyr Asp Trp Thr Thr Ser 35 40 45 50 CCT TCT TCG GAT TAT TGT GTC TGG AGA GGT GTG TCT TGT GAA AAT GTC 248 Pro Ser Ser Asp Tyr Cys Val Trp Arg Gly Val Ser Cys Glu Asn Val 55 60 65 ACC TTC AAT GTT GTT GCT CTT AAT TTG TCA GAT TTG AAT CTT GAT GGA 296 Thr Phe Asn Val Val Ala Leu Asn Leu Ser Asp Leu Asn Leu Asp Gly 70 75 80 GAA ATC TCA CCT GCT ATT GGA GAT CTC AAG AGT CTC TTG TCA ATT GAT 344 Glu Ile Ser Pro Ala Ile Gly Asp Leu Lys Ser Leu Leu Ser Ile Asp 85 90 95 CTG CGA GGT AAT CGC TTG TCT GGA CAA ATC CCT GAT GAG ATT GGT GAC 392 Leu Arg Gly Asn Arg Leu Ser Gly Gln Ile Pro Asp Glu Ile Gly Asp 100 105 110 TGT TCT TCT TTG CAA AAC TTA GAC TTA TCC TTC AAT GAA TTA AGT GGT 440 Cys Ser Ser Leu Gln Asn Leu Asp Leu Ser Phe Asn Glu Leu Ser Gly 115 120 125 130 GAC ATA CCG TTT TCG ATT TCG AAG TTG AAG CAA CTT GAG CAG CTG ATT 488 Asp Ile Pro Phe Ser Ile Ser Lys Leu Lys Gln Leu Glu Gln Leu Ile 135 140 145 CTG AAG AAT AAC CAA TTG ATA GGA CCG ATC CCT TCA ACA CTT TCA CAG 536 Leu Lys Asn Asn Gln Leu Ile Gly Pro Ile Pro Ser Thr Leu Ser Gln 150 155 160 ATT CCA AAC CTG AAA ATT CTG GAC TTG GCA CAG AAT AAA CTC AGT GGT 584 Ile Pro Asn Leu Lys Ile Leu Asp Leu Ala Gln Asn Lys Leu Ser Gly 165 170 175 GAG ATA CCA AGA CTT ATT TAC TGG AAT GAA GTT CTT CAG TAT CTT GGG 632 Glu Ile Pro Arg Leu Ile Tyr Trp Asn Glu Val Leu Gln Tyr Leu Gly 180 185 190 TTG CGA GGA AAC AAC TTA GTC GGT AAC ATT TCT CCA GAT TTG TGT CAA 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【0057】配列番号:2 配列の長さ:9295 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:genomic DNA 起源 生物名:シロイヌナズナ(Arabidopsis thaliana) 株名:コロンビア 配列の特徴: 特徴を表す記号: exon 存在位置: 1803..1881 配列の特徴: 特徴を表す記号: intron 存在位置: 1882..2227 配列の特徴: 特徴を表す記号: exon 存在位置: 2228..2366 配列の特徴: 特徴を表す記号: intron 存在位置: 2367..2467 配列の特徴: 特徴を表す記号: intron 存在位置: 2540..2643 配列の特徴: 特徴を表す記号: exon 存在位置: 2468..2539 配列の特徴: 特徴を表す記号: exon 存在位置: 2644..2715 配列の特徴: 特徴を表す記号: intron 存在位置: 2716..2809 配列の特徴: 特徴を表す記号: exon 存在位置: 2810..2878 配列の特徴: 特徴を表す記号: intron 存在位置: 2879..2968 配列の特徴: 特徴を表す記号: exon 存在位置: 2969..3040 配列の特徴: 特徴を表す記号: intron 存在位置: 3041..3118 配列の特徴: 特徴を表す記号: exon 存在位置: 3119..3190 配列の特徴: 特徴を表す記号: intron 存在位置: 3191..3266 配列の特徴: 特徴を表す記号: exon 存在位置: 3267..3338 配列の特徴: 特徴を表す記号: intron 存在位置: 3339..3421 配列の特徴: 特徴を表す記号: exon 存在位置: 3422..3493 配列の特徴: 特徴を表す記号: intron 存在位置: 3494..3586 配列の特徴: 特徴を表す記号: exon 存在位置: 3587..3655 配列の特徴: 特徴を表す記号: intron 存在位置: 3656..3740 配列の特徴: 特徴を表す記号: exon 存在位置: 3741..3812 配列の特徴: 特徴を表す記号: intron 存在位置: 3813..3888 配列の特徴: 特徴を表す記号: exon 存在位置: 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intron 存在位置: 6012..6095 配列の特徴: 特徴を表す記号: intron 存在位置: 6444..6519 配列の特徴: 特徴を表す記号: exon 存在位置: 6520..6890 配列の特徴: 特徴を表す記号: intron 存在位置: 6891..6974 配列の特徴: 特徴を表す記号: exon 存在位置: 6975..7328 配列 GAATTCAAAG GAATAAGCAT CGGAGACGAT TTAATGTTAC CTCTTGACGT ATTTATCCAA 60 TTTATCCATT AAGCCACCAG CCATAGCATC TGATCATCAT CATCAACATA TAAATAACCA 120 AATTTGAAAT GAACAAAAGT CGAATTGGTG ATATTGAAAA TCGAGTTCGT GAAATTGAGA 180 ATCGGATTGG TGAATTTGAA GAGAGATGCG TGTACCGTTA GGGAGGAGGA GGAGACGGGA 240 GAGAAAAAAG GAGACGGAGA TAACTCGCCG GCTCTGTTTC CATGGCGGAG GTGATAATGT 300 AGCTGCGCAC GTTAGCTTTT TGTGGTTTGA GTTGGAGAAC AGTGGGAGGC TCACGGTAGC 360 GTGGAGTGAC GACATTGGGG ATAACACCAG AGGCGTCTTA TCTCCGTTGG ACAAATTATT 420 ATTATGGCTA TGAACATTCA ACATATAATT TAATTAGAAA TTTGCGGATG AAAAAGAGGT 480 AAACAATTGC AGAAATGGTT AAAAATATTA ACGTTGTACA GCAAATGATA ATAAAAAGTG 540 TAACGTACAG TGTGTAAGGA ATGGAAAAAT AATAATTTGG GTTAAAATAA ATATGTAGTT 600 TTCTAACTAT ATAGTACTTT TTGAGAAAAG ATAATATTAT GTGTATTTTT ATTGAAACAA 660 ATAAATGATT TAACAAAAAA AAAAAGAGAA GTTAAAATGA 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ACTGGTTCAA 4080 TTCCACCTGA GCTTGGAAAC ATGTCAAAAC TCCATTACCT GTATGACCAA CCTTCTCTTC 4140 ACTTCTCTTT TTGCATACAG TCACTACTAA GTTGTGTTTC CTTATCAACT ATTTGTAAAA 4200 TATTCATAGG GAACTCAATG ATAATCATCT CACGGGTCAT ATACCACCAG AGCTTGGGAA 4260 GCTTACTGAC TTGTTTGATC TGTAAGTAGT TCTTCCTATG CTTGACATGT TTTGATGTTC 4320 TTATGCTTAT ATGAACTATG TACATATAGG AATGTGGCCA ACAATGATCT GGAAGGACCT 4380 ATACCTGATC ATCTGAGCTC TTGCACAAAT CTAAACAGCT TGTATGTATC TCTTTCTCTG 4440 AAAACTTCTC ACTTGAATGT TCAAGATTGG TGCTTTATAT GATTTTGTGT CTCATTAATG 4500 TAATGTAGAA ATGTTCATGG GAACAAGTTT AGTGGCACTA TACCCCGAGC ATTTCAAAAG 4560 CTAGAAAGTA TGACTTACCT GTAAGTATCG ACGCTGAGAA TTTCTCTAAT CTTATATAAT 4620 ATATAGTTCC ACAGCGTTTG TTTTTTCGAA TTTCAAGTCA TTAACTACTG AGTTTTTGGT 4680 TGCCTTTGAT TTATCGGTTC AACCAGTAAT CTGTCCAGCA ACAATATCAA AGGTCCAATC 4740 CCGGTTGAGC TATCTCGTAT CGGTAACTTA GATACATTGT AAGTGTTTCT TGTTTTCTGT 4800 GAAGTATACA TCATTATATG TGCCTTGTCT CACATTTATT AAATTTAATG ACATTTGAAG 4860 GGATCTTTCC AACAACAAGA TAAATGGAAT CATTCCTTCT TCCCTTGGTG ATTTGGAGCA 4920 TCTTCTCAAG ATGTGAGCAT CCATAAGACC TCCAGTTTTA TTGTTTATTT CTAGCAAAAG 4980 ATGAAAATGG TTTGTGAACT CTTGCATTCT TGTTATAGGA ACTTGAGTAG AAATCATATA 5040 ACTGGTGTAG TTCCAGGCGA CTTTGGAAAT CTAAGAAGCA TCATGGAAAT GTAAGAAGTT 5100 AACTTCTATC TGCTTGGTTA GAGTTTTTTT CATTTATCTC AATTACTGTT CTGAATTTGT 5160 GTGTTTGTGG TTGCAGAGAT CTTTCAAATA ATGATATCTC TGGCCCAATT CCAGAAGAGC 5220 TTAACCAATT ACAGAACATA ATTTTGCTGT AAGCAATCTT CCTCTTATCC CTTCCAAGCT 5280 GTTAAGAAAT TGTTTTTGTA GAATGAAACT AAAACTCTGT ATACACAATA ATGAGGTCAC 5340 TATAGTGTGA TCCAGGAACA TGTATTGGGT TGGTGATCTA TCTAATGTTG TGTTTCTTAA 5400 AATTGCTTGC AGGAGACTGG AAAATAATAA CCTGACTGGT AATGTTGGTT CATTAGCCAA 5460 CTGTCTCAGT CTCACTGTAT TGTAAGTAGG CACCTTTGGT TCTGAAACAT TTTTTGTCCC 5520 TCTTTGTGCA TCTTTTGCTA AGAATATAAC CCTGCAATCT TCACTAACTC TTATAGGAAT 5580 GTATCTCATA ACAACCTCGT AGGTGATATC CCTAAGAACA ATAACTTCTC AAGATTTTCA 5640 CCAGACAGGT ATGGTAATTT AGCAGGTTTT GGTATTGTGC ATTTTGTTTT GTTTGCTAAT 5700 ATCTATGTTT ATGTTTTTGG ATAAAGCTTC ATTGGCAATC CTGGTCTTTG CGGTAGTTGG 5760 CTAAACTCAC CGTGTCATGA TTCTCGTCGA ACTGTACGAG GTGATTACAT TCTTCTAAAA 5820 GCTTCCATTC ACAAAACCTA AGATAATTAA AGCTCATGTT TCTATCCATG TTTTGTCTGC 5880 AGTGTCAATC TCTAGAGCAG CTATTCTTGG AATAGCTATT GGGGGACTTG TGATCCTTCT 5940 CATGGTCTTA ATAGCAGCTT GCCGACCGCA TAATCCTCCT CCTTTTCTTG ATGGATCACT 6000 TGACAAACCA GGTCTACTCT CCAAACCACT TTACGAATGT TCTTCACCTA CAATGTAATC 6060 CAATAGTTAA TCCTTAAATT TCCTGGTGAC ATCAGTAACT TATTCGACAC CGAAGCTCGT 6120 CATCCTTCAT ATGAACATGG CACTCCACGT TTACGAGGAT ATCATGAGAA TGACAGAGAA 6180 TCTAAGTGAG AAGTATATCA TTGGGCACGG AGCATCAAGC ACTGTATACA AATGTGTTTT 6240 GAAGAATTGT AAACCGGTTG CGATTAAGCG GCTTTACTCT CACAACCCAC AGTCAATGAA 6300 ACAGTTTGAA ACAGAACTCG AGATGCTAAG TAGCATCAAG CACAGAAATC TTGTGAGCCT 6360 ACAAGCTTAT TCCCTCTCTC ACTTGGGGAG TCTTCTGTTC TATGACTATT TGGAAAATGG 6420 TAGCCTCTGG GATCTTCTTC ATGGTAAGTC TCATCGCCAA ACATAGAAAA TTATTTGAAT 6480 CTTCTGTGAC ATAACAACTT GCTTGTGTGT TTTGTAAAGG CCCTACGAAG AAAAAGACTC 6540 TTGATTGGGA CACACGGCTT AAGATAGCAT ATGGTGCAGC ACAAGGTTTA GCTTATCTAC 6600 ACCATGACTG TAGTCCAAGG ATCATTCACA GAGACGTGAA GTCGTCCAAC ATTCTCTTGG 6660 ACAAAGACTT AGAGGCTCGT TTGACAGATT TTGGAATAGC GAAAAGCTTG TGTGTGTCAA 6720 AGTCACATAC TTCAACTTAC GTGATGGGCA CGATAGGTTA CATAGACCCC GAGTATGCTC 6780 GCACTTCACG GCTCACTGAG AAATCCGATG TCTACAGTTA TGGAATAGTC CTTCTTGAGT 6840 TGTTAACCCG AAGGAAAGCC GTTGATGACG AATCCAATCT CCACCATCTG GTTTGTTCTT 6900 TCTTGCCTAT CTCTCTCAGC TGCTCTGTTT AGGTCAAGTC CGTAATCTTG TTTTCATTGA 6960 TTCACTTACA TCAGATAATG TCAAAGACGG GGAACAATGA AGTGATGGAA ATGGCAGATC 7020 CAGACATCAC ATCGACGTGT AAAGATCTCG GTGTGGTGAA GAAAGTTTTC CAACTGGCAC 7080 TCCTATGCAC CAAAAGACAG CCGAATGATC GACCCACAAT GCACCAGGTG ACTCGTGTTC 7140 TCGGCAGTTT TATGCTATCG GAACAACCAC CTGCTGCGAC TGACACGTCA GCGACGCTGG 7200 CTGGTTCGTG CTACGTCGAT GAGTATGCAA ATCTCAAGAC TCCTCATTCT GTCAATTGCT 7260 CTTCCATGAG TGCTTCTGAT GCTCAACTGT TTCTTCGGTT TGGACAAGTT ATTTCTCAGA 7320 ACAGTGAGTA GTTTTTCGTT AGGAGGAGAA TCTTTAAAAC GGTATCTTTT CGTTGCGTTA 7380 AGCTGTTAGA AAAATTAATG TCTCATGTAA AGTATTATGC ACTGCCTTAT TATTATTAGA 7440 CAAGTGTGTG GTGTGAATAT GTCTTCAGAC TGGCACTTAG ACTTCCTATA AGTTCTTGCC 7500 TATCTAAGTT TTTCTAAATT GGGTTATTCT TGTAACATAT CTTAGATCTA GTACTCAACA 7560 CCACGTCACC ACCACAAAAG ATTTCTTATG CTCAAAAACA TATACATAGA AAGAACCTTC 7620 TAAACTACGA GAAACGTTTT GCTATGTAGT GTTATATGTC AACCACGTCT ATGAGAGTGC 7680 AAACGATAGG TTAATAAGTT TTCTCACTTG GCAATAAAAA TGATAAACAA ATATATTGTC 7740 TGATTAATTT ATTTTATATA GTTTTTTTAT AATTTCTTAT ATTAATTCGA ACTCATACAG 7800 CGCGTGAGAC TTTCTAGTTT AGTATAAAGT ACGTATTTTT GCAAAATCAA AATCGTAAAT 7860 ACATACATTT TAAAATGTTA AAAAAGATAA ATCCGTACAC CATTTAAAAA TGGCATTTTC 7920 CTAAGATTTT TTTCAAAAAA GGCATTTTAG ACAAGAACTA ATTACTACAA CTAAAATCTA 7980 CTAACTTTGG TTTTTATGTA TACATTTACG AGAGTCTACA CAAAAAAAAT ACATAAAAGA 8040 AGAAGTAGTA AATAATTAAA ACGTAAAAAA AAAGACTTTT CAAGAAGGCA GAAGAGTAGC 8100 ACTGTTGTGC GATTGTAAAA TCGTCTTGAT TGTTGTTTAT CCCACTGATA AGCCTACCCT 8160 TTTCAAAACT TGTTCTAAGT TTAAATTCTA TTTTTGAACA TGACATACAG TATAAGGCTT 8220 TTTAAAGATA TCATCTTGAT TTTGTTTCTT CCACAGGGAA GCCCTATCCT TTCTTACATA 8280 ATCTTTGTTA GATAATTTTT TATTATTTTC AAAAAAAATA AAATTGAACA TAAGTTTTCT 8340 CAAAGTAATA TGTTCTAACA ATAATAAACA TAATATCATT TTTTTGTTTT AAACTATAAA 8400 GGACTAACAT GGTAAAAAGT TGCAATATAT AAATGATAAT TTAAACTAAA AATTAGAATA 8460 TGGTAACTTT TTCTTCAACA ACATGCCACA TTCGGCTACA TGTCCACTAG GAAGTGTTAT 8520 TATAGAATCG TTAATGTTGG GTACGCTTAT GAAATTATCA ATGTTTGCTT AAATCTATGC 8580 TTAGAAAATT ACCAATATTA CCTTAAAACT ATATTTACGA ATGACCAATA TTGCTTAGAA 8640 CTATGCTTAT GAAATTACCA ATATTTTCTT AAAACTTAAA CACAAAACTC TTTAACAAAA 8700 AAAACTTTAT TTTTATTTTT ATTTTTTTGG CAAAAAAAAA AACTTTATTT ATAAAGTGAA 8760 AGTCTCCAGA TAATTTTGAA TTTCATTTTT CCAGTTTTTA TTTAGAATAA TTTTTCTTCA 8820 TTTACAAAAT AAAAGAAAAC CCTAGGGTTT AGGGTTTAGG GTTTAGGAAA AAGCGATGAT 8880 ATATTAATTG TTATGAAATG TTTTTTTAAA AATAGTTAAC CAAACATTTT TTTAAAGAGA 8940 GTTTAGTTTC ACAAGGCATT TGTAAATTAG AGTAATTATC AATAAAAATG GAAGACAATC 9000 TAATTATTAT TTAGCAAAAA CTATATTTAG GAAAATTAGT TAAAGTTTAG AAATATATCA 9060 TCATAGTGTC AAACTAATTA AAATTATTTA ATTTTGTGAT ATACGTGATC ATATAATTTT 9120 ATGAATATTT AATATTATGA TACATGTAAC TCAGTAAACC TAAATTTAGA AGAAAAGTCA 9180 AAATAATCAT AACCAATTTA GATTCAACTT CTACTTTTGT TCCAAGAAAA AAACACATGG 9240 TTTGTTTTGT GGGATACTAA TGACATCTAT CAAAATCTAT GAAACCAAAT CTAGA 9295 配列番号:3 配列の長さ:18 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:他の核酸 合成DNA アンチセンス:NO 配列: TATCTAAAAA CGCAGTCG 18 配列番号:4 配列の長さ:18 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:他の核酸 合成DNA アンチセンス:YES 配列: AAGATTCTCC TCCTAACG 18
【図1】 実施例で得られた形態制御遺伝子クローンの
制限酵素地図。
制限酵素地図。
【図2】 制限酵素地図及びサザン解析から推定された
染色体DNA断片上のT-DNA挿入部位を示す図。
染色体DNA断片上のT-DNA挿入部位を示す図。
【図3】 T-DNA挿入部位近傍配列のサブクローンの位
置を示す図。
置を示す図。
フロントページの続き (72)発明者 ロバート エフ. ウィッティア 茨城県つくば市千現2−1−6 つくば研 究支援センターD−6 株式会社三井業際 植物バイオ研究所内
Claims (6)
- 【請求項1】 植物の形態形成を制御する活性を有し、
配列番号1に示すアミノ酸配列又はこのアミノ酸配列に
おいて植物の形態形成を制御する活性に影響を与えない
1又は2以上のアミノ酸残基の置換、欠失あるいは挿入
を有するアミノ酸配列を含むタンパク質をコードするD
NA。 - 【請求項2】 請求項1記載のDNAの発現を抑制する
アンチセンスRNAをコードするDNA。 - 【請求項3】 配列番号1記載の塩基配列の少なくとも
一部に実質的に相補的な塩基配列を有する請求項2記載
のDNA。 - 【請求項4】 請求項1記載のDNAで形質転換された
植物体。 - 【請求項5】 請求項2または3記載のDNAで形質転
換された植物体。 - 【請求項6】 請求項1記載のDNAの発現を制御する
DNAであって、配列番号2の塩基番号1〜1752で
表される配列の少なくとも一部を有するDNA。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP7216187A JPH0956382A (ja) | 1995-08-24 | 1995-08-24 | 植物の形態形成を制御するタンパク質をコードする遺伝子 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP7216187A JPH0956382A (ja) | 1995-08-24 | 1995-08-24 | 植物の形態形成を制御するタンパク質をコードする遺伝子 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0956382A true JPH0956382A (ja) | 1997-03-04 |
Family
ID=16684659
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP7216187A Pending JPH0956382A (ja) | 1995-08-24 | 1995-08-24 | 植物の形態形成を制御するタンパク質をコードする遺伝子 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH0956382A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2003236580B2 (en) * | 2002-07-02 | 2008-08-07 | The Australian National University | Method of producing plants having enhanced transpiration efficiency and plants produced therefrom |
-
1995
- 1995-08-24 JP JP7216187A patent/JPH0956382A/ja active Pending
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2003236580B2 (en) * | 2002-07-02 | 2008-08-07 | The Australian National University | Method of producing plants having enhanced transpiration efficiency and plants produced therefrom |
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Legal Events
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A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060516 |
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A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20061010 |